CN101828524B - 一种滇紫草植株再生的方法 - Google Patents
一种滇紫草植株再生的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101828524B CN101828524B CN2010101266644A CN201010126664A CN101828524B CN 101828524 B CN101828524 B CN 101828524B CN 2010101266644 A CN2010101266644 A CN 2010101266644A CN 201010126664 A CN201010126664 A CN 201010126664A CN 101828524 B CN101828524 B CN 101828524B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bud
- cultivated
- medium
- culture
- seedling
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 241000962174 Onosma paniculata Species 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 30
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 30
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 30
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 29
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 29
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 25
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 25
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 23
- 235000004256 Buglossoides arvense Nutrition 0.000 claims description 16
- 241000118841 Lithospermum incisum Species 0.000 claims description 16
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims description 11
- 239000006160 differential media Substances 0.000 claims description 10
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 claims description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 5
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 5
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000011017 operating method Methods 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 21
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 3
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 3
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 241001072256 Boraginaceae Species 0.000 description 2
- NEZONWMXZKDMKF-JTQLQIEISA-N Alkannin Chemical group C1=CC(O)=C2C(=O)C([C@@H](O)CC=C(C)C)=CC(=O)C2=C1O NEZONWMXZKDMKF-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 239000004229 Alkannin Substances 0.000 description 1
- NEZONWMXZKDMKF-UHFFFAOYSA-N C.I. Natural Red 20 Chemical compound C1=CC(O)=C2C(=O)C(C(O)CC=C(C)C)=CC(=O)C2=C1O NEZONWMXZKDMKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001071917 Lithospermum Species 0.000 description 1
- 240000004035 Lithospermum officinale Species 0.000 description 1
- 235000011030 Lithospermum officinale Nutrition 0.000 description 1
- 240000002299 Symphytum officinale Species 0.000 description 1
- 235000005865 Symphytum officinale Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- UNNKKUDWEASWDN-UHFFFAOYSA-N alkannin Natural products CC(=CCC(O)c1cc(O)c2C(=O)C=CC(=O)c2c1O)C UNNKKUDWEASWDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019232 alkannin Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- Y02P60/216—
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及一种通过愈伤组织再生滇紫草植株的方法。其操作步骤主要包括：1)滇紫草胚性愈伤组织的诱导；2)胚性愈伤组织的继代培养；3)胚性愈伤组织丛生芽的分化；4)丛生芽的扶壮和根的诱导；5)炼苗和移栽。本发明能够获得高繁殖系数的胚性愈伤组织，获得的滇紫草再生植株成活率高，生长状态良好，可应用到大规模培育滇紫草人工植株的实际生产过程中。
Description
