JPH0751598B2 - Ｈｔｌｖ‐１感染検出用合成ペプチド抗原 - Google Patents
Ｈｔｌｖ‐１感染検出用合成ペプチド抗原Info
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- JPH0751598B2 JPH0751598B2 JP1504216A JP50421689A JPH0751598B2 JP H0751598 B2 JPH0751598 B2 JP H0751598B2 JP 1504216 A JP1504216 A JP 1504216A JP 50421689 A JP50421689 A JP 50421689A JP H0751598 B2 JPH0751598 B2 JP H0751598B2
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- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
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Description
【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、免疫に重要なHTLV−１プロテインの抗原領域
に相当する配列を有する合成ペプチド抗原に関する。こ
れらのペプチドは、HTLV−１に対する抗体の有無を検査
する判定試薬として有用であり、動物および人間のHTLV
−１に対する抗体を惹起する手段と組成内免疫抗原とし
ても有用である。
に相当する配列を有する合成ペプチド抗原に関する。こ
れらのペプチドは、HTLV−１に対する抗体の有無を検査
する判定試薬として有用であり、動物および人間のHTLV
−１に対する抗体を惹起する手段と組成内免疫抗原とし
ても有用である。
成人のＴ細胞白血病／リンパ腫（ATL;adult T−cell le
ukemia/lymphoma）の病因作用物質は、HTLV−１（human
T−cell lymphotropic virus type 1;人Ｔ細胞リンパ
栄養１型ウィルス）として同定されている。例えば、サ
ンガーダラン他、ビー・エヌ・フィールド編の〈ウィル
ス学〉（1985）1345-1371頁を参照されたい。世界でこ
のウィスルが最も蔓延している地域は、日本南部にある
九州島であり人工の約15％が感染している。最近におい
ては、南洋性不全対麻痺（TSP;tropical spastic parap
aresis）と呼ばれる南洋性完全対麻ひは、HTLV−１の感
染と関係していることが、ロジャージョンソン他の〈ラ
ンセット〉（1985）第２巻1247頁、ヴェルナント他の
〈Ann.Neurol〉（1987年）第21号123頁に報告されてい
る。熱帯地方において、TSPは、西洋世界における多発
硬化症候群と同様規模で同様に重要である。マルクスの
〈J.L.Science〉（1987年）236号1059-1061頁に記載さ
れている。
ukemia/lymphoma）の病因作用物質は、HTLV−１（human
T−cell lymphotropic virus type 1;人Ｔ細胞リンパ
栄養１型ウィルス）として同定されている。例えば、サ
ンガーダラン他、ビー・エヌ・フィールド編の〈ウィル
ス学〉（1985）1345-1371頁を参照されたい。世界でこ
のウィスルが最も蔓延している地域は、日本南部にある
九州島であり人工の約15％が感染している。最近におい
ては、南洋性不全対麻痺（TSP;tropical spastic parap
aresis）と呼ばれる南洋性完全対麻ひは、HTLV−１の感
染と関係していることが、ロジャージョンソン他の〈ラ
ンセット〉（1985）第２巻1247頁、ヴェルナント他の
〈Ann.Neurol〉（1987年）第21号123頁に報告されてい
る。熱帯地方において、TSPは、西洋世界における多発
硬化症候群と同様規模で同様に重要である。マルクスの
〈J.L.Science〉（1987年）236号1059-1061頁に記載さ
れている。
HTLV−１の感染検出の諸方法は、一般的に、血液、血清
および血液派生成生物中のHTLV−１抗原に対する抗体を
検出、定量することによりウィルスへの被爆を測定して
いる。かような分析法は、ATLおよびTSPの診断の補助な
らびに、HTLV−１に予備被爆させるための血液および血
液生成物のスクリーニングに用いることが出来る。
および血液派生成生物中のHTLV−１抗原に対する抗体を
検出、定量することによりウィルスへの被爆を測定して
いる。かような分析法は、ATLおよびTSPの診断の補助な
らびに、HTLV−１に予備被爆させるための血液および血
液生成物のスクリーニングに用いることが出来る。
HTLV−１感染の診断及びHTLV−１被爆のためのスクリー
ニングにつき広く行われている試みは、供試体中のHTLV
−１免疫原性成分に対する抗体の存在を検出する酵素結
合免疫吸着検定法（エライサ:ELISA;enzyme-linked imm
unosorbent assay）技術を含んでいる。他の方法では、
ウェスタンブロッティング法を利用し供試体中のHTLV−
１特異性抗体を検出することができる。一般に、エライ
サ及びウェスタン法に加え、放射線標識免疫検定法、凝
集検査または間接免疫蛍光測定法の様な殆どの公知の免
疫学的検定は、特定の試薬を用いることにより、HTLV−
１および抗体の検出に適応できる。
ニングにつき広く行われている試みは、供試体中のHTLV
−１免疫原性成分に対する抗体の存在を検出する酵素結
合免疫吸着検定法（エライサ:ELISA;enzyme-linked imm
unosorbent assay）技術を含んでいる。他の方法では、
ウェスタンブロッティング法を利用し供試体中のHTLV−
１特異性抗体を検出することができる。一般に、エライ
サ及びウェスタン法に加え、放射線標識免疫検定法、凝
集検査または間接免疫蛍光測定法の様な殆どの公知の免
疫学的検定は、特定の試薬を用いることにより、HTLV−
１および抗体の検出に適応できる。
これらの検定法の場合の抗原の源は、HTLV−１感染Ｔ細
胞系から得た就中抗原タンパク質および組換え型DNA技
術により生産せる抗原を含むことが出来る。これらの供
給源から得られた抗原を使用するのは、重大な欠点があ
る。
胞系から得た就中抗原タンパク質および組換え型DNA技
術により生産せる抗原を含むことが出来る。これらの供
給源から得られた抗原を使用するのは、重大な欠点があ
る。
連続細胞系統中のHTLV−１自体の生産は、ウィルスに研
究者が冒され得る危険があるために高リスク（P3不純
物）実験室において行わねばならない。Ｔ細胞誘導HTLV
−１抗原を用いてエライサ試験において偽陰性および偽
陽性結果を生じさせることも可能であろう。例えば、類
推であるが、エイズ（AIDS）ウィルス感染の測定におい
て、細胞系から得た全ウィルスHTLV−１抗原を使用した
エライサ試験による陰性および偽陽性結果が、ガートラ
ーその他により〈ウィルス学的方法〉誌の1987年版15号
の11-23頁に報告されている。電気ブロットした完全な
ウィルスを使用しHTLV−１を検出するウェスタンブロッ
ト分析は、エライサ試験に比し、より大きな特異性を提
供しなければならず、労力と時間を要する。さらに、HT
LV−１を生産する細胞は、人間を起源とするために、こ
れらの細胞系から得たウィルス抗原は、完全に純化しな
ければ、HLA抗原のような正常な細胞抗原で汚染され、
エライサ試験時に偽陽性反応を生み出す。細胞系からの
ウィルス抗原を徹底的に純化すると、免疫学的に重要な
タンパク質の免疫原性が破壊されるか、そうでなけれ
ば、抗原を不活性化することが考えられ、その結果、偽
陰性反応をもたらす試薬が生産される。加えて、生ウィ
ルス誘導抗原を用いた偽陰性反応が、立体障害のために
生じ、抗原は、反応混合剤中に他の抗原と抗体が存在し
反応を阻止するために、特異性抗原と反応出来ない。
究者が冒され得る危険があるために高リスク（P3不純
物）実験室において行わねばならない。Ｔ細胞誘導HTLV
−１抗原を用いてエライサ試験において偽陰性および偽
陽性結果を生じさせることも可能であろう。例えば、類
推であるが、エイズ（AIDS）ウィルス感染の測定におい
て、細胞系から得た全ウィルスHTLV−１抗原を使用した
エライサ試験による陰性および偽陽性結果が、ガートラ
ーその他により〈ウィルス学的方法〉誌の1987年版15号
の11-23頁に報告されている。電気ブロットした完全な
ウィルスを使用しHTLV−１を検出するウェスタンブロッ
ト分析は、エライサ試験に比し、より大きな特異性を提
供しなければならず、労力と時間を要する。さらに、HT
LV−１を生産する細胞は、人間を起源とするために、こ
れらの細胞系から得たウィルス抗原は、完全に純化しな
ければ、HLA抗原のような正常な細胞抗原で汚染され、
エライサ試験時に偽陽性反応を生み出す。細胞系からの
ウィルス抗原を徹底的に純化すると、免疫学的に重要な
タンパク質の免疫原性が破壊されるか、そうでなけれ
ば、抗原を不活性化することが考えられ、その結果、偽
陰性反応をもたらす試薬が生産される。加えて、生ウィ
ルス誘導抗原を用いた偽陰性反応が、立体障害のために
生じ、抗原は、反応混合剤中に他の抗原と抗体が存在し
反応を阻止するために、特異性抗原と反応出来ない。
HTLV−１の感染を検出するためのエライサ試験は、バク
