CN114259440A - 一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物，是以淫羊藿、黄芪、人参、佛手、茯苓、药用层孔菌及牡丹根皮为原料进行组方，采用可提取明确特征成分的低温破壁提取方法，并与多级膜技术进行有机组合，能有效减少热敏感活性成分的分解变化，节能环保，最大限度的保留有效活性成分，同时解决了传统提取方法色深味重的问题并有效提升了产品的功效。实验证明，该复方植物提取物具有总黄酮、氨基酸、多肽、蛋白质、多酚、多糖等多种成分明确的活性成分，具有高效清除自由基作用，具有强抗氧化性，作为有效活性成分用于护肤品的生产，具有安全无刺激，长期使用，可使肌肤细纹减少，滋养抗衰效果显著。

Description

一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物及其应用

技术领域

本发明涉及一种复方植物提取物，尤其涉及一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物以及制备方法，本发明还涉及该复方提取物作为活性成分在制备护肤品中的应用，属于中药活性提取领域和护肤品技术领域。

背景技术

研究表明，多种单味中药或复方中草药具有抗衰老功效，然而，现有的报道主要是通过乙醇、纯水等溶剂使用传统方法提取，很多热敏成分在加热过程中严重受损。其次，大部分具有抗衰老功效的植物提取物都是通过简单的抗氧化作用来评价产品的效果，未能通过植物本身的特有成分来证明其抗衰老功效。另外，通过传统方法获得的产品杂质多、颜色深、稳定性差，在化妆品中应用难度大，应用范围受限。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物的制备方法，并对其抗氧化性能，DPPH自由基清除作用，超氧阴离子自由基清出作用进行研究，以期作为活性成分用于天然护肤品的制备。

一、复方植物提取物的组分和制备

原料组分：以下重量份计：淫羊藿20～40份、黄芪15～25份、人参15～20份、佛手8～15份、茯苓5～10份、药用层孔菌5～10份、牡丹根皮5～10份。

优选配比：淫羊藿25～35份、黄芪15～20份、人参15～20、佛手10～15份、茯苓7～8份、药用层孔菌5～8份、牡丹根皮5～8份。

本发明复方植物提取物的组分中，以淫羊藿甘温补肾、黄芪甘温滋阴为君；人参甘平补气、佛手甘温补肾为臣；茯苓甘温增强免疫力药用层孔菌为佐；牡丹根皮平衡协调为使，组合成以补肾、健脾、滋阴补阳、藏精益气的药方，以延缓人体衰老。全方功效协同，温阳滋肾以固其根，益脾和胃以培其本，渗湿降浊以祛其邪，重镇平补以宁神益智。

制备工艺：包括如下步骤：

（1）将各组分药材炮制后混合粉碎，过12 mm筛网，得到药材混合物；

（2）将步骤（1）所得药材混合物加入提取溶剂中，在冷媒温度2～30℃下低温破壁提取。提取溶剂为水和/或低级醇，提取溶剂与药材混合物的质量比为5:1～30:1；

（3）将提取液用卧式螺旋离心机除去滤渣，陶瓷膜纯化除去大分子杂质，再通过反渗透膜进行浓缩，得到抗衰老复方植物提取物。陶瓷膜采用采用0.8μm陶瓷膜。

本发明采用可提取明确特征成分的低温破壁提取方法，解决了传统提取方法色深味重的问题并有效提升了产品的功效，并与多级膜技术进行有机组合，能有效减少热敏感活性成分的分解变化，节能环保，最大限度的保留有效活性成分。

实验证明，复方植物提取物具有总黄酮、氨基酸、多肽、蛋白质、多酚、多糖等多种成分明确的活性成分，具有高效清除自由基作用，具有强抗氧化性，作为有效活性成分用于护肤品的生产，具有安全无刺激，长期使用，可使肌肤细纹减少，滋养抗衰效果显著。

