JPH07242561A - 脂肪分解活性物質及びその調製方法 - Google Patents

脂肪分解活性物質及びその調製方法

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JPH07242561A
JPH07242561A JP7005799A JP579995A JPH07242561A JP H07242561 A JPH07242561 A JP H07242561A JP 7005799 A JP7005799 A JP 7005799A JP 579995 A JP579995 A JP 579995A JP H07242561 A JPH07242561 A JP H07242561A
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preparing
lipolytically active
lipolytic activity
seaweed
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JP7005799A
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Jean Gedouin
ジェドゥアン ジャン
Romuald Vallee
ヴァレ ロムアルド
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CODIF INERNATL SA
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 化学薬品類を要せずして、天然物から抽出さ
れた脂肪分解活性を有する新規製品を提供する。 【構成】 先に凍結乾燥した海草を脱ミネラル水による
再水和に供し、当初の水分とすること、前記再水和海草
の半流動床中における浸出、前記抽出ジュースからの
０．２２ミクロンを超える大きさの巨大分子及び粒子の
除去、前記ミネラル分を除去することによる有機成分類
の濃縮、からなる段階に海草を供することからなる脂肪
分解活性を有する海草抽出物の調製方法である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、脂肪分解活性を有する
物質及びその調製方法に関する。また、本発明は、この
脂肪分解活性物質を活性主成分として含有する薬剤組成
物または化粧品用組成物に関する。
【０００２】
【従来技術】先行技術において使用されてきた脂肪分解
物質は、多年にわたり同様の物質であり、カフェイン及
びテオフィリンのようなキサンチン塩基類、Ｌ−カルニ
チン及びそのシラノール類であった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】これらの分子は有効で
はあるが、化学的合成によってまたは天然物からの抽出
によって製造される。両方の場合において、前記活性主
成分類の調製には、おびただしい数の化学試薬類が関与
する。このゆえに、これらの活性主成分類を含有する化
粧品が消費者に対してマイナスの印象を与えることにな
る。
【０００４】本発明の目的は、化学薬品の関与なくし
て、天然物から抽出された脂肪分解活性を有する新規製
品を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、海草抽出物が
細胞に対してさらに詳細には脂肪細胞に対して直接的脂
肪分解活性を有するという予想外の発見に基づいてい
る。この活性は、これまで、海草に関する限り、証明さ
れたことはなかった。
【０００６】前記海草抽出物の調製の第１段階は、本出
願人の名前で出願されたフランス国特許出願第９２ ０
９４９７号に既に記載された工程に従って実施される。
【０００７】前記工程は、 ａ）先に凍結乾燥させた海草を脱ミネラル水による再水
和（ｒｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ）に供し、海草本来の水分
レベルとなるようにすること、 ｂ）前記再水和させた海草を脱ミネラル水による半流動
床中における浸出（ｌｉｘｉｖｉａｔｉｏｎ）に供する
こと、 ｃ）前記抽出（浸出）ジュースから０．２２ミクロンよ
りも大きい巨大分子及び粒子を除去すること、からな
る。
【０００８】前記工程及び使用する装置の特徴について
は、前記特許出願第９２ ０９４９７号にさらに詳細に
記載されている。
【０００９】脂肪分解活性を有する産物を得るために、
一つの新たな段階が前記工程に追加された。この段階
は、ミネラル分を除去することによって、有機成分類を
濃縮することからなる。
