JPH0399266A - 1価の分析物を免疫学的に検出する方法 - Google Patents
1価の分析物を免疫学的に検出する方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、免疫学的方法を用いて分析物を検出する方法
に関する。
に関する。
従来の技術
臨床学的診断において、イムノアッセイの原理による検
出方法は、大きな重要性を達成した。免疫学的方法によ
れば、極めて多数の物質が正確に特異的に検出される。
出方法は、大きな重要性を達成した。免疫学的方法によ
れば、極めて多数の物質が正確に特異的に検出される。
このために、極めて特異的に検出すべき物質と一緒に複
合物を形成するが、類似の構造の化合物とは複合物を形
成しない抗体が必要とされる。従って、特異的抗体を見
い出すことは、新しい検出方法の修得の際もしくは公知
方法の改善の際に極めて本質的な部分である。モノクロ
ナール抗体を生産することができる、ケーラー(Koe
hler)およびミルシュタイン(Mi 1stein
)の方法により、著しい改善がもたらされる。モノクロ
ナール抗体を生産するハイブリドーマ細胞系列の生産は
、それ自体もはや全く困難を提供せず、特異的な高度に
親和性の抗体を生産するそれぞれ適当な細胞系列を選択
するスクリーニング法は、屡々費用がかかる。モノクロ
ナール抗体に対する要件が高くなればなるほど、スクリ
ーニングの費用もますます高くなり、場合によっては適
合する個々のモノクロナール抗体を見い出すことは、全
く不可能である。抗体に課されている主要な要件は、−
面で抗体が“その“抗原またはハプテンに結合するとい
う高い親和性、他面で抗体が“その”抗原またはハプテ
ンを認め、ひいては低い交差反応性を認めるという大き
い特異性にある。抗体の親和性は、それぞれの所与、例
えば分析物の濃度により左右される。試験した抗体と、
′別の”抗原との交差反応性は、一定の値よりも低い。
合物を形成するが、類似の構造の化合物とは複合物を形
成しない抗体が必要とされる。従って、特異的抗体を見
い出すことは、新しい検出方法の修得の際もしくは公知
方法の改善の際に極めて本質的な部分である。モノクロ
ナール抗体を生産することができる、ケーラー(Koe
hler)およびミルシュタイン(Mi 1stein
)の方法により、著しい改善がもたらされる。モノクロ
ナール抗体を生産するハイブリドーマ細胞系列の生産は
、それ自体もはや全く困難を提供せず、特異的な高度に
親和性の抗体を生産するそれぞれ適当な細胞系列を選択
するスクリーニング法は、屡々費用がかかる。モノクロ
ナール抗体に対する要件が高くなればなるほど、スクリ
ーニングの費用もますます高くなり、場合によっては適
合する個々のモノクロナール抗体を見い出すことは、全
く不可能である。抗体に課されている主要な要件は、−
面で抗体が“その“抗原またはハプテンに結合するとい
う高い親和性、他面で抗体が“その”抗原またはハプテ
ンを認め、ひいては低い交差反応性を認めるという大き
い特異性にある。抗体の親和性は、それぞれの所与、例
えば分析物の濃度により左右される。試験した抗体と、
′別の”抗原との交差反応性は、一定の値よりも低い。
この値は、この抗原がそれぞれの検出方法において測定
信号の誤差限界を越えての変化を全く生じないように確
定される。
信号の誤差限界を越えての変化を全く生じないように確
定される。
親和力および特異性に関連して理想的なモノクロナール
抗体を探求することにより試験に役立つ唯1つの抗体が
屡々得られるが、しかし多くの場合の点でではあるが必
ずしも全部の点でではなく要求を満たす若干の抗体が得
られる。
抗体を探求することにより試験に役立つ唯1つの抗体が
屡々得られるが、しかし多くの場合の点でではあるが必
ずしも全部の点でではなく要求を満たす若干の抗体が得
られる。
公知技術水準による方法は、試験条件(pH1塩濃度、
温度等)を、使用されるモノクロナール抗体を用いて臨
床試験に許容しうる交差反応性が得られるまで変えるこ
とにある。しかしこの方法は、時間を費やしかつ屡々望
ましい結果を導かない。
温度等)を、使用されるモノクロナール抗体を用いて臨
