JPH029600B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH029600B2 JPH029600B2 JP56027162A JP2716281A JPH029600B2 JP H029600 B2 JPH029600 B2 JP H029600B2 JP 56027162 A JP56027162 A JP 56027162A JP 2716281 A JP2716281 A JP 2716281A JP H029600 B2 JPH029600 B2 JP H029600B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- uti
- molecular weight
- papain
- pepsin
- influenza virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 12
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 10
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 10
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 8
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 8
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 108010088854 urinastatin Proteins 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 108010027597 alpha-chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本発明は尿中トリプシン阻害物質分解物及び該
分解物を有効成分とする抗インフルエンザウイル
ス用剤に関する。 本発明者らは先に尿中トリプシン阻害物質
（Urinary Trypsin Inhibitor，以下UTIという）
が抗インフルエンザウイルス作用を有することを
見出し、該UTIを有効成分とする医薬組成物の
発明を完成した。しかし、UTIは分子量約67000
の糖蛋白質であるので、ヒト以外の動物に由来す
るUTIはヒトに対して抗原性を有し、実質上ヒ
トに使用し得なかつた。そこで、更に研究を進め
た結果、UTIを蛋白質分解酵素で分解して得た
分子量6000〜9000の画分、特に分子量6000〜7000
の画分（蛋白質）が、ヒトに対する抗原性がなく
トリプシン阻害作用を有するとともに、抗インフ
ルエンザウイルス作用がUTI自体のそれよりも
むしろ強力であることを見出し、本発明を完成し
た。 本発明のUTI分解物はUTIを蛋白質分解酵素
によつて分解した後、イオン交換クロマトグラフ
イー，ゲル過等の一般的な生化学的精製方法を
用いて取得することができる。 UTIは哺乳動物の尿中に存在する公知の物質
であり、由来する動物の種類によつてその性状が
若干異なることが知られているが〔カールソンら
（Carlsson），エンザイム（Enzyme）18巻176頁
1974年〕，ヒト由来のUTIは、分子量67000，等
電点PH２〜３，糖含量５〜12％の糖蛋白質であ
り、例えば須見らの方法〔日本生理学雑誌39巻53
頁1974年〕により精製し、取得することができ
る。 UTI分解物の原料としては哺乳動物由来の
UTIはすべて使用しうるが、ヒト由来のものが
最も好ましいことはいうまでもない。 UTIの蛋白質分解酵素による分解は通常，蛋
白質を分解する場合に用いられる一般的方法によ
り行なう。即ち、適当な緩衝液に溶解したUTI
に蛋白質分解酵素であるパパイン溶液を加えて37
℃前後で10〜60分間反応させた後、ゲル過、イ
オン交換クロマトグラフイー等により精製して、
分子量6000〜9000の画分を得る。この際、反応混
液を凍結乾燥等によつて一旦濃縮し、その後に精
製工程を行なうと精製効果が高まるのでより好ま
しい。なお、得られたUTI分解物を再度、別の
蛋白質分解酵素であるペプシン等で処理すること
により、更に、抗インフルエンザウイルス作用の
強い分子量6000〜7000のUTI分解物を得ること
ができる。 UTIを分解するのに用いる蛋白質分解酵素と