技术领域
本发明涉及一种通过愈伤组织再生滇紫草植株的方法。
背景技术
滇紫草(Onosma paniculatum Bur.et Fr.)主产云南，是云南省本地常用中草药，属紫草科(Boraginaceae)植物，其根药用。主要有效成分为紫草素及其衍生物，这些成分不但具有抗菌、抗炎、抗癌等多种药理作用，还作为天然色素广泛用于医药、化妆品和印染工业。目前，滇紫草的野生资源破坏严重，市场上供需矛盾凸显。虽然利用植物细胞大规模培养技术在反应器中直接培养细胞获得药用次生代谢产物是生产植物药的新技术和新方法，但细胞培养成本和技术含量都较高，难以大范围推广应用。相比较而言，通过愈伤组织再生滇紫草人工种苗，进而采用传统药材种植方式解决药材短缺问题是直接而实际的手段。这种通过愈伤组织获得种苗的方法不受季节和生境的限制，可人为控制，具有自然有性繁殖不可比拟的优势。总的来说，获得一种高频、快速、稳定的植株再生体系是保证高生产效率，低生产成本的必要手段。
紫草科植物的人工种植已有成功的范例，如在东北地区大规模种植的紫草属植物硬紫草(Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.)，但种植所用种苗并非通过生物技术方法获得，而是直接播撒种子获得幼苗。目前尚未见到通过无性繁殖进行滇紫草植株再生的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种通过愈伤组织进行滇紫草植株再生的方法。
该方法的操作步骤如下：
1)滇紫草胚性愈伤组织的诱导：取滇紫草茎尖嫩叶，用蒸馏水把叶表面漂洗干净，然后置于75％乙醇溶液中浸泡20s，迅速去除乙醇溶液，用灭菌蒸馏水漂洗叶片2次，随后转移到2％的次氯酸钠溶液中浸泡2min，取出叶片，用灭菌蒸馏水漂洗3次。把经过消毒的叶片放到已灭菌的培养皿中，用刀片切割成大小约0.5cm2的小块，并移至愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织。诱导培养基和培养条件为：MS基础培养基+NAA 0.1-0.3mg/L+2，4-D 0.8-1.5mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养；
2)胚性愈伤组织的继代：步骤1)中诱导出的愈伤组织为胚性愈伤组织，该愈伤组织需要继代2次以后才用于器官分化获得植株。继代培养基和培养条件为：MS基础培养基+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
3)胚性愈伤组织丛生芽的分化：从继代培养基中取出胚性愈伤组织接种到分化培养基中，既可分化出丛生芽。丛生芽分化培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT1.0-2.0mg/L+蔗糖30-50g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
4)丛生芽的扶壮和根的诱导发生：待步骤3)中的丛生芽长至1cm左右，将其从基部切下，进行丛生芽的扶壮培养。丛生芽扶壮培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT 2.0mg/L+蔗糖30g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux；
5)经过扶壮的丛生芽长至4cm左右的无根苗时，将苗移至生根培养基中诱导生根，生根培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+IBA 1.0-2.0mg/L+蔗糖10-20g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux；
6)炼苗和移栽：待步骤4)中的幼苗长出4条以上的根，且长度超过1.5cm，即可进行炼苗，炼苗过程：将组培瓶移至温室，瓶盖揭开2-3天，然后将幼苗从瓶中取出，用自来水将粘附于根上的琼脂清洗干净(切勿弄断幼根)，移至以蛭石和珍珠岩混合物为基质的培养穴中炼苗10天左右，移栽过程：经过炼苗的幼苗长出两片新叶后可移至自然土壤环境中进行生长，整个植株再生过程结束。
本发明能够获得高繁殖系数的胚性愈伤组织，获得的滇紫草再生植株成活率高，生长状态良好，可应用到大规模培育滇紫草人工植株的实际生产过程中。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不是对本发明的限制。
实施例1：
1)取滇紫草茎尖嫩叶，用蒸馏水把叶表面漂洗干净，然后置于75％乙醇溶液中浸泡20s，迅速去除乙醇溶液，用灭菌蒸馏水漂洗叶片2次，随后转移到2％的次氯酸钠溶液中浸泡2min，取出叶片，用灭菌蒸馏水漂洗3次。把经过消毒的叶片放到已灭菌的培养皿中，用刀片切割成大小约0.5cm2的小块，并移至愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织。诱导培养基和培养条件为：MS基础培养基+NAA0.3mg/L+2，4-D 0.8mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养30天后获得胚性愈伤组织。
2)诱导出的胚性愈伤组织继代2次以后用于器官分化获得植株。继代培养基和培养条件为：MS基础培养基+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
3)从继代培养基中取出20块绿豆大小的胚性愈伤组织接种到分化培养基中。培养两周后，分化出大量丛生芽。丛生芽分化培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT1.0mg/L+蔗糖30g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
4)丛生芽长至1cm左右，将其从基部切下，进行丛生芽的扶壮培养。丛生芽扶壮培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT 2.0mg/L+蔗糖30g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
5)经过扶壮的丛生芽长至4cm左右的无根苗时，将苗移至生根培养基中诱导生根。生根培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖10g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
6)幼苗长出4条以上的根，且长度超过1.5cm，即可进行炼苗。首先将组培瓶移至温室，瓶盖揭开2-3天，然后将幼苗从瓶中取出，用自来水将粘附于根上的琼脂清洗干净(切勿弄断幼根)，移至以蛭石和珍珠岩混合物为基质的培养穴中炼苗10天左右，经过炼苗的幼苗长出两片新叶后可移至自然土壤环境中进行生长，整个植株再生过程结束，一个月后统计再生苗成活率。