床試験に許容しうる交差反応性が得られるまで変えるこ
とにある。しかしこの方法は、時間を費やしかつ屡々望
ましい結果を導かない。
発明が解決しようとする課題
ところで、本発明の課題は、より高い特異性を有する受
容体を準備することによって競合的免疫学的検出方法を
改善することであった。
容体を準備することによって競合的免疫学的検出方法を
改善することであった。
課題を解決するための手段
この課題は、交差反応性が異なる、分析物と特異的に結
合可能な少なくとも2つのモノクロナール抗体を受容体
として使用することを特徴゛とする、1価の分析物を、
分析物に対する受容体の結合位置を中心に測定すべき分
析物と、公知量の標識化されたかまたは固定化された分
析物との競合反応によって免疫学的に検出する方法によ
って解決される。
合可能な少なくとも2つのモノクロナール抗体を受容体
として使用することを特徴゛とする、1価の分析物を、
分析物に対する受容体の結合位置を中心に測定すべき分
析物と、公知量の標識化されたかまたは固定化された分
析物との競合反応によって免疫学的に検出する方法によ
って解決される。
意外なことに、それぞれ特異性および親和力の要件を充
足しないモノクロナール抗体の混合物を使用することに
よって、個別の物質に比較して特異性が改善されている
試験系を提供することに成功する。
足しないモノクロナール抗体の混合物を使用することに
よって、個別の物質に比較して特異性が改善されている
試験系を提供することに成功する。
競合的免疫学的検出方法には、一般に知られている多数
の変法が存在する。通常、1価の分析物、殊にハプテン
には、次の2つの試験原理が有利である:固体相に結合
している受容体が試料および標識化された分析物と反応
するか、或いは標識化された受容体が試料および固体相
に結合している分析物と反応する。本発明に該当する方
法の場合には、抗体は、一般に等モル量で使用されるか
または不足量で使用される。
の変法が存在する。通常、1価の分析物、殊にハプテン
には、次の2つの試験原理が有利である:固体相に結合
している受容体が試料および標識化された分析物と反応
するか、或いは標識化された受容体が試料および固体相
に結合している分析物と反応する。本発明に該当する方
法の場合には、抗体は、一般に等モル量で使用されるか
または不足量で使用される。
形成された錯体は、分離することができ、かつ公知方法
で標識化は評価することができる。
で標識化は評価することができる。
全ての変法にとって、本発明による方法は、1つの改善
をもたらす。
をもたらす。
それぞれの方法に依存して、本発明による抗体混合物は
、標識化された受容体、固体相に結合した受容体、凝集
受容体等として使用することができる。本発明により使
用される抗体混合物には、モノクロナール抗体が選択さ
れ、この抗体の親和力は、最適の範囲内にありかつ僅か
な交差反応を有し、この場合交差反応性は、目標値を1
廻る。混合物に使用される抗体も交差反応性は種々ある
。すなわち、抗体は、検出すべき物質に類似している種
々の化合物と反応する。換言すれば、1つの抗体は、別
の抗体を反応させないかまたは実際に検出不可能に反応
させる(およびその反対に別の抗体を反応させるかまた
は実際に検出可能に反応させる)物質との交差反応を生
じる。この場合特定の物質に対する抗体の交差反応性は
、絶対の測定値ではなく、それぞれの試験系に依存する
相対的測定値である。基準点は、抗体を特異的に結合す
る測定すべき分析物である。分析物との反応の際に達成
される測定信号は、100%が設けられる。更に、分析
物の不在下または存在下で、種々の濃度の交差反応物質
が試験溶液に添加される。更に、交差反応物質を用いた
場合には、固有の分析物の一定量に相当する測定信号が
得られる。較正曲線の最高の精度の範囲内で読み取られ
る。この信号は、同様に%で表現される。すなわち、例
えば10%の交差反応は、分析物の1倍量を用いた場合
と同じ測定信号を達成するために、交差反応物質の10
倍量を使用しなければならないことを意味する。もう1
つの試験系の場合、交差反応物質には、別の値が測定で
きる。試験で要求される交差反応(目標値)はそれぞれ