しては各種の蛋白質分解酵素、例えばパパイン、
ペプシン、トリプシン、α―キモトリプシン等を
使用することができるが、特にパパイン及びペプ
シンを用いるのが好ましい。又、これらの酵素は
溶液状態で使用する他、いわゆる固定化酵素とし
て用いることもできる。 このようにして得た本発明のUTI分解物は分
子量6000〜7000、等電点8.8±0.3、極大吸収
278nm、ニンヒドリン反応陽性、窒素含量15〜17
％の性状を有し、水に易溶、エーテル、クロロホ
ルム、エタノールに不溶である。 次に、本発明のUTI分解物の有効性および毒
性について実験例によつて説明する。 実験例 １ In Vitroにおける抗インフルエンザウイルス作
用 インフルエンザウイルスＡ／WSN／33、Ａ／
USSR／92／73、Ａ／態本／Y5／57およびＢ／
山形／１／75の各株102TCID50（50％組織培養感
染単位）とパパイン及びペプシンを用いて分解し
て得た本発明のUTI分解物を含む液0.1mlとを、
予めマイクロプレート上に培養したMDCK細胞
（マージン・ダーヴイ犬腎細胞）に加え、37℃で
３日間培養し、ウイルス増殖によつて生ずる細胞
変性を抑制するUTI分解物の最小濃度を調べた。
結果を第１表に示した。なお、第１表には分子量
6000〜9000以外のUTI分解物の作用についても
示した。
分解物を有効成分とする抗インフルエンザウイル
ス用剤に関する。 本発明者らは先に尿中トリプシン阻害物質
（Urinary Trypsin Inhibitor，以下UTIという）
が抗インフルエンザウイルス作用を有することを
見出し、該UTIを有効成分とする医薬組成物の
発明を完成した。しかし、UTIは分子量約67000
の糖蛋白質であるので、ヒト以外の動物に由来す
るUTIはヒトに対して抗原性を有し、実質上ヒ
トに使用し得なかつた。そこで、更に研究を進め
た結果、UTIを蛋白質分解酵素で分解して得た
分子量6000〜9000の画分、特に分子量6000〜7000
の画分（蛋白質）が、ヒトに対する抗原性がなく
トリプシン阻害作用を有するとともに、抗インフ
ルエンザウイルス作用がUTI自体のそれよりも
むしろ強力であることを見出し、本発明を完成し
た。 本発明のUTI分解物はUTIを蛋白質分解酵素
によつて分解した後、イオン交換クロマトグラフ
イー，ゲル過等の一般的な生化学的精製方法を
用いて取得することができる。 UTIは哺乳動物の尿中に存在する公知の物質
であり、由来する動物の種類によつてその性状が
若干異なることが知られているが〔カールソンら
（Carlsson），エンザイム（Enzyme）18巻176頁
1974年〕，ヒト由来のUTIは、分子量67000，等
電点PH２〜３，糖含量５〜12％の糖蛋白質であ
り、例えば須見らの方法〔日本生理学雑誌39巻53
頁1974年〕により精製し、取得することができ
る。 UTI分解物の原料としては哺乳動物由来の
UTIはすべて使用しうるが、ヒト由来のものが
最も好ましいことはいうまでもない。 UTIの蛋白質分解酵素による分解は通常，蛋
白質を分解する場合に用いられる一般的方法によ
り行なう。即ち、適当な緩衝液に溶解したUTI
に蛋白質分解酵素であるパパイン溶液を加えて37
℃前後で10〜60分間反応させた後、ゲル過、イ
オン交換クロマトグラフイー等により精製して、
分子量6000〜9000の画分を得る。この際、反応混
液を凍結乾燥等によつて一旦濃縮し、その後に精
製工程を行なうと精製効果が高まるのでより好ま
しい。なお、得られたUTI分解物を再度、別の
蛋白質分解酵素であるペプシン等で処理すること
により、更に、抗インフルエンザウイルス作用の
強い分子量6000〜7000のUTI分解物を得ること
ができる。 UTIを分解するのに用いる蛋白質分解酵素と
しては各種の蛋白質分解酵素、例えばパパイン、
ペプシン、トリプシン、α―キモトリプシン等を
使用することができるが、特にパパイン及びペプ
シンを用いるのが好ましい。又、これらの酵素は
溶液状態で使用する他、いわゆる固定化酵素とし
て用いることもできる。 このようにして得た本発明のUTI分解物は分
子量6000〜7000、等電点8.8±0.3、極大吸収
278nm、ニンヒドリン反応陽性、窒素含量15〜17
％の性状を有し、水に易溶、エーテル、クロロホ
ルム、エタノールに不溶である。 次に、本発明のUTI分解物の有効性および毒