在实际生产中，以复方植物提取物为活性组分，并采用生产护肤品的常规辅料和工艺制备成洁面乳、柔肤水、乳液、面霜、精华素、面膜。复方植物提取物在护肤品中添加量以质量分数计为1～20％。

附图说明

图1为没食子酸标准曲线图。

图2为碘量法抗氧化实验图。

图3为称重法测定失水率图。

图4为测试前后眼角细纹比对图。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案。

实施例1

（1）复方植物提取物（I）的制备：以重量份计，称取淫羊藿35份、黄芪20份、人参20份、佛手8份、茯苓7份、药用层孔菌5份和牡丹根皮5份共10 kg混合均匀，粉碎，过12 mm筛网，再加入300 kg纯水搅拌均匀，通过低温破壁提取器进行提取，低温破壁提取的冷媒温度为10℃，再用卧式螺旋离心机除去滤渣，采用0.8μm陶瓷膜纯化除去其他大分子杂质，滤液再通过反渗透膜浓缩至20kg，制得复方植物提取物（I）。

（2）保湿抗衰爽肤水的制备：

将EDTA-2Na与尿囊素、甲基丙二醇、去离子水混合加热到80℃，搅拌使其溶解，降温至45℃，加入泛醇、三甲基甘氨酸、防腐剂及本发明所述的复方植物提取物，混合搅拌均匀，放置后即得保湿抗衰爽肤水。具体配方见表1所示。

实施例2

（1）复方植物提取物（III）的制备：以重量份计，称取淫羊藿30份、黄芪20份、人参16份、佛手10份、茯苓8份、药用层孔菌8份和牡丹根皮8份共10 kg混合均匀，粉碎，过12 mm筛网，再加入250kg纯水搅拌均匀，通过低温破壁提取器进行提取，低温破壁提取的冷媒温度为20℃，再用卧式螺旋离心机除去滤渣，采用0.8μm陶瓷膜纯化除去其他大分子杂质，滤液再通过反渗透膜浓缩至20 kg，制得复方植物提取物（II）。

（2）保湿抗衰乳的制备：将油相、水相分别加热到75℃后，两相混合均质数分钟，搅拌降温，降温到45℃加入防腐剂及本发明所述的复方植物提取物，搅拌均匀，35℃放置后成白色细腻均匀的乳液。具体配方见表2。

实施例3

（1）复方植物提取物（III）的制备：以重量份计，称取淫羊藿28份、黄芪20份、人参20份、佛手12份、茯苓8份、药用层孔菌7份和牡丹根皮5份共10 kg混合均匀，粉碎，过12 mm筛网，再加入200kg纯水搅拌均匀，通过低温破壁提取器进行提取，低温破壁提取的冷媒温度为15℃，再用卧式螺旋离心机除去滤渣，采用0.8μm陶瓷膜纯化除去其他大分子杂质，滤液再通过反渗透膜浓缩至20kg，制得复方植物提取物（III）。

（2）保湿抗衰精华液的制备：将EDTA-2Na与尿囊素、甲基丙二醇、羟乙基纤维素250HHR去离子水混合加热到90℃，搅拌使其溶解，降温至78℃，加入透明质酸钠，降温至45℃，加入泛醇、防腐剂及本发明所述的复方植物提取物，混合搅拌均匀，放置后即得保湿抗衰精华液1#、2#、3#、4#。具体配方见表3。

实施例4

（1）复方植物提取物（IV）的制备：以重量份计，称取淫羊藿25份、黄芪20份、人参18份、佛手15份、茯苓8份、药用层孔菌8份和牡丹根皮6份共10 kg混合均匀，粉碎，过12 mm筛网，再加入150 kg纯水搅拌均匀，通过低温破壁提取器进行提取，低温破壁提取的冷媒温度为10℃，再用卧式螺旋离心机除去滤渣，采用0.8μm陶瓷膜纯化除去其他大分子杂质，滤液再通过反渗透膜浓缩至20 kg，制得本发明的复方植物提取物（IV）。