テリア中のHTLV−１ゲノム部分をクローニングすること
により生産された免疫学的に重要なウィルスプロテイン
を使用することも可能である。HTLV−１の完全なヌクレ
オチド配列は、セイキその他により、米国科学アカデミ
ー会報（1983）80号、3618-3622頁に報告されている。H
TLV−１の遺伝子envおよびgagにより各々符号化した、
ウィルスの外膜（エンペロープ）糖タンパク質および核
タンパク質は、明らかに、HTLV−１感染患者の血清中の
抗体により認識された抗原である。
テリア中のHTLV−１ゲノム部分をクローニングすること
により生産された免疫学的に重要なウィルスプロテイン
を使用することも可能である。HTLV−１の完全なヌクレ
オチド配列は、セイキその他により、米国科学アカデミ
ー会報（1983）80号、3618-3622頁に報告されている。H
TLV−１の遺伝子envおよびgagにより各々符号化した、
ウィルスの外膜（エンペロープ）糖タンパク質および核
タンパク質は、明らかに、HTLV−１感染患者の血清中の
抗体により認識された抗原である。
ウィルスの外膜と核に存在している免疫的に重要なHTLV
−１抗原は、細菌、酵母あるいはワクシニアのような種
々の表出システム中のHTLV−１ゲノムをクローニングす
ることにより準備出来る。かような組み換え型抗原は、
HIV−１タンパク質の場合に用いられている潜在性ワク
チン成分として、診断において使用できる。例えば、カ
ブラジールその他により〈バイオテクノロジー〉（1986
年）４号の128-133頁、チャンその他により〈バイオテ
クノロジー〉（1985年）３号の905-909頁、プットニー
その他により〈科学〉（1986年）234号の1392-1395頁、
キーニその他により〈バイオテクノロジー〉（1986年）
４号の790-795頁に記載されている。DNA組み換え法によ
り生産されたHTLV−１抗原は、しかしながら、HTLV−１
抗原試料を汚染する表出システムの抗原に対する任意抗
原の活性により、エライサにおける偽陽性反応を避ける
ために徹底的に純化させねばならない。また、純化中に
HTLV−１抗原が変性し、重要な抗原の活性を殺すことに
なる。
−１抗原は、細菌、酵母あるいはワクシニアのような種
々の表出システム中のHTLV−１ゲノムをクローニングす
ることにより準備出来る。かような組み換え型抗原は、
HIV−１タンパク質の場合に用いられている潜在性ワク
チン成分として、診断において使用できる。例えば、カ
ブラジールその他により〈バイオテクノロジー〉（1986
年）４号の128-133頁、チャンその他により〈バイオテ
クノロジー〉（1985年）３号の905-909頁、プットニー
その他により〈科学〉（1986年）234号の1392-1395頁、
キーニその他により〈バイオテクノロジー〉（1986年）
４号の790-795頁に記載されている。DNA組み換え法によ
り生産されたHTLV−１抗原は、しかしながら、HTLV−１
抗原試料を汚染する表出システムの抗原に対する任意抗
原の活性により、エライサにおける偽陽性反応を避ける
ために徹底的に純化させねばならない。また、純化中に
HTLV−１抗原が変性し、重要な抗原の活性を殺すことに
なる。
一方、組み換え技術により生産されたHTLV−１抗原は、
ウィルス感染細胞培養から得られた抗原を超える改良で
あるが、組み換え型タンパク質は、出来る限り正確な診
断を与える試薬をまだ提供出来ていない。病気の性格並
びに正確な結果の必要に応じ、他の試薬を開発しHTLV−
１の診断における精度を100％に近づけねばならない。
ウィルス感染細胞培養から得られた抗原を超える改良で
あるが、組み換え型タンパク質は、出来る限り正確な診
断を与える試薬をまだ提供出来ていない。病気の性格並
びに正確な結果の必要に応じ、他の試薬を開発しHTLV−
１の診断における精度を100％に近づけねばならない。
蛋白質抗原は、特異性抗体に対する結合部を構成する蛋
白質領域である抗原決定基またはエピトープを多数含ん
でいる。一般的に、蛋白質抗原は、各々が６個から８個
のアミノ酸配列より成る、５から10の間のエピトープを
含んでいる。エピトープは、６−８個のアミノ酸が直接
配列され存在する連続形、或は、エピトープを形成する
アミノ酸が蛋白質の３次元張り込みにより結合されてい
る不連続形のいずれでもあり得る。一個のエピトープが
比較的少ないアミノ酸より成るものであっても、その抗
体との反応性は、エピトープを取り巻く蛋白質中のアミ
ノ酸により影響される。
白質領域である抗原決定基またはエピトープを多数含ん
でいる。一般的に、蛋白質抗原は、各々が６個から８個
のアミノ酸配列より成る、５から10の間のエピトープを
含んでいる。エピトープは、６−８個のアミノ酸が直接
配列され存在する連続形、或は、エピトープを形成する
アミノ酸が蛋白質の３次元張り込みにより結合されてい
る不連続形のいずれでもあり得る。一個のエピトープが
比較的少ないアミノ酸より成るものであっても、その抗
体との反応性は、エピトープを取り巻く蛋白質中のアミ
ノ酸により影響される。
抗原部位または蛋白質エピトープのマッピングを作成を
目的とした研究は、関連する蛋白質の種々な領域に対応
する合成試薬を使用することにより助けられた。例え
ば、レーナーその他による〈免疫疾患の生物学：病院診
療書〉（1983）（ディクソン及びフィシヤー編）の331-
338頁、レーナーによる〈Adv.Immunol〉（1984）36号の
１頁に報告されている。エピトープのマッピングの研究
において役立つ以外に、合成ペプチドは、蛋白質の主要
な抗原決定群を取り囲んでいれば、ワクチンおよび診断
試薬を含む免疫組成としての潜在能力を有する。合成ペ
プチド抗原は、特異性抗体の生産と反応性において幾つ
かの利点を有する。合成ペプチドの正確な配列は、蛋白
質のアミノ酸配列により正確に決定した、或は、蛋白質
のDNA配列コードから予測したアミノ酸配列から選択す
ることが出来る。特異合成ペブチドを用いれば、特異性
抗体生産または検査において全長蛋白質を使用する必要
がなくなる。さらに、メリフィールドと協力者による固
相ペプチド合成技術は、関係合成ペプチドを本質的に無
制限量化学的に生産させ得る。例えば、ニューヨーク、
アカデミックプレス社発行のエリクソンとメリフィール
ドの著書〈蛋白質〉（1976年第３版）第２巻の第３章に
記載されている。自動化されたペプチド合成装置の導入
が、かような技術を一層進退させている。
目的とした研究は、関連する蛋白質の種々な領域に対応
する合成試薬を使用することにより助けられた。例え
ば、レーナーその他による〈免疫疾患の生物学：病院診
療書〉（1983）（ディクソン及びフィシヤー編）の331-
338頁、レーナーによる〈Adv.Immunol〉（1984）36号の
１頁に報告されている。エピトープのマッピングの研究
において役立つ以外に、合成ペプチドは、蛋白質の主要
な抗原決定群を取り囲んでいれば、ワクチンおよび診断
試薬を含む免疫組成としての潜在能力を有する。合成ペ
プチド抗原は、特異性抗体の生産と反応性において幾つ
かの利点を有する。合成ペプチドの正確な配列は、蛋白
質のアミノ酸配列により正確に決定した、或は、蛋白質
のDNA配列コードから予測したアミノ酸配列から選択す
ることが出来る。特異合成ペブチドを用いれば、特異性
抗体生産または検査において全長蛋白質を使用する必要
がなくなる。さらに、メリフィールドと協力者による固
相ペプチド合成技術は、関係合成ペプチドを本質的に無
制限量化学的に生産させ得る。例えば、ニューヨーク、
アカデミックプレス社発行のエリクソンとメリフィール
ドの著書〈蛋白質〉（1976年第３版）第２巻の第３章に
記載されている。自動化されたペプチド合成装置の導入
が、かような技術を一層進退させている。
色々な判定基準が、タンパク質のどの部位が免疫優位で
あるかを定めるのに用いられるが、そのような領域に対
応するペプチドが大規模なスクリーニングと診断におい
ては、常に有益であるとは限らず、例えば、ペプチドは
蛋白質と反応する抗体により認識される固有の間隔配位
にないために、抗原性が失われることがある。さらに、
HIV−１とHIV−２につき特に明白であるが、これらの２
つのウィルス群の各々の範囲内に、重大な遺伝子的変異
性があり、多数のウィルスの血清型が生じる。これによ
り、スクリーニングと診断ならびにワクチン作製に用い
るペプチド抗原を誘導する蛋白質部位の選択に重大な拘
束を課している。しかしながら、HIV−１およびHIV−２
蛋白質の或る一定の免疫優位部分は、突然変異株に比較
的多く発見されている。有益な合成抗原は、かようなタ
ンパク質領域から誘導出来ると信じられている。
あるかを定めるのに用いられるが、そのような領域に対
応するペプチドが大規模なスクリーニングと診断におい
ては、常に有益であるとは限らず、例えば、ペプチドは
蛋白質と反応する抗体により認識される固有の間隔配位
にないために、抗原性が失われることがある。さらに、
HIV−１とHIV−２につき特に明白であるが、これらの２
つのウィルス群の各々の範囲内に、重大な遺伝子的変異
性があり、多数のウィルスの血清型が生じる。これによ
り、スクリーニングと診断ならびにワクチン作製に用い
るペプチド抗原を誘導する蛋白質部位の選択に重大な拘
束を課している。しかしながら、HIV−１およびHIV−２
蛋白質の或る一定の免疫優位部分は、突然変異株に比較
的多く発見されている。有益な合成抗原は、かようなタ
ンパク質領域から誘導出来ると信じられている。