の交差反応物質と分析物との濃度比に依存し、かつしI
;がって著しく異なっていてもよい。
、標識化された受容体、固体相に結合した受容体、凝集
受容体等として使用することができる。本発明により使
用される抗体混合物には、モノクロナール抗体が選択さ
れ、この抗体の親和力は、最適の範囲内にありかつ僅か
な交差反応を有し、この場合交差反応性は、目標値を1
廻る。混合物に使用される抗体も交差反応性は種々ある
。すなわち、抗体は、検出すべき物質に類似している種
々の化合物と反応する。換言すれば、1つの抗体は、別
の抗体を反応させないかまたは実際に検出不可能に反応
させる(およびその反対に別の抗体を反応させるかまた
は実際に検出可能に反応させる)物質との交差反応を生
じる。この場合特定の物質に対する抗体の交差反応性は
、絶対の測定値ではなく、それぞれの試験系に依存する
相対的測定値である。基準点は、抗体を特異的に結合す
る測定すべき分析物である。分析物との反応の際に達成
される測定信号は、100%が設けられる。更に、分析
物の不在下または存在下で、種々の濃度の交差反応物質
が試験溶液に添加される。更に、交差反応物質を用いた
場合には、固有の分析物の一定量に相当する測定信号が
得られる。較正曲線の最高の精度の範囲内で読み取られ
る。この信号は、同様に%で表現される。すなわち、例
えば10%の交差反応は、分析物の1倍量を用いた場合
と同じ測定信号を達成するために、交差反応物質の10
倍量を使用しなければならないことを意味する。もう1
つの試験系の場合、交差反応物質には、別の値が測定で
きる。試験で要求される交差反応(目標値)はそれぞれ
の交差反応物質と分析物との濃度比に依存し、かつしI
;がって著しく異なっていてもよい。
本発明方法には、交差反応性が物質に関連して上記目標
値の3倍まで、有利に2倍までであるようなモノクロナ
ール抗体を使用することができる。目標値範囲は、検出
限界と、それぞれの試験で認容しうる誤差限界との間に
ある。本発明によれば、少なくとも2つのモノクロナー
ル抗体の混合物が使用される。また、2つよりも多いモ
ノクロナール抗体種を混合してもよい。個々のモノクロ
ナール抗体が混合物の形で存在する割合は、その親和力
および特異性に左右される。一般に、最も僅かな交差反
応性を有する抗体は、最大の含量で供給される。個々の
抗体の割合は、所与に応じて選択される。有利には、割
合が0.1−10 : lの範囲内にある2つの抗体の
混合物が使用される。
値の3倍まで、有利に2倍までであるようなモノクロナ
ール抗体を使用することができる。目標値範囲は、検出
限界と、それぞれの試験で認容しうる誤差限界との間に
ある。本発明によれば、少なくとも2つのモノクロナー
ル抗体の混合物が使用される。また、2つよりも多いモ
ノクロナール抗体種を混合してもよい。個々のモノクロ
ナール抗体が混合物の形で存在する割合は、その親和力
および特異性に左右される。一般に、最も僅かな交差反
応性を有する抗体は、最大の含量で供給される。個々の
抗体の割合は、所与に応じて選択される。有利には、割
合が0.1−10 : lの範囲内にある2つの抗体の
混合物が使用される。
種々の化合物を用いて支障ある副反応を生じる少なくと
も2つの抗体の混合物によって、交差反応性は全体的に
減少される。この場合、この減少は、一般に希釈効果を
上端るので、明らかに相乗効果の上昇が存在する。
も2つの抗体の混合物によって、交差反応性は全体的に
減少される。この場合、この減少は、一般に希釈効果を
上端るので、明らかに相乗効果の上昇が存在する。
本発明による方法は、特異性に関連して理想的ではない
モノクロナール抗体を使用することができる。このよう
な単に部分的に試験に役立つ抗体のスクリーニングは、
殆ど危険を有さずしたがって安価であり、かつ迅速であ
る。別々では役立たない2個またはそれ以上のモノクロ
ナール抗体の混合物を使用することによって、十分に特
異的な試験系は提供することができる。それというのも
、種々の交差反応性を有する多数の抗体の混合物によっ
て、全体的に要求を満たす1つの系を提供することがで
きる。
モノクロナール抗体を使用することができる。このよう
な単に部分的に試験に役立つ抗体のスクリーニングは、
