JPH03503284A

JPH03503284A - Ｈｔｌｖ‐１感染検出用合成ペプチド抗原

Info

Publication number: JPH03503284A
Application number: JP1504216A
Authority: JP
Inventors: ヴァルネ，アンデルシュ; スヴェンネルフォルム，ヴォー; リューモ，ラーシュ; ヤンション，スチク; ホラール，ペーテル
Original assignee: ヴィロヴァル　ソシエテ　アノニム
Priority date: 1988-03-10
Filing date: 1989-03-10
Publication date: 1991-07-25
Anticipated expiration: 2010-06-05
Also published as: CA1336529C; DE68916421T2; US5017687A; ATE107663T1; EP0403568B1; JPH0751598B2; EP0403568A1; WO1989008664A1; DE68916421D1; KR900700507A; NZ228302A; FI904345A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ＨＴＬＶ−１感染検出用合成ペプチド抗原見肌り１見本発明は、免疫に重要なＨＴＬＶ−１プロテインの抗原領域に相当する配列を有する合成ペプチド抗原に関する。これらのペプチドは、ＨＴＬＶ−１に対する抗体の有無を検査する判定試薬として有用であり、動物および人間のＨＴＬＶ−１に対する抗体を惹起する手段と組成的免疫抗原としても有用である。

成人のＴ細胞白血病／リンパ腫　（Ａ　Ｔ　Ｌ　；　ａｄｕｌｔ　Ｔ−ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ／ｌｙｍｐｈｏｍａ）の病因作用物質は、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　　１　（ｈｕｍａｎＴ−ｃｅｌｌ　ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　ｉ；人Ｔ細胞リンパ栄養１型ウイルス）として同定されている。例えば、サンガーダラン他、ビー・エヌ・フィールド編のくウィルス学＞（１９８５）１３４５−１３７１頁を参照されたい。世界でこのライスルが最も蔓延している地域は、日本南部にある九州島であり人口の約１５％が感染している。最近においては、南洋性不全対麻痺（Ｔ　Ｓ　Ｐ　；　ｔｒｏｐｉｃａｌ　５ｐａｓｔｉｃ　ｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ）と呼ばれる南洋性完全麻ひは、ＨＴＬＶ−１の感染と関係していることが、ロジャージョンソン他のくランセット＞（１９８５）第２巻１２４７頁、ヴエルナント他の＜Ａｎｎ、　Ｎｅｕｒａｌ）（１９８７年）第２１号１２３頁に報告されている。熱帯地方において、ＴＳＰは、西洋世界における多発硬化症候群と同様規模で同様に重要である。マルクスの＜Ｊ、Ｌ。

５ｃｉｅｎｃｅ＞　（１９８７年）２３６号１０５９−１０６１頁に記載されている。

ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１の感染検出の諸方法は、一般的に、血液、血清および血液派生成牛物中のＨＴＬＶ−１抗原に対する抗体を検出、定量することによりウィルスへの被爆を測定している。かような分析法は、ＡＴＬおよびＴＳＰの診断の補助ならびに、ＨＴＬＶ−１に予備被爆させるための血液および血液生成物のスクリーニングに用いることが出来る。

ＨＴＬＶ−１感染の診断及びＨＴＬＶ−１被爆のためのスクリーニングにつき広く行われている試みは、供試体中のＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１免疫原性成分に対する抗体の存在を検出する酵素結合免疫吸着検定法（エライザ：　Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ；　ｅｎｚｙ＋ｓｅ−１ｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ）技術を含んでいる。他の方法では、ウェスタンブロッティング法を利用し供試体中のＨＴＬＶ−１特異性抗体を検出することができる。一般に、エライザ及びウェスタン法に加え、放射線４１１１１１！免疫検定法、凝集検査または間接免疫蛍光測定法の様な殆どの公知の免疫学的検定は、特定の試薬を用いることにより、ＨＴＬＶ−１および抗体の検出に適応できる。

これらの検定法の場合の抗原の源は、ＨＴＬＶ−１感染Ｔ細胞系から得た就中抗原タンパク質および組換え型ＤＮＡ技術により生産せる抗原を含むことが出来る。これらの供給源から得られた抗原を使用するのは、重大な欠点がある。

連続細胞系統中のＨＴＬＶ−１ｎ体の生産は、ウィルスに研究者が冒され得る危険があるために高リスク（Ｐ３不純物）実験室において行わねばならない、、Ｔ細胞誘導ＨＴＬＶ−１抗原を用いてエライサ試験において偽陰性および偽陽性結果を生じさせることも可能であろう。例えば、類推であるが、エイズ（ＡＩＤＳ）ウィルス感染の測定において、細胞系から得た全ウィルスＨＩＶ−１抗原を使用したエライサ試験による陰性および偽陽性結果が、ガートラーその他によりくウィルス学的方法〉誌の１９８７年版１５号の１１−２３頁に報告されている。

電気プロットした完全なウィルスを使用しＨＩ　Ｖ−１を検出するウェスタンプロット分析は、エライサ試験に比し、より大きな特異性を提供しなければならず、労力と時間を要する。さらに、ＨＴＬＶ−１を生産する細胞は。

人間を起源とするために、これらの細胞系から得たウィルス抗原は、完全に純化しなければ、ＨＬＡ抗原のような正常な細胞抗原で汚染され、エライサ試験時に偽陽性反応を生み出す。　細胞系からのウィルス抗原を徹底的に純化すると、免疫学的に重要なタンパク質の免疫原性が破壊されるか、そうでなければ、抗原を不活性化することが考えられ、その結果、偽陰性反応をもたらす試薬が生産される。加えて、生ウイルス誘導抗原を用いた偽陰性反応が、立体障害のために生じ、抗原は１反応混合剤中に他の抗原と抗体が存在し反応を阻止するために、特異性抗原と反応出来な゛い。

ＨＴＬＶ、−１の感染を検出するためのエライサ試験は、バクテリア中のＨＴＬＶ−１ゲノム部分をクローニングすることにより生産された免疫学的に重要なウィルスプロティンを使用することも可能である。ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１の完全なヌクレオチド配列は、セイキその他により、米国科学アカデミ−会報（１９８３）８Ｑ号、３６１８．３６２２頁に報告されている。ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１の遺伝子ｅｎｖおよびｇａｇにより各々符号化した、ウィルスの外膜（エンベロープ）糖タンパク質および核タンパク貿は、明らかに、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１感染患者の血清中の抗体により認識された抗原である。

