JPH0349648A - 細菌毒素中和能を付与した育児用粉乳 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 亙１ユｎむＬ生顆 本発明は、コレラ菌、毒性大腸菌、サルモネラ菌等によ
り産生される細菌性エンテロトキシンを中和する能力を
有する特定の成分を配合することよりなる、細菌毒素中
和能を付与した育児用粉乳に関する． ｋ速１ｕも釦狂箆量 乳児期、特に新生児期の乳児は免疫不全状態にあるので
感染症に罹患し易く、さらには、コレラ菌、毒性大腸菌
、サルモネラ菌等が産生ずる細菌毒素により下痢症を生
じ易いといわれている。

一Ｓに、母乳中には免疫グロブリン、補体、ラクトフェ
リン及びリゾチーム等の感染防御物質が含有されていて
、これらの物質が乳児の感染症を防御するのに有効に作
用することが知られている．したがって、従来、育児用
調製粉乳においては、母乳に含まれる上記ラクトフェリ
ン又はリゾチーム等を配合することにより、感染防御能
を付与している．しかしながら、上記配合による粉乳を
与えた人工栄養児は、母乳栄養児に比較していまだ感染
症に罹患し易く、更には、細菌毒素による下痢症をも生
じ易いといわれている。

その原因として、次のことが考えられる。

本来、牛乳中には、コレラ菌、毒性大腸菌、サルｔネラ
菌等の産生ずる細菌毒素の中和因子としてのκ一カゼイ
ン、ラクトフェリン、シアリルラクトース等が含まれて
いるものの、その量は母乳に比べて著しく少なく、更に
、牛乳を原料として育児用粉乳を製造する際、その製造
過程中の殺菌工程・ｔＪＦ，ＤＦ処理工程・脱塩工程等
において上記因子が一部除去あるいは失活される。更に
、在来の育児用粉乳ではその原料である牛乳威分を栄養
的に母乳成分に近づける目的でカゼインタンパク質の減
量と乳清タンパク質の増量が行われていることから、粉
乳中のκ一カゼインの量も減少するに至っている。この
ため、在来の育児用粉乳は、コレラ菌、毒性大腸菌、サ
ルモ不ラ菌等の産生ずる細菌毒素に対する中和能が母乳
に比べて著しく劣っている． ところで、最近、シアル酸を育児用粉乳に配合すること
が提案されたが（特開昭６１−１５２２３３号公報）、
これは、新生児の脳等の組織形威に関与するＮ−アセチ
ルノイラ逅ン酸の合或能を高めることを目的としたもの
である。また、高ｔＪ！類含有タンバク質を育児用粉乳
に配合することも知られているが（特公昭４０−２１２
３４号公報）、このものは主として乳児の腸内菌叢を占
めるビフィズス菌の発育を促進させることを目的とした
ものである。

上述のごとく、優れた細菌毒素中和能を付与した育児用
粉乳は、現在のところ未だ提供されていない． しよ゜と　る 本発明は、シアル酸結合ペプチド及び／又はシアル酸結
合オリゴ糖を配合することにより、優れた細菌毒素中和
能を有する育児用粉乳を提｛Ｊｊすることを課題とする
。

３　　　゛　るための 本発明は、シアル酸結合ペブチド及び／又はシアル酸結
合オリゴ糖を配合してなる細菌毒素中和能を付与した育
児用粉乳に関する。

本発明におけるシアル酸結合ペプチドは牛乳等の乳由来
のシアル酸結合蛋白質をプロテアーゼで処理して得られ
るものが好ましい． 乳からシアル酸結合蛋白質は公知の方法で得ることがで
きる。シアル酸結合蛋白質にはκ一カゼイン、ラクトフ
ェリン等がある．また、乳由来のシアル酸結合蛋白質と
しては、これらを含有する生乳、還元乳を用いてもよい
。

本発明では、このシアル酸結合蛋白質にプロテアーゼを
作用させ、得られた生戊物を分画することによってシア
ル酸結合ベプチドを分取することができる。

上記プロテアーゼには、エンドペブチターゼに属するも
のが用いられ、このような酵素としては、ペブシン、ト
リブシン、キモトリブシン、プロナーゼ、レンネット、
バンクレアチン、フイシン等がある。

酵素反応は、上記のシアル酸結合蛋白質をエンドベプチ
ターゼの至適ｐＨ、至適温度とし、エンドペプチターゼ
の１種または数種を加え、数十分〜数時間反応を行う． 得られた反応生成物の分画は、ゲル濾過、イオン交換ク
ロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等
の分画手段の１種もしくは２種以上を組合せて行う。