殆ど危険を有さずしたがって安価であり、かつ迅速であ
る。別々では役立たない2個またはそれ以上のモノクロ
ナール抗体の混合物を使用することによって、十分に特
異的な試験系は提供することができる。それというのも
、種々の交差反応性を有する多数の抗体の混合物によっ
て、全体的に要求を満たす1つの系を提供することがで
きる。
実施例
次に、本発明を図面および例によって詳説する。
臨床的に重要な交差反応は著しく異なっていてもよい、
例えば<0.1%またはく20%であるので、百分率の
値の記載で図示することは、困難である。このことを回
避するために、第1図〜第4図の場合には、抗体のそれ
ぞれの最大のXR(交差反応性)は、lで置かれている
(点線=標準化XR)。
例えば<0.1%またはく20%であるので、百分率の
値の記載で図示することは、困難である。このことを回
避するために、第1図〜第4図の場合には、抗体のそれ
ぞれの最大のXR(交差反応性)は、lで置かれている
(点線=標準化XR)。
例1
溶液中でのステロイド濃度の測定(試験原理)緩衝液ま
たは体液(血清、血漿、尿等)中でのステロイドの検出
のために、競合反応の原理による酵素試験を使用する: 材料ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−ストレプタビジン ー牛血清アルブミン(RS A) −基質溶液= (燐酸塩−クエン酸塩緩衝液100ミリ
モル/+2、p H4,4、 過硼酸ナトリウム3.2ミリモ ル/a1 A B T S (2,2’−アジノージー[3−エチ
ル−ベンズチアゾリンス ルホン酸(6)]−ジアンモニウ ム塩)1.9ミリモル/Q −被覆緩衝液:炭酸ナトリウム緩衝液200ミリモル/
Q%pH9,6、 一希釈緩衝液:燐酸すI−IJウム緩衝液50ミリモル
/Q、pH6,8、RSA 013%、 一洗浄液 :NaCQ O,9% MAK(7)ビオチニル化は、JAC3100(197
8)、3585〜3590の記載によりビオチンを用い
てN−ヒドロキシスクシンイミド−ビオチンと、1ol
lの比で反応させることによって行なわれる。
たは体液(血清、血漿、尿等)中でのステロイドの検出
のために、競合反応の原理による酵素試験を使用する: 材料ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−ストレプタビジン ー牛血清アルブミン(RS A) −基質溶液= (燐酸塩−クエン酸塩緩衝液100ミリ
モル/+2、p H4,4、 過硼酸ナトリウム3.2ミリモ ル/a1 A B T S (2,2’−アジノージー[3−エチ
ル−ベンズチアゾリンス ルホン酸(6)]−ジアンモニウ ム塩)1.9ミリモル/Q −被覆緩衝液:炭酸ナトリウム緩衝液200ミリモル/
Q%pH9,6、 一希釈緩衝液:燐酸すI−IJウム緩衝液50ミリモル
/Q、pH6,8、RSA 013%、 一洗浄液 :NaCQ O,9% MAK(7)ビオチニル化は、JAC3100(197
8)、3585〜3590の記載によりビオチンを用い
てN−ヒドロキシスクシンイミド−ビオチンと、1ol
lの比で反応させることによって行なわれる。
a)直接に被覆された管を用いての測定管を被覆緩衝液
(炭酸ナトリウム/重炭酸ナトリウム0.2モル/Q、
pH9,6)中の清浄化された抗抗体溶液(10μg/
mQ”)の調製物と一緒に室温で1時間恒温保持する。
(炭酸ナトリウム/重炭酸ナトリウム0.2モル/Q、
pH9,6)中の清浄化された抗抗体溶液(10μg/
mQ”)の調製物と一緒に室温で1時間恒温保持する。
管壁への前記抗体の自発的な結合が生じる。次に、この
管をアルブミン0.3%当たり燐酸塩緩衝液50ミリモ
ル/aで15分間後処理し、かつ洗浄する。
管をアルブミン0.3%当たり燐酸塩緩衝液50ミリモ
ル/aで15分間後処理し、かつ洗浄する。
特異的抗体を希釈緩衝液中に添加し、かつ60分間恒温
保持する。その後に、試料600μQ(分析物、交差反
応物質等)および酵素接合体500μQ(エストリオー
ル−PODSPOD−活性: 200 mU/m+2)
を添加し、か960分間恒温保持する。別のステロイド