ウィルスの外膜と核に存在している免疫的に重要なＨＴＬＶ−１抗原は、細菌、酵母あるいはワクシニアのような種々の表出システム中のＨＴＬＶ−４ゲノムをクローニングすることにより準備出来る。かような組み換え型抗原は、ＨＩＶ− １タンパク貿の場合に用いられている潜在性ワクチン成分として、診断において使用できる。例えば、カブラシールその他により〈バイオテクノロジー）（１９８６年）４号の１２８−１３３頁、チャンその他によりくバイオテクノロジー）（１９８５年）３号の９０５−９０９頁、プツトニーその他によりく科学＞　（１９８６年）２３４号の１３９２−１３９５頁、キー二その他により〈バイオテクノロジー〉（１９８６年）４号の７９０−７９５頁に記載されている。ＤＮＡ組み換え法により生産されたＨＴＬＶ−１抗原は、しかしながら、ＨＴＬＶ−１抗原試料を汚染する表出システムの抗原に対する任意抗原の活性により、エライザにおける偽陽性反応を避けるために徹底的に純化させねばならない。また、純化中にＨＴＬＶ−１抗原が変性し、重要な抗原の活性を殺すことになる。

一方、組み換え技術により生産されたＨＴＬＶ−１抗原は、ウィルス感染細胞培養から得られた抗原を超える改良であるが、組み換え型タンパク質は、出来る限り正確な診断を与える試薬をまだ提供出来ていない。病気の性格並びに正確な結果の必要に応じ、他の試薬を開発しＨＴＬＶ−１の診断における精度を１００％に近づけねばならない。

蛋白質抗原は、特異性抗体に対する結合部を構成する蛋白質領域である抗原決定基またはエピトープを多数含んでいる。

一般的に、蛋白質抗原は、各々が６個から８個のアミノ酸配列より成る、５から１０の間のエピトープを含んでいる。エピトープは、６−８個のアミノ酸が直接配列され存在する連続形、或は、エピトープを形成するアミノ酸が蛋白質の３次元張り込みにより結合されている不連続形のいずれでもあり得る。−個のエピトープが比較的少ないアミノ酸より成るものであっても、その抗体との反応性は、エピトープを取り巻く蛋白質中のアミノ酸により影響される。

抗原部位または蛋白質エピトープのマツピングを作成を目的とした研究は、関連する蛋白質の種々な領域に対応する合成試薬を使用することにより助けられた。

例えば、シーナーその他によろく免疫疾患の生物学：病院診療帯＞（１９８３）（ディクソン及びフイシャー編）の３３１−３３８頁、シーナーによる＜Ａｄｖ、　　Ｉ　ｍ＋＋＋ｕｎｏｌ＞　（１９８４）　３６号の１頁に報告されている。エピトープのマツピングの研究において役立つ以外に、合成ペプチドは、蛋白質の主要な抗原決定群を取り囲んでいれば、ワクチンおよび診断試薬を含む免疫組成としての潜在能力を有する。合成ペプチド抗原は、特異性抗体の生産と反応性において幾つかの利点を有する。合成ペプチドの正確な配列は、蛋白質のアミノ酸配列により正確に決定した、或は、蛋白質のＤＮＡ配列コードから予測したアミノ酸配列から選択することが出来る。特異合成ペプチドを用いれば、特異性抗体生産または検査において全長蛋白質を使用する必要がなくなる。さらに、メリフィールドと協力者による固相ペプチド合成技術は、関係合成ペプチドを本質的に無制限量化学的に生産させ得る。例えば、ニューヨーク、アカデミツクブレス社発行のエリクソンとメリフィールドの著書く蛋白質＞（１９７６年第３版）第２巻の第３章に記載されている。自動化されたペプチド合成装置の導入が、かような技術を一層進展させている。

色々な判定基準が、タンパク質のどの部位が免疫優位であるかを定めるのに用いられるが、そのような領域に対応するペプチドが大規模なスクリーニングと診断においては、常に有益であるとは限らず、例えば、ペプチドは蛋白質と反応する抗体により認識される固有の間隔配位にないために、抗原性が失われることがある。さらに、ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２につき特に明白であるが、これらの２つのウィルス群の各々の範囲内に、重大な遺伝子的変異性があり、多数のウィルスの血清型が生じる。これにより、スクリーニングと診断ならびにワクチン作製に用いるペプチド抗原を誘導する蛋白質部位の選択に重大な拘束を課している。しかしながら、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２蛋白質の成る一定の免疫優位部分は、突然変異株に比較的多く発見されている。有益な合成抗原は、かようなタンパク質領域から誘導出来ると信じられている。

最近、ＨＩ　Ｖ　−１から表面糖蛋白質ｇｐ１２０とｐｇ４１の種々の免疫優位領域に対応し、二つのウィルスのｅ　ｎ、　ｖｇｅｎｅにより符号化されたＨ　Ｉ　Ｖ　−２の蛋白質に対応する免疫的反応ペプチドが合成され、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に感染した個体から採った血清とほぼ１００％の効率で反応することが示されている。抗体の存在を検出する検査に使用したが、かようなペプチドは、偽陽性または偽陰性反応をを示さなかった。１９８７年５月１８日に出願された米国特許出願第０５１，７２６号及び第０５１，７２７号に公知である。

ＨＴＬＶ−１の免疫的に重要な蛋白質から誘導した合成ペプチド抗原を用いた、ＨＴＬＶ−１感染診断のための同様なアプローチは、ウィルスが地方性のものであると思５れる世界の各地域においては特に有益であると信じられている。

幾つかの論文が、ＨＴＬＶ−１の抗原蛋白質に対応する選択合成ペプチドの免疫的反応性を示す最新のデータを提示している。パーカーその他が〈免疫学〉誌（１，９８６年１３６号、２３９３−２３９７頁）に発表している研究においては、若干のＨＴＬＶ−１のｇａｇペプチドが合成された。ＨＴＬＶ−１のｐ１９蛋白質のＣ端に対応する５Ｐ−７１に指定されたｇａｇペプチドの中の１つは、放射線同位元素標識免疫定量法（ＲＩＡ）ｔｃおいて、８／９ＨＴＬＶ−１患者の血清の８／９と反応することが発見された。５Ｐ−７１のアミノ酸配列は、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−＾１ａ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−Ｖａｌ−Ｌｅｕである。コーペランドその他は、〈免疫学〉誌（１９８６年、１３７号、６０６６−６０９８頁）に発表されている通り、ＨＴＬＶ−１のｅｎ、ｖ　　ｇｅｎｅにより符号化されたタンパク質生成物の領域に対応する３種の付加ＨＴＬＶ−１ペプチドを合成した。主要表面糖蛋白質ｇｐ４６のＣ端付近に位置する５Ｐ−７０ペプチドの中の１つは、抗原活性を有していたが、しかし、ＨＴＬＶ−１陽性患者の血清の４／１２とだけ反応した。５Ｐ−７０ペプシドは、塩基対６０６６−６０９８を包合するＨＴＬＶ−１ゲノムのヌクレオチドの配列により符号化され、そのアミノ酸配列は、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌａｕ −８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｌａｕ−Ｎ）Ｉ２である。