なお、本発明では、乳として牛乳以外に羊乳、山羊乳等
が用いられる。

シアル酸結合ベプチドのｌ種であるグリコマクロペプチ
ド（以下、ＧＭＰと略記する）の製法について述べると
次のとおりである。

κ一カゼイン、生乳、還元乳あるいはカゼインをｐＨ５
．５〜６．５に調整し、レンネットを蛋白質当り１／５
０００　−　１／５０　（重量）の割合で添加し、温度
３０〜４５゜Ｃで３０分〜３時間反応させ、得られた反
応液を加熱してレンネットを失活させ、４０゜Ｃに冷却
する。これに塩化カルシウム等をカルシウムとして５ｍ
モル以上添加するとＧＭＰ以外の威分が沈澱するので、
上澄を分取して濃縮し、必要に応じて透析等により脱塩
後、乾燥することによって高純度のＧＭＰを得ることが
できる．このＧＭＰの分子量は約８０００〜９０００で
あり、シアル酸が結合していることはＴＢＡ法によって
確認した。

シアル酸結合オリゴ糖としては、糖鎖の末端にシアル酸
を有するオリゴ糖であればどのようなオリゴ糖であって
も使用することができる。すなわち、化学的に合威され
たシアル酸結合オリゴ糖であってもよいしあるいは天然
物から抽出されたシアル酸結合オリゴ糖であってもよい
。このようなシアル酸結合オリゴ糖としては、例えば特
開昭５９１８１４９７号公報に開示された方法により得
られるシアリルラクトース、特開昭６１−１２６９５号
公報に開示されたシアル酸誘導体、さらにＣＤ，、ＧＭ
．、ＧＭ．等のガングリオシンド特有の糖鎖もこの目的
に使用し得る． これらのシアル酸結合オリゴ糖の内で上述のシアリルラ
クトースは乳中に大量に含まれており、本発明の目的か
ら特に好ましい。

本発明では、上記のようにして得られるシアル酸結合ペ
プチド、例えばＧＭＰ、あるいはシアル酸結合オリゴ糖
、例えばシアリルラクトースを単独あるいは混合して育
児用粉乳に添加する。

育児用粉乳への添加の手段は、育児用粉乳にこれらのシ
アル酸結合ベプチドあるいはシアル酸結合オリゴ糖を直
接添加し、混合してもよく、また育児用粉乳の原料のカ
ゼイン、ホエー等に水溶液の状態で加え乾燥を行っても
よい。

上記シアル酸結合ペブチド及びシアル酸結合オリゴ糖の
育児用粉乳に対する配合量は、シアル酸結合ベプチド単
独では３Ｂ重量％以上、またシアル酸結合オリゴ糖単独
でも３ｍｇ重量％以上を配合することが、母乳に近似し
た細菌毒素中和能を付与するうえで好ましい．また、両
者を併用して配合する場合には、両者の細菌毒素中和能
を勘案してそれらの配合比率・配合量を決めるとよい。

因に、これらのシアル酸結合ペプチド及びシアル酸結合
オリゴ糖は乳由来の物質であって、安全性の点で問題が
ないので上記配合量の上限には制限がない。

本発明でいう育児用粉乳には、 育児用調製粉乳、 未熟児用粉乳、フォローアソブξルク、治療用特殊粉乳
、その他の人工噛育に用いる粉乳類を包含する． 次に、シアル酸結合ペプチドとしてＧＭＰ、シアル酸結
合オリゴ糖としてシアリルラクトースをそれぞれ配合し
た育児用粉乳の細菌毒素中和能を試験した結果を示す。

〔コレラトキシン、毒性大腸菌エンテロトキシンによるチャイニーズハムスター卵巣細胞形態変化に対する阻止効果試験〕

（１）チャイニーズハムスター卵巣細胞形態変化活性測
定に用いるコレラトキシン、毒性大腸菌エンテロトキシ
ン濃度の決定 抗原性の異なる２種のエンテロトキシンＬＴ−１　　（
Ｃ　ＦＡ／　Ｉ　Ｅ．　ｃｏｌｔより得た）　、ＬＴ−
ＩＩ（Ｃ　Ｆ　Ａ／　ＩＦ　Ｅ．ｃｏｌｉより得た）を
産生ずる２種の毒性大腸菌（都立衛生研究所より分譲さ
れた血清型Ｈ−１０４０７−Ｐ株、Ｐｂ−１７６株）を
ＣＡＹＥ培地にて振盪培養した．この培養液を遠心分離
し、得られた上清を１／１０〜１／１０００まで段階的
に希釈し、それぞれの希釈液を氷上に置いたＬａｂ−Ｔ
ｅｋ８チャンバー（フローラボラトリーズ製）に入れた
。

またコレラトキシンＣＴ（リストバイオロジカルラボラ
トリーズ製〉についても同様に希釈し、Ｌａｂ−Ｔｅｋ
８チャンバー（以下８チャンバーと略記する）に入れた
．次いで８チャンバーの各穴にｌ％牛胎児血清を含むダ
ルベッコ培地（ＦＣＳ／ＤＭＥＭ）を４４０ａｌｌ入れ
た。コレニ１０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭ中で培養したチャイ
ニーズハムスター卵巣Ｋｌ細胞（ＣＨＯ−Ｋｌ細胞（Ａ
　Ｔ　Ｃ　ＣＣＣＬ６））を５０００ｃａｌ　Ｉｓ／一
になるように１０％ＦＣＳ／ＤＭＥＭ中に懸濁させた細
胞懸濁液を５０μｌ入れ、５％ＣＯ８濃度のインキュベ
ーター中で３７”Ｃで一夜培養した．その後培地を捨て
、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（−））でチャンバー
内を洗浄し、さらにチャンバー内の細胞をメタノールに
１０分間浸し、固定し、ギムザ染色液で細胞を染色し、
風乾した． 顕微鏡により、一つの試料について２００〜４００個の
細胞を観察し、紡錘型に変形した細胞数の割合を数えて
各毒素の各濃度当りのＣＨＯ−Ｋｌ細胞の形態変化率を
算出した。