に対する交差反応を試験するために、試料溶液に試験す
べきステロイドの種々の量を添加する。別のステロイド
により測定信号が減少することは、固有の分析物を有す
る標準曲線の高さを読取ることができる交差反応を意味
する。更に、洗浄工程の後にペルオキシダーゼ活性を基
質溶液の添加によって測定し、染料(1000μQ)の
開発のために先にさらに恒温保持を行なう(30分間)
。染料の変換率の測定は、422nmで光度計中で行な
われる。
保持する。その後に、試料600μQ(分析物、交差反
応物質等)および酵素接合体500μQ(エストリオー
ル−PODSPOD−活性: 200 mU/m+2)
を添加し、か960分間恒温保持する。別のステロイド
に対する交差反応を試験するために、試料溶液に試験す
べきステロイドの種々の量を添加する。別のステロイド
により測定信号が減少することは、固有の分析物を有す
る標準曲線の高さを読取ることができる交差反応を意味
する。更に、洗浄工程の後にペルオキシダーゼ活性を基
質溶液の添加によって測定し、染料(1000μQ)の
開発のために先にさらに恒温保持を行なう(30分間)
。染料の変換率の測定は、422nmで光度計中で行な
われる。
b)ストレプタビジンで被覆された管の測定管をストレ
ブタビジン溶液を用いて被覆緩衝液中で室温で1時間恒
温保持し、かつアルブミン0.3%当たり燐酸塩緩衝液
50ミリモル/aで15分間後処理し、かつ洗浄する。
ブタビジン溶液を用いて被覆緩衝液中で室温で1時間恒
温保持し、かつアルブミン0.3%当たり燐酸塩緩衝液
50ミリモル/aで15分間後処理し、かつ洗浄する。
特異的抗体を希釈緩衝液中に添加し、かつ60分間恒温
保持する。その後に、試料600μQ(分析物、交差反
応物質等)および酵素接合体500μQ(エストリオー
ル−POD、POD−活性: 200 mU/m12)
を添加し、か960分間恒温保持する。別のステロイド
に対する交差反応を試験するために、試料溶液に試験す
べきステロイドの種々の量を添加する。別のステロイド
により測定信号が減少することは、固有の分析物を有す
る標準曲線の高さを読取ることができる交差反応を意味
する。更に、洗浄工程の後にペルオキシダーゼ活性を基
質溶液の添加によって測定し、染料(1000μQ)の
開発のために先にさらに恒温保持を行なう(30分間)
。染料の変換率の測定は、422nmで光度計中で行な
われる。
保持する。その後に、試料600μQ(分析物、交差反
応物質等)および酵素接合体500μQ(エストリオー
ル−POD、POD−活性: 200 mU/m12)
を添加し、か960分間恒温保持する。別のステロイド
に対する交差反応を試験するために、試料溶液に試験す
べきステロイドの種々の量を添加する。別のステロイド
により測定信号が減少することは、固有の分析物を有す
る標準曲線の高さを読取ることができる交差反応を意味
する。更に、洗浄工程の後にペルオキシダーゼ活性を基
質溶液の添加によって測定し、染料(1000μQ)の
開発のために先にさらに恒温保持を行なう(30分間)
。染料の変換率の測定は、422nmで光度計中で行な
われる。
例2
MAK<エストリオール>19.6.9とMAK〈エス
トリオール>1.26.18との混合物に対する交差反
応の測定 材料ニ ーE3 POD接合体(こ(7)E3−POD接合体
は、エストリオールを6位でヘミスクシネートで活性化
しかつ引続きスクシンイミドでエステル化することによ
り得られる。生成されたエステルは、直接にペルオキシ
ダーゼに結合される。)(POD活性活性500m上び
loomU/mQ) ビオチニル化されたMAK<E3>19.6゜9 (E
CACC89082503) (100μg/mQ) ビオチニル化されたMAK<E 3> 1.26 。
トリオール>1.26.18との混合物に対する交差反
応の測定 材料ニ ーE3 POD接合体(こ(7)E3−POD接合体
は、エストリオールを6位でヘミスクシネートで活性化
しかつ引続きスクシンイミドでエステル化することによ
り得られる。生成されたエステルは、直接にペルオキシ
ダーゼに結合される。)(POD活性活性500m上び
loomU/mQ) ビオチニル化されたMAK<E3>19.6゜9 (E
