JPH02209889A - 合成親水性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 技術分野 本発明は、一般に免疫原の作製に関し、特に人Ｔ細胞白
血病ビールス（ＨＴＬＶ）タイプＩ又は）１のエンベロ
ープ蛋白質の抗原決定索に関するアミノ酸配列を持つ合
成ペプチド及びこれを備えた免疫原組成物に関する。

背景技術 ＨＴＬＶ−１及び−１１は外生のものであり、一般には
人のレトロビールスをして優先的に胸腺から派生された
（Ｔ）リンパ線に感染することを生じせしめる。）ＩＴ
ＬＶ−１及び−１１は、おとなのＴ細胞白血病及びリン
パ種（ＡＴＬＬ）の原因となる因子である（ボアエスズ
ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．υＳ＾７
７：７４１５，１９８０；　カリアナラマンら、５ｃｉ
ｅｎｃｅ　２８１：５７１．１９８２）。

人のＩＩＴＬＶ−１の感染は、「うっせきしている」前
−白血病状態と関連し、これは公然と攻撃的なＡＴＬＬ
に進行することができ、又は数年間変化しないままとな
ることもできる（ヤマグチら、Ｂｆｏｏｄ　８２：’１
５８．１９８３）。ＡＴＬＬの攻撃の前には見掛は上の
長い潜伏があるが、このことは、主な疫学的な問題、す
なわち、健康なＩＩＴＬＶ−１＋キヤリアによる感染の
広がりを含む問題、及びビールスに暴露されたこれらを
同定する問題を示している。ＩＩＴＬＶ−１は、性交、
共有された静脈の薬剤乱用処理、母乳、及びインクｏ　
（Ｉｎ　ｕｔｅｒｏ）またはべりパラタム（ｐｅｒｌｐ
ａｒｔＵＳ）な暴露により感染される（ロング−スクー
ル及びガロ、Ｎａｔｕｒｅ　３１７：３９５．１９１＋
５）。現在、感染された人からＩＩＴＬＶ−１を消滅す
る方法、ビールスの伝播又は病気の進行を妨げる方法は
ない。

ＡＴＬＬに加えて、ＩＩＴＬＶ−１の感染は、熱帯けい
れん性ｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ　（ゲシンら、Ｌａｎｃ
ｅｔ　Ｉｌ：６９８．１９８Ｂ）　、ｃｈｒｏｎｌｃ　
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　５ｙｅｌｏｐａｔｈ１ｅｓ（
オサムら、Ａｎｎ、Ｎｅｕｒｏｌ、２１：１１７，１９
８７）　、５ｕｌｔｌｐｌｅ　５ｃｌｅｒｏｓ１ｓ（コ
ブロフスキーら、Ｎａｔｕｒｅ　３１８：１５４．１９
８５）、ｎｏｎ−１１ｏｄｇｋｌｎ’ｓリンパｌｌｌ１
（ギブスら、Ａｓ５ｏｅ、１ｎｔｅｒｎ、Ｍｅｄ、ｌＱ
６：３Ｂ１．１９８７）、及びＢ細胞ｃｈｒｏｎｉｃリ
ンパ線白血病（ＣＬＬ）　　（７ンら、５ｃｉｅｎｃｅ
　２３６；１１０３．１９８７）に関連する。ＩＩＴＬ
Ｖ−１１は、ｈａｔ　ｒｙ細胞白血病のＴ細胞変態と呼
ばれる慢性白血病の希な形態と関連する（カリアナラマ
ンら、５ｌｅｎｃｅ　２１８：５７１．１９８２）。

＋１ＴＬＶ−１は世界的に広い分布を持っているが、局
地的に特有な領域は日本南部（ヒルマら、Ｉｎｔ、Ｊ。

Ｃａｎｃｅｒ　２９：６３１．１９８３）　、カリブ流
域、（ブラットナーら、Ｌａｎｃｅｔ　ＩＩ：８１．１
９８３　）　、米国南西部（プレイニーら、ｊ、＾ｍ、
Ｍｅｄ、Ａｓ５ｏｃ、２５０：　１０４８．１９８３）
、アフリカ（ビッガーら、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ　
３４：２１５，１９８４）、及び他の領域に特定される
。ＩＩＴＬＶ−１１の血清陽性の流行が増加しているが
、ＩＩＴＬＶ−１１の疫学は、よく知られていない（ロ
ーゼンブラットら、Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、３
１５：３７２，１９８６　）　ｏ同様に、ＨＴＬＶ−１
に対する血清陽性の割合はニューヨーク市からの静脈薬
剤乱用者内（９％、（ロバートーガロフら、Ｊ、ＡＩｌ
、Ｍｅｄ、＾５ｓｏｃ、２５５：３１３３．１９８Ｂ）
）及びニューオルリンズ（４９％、（ワイスら、Ｐｒｏ
ｃ、Ａｍ、Ｓｏｃ。

ＣｌＩｎ、Ｏｎｃ、６：５．１９８７））及びニューヨ
ーク市からの血液生産の輸血を受ける者（９％（ロバー
トーガロフら、Ｊ、＾ｓ、Ｍｅｄ、Ａｓ５ｏｃ、２５５
：３１３３．１９８Ｂ））及びノースカロライナのチャ
ペルヒル（１３％、ハイネスら、ＣｌＩｎ、Ｒａｓ、３
３：３４２Ａ、１９８５））内で増加している。

最近、ラレイフ、ＮＣからの６個人の集団がＩＩ　Ｔ　
Ｌ　Ｖ−１に対する抗体であると同定された（ワインベ
ルブら５Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｒｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃ
ｏｎｔｒｏｌ、Ｍｏｒｂｌｄｌｔｙａｎｄ　Ｍｏｒｔａ
ｌｌｔｙ　Ｗｅｅｋｌｙ　Ｒｅｐｏｒｔ、１９８７年１
２月１８日）。

これらの単位はまた、アブノーマルな循環リンパ球を持
ち、これは、前白血病シンドロームを示す。

患者の一人は次いでおとなのＴ細胞白血病で死んだ。６
人はすべて１１１ｖに対して血清陰性であった。

この集団の発見により、ニューヨーク市及びニューオル
ンズ中の血清陽性の割合が増加していることとともに、
ＩＩＴＬＶ−１に対する信頼できる診断上の分析及び非
感染個人に対する保護ワクチンが直ちに必要であること
が強調される。

いくつかの研究結果によれば、ＩＩＴＬＶ−１のエンベ
ロープ遺伝子生産物を組込んだワクチンが保訛値を持つ
らしいことが示されているが、Ｉ　Ｔ　Ｌ　Ｖ刊に対し
て有効なワクチンは現在ない。ＩＩＴＬＶ−１のエンベ
ロープ遺伝子は６３−６７キロダルトン（ｋｄ）の糖蛋
白質の先駆体をエンコードしており、この先駆体は蛋白
分解的に進行して、成熟したｇｐ４６外部エンベロープ
等蛋白質及び２１ｋｄ　）ランスメンブレン蛋白になる
ものである（リーら、Ｐ「ＯＣ，Ｎａｔ！、＾ｃａｄＪ
ｃ１．ＩＪｓＡ　８１：３Ｂ５６．１９８４）。