【００１０】
【実施例】
Ａ）本発明による海草抽出物類の調製例 実施例１Ｌａｍｉｒａｒｉａ ｄｉｇｉｔａｔａ の種類の海草
１．２ｋｇを大まかに１ｃｍ片に切断し凍結乾燥した
後、脱ミネラル水で再水和した。
【００１１】水６．８リットル中で１５分間再水和した
後、これらの海草片を半流動床中で浸出した。この抽出
工程からの最大収率は、半流動床中における浸出をおよ
そ１．５時間行った時点で達成される。
【００１２】その後、このようにして得られた抽出ジュ
ースを精製工程に供した。この目的のため、前記抽出ジ
ュースをおよそ１２８ミクロンの保持しきい値（ｒｅｔ
ｅｎｔｉｏｎ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を有する第１フィ
ルターを通過させた。このフィルターの機能は、前記海
草残渣を除去することである。
【００１３】その後、ろ液をセルロース膜を有する前面
タイプの２枚のフィルターを通過させる。これら２枚の
フィルターの保持しきい値は、それぞれ、１０及び１ミ
クロンである。
【００１４】得られたろ液をその後、０．２２ミクロン
の保持しきい値を有するフィルターによる接触（ｔａｎ
ｇｅｎｔｉａｌ）ミクロフィルトレーションによって精
製する。この操作の目的は、多糖類及び微生物類のよう
な巨大分子を前記ろ液から除去することである。
【００１５】前記ろ液自体は、透明な液体で、色が淡黄
色であり、微量元素類、アミノ酸類、ペプチド類、タン
パク質類等のような小分子類を含有している。
【００１６】前記抽出物の分析特性ならびに先の段階に
ついては、前記特許出願第９２ ０９４９７号にさらに
詳細に記載されている。
【００１７】前記先の段階から得られたろ液を次に、ナ
ノフィルトレーションによって、容量濃縮係数ＶＣＦ３
５となるまで濃縮する。この段階は、４００ダルトンの
保持しきい値を有する膜をろ液が通過できるようにする
ピストンポンプを用いる系で実施する。濃縮過程におけ
るポンプの圧力は、２０乃至４０バールである。このよ
うな系において、１価の無機質分及び２価の無機質分の
一部を前記フィルターを通過させ、除去する。同時に、
閉回路を循環する保持物が前記フィルターを数回通過す
る。その結果、前記ミネラル分が除去されると共に、前
記保持物の有機成分が漸次濃縮されることになる。得ら
れた保持物は、抽出物１と称する。
【００１８】抽出物１は、下記の分析特性を有してい
る。 タンパク質 １１％ 脂質類 微量 無機質分 ２０％ 糖質 ６９％ ──────────────────────────────────── 感覚器官による検査 ──────────────────────────────────── 外観 わずかに濁った液体 色 暗茶色 臭 特徴的 ──────────────────────────────────── 物理化学的検査 ──────────────────────────────────── ２０゜ＣにおけるｐＨ ４．８８ ２０゜Ｃにおける密度 １．０６１ ２０゜Ｃにおける屈折率 １３．５％ 電導度 １８．６ｍＳ 乾燥物（２グラムを１０５℃において、２時間） １２．０７％ 無機質（５５０℃において） ２．４０％ ──────────────────────────────────── 無機質分析 ──────────────────────────────────── 窒素総量 ２．１７５ｇ／ｌ マグネシウム ３．２７ｇ／ｌ 塩化物 ６．４ｇ／ｌ カルシウム １．３ｇ／ｌ カリウム ３．６ｇ／ｌ 硫酸塩 ４．８ｇ／ｌ リン ０．４８ｇ／ｌ 鉄総量 ３．９ｍｇ／ｌ 亜鉛 ８０ｍｇ／ｌ 銅 ０．７６ｍｇ／ｌ マンガン １０ｍｇ／ｌ ──────────────────────────────────── アミノ酸分析 ──────────────────────────────────── 前記抽出物を加水分解した後薄層クロマトグラフィで分析すると、下記のアミ ノ酸類の存在が明らかとなった：アラニン、グルタミン酸、バリン、フェニルア ラニン、ロイシン、イソロイシンまたはメチオニンである。 ────────────────────────────────────
【００１９】実施例２ 実施例１と同一操作を実施し抽出物１を得、次に２４時
間放置した後、ろ過して不溶性成分を除去する。得られ
たろ液を抽出物２と称する。
【００２０】実施例３ 実施例１と同一操作を実施するが、容量濃縮係数ＶＣＦ
９０となるまで前記抽出物を濃縮するようにナノフィル
トレーションを継続する。
【００２１】その後、３０００〜４０００ダルトンを超
える分子量を有する全ての分子を除去するため、１００