CACC89082503) (100μg/mQ) ビオチニル化されたMAK<E 3> 1.26 。
18 (ECACC89082502)(l OOOμ
9 /mQ) 使用した交差反応物質の濃度 エストリオール(E 3); 0,5.10,40ng
/m(2(試験の場合に1=5の希釈)エストラジ:t
−ル(E2): 10,1100n/ m Q エステトC’−ル(E4):lO,loOng/Q E 3−3−スル7エート: 50s 100 n9
/Q E3−3−グルクロニド :50.ioOng/Q 測定は、例1bの記載により実施する。
9 /mQ) 使用した交差反応物質の濃度 エストリオール(E 3); 0,5.10,40ng
/m(2(試験の場合に1=5の希釈)エストラジ:t
−ル(E2): 10,1100n/ m Q エステトC’−ル(E4):lO,loOng/Q E 3−3−スル7エート: 50s 100 n9
/Q E3−3−グルクロニド :50.ioOng/Q 測定は、例1bの記載により実施する。
結果(第1図)は、MAK l 9.6.9がエストラ
ジオールおよびエステトロールと強力に反応し、MAK
1.26.18がエストリオール−3−スルフェート
およびエストリオール−3−グルクロニドと強力に交差
反応することを示す。
ジオールおよびエステトロールと強力に反応し、MAK
1.26.18がエストリオール−3−スルフェート
およびエストリオール−3−グルクロニドと強力に交差
反応することを示す。
抗体は、種々の混合比で使用された。種々の混合比の場
合には、それぞれの交差反応が変化する。1つの最適な
範囲および有利な範囲が存在する。
合には、それぞれの交差反応が変化する。1つの最適な
範囲および有利な範囲が存在する。
例3
MAK<エストリオール>19.6.9とMAK〈エス
トリオール>984.C2との混合物に対する交差反応
の測定 測定は、例1aの記載と同様に実施する。MAK9B4
.C2(製造元I P L 、 Interpharm
Laboratories Ltd、、Ne5s Zi
ona 76110、イスラエル国)は、(1,26,
18と同様に)E3−3−スルフニー )およびE 3
−3−グルクロニドと強力に交差反応する。
トリオール>984.C2との混合物に対する交差反応
の測定 測定は、例1aの記載と同様に実施する。MAK9B4
.C2(製造元I P L 、 Interpharm
Laboratories Ltd、、Ne5s Zi
ona 76110、イスラエル国)は、(1,26,
18と同様に)E3−3−スルフニー )およびE 3
−3−グルクロニドと強力に交差反応する。
また、この場合には、XRが明らかに減少しているよう
なMAK濃度が存在する(第2図参照)。
なMAK濃度が存在する(第2図参照)。
例4
MAK<テストステロン>8.15.1とMAKくテス
トステロン>700−03物質との混合物に対する交差
反応の測定ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−マウス−Fcγに抗するポリクロナール羊抗体(Ig
G)(10μg/mL管の被覆のため) −クロテインC −テストステロンPOD接合体(このテストステロン−
POD接合体は、テストステロンを3位でカルボキシメ
チルオキシンで活性化しかつスクシンイミドでエステル
化することにより得られる。生成されたエステルは、直
接にPODに結合される。)(P OD活性100mU
/mQ)−テストステロン 4−アンドロステン−3,17−シオンーアンドロステ
ンジオン 11−ケト−テストステロン −MAK<テストステロン>8.15.1 (ECA
CC89082501) MAK(テストステロン>700−03(製造元: M
edix Biotech Inc、、Foster
C1ty、CA 94404 、USA、型式T−70
0−03)使用しt;交差反応物質の濃度 テストステロン :0.1.25.2.5.5.1
O120,40、n9/ma アンドロステンジオン:2.5.5.10.20.40
.80.160.320.640 n9/mQ 11−ケト−テストステロン=2.5.5.1020.