（2）保湿抗衰精华液：同实施例3。

对比例1

以重量份计，称取淫羊藿35份、黄芪20份、人参20份、佛手8份共10 kg，按照实施例1所述的制备方法进行提取、浓缩得到20 kg的复方中药提取物（I）。

对比例2

以重量份计，称取淫羊藿35份、黄芪20份、人参20份、佛手8份、茯苓7份共10 kg，按照实施例1所述的制备方法进行提取、浓缩得到20 kg的复方中药提取物（II）。

对比例3

以重量份计，称取淫羊藿35份、黄芪20份、人参20份、佛手8份、茯苓7份、药用层孔菌5份共10 kg，按照实施例1所述的制备方法进行提取、浓缩得到20 kg的复方中药提取物（III）。

对比例4

以重量份计，称取淫羊藿35份、黄芪20份、人参20份、佛手8份、茯苓7份、药用层孔菌5份和牡丹根皮5份共10 kg混合均匀，按照实施例1所述的制备方法进行提取、浓缩得到20 kg的复方中药提取物（Ⅳ）。

下面对实施例1~4制备的样品中多酚含量、黄酮含量进行测定，并通过体外试验观察对本发明复方植物提取物的抗氧化性及清除自由基的作用进行说明。

一、多酚含量的测定

试验方法：没食子酸标准曲线（图1）的建立：a. 没食子酸标准储备溶液（1000 μg/mL）（现配）：称取0.110 g±0.001 g没食子酸，于100 mL容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀。b. 没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL的没食子酸标准储备溶液于100 mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，没食子酸的浓度分别为10μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL。c. 10%福林酚试剂（现配）：将20 mL福林酚试剂转移到200 mL容量瓶中，用水定容并摇匀。d. 7.5% Na₂CO₃（质量浓度）：称取37.50 g±0.01 g Na₂CO₃，加适量水溶解，转移至500 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。

用移液管分别移取没食子酸工作液、水及样品各1.0 mL于刻度试管内，在每个试管内分别加入5.0 mL的福林酚试剂，摇匀，反应5 min，加入4.0 mL7.5% Na₂CO₃溶液，加水定容至刻度，摇匀，室温放置60 min。用10 mm比色皿，在765 nm波长条件下用分光光度计测定吸光度（A）。根据没食子酸的吸光度（A）与各工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线，没食子酸标准曲线如图1所示。

计算公式：多酚含量（%）=（A×V×d）/(SLOPE_Std×m×10⁶×m₁) ×100

式中，A为样品测试液吸光度；V为样品提取液体积，10 mL；d为稀释因子（通常为1mL稀释成100 mL，则其稀释因子为100）；SLOPE_Std为没食子酸标准曲线斜率；m为样品干物质含量，单位为%；m1为样品质量，单位为g。多酚含量的测定结果见表1。

二、黄酮含量的测定

（1）对照品溶液的制备：取芦丁对照品50 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加适量甲醛，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醛至刻度，摇匀，得对照品原液。精密量取10 mL对照品原液，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL对照品溶液中含芦丁0.2 mg）。

（2）标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置于25 mL容量瓶中，各加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂为空白，按照紫外-可见分光光度法于500 nm波长处测定吸光度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（3）样品测定 ：将上述各实施例中药组合物按1：10比例稀释后得到各样品，准确取各样品20 ml，用75 ml乙醚分3次萃取脱脂，弃醚层。精密取10 mL水层液，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密取3 mL，置25 mL容量瓶中，照“标准曲线制备”项下的方法，自“加水6.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（μg），计算，即得。

计算公式：×=（m1×V2）/（m×V1×10⁶）×100

式中，×为中药组合物中总黄酮含量，单位为g/100 g或g/100 mL；ml为根据标准曲线计算出待测液中总黄酮的含量，单位为μg；m为中药组合物质量或中药组合物体积，单位为g或mL；V1为中药组合物测定用体积，单位为mL；V2为中药组合物总体积，单位为mL。总黄酮含量见表4。