最近、HIV−１から表面糖蛋白質gp120とpg41の種々の免
疫優位領域に対応し、二つのウィルスのenvgeneにより
符号化されたHIV−２の蛋白質に対応する免疫的反応ペ
プチドが合成され、HIV−１またはHIV−２に感染した個
体から採った血清とほぼ100％の効率で反応することが
示されている。抗体の存在を検出する検査に使用した
が、かようなペプチドは、偽陽性または偽陰性反応をを
示さなかった。1987年５月18日に出願された米国特許出
願第051,726号及び第051,727号に公知である。
疫優位領域に対応し、二つのウィルスのenvgeneにより
符号化されたHIV−２の蛋白質に対応する免疫的反応ペ
プチドが合成され、HIV−１またはHIV−２に感染した個
体から採った血清とほぼ100％の効率で反応することが
示されている。抗体の存在を検出する検査に使用した
が、かようなペプチドは、偽陽性または偽陰性反応をを
示さなかった。1987年５月18日に出願された米国特許出
願第051,726号及び第051,727号に公知である。
HTLV−１の免疫的に重要な蛋白質から誘導した合成ペプ
チド抗原を用いた、HTLV−１感染診断のための同様なア
プローチは、ウィルスが地方性のものであると思われる
世界の各地域においては特に有益であると信じられてい
る。
チド抗原を用いた、HTLV−１感染診断のための同様なア
プローチは、ウィルスが地方性のものであると思われる
世界の各地域においては特に有益であると信じられてい
る。
幾つかの論文が、HTLV−１の抗原蛋白質に対応する選択
合成ペプチドの免疫的反応性を示す最新のデータを提示
している。パーカーその他が〈免疫学〉誌（1986年136
号、2393-2397頁）に発表している研究においては、若
干のHTLV−１のgagペプチドが合成された。HTLV−１のp
19蛋白質のＣ端に対応するSP-71に指定されたgagペプチ
ドの中の１つは、放射線同位元素標識免疫定量法（RI
A）において、8/9HTLV−１患者の血清の8/9と反応する
ことが発見された。SP-71のアミノ酸配列は、Pro-Tyr-V
al-Glu-Pro-Thr-Ala-Pro-Gln-Val-Leuである。コーペラ
ンドその他は、〈免疫学〉誌（1986年、137号、6066-60
98頁）に発表されている通り、HTLV−１のenv geneによ
り符号化されたタンパク質生成物の領域に対応する３種
の付加HTLV−１ペプチドを合成した。主要表面糖蛋白質
gp46のＣ端付近に位置するSP-70のペプチドの中の１つ
は、抗原活性を有していたが、しかし、HTLV−１陽性患
者の血清の4/12とだけ反応した。SP-70ペプシドは、塩
基対6066-6098を包合するHTLV−１ゲノムのヌクレオチ
ドの配列により符号化され、そのアミノ酸配列は、Pro-
Pro-Phe-Ser-Leu-Ser-Pro-Val-Pro-Thr-Leu-NH2であ
る。
合成ペプチドの免疫的反応性を示す最新のデータを提示
している。パーカーその他が〈免疫学〉誌（1986年136
号、2393-2397頁）に発表している研究においては、若
干のHTLV−１のgagペプチドが合成された。HTLV−１のp
19蛋白質のＣ端に対応するSP-71に指定されたgagペプチ
ドの中の１つは、放射線同位元素標識免疫定量法（RI
A）において、8/9HTLV−１患者の血清の8/9と反応する
ことが発見された。SP-71のアミノ酸配列は、Pro-Tyr-V
al-Glu-Pro-Thr-Ala-Pro-Gln-Val-Leuである。コーペラ
ンドその他は、〈免疫学〉誌（1986年、137号、6066-60
98頁）に発表されている通り、HTLV−１のenv geneによ
り符号化されたタンパク質生成物の領域に対応する３種
の付加HTLV−１ペプチドを合成した。主要表面糖蛋白質
gp46のＣ端付近に位置するSP-70のペプチドの中の１つ
は、抗原活性を有していたが、しかし、HTLV−１陽性患
者の血清の4/12とだけ反応した。SP-70ペプシドは、塩
基対6066-6098を包合するHTLV−１ゲノムのヌクレオチ
ドの配列により符号化され、そのアミノ酸配列は、Pro-
Pro-Phe-Ser-Leu-Ser-Pro-Val-Pro-Thr-Leu-NH2であ
る。
HTLV−１感染患者の血清と100％の効率で反応するgp46
のような、HTLV−１の免疫的に重要な蛋白質の領域に対
応する合成ペプチド抗原は、診断用ならびにHTLV−１に
対する抗体の生産を誘発するための潜在的免疫成分とし
て、直ちに使用されよう。
のような、HTLV−１の免疫的に重要な蛋白質の領域に対
応する合成ペプチド抗原は、診断用ならびにHTLV−１に
対する抗体の生産を誘発するための潜在的免疫成分とし
て、直ちに使用されよう。
発明の要約 この発明によれば、HTLV−１感染を検出するための選択
性の高い診断方法に有益であり、HTLV−１の外被蛋白質
の免疫優性領域に対応する４種の新しい合成ペプチドが
提供される。
性の高い診断方法に有益であり、HTLV−１の外被蛋白質
の免疫優性領域に対応する４種の新しい合成ペプチドが
提供される。
HTLV−１のenv遺伝子（gene）により符号化された糖蛋
白質の免疫優性領域に対応する新しい合成ペプチド抗原
が発見された。これらのペプチドは、HTLV−１に感染の
疑いのある個体中のHTLV−１の感染により生じたATLお
よびTPSの診断並びに、血液および血液派生成物中のHTL
V−１被爆スクリーニングを高信頼性と特異性で実施す
るのに有効である。
白質の免疫優性領域に対応する新しい合成ペプチド抗原
が発見された。これらのペプチドは、HTLV−１に感染の
疑いのある個体中のHTLV−１の感染により生じたATLお
よびTPSの診断並びに、血液および血液派生成物中のHTL
V−１被爆スクリーニングを高信頼性と特異性で実施す
るのに有効である。
前記ペプチドは、血液、血清又は他の試料中のHTLV−１
に対する抗体を検出する方法において使用出来る。検出
法は、サンプルを、サンプル中に存在し得るHTLV−１の
特異抗体とペプチド間に免疫複合体が形成され得るよう
な条件下で、サンプルを少なくとも１個のペプチド抗原
と接触させることを含んでいる。適当な検出手段により
複合体の生成を測定しサンプル中のHTLV−１に対する抗
体の有無を表示する。
に対する抗体を検出する方法において使用出来る。検出
法は、サンプルを、サンプル中に存在し得るHTLV−１の
特異抗体とペプチド間に免疫複合体が形成され得るよう
な条件下で、サンプルを少なくとも１個のペプチド抗原
と接触させることを含んでいる。適当な検出手段により
複合体の生成を測定しサンプル中のHTLV−１に対する抗
体の有無を表示する。
新しいペプチドは、HTLV−１の抗原に対する特異性抗体
が動物及び人の体内で作り出されるように誘発する組成
物に使用される。かような組成には、HTLV−１感染に対
する免疫化用ワクチンを含む。
が動物及び人の体内で作り出されるように誘発する組成
物に使用される。かような組成には、HTLV−１感染に対
する免疫化用ワクチンを含む。
本発明は、少なくとも１つの新しいペプチドを動物及び
人に投与することを含む、HTLV−１の抗原に対する抗体
の生産誘発方法を含んでいる。
人に投与することを含む、HTLV−１の抗原に対する抗体
の生産誘発方法を含んでいる。
発明の説明 本発明は、HTLV−１のenv gene（遺伝子）で符号化した
外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４種のペプチド
gpAHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１およびgpHHTLV
−１を、合成し、HTLV−１の陽性血清試料への免疫反応
性を試験し提供する。これらの新しいペプチドは、HTLV
−１の感染又はウィルスの予備感染を診断するための試
験用、並びに、HTLV−１に対する抗体を動物および人の
体内での生産を誘発させる組成中の免疫原として有益で
ある。本発明により閉じ込められたペプチドは、HTLV−
１の特異性抗体と反応可能な連続（線）エピトープより
成る配列を内容とするアミノ酸の配列を有するオリゴペ
プチドより成る。
外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４種のペプチド
gpAHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１およびgpHHTLV
−１を、合成し、HTLV−１の陽性血清試料への免疫反応
性を試験し提供する。これらの新しいペプチドは、HTLV
−１の感染又はウィルスの予備感染を診断するための試
験用、並びに、HTLV−１に対する抗体を動物および人の
体内での生産を誘発させる組成中の免疫原として有益で
ある。本発明により閉じ込められたペプチドは、HTLV−
１の特異性抗体と反応可能な連続（線）エピトープより
成る配列を内容とするアミノ酸の配列を有するオリゴペ
プチドより成る。
４種のペプチドは、HTLV−１の外被糖蛋白質に対応する
Ａ−Ｈで指定する８種の異なる合成ペプチドから選択さ
れた。これらのペプチドは、有効なHIV−１またはHIV−
２ペプチドの選択と同様な種々の判定基準を用いて、例
えば、システイン残分に近接たは含有（比較的に不変な
関与生体からの同種蛋白質中におけるシステインの位
置）および糖鎖形成部位への近接により、選定された。
かようなペプチド選択基準は、潜在的に有用でないペプ
