JPH03240736A - クジン由来細胞賦活物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的） 本発明は、新規な細胞賦活物質（因子）の開発に関する
。

具体的には、マメ科植物（ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｓｅｌ
のクジンｆｓｏｐｈｏｒａ　ａｎｇｕｓｕｔｉｆｏｌｉ
ａ　５ｉｅｂ、　ｅｔ　Ｚｕｃｃ、ｌから抽出された水
溶性の成分による、細胞賦活作用物質に関する。

「産業上の利用分野」 本発明によるクジン由来の細胞賦活物質は１例えば２組
織培養、医薬品、医薬部外品、化粧品（人及びその他の
動物用）、加工食品（健康食品。

食品添加物）分野に用いることができる。又、動物用飼
料等にも添加して利用することも出来る。

「従来の技術」 クジン（苦参）は、古い書物「風土記」の中に多く記さ
れ、薬用として正倉院に保存されている一つであり、又
、「延喜式」典薬寮によると、諸国より多量の苦参が１
日本に貢進されたと記載されている。

更に、広用薬用植物大辞典には、クジンとも称して、漢
方で健胃、利尿、解熱、鎮痛及び駆除薬とすると開示さ
れており、古くから、解熱、利尿、温補の薬物として用
いられている。

苦参の薬理作用に関しては、例えば、山原らによれば、
クジン中に含まれるアルカロイド成分が、ストレス潰瘍
ラットに対して、潰瘍の発生を予防する効果を報告して
いる【文献所在：生薬の抗潰瘍作用に関する研究（第一
報）、生薬の抗潰瘍作用、生薬、２８．３３〜３７．ｔ
９７４］。

しかし、未だ、その他の作用については、十分研究され
ていないのが現状であり、特に、クジンから得られた抽
出物については、細胞賦活作用に関する研究は、他に見
当たらない。

「発明が解決しようとする課題」 動物細胞（細胞賦活物質）の増殖能についてみると、血
清培地を用いた場合において、細胞を低密度で培養する
と、細胞が死滅することが多く。

更に、無血清培地で行なうと、より顕著に細胞の死滅減
少を起こす為、細胞が非常に少ない状態からで６増殖し
てくるような物質が望ましい。

そこで１本発明者らは、動物細胞を低密度から増殖を可
能とする因子を得る目的で、又、広く自然界を検索（ス
クリーニング）する中で、生薬であるクジンの抽出物か
ら、強い細胞賦活作用を有することを見い出すに至った
。

［発明の構成１ 本発明による細胞賦活物質は、マメ科の植物クジンから
得られた、分子量が７００−１１００にある、水溶性成
分をもって構成される。

「課題を解決するための手段」 斯かる実状において、本発明者らは、更に鋭意研究を行
った結果、以下に詳記する如く、細胞生着率と、そのコ
ロニー形成能促進作用に関する試験をもとに、クジンか
ら新規細ｌｌｉ！賦活物質を、簡易な手段で得ることに
成功したわけである。

すなわち、クジン（乾燥物）１部に対して、５〜ｌＯ部
の水を加えて、４℃にて１時々撹拌しながら数日間８！
漬を行った後、ろ過してろ液を取りこのろ液を減圧下に
おいて、１０分の１〜２０分の１になるまで濃縮を行い
、濃縮液に対して、有１１ｉｆｉ媒（エタノール又はメ
タノール等、ポリオール系の溶媒）の濃度が約６０％に
なるように添加後、遠心分離し、沈殿物を分取する。

次に、この沈殿物を水に溶解して、ゲルろ過を行ない、
特定するＫａｖ値に流出するフラクションを得る。更に
、これを凍結乾燥して１本発明によるクジン由来細胞賦
活物質を得る。

尚１本発明によるクジン由来細胞賦活物質は、マメ科植
物のクジン（生薬名：苦参、別名をクジンとも言う）を
出発原料となし、抽出、精製することによって製造でき
るが、精製前の抽出液（粗液、又は濃縮液、エキス）の
状態で用いることも出来る。更に、その際の出発原料は
１組織培養法によって得られた、クジンを用いることも
でき、又、上記原料を抽出する際には、水の単独抽出も
で十分行なえるが、抽出液の腐敗を防止する為に、粗液
、又は濃縮液、エキスの状態で用いる際には、例えば、
水性低級有機溶媒を用いることが良い。

以下１本発明を更に具体的に示す為に、実施例等をもっ
て詳記する。

［実施例１］ クジン（乾燥４１り　１部に対して、５〜１０部の水を
加えて、４℃にて、時々撹拌しながら３日間浸漬を行う
、浸漬後、ろ過してろ液をとり、ろ液を減圧下において
、１０分の１〜２０分の１になるまで濃縮を行い、この
濃縮液に対してエタノールの濃度が６０％になるように
添加した後、遠心分離し、沈殿物を分取する。

