RU2120298C1 - Иммуностимулятор и препарат на его основе - Google Patents
Иммуностимулятор и препарат на его основе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2120298C1 RU2120298C1 RU95119704/14A RU95119704A RU2120298C1 RU 2120298 C1 RU2120298 C1 RU 2120298C1 RU 95119704/14 A RU95119704/14 A RU 95119704/14A RU 95119704 A RU95119704 A RU 95119704A RU 2120298 C1 RU2120298 C1 RU 2120298C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- bestim
- drug
- solution
- immunostimulating agent
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммуностимуляторам и препаратам на их основе. Сущность изобретения заключается в том, что в качестве иммуностимулятора предлагается препарат, содержащий активное начало - пептид H-γ-L-GLu-L-Trp-OH, при его содержании в препарате 0,001-0,01 мас.%, и соответствующий разбавитель. Технический результат заключается в создании более эффективного иммуностимулятора на основе "коротких" пептидов. 2 с.п. ф-лы, 5 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммуностимуляторам и препаратам на их основе.
Известно применение в медицине большого количества иммуностимуляторов, таких как препараты женьшеня и лимонника, производные никотиновой кислоты, тималин и т.д. /Машковский М.Д. Лекарственные средства, т.II, М., Медицина, 1988 г. , стр. 169/. Недостатком большинства природных препаратов является невысокая активность в связи с низким содержанием активного начала, наличие побочных эффектов.
Известно значительное количество иммуностимуляторов пептидной природы, например, тактивин /пат. Франции, N 2570278, кл. A 61 K 39/41/, тимозин /Goldstein A. L. et al, Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1972, v. 69, p. 1856-1863/, полученных из природного сырья. Эти препараты представляют собой набор полипептидов различной длины, воздействующих на различные звенья иммунного ответа, а также на ряд других физиологических функций организма, что ведет к появлению нежелательных побочных эффектов. Кроме того, практическое использование таких препаратов затруднено в связи со сложностью способов их извлечения из природного сырья, малым выходом, значительной вариабельностью их физико-химических свойств.
Поиск синтетических пептидов с селективной активностью на счет изменений структуры представляется более целесообразным. Синтетическими пептидными иммуностимуляторами являются пептид Glu-Asp-Ser-Ser-Thr-Gly-Trp-Asp-OH /пат. США N 4478828, кл. A 61 K 37/00, C 07 C 103/52, 1984/, аналоги тимопентина /Евр. пат., кл. C 07 K 7/64, 1985, пат. США 5013723, кл. A 61 K 37/02, 1991 г./ и т.п.
Еще больший интерес представляет создание пептидных иммуностимуляторов на основе коротких, селективно действующих высокоактивных пептидов, синтез которых является экономически выгодным.
Прототипом заявляемого изобретения являлся препарат "Тимоген", полученный на основе пептидной субстанции H- α -L-Glu-L-Trp-OH.
Задачей, стоящей перед авторами, являлось создание более эффективного иммуностимулятора на основе "коротких" пептидов и разработка препарата, в который он входит в качестве активного начала.
Задача решалась созданием дипептида H- γ -L-Glu-L-Trp-OH, который оказался активным иммуностимулятором, получившим условное наименование "Бестим" (заявка на торговую марку N 94008579 от 15.03.94) и послужившим активным началом лекарственного препарата, содержащего 0,001-0,01 мас% указанного пептида в виде соответствующей соли и разбавитель.
Получение лекарственного препарата осуществляют по стандартным технологиям получения лекарственных форм фармпрепаратов, а именно путем добавок к действующему началу фармацевтически подходящих солей и неорганических и органических кислот, например, хлористоводородной, серной, фосфорной, гликолевой, молочной, лимонной и соответствующего растворителя, не вызывающего нежелательных побочных эффектов, таких, например, как желудочно-кишечные дискомфорты, лихорадки и т.п.
В качестве разбавителя в зависимости от формы введения препарата используют раствор, содержащий 0,9% NaCl и 0,5% новокаин для внутреннего и внутримышечного введения, или крахмал, глюкозу, глицин и их смеси для перорального применения.
Действие препаратов на основе "Бестим" оказалось наиболее эффективным для лечения вторичных иммунодефицитов, развивающихся, например, у больных с хирургической инфекцией и онкологических больных. Под влиянием препарата наблюдается значительное усиление экспрессии θ -антигена и продукции интерлейкина-2 лимфоцитами, а также увеличение процентного и абсолютного содержания CD3 и CD4 лимфоцитов.
Препарат не токсичен, так как при 1000-кратном превышении терапевтической дозы (1 мг/кг) летальный исход не был обнаружен ни у одного животного.
"Бестим" получают стандартной технологией пептидного синтеза на твердой фазе /J.M.Steward and J.D.Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman Co., San Francisco, 1969/, или путем синтеза в растворе/ E.Schroder and K. Lubke, "The Peptides", Vol.1, Academic Press (New York), 1965/ с последующим отщеплением защитных групп и очисткой конечного продукта с использованием гель- и обращеннофазовой хроматографии. Индивидуальность полученной пептидной субстанции подтверждается данными ВЭЖХ и аминокислотного анализа гидролизата пептида.
Полученная субстанция пептида в виде соответствующих солей и добавок соответствующих наполнителей и разбавителя используется для приготовления препарата "Бестим".
Практическая применимость изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Синтез пептида "Бестим"
0,6 г (0,0018 мол) α -бензилового эфира N-трет.-бутилоксикарбонил-L-глутаминовой кислоты растворяют в 2.0 см3 диметилфорамида, прибавляют 0,2 г (0,0018 мол) N-оксисукцинимида, охлаждают до минус 5oC и при сильном перемешивании приливают к реакционной смеси раствор 0,37 г (0,0018 мол) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2,0 см3 диметилформамида. Смесь перемешивают при 0oC 1 час и оставляют на 12 часов при комнатной температуре. Отфильтровывают дициклогексилмочевину, прибавляют к фильтрату 0,72 г (0,0022 мол) гидрохлорида бензилового эфира L-триптофана и 0,3 см3 (0,0023 мол) триэтиламина и перемешивают реакционную смесь 16 часов при комнатной температуре. Раствор фильтруют, разбавляют 50,0 см3 воды и экстрагируют три раза 40 см3 этилацетата. Объединенные органические экстракты промывают последовательно 20,0 см3 воды, два раза по 20,0 см3 2 н серной кислоты, два раза по 20,0 см3 насыщенного раствора хлористого натрия и сушат безводным сернокислым натрием.
0,6 г (0,0018 мол) α -бензилового эфира N-трет.-бутилоксикарбонил-L-глутаминовой кислоты растворяют в 2.0 см3 диметилфорамида, прибавляют 0,2 г (0,0018 мол) N-оксисукцинимида, охлаждают до минус 5oC и при сильном перемешивании приливают к реакционной смеси раствор 0,37 г (0,0018 мол) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2,0 см3 диметилформамида. Смесь перемешивают при 0oC 1 час и оставляют на 12 часов при комнатной температуре. Отфильтровывают дициклогексилмочевину, прибавляют к фильтрату 0,72 г (0,0022 мол) гидрохлорида бензилового эфира L-триптофана и 0,3 см3 (0,0023 мол) триэтиламина и перемешивают реакционную смесь 16 часов при комнатной температуре. Раствор фильтруют, разбавляют 50,0 см3 воды и экстрагируют три раза 40 см3 этилацетата. Объединенные органические экстракты промывают последовательно 20,0 см3 воды, два раза по 20,0 см3 2 н серной кислоты, два раза по 20,0 см3 насыщенного раствора хлористого натрия и сушат безводным сернокислым натрием.
Упаривают полученный органический раствор при пониженном давлении, остаток обрабатывают 16,0 см3 50% раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене в течение 45 минут, снова упаривают при пониженном давлении и прибавляют 25,0 см3 изопропилового спирта.
К полученному раствору 0,3 г (0,00048 мол) трифторацетата дибензилового эфира γ -дипептида прибавляют 0,16 г (0,00096 мол) кислого углекислого натрия и 0,18 г (0,0024 мол) формиата аммония. Реакционную смесь нагревают до 50oC, прибавляют небольшими порциями 5,0 г 10% палладия на угле, суспензированного в 25,0 см3 воды и перемешивают в течение 30 минут. Отфильтровывают катализатор, упаривают изопропиловый спирт при пониженном давлении, водный раствор лиофилизуют, прибавляют к остатку 20,0 см3 воды и снова лиофилизуют.
Полученный лиофилизат очищают обращеннофазовой хроматографией на колонке Ultraprep C18, в градиенте (10-30%) ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте. Содержание основного вещества по данным оптической плотности не менее 97%. Соотношение аминокислотных остатков в гидролизате пептида соответствует теоретическому.
