JPH0362701B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、抗生物質RK−647A物質を有効成分
として含有することを特徴とする新規な制癌剤に
関するものである。 従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナ
イトロジエンマスタード類、エチレンイミン類、
スルフオン酸エステル類）、代謝拮抗物質（葉酸
拮抗剤、プリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤）、植
物性核分裂毒（コルセミド、ビンブラスチン等）、
抗生物質（ザルコマイシン、カルチノフイリン、
マイトマイシン等）、ホルモン類（副賢ステロイ
ド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフイ
リン錯塩（マーフイリン、copp）等が用いられ
ている。 本発明者らは、すぐれた制癌活性を有する物質
を探索して、ストレプトミセス（Streptomyces）
属に属する微生物の代謝産物の生理活性につき、
鋭意研究の結果、新規抗生物質RK−647A物質
が、優れた制癌活性を有することを見出し、この
物質が癌治療に顕著な効果を発揮し得ることの新
たな知見を得て、本発明の制癌剤を完成するに至
つた。本発明の制癌剤の有効成分は、人、家畜、
犬、猫等の混血動物に対する優れた癌化学療法剤
となり得るものである。 本発明に用いる制癌活性を有する抗生物質RK
−647A物質及びその生産菌については、特許出
願公開昭59−198981号「新規抗生物質RK−647A
及びその製造法」公報に詳述されている。本物質
を生産するに当つては、ストレプトミセス属に属
する抗生物質RK−647A生産菌を、抗生物質を生
産する通常の方法で培養することができる。培養
の形態は、液体培養でも固体培養でもよく、工業
的に有利に培養するためには、上記生産菌の胞子
懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気撹拌培養
を行えばよい。 培地の栄養剤としては特に限定されることな
く、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素
源その他を培地中に含有させることができる。 炭素源としては、澱粉、デキストリン、グリセ
リン、グルコース、シユークロース、ガラクトー
ス、イノシトール、マンニトールなどが、また窒
素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米
ぬか、麩、尿素、コーンステイープリカー、アン
モニウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の
窒素含有物が用いられる。その他、無機塩類、例
えば食塩、リン酸塩類、カルシウム、亜鉛、マン
ガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加してもよ
く、必要に応じて消泡剤としての動、埴、鉱物油
等を添加してもよい。 培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発
育に適し、しかもRK−647Aの生産が最高となる
ような条件が選ばれる。たとえば、培地のPHは中
性付近がよく、培養の適温は25℃〜35℃程度が望
ましい。また培養時間は通常２〜７日間程度がよ
い。 しかし、これらの培養組成物、培地の液性、培
養温度、撹拌条件などの培養条件は使用する菌株
の種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が
得られるよう適宜調節選択されるべきであること
はいうまでもない。このようにして得られる培養
物から、抗生物質RK−647Aを得るには代謝産物
を採取するのに通常用いられる手段を適宜に利用
して採取し得る。たとえば、RK−647Aと不純物
との溶解度差を利用する手段、吸着親和力の差を
利用する手段、イオン結合力の差を利用する手
段、有機溶剤との間の分配の差を利用する手段の
いずれも、それぞれ単独で、または組合わせて、
あるいは反復して利用される。 具体的には、RK−647Aは培養瀘液及び培養菌
体に存在するが、培養瀘液より陽イオン交換樹脂
Dowex50W×８（Ｈ型）に吸脱着させることが適
当である。培養菌体中に存在するRK−647Aは、
菌体を含水アセトン、あるいは含水メタノール等
を用いて抽出することが出来る。このように抽出
されたRK−647Aは、その両性の性質を利用し
て、吸着クロマトグラフイー、イオン交換クロマ
トグラフイー、ゲル濾過クロマトグラフイー等を
組合わせて精製することが出来る。吸着クロマト
グラフイーの担体としては、ダイヤイオンHP−
10、活性炭、シリカゲル等の吸着剤が使用され
る。イオン交換クロマトグラフイーの担体として
は、DEAE−セルロース、DEAE−セフアロー
ス、CM−セルロース、CM−セフアデツクス等
のイオン交換体を利用することが出来る。又、ゲ
ル濾過には、セフアデツクスLH−20が有利に使
用し得る。更に高度の精製には高速液体クロマト
グラフイーが利用される。この場合の使用カラム
は逆層分配型のものが有利に使用出来る。このよ
うにして精製されたRK−647Aは、その水溶液に
エタノール、アセトン等を加えると高純度の白色
の粉末として沈澱するので、これを濾過により採