性について実験例によつて説明する。 実験例 １ In Vitroにおける抗インフルエンザウイルス作
用 インフルエンザウイルスＡ／WSN／33、Ａ／
USSR／92／73、Ａ／態本／Y5／57およびＢ／
山形／１／75の各株102TCID50（50％組織培養感
染単位）とパパイン及びペプシンを用いて分解し
て得た本発明のUTI分解物を含む液0.1mlとを、
予めマイクロプレート上に培養したMDCK細胞
（マージン・ダーヴイ犬腎細胞）に加え、37℃で
３日間培養し、ウイルス増殖によつて生ずる細胞
変性を抑制するUTI分解物の最小濃度を調べた。
結果を第１表に示した。なお、第１表には分子量
6000〜9000以外のUTI分解物の作用についても
示した。
【表】
UTIを分解した画分はいずれのインフルエン
ザウイルスに対してもUTI自体よりも強い抗ウ
イルス作用を示し、特に本発明のUTI分解物を
含む分子量6000〜9000の画分が有効であつた。 実験例 ２ インフルエンザウイルス感染によつて生ずる肺
炎の抑制作用 ４週令のICR系雌マウスを１群10匹として使用
した。インフルエンザウイルスＡ／態本／Y5／
57株1035TCID50／マウスを鼻腔内に接種し、翌
日から本発明のUTI分解物を生理食塩水に溶解
し、1.2mg／Kg／dayづつ３日間静脈内注射した。
ウイルス接種の４日後にマウスを屠殺し、肺重量
を測定した。結果を第２表に示した。 対照群のマウスの肺重量は237mgに増加したが、
UTI分解物を投与したマウスの肺重量は192mgで
あり、肺重量の増加は有意に抑制された。
ザウイルスに対してもUTI自体よりも強い抗ウ
イルス作用を示し、特に本発明のUTI分解物を
含む分子量6000〜9000の画分が有効であつた。 実験例 ２ インフルエンザウイルス感染によつて生ずる肺
炎の抑制作用 ４週令のICR系雌マウスを１群10匹として使用
した。インフルエンザウイルスＡ／態本／Y5／
57株1035TCID50／マウスを鼻腔内に接種し、翌
日から本発明のUTI分解物を生理食塩水に溶解
し、1.2mg／Kg／dayづつ３日間静脈内注射した。
ウイルス接種の４日後にマウスを屠殺し、肺重量
を測定した。結果を第２表に示した。 対照群のマウスの肺重量は237mgに増加したが、
UTI分解物を投与したマウスの肺重量は192mgで
あり、肺重量の増加は有意に抑制された。
【表】
実験例 ３
急性毒性
１群10匹のddY系雄マウスに、生理食塩水に溶
解した本発明のUTI分解物2000mg／Kgを静脈内
又は腹腔内に注射し、７日間経過を観察したが何
ら異常を認めなかつた。 以上の実験例から明らかなように、UTI分解
物はIn Vitroにおいて強い抗インフルエンザウイ
ルス作用を示し、又、In Vivoにおいてもインフ
ルエンザ肺炎を明らかに抑制した。しかも、これ
らの作用を発現する用量は急性毒性の結果から充
分安全な用量であり、UTI分解物はインフルエ
ンザウイルス感染症の予防および治療に極めて有
用な薬剤となり得るものである。 本発明のUTI分解物の成人の治療量は１日当
り１〜1000mgであるが、症状あるいは用法に応じ
て適宜増減することができる。 本発明のUTI分解物は通常、注射剤あるいは
吸入剤として投与されるが、経口投与剤又は直腸
用剤として用いることもできる。注射剤及び吸入
剤としては用時溶解して用いる凍結乾燥製剤、経
経口投与剤としてはカプセル剤、錠剤、顆粒剤、
散剤あるいは経口用液体製剤、直腸用剤としては
直腸用坐剤とするのが適当である。これらの製剤
を調製するにあたつては、慣用の製薬用担体ある
いは賦形剤等とともに慣用の方法を使用すること
ができる。 次に、UTI分解物の製造方法および製剤を実
施例として示すが、本発明はこれのみに限定され
るものではない。 実施例 １ (a) パパインによる分解 0.015Mリン酸緩衝液（PH7.2）150mlに溶解
したヒトUTI2ｇに、パパイン７ｇを添加し、
37℃で30分間放置後凍結乾燥する。凍結乾燥粉
末を0.154M塩化ナトリウム溶液52mlに溶解し、
同溶液で平衡化したセフアデツクスＧ−100の
カラム（10×83cm）でゲル過し、分子量7000
〜9000の画分を集める。この時の溶出パターン
を第１図に示す。この画分はトリプシン阻害活
性を有する。なお、トリプシン阻害活性は、カ
ツセルの方法（メソツド イン エンザイモロ
ジー（Methods in Enzymol.）19巻844頁1970
年）で測定する。得られた画分をローリーらの