キヨカワら（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．
ＵＳ八へ１：６２０２、１９８４）は、Ｅ、ｃｏｌｌ中
で、二つの部分、すなわち外部ｇｐ４Ｂエンベロープ分
子の１２アミノ酸を除いたものを含んでいるＮ末端部分
とｇｐ２１トランスメンブレン分子のほとんど全てから
なるＣ末端部分として、ＩＩＴＬＶ刊の全てのｇｐ６３
エンベロープ先駆体分子を表現している。ＨＴＬＶｉ　
ＧＰＢ３エンベロープ先駆体のＮ末端及びＣ末端に対す
るラビットの免疫血清を使用して、キヨカワらは、米国
及び日本のＨＴＬＶ−１先駆体双方を中性化した。ポシ
ノらは（１０ｔ１．ｃａｎｅｃｒ　３Ｂ＋７８１．１９
８５）　、この発見を抗ｇｐ２１免疫血清で確認した。

−まとめにすると、これらのデーターは、１ｌＴ１．Ｖ
−１エンベロープ上の少なくとも２つの中性化位置の存
在、すなわち一つは外部ｇｐ４Ｂエンベロープ糖蛋白質
に関連（２、二つ目はｇｐ２１トランスメンブレン等蛋
白質に関連していること、の存在を示している。さらに
、Ｅ、ｃｏｌ　ｌ中で生産されたこれらＩＩＴＬＶ−１
再結合蛋白は配糖体化されていないので、炭水化物はこ
れら中性化位置の基本的な成分ではない。

従って、非配糖体構造としての合成ペプチドは、＋１Ｔ
ＬＶ−１エンベロープに対する中性化免疫血清を生じさ
せるのに適切である。日本及び米国の１１Ｔ１、Ｖ−エ
ンベロープに対する人又は動物の免疫血清は、疑似分析
中で交差−中性化されるので、ＩＩＴＬＶ−１のエンベ
ロープ抗原は単独の血清タイプの世界的な広がりを示す
ようである（ナキーら、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ　３
２：３２１．１９８３）　、従って、１１１　Ｖの隔離
特定中性化エピトープ（ｅｐｌ　ｔｏｐｅｓ）と異なっ
て、一つのＩＩＴＬＶ−！隔離に対する合成ワクチンは
、他のＨＴＬＶ−１隔離に対して保護するであろう。実
際トチクラらは（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｃｒ　３６：Ｉ
、１９８５）　、）ＩＴＬＶ−１特定抗体は、１１ＴＩ
、Ｖ−＋＋リンパ球の培養に加えた時、ウィルス抗原表
現を抑制することができることを示し１、抗ＨＴＬＶ−
１抗体は［ｎ　ｖｌｖｏで保護するメカニズムを示唆し
ている。

これらのデーターから、ＩＩＴＬＶｉエンベロープ糖−
蛋白質の部分がワクチンとして使用されて、入内のＩＩ
ＴＬＶ−１に対して保護抗体力価を引出すことができる
という提案に対して、これを強力に支持するが、これら
研究は臨界的なエピトープの配列を同定しない。配列の
解明は、ＩＩＴＬＶ−１とＩＩＴＬＶ−１１エンベロー
プ糖蛋白質との間に存在する配列の相同関係により、糖
蛋白質のｅｐＨｏｐｅ（ｓ）の同定を容易にする。

発明の目的 本発明は、単独若しくはキャリア分子に結合された時、
及び／又はポリマー化されて分子集合物を形成する時、
哺乳類中でＩＩＴＬＶ−１又はＩＩＴＬＶ−１１に対す
る高力価の中性化抗体を生産することを誘導することが
できる合成ペプチドを提供することである。

本発明の他の［１的は、ＨＴＬＶ−１に対して哺乳類中
で保護免疫を誘導することができるＩＩＴＬＶ−１ユ、
ンベローブ蛋白の抗原決定木に相当するアミノ酸配列を
持つペプチドを備えた免疫遺伝学的な結Ａ　（ｃｏｎｊ
ｕｇａｔｃ）を提供することにある。

本発明の別の目的は、ＩＩＴＬＶ−１１に対して鋪乳類
中で保護免疫を誘導することができるＩＩＴＬＶ−１１
エンベロープ蛋白の抗原決定木に相当するアミノ酸配列
を持つペプチドを備えた免疫遺伝学的な結合（ｃｏｎｊ
ｕｇａＬｃ）を提供することにある。

本発明のさらに異なる目的は、生物学的な試験試料中で
抗＋１ＴＬＶ−１又は抗１１ＴＬＶ−１ビ抗体を検査す
る方法を提供することにある。

これらの又は他の目的は、以下の詳細な説明から当業者
であれば明白であり、ＩＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−
１のビールスを引起こす因子に対して免疫的な応答を作
るのに有益な合成ペプチドを提供することにより達成さ
れる。

発明の概要 本発明は、免疫原の作製及びそれから作られたワクチン
に関する。ＩＩＴＬＶ−１又は）ＩＴＬＶ−１１のいず
れかのエンベロープ蛋白の抗原決定水に相当するアミノ
酸配列を持つ合成ペプチドは、直接又はスペーサー分子
を介在して適切なキャリア分子に共イ（的に結合されて
、免疫原結合物（ｃｏｎｊＢａｔｅｓ　）を形成する。

このような結合物を−又は二以上備えたワクチンは開示
されている。

一つの具体例では、本発明は、＋１　Ｔ　１．、Ｖ　−
１（又はＩＩＴＬＶ−１１）のエンベロープ糖蛋白質の
抗原決定木に相当するアミノ酸配列を持つ合成ペプチド
を具備している。このペプチドは単独又はキャリア分子
と結合した時、咽乳類内テＩＩＴＬＶ−１（又１１１１
ＴＬＶ−１１）対して高力価の保護抗体を誘導する。本
発明のペプチドは、ＨＴＬＶ−１（セイキら、Ｐｒｏｃ
、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．ＵｓＡ　８０：３６１
８）もしくはＩＩＴＬＶ−１１（ソドロスキら、５ｃｉ
ｅｎｃｅ　２２５：４２１．１９８４））のエンベロー
プ糖蛋白質の親水性領域中にある抗原決定素に相当する
（カイト及びドーリトルＪ、Ｍｏ１．Ｂ１ｏ１．Ｉ５７
：１０５．１９８２）。

別の具体例テハ、本発明は、ＩＴＬＶ−１（又はＩｔ　
Ｔ　Ｌ　Ｖ−１１）に対する哺乳類中で高力価の保護抗
体を誘導できる免疫原結合物を備えている。この結合物
は：（１）キャリア分子と、（ＩＩ）この分子が共有的
ニ俄付けられたＨＴＬＶ−１（又ｌｅｔ　ＩＩＴＬＶ−
ｌ　Ｉ　）　（７）　エンベロープ糖蛋白質の抗原決定
索に相当するアミノ酸配列を持つ合成ペプチドと、を備
えている。

さらに別の具体例では、本発明は、哺乳類に対して免疫
原的に有効量の上記＋１ＴＬＶ−１（またはＨＴ　Ｌ　
Ｖｌｌ）特定結合物を投薬することを備えたＩＩＴＬＶ
−１（又はＩＩＴＬＶ−１！　）に対する免疫を作る方
法を具備している。

別の具体例では、本発明は、生物学的な試験試料中で抗
体を検査する方法を備え、この方法は本発明のペプチド
を試料と接触させ、試料中の抗体をペプチドと複合化さ
せ、その複合物の形成をａｌｌ定する方法である。