40.80.1601.320.64Qr+g/mQ 測定は、例1aの記載と同様にして実施される。
トステロン>700−03物質との混合物に対する交差
反応の測定ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−マウス−Fcγに抗するポリクロナール羊抗体(Ig
G)(10μg/mL管の被覆のため) −クロテインC −テストステロンPOD接合体(このテストステロン−
POD接合体は、テストステロンを3位でカルボキシメ
チルオキシンで活性化しかつスクシンイミドでエステル
化することにより得られる。生成されたエステルは、直
接にPODに結合される。)(P OD活性100mU
/mQ)−テストステロン 4−アンドロステン−3,17−シオンーアンドロステ
ンジオン 11−ケト−テストステロン −MAK<テストステロン>8.15.1 (ECA
CC89082501) MAK(テストステロン>700−03(製造元: M
edix Biotech Inc、、Foster
C1ty、CA 94404 、USA、型式T−70
0−03)使用しt;交差反応物質の濃度 テストステロン :0.1.25.2.5.5.1
O120,40、n9/ma アンドロステンジオン:2.5.5.10.20.40
.80.160.320.640 n9/mQ 11−ケト−テストステロン=2.5.5.1020.
40.80.1601.320.64Qr+g/mQ 測定は、例1aの記載と同様にして実施される。
結果:
MAK8.15.1およびMAK700−03は、テス
トステロンに対する特異的な抗体であるが、アンドロス
テンジオンそれぞれ11−ケト−テストステロンに対し
て比較的に高いXRを有する。
トステロンに対する特異的な抗体であるが、アンドロス
テンジオンそれぞれ11−ケト−テストステロンに対し
て比較的に高いXRを有する。
結合されていない抗体は、種々の混合比で使用された(
第3図参照)。
第3図参照)。
テストステロンに対するMAK混合物のXRは、混合に
よって影響を及ぼされうるが、この場合にも全ての交差
反応が予想された値であるような混合比が存在しうる(
第3図)。
よって影響を及ぼされうるが、この場合にも全ての交差
反応が予想された値であるような混合比が存在しうる(
第3図)。
例5
MAK(フエノバルビタール>2.341.l15とM
AK<フェノバルビクール>2.93.37との混合物
に対する交差反応の測定:材料ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−マウス−Fcγに抗するポリクロナール羊抗体(I
gG)(l Opg/rrl;管の被覆ツタめ) 一りロティンC −フェノパルビタールーPOD接合体(この)ェノバル
ビタールーPOD接合体は、フエノバルビクールからN
上で1位でブチレートで活性化しかつスクシンイミドで
エステル化することにより得られる。生成されたエステ
ルは、直接にPODに結合される。)(POD活性10
0mU/mf2) −フェノバルビクール ーセコバルビタール ーアモバルビタール ベンドパルビタール プリミドン −MAK<フェノバルビタール>2.341.115
(ECACC90071903)MAK(フエノバルビ
クール>2.93.37(ECACC90071904
) 使用しI;交差反応物質の濃度: フェノバルビタール :0.7.8.15.6.31.
3.62.5.125ng/mQセコバルビタール
:0.2、lpg/m12アモバルビタール :0.