表4的测试结果表明:本发明复方植物提取物的多酚、总黄酮含量差异小，其中多酚、总黄酮含量最高的是实施例1的复方植物提取物（Ⅰ）。对比例的多酚、总黄酮含量较低，其中对比例4的多酚、总黄酮含量最低，表明传统的高温提取工艺得到的有效成分含量低。实施例1＞对比例3＞对比例2＞对比例1＞对比例4，表明本发明的植物复合物通过植物间的协同增效使有效成分多酚、总黄酮得到显著的提高。

二、抗氧化效果的测试

（一）DPPH自由基清除实验

（1）试剂配制：DPPH溶液：精密称取DPPH粉末0.0100 g，置于250 mL容量瓶中，用适量95%乙醇溶解并定容至250mL。

（2）测定方法：在10 mL试管中依次加入4.0 mLDPPH溶液和1.0 mL95%乙醇，混合摇匀，避光反应30 min，稳定后，以95%乙醇溶液为参比，在517 nm处测定吸光值（A0）。在10mL试管中依次加入4.0 mLDPPH溶液和1.0 mL待测溶液，混合摇匀，避光反应30 min，稳定后，以95%乙醇为参比，在517 nm处测定吸光值（Ar）。在10mL试管中依次加入4.0 mL95%乙醇和1.0 mL待测溶液，混合摇匀，避光反应30 min，稳定后，以95%乙醇溶液为参比，在517nm处测吸光值（As）。

计算公式：DPPH自由基清除率={1-（Ar- As）/ A0}×100%

式中，Ar为加测试液反应后DPPH溶液的吸光度；As为不加DPPH，只加测试液和95%乙醇溶液的吸光度；A0为不加测试液，只加DPPH和95%乙醇溶液的吸光度。

（3）测试结果：表5的测试结果表明，不同浓度的复方植物提取物（Ⅰ）在对DPPH自由基清除作用上呈正比关系，3%实施例1中药组合物可以达到60%的清除率。根据实验结果可以得出，本发明实施例1的复方提取物在DPPH自由基清除作用上具有明显效果，并且组合物的各植物在DPPH自由基清除上具有协同增效的作用。

（二）ABTS法体外测定抗氧化实验

1）试剂配制：a. PBS溶液（pH=7.2）：称取8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na₂HPO₄和0.24 g KH₂PO₄溶于水，调pH至7.2并定容至1000 mL。b. 2.45 mM过硫酸钾：称取0.0662 g过硫酸钾溶于水并定容至100 mL。c. 7 mM ABTS+•储备液：称取0.0384 g ABTS，用2.45mM过硫酸钾溶解，定容至10 mL，溶液呈墨绿色，在室温、避光条件下静置12～16 h，该储备液可稳定保存3～4d。d．ABTS+•测定液：将ABTS+•储备液以PBS稀释，使其吸光度在734 nm波长处达到0.700±0.020。

2）测定方法：a. 取4mL的ABTS+•工作液与1mL样品混合10 s后25℃避光静置6min，在734 nm处测定吸光值。以4mLPBS+1mL样品作为参比，记A样品。b. 取4ml的ABTS+•工作液与1mLPBS混合10s后25℃避光静置6min，在734 nm处测定吸光值。以PBS作为参比，记A0。抑制率（%）=(（A0-A样品）)/A0×100%。

3）测试结果表明：表6的测试结果表明，复方植物提取物（Ⅰ）对ABTS自由基具有很好的清除效果，0.1%实施例1中药组合物即可达到25.60%的清除率，1%实施例1的复方提取物的清除效果与0.1%异抗坏血酸钠的清除效果一致，达到100%清除率，说明实施例1的复方提取物对ABTS自由基具有很好清除作用。