０ダルトンにおける接触（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）限外
ろ過を保持物に対して実施する。その大きさの故に、こ
れらの分子は、皮膚の障壁を通過できない。得られたろ
液を抽出物３と称する。
【００２２】実施例４ 抽出物４は抽出物３の凍結乾燥によって得られる。
【００２３】Ｂ）本発明の海草抽出物の脂肪分解活性の
測定 各々の調製抽出物の脂肪分解活性を、ラットから単離し
た脂肪細胞を用いて測定した。
【００２４】脂肪分解過程において、細胞内トリグリセ
リド類は、グリセロール及び脂肪酸に加水分解され、細
胞外媒体中に放出される。本発明による各調製抽出物の
脂肪分解活性を測定するため、海草抽出物の存在下、肥
満細胞によってインキュベーション媒体中に放出された
脂肪酸及びグリセロールの量を測定する。次に、これら
の値を、海草抽出物非存在下で得られた値と比較する。
【００２５】脂肪酸類及びグリセロールの量の測定は、
市販の量測定キット（脂肪酸についてはＢｉｏｌｙｏｎ
（登録商標）キット及びグリセロールについてはＢｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ（登録商標）キット）を用いて実施す
る。
【００２６】ラット脂肪細胞の単離 使用したラットは、体重４００ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄ
ａｗｌｅｙ雄性ラットである。この表皮組織の脂肪細胞
を、フェノールレッドを含有しないＭＥＭ培地にペニシ
リン５０ＩＵ／ｍｌ、ストレプトマイシン５０μｇ／ｍ
ｌ、０．１３％重炭酸ナトリウム及び０．５％グルタミ
ンを添加して調製した分離用媒体中でコラゲナーゼ０．
１％によって分離した。
【００２７】細胞懸濁液をろ過した後、０．５％脱脂質
ＢＳＡを添加した前記分離用媒体で調製したインキュベ
ーション媒体中で洗浄した。
【００２８】細胞の生存を酸素法（ｏｘｙｍｅｔｒｙ）
によって検査した。脂肪細胞の酸素消費は、本実験室で
通常得られる値の範囲内にあった。
【００２９】インキュベーションプロトコール 検査する抽出物を、インキュベーション媒体で直接希釈
した。それらを、３７゜Ｃで２時間、適当な数の細胞と
接触させた。“産物を含有しない標準溶液”すなわち
“前記細胞を含有しない標準溶液”のインキュベーショ
ンも同時に行った。各実験条件について、三重に実施し
た。
【００３０】結果の表現 得られた結果を、表１、表２、表３及び表４に示した。
【００３１】
【表１】 放出された脂肪酸（μＭ）として示した非エステル化脂肪酸の定量測定 （インキュベーション０．５時間後） ──────────────────────────────────── 濃 度 （％，Ｖ／Ｖ）または（％，Ｐ／Ｖ） ──────────────────────────────────── 時間＝ 0.5時間 0 0.01 0.1 1.0 ──────────────────────────────────── 1 10.87 13.90 12.83 +/- 1.65 +/- 2.42 +/- 2.69 ──────────────────────────────────── % 100 128 118 ──────────────────────────────────── 2 10.87 11.13 8.63 +/- 1.65 +/- 2.37 +/- 0.98 ──────────────────────────────────── % 100 102 79 ──────────────────────────────────── 3 10.87 10.33 10.60 +/- 1.65 +/- 0.98 +/- 1.28 ──────────────────────────────────── % 100 95 98 ──────────────────────────────────── 4 10.87 15.90 16.17 +/- 1.65 +/- 0.80 +/- 2.11 ──────────────────────────────────── % 100 146 149 ────────────────────────────────────
【００３２】
