JPH0338593A - 新規オリゴ糖とその製造法及び利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 童栗圭坐皿里分立 本発明は、生体内におけるビフィズス菌に対して優れた
増殖作用を有し、また、食物繊維、乳糖ならびにラクチ
ュロースと併用して摂取した場合、顕著な便秘改善作用
を示す新規なオリゴ糖とその製造法及び利用に関する。

丈来二技徨姓豊量 近年、生体内における有用菌として知られているビフィ
ズス菌の増殖を促進する物質（摩下ビフィズス菌増殖因
子と称する）について多くの研究がなされており、その
増殖因子としてオリゴ糖が注目されている。

このようなオリゴ糖としてガラクトシルラクチュロース
の増殖活性が報告されており、その製造法として、ラク
チュロースにβ−グルコシダーゼを反応させてガラクト
−ス転移反応を行わせる方法が提案されている（特公昭
６３−９４９８７）。すなわち、この方法によると、下
記式で表わされるオリゴ糖が得られる。

β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−β−０−ガ
ラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ−フラクトース本発
明者は、ビフィズス菌増殖作用を有するオリゴ糖につい
て検討した結果、ラクチュロースにβ−グルコシダーゼ
を作用させることにより、上記増殖作用に加えて便秘改
善にも利用し得る新規オリゴ糖を見出し、本発明をなす
に至った。

ｌが”しようとする晋 したがって、本発明は、ビフィズス菌増殖作用に加えて
さらに便秘改善作用も有する新規オリゴ糖とその製造法
、さらにはこれらの作用を利用したビフィズス菌増殖促
進組成物及び便秘改善組成物を提供することを課題とす
る。

課　を”するための 本発明に係るオリゴ糖は、下記の式（１）及び（ＩＩ）
で表わされる。

０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→３）−〇−β
−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ−フラクト
ース（１）０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→３
）−〇−β−Ｄ−ガラクトビラ、ノシルー（１→３）２
０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（］叫４）−〇−フ
ラクトース（ＩＩ）次に、これらのオリゴ糖の物性値を
示す。

（イ）分子量 式（１）・−・−５０４ 式（ｎ）−・−・−６６６ （ロ）色調 乾燥、粉末化したものはいずれも白色を呈する。

（ハ）酸性、塩基性及び中性の区別 いずれも中性を示す。

（ニ）溶解性 いずれも水に可溶性であるが、ベンゼン、クロロホルム
、アセトンに難溶である。

（ホ） 呈色反応 （へ） （ト） 硝酸銀反応　　　　　　　　陰性（−）アンスロン硫酸
反応　　　　陽性（＋）ニンヒドリン反応　　　　　陰
性（−）ビユレット反応　　　　　　陰性〈−〉構成糖 本発明に係るオリゴ糖をそれぞれ０．５Ｎ−ＨＣＩによ
り１００℃の温度で２４時間加水分解して得られる生成
糖のモル比は、ガラクトース：フラクトース−２＝１で
あることから２分子のガラクトースと１分子のフラクト
ースから成るオリゴ糖と、ガラクトース：フラクトース
−３：ｌであることから３分子のガラクトースと１分子
のフラクトースから成るオリゴ糖であることが確認し得
る。

構成糖及びオリゴ糖の結合Ｂ＋１ 本発明に係るオリゴ糖をそれぞれ高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）もしくは活性炭カラムクロマト
グラフィーにより分離猜製した後、常法によりメチル化
分析した結果、表１に示す結合態様が確認された。

表　　１ 注）　Ｇａｌ　はガラクトースを示す。

（チ〉β−配位 本発明に係るオリゴ塘は、β−グルコシダーゼの作用に
よりガラクトースとフラクトースを生成することから、
β配置であることが確認し得る。

上記（イ）乃至（チ〉に示した物性に鑑み、本発明に係
るオリゴ糖は前記式（Ｉ）及び（ｎ）でそれぞれ表わさ
れるものであると同定し得る。

次に、本発明に係るオリゴ糖の製造方法について説明す
る。

本オリゴ糖は、ラクチュロースもしくはラクチュロース
含有物にβ−グルコシダーゼを作用させて、ラクチュロ
ース分子中のガラクトース残基に転移反応を行わせるこ
とにより得ることができる。