2、lμg/mQベンドパルビタール :0.2、lμ
g/mQプリミドン =115μg/mQ測
定は、例1aの記載と同様にして実施される。
AK<フェノバルビクール>2.93.37との混合物
に対する交差反応の測定:材料ニ ー被覆されていないルラン管(Luran tube)
−マウス−Fcγに抗するポリクロナール羊抗体(I
gG)(l Opg/rrl;管の被覆ツタめ) 一りロティンC −フェノパルビタールーPOD接合体(この)ェノバル
ビタールーPOD接合体は、フエノバルビクールからN
上で1位でブチレートで活性化しかつスクシンイミドで
エステル化することにより得られる。生成されたエステ
ルは、直接にPODに結合される。)(POD活性10
0mU/mf2) −フェノバルビクール ーセコバルビタール ーアモバルビタール ベンドパルビタール プリミドン −MAK<フェノバルビタール>2.341.115
(ECACC90071903)MAK(フエノバルビ
クール>2.93.37(ECACC90071904
) 使用しI;交差反応物質の濃度: フェノバルビタール :0.7.8.15.6.31.
3.62.5.125ng/mQセコバルビタール
:0.2、lpg/m12アモバルビタール :0.
2、lμg/mQベンドパルビタール :0.2、lμ
g/mQプリミドン =115μg/mQ測
定は、例1aの記載と同様にして実施される。
結果:
MAK2.341.115およびMAK2.93.37
は、フェノバルビタールに対する特異的な抗体であるが
、−面でプリミドン(MAK2.341.115)に対
して、他面セコバルビクール、アモバルビタールおよび
ベンドパルビタール(MAK2.93.37)に対して
比較的に高い交差反応を示す。
は、フェノバルビタールに対する特異的な抗体であるが
、−面でプリミドン(MAK2.341.115)に対
して、他面セコバルビクール、アモバルビタールおよび
ベンドパルビタール(MAK2.93.37)に対して
比較的に高い交差反応を示す。
抗体は、種々の混合比で使用される(第4図参照)。
フェノバルビタールに対するMAK混合物の交差反応は
、混合によって影響を及ぼされうろこの場合にも全ての
交差反応が予想された値であるような混合比が存在しう
る(第4図)。
、混合によって影響を及ぼされうろこの場合にも全ての
交差反応が予想された値であるような混合比が存在しう
る(第4図)。
第1図は、2つの抗体19.6.9およびl。
26.18の種々の混合物に対して得られる交差反応性
(標準化した)が記載されているグラフを示し、 第2図は、2つの抗体19.6.9および9日4.02
の種々の混合物に対して得られる交差反応性(標準化し
た)が記載されているグラフを示し、 第3図は、2つの抗体8.15.1および700−03
の種々の混合物に対して得られる交差反応性(標準化し
た)が記載されているグラフを示し、かつ 第4図は、2つの抗体2.341.115および2.9
3.37の種々の混合物に対して得られる交差反応性(
標準化した)が記載されているグラフを示す。
(標準化した)が記載されているグラフを示し、 第2図は、2つの抗体19.6.9および9日4.02
の種々の混合物に対して得られる交差反応性(標準化し
た)が記載されているグラフを示し、 第3図は、2つの抗体8.15.1および700−03
の種々の混合物に対して得られる交差反応性(標準化し
た)が記載されているグラフを示し、かつ 第4図は、2つの抗体2.341.115および2.9
3.37の種々の混合物に対して得られる交差反応性(
標準化した)が記載されているグラフを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、1価の分析物を、分析物に対する受容体の結合位置
を中心に測定すべき分析物と、公知量の標識化されたか
または固定化された分析物との競合反応によって免疫学
的に検出する方法において、交差反応性が異なる、分析
物と特異的に結合可能な少なくとも2つのモノクロナー
ル抗体を受容体として使用することを特徴とする、1価
の分析物を免疫学的に検出する方法。 2、2つのモノクロナール抗体の混合物を0.1−10
:1の比で使用する、請求項1記載の方法。 3、検出限界と、そのつどの試験に対して認めることが
できる限界の3倍との範囲内にある、1つまたはそれ以
上の物質との交差反応性を有するモノクロナール抗体を
使用する、請求項1または2に記載の方法。
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