方法〔ジヤーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー（J.Biol.chem.）139巻 265頁
1951年〕により、牛血清アルブミンを標準蛋白
質として蛋白質量を測定する。収量は390mgで
あつた。 (b) ペプシンによる分解 実施例１の方法で得た分子量7000〜9000の画
分１ｇにペプシン20mgを加えて37℃で10分間放
置したのち、4N水酸化ナトリウム溶液を加え
てPH８に調製後凍結乾燥する。凍結乾燥粉末を
50mlの水に溶解後0.02Mリン酸緩衝液（PH8.0）
で平衡化したセフアデツクスＧ―25のカラム
（５×50cm）を通過させて緩衝液を置換したの
ち、同緩衝液で平衡化したCM―セフアロース
のカラム（2.6×15cm）に吸着させた。 次いで、0.2M塩化ナトリウムを含む同緩衝
液を用いて直線濃度勾配法により溶出し、分子
量6000〜7000の画分を集めた。溶出パターンを
第２図に示す。この画分を実施例１と同様にし
て蛋白質量を測定した。収量は170mgであつた。
ヴエスターバークの方法（アクタ ケミカ ス
カンジナビア（Acta Chem.Scand.）20巻
820頁 1966年）で測定すると等電点は8.8±
0.3である。 実施例 ２ 実施例１、ｂ）で集めた画分100mgを凍結乾燥
後５mlの蒸留水に溶解し、実施例１、ｂ）と同様
にセフアデツクスＧ―25のカラムを通過させて緩
衝液を置換する。実施例１、ｂ）と同様にCM―
セフアロースのカラムを用いてイオン交換クロマ
トグラフイーを行う。溶出パターンを第３図に示
す。図からわかるように吸光度とトリプシン阻害
活性は一致し、単一ピークを示す。 参考例 ブタUTI〔カールソンら（Carlsson）、エンザ
イム（Enzyme）18巻、176頁、1974年〕５ｇを
0.015Mリン酸緩衝液（PH7.2）400mlに溶解し、
これにパパイン15ｇを添加し、37℃で30分間放置
後凍結乾燥する。凍結乾燥粉末を0.154M塩化ナ
トリウム溶液250mlに溶解し、同溶液で平衡化し
たセフアデツクスＧ―100のカラム（14×90cm）
でゲル過し、分子量7000〜9000の画分を集め
る。得られた画分を前記のローリーらの方法によ
り蛋白質量を測定する。 実施例 ３ 実施例１の方法で集めた画分を、10mg／mlとな
るように生理食塩水を加えて調整する。これをメ
ンブランフイルターで除菌ろ過したのち、10mlづ
つガラス容器に分注して凍結乾燥し密栓して、凍
結乾燥注射剤とする。 実施例 ４ 実施例２の方法で集めた画分を、10mg／mlとな
るように生理食塩水で調整したのちメンブランフ
イルターで除菌ろ過し、ろ液を５mlづつガラス容
器に分注密栓して、注射用液剤とする。 実施例 ５ 実施例１の方法で集めた画分を、100mg／mlと
なるように調整する。これをメンブランフイルタ
ーで除菌ろ過したのち、単シロツプを加えて経口
用液体製剤とする。
解した本発明のUTI分解物2000mg／Kgを静脈内
又は腹腔内に注射し、７日間経過を観察したが何
ら異常を認めなかつた。 以上の実験例から明らかなように、UTI分解
物はIn Vitroにおいて強い抗インフルエンザウイ
ルス作用を示し、又、In Vivoにおいてもインフ
ルエンザ肺炎を明らかに抑制した。しかも、これ
らの作用を発現する用量は急性毒性の結果から充
分安全な用量であり、UTI分解物はインフルエ
ンザウイルス感染症の予防および治療に極めて有
用な薬剤となり得るものである。 本発明のUTI分解物の成人の治療量は１日当
り１〜1000mgであるが、症状あるいは用法に応じ
て適宜増減することができる。 本発明のUTI分解物は通常、注射剤あるいは
吸入剤として投与されるが、経口投与剤又は直腸
用剤として用いることもできる。注射剤及び吸入
剤としては用時溶解して用いる凍結乾燥製剤、経
経口投与剤としてはカプセル剤、錠剤、顆粒剤、
散剤あるいは経口用液体製剤、直腸用剤としては
直腸用坐剤とするのが適当である。これらの製剤
を調製するにあたつては、慣用の製薬用担体ある
いは賦形剤等とともに慣用の方法を使用すること
ができる。 次に、UTI分解物の製造方法および製剤を実
施例として示すが、本発明はこれのみに限定され
るものではない。 実施例 １ (a) パパインによる分解 0.015Mリン酸緩衝液（PH7.2）150mlに溶解
したヒトUTI2ｇに、パパイン７ｇを添加し、
37℃で30分間放置後凍結乾燥する。凍結乾燥粉