ここで出発物質として用いるラクチュロースもしくはラ
クチュロース含有物としては市販のラクチュロースまた
はラクチュロースシロップなどのラクチュロース含有物
を例示し得る。

また、これらの出発物質に作用させるβ−グルコシダー
ゼの起源について特に限定されるものではなく、スィー
トアーモンドから得られた市販のβ−グルコシダーゼを
例示できる。更に、高純度に精製された酵素ばかりでな
く、粗酵素を用いる事もできる。

本発明では、出発物質としてラクチュロースもしくはラ
クチュロース含有物を５〜８０重景％のラクチュロース
濃度に調製した溶液を用い、β−グルコシダーゼを１〜
１０００単位／−の酵素濃度で添加し、ｐ１１３〜８．
１０〜６０℃の温度で１時間乃至数日間、酵素反応を行
うことが好ましい。

上記の酵素反応によりガラクトース転移反応が起り、ガ
ラクトシルラクチュロースが生成する。

このようにして生成したガラクトシルラクチュロースは
、９０℃以上の温度で１〜５分間加熱して酵素を失活さ
せた後、通常行われるオリゴ糖の分離、精製法に従って
、効率よく調製することができる。

上述のようにして得られるオリゴ糖は、既に言及したご
とく、生体内のビフィズス菌に対して優れた増殖作用を
有し、また食物繊維や乳糖等と併用して摂取すると顕著
な便秘改善作用を示すので、ビフィズス菌増殖促進剤及
び便秘改善剤の有効成分として利用することが可能であ
る。

次に、本発明に係るビフィズス菌に対する増殖促進効果
及び便秘改善効果を試験した結果を示す。

■ビフィズス菌に対する増殖試験 試験方法 １０匹を１群とするカニクイサルを供試動物として用い
、その各々に乳糖を５重量％添加した市販育児用粉乳を
５週間与えた後、本発明による糖アルコール（粉末形態
）を５重量％添加した育児用粉乳を更に３週間与え、そ
の間各サルの糞便を採取して便中のビフィズス菌の割合
を測定した。結果は添付の図面に示すとおりである。

図にみられるとおり、乳糖を添加して与えた期間中の糞
便中のビフィズス菌の割合に比べ、本発明によるオリゴ
糖を添加して与えた期間中の糞便中のビフィズス菌の割
合は著しく上昇している。

すなわち、本発明によるオリゴ塘は生体内におけるビフ
ィズス菌の増殖促進に極めて優れた効果を奏するもので
あり、また、人間の腸管内に生育する種々のビフィズス
菌、例えばビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィド
バクテリウム・プリーベ、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダム、ビフィドバクテリウム・アドレスセンチイス、
ビフィドバクテリウム・インファンティス等の広範囲な
ｆｉｉＭのビフィズス菌に対して高い増殖活性を示すこ
とが認められる。

したがって、本発明によるオリゴ糖は、粉乳、発酵乳の
ごとき乳製品に配合したり、また、整腸剤のような薬剤
の成分として添加して用いることができる。

因に、本発明によるオリゴ糖を２重量％添加した乳飲料
を調製し、これを健康成人３０名に投与したところ、こ
れらの糞便中の全菌数に占めるビフィズス菌の比率の増
加は、乳糖を２重量％を添加した乳飲料を同様に投与し
た場合に比較して約２倍であることが認められた。

■便秘改善試験 試験方法： 上記により得たオリゴ糖粉末を、日常的に便秘ぎみを訴
える健康な老人２０名を４名づつの５つのグループに分
け、試験区胤ｌ乃至Ｍ５として、下記割合の量を投与し
た。