チドを排除することが出来、潜在的に有用なペプチドを
示すことが出来るが、さらに、８種のペプチドのいずれ
がHTLV−１に陽性な血清試料に対し免疫反応性を示すか
を同定するために試験を要した。８種のペプチドは、Ａ
からＨの優先順位で合成され、Ｆペプチドが前記基準に
より最小の抗原であると認められた。ＤからＦまでのペ
プチドは、既知のHTLV−１陽性血清と反応可能であると
は認められなかった。ペプチドＡ、Ｂ、Ｃ及びＨは、HT
LV−１の感染診断に有効であることが判明し、各々、gp
AHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１およびgPHHTLV−
１と命名した。
Ａ−Ｈで指定する８種の異なる合成ペプチドから選択さ
れた。これらのペプチドは、有効なHIV−１またはHIV−
２ペプチドの選択と同様な種々の判定基準を用いて、例
えば、システイン残分に近接たは含有（比較的に不変な
関与生体からの同種蛋白質中におけるシステインの位
置）および糖鎖形成部位への近接により、選定された。
かようなペプチド選択基準は、潜在的に有用でないペプ
チドを排除することが出来、潜在的に有用なペプチドを
示すことが出来るが、さらに、８種のペプチドのいずれ
がHTLV−１に陽性な血清試料に対し免疫反応性を示すか
を同定するために試験を要した。８種のペプチドは、Ａ
からＨの優先順位で合成され、Ｆペプチドが前記基準に
より最小の抗原であると認められた。ＤからＦまでのペ
プチドは、既知のHTLV−１陽性血清と反応可能であると
は認められなかった。ペプチドＡ、Ｂ、Ｃ及びＨは、HT
LV−１の感染診断に有効であることが判明し、各々、gp
AHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１およびgPHHTLV−
１と命名した。
本発明は、かように、HTLV−１のenv gene（遺伝子）で
符号化た外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４つの
免疫的に反応可能なペプチドと、機能的に同等であり該
ペプチドの抗原特性に重大な影響を与えない変種を含ん
でいる。前記ペプチドは、公知の固相ペプチド合成技術
で合成した。例えば、メリーフィールドおよびバラニー
著〈ペプチド：分析、合成、生物学〉（1980）（グロス
およびメイネンホーファー編集、ニューヨーク、アカデ
ミープレス社）の第１巻第１章に記載されている。この
合成では、また、上記ペプチドのアミノまたはカルボキ
シル基末端に基となる蛋白質配列に対応していない１個
または２個のアミノ酸を付加することができる。かよう
な余剰アミノ酸は、上記ペプチドを相互に結合させた
り、他のペプチドに結合させたり、また、大きな担体蛋
白質または固体支持体に結合させるのに有用である。こ
れらの目的に役立つアミノ酸には、チロシン、リシン、
グルタミン酸、アスパラギン酸、システィンおよびそれ
らの誘導体が含まれる。それらに加え蛋白質の修飾技
術、例えば、NH2のアセルチル化、COOH末端のアミド化
は、上記ペプチドを他の蛋白質またはペプチド分子また
は支持体に結合する付加的手段として用いることができ
る。
符号化た外被糖蛋白質の免疫優性領域に対応する４つの
免疫的に反応可能なペプチドと、機能的に同等であり該
ペプチドの抗原特性に重大な影響を与えない変種を含ん
でいる。前記ペプチドは、公知の固相ペプチド合成技術
で合成した。例えば、メリーフィールドおよびバラニー
著〈ペプチド：分析、合成、生物学〉（1980）（グロス
およびメイネンホーファー編集、ニューヨーク、アカデ
ミープレス社）の第１巻第１章に記載されている。この
合成では、また、上記ペプチドのアミノまたはカルボキ
シル基末端に基となる蛋白質配列に対応していない１個
または２個のアミノ酸を付加することができる。かよう
な余剰アミノ酸は、上記ペプチドを相互に結合させた
り、他のペプチドに結合させたり、また、大きな担体蛋
白質または固体支持体に結合させるのに有用である。こ
れらの目的に役立つアミノ酸には、チロシン、リシン、
グルタミン酸、アスパラギン酸、システィンおよびそれ
らの誘導体が含まれる。それらに加え蛋白質の修飾技
術、例えば、NH2のアセルチル化、COOH末端のアミド化
は、上記ペプチドを他の蛋白質またはペプチド分子また
は支持体に結合する付加的手段として用いることができ
る。
HTLV−１の外被糖蛋白質配列に対応する新しいペプチド
について以下に記述する。
について以下に記述する。
gpAHTLV−１ X-Gly-Leu-Asp-Leu-Leu-Phe-Trp-Glu-Gln-Gly-Gly-Leu-
Cys-Lys-Ala-Leu-Gln-Glu-Gln-Cys-Arg-Phe-Pro-Asn-Y-
Z ここで、Ｘは、ペプチドのアミノ末端NH2群のＨまたは
ペプチドのアミノ末端NH2群に結合した付加アミノ酸の
いずれかであり、該付加アミノ酸は、担体蛋白質又は他
の担体とのペプチドの結合を促進するために選択された
ものである。Ｙは、存在しないか、または、Cysであ
り、Ｚは、OHまたはNH2である。
Cys-Lys-Ala-Leu-Gln-Glu-Gln-Cys-Arg-Phe-Pro-Asn-Y-
Z ここで、Ｘは、ペプチドのアミノ末端NH2群のＨまたは
ペプチドのアミノ末端NH2群に結合した付加アミノ酸の
いずれかであり、該付加アミノ酸は、担体蛋白質又は他
の担体とのペプチドの結合を促進するために選択された
ものである。Ｙは、存在しないか、または、Cysであ
り、Ｚは、OHまたはNH2である。
ペプチドgpAHTLV−１は、env遺伝子の領域内にある塩基
対（bp）6342から6413HTLV−１（セイキその他による番
号：米国科学アカデミー会報（1983）80号、3618-3622
頁）を含むHTLV−１のゲノムのヌクレイド（nucleotid
e）配列により符号化されている。ＸがＨ、ＹがCysで、
ＺがOHであるペプチドgpAHTLV−１が特に好適である。
対（bp）6342から6413HTLV−１（セイキその他による番
号：米国科学アカデミー会報（1983）80号、3618-3622
頁）を含むHTLV−１のゲノムのヌクレイド（nucleotid
e）配列により符号化されている。ＸがＨ、ＹがCysで、
ＺがOHであるペプチドgpAHTLV−１が特に好適である。
gpBHTLV−１ ペプチドgpBHTLV−１は、HTLV−１のゲノムのほぼbp601
8-6086により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る：X-Trp-Thr-His-Cys-Phe-Asp-Pro-Gln-Ile-Gln-Ala-
Ile-Val-Ser-Ser-Pro-Cys-His-Asn-Ile-Leu-y-Zここで
Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じである。Ｘ
がＨ、ＹがCysでＺがOHであるペプチドgpBHTLV−１が特
に好適である。
8-6086により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る：X-Trp-Thr-His-Cys-Phe-Asp-Pro-Gln-Ile-Gln-Ala-
Ile-Val-Ser-Ser-Pro-Cys-His-Asn-Ile-Leu-y-Zここで
Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じである。Ｘ
がＨ、ＹがCysでＺがOHであるペプチドgpBHTLV−１が特
に好適である。
gpCHTLV−１ ペプチドgpCHTLV−１は、HTLV−１のゲノムのほぼbp586
8-5930により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る：X-Tyr-Thr-Cys-Ile-Val-Cys-Ile-Asp-Arg-Ala-Ser-
Leu-Ser-Thr-Trp-His-Val-Leu-Tyr-Pro-Y-Z ここで、Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じで
ある。
8-5930により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る：X-Tyr-Thr-Cys-Ile-Val-Cys-Ile-Asp-Arg-Ala-Ser-
Leu-Ser-Thr-Trp-His-Val-Leu-Tyr-Pro-Y-Z ここで、Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じで
ある。
ＸがＨ、ＹがCysでＺがOHであるペプチドgpCHTLV−１が
特に好適である。
特に好適である。
gpHHTLV−１ ペプチドgpHHTLV−１は、HTLV−１のゲノムのほぼbp572
7-5798により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る。X-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-
Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Il
e-Y-Z ここで、Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じで
ある。