ＨＴＬＶ−１感染患者の血清と１００％の効率で反応するｇｐ４６のような、ＨＴＬＶ−１の免疫的に重要な蛋白質の領域に対応する合成ペプチド抗原は、診断用ならびにＨＴＬＶ−１に対する抗体の生産を誘発するための潜在的免疫成分として、直ちに使用されよう。

１犯ＪＬｆｉこの発明によれば、ＨＴＬＶ−４感染を検出するための選択性の高い診断方法に有益であり、ＨＴＬＶ−１の外被蛋白質の免疫優性領域に対応する４種の新しい合成ペプチドが提供される。

ＨＴＬＶ−１のｅｎｖ遺伝子（ｇｅｎｅ）により符号化された糖蛋白質の免疫優性領域に対応する新しい合成ペプチド抗原が発見された。これらのペプチドは、ＨＴＬＶ−１に感染の疑いのある個体中のＨＴＬＶ−１の感染により生じたＡＴＬおよびＴＰＳの診断並びに、血液および血液派生酸物中のＨＴＬＶ−１被爆スクリーニングを高信頼性と特異性で実施するのに有効である。

前記ペプチドは、血液、血清又は他の試料中のＨＴＬＶ−１に対する抗体を検出する方法において使用出来る。検出法は、サンプルを、サンプル中に存在し得るＨＴＬＶ−１の特異抗体とペプチド間に免疫複合体が形成され得るような条件下で、サンプルを少なくとも１個のペプチド抗原と接触させることを含んでいる。

適当な検出手段により複合体の生成を測定しサンプル中の）（ＴＬＶ−１に対する抗体の有無を表示する。

新しいペプチドは、ＨＴＬＶ−１の抗原に対する特異性抗体が動物及び人の体内で作り出されるように誘発する組成物に使用される。かような組成には、ＨＴＬＶ−１感染に対する免疫化用ワクチンを含む。

本発明は、少なくとも１つの新しいペプチドを動物及び人に投与することを含む、ＨＴＬＶ−１の抗原に対する抗体の生産誘発方法を含んでいる。

見訓攻■匪本発明は、ＨＴＬＶ−１のｅｎｙ　　ｇｅｎｅ　（遺伝子）で符号化した外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４種のペプチドｇＰＡＨＴＬＶ−１、ｇｐＢＨＴＬＶ−１，ｇｐＣＨＴＬＶ−１およびｇｐＨＨＴＬＶ−１を、合成し、ＨＴ　Ｌ　Ｖ−１の陽性血清試料への免疫反応性を試験し提供する。これらの新しいペプチドは、ＨＴＬＶ−１の感染又はウィルスの予備感染を診断するための試験用、並びに、ＨＴＬＶ−１に対する抗体を動物および人の体内での生産を誘発させる組成中の免疫原として有益である。本発明により閉じ込められたペプチドは、ＨＴＬＶ−１の特異性抗体と反応可能な連続（線）エピトープより成る配列を内容とするアミノ酸の配列を有するオリゴペプチドより成る。

４種のペプチドは、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１の外被糖蛋白質に対応するＡ　−Ｈで指定する８種の異なる合成ペプチドから選択された。これらのペプチドは、有効なＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２ペプチドの選択と同様な種々の判定基準を用いて、例えば、システィン残分に近接たは含有（比較的に不変な関与生体からの同種蛋白質中におけるシスティンの位Ｗ）および糖鎖形成部位への近接により、選定された。かようなペプチド選択基準は、潜在的に有用でないペプチドを排除することが出来、潜在的に有用なペプチドを示すことが出来るが、さらに、８種のペプチドのいずれがＨＴＬＶ−１に陽性な血清試料に対し免疫反応性を示すかを同定するために試験を要した。８種のペプチドは、ＡからＨの優先順位で合成され、Ｆペプチドが前記基準により最小の抗原であると認められた。ＤからＦまでのペプチドは、既知のＨＴＬＶ−１陽性血清と反応可能であるとは認められなかった。ペプチドＡ、Ｂ、Ｃ及びＨは、ＨＴＬＶ−１の感染診断に有効であることが判明し、各々、ｇｐＡＨＴＬＶ−１、ｇＰＢＨＴＬＶ−１、ｇｐＣＨＴＬＶ−１およびｇｐＨＨＴＬＶ−１と命名した。

本発明は、かように、ＨＴＬＶ−１のｅｎｖ　　ｇｅｎｅ（遺伝子）で符号化た外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４つの免疫的に反応可能なペプチドと、機能的に同等であり該ペプチドの抗原特性に重大な影響を与えない変種を含んでいる。前記ペプチドは、公知の同相ペプチド合成技術で合成した。例えば、メリーフィールドおよびパラニー著くペプチド：分析、合成、生物学＞（１，９８０）（グロスおよびメイネンホーファー編集、ニューヨーク、アカデミ−プレス社）の第１巻第１章に記載されている。合成は、また、ペプチドのアミノまたはカルボキシル基端末に付加される原蛋白質配列に対応しない１個または２個のアミノ酸を許容する。かような余剰アミノ酸は、ペプチドを相互に結合し、大きな担体蛋白質または同相サポートにするのに有用である。これらの目的に役立つアミノ酸は、チロシン、リシン、グルタミン酸、アルパラギン酸、システィンおよび派生物を含む。付加蛋白質の修飾技術は１例えば、ＮＨ，のアセチル化、Ｃ００Ｈ末端のアミド化によりペプチドを他の蛋白質またはペプチド分子または支持体に結合する付加手段を提供するのに用いられる。

ＨＴＬＶ−１の外被糖蛋白質配列に対応する新しいペプチドについて以下に記述する。

ＡＨＴＬＶ−１Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−１，、ｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ− Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚここで、Ｘは、ペプチドのアミノ末端ＮＨ２群のＨまたはペプチドのアミノ末端ＮＨ２群に結合した付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は、担体蛋白質又は他の担体とのペプチドの結合を促進するために選択されたものである。

Ｙは、存在しないか、または、Ｃｙｓであり、Ｚは、ＯＨまたはＮＨ，である。

ペプチドｇｐＡＨＴＬＶ’−１は、ｅｎｖ遺伝子の領域内にある塩基対（ｂｐ）６３４２から６４１３ＨＴＬＶ−１（セイキその他による番号：米国科学アカデミ−会報（１９８３）８０号、３６１８−３６２２頁）を含むＨＴＬＶ−１（７）ゲノムのヌクレイド（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　）配列により符号化されている。