ＣＴでは１０μｇｏｄ、ＬＴ−１，ＬＴ−Ｉｔでは培養
上清そのものでＣＨＯ−Ｋｌｍ胞を少くとも７０％以上
形態変化させ得ることが判明した．以下の実験では、こ
の濃度の各毒素を用いることとした．（２）　　ＣＨＯ
−Ｋｌ細胞形態変化阻止活性の測定次の検体Ａ−Ｃにつ
いてエンテロトキシンに対する細胞形態変化の阻止活性
を確認した。

Ａ　母乳（初乳、泌乳１ケ月時） Ｂ　育児用粉乳１３％調乳液 Ｃ　育児用粉乳１３％調乳液にシアル酸結合ベプチドと
してＧＭＰ、シアル酸結合オリゴ糖としてシアリルラク
トース（ＳＬ）をそれぞれ粉乳当り１、３、１０ｍｇ重
量％添加したもの １０ｕｇ／ｄのＣＴおよびＬＴ−１．．ＬＴ一ＩＩの培
養上清をそれぞれ１０μｌずつ、氷上に置いた８チャン
バーに入れ、これに各検体を必要濃度にＰＢ　Ｓ　（−
）に溶解した液を６０μｌ加え振盪し反応させた． その後各チャンバーにｌ％ＦＣＳ／ＤＭＥＭを４４０１
！，ＣＨＯ−Ｋｌ細胞懸濁液５０ｐｌ入れ振盪し、５％
Ｃ　Ｏ　ｔインキュベーター中で一夜培養した．その後
メタノール固定、ギムザ染色を行い、形態変化率を測定
し，た。ＣＴ，ＬＴ−１、ＬＴ一■各毒素に対する各検
体の形態変化率を第１〜３図に示す。ＧＭＰ及びＳＬを
添加した青粉（育児用粉乳）は無添加育籾にくらべて形
態変化阻止効果が高く、その阻止率はＧＭＰ及びＳＬの
添加量が多い程高く、次第に母乳の阻止率に近くなる。

この結果から、ＧＭＰ，シアリルラクトース配合育児用
粉乳とも母乳と同様にＣＨＯ−Ｋｌｍ胞に対するＣＴ，
ＬＴ−１，ＬＴ−Ｈの毒性を中和していることが確認さ
れた． 次に本発明の実施例を示す。

実施例ｌ ホエー粉５２．７ｋｇ、ビタξンとミネラル成分１ｋｇ
及びＧＭＰ３ｇを水５００ｋｇに熔解し、この溶液に脱
脂乳２３９ｋｇを加え、さらに植物油２３．９ｋｇを混
合し、均質化した。

得られた溶液を殺菌し、常法により濃縮、乾燥して粉乳
１００ｋｇを得た。

実施例２ カゼイン６．８ｋｇ、ホエー粉７０．６ｋｇ、ビタミン
と藁ネラル戒分１ｋｇ及びシアリルラクトース３ｇを水
７００Ｋｇに溶解した後、これに植物油２３．９ｋｇを
混合して均質化した。得られた溶液を殺菌し、常法によ
り濃縮し、乾燥して粉乳１００ｋｇを得た。

発亙旦盆来 本発明によると、シアル酸結合ベプチド及び／又はシア
ル酸結合オリゴ糖を育児用粉乳に配合することによって
コレラ菌、毒性大腸菌、サルモネラ菌等によって産生さ
れる細菌性エンテロトキシンを中和して無毒化すること
ができる。この結果、これらの細菌の毒素によって惹起
される人工栄養児の下痢症を有効に防止することができ
る。しかも安全性の面からも何ら問題がない。したがっ
て、優れた利点を有する育児用籾乳を提供することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、コレラトキシン誘導性のＣＨＯ−Ｋｌ細胞形
態変化に対する阻止効果を、第２図は、毒性大腸菌由来
ＬＴ−１誘導性のＣｌ−１０−Ｋｌ細胞形態変化に対す
る阻止効果を、第３図は、毒性大腸菌由来ＬＴ一■誘導
性のＣＨＯ−Ｋｌ細胞形態変化に対する阻止効果をそれ
ぞれ示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）シアル酸結合ペプチド及び／又はシアル酸結合オ
   リゴ糖を配合してなる細菌毒素中和能を付与した育児用
   粉乳。
2. （２）シアル酸結合ペプチドが牛乳由来のグリコマクロ
   ペプチドである請求項（１）に記載の育児用粉乳。
3. （３）シアル酸結合オリゴ糖がシアリルラクトースであ
   る請求項（１）に記載の育児用粉乳。