7-5798により符号化された外被蛋白質の領域に対応す
る。X-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-
Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Il
e-Y-Z ここで、Ｘ、ＹおよびＺの定義は、前記の場合と同じで
ある。
これらのペプチドは、HTLV−１またはHTLV−１を伴う抗
原に対する抗体の検出法において使用することが出来
る。該ペプチドを使用しサンプル中のHTLV−１の特異性
抗体の存在を検出する方法は、好ましくは、サンプル中
に存在するかも知れないHTLV−１に対する抗体とペプチ
ドとの間に免疫複合体が形成され得る様な条件下におい
て、サンプルを少なくとも１個のペプチドと接触させる
ことを含む。HTLV−１に対する抗体が存在することを示
す免疫吻合体が形成されたならば、次に、適当な方法に
より検出し測定する。
原に対する抗体の検出法において使用することが出来
る。該ペプチドを使用しサンプル中のHTLV−１の特異性
抗体の存在を検出する方法は、好ましくは、サンプル中
に存在するかも知れないHTLV−１に対する抗体とペプチ
ドとの間に免疫複合体が形成され得る様な条件下におい
て、サンプルを少なくとも１個のペプチドと接触させる
ことを含む。HTLV−１に対する抗体が存在することを示
す免疫吻合体が形成されたならば、次に、適当な方法に
より検出し測定する。
かような方法は、就中、ラジオイムノアッセイ（RIA;ra
dioimmunoassays）、エライサ、ウェスタンブロット分
析のような同種及び異種結合免疫学的検定法を含む。さ
らに、新しいペプチドを使用したアッセイプロトコル
は、競合および非競合結合分析の実施を考慮する。
dioimmunoassays）、エライサ、ウェスタンブロット分
析のような同種及び異種結合免疫学的検定法を含む。さ
らに、新しいペプチドを使用したアッセイプロトコル
は、競合および非競合結合分析の実施を考慮する。
ペプチドは、使用される分析法の種類に従い、標識（信
号発信）されるか、または、標識されない。ペプチドに
結合され得る標識は、技術的に公知のものであり、就
中、酵素、放射線核種、蛍光および色原体物質、補助因
子、ビオチン／アビジン、コロイド金および磁粉を含
む。新しいペプチドの修飾には、公知の手段による担体
蛋白質、またはペプチドまたは公知の保持体への結合
を、例えば、ポリスチレンまたはポリビニール製マイク
ロタイタープレート、ガラス管またはガラス玉およびク
ロマトグラフ用保持体、例えば、紙、セルローズとセル
ローズ派生品およびシリカとの結合を考慮する。
号発信）されるか、または、標識されない。ペプチドに
結合され得る標識は、技術的に公知のものであり、就
中、酵素、放射線核種、蛍光および色原体物質、補助因
子、ビオチン／アビジン、コロイド金および磁粉を含
む。新しいペプチドの修飾には、公知の手段による担体
蛋白質、またはペプチドまたは公知の保持体への結合
を、例えば、ポリスチレンまたはポリビニール製マイク
ロタイタープレート、ガラス管またはガラス玉およびク
ロマトグラフ用保持体、例えば、紙、セルローズとセル
ローズ派生品およびシリカとの結合を考慮する。
好適な検定技術、特に、患者の血清、血液及び血液派生
物の大規模な臨床スクリーニングには、エライサとウェ
スタンプロット法があり、エライサ試験が特に好まし
い。前記のペプチドを用いたエライサ試験は、他の抗原
の検出に広く用いられている方法、例えば、ヒト細胞誘
導、組み換えDNA誘導または合成抗原蛋白質またはHIV−
１蛋白質を用いるエイズウィルスへの被爆測定試験に基
づいている。これらの検定方法における試薬として使用
するために、本発明によるペプチドは、マイクロタイタ
ーのウェルの内面に好便に貼付けられる。ペプチドは、
マイクロタイタのウェルに直接貼り付けてもよい。しか
し、ペプチドを加える前に前記ウェルをポリリシンで前
処理することにより、ウェルにペプチドを最大に結着出
来ることが判った。さらに、新しいペプチドを、公知の
手段で、BSAのような担体蛋白質に共有的に付着出来、
ウェル被覆用の複合物が得られる。一般的に、前記ペプ
チドは、10-100μg/mlの範囲の濃度で被覆用に使用され
たが、しかし、検定を成功させるには、500μg/mlのペ
プチドが必要とされよう。
物の大規模な臨床スクリーニングには、エライサとウェ
スタンプロット法があり、エライサ試験が特に好まし
い。前記のペプチドを用いたエライサ試験は、他の抗原
の検出に広く用いられている方法、例えば、ヒト細胞誘
導、組み換えDNA誘導または合成抗原蛋白質またはHIV−
１蛋白質を用いるエイズウィルスへの被爆測定試験に基
づいている。これらの検定方法における試薬として使用
するために、本発明によるペプチドは、マイクロタイタ
ーのウェルの内面に好便に貼付けられる。ペプチドは、
マイクロタイタのウェルに直接貼り付けてもよい。しか
し、ペプチドを加える前に前記ウェルをポリリシンで前
処理することにより、ウェルにペプチドを最大に結着出
来ることが判った。さらに、新しいペプチドを、公知の
手段で、BSAのような担体蛋白質に共有的に付着出来、
ウェル被覆用の複合物が得られる。一般的に、前記ペプ
チドは、10-100μg/mlの範囲の濃度で被覆用に使用され
たが、しかし、検定を成功させるには、500μg/mlのペ
プチドが必要とされよう。
次に、サンプルを、ペプチドを塗布したウェルに加え
る。サンプル中にHTLV−１に対する抗体が存在していれ
ば、免疫複合体が形成される。信号発生手段を加えて、
複合体の形成検出を助けるようにしてもよい。検出可能
な信号は、サンプル中にHTLV−１の特異抗体が存在して
いれば発生する。
る。サンプル中にHTLV−１に対する抗体が存在していれ
ば、免疫複合体が形成される。信号発生手段を加えて、
複合体の形成検出を助けるようにしてもよい。検出可能
な信号は、サンプル中にHTLV−１の特異抗体が存在して
いれば発生する。
この発明によるペプチドは、動物及び人の体内にHTLV−
１に対する抗体の生産を誘発するために使用する、ワク
チンを含む組成物に調製することが出来る。かような組
成物の調製のために、gpAHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCH
TLV−１、gpHHTLV−１うちの、少なくとも１つのペプチ
ドを免疫的に有効な量を、動物及び人への投与に適し生
理的に摂取可能な担体に添加する。前記のペプチドは、
共有結合的に、ペプチド同志互いに、また他のペプチド
に、蛋白質担体または他の担体に付加出来、リポソーム
または他の小胞に混入出来、または、ワクチン技術にお
いて公知のように、抗原性補強剤または吸着剤と複合化
出来る。二者択一的には、ペプチドは、上記と複合せ
ず、動物及び人への投与に適した通常生活食塩溶液また
は緩衝化合物のような生理的に摂取可能な担体にただ添
加することが出来る。
１に対する抗体の生産を誘発するために使用する、ワク
チンを含む組成物に調製することが出来る。かような組
成物の調製のために、gpAHTLV−１、gpBHTLV−１、gpCH
TLV−１、gpHHTLV−１うちの、少なくとも１つのペプチ
ドを免疫的に有効な量を、動物及び人への投与に適し生
理的に摂取可能な担体に添加する。前記のペプチドは、
共有結合的に、ペプチド同志互いに、また他のペプチド
に、蛋白質担体または他の担体に付加出来、リポソーム
または他の小胞に混入出来、または、ワクチン技術にお
いて公知のように、抗原性補強剤または吸着剤と複合化
出来る。二者択一的には、ペプチドは、上記と複合せ
ず、動物及び人への投与に適した通常生活食塩溶液また
は緩衝化合物のような生理的に摂取可能な担体にただ添
加することが出来る。
抗体誘発用の全ての免疫組成物につき、本発明によるペ
プチドの免疫的に有効な量を決定しなければならない。
考慮すべき要素は、天然ペプチドの免疫原性、ペプチド
は抗原性補強剤または担体蛋白質または他の担体と複合
するか或は共有的に付着するのか、組成物の場合の投与
経路、即ち、静脈内、筋肉内、皮下等の投与経路、およ
び投与すべき免疫量の回数が含まれる。かような要素
は、ワクチン技術において公知であり、免疫学者であれ
ば、かような決定は実験を要せずによくなり得よう。
プチドの免疫的に有効な量を決定しなければならない。
考慮すべき要素は、天然ペプチドの免疫原性、ペプチド
は抗原性補強剤または担体蛋白質または他の担体と複合
するか或は共有的に付着するのか、組成物の場合の投与
経路、即ち、静脈内、筋肉内、皮下等の投与経路、およ
び投与すべき免疫量の回数が含まれる。かような要素
は、ワクチン技術において公知であり、免疫学者であれ
ば、かような決定は実験を要せずによくなり得よう。
本発明は、以下の実施例をもってさらに説明するが、た
だし、実施例は、発明の範囲を制限するものではない。
だし、実施例は、発明の範囲を制限するものではない。
実施例１ アプライドバイオシステム社製430A型ペプチド合成装置
を、すべてのペプチドの合成に使用した。各々の合成に
は、ｐ−methylbenzylhydrylamine（ｐ−メチルベンジ
ルヒドロキシルアミン）の固相支持樹脂（Peptides Int
ernational,Louisvile,KY）を使用した。ペプチドは、
アプライドバイオシステム社の430A型ペプチド合成装置
のユーザーマニュアル（1986）に従い、合成した。
を、すべてのペプチドの合成に使用した。各々の合成に