【表２】 放出された脂肪酸（μＭ）として示した非エステル化脂肪酸の定量測定 （インキュベーション２時間後） ──────────────────────────────────── 濃 度 （％，Ｖ／Ｖ）または（％，Ｐ／Ｖ） ──────────────────────────────────── 時間＝２時間 0 0.01 0.1 1.0 ──────────────────────────────────── 1 15.03 21.73 17.27 +/- 1.44 +/- 0.85 +/- 0.98 ──────────────────────────────────── % 100 145 115 ──────────────────────────────────── 2 15.03 20.07 19.80 +/- 1.44 +/- 3.00 +/- 3.14 ──────────────────────────────────── % 100 133 132 ──────────────────────────────────── 3 13.10 14.50 16.73 +/- 1.91 +/- 1.91 +/- 0.85 ──────────────────────────────────── % 100 111 128 ──────────────────────────────────── 4 13.10 14.20 16.73 +/- 1.91 +/- 1.70 +/- 3.00 ──────────────────────────────────── % 100 108 128
【００３３】
【表３】 放出された脂肪酸（μＭ）として示した非エステル化脂肪酸の定量測定 （インキュベーション４時間後） ──────────────────────────────────── 濃 度 （％，Ｖ／Ｖ）または（％，Ｐ／Ｖ） ──────────────────────────────────── 時間＝４時間 0 0.01 0.1 1.0 ──────────────────────────────────── 1 14.47 19.27 15.07 +/- 4.12 +/- 4.66 +/- 0.85 ──────────────────────────────────── % 100 133 104 ──────────────────────────────────── 2 10.03 13.35 13.13 +/- 1.44 +/- 1.20 +/- 3.87 ──────────────────────────────────── % 100 133 131 ──────────────────────────────────── 3 10.03 16.70 14.50 +/- 1.44 +/- 4.65 +/- 2.96 ──────────────────────────────────── % 166 145 ──────────────────────────────────── 4 10.03 8.93 9.47 +/- 1.44 +/- 1.76 +/- 0.92 ──────────────────────────────────── % 100 89 94
【００３４】
【表４】 放出グリセロール（μＭ）として示した非エステル化グリセロールの定量測定 （インキュベーション４時間後） ──────────────────────────────────── 濃 度 （％，Ｖ／Ｖ）または（％，Ｐ／Ｖ） ──────────────────────────────────── 時間＝４時間 0 0.01 0.1 1.0 ──────────────────────────────────── 1 2.85 3.90 4.65 ──────────────────────────────────── % 100 137 163 ──────────────────────────────────── 2 2.85 4.05 8.80 ──────────────────────────────────── % 100 142 309 ──────────────────────────────────── 3 2.20 2.85 4.05 ──────────────────────────────────── % 100 130 184 ──────────────────────────────────── 4 2.20 2.40 2.35 ──────────────────────────────────── % 100 109 107 ────────────────────────────────────
【００３５】値は、０．５、２及び４時間のインキュベ
ーション時間及び一定数の細胞について形成された脂肪
酸（またはグリセロール）のμＭとして示した。三重測
定から平均質を求め、次に、試験中の物質の存在下及び
前記細胞の非存在下で実施したインキュベーションで得
られた平均値を、減算した。
【００３６】表１、表２、表３及び表４は、抽出物１乃