末を0.154M塩化ナトリウム溶液52mlに溶解し、
同溶液で平衡化したセフアデツクスＧ−100の
カラム（10×83cm）でゲル過し、分子量7000
〜9000の画分を集める。この時の溶出パターン
を第１図に示す。この画分はトリプシン阻害活
性を有する。なお、トリプシン阻害活性は、カ
ツセルの方法（メソツド イン エンザイモロ
ジー（Methods in Enzymol.）19巻844頁1970
年）で測定する。得られた画分をローリーらの
方法〔ジヤーナル オブ バイオロジカル ケ
ミストリー（J.Biol.chem.）139巻 265頁
1951年〕により、牛血清アルブミンを標準蛋白
質として蛋白質量を測定する。収量は390mgで
あつた。 (b) ペプシンによる分解 実施例１の方法で得た分子量7000〜9000の画
分１ｇにペプシン20mgを加えて37℃で10分間放
置したのち、4N水酸化ナトリウム溶液を加え
てPH８に調製後凍結乾燥する。凍結乾燥粉末を
50mlの水に溶解後0.02Mリン酸緩衝液（PH8.0）
で平衡化したセフアデツクスＧ―25のカラム
（５×50cm）を通過させて緩衝液を置換したの
ち、同緩衝液で平衡化したCM―セフアロース
のカラム（2.6×15cm）に吸着させた。 次いで、0.2M塩化ナトリウムを含む同緩衝
液を用いて直線濃度勾配法により溶出し、分子
量6000〜7000の画分を集めた。溶出パターンを
第２図に示す。この画分を実施例１と同様にし
て蛋白質量を測定した。収量は170mgであつた。
ヴエスターバークの方法（アクタ ケミカ ス
カンジナビア（Acta Chem.Scand.）20巻
820頁 1966年）で測定すると等電点は8.8±
0.3である。 実施例 ２ 実施例１、ｂ）で集めた画分100mgを凍結乾燥
後５mlの蒸留水に溶解し、実施例１、ｂ）と同様
にセフアデツクスＧ―25のカラムを通過させて緩
衝液を置換する。実施例１、ｂ）と同様にCM―
セフアロースのカラムを用いてイオン交換クロマ
トグラフイーを行う。溶出パターンを第３図に示
す。図からわかるように吸光度とトリプシン阻害
活性は一致し、単一ピークを示す。 参考例 ブタUTI〔カールソンら（Carlsson）、エンザ
イム（Enzyme）18巻、176頁、1974年〕５ｇを
0.015Mリン酸緩衝液（PH7.2）400mlに溶解し、
これにパパイン15ｇを添加し、37℃で30分間放置
後凍結乾燥する。凍結乾燥粉末を0.154M塩化ナ
トリウム溶液250mlに溶解し、同溶液で平衡化し
たセフアデツクスＧ―100のカラム（14×90cm）
でゲル過し、分子量7000〜9000の画分を集め
る。得られた画分を前記のローリーらの方法によ
り蛋白質量を測定する。 実施例 ３ 実施例１の方法で集めた画分を、10mg／mlとな
るように生理食塩水を加えて調整する。これをメ
ンブランフイルターで除菌ろ過したのち、10mlづ
つガラス容器に分注して凍結乾燥し密栓して、凍
結乾燥注射剤とする。 実施例 ４ 実施例２の方法で集めた画分を、10mg／mlとな
るように生理食塩水で調整したのちメンブランフ
イルターで除菌ろ過し、ろ液を５mlづつガラス容
器に分注密栓して、注射用液剤とする。 実施例 ５ 実施例１の方法で集めた画分を、100mg／mlと
なるように調整する。これをメンブランフイルタ
ーで除菌ろ過したのち、単シロツプを加えて経口
用液体製剤とする。
第１図は実施例１、ａ）のヒトUTIのパパイ
ン分解物のゲルろ過での溶出パターンを示すグラ
フ、第２図は実施例１、ｂ）のイオン交換での溶
出パターンを示すグラフ、第３図は実施例２のイ
オン交換での溶出パターンを示すグラフである。
ン分解物のゲルろ過での溶出パターンを示すグラ
フ、第２図は実施例１、ｂ）のイオン交換での溶
出パターンを示すグラフ、第３図は実施例２のイ
オン交換での溶出パターンを示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 尿中トリプシン阻害物質をパパイン及びペプ
シンで分解し精製して得られる、下記の性状を有
する蛋白質。 (a) 分子量 6000〜7000 (b) 等電点 8.8±0.3 (c) 極大吸収 278nm (d) ニンヒドリン反応 陽性 (e) 窒素含量 15〜17％ (f) 溶解性 水に易溶、エーテル、クロロホルム、エタノール
に不溶 (g) トリプシン阻害活性を有する ２ 尿中トリプシン阻害物質をパパイン及びペプ