Пример 2. Сравнительный анализ влияния препаратов "Бестим" и "Тимоген" на дифференцировку предшественников T-лимфоцитов костного мозга мышей.
Взвесь клеток костного мозга мышей, умерщвленных дислокацией шейных позвонков, получают путем промывания бедренных костей физиологическим раствором. Пептиды в различных концентрациях добавляют к полученным клеткам в среде Игла и инкубируют в течение часа при 37oC. Уровень экспрессии маркера дифференцировки T-лимфоцитов θ -антигена определяют методом комплемент зависимого цитолиза с помощью антител к θ -антигену. /Merasabi P.I. et al. in Manual of Tissue Tuping Techniques, National Institute of Health, Bethesda, 1972, p.50-55/. данные приведены в таблице 1.
Согласно приведенным данным, препарат "Бестим" вызывает усиление дифференцировки предшественников T-лимфоцитов в широком диапазоне доз от 100 до 0,001 мкг/мл и более активен по сравнению с препаратом "Тимоген".
Пример 3. Сравнительный анализ влияния препаратов "Бестим" и "Тимоген" на продукцию интерлейкина-2 мышиными спленоцитами.
Иммуномодулирующая активность препарата "Бестим" оценивалась также по индукции синтеза главного ростового фактора T-лимфоцитов-интерлейкина-2 /Gillis S.et al., J.Imminol., 1978, v.120, p.2027-2032/.
Данные приведены в таблице 2.
Согласно приведенным данным, препарат "Бестим" вызывает усилие продукции интерлейкина-2 в дозах от 100 до 0,001 мкг/мл.
Пример 4. Использование препарата "Бестим" для коррекции иммунодефицита, вызванного сепсисом.
Больной Т-в, 70 лет поступил в клинику ГКБ N 24 г. Москвы с диагнозом: "Сепсис" в тяжелом состоянии. У больной лабораторно подтвержден иммунодефицитный синдром, возникший на фоне бактериального сепсиса. Препарат "Бестим" применен для иммунокоррегирующего лечения в виде курсовой терапии (5 ежедневных внутримышечных инъекций по 0,1 мг ацетата пептида в изотоническом растворе хлористого натрия). Результаты лечения приведены в таблице 3.
Согласно приведенным данным, использование препарата "Бестим" вызывало увеличение содержания в периферической крови общих лимфоцитов, фракции T-лимфоцитов и субпопуляции T-лимфоцитов хелперов. На фоне улучшения иммунологических показателей состояние больного удовлетворительное, отмечено снижение лифорадки и улучшение гемодинамических показателей.
Пример 5. Использование препарата "Бестим" для коррекции иммунодефицита у онкологических больных.
Больная Х-а, 44 года, находилась в клинике ГКБ и 24 г. Москвы с диагнозом: "Рак толстой кишки". У больной отмечалось иммунодефицитное состояние, развившееся на фоне основного заболевания. Препарат "Бестим" применен для коррекции иммунодефицита в виде курсовой терапии (5 ежедневных внутримышечных инъекций по 0,1 мг ацетата пептида в 5% водном растворе глицина). Результаты лечения приведены в таблице 4.
Пример 6. Использование препарата "Бестим" для коррекции иммунодефицита, связанного с удалением вилочковой железы.
Больная Г-а, 18 лет, поступила в клинику ГКБ N 24 г. Москвы по поводу иммунодефицитного состояния, развившегося в связи с удалением вилочковой железы. Препарат "Бестим" применен для коррекции иммунодефицита в виде курса из 5 ежедневных внутримышечных инъекций по 0,1 мг ацетата пептида в 6% растворе полиглюкина в изотоническом растворе хлористого натрия. Результаты лечения приведены в таблице 5.
В результате лечения препаратом "Бестим" у больной отмечено восстановление содержания общей фракции лимфоцитов и субпопуляции T-лимфоцитов до уровня нормальных показателей. Больная выписана в удовлетворительной состоянии.
Claims (2)
1. Пептид H-γ-L-Glu-L-Trр-OH, обладающий иммуностимулирующей активностью.
2. Средство, обладающее иммуностимулирующей активностью, содержащее дипептид и фармакологически приемлемую добавку, отличающееся тем, что в качестве дипептида содержит H-γ-L-Glu-L-Trр-OH в количестве 0,001 - 0,01 мас.%.