ＸがＨ，ＹがＣｙｓで、２がＯＨであるペプチドｇ　ｐ　Ａ　Ｉ−！　ＴＬＶ− １が特に好適である。

ＢＨＴＬＶ−１ペプチドｇｐＢＨＴＬＶ−１は、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１１７）ゲノムノはぼｂｐ６０１８−６０８６により符号化された外被蛋白質の領域に対応する　：　　Ｘ− Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｉ　１ｅ −Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　ｌａ−Ｉ　１ｅ−Ｖａ　ｌ−５ａｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−）１　ｊ、ｓ−Ａ　ｓ　ｎ−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ|Ｙ− Ｚ　ここでＸ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じである。Ｘが■（、ＹがＣｙｓでＺがＯＨであるペプチドｇｐＢＨＴＬＶ−１が特に好適である。

ＣＨＴＬＶ−１ペプチドｇｐＣＨＴＬＶ−１は、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１（７）ゲノムノはぼｂＰ５８６８−５９３０により符号化された外被蛋白質の領域に対応する　：　　Ｘ− Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ−＾ｒｇ− Ａ　１ａ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｒｐ−１１ｉｓ−Ｖａ　ｌ− Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚここで、Ｘ、Ｙおよび２の定義は、前記の場合と同じである。

ＸがＨ，ＹがＣｙ　ｓ　”ＣＺが○Ｉ（であるペプチドｇｐｃＦ（ＴＬ’Ｖ　− １が特に好適である。

ＨＨＴＬＶ−１ペプチドｇｐＨＨＴＬＶ−１は、ＨＴＬＶ−１１７）ゲノムノはぼｂｐ５７２７ −５７９８により符号化された外被蛋白質の領域に対応する＠　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐ　ｒｏ− Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−１１ｅ−Ｙ−Ｚここで、Ｘ、Ｙおよび２の定義は、前記の場合と同じである。

これらのペプチドは、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−１を伴う抗原に対する抗体の検出法において使用することが出来る。該ペプチドを使用しサンプル中のＨＴＬＶ−１の特異性抗体の存在を検出する方法は、好ましくは、サンプル中に存在するかも知れないＨＴＬＶ−１に対する抗体とペプチドとの間に免疫複合体が形成され得る様な条件下において、サンプルを少なくとも１個のペプチドと接触させることを含む。

ＨＴＬＶ−１に対する抗体が存在することを示す免疫複合体が形成されたならば、次に、適当な方法により検出し測定する。

かような方法は、就中、ラジオイムノアッセイ（ＲＩ　Ａ　；ｒａｄｉｏｉｍｗ＋ｕｎｏａｓｓａｙｓ）　、エライサ、ウェスタンプロット分析のような同種及び異種結合免疫学的検定法を含む。さらに、新しいペプチドを使用したアッセイプロトコルは、競合および非競合結合分析の実施を考慮する。

ペプチドは、使用される分析法の種類に従い、標識（信号発信）されるか、または、ｍ識されない。ペプチドに結合され得る標識は、技術的に公知のものであり、就中、酵素、放射線核種、蛍光および色原体物質、補助因子、ビオチン／アビジン、コロイド金および磁粉を含む、新しいペプチドの修飾には、公知の手段による担体蛋白質、またはペプチドまたは公知の保持体への結合を、例えば、ポリスチレンまたはポリビニール製マイクロタイタープレート、ガラス管またはガラス玉およびクロマトグラフ用保持体、例えば、紙、ヤレローズとセルローズ派生品およびシリカとの結合を考慮する。

好適な検定技術、特に、患者の血清、血液及び血液派生物の大規模な臨床スクリーニングには、エライザとウェスタンプロット法があり、エライサ試験が特に好ましい。前記のペプチドを用いたエライサ試験は、他の抗原の検出に広く用いられている方法１例えば、ヒト細胞誘導、組み換えＤＮＡ誘導または合成抗原蛋白質またはＨＩＶ−１蛋白質を用いるエイズウィルスへの被爆測定試験に基づいている。これらの検定方法における試薬として使用するために、本発明によるペプチドは、マイクロタイターのウェルの内面に好便に貼付けられる。ペプチドは、マイクロタイタのウェルに直接貼り付けてもよい。しかし、ペプチドを加える前に前記ウェルをポリリシンで前処理することにより、ウェルにペプチドを最大に結着出来ることが判った。さらに、新しいペプチドを、公知の手段で、ＢＳＡのような担体蛋白質に共有的に付着出来、ウェル被覆用の複合物が得られる。一般的に、前記ペプチドは、１０−１００μｇ／ｍｌの範囲の濃度で被覆用に使用されたが、しかし、検定を成功させるには、５００μｇ／＋ｍｌのペプチドが必要とされよう。

次に、サンプルを、ペプチドを塗布したウェルに加える。

サンプル中にＨＴＬＶ−１に対する抗体が存在していれば、免疫複合体が形成される。信号発生手段を加えて、複合体の形成検出を助けるようにしてもよい。検出可能な信号は、サンプル中にＨＴＬＶ−１の特異抗体が存在していれば発生する。

この発明によるペプチドは、動物及び人の体内にＨＴＬＶ−１に対する抗体の生産を誘発するために使用する、ワクチンを含む組成物に調製することが出来る。

かような組成物の調製のために、ｇｐＡＨＴＬＶ−１，ｇｐＢＨＴＬＶ−１、ｇｐＣＨＴＬＶ−１、ｇｐＨ，ＨＴＬＶ−１うちの、少なくとも１つのペプチドを免疫的に有効な量を、動物及び人への投与に適し生理的に摂取可能な担体に添加する。前記のペプチドは、共有結合的に、ペプチド同志互いに、また他のベプチドに、蛋白質担体または他の担体に付加出来、リポソームまたは他の小胞に混入出来、または、ワクチン技術において公知のように、抗原性補強剤または吸着剤と複合化出来る。二者択一的には、ペプチドは、上記と複合せず、動物及び人への投与に適した通常生活食塩溶液または緩衝化合物のような生理的に摂取可能な担体にただ添加することが出来る。

抗体誘発用の全ての免疫組成物につき１本発明によるペプチドの免疫的に有効な量を決定しなければならない。考慮すべき要素は、天然ペプチドの免疫原性、ペプチドは抗原性補強剤または担体蛋白質または他の担体と複合するか或は共有的に付着するのか、組成物の場合の投与経路、即ち、静脈内、筋肉内、皮下等の投与経路、および投与すべき免疫量の回数が含まれる。かような要素は、ワクチン技術において公知であり、免疫学者であれば、かような決定は実験を要せずによくなり得よう。