拭慧区　　　　　土１１藍授与且（ｇ）磁１５ 臘２４ １１ｈ３　　　　　　　　３ ＮＩ１４（対照区）　　　２ 胤５　（対照区）　　　０ なお、各試験区ともに、上記量のオリゴ糖をそれぞれ１
日１回の割合で２ｉ！！間投与して、投与前の２週間と
投与中の２週間における排便回数及び各排便毎の糞便の
硬さを官能的に評価した。

結果は表２に示すとおりである。

表 注）排便回数は１人当りの２週間の平均を示す。

糞便の硬さは１人当りの排便毎の平均で示し、表中の数
字は下記５段階で示す。

非常に軟らかい　　　　５点 軟らかい　　　　　　　４点 普通　　　　　　　　　３点 硬い　　　　　　　　　２点 非常に硬い　　　　　　１点 表２にみられるとおり、本発明にょるオリゴ糖を投与し
たグループでは３ｇ以上の投与において排便回数の顕著
な増加と糞便の軟化が認められた。

因に、対照区では排便回数の増加及び糞便の軟化はほと
んど認められなかった。

上述したとおり、本発明によるオリゴ糖の単独投与によ
り顕著な便秘改善の効果が認められるようになる。そし
て、このような効果は、ヒト小腸倣絨毛に存在するβ−
グルコシダーゼが大きいため、本発明によるオリゴ糖は
小腸で分解されずに大腸まで到達し、その結果、大腸内
の浸透圧が高くなって糞便を軟化して便秘を改善するも
のと推定される。

先１ｊ九里 以上述べたとおり、本発明に係るオリゴ糖は、ビフィズ
ス菌に対して優れた増殖促進効果を示し、さらに、便秘
改善効果についても排便回数の増加及び糞便の軟化をも
たらすという優れた効果を示す。

以下に実施例を示して本発明によるオリゴ糖の調製につ
いて具体的に説明する。

実施例 土１１且坐且製 ラクチュロース１０ｋｇを温水１５ｋｇに溶解した溶液
にクエン酸を加えてｐＨを５．０に調整したものに、β
−グルコシダーゼｓｏ　、　ｏｏｏ単位を加え、４０℃
の温度で１０時間反応させた。得られた反応混合液を１
０５℃の温度で２秒間加熱して酵素を失活させた。

次いで、この反応混合液２ｋｇを活性炭−セライ１−　
（２：　１）のカラム（φ２０ｃｓ　Ｘ　５０ｃｓ＋）
に通してラクチュロースと転移オリゴ糖を吸着させた０
次いで、１５ｋｇの水をカラムに通して単糖と未吸着の
ラクチュロースを溶出し、除去した後、５％エタノール
２０ｋｇをカラムに通して吸着したラクチュロースを完
全に溶出し、除去した。

次に、４０％エタノール１０ｋｇをカラムに通して得ら
れた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥してオリゴ１１９５
重量％以上を含む粉末１００ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

添付図は、本発明によるオリゴ糖のビフィズス菌に対す
る増殖試験をカニクイサルについて行つた結果を示した
ものである。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）式（ I ） ０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−０−β
   −Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ−フラクト
   ース（ I ）で表わされるオリゴ糖。
2. （２）式（II） ０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−０−β
   −Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→３）−０−β−Ｄ−
   ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ−フラクトース（
   II）で表わされるオリゴ糖。
3. （３）ラクチュロース又はラクチュロース含有物にβ−
   グルコシダーゼを作用させてガラクトース転移反応を行
   わせることを特徴とする式（ I ）及び式（II）を有す
   るオリゴ糖を製造する方法。
4. （４）式（ I ）及び式（II）を有するガラクトシルラ
   クチュロースから成るオリゴ糖を活性成分として含有す
   るビフィドバクテリウム菌の増殖促進組成物。
5. （５）式（ I ）及び式（II）を有するガラクトシルラ
   クチュロースから成るオリゴ糖を活性成分として含有す
   る便秘改善組成物。