は、ｐ−methylbenzylhydrylamine（ｐ−メチルベンジ
ルヒドロキシルアミン）の固相支持樹脂（Peptides Int
ernational,Louisvile,KY）を使用した。ペプチドは、
アプライドバイオシステム社の430A型ペプチド合成装置
のユーザーマニュアル（1986）に従い、合成した。
合成に使用した全てのアミノ酸は、α−NH2基を保護す
るｔ−ブチルカルボニル基（ｔ−Boc）を含んでおり、
スイス国のノババイオケム株式会社より入手した。アミ
ノ酸は、反応側鎖群を有し、不必要で好ましくない側鎖
反応を阻止するために追加基を含んでいた。全てのペプ
チドの合成に使用した個別に保護されたアミノ酸を第１
表に記載してある。
るｔ−ブチルカルボニル基（ｔ−Boc）を含んでおり、
スイス国のノババイオケム株式会社より入手した。アミ
ノ酸は、反応側鎖群を有し、不必要で好ましくない側鎖
反応を阻止するために追加基を含んでいた。全てのペプ
チドの合成に使用した個別に保護されたアミノ酸を第１
表に記載してある。
個々の合成終了後、10％アニソールと10％硫化ジメチル
を排除剤として組合わせた、無水フッ素酸（HF）を用い
０℃の温度で処理することにより、保護群を合成ペプチ
ドから除去し、ペプチドを固相支持樹脂から開裂した。
開裂後、サンプル中のHFをN2を流して排除し、さらに、
０℃の温度でサンプルを真空にさらし残存HFを除去し
た。トリフルオル酢酸（TFA）で処理し、樹脂からペプ
チドを抽出し、次に、TFAを室温で蒸発させ除去した。T
FAを除去してから、ペプチドを沈殿させ、無水エーテル
で洗浄した。特定の検定に使用する前に、必要に応じ、
ペプチドを逆相高性能液体クロマトグラフ（HPLC）を使
用し純化することが出来る。かような純化に特に適した
カラムは、ペプチド溶離勾配の水（TFA）−アセトニト
リル（TFA）を使用した逆相Vydak C−18カラムである。
を排除剤として組合わせた、無水フッ素酸（HF）を用い
０℃の温度で処理することにより、保護群を合成ペプチ
ドから除去し、ペプチドを固相支持樹脂から開裂した。
開裂後、サンプル中のHFをN2を流して排除し、さらに、
０℃の温度でサンプルを真空にさらし残存HFを除去し
た。トリフルオル酢酸（TFA）で処理し、樹脂からペプ
チドを抽出し、次に、TFAを室温で蒸発させ除去した。T
FAを除去してから、ペプチドを沈殿させ、無水エーテル
で洗浄した。特定の検定に使用する前に、必要に応じ、
ペプチドを逆相高性能液体クロマトグラフ（HPLC）を使
用し純化することが出来る。かような純化に特に適した
カラムは、ペプチド溶離勾配の水（TFA）−アセトニト
リル（TFA）を使用した逆相Vydak C−18カラムである。
第１表 ペプチド合成に使用せるアミノ酸 Boc-Ala-OH Boc-Arg(Tos)-OH Boc-Asn-OH Boc-Asp-(OBzl)-OH Boc-Cys-(pMeOBzl)-Oh Boc-Glu-(OBzl)-OH Boc-Gln-OH Boc-Gly-OH Boc-His(Tos)-OH Boc-Ile-OH・1/2 H2O Boc-Leu-OH・H2O Boc-Lys(2-Cl-Z)-OH (cryst.) Boc-Met-OH Boc-Phe-OH Boc-Pro-OH Boc-Ser(Bzl)-OH・DCHA Boc-Thr(Bzl)-OH Boc-Trp(Formyl)-OH Boc-Tyr(2-Br-Z)-OH Boc-Val-OH ただし、 Tos＝トシルまたはｐ−トルエンスルホン酸 OBzl＝ベンジルオキシ pMeOBzl＝ｐ−メチルベンジルオキシ ２−Cl−Ｚ＝塩化カルボベンゾキシ ２−Br−Ｚ＝臭化カルボベンゾキシ である。
実施例２ Gly-Leu-Asp-Leu-Leu-Phe-Trp-Glu-Gln-Gly-Gly-Leu-Cy
s-Lys-Ala-Leu-Gln-Glu-Gln-Cys-Arg-Phe-Pro-Asn-Cys-
OHのアミノ酸配列を有するペプチドgpAHTLV−１を実施
例１に記述のごとく合成し、エライサ試験に使用し、そ
の免疫反応を測定した。
s-Lys-Ala-Leu-Gln-Glu-Gln-Cys-Arg-Phe-Pro-Asn-Cys-
OHのアミノ酸配列を有するペプチドgpAHTLV−１を実施
例１に記述のごとく合成し、エライサ試験に使用し、そ
の免疫反応を測定した。
1mg/mlの濃度でポリリシンをマイクロタイタープレート
に加え、30分間培養した。次に、このポリリシンを捨
て、ペプチドgpAHTLV−１を10-100μg/mlの濃度でウェ
ル（穴）に加え被覆した。ペプチドがウェルに結着する
まで十分な時間培養してからペプチド溶液を除去し、ウ
ェルへのペプチドの付着を安定させるためにグルタルア
ルデヒド溶液を15分間加えた。次に、グルタルアルデヒ
ド溶液を除去し、緩衝液でウェルを洗浄し、グルシンと
ウシの血清アルバミン（BSA）の混合物を、ウェル内の
非結着部を遮断しエライサ試験それ自身中の疑性反応を
最小にするために添加した。最終洗浄段階を経て、前記
プレートは使用準備が完了した。この準備の出来たマイ
ロタイタープレートは、ウェルに被覆したペプチドgpAH
TLV−１の抗原活性を低下させることなく数ケ月間保存
することが出来た。
に加え、30分間培養した。次に、このポリリシンを捨
て、ペプチドgpAHTLV−１を10-100μg/mlの濃度でウェ
ル（穴）に加え被覆した。ペプチドがウェルに結着する
まで十分な時間培養してからペプチド溶液を除去し、ウ
ェルへのペプチドの付着を安定させるためにグルタルア
ルデヒド溶液を15分間加えた。次に、グルタルアルデヒ
ド溶液を除去し、緩衝液でウェルを洗浄し、グルシンと
ウシの血清アルバミン（BSA）の混合物を、ウェル内の
非結着部を遮断しエライサ試験それ自身中の疑性反応を
最小にするために添加した。最終洗浄段階を経て、前記
プレートは使用準備が完了した。この準備の出来たマイ
ロタイタープレートは、ウェルに被覆したペプチドgpAH
TLV−１の抗原活性を低下させることなく数ケ月間保存
することが出来た。
公知のエライザ法の便法を、前記の通り準備したマイク
ロタイタープレートを使用して実施した。ポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート（Tween 20）を0.05
％、BSAを１％含有する食塩加燐酸緩衝液（PBS）に1:50
の割合で希釈した、各個体から採取した血清サンプル
を、各ウェルに加え、加湿した雰囲気中に37℃の温度で
90分間培養した。次に、プレートから希釈血清サンプル
を除去し、ウェルを、Tween 20を0.05％含むPBSで３回
洗浄した。次に、接合抗ヒトIg抗体を、ウェルに加え、
90分間培養した。接合抗体が、山羊またはウサギの中に
生じ、ヒト（人）の免疫グロプリンIgG、IgMの軽鎖また
はその組合せに対し特異であった。エライサには、Twee
n 20を0.05％、BSAを１％含有しているPBSに使用するた
めに1:500に希釈した（Dakopattsの）アルカリ性フォス
ファターゼ接合抗ヒトIgGをより好ましく使用した。接
合体を、結合ヒト抗体と反応するに十分な時間培養して
から、プレートを前記のように３回洗浄した。抗原とし
て使用したペプチドと反応する、即ち、陽性反応する、
ヒト血清中のHTLV−１に対する抗体を検出するために、
着色生成物を生じさせるために抗ヒトIgに付着されたア
ルカリ性フォスファターゼ酵素により開裂させた、色腹
体基質、アルカリ性フォスファターゼ基質（Sigma Cat.
No.104 tablets）を炭酸ナトリウム／塩化マグネシウム
（MgCl）緩衝液に溶解し１μg/mlの濃度に調節して加え
た。室温で約40分間培養後、抗原と反応する抗体がサン
プル中に存在することを示す陽性反応が認められた。陽
性反応を示す各ウェル中の黄色、オレンジ色から赤みが
かった茶褐色までの色は、分光光度計の読み405nmとし
て反応が数量化された。分光光度計の読みは、背景反応
に対し補正調節された。
ロタイタープレートを使用して実施した。ポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート（Tween 20）を0.05
％、BSAを１％含有する食塩加燐酸緩衝液（PBS）に1:50
の割合で希釈した、各個体から採取した血清サンプル
を、各ウェルに加え、加湿した雰囲気中に37℃の温度で
90分間培養した。次に、プレートから希釈血清サンプル
を除去し、ウェルを、Tween 20を0.05％含むPBSで３回
洗浄した。次に、接合抗ヒトIg抗体を、ウェルに加え、
90分間培養した。接合抗体が、山羊またはウサギの中に
生じ、ヒト（人）の免疫グロプリンIgG、IgMの軽鎖また
はその組合せに対し特異であった。エライサには、Twee
n 20を0.05％、BSAを１％含有しているPBSに使用するた
めに1:500に希釈した（Dakopattsの）アルカリ性フォス
ファターゼ接合抗ヒトIgGをより好ましく使用した。接
合体を、結合ヒト抗体と反応するに十分な時間培養して
から、プレートを前記のように３回洗浄した。抗原とし
て使用したペプチドと反応する、即ち、陽性反応する、
ヒト血清中のHTLV−１に対する抗体を検出するために、
着色生成物を生じさせるために抗ヒトIgに付着されたア
ルカリ性フォスファターゼ酵素により開裂させた、色腹
体基質、アルカリ性フォスファターゼ基質（Sigma Cat.