発明の詳細な説明 本発明は、ＩＩＴＬＶ−１の免疫原エピトープに相当す
るペプチド及びＩＩＴＬＶ−１１の免疫原エピトープに
相当するペプチド、さらにこれらから作られたＩＩ　Ｔ
　Ｌ　Ｖ−１、ＩＩＴＬＶ−１１に対してそれぞれ合成
ワクチンに関する。これら新規な免疫原剤は、ペプチド
、すなわち抗原決定素をＩＩＴＬＶ−１又ハＩＩＴＬＶ
−１１（７）　ｇｐ４Ｂエンベロープ蛋白と分割するペ
プチドを化学的に合成することにより作製できる。ペプ
チドはキャリア分子と結合され、従って、免疫原結合物
を形成しく及び／又はポリマー化される）、これらをワ
クチンとして適切なものとする。これらワクチンは、免
疫原的に有効量を哺乳類に例えば非経口ルートで投与す
ることにより、ＨＴ　Ｌ　Ｖ刊又はＩＩＴＬＶ−１１に
関する病気に対する免疫として有益である。

免疫原の可能性として研究されるべきペプチドは、親水
性テ１ＩＴＬＶ−１又ハ１ｌＴＬＶ−１ｆ　ｇｐ４Ｇエ
ンベロープ糖蛋白質の供給領域に相当するこれらのもの
を含んでいることが分った。さらに、これらペプチドで
は、予想されたデーグーの変更（ｔｕｒｎｓ）は特に重
要なものであることが分った。内部ペプチド（１ｎｔｒ
ａｐｅｐｔｌｄｅ）二硫化物結合は生来の形態決定索を
確定するのに有益であることが認識された。

また踏量（Ｉｎｔｅｒｃｈａｉｎ）に硫化物結合の形成
は、ポリマー化ペプチド分子内でを益であり、このこと
により大きな、より免疫原ペプチドの集合物を形成する
。

１１ＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１ｌ　（７）　エンベ
ロープ蛋白の予想されるアミノ酸配列のコンピュータ分
析によれば、親水性領域の二次的構造及び位置を確立し
た。二次的構造はクーとファスマンの手法を用いてコン
ピュータ分析から決定された（ＢＩｏｃｈｅａｌｓＬｒ
ｙ　１３：２！１尾よび１３：２２２．１９７４；　Ａ
ｄｖａｎｃｅｓ　Ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　４７：
４５．１９７８）。データー変更の可能領域はローズの
手法を用いて局部限定された（Ｎａｔｕｒｅ　２７２：
５Ｈ，１９７ｇ）。エンベロープ蛋白の親水性領域はロ
ーズとロイ（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．
ＵＳＡ　７７：４Ｂ４３．ＩＨＯ）及びカイト及びドー
リトル（Ｊ、Ｍｏ１．ＢＩｏｌ、＋５７：１０５−１３
２．１９８２）の技術で同定された。

本発明のペプチドは、ＩＩＴＬＶ−１のｇｐ４Ｂエンベ
ロープ糖蛋白糖蛋白質性するＢ細胞エピトープに相当し
又は相同するペプチドを含む。これらペプチドは、長さ
が約２５アミノ酸（単位）またはそれ以下であり、親水
性で、適切なキャリア分子と結合した時、高力価の抗ペ
プチド抗体（１：１ｏ００）を哺乳類内で生産すること
を呼び覚ます。この抗体は生来のＨＴＬＶ−１のｇｐ４
Ｂエンベロープ糖蛋白質と反応することができる。本発
明の他のペプチドは、Ｉｔ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−１１のｇｐ４
６ベロープ糖蛋白質内に存在するＢ細胞エピトープに相
当し又は相同するペプチド含む。

これらペプチドもまた、長さが約２５アミノ酸（単位）
またはそれ以下であり、親水性で、適切なキャリア分子
と結合した時、高力価の抗ペブチド抗体（１：１０００
）を哺乳類内で生産することを呼び覚ます。この抗体は
生来のＨＴＬＶ−１１のｇｐ４Ｂエンベロープ糖蛋白質
と反応することができる。

本発明の合成ペプチドは、表１に示されるアミノ酸配列
、または表１に示された配列の一つに十分類似する配列
を持ち、このことにより表に示される特定の配列により
表現されたエピトープと結合する抗体により同じ方法で
処理されるものである（すなわち、免疫原的に比較しう
る配列である）。このような合成ペプチドはここでは以
下、ｒｌｌＴＬＶ−１０定ペプチド」と称する。

表１ ＋１ＴＬＶ−１に対する診断及びワクチン注射に使用す
るための合成ペプチド ペプチド　エンベロープ　アミノ酸配列２，３．４アミ
ノ酸１ ２　　　　８Ｂ−１０７ ３１７Ｂ−１８９ Ａ ２９Ｂ−３１２ ４Ｂ２−４８０ ＶＳＳＹ）ＩＳＫＰＣｌｌｉＰＡＱＰＶ（Ｃ）ＰＨＶＴ
ＫＫＰＮＩ？ＮＧＧＧＹＹＳＡＹＳＤＰ （Ｃ）ＬＮＴＥＰＳＱＬＰＰＴＡＰＰ（Ｙ）ＳＳＰＹＷ
ＫＦＱＩＩＤＶＮＦＴＱＥＶＳＲＬＮ（Ｃ） （Ｃ）ＬＬＰＩＩＳＮＬＤＩＩＩＬＥＰＳＩＰＷＫＳＫ
（Ｙ） （Ｙ）ＬＰＰＮＷＴＩＩＣＦＤＰＱ（Ｃ）（Ｃ）ＰＰｌ
’５ＬＳＰＶＰＴｌ、ｃｓｈｓＲｎＹ＾＾ＱＮｌ？ｌ？
ＧＬＤＬＬＰＷＥＱＧＧＬ（Ｃ） ＣＲＰＰＮＩＴＮＳ）ｉＶＰＩＬＱＥ （Ｃ）ＰＩＬＱＥＲＰＰＬＥＮＩ？ ＣＩＬＲＱＬＲＨＬＰＳＲＶｌ？ＹｐＨＹＳ１１　　　
　　４７５−４８８　　　　　　　（Ｃ）ＲＹＰＩＩＹ
ＳＬＩにＰＥ５ＳＬ１　セイキ１Ｍ、ら、ｐｒｏｃ、Ｎ
ａｔ＋、＾ｃａｄ、ｓｃ１．Ｕｓ＾８０：３Ｂ＋８−３
６２２．１９８３による。リーダ配列のＮ末端メチオニ
ン−１である。

２　合成ペプチド１−１１の配列は、ペプチド４を除い
てＩＩＴＬＶ−１ｇｐＧ３のＮからＣ末端に順にリスト
されている。ペプチド１−６内の配列はｇｐ４Ｇ外部外
部エンベロープ糖蛋白質からであるが、一方ベブチドア
ー１１の配列はｇｐ２１トランスメンブレン糖蛋白質か
ら誘導される。アミノ酸数は、最初のメチオニン−１か
ら始まる。（パーカーらＪ、Ｉｓ＋５ｕｎｏｌ　（１９
ｇ９）　Ｖｏｌ、１４２　（２月１日）参照）３　バレ
ンテーゼ（ｐａｒｅｎＬｌ＋ｅｓｅｓ）中のアミノ酸を
加えて、キャリア蛋白（Ｃ）及びペプチドのヨード化物
（Ｙ）への結合を容品とする。ＣｙｓはＮ又はＣ末端の
いずれかにあることが可能である。

４　各アミノ酸はその単独の文字コードで表現される。

すなわちその名前の最初の文字である。ただし、アルギ
ニンは（Ｒ）、アスパラギン酸は（Ｄ）、アスパラギン
は（Ｎ）、グルタミンは（Ｑ）、グルタミン酸は（Ｅ）
、リジンは（Ｋ）、フェニララニンは（Ｆ）　、トリプ
トファンは（Ｗ）、チロシンは（Ｙ）である。