植株再生效率：步骤3)中20块胚性愈伤组织共产生丛生芽71个，其中62个经过扶壮和生根处理成为植株，最后移栽成活55棵滇紫草再生苗。
实施例2：
1)取滇紫草茎尖嫩叶，用蒸馏水把叶表面漂洗干净，然后置于75％乙醇溶液中浸泡20s，迅速去除乙醇溶液，用灭菌蒸馏水漂洗叶片2次，随后转移到2％的次氯酸钠溶液中浸泡2min，取出叶片，用灭菌蒸馏水漂洗3次。把经过消毒的叶片放到已灭菌的培养皿中，用刀片切割成大小约0.5cm2的小块，并移至愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织。诱导培养基和培养条件为：MS基础培养基+NAA 0.1mg/L+2，4-D 1.5mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养30天后获得胚性愈伤组织。
2)诱导出的胚性愈伤组织继代2次以后用于器官分化获得植株。继代培养基和培养条件为：MS基础培养基+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
3)从继代培养基中取出20块绿豆大小的胚性愈伤组织接种到分化培养基中。培养两周后，分化出大量丛生芽。丛生芽分化培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT2.0mg/L+蔗糖50g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
4)丛生芽长至1cm左右，将其从基部切下，进行丛生芽的扶壮培养。丛生芽扶壮培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT 2.0mg/L+蔗糖30g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
5)经过扶壮的丛生芽长至4cm左右的无根苗时，将苗移至生根培养基中诱导生根。生根培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+IBA 2.0mg/L+蔗糖20g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
6)幼苗长出4条以上的根，且长度超过1.5cm，即可进行炼苗。首先将组培瓶移至温室，瓶盖揭开2-3天，然后将幼苗从瓶中取出，用自来水将粘附于根上的琼脂清洗干净(切勿弄断幼根)，移至以蛭石和珍珠岩混合物为基质的培养穴中炼苗10天左右。经过炼苗的幼苗长出两片新叶后可移至自然土壤环境中进行生长，整个植株再生过程结束，一个月后统计再生苗成活率。
植株再生效率：步骤3)中20块胚性愈伤组织共产生丛生芽107个，其中95个经过扶壮和生根处理成为植株，最后移栽成活83棵滇紫草再生苗。
实施例3：
1)取滇紫草茎尖嫩叶，用蒸馏水把叶表面漂洗干净，然后置于75％乙醇溶液中浸泡20s，迅速去除乙醇溶液，用灭菌蒸馏水漂洗叶片2次，随后转移到2％的次氯酸钠溶液中浸泡2min，取出叶片，用灭菌蒸馏水漂洗3次。把经过消毒的叶片放到已灭菌的培养皿中，用刀片切割成大小约0.5cm2的小块，并移至愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织。诱导培养基和培养条件为：MS基础培养基+NAA 0.2mg/L+2，4-D 0.8mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养30天后获得胚性愈伤组织。
2)诱导出的胚性愈伤组织继代2次以后用于器官分化获得植株。继代培养基和培养条件为：MS基础培养基+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
3)从继代培养基中取出20块绿豆大小的胚性愈伤组织接种到分化培养基中。培养两周后，分化出大量丛生芽。丛生芽分化培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT1.5mg/L+蔗糖40g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养。
4)丛生芽长至1cm左右，将其从基部切下，进行丛生芽的扶壮培养。丛生芽扶壮培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT 2.0mg/L+蔗糖50g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
5)经过扶壮的丛生芽长至4cm左右的无根苗时，将苗移至生根培养基中诱导生根。生根培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+IBA 1.5mg/L+蔗糖15g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux。
6)幼苗长出4条以上的根，且长度超过1.5cm，即可进行炼苗。首先将组培瓶移至温室，瓶盖揭开2-3天，然后将幼苗从瓶中取出，用自来水将粘附于根上的琼脂清洗干净(切勿弄断幼根)，移至以蛭石和珍珠岩混合物为基质的培养穴中炼苗10天左右。经过炼苗的幼苗长出两片新叶后可移至自然土壤环境中进行生长，整个植株再生过程结束，一个月后统计再生苗成活率。
植株再生效率：步骤3)中20块胚性愈伤组织共产生丛生芽101个，其中90个经过扶壮和生根处理成为植株，最后移栽成活82棵滇紫草再生苗。
Claims (1)
1.一种通过愈伤组织再生滇紫草植株的方法，其特征在于该方法的操作步骤包括：
1)滇紫草胚性愈伤组织的诱导：把经过消毒的滇紫草叶片移至愈伤组织诱导培养基上，诱导培养基和培养条件为：MS基础培养基+NAA 0.1-0.3mg/L+2，4-D 0.8-1.5mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养；
2)胚性愈伤组织的继代：步骤1)中诱导出的胚性愈伤组织，进行继代2次，继代培养基和培养条件为：MS基础培养基+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养；
3)胚性愈伤组织丛生芽的分化：从继代培养基中取出胚性愈伤组织接种到分化培养基中，即可分化出丛生芽，丛生芽分化培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT1.0-2.0mg/L+蔗糖30-50g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，避光培养；
4)丛生芽的扶壮：待步骤3)中的丛生芽长至1cm左右，将其从基部切下，进行丛生芽的扶壮培养，丛生芽扶壮培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+KT 2.0mg/L+蔗糖30g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux；