シンで分解し精製して得られる、下記の性状を有
する蛋白質を有効成分とする抗インフルエンザウ
イルス用剤。 (a) 分子量 6000〜7000 (b) 等電点 8.8±0.3 (c) 極大吸収 278nm (d) ニンヒドリン反応 陽性 (e) 窒素含量 15〜17％ (f) 溶解性 水に易溶、エーテル、クロロホルム、エタノール
に不溶 (g) トリプシン阻害活性を有する
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56027162A JPS57140728A (en) | 1981-02-26 | 1981-02-26 | Decomposition product of substance inhibiting trypsin in urine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56027162A JPS57140728A (en) | 1981-02-26 | 1981-02-26 | Decomposition product of substance inhibiting trypsin in urine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57140728A JPS57140728A (en) | 1982-08-31 |
| JPH029600B2 true JPH029600B2 (ja) | 1990-03-02 |
Family
ID=12213354
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56027162A Granted JPS57140728A (en) | 1981-02-26 | 1981-02-26 | Decomposition product of substance inhibiting trypsin in urine |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57140728A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109776674A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-21 | 广东天普生化医药股份有限公司 | 纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57144224A (en) * | 1981-03-02 | 1982-09-06 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Remedy for respiratory dieseases |
| GB8821049D0 (en) * | 1988-09-08 | 1988-10-05 | Health Lab Service Board | Method & composition for treatment & prevention of viral infections |
| JP2694419B2 (ja) * | 1994-05-23 | 1997-12-24 | 株式会社ミドリ十字 | ロタウイルス感染症の予防治療剤 |
| CN109553679B (zh) * | 2019-02-19 | 2019-08-23 | 上海医药集团股份有限公司 | 高纯度乌司他丁及其制备方法和含有乌司他丁的药物组合物 |
-
1981
- 1981-02-26 JP JP56027162A patent/JPS57140728A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109776674A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-21 | 广东天普生化医药股份有限公司 | 纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物 |