同様に、本発明の他の合成ペプチドは、表２に示すアミ
ノ酸配列または表２に示された配列の一つに十分類似す
る配列を持ち、このことにより表に示される特定の配列
により表現されたエピトープと結合する抗体により同じ
方法で処理されるものである（すなわち、免疫原的に比
較しうる配列である）。このような合成ペプチドは以下
ｒ　ＨＴＬＶ−１１特定ペプチド」と称する。

表２ １１ＴＬＶ−１に対する診断及びワクチン注射に使用す
るための合成ペプチド ペプチド　エンベロープ　アミノ酸配列２．３アミノ酸
１ １　　　　３０−４４　　　　５ＳＹＨ８ＳＰＣ３ＰＴ
ＱＰＶＣ２４４−８３ＣＴＶＮＬＤＬ）ＪＳＬＴＴＤＱ
ＲＬＩＩＰＰＣ３Ｈ−１０４１１ＶＩＫＫＰＮＲＱＧＬ
ＧＹＹＳＰＳＹＮＤＣ −４１２５−１４０（Ｃ）ＳＳＰＳＷ［Ｐ）ＩＳＤＶＮ
ＰＴＩ５　　　１７４−１９４　　　　　（Ｃ）ＳＥＰ
ＴＱＰＰＰＴＳＰＰＬＶＩＩＤＳＤＬε！１ ６　　　２９５−３０８　　　　　（Ｃ）ＳＬＡＰＶＰ
ＰＰＡＴＲＲＲＲｌ　ソダロスキーら、５ｃｉｅｎｃｅ
　２２５：４２１−４２４．１９８４による。リーダ配
列のメチオニン−ｍｌである。

２　パレンテーゼ中のアミノ酸を加えて、キャリア蛋白
（Ｃ）及びペプチドのヨード化物（Ｙ）への結合を容易
とする。ＣｙｓはＮ又はＣ末端のいずれかにあることが
可能である。

３　各アミノ酸はその単独の文字コードで表現される。

すなわちその名前の最初の文字である。ただし、アルギ
ニンは（Ｒ）、アスパラギン酸は（Ｄ）、アスパラギン
は（Ｎ）、グルタミンは（Ｑ）、グルタミン酸は（Ｅ）
、リジンは（Ｋ）、フエニララニンは（Ｆ）　、）リブ
トファンは（ｗ）、チロシンは（Ｙ）である。

本発明のペプチドへ共有的に結合（共役的に結合）され
るキャリア分子は、毒性がなく、製薬学的に許容でき、
さらに哺乳類中で免疫的な応答を作るのに十分な寸法で
あるのがよい。適切なキャリア分子の例は、テタナス　
トキソイド及びキーホール　リンペット　ヘモシアニン
（にＬｌｌ）がある。

ＨＴＬＶ−１特定ペプチド及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペ
プチドが結合される他のキャリア分子はＩＩＴＬＶ−１
又はＩＩＴＬＶ−ＩＩ　ｇｐｅａヱンベローブ糖蛋白質
又はヘリカル構造を持つｐ５５ギャグ（ｇａｇ）ポリプ
ロティンのＴ細胞エピトープ（マルゴリッタらのアルゴ
リズム（Ｊ。

１＊５ｕｎｏ１．１３８：２２１３．１９８７）により
予想された）に相当する配列を備えている。これらの特
定の例は、表３に示されている。ＬＡＳＧＫＳＬアミノ
酸をｌ−ＴｌのＮ末端に添加することにより、鼠のＴヘ
ルパー細胞によって同定されたペプチドとなる。

表３ ！１ＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１７７）　Ｔ細胞エ
ピトープビールス　遺伝子　アミノ酸　名称　配列２．
３１１ＴＩ、■−１エンベ　　３４７−３８３　１−Ｔ
Ｉ　　ＬＨＥＶＤＫＤＩローブ　　　　　　　　　　５
ＱＬＴＱＡＩＶＫ１１ＴＬＶｉ　　　エンベ　　６４−
７４　１−Ｔ２　　ＱＰＰＣＰＮＬＶＳＹローブ ギャグ　１１１４−２００　１−Ｔ３　　ＤＬＱＤＬＬ
ＱＹＬＣ３ＳＬＶＡＳＬ ギャグ　　７９−８７　１−Ｔ４　１？ＶＮＩＥＩＬＩ
ＩＩｌ、ＨＴＬＶ−ＩＩ　　　１ンベ　　３４Ｂ−３６
９ＩＩ−Ｔ４　ＫＤＩＳＩＩＬＴＱローブ　　　　　　
　　　　ＡＩＶＫＮＨＱＮ＋１．ｌ？ＶＡＱ １　マルゴリッタらのアルゴリズム、Ｊ、Ｉａｍｕ口０
１゜１３８＋２２１３．１９８７アンフイパシツクを含
むアミノ酸配列がヘリカル二次構造であることをを予想
するのに使用された。

２　セイキら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｃ１
．Ｕｓ＾８０：３６１ｇ、１９８３から予想されたアミ
ノ酸配列のＩＩＴＬＶ−１３ソドロスキーら、５ｃｉｅ
ｎｃｅ　２２５：４２１，１９８４から予言されたアミ
ノ酸配列のＩＩＴＬＶ−１１ＨＴＬＶ−１及びＩＩＴＬ
Ｖ−１１特定ペプチドは薬学的に許容される補助薬、例
えばみょうばん又はテタナストキソイド（ｔｅｔａｎｕ
ｓ　ｔｏｘｏｉｄ）よりもより免疫原の他のキャリア分
子に結合された補助薬とともに投与することも可能であ
る。

本発明ノＨＴＬＶ−１及び１１Ｔ１、■−１１特定ペプ
チドへのキャリアの結合は、直接又はスペーサ分子を介
在しておこなうことができる。スペーサ分子は、毒性が
なくまた反応性であるのが良い。ＩＩ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−１
又は＋１ＴＬＶ−１１特定ペプチドのアミノ末端に加え
られるグリシン残部は、キャリア分子にペプチドを結合
するための適切なスペーサ分子を提供する。あるイハ、
ＩＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペプチドは、
例えば他の免疫原１１Ｔ１、Ｖ−１又ハＩＩＴＬＶ−ｌ
　ｌ　エンベロープ配列に直接隣接して合成されるよう
にしてもよい。

例えば、表３に示されるこれらの配列（又はその一部分
）のエンベロープ配列を用いることができる。システィ
ン類は、キャリア分子に結合させるためｉ、：ＩＩＴＬ
Ｖ−１又はＩＩＴＬＶ−１１特定ペプチドのＮ末端又は
Ｃ末端のいずれかの位置で加えることができる。あるい
は両端に加えて二硫化物結合形成物を介してインターチ
ェインポリマリゼーションを容品として、大きな分子集
合物を形成することもできる。

ＩＩ　Ｔ　Ｌ　Ｖ刊又はＩＩＴＬＶ−１１特定ペプチド
へのキャリア分子の結合は、カップリング剤を用いて達
成される。好ましくは、ヘテロファンクシジナルなカッ
プリング剤Ｍ−マレインミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキ
シスシンイミド　エステル（ＭＢＳ）、又は水溶性化合
物ｍ−マレイミド−ベンドイルスルホスシンイミド　エ
ステル（スルホ−ＭＢＳ）が使用される。グリーンら（
Ｃｅｌｌ　２８：４７７．１９８２）及びバーカーら（
Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｃｉ、ＵｓＡ　８４
：２４７９．１９８７）。