5)丛生芽根的诱导发生：经过扶壮的丛生芽长至4cm左右的无根苗时，将苗移至生根培养基中诱导生根，生根培养基和培养条件为：无蔗糖MS基础培养基+IBA 1.0-2.0mg/L+蔗糖10-20g/L，固体琼脂培养，pH值5.6，温度25℃，光照培养，光强5000Lux；
6)炼苗和移栽：待步骤5)中的幼苗长出4条以上的根，且长度超过1.5cm，进行炼苗，移至以蛭石和珍珠岩混合物为基质的培养穴中炼苗10天，待幼苗长出两片新叶后可进行移栽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101266644A CN101828524B (zh) | 2010-03-18 | 2010-03-18 | 一种滇紫草植株再生的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101266644A CN101828524B (zh) | 2010-03-18 | 2010-03-18 | 一种滇紫草植株再生的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101828524A CN101828524A (zh) | 2010-09-15 |
| CN101828524B true CN101828524B (zh) | 2012-05-23 |
Family
ID=42712867
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101266644A Expired - Fee Related CN101828524B (zh) | 2010-03-18 | 2010-03-18 | 一种滇紫草植株再生的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101828524B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111194692B (zh) * | 2018-11-19 | 2022-06-10 | 四川农业大学 | 一种新疆紫草组培快繁方法和新疆紫草组培快繁培养基 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101503715A (zh) * | 2009-03-17 | 2009-08-12 | 昆明理工大学 | 一种在滇紫草细胞培养过程中增强紫草素合成的方法 |
-
2010
- 2010-03-18 CN CN2010101266644A patent/CN101828524B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101503715A (zh) * | 2009-03-17 | 2009-08-12 | 昆明理工大学 | 一种在滇紫草细胞培养过程中增强紫草素合成的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 葛锋等.新疆紫草愈伤组织高效诱导及快速增殖研究.《中国药学杂志》.2004,第39卷(第10期),第735-737页. * |
| 计巧灵等.新疆紫草外植体组织培养和植株再生.《新疆大学学报(自然科学版)》.1993,第10卷(第3期),第91-94页. * |
| 计巧灵等.新疆紫草的无性繁殖及其再生植株的遗传稳定性初探.《植物生理学通讯》.2001,第37卷(第6期),第499-502页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101828524A (zh) | 2010-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104335903A (zh) | 一种促进白及快速繁殖的方法 | |
| CN105340747A (zh) | 一种甘草无性快速繁殖方法 | |
| CN107047320A (zh) | 一种大花胡麻草组织培养方法 | |
| CN104396742B (zh) | 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的方法 | |
| CN106417011A (zh) | 野生白芨组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105766656A (zh) | 鹤顶兰假鳞茎快速繁殖的一步成苗方法 | |
| CN105265320B (zh) | 一种绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法 | |
| CN103155862B (zh) | 麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法 | |
| CN104137779A (zh) | 一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法 | |
| CN103583357B (zh) | 一种生石花无菌播种及再生体系建立的方法 | |
| CN103270946A (zh) | 一种铁皮石斛种苗生产与炼苗同步方法 | |
| CN105475129A (zh) | 一种竹叶兰组培快繁的方法 | |
| CN104488723A (zh) | 一种朝鲜淫羊藿组培快速繁殖方法 | |
| CN112042537B (zh) | 一种白芨植株再生体系的建立方法 | |
| CN103651141A (zh) | 亳菊工厂化试管苗快繁的方法 | |
| CN103477988A (zh) | 轮叶蒲桃离体培养和快速繁殖的方法 | |
| CN103477976B (zh) | 一种铁皮石斛茎段组培育苗法 | |
| CN102893866B (zh) | 一种草莓根尖脱毒与组培方法 | |
| CN103548695A (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN114600772B (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
| CN100442971C (zh) | 一种牡丹胚状体诱导方法 | |
| CN105409773A (zh) | 一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法 | |
| CN101828524B (zh) | 一种滇紫草植株再生的方法 | |
| CN104285816A (zh) | 一种文冠果的组织培养快繁方法 | |
| CN104604686B (zh) | 一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120523 Termination date: 20150318 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |