JPH0364512B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗ウイルス及び抗腫瘍作用を有するト
リペプチド及びこれらトリペプチドを含有する薬
剤に関する。

イタリア国特許出願第49691号Ａ／78及び第
51885号Ａ／78には、人間の組織の細胞に生理学
的に作用し、免疫の過程で関与することによつて
生体の防御機構を励起させる物質あるいは物質混
合物の製造方法が記載されている。

本発明の課題は、人間生体の防御力機構を高め
るために、その細胞を刺激し、免疫系の範囲内で
細胞で起こされている免疫反応に応答する、すな
わち、例えばＴ−リンパ球〔ヘルパー（Helper）
リンパ球並びに細胞毒的に作用するリンパ球も〕、
そして、それによつて、また生体が再発性炎症に
際して従う方法を示すために液素性免疫を改良す
るペプチドを創り出すことであつた。

本発明の対象は下記のアミノ酸結合順序のトリ
ペプチドに関するものである。

Phe−Ala−Leu 本発明によるトリペプチドは、抗ウイルス作
用、例えば急性及び慢性MHV₃ヘパチチス
（MHV₃Hepatitis）、また同様に抗腫瘍作用を、
例えば、レウイス（Lewis）肺癌と称されている
腫瘍に対しても、示しているということが新規に
見いだされた。別して、それらは、細胞で起こさ
れている免疫反応及び血液グロブリンに起こされ
ている液素性免疫を高める。適当した投与量で腹
腔内に接種された本発明によるトリペプチドは、
２つの重要な免疫的事実を解決し、それによつて
抗ウイルス−及び抗腫瘍効果を引き起こす： １ Ｔ−リンパ球に密接している細胞に起こる免
疫反応（雄羊のヘマチンとカラー（Rosetle）
を構成する、これらのリンパ球の数の大増加に
結び付いて）の刺激。

２ 電気泳動的にα₁及びα₂の間にあるバンド内で
動き、優れた免疫性特性を示すグロブリン−血
清の生成。

本発明の対象は、また、ウイルスに対する免疫
強化の医薬剤及び本発明によるトリペプチドの少
なくとも１種を含有すること、必要に応じては、
薬学的に相容する担体及び／あるいは添加剤との
組成物であることを特徴とする腫瘍に対する防御
力を高める医薬剤である。

本発明によるトリペプチドはそれ自体公知の方
法で、従来からの保護基を用いて、例えアドバン
セス イン プロテイン ケミストリー
（Advances in protein Chem.）12、465（1957）
に記載されているようにして行うことができる。
それは、また、それ自体公知の方法で血液から分
離することもできる。

例 １ トリペプチドPhe−Ala−Leuの抗ウイルス特
性の検討。

BDFI種の16ｇの雄マウスにヘパチチスウイル
スMHV₃で感染させる。そのウイルスは最適の
感染投与量で、感染後第５日及び第７日で、感染
動物少なくとも80％が死亡する。

処理動物の血清のトリペプチドの効果を確認す
るために、感染動物の２群（処理及び非処理対照
動物）を下記のパラメーターで検討した。

(a) 感染させた処理及び非処理対照の死亡曲線； (b) 第５日に得られた血液のアミノ基転移酵素値
（最高感染）； (c) 身体の重要部分、特に肝臓（直接ウイルスに
侵かされる身体の部分）の視覚試験。

その結果は下記のとおりであつた。

(a) 前もつてトリペプチドで処理（腹腔内注入）
した50のマウスの死亡曲線は、非処理の50の対
照よりも50％少ない価を示す。

(b) 前もつてトリペプチドで処理したマウスの死
亡曲線は、非処理対照のそれよりも平均50％だ
け低いということは、第５日で調べたアミノ基
転移酵素値を証明する。

(c) 視覚的試験は、前もつてトリペプチド処理し
た動物の肝臓はウイルス感染に起因する被害は
全然なく、しかるに、非処理対照の肝臓はこの
ような被害を受けていることを示す。

例 ２ トリペプチドPhe−Ala−Leuの抗腫瘍特性の
検討。

モデルとしてレウイス肺癌を選んだ。このモデ
ルは、すべての場合100％転移して、その元の発
生部位の動物の足の皮下組織から動物の肺に転移
するので、特に興味がある。その動物は、次い
で、この転移のために死亡する。

下記の処理を行つた。

処理Ａ １ ０日目BDFI種の16ｇのマウスを生理学的溶
液0.5mlに溶解させたトリペプチド350γで処理
した。

２ トリペプチド処理後12日目に、トリペプチド
処理したマウスに腫瘍を節肉内に感染を行つ
た。〔そのマウスは、12日及び13日目にＴ−リ
ンパ球は最大に増加し、そのリンパ球はカラー
（Rosette）を形成する部位にある。〕 ３ 15日目に更にマウス１匹当たり350γのトリ
ペプチド処理を行つた。この第２の投与は腹腔
内あるいは節肉内で適用することができる。し
かし、本トリペプチドはなんの禁忌もなく経口
投与することもできる。

処理Ｂ 上記Ａ、１及び２に記載の処理を繰り返す。続
いて、各マウスは、腫瘍感染の日から引き続いて
少なくとも12日間を１日当たり0.15mlの動物血清
で腹腔投与処理を行う。（その血清は、あらかじ
めトリペプチドで処理し、続いて死亡したBDFI
種のマウスのもので、血清は13日目に採取した。） トリペプチドの適用は、腫瘍の生成及び肺転移
の生起に関してプラスの結果をもたらすことが分
かつた。LD50は350γ×10／マウス（56mg／マウ
スｇ）であり、投与方法は年に２度筋肉注射
（8.6〜14.3mg／Kg）により行つた。

製造例 フエニル−アラニル−ロイシン （Phe−Ala−Leu）の製造 スチレンとジビニルベンゼンとの共重合であ
り、反応性のクロロメチル基を有する合成樹脂
100ｇを湿気遮断下にフラスコに入れ、無水エタ
ノール500mlをその上に仕込む。ｔ−ブチルオキ
シカーボニルフエニルアラニン1.0モルを加え、
還流下、90℃で24時間加熱する。酢酸20ml中の無
水塩酸の添加により、保護基が分裂する。塩酸の
中和のため、及び遊離のアミノ酸−NH₂−基を
生成させるためにトリエチルアミン20mlを加え
る。そこで、この生成物５ｇを、エタノール溶液
中のｔ−ブチルオキシカーボニルアラニン１モル
を、Ｎ，Ｎ−カーボニルジイミダゾールの存在下
で、還流下、12時間反応させる。得られたジペプ
チド−フエニル−アラニン（Dipeptid−Phe−
Ala）を次いで、40℃でメチレンクロライドで洗
浄する。この生成物を、次いで、ｔ−ブチルオキ
シカーボニルロイシン１モルで上記の方法により
転化させる。その際樹脂に結合しているトリペプ
チド フエニル−アラニン−ロイシン（Phe−
Ala−Leu）を得る。この生成物をトリフルオロ
酢酸100ml中に懸濁し、次いでこの懸濁液を通し
て臭化水素酸を２時間流す。これによつて、保護
基は分裂し、担体のトリペプチドは溶解する。樹
脂を濾別し、トリペプチドを含有する溶液は真空
下で蒸発乾固する。

トリペプチドは、薄層クロマトグラフイーによ
り２−展開系においてシリカゲルでR_f−価0.39を
有する。その際、第１移動相には、酢酸エチル−
ブタノール−酢酸−水（２：１：１：１）混合物
が、第２移動相にはクロロホルム−メタノール
（２：１）混合物が適用される。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明のトリペプチドのIRスペクトル
を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ アミノ酸配列がPhe−Ala−Leuである、ト
   リペプチド。 ２ アミノ酸配列：Phe−Ala−Leuのペプチド
   および医薬的に許容可能な担体を含む、抗ウイル
   ス剤。 ３ アミノ酸配列：Phe−Ala−Leuのペプチド
   および医薬的に許容可能な担体を含む、抗腫瘍
   剤。