本発明は、以下の実施例をもってさらに説明するが、ただし、実施例は、発明の範囲を制限するものではない。

叉差遭上アプライドバイオシステム社製４３ＯＡ型ペプチド合成装置を、すべてのペプチドの合成に使用した。各々の合成には。

ｐ−ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｙｌｈｙｄｒｙｌａｍｉｎｅ　（ｐ−メチルベンジルヒドロキシルアミン）の同相支持樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ。

Ｌｏｕｊ、５ｖｉｌｅ、に’／）を使用した。ペプチドは、アプライドバイオシステム社の４３ＯＡ型ペプチド合成装置のユーザーマニュアル（１９８６）に従い、合成した。

合成に使用した全てのアミノ酸は、α−ＮＨ２基を保護するｔ−ブチルカルボニル基（ｔ−Ｂｏｃ）を含んでおり、スイス国のノババイオケム株式会社より入手した。アミノ酸は、反応側鎖群を有し、不必要で好ましくない側鎖反応を阻止するために追加基を含んでいた。全てのペプチドの合成に使用した個別に保護されたアミノ酸を第１表に記載しである。

個々の合成終了後、１０％アニソールと１０％硫化ジメチルを排除剤として組合わせた、無水フッ素酸（ＨＦ）を用い０℃の温度で処理することにより、保護群を合成ペプチドから除去し、ペプチドを同相支持樹脂から開裂した。開裂後、サンプル中のＨＦをＮ２を流して排除し、さらに、０℃の温度でサンプルを真空にさらし残存ＨＦを除去した。トリフルオル酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）で処理し、樹脂からペプチドを抽出し、次に、ＴＦＡを室温で蒸発させ除去した。ＴＦＡを除去してから、ペプチドを沈殿させ、無水エーテルで洗浄した。特定の検定に使用する前に、必要に応じ、ペプチドを逆相高性能液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を使用し純化することが出来る。かような純化に特に適したカラムは、ペプチド溶離勾配の水（Ｔ　Ｆ　Ａ）−アセトニトリル（Ｔ　Ｆ　Ａ）を使用した逆相Ｖｙｄａｋ　　Ｃ−１８カラムである。

以下余白第に尺ごプチドＡ　に　　せるアミノＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨＢｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−ＯＨＢｏ　　Ｃ−Ａｓｎ−０ｆ（Ｂ　ｏ　ｃ−Ａｓ　ｐ　−（ＯＢ　ｚ　ｌ）　−０ＨＢｏｃ−Ｃｙｓ　−（ｐＭｅＯＢｚ　１）−ＯｈＢｏｃ−Ｇｌｕ−（○Ｂｚｌ）−ＯＨＢｏ　　ｃ−Ｇｌｎ　　−０ＨＢ　ｏ　　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−ＯＨＢ　ｏ　ｃ−Ｈｉ　ｓ　　（Ｔｏ　ｓ）−〇■（Ｂｏｃ−１１ｅ−ＯＨ−１，／２　　Ｈ２０Ｂ　ｏ　　ｃ　−Ｌ　ｅ　ｕ、−ＯＨ−Ｈ，０Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（２−Ｃ１−Ｚ）−〇）−（（ｃｒｙｓｔ、）Ｂｏ　　ｃ−Ｍｅｔ−ＯＨＢｏ　　ｃ−Ｐｈｅ−ＯＨＢｏ　　Ｃ−Ｐｒｏ−０ＨＢｏｃ−８ｅｒ　（Ｂｚｌ）−ＯＨ・ＤＣＨＡＢ　ｏ　ｃ−Ｔｈ　ｒ　（Ｂ　ｚ　１）〜○ＨＢｏｃ−Ｔｒｐ　（Ｆｏ　：□ｍｙ　ｌ）　−０ＨＢ　ｏ　ｃ−Ｔｙ　ｒ　（２−Ｂ　ｒ−Ｚ）　−０ＨＢｏ　　ｃ−Ｖａｌ　　−ＯＨただし、Ｔｏｓ＝トシルまたはＰ−トルエンスルホン酸０Ｂｚ１．＝ベンジルオキシｐＭｅＯＢｚｌ＝ｐ−メチルベンジルオキシ２−Ｃ１−Ｚ＝塩化カルボベンゾキシ２−Ｂｒ−Ｚ＝臭化カルボベンゾキシである。

ヌ】１１点Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａ　５ｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ −Ｇｕｙ−Ｇ　ｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙ　５−Ｌｙｓ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ− Ｇｌｕ−Ｇ　１ｎ−Ｃｙ　ｓ−Ａ　ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａ　５ｎ−Ｃｙ　５ −ＯＨのアミノ酸配列を有するペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１を実施例１に記述のごとく合成し、エライサ試験に使用し、その免疫反応を測定した。

１■／＠１の濃度でポリリシンをマイクロタイタープレートに加え、３０分間培養した０次に、このポリリシンを捨て、ペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１を１０−１００μｇ／ｍｌの濃度でウェル（穴）に加え被覆した。ペプチドがウェルに結着するまで十分な時間培養してからペプチド溶液を除去し、ウェルへのペプチドの付着を安定させるためにグルタルアルデヒド溶液を１５分間加えた。次に、グルタルアルデヒド溶液を除去し、緩衝液でウェルを洗浄し、グルシンとウシの血清アルバミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）の混合物を、ウェル内の非結着部を遮断し、エライサ試験それ自身中の凝性反応を最小にするために添加した。最終洗浄段階を経て、前記プレートは使用準備が完了した。この準備の出来たマイロタイタープレートは、ウェルに被覆したペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１の抗原活性を低下させることなく数ケ月間保存することが出来た。

公知のエライザ法の便法を、前記の通り準備したマイクロタイタープレートを使用して実施した。ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ　　２０）を０．０５％、ＥＳＡを１％含有する食塩加燐ｗｌ（衝液（ＰＢＳ）に１：５０の割合で希釈した、各個体から採取した血清サンプルを、各ウェルに加え、加湿した雰囲気中に３７℃の温度で９０分間培養した。次に、プレートから希釈血清サンプルを除去し、ウェルを、Ｔｗｅｅｎ　　２０を０．０５％含むＰＢＳで３回洗浄した１次に、接合抗ヒトＩｇ抗体を、ウェルに加え、９０分間培養した。接合抗体が、山羊またはウサギの中に生じ、ヒト（人）の免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＭの軽鎖またはその組合せに対し特異であった。エライザには、Ｔｗｅｅｎ　　２０を０．０５％、ＢＳＡを１％含有しているＰＢＳに使用するために１．：５００に希釈した（　Ｄａｋｏｐａｔｔｓの）アルカリ性フォスファターゼ接合抗ヒトＩｇＧをより好ましく使用した。接合体を、結合ヒト抗体と反応するに十分な時間培養してから、プレートを前記のように３回洗浄した。

抗原として使用したペプチドと反応する、即ち、陽性反応する、ヒト血清中のＨＴＬＶ−１に対する抗体を検出するために、着色生成物を生じさせるために抗ヒトＩｇに付着されたアルカリ性フォスファターゼ酵素により開裂させた、色原体基質、アルカリ性フォスファターゼ基質（Ｓｉｇｍａ　Ｃａｔ、　Ｎｏ、１０４ｔａｂｌｅｔｓ）を炭酸ナトリウム／塩化マグネシウム（ＭｇＣ１）緩衝液に溶解し１ｕｇ／ｍｌの濃度に調節して加えた。室温で約４０分間培養後、抗原と反応する抗体がサンプル中に存在することを示す陽性反応が認められた。陽性反応を示す各ウェル中の黄色、オレンジ色から赤みがかった茶褐色までの色は、分光光度計の読み４０５ｎｍとして反応が数量化された。

分光光度計の読みは、背景反応に対し補正調節された。

ス】１１ｙ実施例１に記述のごとく合成したペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１、ｇｐＢＨＴＬＶ −１、ｇｐＣＨＴＬＶ−１，は、実施例２に記述のエライサ試験と平行して、ＨＴＬＶ−１に対する抗体に陽性な６つの血清サンプル、ＨＩ　Ｖ−１に対する抗体に陽性な８つの血清サンプル、ＨＩＶ−１／ＨＩＶ−２に対し陰性な１０の献血者血清サンプルにつきエライサ法で検定された。第２表に示されている様に、ＨＴ　Ｌ　Ｖに対し陽性が確認されている６血清サンプルのすべてがペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１と反応し、陽性が確認されている６血清サンプルのうち−の５サンプルがｇＰＢＨＴＬＶ−１と反応し、陽性が確認されている６血清サンプルのうちの５サンプルがｇＰＣＨＴＬＶ−１と反応した。表は、また、ＨＩＶ−１に対し陽性である血清サンプルおよび陰性である献血者血清サンプルは、ひとつとして、前記ペプチドと反応しなかったことを示している。

以下余白碧じしにエライザにより測定した、ペプチドＡＨＴＬＶ−１，ｇｐＢＨＴＬＶ−１゜ｇ　ｐ　ＣＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１と、ＨＴＬＶ−１陽性、ＨＩ　Ｖ−１陽性および正常な　々の　与　かケ床瓜旦ム也遭沖匁坑腟澗辺逸及返苺立血！青」出吐乞’ｔ　　　　　　ｔ［上Δす≦ＬＷＢ”　　　　　　ｔｖ人几工１．に１　　　　ｇＪ２旦■工１．に１　　　＆Ｐ℃、け工t二１！１８２　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　１．０４８★★　　　１．７９９”　　　　１．１０８゜１．０４８　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　２．０７４　　　　　２．０２９　　　　　０．７５０１０４９　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　２．０５０　　　　　１．９０８　　　　　０．６２８１０５０　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　２．１０５　　　　　２．３０９　　　　　０．７５８１０５１　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　０．６４６　　　　　０．２６２　　　　　０．２８９１０５２　　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　１．８６２　　　　　２゜１７３　　　　　２．３４４９５１　（ＨＩＶＥ）す　　　　　−　　　　　　　　　　　　０．０７２　　　　　　　０．０４ｇ　　　　　　　　０．０８４８４０（ＨＩＶＩ）　　　　−０，１１１０，０９２０，０７９９５２（ＩＩＩνｌ）　　　　−０，ｌ］、４　　　０．０５０　　　０．０９５８４５（Ｈ’ＩＶＩ）　　　　−０，２２６０，１９９０，１９１８４７（ＩＩＩν１）　　　　−０，１０４０，０６９０，１１６８４９（ＩＩＴＶＩ）　　　　−０，２０２０，１１５０，１１３９４９（ＨＩＶＥ）　　　　−０，０４８０，０５３０，０８２９５０（旧Ｖｌ）　　　　−０，０９００，０５８０，０９０３９３８８（ＢＤ）ｔｔ−０，０８４０，０７４０，１２６３９３８９（ＢＤ）　　　　−０，０９７０，０９００，０９２３９３９０（ＢＤ）　　　　−０，１２２０，１０７０，１２８３９３９１（ＢＤ）　　　　−０，１１９０，０９５０，１７８３９３９２（ＢＤ）　　　　−０，０８５０，０７ｇ　　　　０．１２５３９３９３（ＢＤ）　　　　−０，０９６０，０８２０，０５０３９３９４（ＢＤ）　　　　 −０，１１６０，１１００，］、５０３９３９５（ＢＤ）　　　　−０，１０９０，０７５０，０７９３９３９６（ＢＤ）　　　　−０，３０３０，１１６０，２０７３９３９７（ＢＤ）　　　　−０，１４２０，０７７０，１０８ｆ＝　Ｉ（ＴＶＩ；旧Ｖ−１に対し陽性な血清＋＋＝ＢＤ；（正常な）献血者の血清 ★　；すＢ；ウェスタンブロッティング分析★★：分光光度計の読み光電密度０．Ｄ、４０５カツトオフ＝陰性血清の平均光電密度０．Ｄ、４０５　＋　６　Ｘ標準偏差Ｓ、Ｄ。

ｇｐＡＩ（ＴＬＶ−１＝０．１２４　＋　６Ｘ０．０６１　＝　０．４９０　（０，Ｄ、４０５）ｇｐＢＨＴＬＶ〜１　＝　０．０８８　＋　６Ｘ０．０３５　＝　０．２９８　（０，０，４０５）ｇｐｃＨＴＬＶ−１＝０．１１６　＋　６Ｘ０．０４２　二０．３６８　（０，０，４０５）ス】１１先Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇ　１ｕ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ｇ　１ｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｂｒ−Ａ　ｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａ　５ｎ−Ｌｅｕ−Ａ　５ｐ−Ｈｉｓ−１１ｅ−Ｃｙｓ−ＯＨのアミノ酸配列を有するペプチドｇｐＨＨＴＬＶ−１を実施例１に記述のごとく合成し、実施例２に記述のごとく、エライサ試験に使用し、確認せる日本人のＨＴＬＶ血清および、米国及び欧州の成人Ｔ細胞白血病、熱帯性不全対麻痺（ＴＳＰ）患者より採取した血清および脳を髄液（Ｃ８Ｆ）に対する免疫反応性を測定した。第３表に示すように、全ての血清は、ＨＴＬＶ−１に関し陽性であることが確認されている。

日本ノＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１血清　　　　　　２２／３２　（６９％）ＡＴＬ　Ｃ８Ｆ　　　　　　　　　　　　　　　１／ＩＴＳＰ　血清　　　　　　　　　　　　　　　４／４ＴＳＰ　　Ｃ８Ｆ　　　　　　　　　　　　　　　４／４旦且二Ａ度作髪皿　　　　　　　エライザにおいて２８献血者血清　　　　　　　　　　　　ｏ／２８３０　ＨＩＶ−１陽性血清　　　　　　　　　０／３０８　　ＨＩＶ−２陽性血清　　　　　　　　　０／８４移植宿主の血清　　　　　　　　　　　０／４４　白血病患者の血清　　　　　　　　　　０／４４　　ＥＢウィルスＩｇＭ陽性血清　　　　　０／４４　リウマチ因子の陽性血清　　　　　　　０／４８Ｃ５Ｆ（無菌髄膜炎）Ｏ／８ス】１１ｊ日本のＨＴＬＶ−１血清に関する吸収着値を、ｇ　ｐ　ＨＨＴＬ　Ｖ　−１を用いエライサ試験、デュポンＨＴＬＶ−１エライサおよびウェスタン法で測定した。血清はすべて、１１５０に希釈した。結果を第４表に示す。

以下余白策±表スｍＡＴＬおよびＴＳＰの患者より採取した血清と脳を髄液（Ｃ５Ｆ）に関する吸収値を、血清を１１５０に、Ｃ８Ｆを１　／　２０　ニ希釈し、ｇｐＨＨＴＬＶ− １を用い、エライサ検定法で測定した６結果を第５表に示す。

第旦人３９５１１　　　　　　　　　　　　　　０．０３８３９５１２　　　　　　　　　　　　　０．０１５３９５１２　　　　　　　　　　　　　０．０２０３９５１３　　　　　　　　　　　　　０．０２０３９５１３　　　　　　　　　　　　　　０．０２３ＴＳＰ／ＡＴＬ血清ＴＳＰ−ＢＡＲ０，１３８ＴＳＰ−８ＥＰＩＩ　　　　　　　　　　　　０．２２６ＴＳＰ−ＬＥＲ０，２７５ＴＳＰ−ＳＯＲ０，１５１ＡＴＬ−５ＩＥ　　　　　　　　　　　　　０．０８０ＡＴＬ−ＬＡＵ７　　　　　　　　　　　０．０７７ＴＳＰ／ＡＴＬ　　Ｃ３ＦＴＳＰ−ＢＡＲ０，２７５ＴＳＰ−８ＥＰＨ０，２６３ＴＳＰ−ＬＥＲ０，３６９ＴＳＰ−５ＯＲ０，４１８ＴＳＰ−３ＩＥ　　　　　　　　　　　　　０．０２７前記の結果より明らかな通り、ＨＴＬＶ−１のｅｎｖ遺伝子により符号化された免疫的に重要な外被糖蛋白質の領域に対応する新しい合成ペプチドｇｐＡＨＴＬＶ−１，、ｇ　ｐ　Ｂ　ＨＴＬＶ−１、ｇｐＣＨＴＬＶ−１およびｇｐＨＨＴＬＶ−１は、ＨＴＬＶ−１に対する抗体の存在を検出し選択的に検定するためのユニークな試薬を提供する。

補正書の写しく翻訳文）提出帯（特許法第１８４条の８）平成２年９月１０日特許庁長官　　　植　松　　敏　　殿１、特許出願の表示国際出願番号　ＰＣＴ／５Ｅ８９１００１２６２、発明の名称Ｈ，ＴＬＶ−１感染検出用合成ペプチド抗原３、特許出願人住　所　　　　スイス国、シーエイチ　６３００　ツーク、ヴアーレルストラーセ４３氏　名　　　　ヴイロヴアル　ソシエテ　アノニム国　籍　　　　スイス４、代理人住　所　　　　〒２３１　神奈川県横浜市中区不老町１−２−１中央第６関内ビル１００１５、補正書の提出年月日１９９０年５月２３日正された　　　・の１　、　ａ　）　Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ−Ｉ　１ｅ−Ｇｉｎ−Ｇ　１　ｕ−Ｇ　１ｎ−Ｃｙ　ｓ−Ａ　ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ −Ａ　５ｎ−Ｙ　−Ｚ。

ｂ　）　Ｘ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−３ｅｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａ　５ｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ　。

ｃ　）　Ｘ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−２。

および、ｄ　）　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈ１ｓ−３ｅｒ−Ａ　ｓｎ−１ｅｕ−Ａ　ｓｐ−Ｈｉｓ−Ｉ　１ｅ−Ｙ−Ｚ　。

の配列式を有するペプチド群から選択され、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ，基のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進するために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ，である、抗原ペプチド。

２　、　ａ　）　Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ− Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙ　ｓ−Ｌｙ　ｓ−Ａ　ｌａ−Ｉ　１ｅ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　１ｕ−Ｇｉｎ　−Ｃｙ　ｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ− Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

ｂ　）　Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ− １１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａｌ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ− Ｈｉｓ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌａｕ−１１ｅ−ｔ＋−・＋−Ｃｙｓ−ＯＨ。

ｃ　）　Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ− Ａｒｇ−Ａｌａ・５ａｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ− Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

および、ｄ　　）　　Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−丁ｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−１ｅｕ−Ａｓｐ−Ｈｉｓ−Ｉ　１ｅ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

の配列式を有するペプチド群から選択される抗原ペプチド。

３　、　Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−１、ｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａ　１．ａ−Ｉ　１ｅ−Ｇ］、ｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈａ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｙ −Ｚの配列式において、Ｘ、Ｙ、Ｚが請求項の第１項に規定された通りであり、好ましくは、Ｘが１個の１（であり、ＹがＣｙ　ｓであり、ＺがＯＨであることを特徴とする請求項第１項に記載の抗原ペプチド。

４　、　Ｘ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉ　１ｅ−Ｌｅｕ−Ｙ−７，の配列式において、ｘ、ｙ、ｚが請求項の第１項に規定された通りであり、好ましくは、Ｘが１個のＨであり、ＹがＣｙｓであり、ＺがＯＨであることを特徴とする請求項第１項に記載の抗原ペプチド。

５　＠Ｘ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ −Ａｒｇ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ −Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚの配列式において、Ｘ、Ｙ、Ｚが請求項の第１項に規定された通りであり、好ましくは、Ｘが１個のＨであり、ＹがＣｙｓであり、ＺがＯＨであることを特徴とする請求項第１項に記載の抗原ペプチド。

６　　、　　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ｇｌｎ− Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ− Ｐｒｏ−Ｈ１ｓ−３ｅｒ−Ａ　ｓｎ　−１ｅｕ−Ａｓｐ−１（ｉ　ｓ−１１ｅ− Ｙ−Ｚの配列式において、ｘ、ｙ、ｚが請求項の第１項に規定された通りであり、好ましくは、Ｘが１個のＨであり、ＹがＣｙｓであり、ＺがＯＨであることを特徴とする請求項第１項に記載の抗原ペプチド。

７　、　ａ　）　Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−丁］、ｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｙ −Ｚ。

ｂ　）　Ｘ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａ　５ｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ　。

ｃ　）　Ｘ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−シａｉ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−３ａｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ　。

および、ｄ、　）　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−８ａｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−１ｅｕ−Ａ　５ｐ−Ｈｉ　ｓ−Ｉ　ｌｅ−Ｙ− Ｚ　。

よりなり、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ，基のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチド８１個の担体蛋白質との結合を促進するために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、Ｃｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ，である、ペプチド群から選択された少なくとも１−個の抗原ペプチドとサンプルを、該サンプル中にＨＴＬＶ−１に対する抗体が存在すれば、該抗体と前記ペプチドとの間に免疫複合体が形成される条件下において接触させ、前記サンプル中のＨＴＬＶ− １に対する抗体の存在を決定するために。

前記免疫複合体の形成を測定することを特徴とするサンプル中のＨＴＬＶ−１に対する抗体を誘発する方法。

８、前記ペプチドが、ａ　）　Ｇ１．ｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ −Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａ　１ａ−１１ｅ−Ｇ　１ｎ−Ｇ　ｌｕ−Ｇｉｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ− ＯＨ。

ｂ　）　　Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ −１１ｅ−Ｇｉｎ−Ａｌａ−丁１ｅ−Ｖａ　ｌ−５ｅｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙ　ｓ−Ｈｉｓ−Ａ　５ｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅ　ｕ　−Ｃｙ　５− ＯＨ。

ｃ　）　Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ− Ａｒｇ−＾Ｌａ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ− Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

および、ｄ　）　Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−５ｅｒ−Ｇ］、ｎ−Ｌｅｕ −Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ −ｔ（ｊ、５−３ｅｒ−Ａｓｎ−１ｅｕ−＾５ｐ−Ｈｉｓ−１１ｅ−Ｃｙｓ−Ｏ１１。

よりなる群から選択される、請求項の第７項に記載の方法。

９　、　ａ　）　Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−丁１ｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｙ− Ｚ。

ｂ　）　Ｘ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａ　１−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉ　１ｅ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ　。

ｃ　）　Ｘ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ　。

および、ｄ　）　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−１ｅｕ−Ａ　ｓｐ−Ｈｉｓ−Ｉ　１ｅ−Ｙ−Ｚ　。

よりなり、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基の１（か、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進するために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である、ペプチド群から選択された少なくとも１個の抗原ペプチドが免疫的に有効な量であり、生理的に摂取可能な担体であることを特徴とする、動物およびヒトの体内でＨＴＬＶ−１感染に対する抗体の生産を誘発する組成。

１０、前記ペプチドが、ａ　）　Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ− Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｇｌｎ− Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

ｂ　）　Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−１１ｉｓ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ −１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｖａ　ｌ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−）１ｉｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ−ＯＨ。

ｃ　）　Ｘ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｌａ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｙ−Ｚ　。

および、ｄ　）　Ｘ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−３ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ａｓｎ−１ｅｕ−Ａ　５ｐ−Ｈｉｓ−１１ｅ−Ｙ−Ｚ　。

よりなる群から選択されることを特徴とする請求項の第９項国際調査報告ＷｅｌＲ１１１ａｎａｌ＾１，１．、．１＝−Ｎ−ＰＣＴ／Ｓ［：８９１００１２６−１・ＩＩＩＩＩ−・ｆｉｌｌ＾−−−シＩ吻−−−＊ＰＣＴ／Ｓ［８９１００１２６

Claims

【特許請求の範囲】

１．【配列があります】Ｚ，の式を有し、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基の１個のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である抗原ペプチド。
２．【配列があります】の式の抗原ペプチド。
３．【配列があります】の式を有し、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基の１個のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である抗原ペプチド。
４．【配列があります】の式の抗原ペプチド。
５．【配列があります】の式を有し、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基の１個のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である抗原ペプチド。
６．【配列があります】の式の抗原ペプチド。
７．【配列があります】の式の抗原ペプチド。
８．【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなり、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である、ペプチド群から選択された少なくとも１個の抗原ペプチドと、サンプルを、該サンプル中にＨＴＬＶ−１に対する抗体が存在すれば、該抗体と前記ペプチドとの間に免疫複合体が形成される条件下において接触させ、前記サンプル中のＨＴＬＶ−１に対する抗体の存在を決定するために、前記免疫複合体の形成を測定することよりなる、サンプル中のＨＴＬＶ−１に対する抗体を検出する方法。
９．前記ペプチドが、【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなる群から選択される、請求項の第８項に記載の方法。
１０．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第８項に記載の方法。
１１．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第８項に記載の方法。
１２．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第８項に記載の方法。
１３．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第８項に記載の方法。
１４．【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなり、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である、ペプチド群から選択された少なくとも１個の抗原ペプチドの免疫的に有効な量と、生理的に摂取可能な担体よりなる、動物およびヒトの体内でＨＴＬＶ−１感染に対する抗体の生産を誘発する組成。
１５．前記ペプチドが、【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなる群から選択される、請求項の第１４項に記載の組成。
１６．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第１４項に記載の組成。
１７．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第１４項に記載の組成。
１８．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第１４項に記載の組成。
１９．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第１４項に記載の組成。
２０．【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなり、Ｘがペプチドのアミノ末端のＮＨ２基のＨか、前記ペプチドの該アミノ末端のＮ２基に結合した１個の付加アミノ酸のいずれかであり、該付加アミノ酸は前記ペプチドと１個の担体蛋白質との結合を促進しするために選択されたものであり、Ｙは、欠落しているか、またはＣｙｓであり、ＺはＯＨかＮＨ２である、ペプチド群から選択された少なくとも１個の抗原ペプチドの、動物およびヒトに投与する免疫的に有効な量と、生理的に摂取可能な担体よりなる、動物およびヒトの体内でＨＴＬＶ−１に対する抗体の生産を誘発する方法。
２１．前記ペプチドが、【配列があります】，【配列があります】，および【配列があります】，よりなる群から選択される、請求項の第２０項に記載の方法。
２２．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第２０項に記載の方法。
２３．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第２０項に記載の方法。
２４．前記ペプチドが、【配列があります】，である、請求項の第２０項に記載の組成。