至４の脂肪分解活性を示している。
【００３７】脂肪分解活性は時間と共に全体として増加
し、２時間の時点で最大値を示す。このことは、脂肪細
胞内への前記抽出物の活性主成分の集積があることを示
している。
【００３８】非エステル化脂肪酸としての前記トリグリ
セリドの加水分解の刺激係数は、海草抽出物の非存在下
における標準溶液と比較して、１４０％のオーダーであ
ることがわかるであろう。
【００３９】また、抽出物１、２、３及び４の脂肪分解
活性に有意差がないことがわかるであろう。このこと
は、４００ダルトンにおけるナノフィルトレーションの
後に追加された段階が前記抽出物の有効性を有意に改善
することはないことを示すようである。
【００４０】脂肪酸の定量測定ほど精度が高くはないが
グリセロールの定量測定によって、本発明による海草抽
出物の存在下において脂肪分解が刺激されることが確認
された。
【００４１】１０００ダルトンの接触限外ろ過に供した
後、抽出物３はもはや３０００〜４０００ダルトンを超
える分子量を有する分子を含有していない。しかし、そ
れは、脂肪分解活性を有している。したがって、前記活
性主成分類は、３０００〜４０００ダルトン未満の分子
量を有しており、それらは、その通過しきい値がおよそ
６０００ダルトンである皮膚障壁を通過可能なのであろ
う。
【００４２】Ｃ）海草抽出物の脂肪分解活性と既知の脂
肪分解物の比較 第５表は、前記海草抽出物１の脂肪分解活性を、既知の
脂肪分解物群に属する数種の標準分子類と比較したもの
である。前記標準溶液の濃度は、脂肪細胞に関して細胞
毒性を示すことなく最大活性を発揮するように、選択し
た。細胞の破壊は、実際には、脂肪酸とグリセロールと
のインキュベーション媒体中への放出へ導くが、このこ
とは、標準溶液の脂肪分解活性の測定に誤差を与えるこ
とになるであろう。
【００４３】
【表５】 ──────────────────────────────────── 物質 濃度 乾燥抽出物当量 脂肪分解活性 ──────────────────────────────────── Ｌ−カルニチン 0.1mM 0.01% 120 ──────────────────────────────────── カフェイン 0.1mM 0.02% 152 ──────────────────────────────────── テオフィリン 0.1mM 0.02% 132 ──────────────────────────────────── メチルシラントリオールのマンヌロン酸エステル 1.0% 0.01% 140 ──────────────────────────────────── 抽出物１ 0.1% 0.01% 145 ────────────────────────────────────
【００４４】第５表の解析から、実施例１に記載の工程
による抽出物１が化粧品に通常使用される脂肪分解物に
等しい活性を有していること並びにこれが同一オーダー
の大きさの活性分子の％を有していることがわかる。
【００４５】本発明による海草抽出物は、１％濃度まで
は抽出物１乃至３について、全く細胞毒性を示さず、ま
た、抽出物４（凍結乾燥産物）について、濃度０．１％
まで同様であった。脂肪細胞に対するわずかの毒性が、
濃度１０％から、及び凍結乾燥産物について１％から、
それぞれ留意される。
【００４６】したがって、トリグリセリド類の加水分解
に関する結果は脂肪細胞レベルにおける活性に起因し、
脂肪細胞の破壊によるのではないことが示される。
【００４７】既存の脂肪分解物に比較して、本発明によ
る脂肪分解産物は全く化学試薬類を必要としない工程に
よって天然物から抽出されるという利点を有しているこ
とがわかるであろう。その結果、消費者の真のニーズに
答える新規化粧品用組成物類が完成されることになる。
【００４８】本発明による海草抽出物の時間的安定性に
関する研究も行った。結果を第６表に示してある。前記
表を検討すれば、６カ月の間隔をおいて測定した抽出物
１の脂肪分解活性が評価可能ないかなる変化も受けてい
ないことがわかるであろう。
【００４９】
【表６】 脂肪分解活性の時間的安定性 ──────────────────────────────────── 濃度（％、Ｖ／Ｖ） ──────────────────────────────────── 時間＝２時間 ──────────────────────────────────── 0 0.05 0.1 0.5 1 ──────────────────────────────────── 抽出物１ 13+/-0 14+/-1 15+/-1 16+/-1 14+/-1 ──────────────────────────────────── ％ 100 107 122 129 107 ──────────────────────────────────── ６カ月後の抽出物１ 15.03 21.73 12.27 +/-1.44 +/-0.85 +/-0.98 ──────────────────────────────────── ％ 100 145 115 ────────────────────────────────────