本発明のワクチンは、哺乳類に投与される時、ＨＴＬＶ
−１に対して保護免疫原的な応答を引起こす。

これは、−若しくはそれ以上の免疫原的な結合物を備え
、各共役はＩＩＴＬＶ−１特定ペプチドを備えている。

ココテハ、各１１Ｔ１、Ｖ−１特定ペプチドハＨＴＬＶ
−１ｇｐ４６エンベローブ蛋白の異なる部分に応答する
。好ましくは、表１にリストされたＩＩＴＬＶ−１特定
ペプチドが例えば表３に示されるようなＩＩＴＬＶ−１
エンベロープ又はギャグ蛋白質の予想されたＴ細胞エピ
トープと結合又は合成されるものがよい。

同様に、本発明のワクチンは、ＩＩＴＬＶ−１１に対し
て保護免疫原的な応答を引起こす。これは、−若しくは
それ以上の免疫原的な共役を備え、各共役はｌ１ＴＬＶ
−１１特定ペプチドを備えている。ここでは、各＋１Ｔ
ＬＶ−１特定ペプチドはＩＩＴＬＶ−１１ｇｐｔｅエン
ベロープ蛋白の異なる部分に応答する。好ましくは、表
２にリストされたＩＩＴＬＶ−１特定ペプチドが例えば
表３に示されるようなＩＩＴＬＶ−１１エンベロープ又
はギャグ蛋白質の予想されたＴ細胞エピトープと結合又
は合成されるものがよい。

更に加えて、上記免疫原共役により二価値のワクチンも
構成することができる。このワクチンは、＋１ＴＬｖ−
１及びＩＩ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−目のエンベロープ蛋白からの
合成ペプチドを備え、混合されて単一の接種物を形成し
、このことにより保護抗体が哺乳類中でＩｔ　Ｔ　Ｌ　
Ｖ−１及びＩＩＴＬＶ−１１に対して同時に生じる。

キャリア分子として、合成ペプチド、すなわちヘルパー
Ｔ細胞により認識されるＨＴＬＶ−１又はＩＩ　Ｔ　Ｌ
　Ｖ−１１エンベロープ又はギャグ分子の一部分を反映
する合成ペプチドを使用する利点は、テタナストキソイ
ドのような他のキャリア分子を必要としないということ
である。モしてＢ及びＴ細胞のＩＩＴＬＶ−１又はＩＩ
ＴＬＶ−１１に対する応答が特定されるということであ
る。　ＩＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペプチ
ドは、単独又は相当するＴ細胞ｅ、ｐｌｔＯｐと合成さ
れたものは、酸化剤で処理され、ペプチド鎖システィン
との間で二硫化物結合形成物を引起こすことができる、
その結果ポリマー化され、高い免疫原抗体を得ることが
できる。

本発明ノ！ＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペプ
チドの中性化抗体を引起こして免疫化する能力は、ナギ
ーら（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ　３２：３２１）の如
く決定される。

！ＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペプチドをワ
クチン又はワクチンの成分として使用することに加えて
、これらワクチンを診断上の目的に使用できる。生物学
的試料内でのＩＩＴＬＶ−１又はＩＩＴＬＶ−１１エン
ベロープ蛋白に対する抗体の存在及び力価は、固体槽の
放射免疫分析（ＲＩＡ　）中テ１ｌＴＬＶ−１及びＩＩ
ＴＬＶ−１１特定蛋白を使用することにより検出できる
。（バーカーらＪ、１ｔｓｕｎｏ１．１３６：２３９３
．１９８８−この文章の全ての内容は試料；　Ｉｂ１ｄ
、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、ＡｃａｄＪｃｌ、ＵＳＡ　８４
：２４７９，１９８７＋、ｍ記載サレテイる）。本発明
（７）　ＩＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１特定ペプ
チドは標準酵素結合免疫吸収分析（ＥＬＩＳＡ　）中で
生物学的試料中でＩＩＴＬｖ−１又はＩＩＴＬＶ−１１
エンベロープ糖蛋白質に対する抗体の存在を検出するこ
ともできる。

本発明のＩＩＴＬＶ−１診療分析の一つの例では、＋１
　Ｔ　Ｌ　Ｖ−Ｉ　　ｇｐ４Ｂエンベロープ及びＩＩＴ
ＬＶ−ｌ　　ｐ１９ギャグ蛋白からの合成ペプチドの混
合物が使用できる。好ましくは、表１のペプチド４Ａ及
びっぎのＩＩＴＬＶ−１ｐ１９のカルボキシ末端配列（
Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈ　ｒ−
＾１ａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ　）を含むペ
プチドがよい。組合わせでは、これら二つのペプチドは
、抗体を持ツＨＴＬＶ−１＋物からｐ＋９又ハｇｐ４６
まテノ血清の９５％内の抗体により認識される。（バー
カーら、Ｊ、１ｓｓｕｎｏ１．１３６：２３９３．１９
８ｆｌ、及び第１図）。

これら二つのペプチドの組合わせにより、ＥＬＩＳＡ又
はＲＩＡ中で使用してＩＩＴＬＶ−１＋患者からの血清
中の抗体を検出できる。

上記のことから、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、間接免疫フルオ
ロサイエンス及びウェスタンプロット分折を含む検出技
術を用いれば、当業者であればＩＩＴＬＶ−１及びＨＴ
ＬＶ−１１特定試験キツトを構成１．て生物学的な試料
中でＩＩＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１１に対する抗体
を検出できることは明白である。

さらにまた本発明のＩＩＴＬＶ−１又はｌ！ＴＬＶ−１
１特定ペプチドでの免疫化に応答して生産された抗体は
、標準技術を用いて抗原診断分析中で使用できることは
当業者であれば明白である。

以下本発明を以下の実施例で詳細に説明する。

ただし本発明はこの実施例に限定されるものではない。

実施例１ ＋！Ｔ１．Ｖ−１及びＩＴｌ、、Ｖ−１１特定ペプチド
の合成及び結合物の作製 １１丁ＬＶ−１ｇｐ４Ｂ（セイキら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．ｔｌＳＡ　８０：３Ｂ＋１ｔ−
３６２２，１９１ｔ３）及びＩＩＴＬ、Ｖ−Ｉｆ　ｇｐ
４Ｂ（ソドロスキら、Ｓｃ！ｅｎｃｅ　２２５：４２１
−４２４．１．９８４）から親水性アミノ酸配列を含む
基本的に純粋なペプチドの合成は、製造者によって供給
される化学品及びプログラムサイクルを使用してＤｕｐ
ｏｎｔ　２１００ペプチド合成機により合成される。配
列は表１及び２に示されている。

ペプチドはＭＢＳを持つキャリア分子テタナストキソイ
ド（ＴＴ）と結合される。これは（グリーンら、Ｃｅ１
ｌ　２８：４７７．１９８２；パルカーら、Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、ｓｃ１．ＵｓＡ　１１４：２４７
９，１９８７　）に記載されている。カップリングをお
こなうために、０．５ｍｌの燐酸塩バッファ生理食塩水
、ｐＨ７，２中の２４ｍｇのテタナストキソイドを、１
００μｍのジメチルホルムアルデヒド中に溶解した１ｍ
ｇのＭＢＳで１時間、２３℃で培養した。ＭＢＳで処理
されたテタナストキソイド（ＴＴ−ＭＢＳ）を次いでＰ
Ｄ−１０（バラマシア）カラム上のふるい用クロマトグ
ラフィーにかけて、ＴＴ−ＭＢ　Ｓから未反応のＭＢＳ
を除去した。モしてＴＴ−ＭＢＳを含む部分をカラムの
空隙容積内に回収した。