| CN109776674B (zh) * | 2019-02-19 | 2020-01-17 | 广东天普生化医药股份有限公司 | 纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57140728A (en) | 1982-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3325618B1 (en) | Novel trypsin isoforms and their use | |
| KR20090122940A (ko) | 호흡기 질환 치료용 박테리아 추출물 및 그 제조방법 | |
| JPS6123167B2 (ja) | ||
| CN109439612A (zh) | 促进肝细胞增殖和/或抑制肝细胞凋亡的多肽及其用途 | |
| EP0073251B1 (en) | Agent for treating diseases of respiratory organs | |
| JPH029600B2 (ja) | ||
| CA1186629A (en) | Biologically active substance, process for preparing the substance and immunoactive composition | |
| NO173655B (no) | Fremgangsmaate for ekstrahering av et tetrapeptid fra biologisk materiale | |
| EP0491114B1 (en) | A process for preparing new non-covalent polysaccharide-protein associations having pharmacological activity | |
| JPS60184011A (ja) | 免疫調節剤 | |
| EP1105467B9 (en) | USE OF MODIFIED LYSOZYME c TO PREPARE MEDICINAL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF SOME SERIOUS DISEASES | |
| JPH04121187A (ja) | ポリエチレングリコール修飾アルギニンデイミナーゼおよびその製造法 | |
| JPH0521092B2 (ja) | ||
| JP4006058B2 (ja) | 多臓器不全予防及び／又は治療剤 | |
| Holms et al. | Ezrin Peptide Therapy: A Potential Treatment for COVID | |
| JPS58318B2 (ja) | 制癌性物質の製造方法 | |
| JP3072321B2 (ja) | 抗ｈｉｖ活性物質およびその製造方法 | |
| JPH08176000A (ja) | Ｃ型肝炎治療剤 | |
| JPH08782B2 (ja) | 抗炎症剤 | |
| RU2380405C2 (ru) | Способ получения рекомбинантного альфа 16-интерферона человека и фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний на основе рекомбинантного альфа 16-интерферона человека | |
| JPH0525055A (ja) | 血圧降下剤 | |
| CN117205188A (zh) | 维生素k4在制备治疗黑色素瘤的药物中的应用 | |
| GB2132481A (en) | Pharmaceutical compositions containing human pepsin or pepsin-like enzymes | |
| EP0753309A2 (en) | Preparation of lactoferrin (or analogous proteins) and desferrioxamine methanesulfonate (or other metal ion chelators) for the therapy of viral infectious diseases | |
| GB2042558A (en) | Interferon inducers, methods for their preparation, pharmaceutical compositions containing them and their use as medicaments |