No.104 tablets）を炭酸ナトリウム／塩化マグネシウム
（MgCl）緩衝液に溶解し１μg/mlの濃度に調節して加え
た。室温で約40分間培養後、抗原と反応する抗体がサン
プル中に存在することを示す陽性反応が認められた。陽
性反応を示す各ウェル中の黄色、オレンジ色から赤みが
かった茶褐色までの色は、分光光度計の読み405nmとし
て反応が数量化された。分光光度計の読みは、背景反応
に対し補正調節された。
実施例３ 実施例１に記述のごとく合成したペプチドgpAHTLV−
１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１は、実施例２に記述のエ
ライサ試験と平行して、HTLV−１に対する抗体に陽性な
６つの血清サンプル、HIV−１に対する抗体に陽性な８
つの血清サンプル、HIV−1/HIV−２に対し陰性な10の献
血者血清サンプルにつきエライサ法で検定された。第２
表に示されている様に、HTLVに対し陽性が確認されてい
る６血清サンプルのすべてがペプチドgpAHTLV−１と反
応し、陽性が確認されている６血清サンプルのうちの５
サンプルがgpBHTLV−１と反応し、陽性が確認されてい
る６血清サンプルのうちの５サンプルがgpCHTLV−１と
反応した。表は、また、HIV−１に対し陽性である血清
サンプルおよび陰性である献血者血清サンプルは、ひと
つとして、前記ペプチドと反応しなかったことを示して
いる。
１、gpBHTLV−１、gpCHTLV−１は、実施例２に記述のエ
ライサ試験と平行して、HTLV−１に対する抗体に陽性な
６つの血清サンプル、HIV−１に対する抗体に陽性な８
つの血清サンプル、HIV−1/HIV−２に対し陰性な10の献
血者血清サンプルにつきエライサ法で検定された。第２
表に示されている様に、HTLVに対し陽性が確認されてい
る６血清サンプルのすべてがペプチドgpAHTLV−１と反
応し、陽性が確認されている６血清サンプルのうちの５
サンプルがgpBHTLV−１と反応し、陽性が確認されてい
る６血清サンプルのうちの５サンプルがgpCHTLV−１と
反応した。表は、また、HIV−１に対し陽性である血清
サンプルおよび陰性である献血者血清サンプルは、ひと
つとして、前記ペプチドと反応しなかったことを示して
いる。
実施例４ Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-Pro-Thr-Ala-Pr
o-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Cys-
OHのアミノ酸配列を有するペプチドgpHHTLV−１を実施
例１に記述のごとく合成し、実施例２に記述のごとく、
エライサ試験に使用し、確認せる日本人のHTLV血清およ
び、米国及び欧州の成人Ｔ細胞白血病、熱帯性不全対麻
痺（TSP）患者より採取した血清および脳脊髄液（CSF）
に対する免疫反応性を測定した。第３表に示すように、
全ての血清は、HTLV−１に関し陽性であることが確認さ
れている。
o-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-Asp-His-Ile-Cys-
OHのアミノ酸配列を有するペプチドgpHHTLV−１を実施
例１に記述のごとく合成し、実施例２に記述のごとく、
エライサ試験に使用し、確認せる日本人のHTLV血清およ
び、米国及び欧州の成人Ｔ細胞白血病、熱帯性不全対麻
痺（TSP）患者より採取した血清および脳脊髄液（CSF）
に対する免疫反応性を測定した。第３表に示すように、
全ての血清は、HTLV−１に関し陽性であることが確認さ
れている。
第３表 血清 エライサにおいて陽性 日本のHTLV−１血清 22/32（69％） ATL CSF 1/1 TSP 血清 4/4 TSP CSF 4/4 CSF真陰性細胞 エライサにおいて陽性 28 献血者血清 0/28 30 HIV−１陽性血清 0/30 8 HIV−２陽性血清 0/8 4 移植宿主の血清 0/4 4 白血病患者の血清 0/4 4 EBウィルスIgM陽性血清 0/4 4 リウマチ因子の陽性血清 0/4 8 CSF（無菌髄膜炎） 0/8 実施例５ 日本のHTLV−１血清に関する吸収着値を、gpHHTLV−１
を用いエライサ試験、デュポンHTLV−１エライサおよび
ウェスタン法で測定した。血清はすべて、1/50に希釈し
た。結果を第４表に示す。
を用いエライサ試験、デュポンHTLV−１エライサおよび
ウェスタン法で測定した。血清はすべて、1/50に希釈し
た。結果を第４表に示す。
実施例６ ATLおよびTSPの患者より採取した血清と脳脊髄液（CS
F）に関する吸収値を、血清を1/50に、CSFを1/20に希釈
し、gpHHTLV−１を用い、エライサ検定法で測定した。
結果を第５表に示す。
F）に関する吸収値を、血清を1/50に、CSFを1/20に希釈
し、gpHHTLV−１を用い、エライサ検定法で測定した。
結果を第５表に示す。
第５表 血清／CSF gpHHTLV-1 ラエイサ 陰性献血者血清 39511 0.045 39511 0.038 39512 0.015 39512 0.020 39513 0.020 39513 0.023 neg CSF ８ 0.033 19 0.039 21 0.056 TSP/ATL血清 TSP-BAR 0.138 TSP-SEPH 0.226 TSP-LER 0.275 TSP-SOR 0.151 ATL-SIE 0.080 ATL-LAUT 0.077 TSP/ATL CSF TSP-BAR 0.275 TSP-SEPH 0.263 TSP-LER 0.369 TSP-SOR 0.418 TSP-SIE 0.027 前記の結果より明らかな通り、HTLV−１のenv遺伝子に
より符号化された免疫的に重要な外被糖蛋白質の領域に
対応する新しい合成ペプチドgpAHTLV−１、gpBHTLV−
１、gpCHTLV−１およびgpHHTLV−１は、HTLV−１に対す
る抗体の存在を検出し選択的に検定するためのユニーク
な試薬を提供する。
より符号化された免疫的に重要な外被糖蛋白質の領域に
対応する新しい合成ペプチドgpAHTLV−１、gpBHTLV−
１、gpCHTLV−１およびgpHHTLV−１は、HTLV−１に対す
る抗体の存在を検出し選択的に検定するためのユニーク
な試薬を提供する。
フロントページの続き (72)発明者 ヤンション，スチク スウェーデン国、エス‐411 27 エーテ ボリ、フェーレニンシュガータン 33 (72)発明者 ホラール，ペーテル スウェーデン国、エス‐412 66 エーテ ボリ、オランゲリガータン 21ビー (56)参考文献 特開 昭60−28993（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−142925（ＪＰ，Ａ) 「ＳＣＩＥＮＣＥ」270，Ｐ．453〜455 （1985)
Claims (9)
- 【請求項１】X-Trp-Thr-His-Cys-Phe-Asp-Pro-Gln-Ile-
Gln-Ala-Ile-Val-Ser-Ser-Pro-Cys-His-Asn-Ser-Leu-Il
e-Leu-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチド。 - 【請求項２】X-Tyr-Thr-Cys-Ile-Val-Cys-Ile-Asp-Arg-
Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Trp-His-Val-Leu-Tyr-Ser-Pro-Y-
Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチド。 - 【請求項３】X-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-
Pro-Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-As
p-His-Ile-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチド。 - 【請求項４】X-Trp-Thr-His-Cys-Phe-Asp-Pro-Gln-Ile-
Gln-Ala-Ile-Val-Ser-Ser-Pro-Cys-His-Asn-Ser-Leu-Il
e-Leu-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドと、サンプルを、該サ
ンプル中にHTLV−１に対する抗体が存在すれば、該抗体
と前記ペプチドとの間に免疫複合体が形成される条件下
において接触させ、前記サンプル中のHTLV−１に対する
抗体の存在を決定するために、前記免疫複合体の形成を
測定することよりなる、サンプル中のHTLV−１に対する
抗体を検出する方法。 - 【請求項５】X-Tyr-Thr-Cys-Ile-Val-Cys-Ile-Asp-Arg-
Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Trp-His-Val-Leu-Tyr-Ser-Pro-Y-
Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドと、サンプルを、該サ
ンプル中にHTLV−１に対する抗体が存在すれば、該抗体
と前記ペプチドとの間に免疫複合体が形成される条件下
において接触させ、前記サンプル中のHTLV−１に対する
抗体の存在を決定するために、前記免疫複合体の形成を
測定することよりなる、サンプル中のHTLV−１に対する
抗体を検出する方法。 - 【請求項６】X-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-
Pro-Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-As
p-His-Ile-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドと、サンプルを、該サ
ンプル中にHTLV−１に対する抗体が存在すれば、該抗体
と前記ペプチドとの間に免疫複合体が形成される条件下
において接触させ、前記サンプル中のHTLV−１に対する
抗体の存在を決定するために、前記免疫複合体の形成を
測定することよりなる、サンプル中のHTLV−１に対する
抗体を検出する方法。 - 【請求項７】X-Trp-Thr-His-Cys-Phe-Asp-Pro-Gln-Ile-
Gln-Ala-Ile-Val-Ser-Ser-Pro-Cys-His-Asn-Ser-Leu-Il
e-Leu-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドの免疫的に有効な量
と、生理的に摂取可能な担体よりなる、HTLV−１感染に
対する抗体の生産を誘発する組成物。 - 【請求項８】X-Tyr-Thr-Cys-Ile-Val-Cys-Ile-Asp-Arg-
Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Trp-His-Val-Leu-Tyr-Ser-Pro-Y-
Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドの免疫的に有効な量
と、生理的に摂取可能な担体よりなる、HTLV−１感染に
対する抗体の生産を誘発する組成物。 - 【請求項９】X-Leu-Asn-Thr-Glu-Pro-Ser-Gln-Leu-Pro-
Pro-Thr-Ala-Pro-Pro-Leu-Leu-Pro-His-Ser-Asn-Leu-As
p-His-Ile-Y-Z、 の式を有し、Ｘはペプチドのアミノ末端のNH2基の１個
のＨか、前記ペプチドを担体に結合させるために、前記
ペプチドの該アミノ末端のNH2基に結合した１アミノ酸
で、Asp,Glu,Lys,Cys,Tyrまたはそれらの誘導体のいず
れかであり、Ｙは欠落しているか、またはCysであり、
ＺはOHかNH2である抗原ペプチドの免疫的に有効な量
と、生理的に摂取可能な担体よりなる、HTLV−１感染に
対する抗体の生産を誘発する組成物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16620588A | 1988-03-10 | 1988-03-10 | |
| US166,205 | 1988-03-10 | ||
| US07/206,140 US5017687A (en) | 1988-03-10 | 1988-06-13 | Peptides for the detection of HTLV-1 infection |
| US206,140 | 1988-06-13 | ||
| PCT/SE1989/000126 WO1989008664A1 (en) | 1988-03-10 | 1989-03-10 | Synthetic peptide antigens for the detection of htlv-1 infection |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03503284A JPH03503284A (ja) | 1991-07-25 |
| JPH0751598B2 true JPH0751598B2 (ja) | 1995-06-05 |
Family
ID=26862056
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1504216A Expired - Lifetime JPH0751598B2 (ja) | 1988-03-10 | 1989-03-10 | Ｈｔｌｖ‐１感染検出用合成ペプチド抗原 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5017687A (ja) |
| EP (1) | EP0403568B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0751598B2 (ja) |
| KR (1) | KR900700507A (ja) |
| AT (1) | ATE107663T1 (ja) |
| CA (1) | CA1336529C (ja) |
| DE (1) | DE68916421T2 (ja) |
| FI (1) | FI904345A0 (ja) |
| NZ (1) | NZ228302A (ja) |
| WO (1) | WO1989008664A1 (ja) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5643714A (en) * | 1986-12-31 | 1997-07-01 | Genelabs Technologies, Inc. | Method and assay for HTLV |
| US5614366A (en) * | 1986-12-31 | 1997-03-25 | Genelabs Technologies, Inc. | HTLV-I peptide antigens and kit |