これは、スペクトル光メーター分析により２８０ｎ−の
光密度で決定された。ＴＴ−ＭＢ　Ｓを、次いで、カル
ボキシル又はアミノ末端で誘導システィンを含むＰＢＳ
内の６〜９Ｂの合成ペプチド（モル比３０：Ｌペプチド
キャリア蛋白〕で、２３℃で３時間揺らしながら培養し
た。ＴＴペプチド結合物はＰＢＳに対して４℃で一昼夜
透析され、またはＰＤ−１０カラム上で再度脱塩され、
そして免疫原として使用された。

キャリア分子トキソイドに対するペプチドの結合物は、
結合物をソディウム　ドデシルスルフェート　　ポリア
クリルアミド　ゲルエレクトロフォレシス（ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ）にさらし、更に監視した。この監視は、キャリ
ア分子ポリアクリルゲル　エレクトロフォレシス（ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ）のそれを越える見掛は上の分子重量の増
加をＡｌ１定し、さらにＭＢＳで処理されたキャリア分
子のそれを越える見掛けの分子重量の増加をΔＦ１定す
ることにより行なった。結合の効率は、またペプチドに
依存して１０〜３０％麦化するペプチドの追跡ヨウド化
により監視した。

実施例２ １１ＴＬｖ−１ｇｐ４Ｂ合成へ１チ）；１．：対ｔ　ル
１１ＴＬＶ−１血清陽性物からの抗体反応性 ＩＩＴＬＶ−１ｇｐ４Ｂの親水性領域から誘導された合
成ペプチドを０　、　１　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯバッフ
ァ、ｐＨ９゜６中に溶解又は懸濁せしめ、５０μｍ　ｇ
　／ウェルをイムロン２マイクロ力価ウェル（（Ｄｙｎ
ａｔｃｃｌ＋）中で、４℃で一昼夜培養した。ウェルを
空にし、燐酸塩バッファ生理食塩水（ＰＢＳ）及び０．
１％アジ化ナトリウム中の２００μｍｌの５％無脂肪分
乾燥ミルク（カーネー　ジョン）ウェルに加え、２時間
培谷した。ウェルを空にし、ＰＢＳ含Ｈ５％無脂肪分乾
燥ミルクと０．０５％ツイン２０（洗浄バッファ）とで
洗浄し、さらに、洗浄バッファ中のＩＩＴＬＶ−１４患
者又は通常の被験者からの１：５０希釈血清で１時間培
養した。ウェルを洗浄バッファ中でＸ３洗浄し、さらに
ラビット抗−人１ｇＧの１：１５０希釈（Ｈ＆　Ｌ　ｃ
ｈａｉｎ　５ｐｅｃｌＮｃ、Ｃｏｏｐｅｒ　Ｂｉｏｍｃ
ｄｌｃａｌ、Ｍａｌｖｃｒｎ、ＰＡ）で、洗浄バッファ
（５０μｍ）中の全ての血清を３０分間培養した。前と
同様に洗浄し、さらに５０μｌ洗浄バツフア中の１０５
の１２５１−ラベル化蛋白Ａ（シグマ）で、３０分、２
３℃で培養した。前と同様にウェルを洗浄し、ウェルへ
の放射活性結合をガムマカウンターで測定した。図示の
ように、平均ｃｐ■値の（Ｅ／Ｃ）（ｆｆｌｌ！ｌ工／
ｌ、）Ｊ！、実験（Ｅ　）　ＩＩＴＬＶ−１ｔ患者血清
及び通常の血清参照（Ｃ）で得られた。２．０より大き
な比は正と考えられる。

実施例３ ＋１ＴＬＶ−１及びＩＩＴＬＶ−１ｔ　１．：対する抗
体の検出ｐ１９のＣ末端またはその蛋白のＩＩＴＬＶ−
１工ンコード合成ペプチド５Ｐ−７１　（Ｐｒｏ−Ｔｙ
ｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ）と、ｇｐ４６からの表１の
合成ペプチド８ｐ−４Ａを混合し、上述のＲＩＡ中のマ
イクロ力価ウェル（マイクロ力価ウェル当りの各ペプチ
ドは１０〜５０μｇ）に加えた。そしてＨＴ　Ｌ　Ｖ−
１抗体の検出に使用した。また、Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａ
ｔ−（ｉＩｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌ
ｎ−Ｇｙｓ−ＰｈｅまたはＩＩＴＬＶ−１１ｐ１９のＣ
末端からのアミノ酸配列を含むその蛋白質を上述のよう
にマイクロ力価ウェル（ウェル当りＩＯ〜５０μｇ）に
加え、ＩＩＴＬＶ−１１１：対する抗体を検出するのに
使用した。

実施例４ 合成ペプチド及びＨＴＬＶ−１エンベロープ糖蛋白質に
対する抗−合成ペプチド免疫血清の活性＋１ＴＬＶ−１
エンブーエンコード（ｅｎｖ−ｅｎｃｏｄｅｄ）合成ペ
プチド（ＩＩＴＬＶ−１特定ペプチド）を前述のように
テタナストキソイドに共有的に結合し、ラビットの免疫
化に使用した。フロイント完全補助薬中の５ｍｇのペプ
チドＴＴ結合で１免疫し、次いで、フロインド不完全補
助薬中の結合物で更に週１回のおしあげ（ブースト）を
２回おこない、その後集めて、免疫ペプチドに対する活
性度の試験をおこなった（表４）。

表４ ＋１ＴＬＶ−１合成ペプチド（ＳＰ）１−６に対するラ
ビット血清の活性度 抗体　　　　　　　　　　抗原 合成ペプチドに対する抗ペプチド免疫血清の活性度は、
放射免疫分析中で決定され（二重ウェル）、その結果は
免疫又は前免疫血清で得られた平均ｃｐ１値の比として
表現された。抗ペプチド免疫血清は、免疫ペプチドに対
して高い割合で特異性を持っていた（アンダーラインの
値）。

＋１ＴＬＶ−１合成ペプチド１−６に対する免疫血清は
、最小力価がＲＩＡ中で１７２０００を持つ免疫ペプチ
ドに対して高い度合の特異性で反応した。免疫プロット
分析で試験した時、ペプチド１．３゜４．４Ａ及び６に
対する免疫血清は、ＨＴＬＶ−１ｇｐ４Ｂ及び／又はｇ
ｐ８３と反応した（それぞれ２，４，６゜８．１０レー
ン）一方、前免疫血清（１，３，５゜８．９レーン）は
反応しなかった。抵抗＋１ＴＬＶ−１工ンベロープモノ
クロナル抗体ＩＣ１１は、正の参照として使用されるが
、これもまたｇｐ４Ｂとｇｐ６３と反応した（１２レー
ン）。これに対して負の参照の腹水液（Ｐ３Ｘ６３）は
、反応しなかった（１ル−ン）（第２図）。免疫プロッ
ト中のｇｐ４６に対する抵抗ペプチド免疫血清の活性度
は、相当するペプチドで予備培養した免疫抗体で特に抑
制される（第３図）。抗ペプチド抗体のｇｐ４Ｂに対す
る拘束力の特異性を評価するために、ＩＩＴＬＶ−１ｇ
９４Ｂペプチド５ｐ−８に対する免疫血清を２００μの
５ｐ−８（レーン１）または５ｐ−５（レーン２）で予
備培養した。そして免疫プロット分析中でｇｐ４Ｂと反
応した。合成ペプチド５ｐ−６は、完全に抗５ｐ−８抗
体がｇｐ４Ｂと結合するのを抑制した（レーン１）。一
方、５ｐ−ｅは、抑制しなかった（レーン２）。レーン
３に示すように、通常のラビット血清抗体（プラスペプ
チドＳＰ−＆）がｇｐ４Ｂに対して活性度が欠けている
。このデータは、キャリア分子に結合されたときｌｌＴ
１．、Ｖ−１ｇｐ４Ｂからのペプチド（ＩＩＴＬＶ−１
特定ペプチド）は、１１Ｔ１．Ｖ−１ｇｐ４Ｂに対する
抗体を上昇するのに使用できることを示しＣいる。

