JPH0380090A - ２―オキソ―４―フェニル酪酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は２−オキソ−４−フェニル酪酸の製造方法に関
する。２−オキソ−４−フェニル酪酸は種々の医薬品の
重要中間体である。

（従来技術及び発明が解決しようとする課題）従来、２
−オキソ−４−フェニル−３−ブテン酸から２−オキソ
−４−フェニル酪酸を製造する方法としては水素雰囲気
下でニッケル触媒を用いて化学合成的に製造する方法（
Ｉｎｓｔ、Ｏｒｇ。

５Ｌｎｔ、　、５８　（１１）　、２５８６、（１９８
５））等が知られているが、化学合成的に水素添加すれ
ば３位の二重結合だけではなく、２位のカルボニル基ま
で還元されて、生成物としてオキソ酸とヒドロキシ酸が
生じるという問題があり、３位の二重結合のみを特異的
に水添する方法が望まれていた。また、微生物の水素添
加能を利用して２−オキソ−４−フェニル−３−ブテン
酸から２−オキソ−４−フェニル酪酸を製造する方法は
知られていない。

（課題を解決する為の手段） 本発明者は３位の二重結合のみに特異的に水素添加する
ことで２−オキソ−４−フェニル−３ブテン酸から２−
オキソ−４−フェニル酪酸を得る方法として微生物によ
る水素添加法に着目し、この目的に適した微生物を検索
した結果、ミクロコツカス（Ｍｉ　ｃ　ｒｏｃｏｃｃｕ
ｓ）　、パラコッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属に属
する微生物が本発明の目的を達成することを見出だし、
本発明を完成したものである。本発明に使用する微生物
としては、ミクロコツカス（ＭｉｃｒｏｃｏｃＣｕＳ）
、バラコツカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属に属する微
生物で２−オキソ−４−フェニル３−ブテン酸を２−オ
キソ−４−フェニル酪酸に水素添加する能力を有する物
であればいずれも使用可能であるが具体的にはミクロコ
ツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　　１ｕｔ
ｅｕｓ）ＡＴＣＣ７４６８、バラコツカス・デニトリフ
ィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ　　ｄｅｎｉｔｒｉｆ
ｉｃａｎｓ）ＩＦＯ１２４４２等を挙げることができる
。

これらの微生物は、野生株、変異株、または細胞融合も
しくは遺伝子操作法等の手法により誘導される組み替え
株等、いずれの株でも好適に用いることができる。

尚、ＩＦＯ番号の付された微生物は、（財）発酵研究所
（ＩＦＯ）発行のＬｉ５ｔ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　、
第８版、第１巻（１９８８）に記載されており、該（財
）発酵研究所（ＩＦＯ）から人手することができる。Ａ
ＴＣＣ番号の付された微生物は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔ
ｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴ
ＣＣ）発行のＣａｔａｌｏｇｕｅ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅ、
ｒｉａ　Ｐｈａｇｅｓ　ｒＤＮＡ　Ｖｅｃｔｏｒｓ　。

第１６版（１９８５）に記載されており、該Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉ
ｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手することができる。

発明に用いる培地は菌が増殖し得る培地であれば特に制
限はない。例えばグルコース、シュクロース等の糖類、
エタノール、グリセロール等のアルコール類、酢酸、プ
ロピオン酸等の有機酸類、パラフィン等の炭化水素類、
その他の炭素源、又は、これらの混合物、窒素源として
、硫酸アンモニウム、酵母エキス、尿素等の無機有機含
窒素化合物、他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類等、
通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して用いる
ことができる。また必要に応じて微生物の増殖を促進す
る因子あるいは培地のｐＨ保持の為の化合物等を添加す
ることもできる。

培養方法としては培地ｐＨを３．　０〜９．５、培養温
度は２０〜４５℃の範囲にて好気的あるいは姐気的に１
〜５日間培養するのが好ましい。

水素添加反応の方法としては（１）培養液をそのまま用
いる方法、（２）遠心分離等により、菌体を分離し、こ
れをそのまま、或いは、洗浄した後、緩衝液、水等に再
懸濁したものに、２−オキソ−４−フェニル−３−ブテ
ン酸を添加し反応させる方法（３）菌体破砕物、アセト
ン処理、凍結乾燥等の処理をほどこしたものを生菌体の
代わりに用いる方法　（４）これらを担体に固定化して
用いる方法等を適用できる。この反応の際、グルコース
、シュクロース等の炭素源をエネルギー源として添加し
たほうが収率が向上する場合が多い。

２−オキソ−４−フェニル−３−ブテン酸はそのまま、
或いは、反応に影響を与えないような有機溶媒に溶解し
たり、界面活性剤等に分散させたりして、反応始めから
一括に或いは分割して添加しても良い。また、２−オキ
ソ−４−フェニル−３−ブテン酸はナトリウム塩、カリ
ウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等として用いる
ことかできる。

反応はｐＨ３〜９の範囲で１０〜６０℃の温度で行うの
が好ましく、１〜１２０時間、攪拌下で行う。基質の使
用濃度は特に制限されないが、０゜１〜１０％程度が好
ましい。

反応によって生成した２−オキソ−４−フェニル酪酸の
採取は反応液から直接或いは菌体分離後、酸性にした後
、有機溶媒で抽出し、カラムクロマトグラフィー、蒸留
等の通常の精製方法を用いれば容易に得られる。

（実施例） 以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発明
はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

実施例における定量は逆相系カラムを用いた高速液体ク
ロマトグラフィー（カラム：ヌクレオシル１０Ｃ１８、
（４，６ｍｍ　Ｉ　Ｄ　Ｘ　２５０ｍｍ）移動相：４０
ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ３ｙ　Ｏ）／アセトニトリル
−４／１、検出；　２５４　ｎ　ｍ　％流速１．０ｍ１
７分）により行った。

実施例１ グルコース１％、酵母エキス０．　５％、ペプトン０．
　５％、肉エキス０．５％、塩化ナトリウム０．　５％
、ｐＨ７，０より成る組成の培地２Ｌを含む５Ｌ容ジャ
ーファーメンタ−にミクロコツカス◆ルテウス（Ｍｉｃ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ　　ｌｕｔ　ｅｕｓ）ＡＴＣＣ７４６
８を植菌し、３０℃で攪拌４００ｒｐｍ、通気量１ｖ、
　　ｖ、　ｍ、の条件で２４時間培養した。培養終了後
、遠心分離にて菌体を集め、水１Ｌにて菌体を洗浄した
。しかる後、この菌体を水２Ｌに懸濁し、２−オキソ−
４−フェニル−３−ブテン酸カリウム２０ｇ１グルコー
ス２００ｇ、炭酸カルシウム２０ｇを添加し３０℃で攪
拌下４８時間反応させた。反応終了後、硫酸でｐＨ１に
した後、等量の酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル
層を無水芒硝で脱水した後、減圧下読溶剤し、２−ヒド
ロキシ−４−フェニル酪酸の粗結晶１６ｇを得た。これ
をメタノールで再結晶すると、２−ヒドロキシ−４−フ
ェニル酪酸の結晶を１４ｇ得られた。

実施例２ 実施例１と同様の操作でバラコツカス・デニトリフィカ
ンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ　　ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃ
ａｎｓ）ＩＦＯ１２４４２を用いた場合は２−ヒドロキ
シ−４−フェニル酪酸の結晶を１２ｇ得られた。

（発明の効果） 本発明の微生物を用いた水素添加法による２ヒドロキシ
−４−フェニル酪酸の製造方法は２−ヒドロキシ−４−
フェニル酪酸を簡便に効率良く製造できることを可能に
させるものであり、工業的製造方法として極めて有利で
ある。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ２−オキソ−４−フェニル−３−ブテン酸を水素添加し
   ２−オキソ−４−フェニル酪酸に変換する能力を有する
   ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、パラコッ
   カス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物群から
   選ばれた微生物またはその処理物を２−オキソ−４−フ
   ェニル−３−ブテン酸に作用させ、生成する２−オキソ
   −４−フェニル酪酸を採取することを特徴とする２−オ
   キソ−４−フェニル酪酸の製造方法。