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119704/14A RU2120298C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Иммуностимулятор и препарат на его основе |
US08/634,718 US5744452A (en) | 1995-11-28 | 1996-04-18 | γ-L-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
PCT/US1996/017913 WO1997019691A1 (en) | 1995-11-28 | 1996-11-13 | Gamma-l-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
US09/031,842 US5916878A (en) | 1995-11-28 | 1998-02-27 | γ-glutamyl and β-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95119704/14A RU2120298C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Иммуностимулятор и препарат на его основе |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95119704A RU95119704A (ru) | 1997-10-20 |
RU2120298C1 true RU2120298C1 (ru) | 1998-10-20 |
Family
ID=20174019
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95119704/14A RU2120298C1 (ru) | 1995-11-28 | 1995-11-28 | Иммуностимулятор и препарат на его основе |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2120298C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1491206B1 (en) * | 2002-02-28 | 2010-11-17 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstennostiyu "Pharmenterprises" | Use of peptide derivatives for inducing cell differentiation |
US7906486B2 (en) | 2007-02-13 | 2011-03-15 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating or preventing tissue deterioration, injury or damage due to disease of mucosa |
WO2012087181A1 (ru) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Цитонир" | Фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний |
RU2672861C2 (ru) * | 2014-10-31 | 2018-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Эксифарм" (ООО "Эксифарм") | Композиция на основе интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний (варианты) |
-
1995
- 1995-11-28 RU RU95119704/14A patent/RU2120298C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1993, часть II, с.197. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1491206B1 (en) * | 2002-02-28 | 2010-11-17 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstennostiyu "Pharmenterprises" | Use of peptide derivatives for inducing cell differentiation |
US7906486B2 (en) | 2007-02-13 | 2011-03-15 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating or preventing tissue deterioration, injury or damage due to disease of mucosa |
WO2012087181A1 (ru) | 2010-12-23 | 2012-06-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Цитонир" | Фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний |
RU2672861C2 (ru) * | 2014-10-31 | 2018-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Эксифарм" (ООО "Эксифарм") | Композиция на основе интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний (варианты) |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2060998C1 (ru) | Способ получения пептидов, пептиды, иммуномодулирующая композиция и способ регуляции недостаточной или избыточной функции т-клеток у пациента | |
JP3266311B2 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗hiv剤 | |
GB2207922A (en) | Tripeptides with pharmacological properties | |
JP2511159B2 (ja) | 免疫欠損状態の治療のための医薬製剤 | |
JP2625156B2 (ja) | 細胞接着活性コア配列の繰り返し構造からなるポリペプチド | |
JP2638666B2 (ja) | 血液調節ペプチド | |
HU224073B1 (hu) | Biológiai aktivitással rendelkező peptidek, ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények és eljárás ezek előállítására | |
US7220725B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide and method for treating pain | |
HU198512B (en) | Process for producing peptide with anticoagulant effect and pharmaceutical composition comprising same | |
RU2120298C1 (ru) | Иммуностимулятор и препарат на его основе | |
AU2001280052A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide | |
HU199879B (en) | Process for producing hexapeptides and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
JPH10505580A (ja) | ムラミルペプチド化合物の使用 | |
RU2142958C1 (ru) | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью, и препарат на его основе | |
RU2242241C1 (ru) | Тетрапептид, регулирующий уровень глюкозы при сахарном диабете, фармакологическое средство на его основе и способ его применения | |
JPH0796557B2 (ja) | 新規ペプチド、その製法およびそれを含有する医薬組成物 | |
CN107459557B (zh) | 左旋维c-2-氧乙酰-grpak,其合成,活性和应用 | |
JP2877908B2 (ja) | 抗ヘルペスペンタペプチド類 | |
WO1997019691A1 (en) | Gamma-l-glutamyl containing immunomodulator compounds and methods therewith | |
RU2091389C1 (ru) | Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью | |
US5225400A (en) | Immunostimulating peptides, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
CN107459556B (zh) | 左旋维c-2-氧乙酰-pakpak,其合成,活性和应用 | |
JPH0778076B2 (ja) | 新規ペプチド | |
US6136788A (en) | Pharmaceutical preparation for the therapy of immune deficiency conditions | |
CN107459553B (zh) | 左旋维c-2-氧乙酰-pak,其合成,活性和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20050325 |
|
QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20050325 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20141129 |