実施例５ Ｓトロピカル　スバスティソクバラバレシス（ＴＳＰ）
に関連するＩＩＴＬＶ−１を持った患者ＡからのＨＬ　
Ａ、　−Ｄ　Ｒ２限定シトトキシツクＴ細胞ラインＰ−
１０１，：、Ｊｌ、す、認識されたＩＩＴＬＶ−１ｇｐ
４Ｂのエピトープのマツピング 第４Ａ図及び４Ｂ図に示す結果は、シャコブソンらの手
法を用いて得られた（ｖｌｒａｌ　１ｍｍｕｎｏ１．（
ｉ９８７／ｊ、９８ｇ）　　Ｉ　二１５３−１６２）　
。

第４Ａ図：、轡者ＡからのＥＢＶ変形Ｂ細胞をＩＩＴＬ
Ｖ−ｉエンベロープ合成ペプチド１−１１（表１）をｌ
ｌＴ１、Ｖ〜１のｅｎｖ−エンコード合成ペプチド１．
−１１（表１）で培養し、Ｃｒでラベルし、ターゲット
として使用して、オウトロジャス、クローン、サイトド
キシツクＴ細胞ラインＰ−１０でペプチド特定殺傷をア
クセスするようにした。ペプチド５Ｐ−４Ａでコートさ
れたＢ細胞（ムーム）及びＨＴＬＶ−１で感染さたオウ
トロジヤスＴ細胞（・−・）の両方を患者Ａからのサイ
トド牛シックＴ細胞ラインＰ−１０で殺した。処理して
いないオウトロジャスＢ細胞（０−０）又は残りの１１
のペプチドのいずれかでコートされたＢ細胞（△−Δ）
は殺されなかった。

第５Ｂ図：ＨＬＡ−ＤＲ２でサイＩ−１−キシツクＴ細
胞ラインＰ　−１，Ｏとマツチした二つのへチオロジア
スＢ細胞ライン（・−・、ムーム）、およびＨＬＡ−Ｄ
Ｒ２でミスマツチした一つのＢ細胞ライン（〇−〇）を
ペプチド５Ｐ−４Ａでコートし、上述のようにサイトド
キシティー分析中のターゲットとして使用した。ペプチ
ド４Ａでコートされ、ｌ１１４＾−ＤＲ２とマツチした
Ｂ細胞は、Ｔ細胞ラインＰ−１０で殺された、これに足
して５Ｐ−４ＡでコートされたＩＩＬ＾−ＤＲ２ミスマ
ツチＢ細胞では殺傷はすこししか観察されなかった。

これらの研究は、ペプチド５Ｐ−４Ａ（アミノ酸　１９
０−２０９）で規定されたＢＴＩ、Ｖ−１ｇｐ４Ｂの領
域力月ＩＬへ−ＤＩ？２限定サイトキシツクＴ細胞ライ
ンにより同定されたエピトープを含んでいることを示し
ている。

実施例６ ＨＴＬＶ−１のエンブーエンコード合成ペプチドに対す
る免疫血清を持つベシキュラ　ストマティティス　ビー
ルス（ＶＳＶ）／人Ｔ細胞ロイケニミアビールス　タイ
プＩ　　（ＩＩＴＬＶ−１）ブシュードタイプ粒子の中
性化 ラビットを５ｍｇの合成実質的にフロイントの完全（日
１）及び不完全（日８，１５，２２．及び２９）？Ｉ［
ｉ助薬中のベプチドーテタナストキソイド結合−で免疫
化した。

＋１ＴＬＶ−１のエンブ遺伝子エンコード合成ペプチド
のアミノ酸配列を表１に示す。

データは、プラク形成が誘導されたＶＳＶ（ｌ！Ｔ１、
Ｖ−１）のパーセント抑制として与えられている。

ＶＳＶゲンム及びＩｆ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−１エンベロープ糖
蛋白質を含むブシュードタイプの粒子を滴定し、分ｔｆ
？当り１５０−２００プラクを賦与した。この分析は、
ドクター　バウル　クラファンによってクラファンらの
手順に従ってなされたｏ　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｅａ
ｄ、Ｓｃｉ、Ｕｓ＾８１：２８Ｈ，１９８４に文書化さ
れた全ての内容はここに引用される。

表５ ラビット当　　　　ペプチドに対する免疫血清血清　　
　。　。　ｏｏ　　ｏｏｏ　　。　ｏｏｏ。

４５０　５０　５０　０　０　０　０　　ＮＤ　　ＮＤ
　　ＮＤ　　ＮＤ　　ＮＤ５ｏ＞８ｏ＞ａｏｏ＞５ｏｏ
ｏ　　ｏ　　ｏ　　ｏ　　ｏ　　。

上記の発明は、明確にし及び理解のために実施例の方法
で詳細に説明した。当業者にとってこの開示内容を読む
ことにより、ＨＴＬＶ−ｉ用のワクチンはさらに少なく
ともＩＩＴＬＶ−１のトランスメンブレン蛋白に親水性
エンベロープ領域に相当する少なくとも一つの合成ペプ
チドを備え（好ましくは、ＹＡ＾ＱＮＲＲｃ＋、ｏＬＬ
ＦＷＥＱｃｃＬｃ　（ｇｐ２ｔのアミノ酸３７４−３８
８）　　：ＣＩ？ＦＰＮＩＴＮＳｌｌＶＰＩＬＱＥ（７
ミ／酸３９９−４１５）　　；　ＣＰＩＬＱＩＥＲＰＰ
ＬＥＮＲ（アミノ酸４１１−４２２）　　；　ＣＩＬＲ
ＱＬＲＨＬＰＳＩ？ＶＲＹ　Ｐ　ＩＩ　Ｙ　Ｓ　　（ア
ミノ酸４６２−４８０）　　；又は（Ｃ）ＲＹＰＩ（Ｙ
ＳＬＩＫＰＥＳＳＬ　　（アミノ酸４７５−４１１１８
）。形態や詳細の各種組合わせを発明の範囲を逸脱しな
い範囲でおこなうことは自明である。