【００５０】
【発明の効果】本発明による海草抽出物により、脂肪分
解活性を有する薬剤または化粧品用組成物類が得られ
る。これらの組成物類を皮膚へ塗布する結果、局部的な
スリム化（ｌｏｃａｌ ｓｌｉｍｍｉｎｇ）が起こる。
このような組成物類は、特に、蜂巣炎の治療に使用でき
るであろう。
【００５１】例 下記の実施例は、本発明による組成物類を例示するため
に示した。成分類の比率は、重量百分率で示した。
【００５２】 例１：スリム化ゲル 水 ８８．００ プロピレングリコール １．００ シクロメチコン １．００ ワセリン油 ５．００ 海草抽出物１ １．００ セピゲル（ｓｅｐｉｇｅｌ）３０５ ３．００ 保存剤、香料 適量、 １００ （十分量）
【００５３】 例２：噴霧用スリム化ローション 水 ８５．００ プロピレングリコール ２．００ セチオール（Ｃｅｔｉｏｌ）ＭＥ １．００ ローズ水 １０．００ 海草抽出物１ １．００ 保存剤、着色剤、香料 適量、 １００
【００５４】 例３：スリム化、排液用クリーム ワセリン油 ５．００ ステアリン酸 １．００ セチルアルコール １．５０ スイートアーモンド油 ４．００ トリエタノールアミン １．２０ プロピレングリコール １．００ 水 ８１．００ カーボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）９４０ ０．５０ 植物抽出物 ３．００ 海草抽出物１ １．００ 香料、着色剤 適量、 １００

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 脂肪分解活性を有する物質の調製におい
    て、 ａ）先に凍結乾燥した海草を脱ミネラル水による再水和
    に供し、海草本来の水分レベルとする段階と、 ｂ）前記再水和海草の半流動床中における浸出する段階
    と、 ｃ）前記抽出ジュースからの０．２２ミクロンを超える
    大きさの巨大分子及び粒子の除去する段階と、 ｄ）前記ミネラル分を除去することによる有機成分類の
    濃縮する段階と、からなることを特徴とする脂肪分解活
    性物質の調製方法。
  2. 【請求項２】 前記ミネラル分を除去する段階が、ナノ
    フィルトレーションによって行われることを特徴とする
    請求項１記載の脂肪分解活性物質の調製方法。
  3. 【請求項３】 前記ナノフィルトレーションが、保持し
    きい値４００ダルトンを有するフィルターを用いて行わ
    れることを特徴とする請求項２記載の脂肪分解活性物質
    の調製方法。
  4. 【請求項４】 大きさが０．２２ミクロンよりも大きい
    高分子類及び粒子類の除去が０．２２ミクロンの保持し
    きい値を有するフィルターを用いる接触ミクロフィルト
    レーションによって行われることを特徴とする請求項
    １，２または３記載の脂肪分解活性物質の調製方法。
  5. 【請求項５】 前記接触ミクロフィルトレーションに対
    して、１ミクロンの保持しきい値を有するフィルターを
    用いる前面タイプのろ過が先行することを特徴とする請
    求項４記載の脂肪分解活性物質の調製方法。
  6. 【請求項６】 前記前面タイプのろ過に対して、１０ミ
    クロンの保持しきい値を有するフィルターを用いる同一
    タイプのろ過が先行することを特徴とする請求項５記載
    の脂肪分解活性物質の調製方法。
  7. 【請求項７】 脂肪分解活性を有する物質であり、前記
    物質が請求項１，２，３，４，５または６記載による調
    製方法によって調製されることを特徴とする脂肪分解活
    性物質。
  8. 【請求項８】 薬剤または化粧品用組成物であり、この
    組成物が請求項７記載の脂肪分解活性物質を含有するこ
    とを特徴とする組成物。
  9. 【請求項９】 脂肪分解活性を有する薬剤または化粧品
    用組成物類の調製のための請求項１乃至６による抽出方
    法によって得られた脂肪分解活性物質の用途。
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