| US5322769A (en) * | 1988-03-11 | 1994-06-21 | Abbott Laboratories | Methods for using CKS fusion proteins |
| SE8900721D0 (sv) | 1989-03-02 | 1989-03-02 | Blomberg Jonas | Methods for detection of antibodies to |
| SE467542B (sv) * | 1989-06-13 | 1992-08-03 | Syntello Ab | Syntetiska peptidantigener, immuniserande komposition och immunanalys foer htlv-1 antikroppar |
| US5882853A (en) * | 1989-09-01 | 1999-03-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of evaluating HTLV-I-specific T cell responses |
| US5283320A (en) * | 1989-11-13 | 1994-02-01 | Syntello Ab | Peptides for HTLV-2 infection diagnosis of, therapy for, vaccination against, for distinguishing between HTLV-1 and HTLV-2 infections and antibodies derived therefrom |
| FI910245A (fi) * | 1990-01-24 | 1991-07-25 | United Biomedical Inc | Syntetiska peptidkompositioner med immunoreaktivitet mot htlv-antikroppar. |
| NZ238855A (en) * | 1990-07-18 | 1994-03-25 | Iaf Biochem Int | Peptides, mixtures thereof and compositions useful for detecting htlv-i and htlv-ii infections |
| EP0551308A4 (en) * | 1990-08-29 | 1994-09-14 | Us Health | Novel peptide antigens and immunoassays, test kits and vaccines using the same |
| US5378805A (en) * | 1990-08-29 | 1995-01-03 | United States Of America | Immunoreactive HTLV-I/II ENV and POL peptides |
| WO1992007961A1 (en) * | 1990-10-26 | 1992-05-14 | President And Fellows Of Harvard College | Specific detection of antibodies to human t-cell leukemia viruses |
| US5773211A (en) * | 1991-07-10 | 1998-06-30 | Abbott Laboratories | Differentiation of HTLV-I and HTLV-II using synthetic peptides |
| AU2319492A (en) * | 1991-07-10 | 1993-02-11 | Abbott Laboratories | Differentiation of htlv-i and htlv-ii using synthetic peptides |
| WO1993002102A1 (en) * | 1991-07-23 | 1993-02-04 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Novel peptide antigens and immunoassays, test kits and vaccines using the same |
| US5736378A (en) * | 1991-09-12 | 1998-04-07 | The Scripps Research Institute | Molecular cloning and characterization of the feline immunodeficiency virus isolate PPR |
| DE69330164T2 (de) * | 1992-02-24 | 2002-01-17 | Genelabs Technologies, Inc. | Htlv-i/htlv-ii assay und verfahren |
| SE9202318L (sv) * | 1992-08-10 | 1994-02-11 | Replico Medical Ab | Nya peptider, diagnostiska antigen, användning därav, vacciner och medikamenter |
| US6274552B1 (en) | 1993-03-18 | 2001-08-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Composition and method for delivery of biologically-active factors |
| US20010055581A1 (en) * | 1994-03-18 | 2001-12-27 | Lawrence Tamarkin | Composition and method for delivery of biologically-active factors |
| AU6764196A (en) * | 1995-08-31 | 1997-03-19 | First Medical, Inc. | Methods and antibodies for detecting creatine kinase |
| US7229841B2 (en) * | 2001-04-30 | 2007-06-12 | Cytimmune Sciences, Inc. | Colloidal metal compositions and methods |
| US6407218B1 (en) * | 1997-11-10 | 2002-06-18 | Cytimmune Sciences, Inc. | Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs |
| EP1694301A4 (en) * | 2003-12-02 | 2009-11-18 | Cytimmune Sciences Inc | METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE PRODUCTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES |
| CA2554755A1 (en) * | 2004-01-28 | 2005-08-11 | Cytimmune Sciences, Inc. | Functionalized colloidal metal compositions and methods |
| WO2005076002A1 (ja) * | 2004-02-06 | 2005-08-18 | Kyowa Medex Co., Ltd. | 抗体の測定方法 |
| CA2700378A1 (en) * | 2007-09-21 | 2009-03-29 | Cytimmune Sciences, Inc. | Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods |
| US20110014118A1 (en) * | 2007-09-21 | 2011-01-20 | Lawrence Tamarkin | Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods |
| WO2009062151A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Compositions and methods for generating antibodies |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6028993A (ja) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | ヒト白血病ウイルス関連ペプチド |
| JPS60142925A (ja) * | 1983-12-28 | 1985-07-29 | Japan Found Cancer | ヒト白血病ウイルス抗体の製造法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0152030A3 (en) * | 1984-02-03 | 1986-08-13 | Juridical Foundation Japanese Foundation for Cancer Research | Adult t cell leukemia virus antigen polypeptide |
| JPS60249058A (ja) * | 1984-05-25 | 1985-12-09 | Eisai Co Ltd | Ａｔｌウイルス抗体の測定方法および試薬 |
| US4722888A (en) * | 1985-03-29 | 1988-02-02 | United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Cell line producing human monoclonal antibody which binds to HTLV-I producing cells |
| JP2564268B2 (ja) * | 1985-08-28 | 1996-12-18 | 協和醗酵工業株式会社 | 融合抗原ポリペプチド |
| US4735896A (en) * | 1986-03-04 | 1988-04-05 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions |
| US4753873A (en) * | 1986-02-03 | 1988-06-28 | Cambridge Bioscience Corporation | Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use |
| EP0246101A3 (en) * | 1986-05-14 | 1989-06-07 | FUJIREBIO KABUSHIKI KAISHA also trading as FUJIREBIO INC. | Protein having htlv-1 antigenic activity and preparation thereof |
-
1988
- 1988-06-13 US US07/206,140 patent/US5017687A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-03-10 EP EP89904657A patent/EP0403568B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-10 NZ NZ228302A patent/NZ228302A/en unknown
- 1989-03-10 CA CA000593356A patent/CA1336529C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-03-10 JP JP1504216A patent/JPH0751598B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-10 AT AT89904657T patent/ATE107663T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-03-10 WO PCT/SE1989/000126 patent/WO1989008664A1/en active IP Right Grant
- 1989-03-10 DE DE68916421T patent/DE68916421T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-09 KR KR1019890702087A patent/KR900700507A/ko not_active Application Discontinuation
-
1990
- 1990-09-03 FI FI904345A patent/FI904345A0/fi not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6028993A (ja) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | ヒト白血病ウイルス関連ペプチド |
| JPS60142925A (ja) * | 1983-12-28 | 1985-07-29 | Japan Found Cancer | ヒト白血病ウイルス抗体の製造法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 「ＳＣＩＥＮＣＥ」２７０，Ｐ．４５３〜４５５（１９８５） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0403568B1 (en) | 1994-06-22 |
| CA1336529C (en) | 1995-08-01 |
| EP0403568A1 (en) | 1990-12-27 |
| FI904345A0 (fi) | 1990-09-03 |
| ATE107663T1 (de) | 1994-07-15 |
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| NZ228302A (en) | 1990-12-21 |
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| JPH03503284A (ja) | 1991-07-25 |
| US5017687A (en) | 1991-05-21 |
| WO1989008664A1 (en) | 1989-09-21 |
| DE68916421T2 (de) | 1994-11-24 |
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