ここで引用した全てのドキュメントは、参照として組込
まれ、拠り所とされる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ｇｐ４Ｇ　　エンブエンコード合成ペプチド
に対するＨＴＬＶ−１＋患者からの抗体の反応性を示す
図、　第２図は免疫プロット分析でのＨＴＬＶ−１のｇ
９４Ｂ及びｇｐｅａエンベロープ糖蛋白質に対する抵抗
合成ペプチド免疫血清の反応性を示す図、第３図は免疫
プロット分析でのＩＩＴＬＶ−１ｇｐ４Ｇに対する抵抗
ペプチド抗体反応性の特定抑制を示す図、第４Ａ図及び
第４Ｂ図は、トロピカルスバスティクバラパレシス（Ｔ
ＳＰ）に関連するＩＩＴＬＶ−１を持った患者Ａからの
ＨＬＤ−ＤＲ２限定サイトキンツクＴ細胞ライうＰ−１
０により認識されたＩＩＴＬＶ−！ｇ９４Ｇのエピトー
プのマツピングを示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、基本的に長さが約２５単位までのアミノ酸配列から
   なる合成親水性ペプチドからなり、Ｂリンパ球で認識さ
   れたＨＴＬＶ− I 又はＨＴＬＶ− I I のエンベロー
   プ糖蛋白質の少なくとも一つの抗原決定素に相当し、上
   記ペプチドは、キャリア分子に共有的に結合された時、
   哺乳類内においてＨＴＬＶ− I 又はＨＴＬＶ− I I
   のｇｐ４６又はｇｐ６３エンベロープ糖蛋白質に対して
   高力価の抗体の生産を誘導することができるものである
   合成親水性ペプチド。 ２、上記アミノ酸配列は、ＨＴＬＶ− I のエンベロー
   プ糖蛋白質の少なくとも一つの抗原決定素に相当する特
   許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ３、上記アミノ酸配列は、ＨＴＬＶ− I I のエンベロ
   ープ糖蛋白質の少なくとも一つの抗原決定素に相当する
   特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ４、上記アミノ酸配列は、ＶＳＳＹＨＳＫＰＣＮＰＡＱ
   ＰＶ；（Ｃ）ＰＨＷＴＫＫＰＮＲＮＧＧＧＹＹＳＡＳＹ
   ＳＤＰ；（Ｃ）ＬＮＴＥＰＳＱＬＰＰＴＡＰＰ（Ｙ）；
   及びＳＳＰＹＷＫＦＱＨＤＶＮＦＴＱＥＶＳＲＬＮ（Ｃ
   ）；（Ｃ）ＬＩＰＨＳＮＬＤＨＬＥＰＳＩＰＷＫＳＫ（
   Ｙ）；（Ｙ）ＬＰＦＮＷＴＨＣＦＤＰＱ（Ｃ）；（Ｃ）
   ＰＰＦＳＬＳＰＶＰＴＬＧＳＲＳＲＲの配列及び免疫遺
   伝学的にこの配列と匹敵する配列から選択された特許請
   求の範囲第２項記載のペプチド。 ５、上記アミノ酸配列は、ＳＳＹＨＳＳＰＣＳＰＴＱＰ
   ＶＣ；ＣＴＷＮＬＤＬＮＳＬＴＴＤＱＲＬＨＰＰＣ；Ｈ
   ＷＩＫＫＰＮＲＱＧＬＧＹＹＳＰＳＹＮＤＰＣ；（Ｃ）
   ＳＳＰＳＷＫＦＨＳＤＶＮＦＴＱＥ；（Ｃ）ＳＥＰＴＱ
   ＰＰＰＴＳＰＰＬＶＨＤＳＤＬＥＨ；（Ｃ）ＳＬＡＰＶ
   ＰＰＰＡＴＲＲＲＲ；及びこの配列に免疫遺伝学的に匹
   敵する配列から選択された特許請求の範囲第３項記載の
   ペプチド。 ６、ＨＴＬＶ− I 又はＨＴＬＶ− I I のｇｐ４６又
   はｇｐ６３エンベロープ糖蛋白質に対する高力価の生産
   を哺乳類内で誘導することができる免疫原の結合物であ
   り、この結合物は、（ｉｉ）合成親水性ペプチドに共有
   的に取付けられた（ｉ）キャリア分子を備え、このペプ
   チドは、基本的に長さが約２５までのアミノ酸配列から
   なり、これはＢリンパ球で認識されたＨＴＬＶ− I 又
   はＨＴＬＶ− I I のエンベロープ糖蛋白質の少なくと
   も一つの抗原決定素に相当する結合物。 ７、上記キャリア分子は、ＨＴＬＶ− I 又はＨＴＬＶ
   − I I のＴ細胞エピトープに相当するアミノ酸配列を
   備えている特許請求の範囲第６項記載の接合物。 ８、上記キャリア分子は、ＬＨＥＶＤＫＤＩＳＱＬＴＱ
   ＡＩＶＫ；ＱＰＰＣＰＮＬＶＳＹＳ；ＤＬＱＤＬＬＱＹ
   ＬＣＳＳＬＶＡＳＬ；ＲＶＮＥＩＬＨＩＬ；ＫＤＩＳＨ
   ＬＴＱＡＩＶＫＮＨＱＮＩＬＲＶＡＱからなるペプチド
   の群から選択されている特許請求の範囲第７項記載の結
   合物。 ９、上記キャリア分子はテタナストキソイドである特許
   請求の範囲第６項記載の結合物。 １０、上記キャリア分子は、上記ペプチドに少なくとも
   一つのスペーサ分子をとおして共有的に結合されている
   特許請求の範囲第６項記載の結合物。 １１、上記スペーサー分子は、ジペプチドグリシン−グ
   リシンからなる特許請求の範囲第１０項記載の結合物。 １２、上記アミノ酸配列は、ＨＴＬＶ− I のエンベロ
   ープ糖蛋白質の少なくとも一つの抗原決定素に相当する
   特許請求の範囲第６項記載の結合物。 １３、上記アミノ酸配列は、ＨＴＬＶ− I I のエンベ
   ロープ糖蛋白質の親水性領域に相当する特許請求の範囲
   第６項記載の結合物。 １４、特許請求の範囲第１２項に係わる少なくとも一つ
   の結合物の遺伝子学的に有効量を上記哺乳類に施す哺乳
   類中でＨＴＬＶ− I に対する免疫を生産する方法。 １５、特許請求の範囲第１３項に係わる少なくとも一つ
   の結合物の遺伝子学的に有効量を上記哺乳類に施す哺乳
   類中でＨＴＬＶ− I I に対する免疫性を生産する方法
   。 １６、特許請求の範囲第１２項に係わる少なくとも二つ
   の結合物を備えたＨＴＬＶ− I に対する哺乳類内での
   保護免疫応答を作ることができる遺伝学的な集合物であ
   って、上記結合物はそれぞれ少なくとも一つに上記結合
   物の他のものが共有的に結合されている。 １７、特許請求の範囲第１２項に係わる少なくとも二つ
   の結合物を備えたＨＴＬＶ− I I に対する哺乳類内で
   の保護免疫応答を作ることができる遺伝学的な集合物で
   あって、上記結合物はそれぞれ少なくとも一つに上記結
   合物の他のものが共有的に結合されている。 １８、ＨＴＬＶ− I に対する抗体の生物学的な試料中
   での存在及び力価を決定する方法であって、（ｉ）上記
   試料で特許請求の範囲第２項のペプチドを接触させる工
   程と、 （ｉｉ）上記試料中の高ＨＴＬＶ− I 抗体を上記ペプ
   チドと複合せしめ、 （ｉｉｉ）上記ペプチドと上記抗体との間の複合物の形
   成を測定する、 方法。 １９、ＨＴＬＶ− I I に対する抗体の生物学的な試料
   中での存在及び力価を決定する方法であって、（ｉ）上
   記試料で特許請求の範囲第３項のペプチドを接触させる
   工程と、 （ｉｉ）上記試料中の高ＨＴＬＶ− I I 抗体を上記ペ
   プチドと複合せしめ、 （ｉｉｉ）上記ペプチドと上記抗体との間の複合物の形
   成を測定する、 方法。 ２０、ＨＴＬＶ− I I に対する抗体の哺乳類の血清中
   での存在及び力価を決定する方法であって、（１）ペプ
   チドＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
   −Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ又はその免
   疫学的反応部分を上記血清に接触させる工程と、 （ｉｉ）上記抗体と上記ペプチドとの間で複合物を形成
   し、 （ｉｉｉ）上記ペプチドと上記抗体との間の複合物の形
   成を放射免疫分析又は免疫吸収剤に結合された酵素によ
   り測定する、 方法。