次に、この沈殿物を水で溶解した後、セフ１デフクスＧ
−２５メデイウムを充填したカラム（２５Ｘ６０ｃｍ）
によって、ゲルろ過を行い（第１図１．Ｋａｖ値で０．
６５〜０．８５に流出するフラクションを得る。

更に、これを凍結乾燥して、クジン由来細胞賦活物質を
得る。尚、その取置は、約５ｇである。

尚、ここで得られたクジン由来細胞賦活物質をもとに、
以下に開示する如く、理化学的データ及び生物学的デー
タをもってｆｉ＆’認した。

［１１理化学的特性に関するデータ （ａ）分子量測定 クジン由来細胞賦活物質の分子量は、以下の試験法をも
って推定するとき、７００−ｔｔｏｏにあることが確認
された（第２図）。

（測定法の概要） ポリエチレングリコール１０００及び４０００を標準品
として、セファデックスＧ−２５フアイン（ファルマシ
ア社製）で分画して、分子量を推定する。

（ｂ）ペーパークロマトグラム（東ン羊ろ紙隘５０使用
）による測定 展開格媒として、エタノール二本＝　（２：　３）を使
用した場合、クロマトグラム上のＲｆ値は。

０．５０〜０．６０にあることが確認された。

尚、ｎ−ブタノールに溶解したニンヒドリンを噴霧し、
１００℃に加熱すると紫色に呈色する。

又、展開溶媒を変えて、エタノール二本＝（４１）を使
用した場合は、原点にとどまり、Ｒｆ値は確認されなか
った。

（ｃｌ　添媒に対するｔδ解性試験 水及び６０％エタノール水ｌδｌ夜には５涜であるが、
８０％以上のエタノール本漬ン夜ではｆｌ清である。又
、無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロ
ロホルム、石油エーテル、エーテルには不添である。

（ｄ）その他の反応試験 ■モーリッジ１反応　水に溶解した液に、＋５％ａ５％
ミーナフトールし、硫酸を加える時、赤紫色を呈する。

■ニンヒドリン反応三水に溶解した液に、ニンヒドリン
試？夜を加え、水浴中で３分間加熱する時紫色を呈する
。

〔２］生物学的特性に関するデータ （ａ）細胞生着率の促進作用 モルモットの初代繊維芽細胞、更にマウスの初代腹腔マ
クロファージは、無血清のＭＥＭ中では、培養器に生着
せず死滅する。

これに対して、クラン由来細胞賦活物質は、無血清の培
地において、細胞の生着性（率）を促進し、死滅するこ
とを防止することがＦｉｉ認出来る。

又、クラン由来細胞賦活物質を添加することにより、細
胞が生着し、１週間以上生存することが確認された。

（ｂ）コロニー形成からみた促進作用 第１表（次表）は、１０〜１０００個のモルモットの初
代培１１線維芽細胞を、直径６．０ｃｍのベトリ皿（培
養源　ＭＥＭ＋５％ＦＢＳ　＜牛胎児血清〉）に播種し
、２週間後のコロニー数を測定した成績結果である。

モルモットの初代培養線維芽細胞を用いて、コロニー形
成数（能）を求めてみると、クラン由来細胞賦活物質の
添加は、有意にコロニー数が増加し、無添加に比べると
、約５倍以上の増加が確認された。

この促進作用は、線維芽細胞に限らず、上皮細胞等にお
いても、同等に確認された。

「第１表」コロニー形成数〈能）促進作用「発明の効果
」 本発明によるクランから得られた細胞賦活物質は、水溶
性成分であって、その分子量が７００〜１１００にある
。

更に、本発明のクラン由来細胞賦活物質に関する作用、
効果についてまとめてみると、次の如く述べることがで
きる。

■細胞の生着率を促進し、細胞の死滅を防止することが
できる。

■又、第１表に示した如く、細胞のコロニー形成率を促
進（増殖）することができる。

よって、その利用分野は、例えば、組織培養促進剤とし
ての利用、あるいは医薬品、化粧品等においては、潰瘍
部、又は外傷部の再生治癒の促進剤として、あるいは、
細胞賦活剤として用いるが出来る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明による実施例１の製造工程中に得られ
たクラン由来細胞賦活物質のゲルろ過による漬出図であ
る。 第２図は１本発明の実施例１によって得られたクラン由
来細胞賦活物質の分子量測定に当って、標準物質を用い
て作成した、分子量とＫａｖ値による検１綿である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１） マメ科植物のクジンから得られた、水溶性の成分であっ
   て、その分子量が、７００〜１１００にあることを特徴
   とするクジン由来細胞賦活物質。