取することが出来る。この白色粉末を含水アルコ
ール、含水アセトン等により再結晶して無色結晶
のRK−647A物質を得る。 RK−647の理化学的性質および生物学的性状
は次の通りである。 (1) 形状：無色針状結晶 (2) 融点：270℃以上で分解 (3) 元素分析：炭素31.51％、水素4.02％、窒
素19.53％、硫黄6.51％、塩素7.33％ (4) 分子量：451（二次イオン・マススペクトル：
（Ｍ＋１）⁺m／z452、（Ｍ＋Na）⁺m／z474） (5) 比旋光度：〔α〕²⁰ _D＋2.34（C1.0、水） (6) 紫外部吸収スペクトル：中性、塩基性、酸性
で263nｍにそれぞれE¹%_1cn272、257、253の極大
吸収を示す。 (7) 赤外部吸収スペクトル：臭化カリ中、次の波
数に特徴的な吸収帯を有する。 3370、3160、2920、1645、1600、1500、
1455、1290、1205、1140、1095、975、835、
780、625、585cm^-1 (8) 溶解性：水に可溶、その他の有機溶媒に不溶
である。 (9) 呈色反応：過マンガン酸カリウム溶液を脱色
する。アニスアルデヒド一硫酸試薬、過沃素酸
−ベンジジン試薬、ニンヒドリン試薬に陽性で
ある。 (10) 塩基性、酸性、中性の区別：両性物質 (11) 抗菌スペクトル（ペーパーデイスクを用い
た寒天プレート法による）： 以下に示すようにキサントモナス
（Xanthomonas）属の細菌に特異的に強い生育
阻害活性を示す。

【表】 本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいず
れも使用可能であり、経口投与する場合は、軟・
硬カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤と
して投与され、非経口投与する場合は、水溶性懸
濁液、油性製剤などの皮下或いは静脈注射剤、点
滴剤及び固定状又は懸濁粘稠液状として持続的な
粘膜吸収が維持できるように坐薬のような剤型で
投与され得る。 本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦
形剤、滑沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮
して腸溶性製剤とするために医薬的に許容し得る
皮膜形成物質、コーテイング助剤等を用いて適宜
行うことができ、その具体例を挙げれば、次のと
おりである。 本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめる
ために、界面活性剤、例えばアルコール、エステ
ル類、ポリエチレングリコール誘導体、ソルビタ
ンの脂肪酸エステル類、硫酸化脂肪アルコール類
等の１種又は２種以上を添加することができる。 また、賦形剤として、例えば〓糖、乳糖、デン
プン、結晶セルロース、マンニツト、軽質無水珪
酸、アルミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン
酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カ
ルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カル
シウム、カルボキシルメチルセルロースカルシウ
ム等の一種又は２種以上を組合わせて添加するこ
とができる。 滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシ
ウム、タルク、硬化油等を一種又は２種以上添加
することができ、また矯味剤及び矯臭剤として、
食塩、サツカリン、糖、マンニツト、オレンジ油
カンゾウエキス、クエン酸、ブドウ酸、メントー
ル、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味剤、香料、着
色料、保存料等を含有させてもよい。 懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばコ
コナツツ油、オリーブ油、ゴム油、落花生油、乳
酸カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含
有させることができる。 また皮膜形成物質としては、セルロース、糖類
等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロー
ス（CAP）、またアクリル酸系共重合体、二塩基
酸モノエステル類等のポリビニル誘導体としてア
クリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体、メタ
アクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合体が挙
げられる。 また、上記皮膜形成物質をコーテイングするに
際し、通常使用されるコーテイング助剤、例えば
可塑剤の他、コーテイング操作時の薬剤相互の付
着防止のための各種添加剤を添加することによつ
て皮膜形成剤の性質を改良したり、コーテイング
操作をより容易ならしめることができる。なお、
有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロカプセ
ル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良
い。 特に代表的な剤型における配合比は下記の通り
である。

【表】 物質
特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロー
ス、カルボキシメチルセルロースカルシウムであ
る。 また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに
十分な量であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型な
どによつて左右されるが、一般に、傾向投与の場
合、大人では１日当り、約0.01〜100mg／Kg体重
（小人では、0.01〜60mg／Kg体重）の範囲で、そ
の上限は好ましくは約50mg／Kg体重、更に好まし
くは約10mg／Kg体重程度であり、非経口投与の場
合、その上限は約10mg／Kg体重程度であり、好ま
しくは５mg／Kg体重、更に好ましくは２mg／Kg体
重が適当である。 RK−647Aの急性毒性試験を、７週令のICRマ
ウス・オス６匹を使つて腹腔内投与により実施し
た結果、3.2mg／Kgが半数致死濃度（LD₅₀）であ
つた。 次に、RK−647A物質（以下「アスカマイシ
ン」ともいう。）の制癌活性を確認した制癌性試
験について述べる。 各種細胞を各々の倍地で37℃５％CO₂を含む培
養器中に培養し５〜10×10⁴cells／mlとなつた時
に倍地中にアスカマイシンを添加する。アスカマ
イシンの倍地中濃度は５×10^-8〜10^-5Mの間であ
る。アスカマイシン処理20時間後に各濃度のアス
カマイシンを含む新鮮なハムのF12倍地（10％
FCSを含む）に交換し、5μCi／mlとなるように
³⁵S−メチオニンを加える。 ³⁵S−メチオニンで
３時間細胞をラベルした後、細胞をよく洗浄し、
氷冷トリクロル酢酸に不溶な画分の放射活性を測
定する。 結果を次表に示す。

【表】 上記細胞の蛋白合成を50％阻害するアスカマイ
シンの濃度は0.5〜6.6μMであつた。 Sarcoma180（ip−ip）ICPマウスを用いた抗腫
瘍試験の結果は次の通りであつた。 投与量 投与方法 Ｔ／Ｃ 0.6mg／Kg ９回連続 142％ 4.0mg／Kg 単回投与 154％ 以下に本発明の製剤例を示す。 製剤例 １ （注射・点滴剤） RK−647A物質10mgを含有するように粉末ぶど
う糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密
封した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを密封
して冷暗所に保存する。使用前に0.85％生理的食
塩水100mlを添加して静脈内注射剤とし、１日、
10〜100mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で
投与する。 製剤例 ２ （注射・点滴剤） RK−647A物質２mgを用いて、製剤例１と同様
の方法により軽症用静脈内注射剤とし、１日、10
〜100mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴で投
与する。 製剤例 ３ （腸溶性カプセル剤） RK−647A物質５ｇ、乳糖2.46ｇ及びヒドロキ
シプロピルセルロース0.04ｇを各々とり、よく混
合した後、常法に従つて粒状に成形し、これをよ
く乾燥して篩別してビン、ヒートシール包装など
に適した顆粒剤を製造する。次に、酢酸フタル酸
セルロース0.5ｇ及びヒドロキシプロピルメチル
セルロースフタレート0.5ｇを溶解して被覆基材
となし、前記顆粒を浮遊流動させつゝこの基材を
被覆して腸溶性の顆粒剤とする。この組成物をカ
プセルに充填して腸溶性カプセル製剤100個を製
造する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学的性質及び生物学的性状を有す
   るRK−647A物質を有効成分として含有すること
   を特徴とする制癌剤。 形状：無色針状結晶 融点：270℃以上で分解 元素分析：炭素31.51％、水素4.02％、窒素19.53
   ％、硫黄6.51％、塩素7.33％ 分子量：451（二次イオン・マススペクトル：（Ｍ
   ＋１）⁺m／z452、（Ｍ＋Na）⁺m／z474） 比旋光度：〔α〕²⁰ _D＋2.34（C1.0、水） 紫外部吸収スペクトル：中性、塩基性、酸性で
   263nｍにそれぞれE¹%_1cn272、257、 253の極大吸収を示す。 赤外部吸収スペクトル：臭化カリ中、次の波数に
   特徴的な吸収帯を有する。 3370、3160、2920、1645、1600、1500、
   1455、1290、1205、1140、1095、975、835、
   780、625、585cm^-1 溶解性：水に可溶、その他の有機溶媒に不溶であ
   る。 呈色反応：過マンガン酸カリウム溶液を脱色す
   る。アニスアルデヒド−硫酸試薬、過沃素酸−
   ベンジジン試薬、ニンヒドリン試薬に陽性であ
   る。 塩基性、酸性、中性の区別：両性物質抗菌スペク
   トル（ペーパーデイスクを用いた寒天プレート法
   による）：以下に示すようにキサントモナス
   （Xanthomonas）属の細菌に特異的に強い生育
   阻害活性を示す。 【表】 ２ 非経口投与形態による特許請求の範囲第１項
   記載の制癌剤。 ３ 経口投与形態による特許請求の範囲第１項記
   載の制癌剤。