（三）超氧阴离子自由基清除实验

1）试剂配制：2.5 mM邻苯三酚（现配现用）、0.05 M Tris-HCL（pH8.2）

2）实验方法：邻苯三酚自氧化吸光值的测定在试管中按表7加入缓冲液，加入邻苯三酚(对照管用10 M HCl代替)，迅速摇匀，反应4 min后，加入10 M的HCl，终止反应，先进行全波长扫描，确定最高吸收波长320 nm，然后在320nm处测定吸光值A0。样品活力测定在试管中按表8加入缓冲液，添加0.1 mL样品于试管中(对照管用0.1mL10 M HCl代替)，加入邻苯三酚，迅速摇匀，反应4 min后，加入10 M的HCl，终止反应，在320 nm，测定吸光值A1。通过计算测得超氧阴离子自由基清除率(抑制率)。

计算公式：抑制率（%）=(（A0-A1）)/A0×100%，式中， A0为邻苯三酚的自氧化吸光值； A1为加入样品溶液后邻苯三酚的自氧化吸光值。

（3）测试结果：上述结果表明，复方植物提取物（Ⅰ）在不同浓度的条件下对超氧阴离子自由基都均有不同的清除效果，清除效果与浓度成正比，说明实施例1的复方提取物具有较好的超氧阴离子自由基清除效果。

（四）碘量法测定抗氧化实验

1）测试方法：分别配制浓度为0.05%和0.1%的碘溶液40 mL，再加入1mL实施例1中药组合物，观察碘溶液的褪色情况，结果如图2所示。

2）碘量法测定复方植物提取物（Ⅰ）的氧化还原作用结果表明:在不同浓度的碘溶液中加入本发明实施例1的复方提取物，可以立即使碘溶液还原成无色状态，说明本发明复方提取物具有明显的氧化还原作用。

以上四个抗氧化测试实验表明本发明的复方提取物具有很强的清除多种自由基的作用，可以减少因自由基过多而导致的皮肤衰老。

（五）、保湿效果测试

1）测试方法：称重法测定失水率。配制1%、3%、5%三种浓度的实施例1的复方提取物样品和0.15%透明质酸钠后，分别称取5g样品于培养皿中，置于温度25±2℃，湿度50±2%环境中，每1 h称量样品的重量，测定样品失水率。其中，透明质酸钠是目前最常用、效果较好的保湿成分。结果如图3所示。

2）测试结果表明：复方植物提取物（Ⅰ）在不同浓度条件下都有一定的保湿效果，而且5%浓度的实施例1的复方提取物的保湿效果明显优于0.15%透明质酸钠，表明本发明的复方提取物在保湿方面具有较好的作用。

下面通过人体试验观察，对本发明复方植物提取物的抗氧化性及清除自由基的作用进行说明。

1、去细纹功效测试

1）实验部位：受试者眼周

2）样品：保湿抗衰精华液2#

3）实验原理：眼部肌肤是人体最脆弱的部位，也是最容易产生细纹/皱纹的区域，针对该区域进行效果评价，更具有参考意义。

4）实验方法：选择肌肤正常、无化妆品过敏史，眼角出现细纹/皱纹的受试人群，年龄25~40岁，男性10位，女性20位，受试者每天洁面完成后，分别在眼角周围涂抹样品，轻轻按摩至完全吸收，连续使用2个月，观察眼角细纹的变化，收集测试前后的图片进行比对，结果如图4所示。

5）结果分析：通过对眼角细纹的图片对比，表明受试者在眼角周围连续使用本发明应用实施例3保湿抗衰精华液2#两个月后，受试者眼周的细纹有了明显的改善，随着使用周期的加长，效果会更明显。由此说明，本发明的复方提取物具有明显的去细纹效果。

2、 安全性人体斑贴测试

1）受试对象：男15人，女15人，共30人，年龄25-40岁，符合受试者志愿入选标准。

2）测试物：本发明实施例1的复方植物提取物（I）（受试组）、纯水（对照组）

3）测试方法：选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将测试物约0.02~0.025mL涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者前臂屈侧，24 h后除去受试物，除去受试物斑试器30 min后，待压痕消失后观察皮肤反应，按表10中皮肤反应分级标准记录其结果。

4）判定标准：30例受试者中出现1级皮肤不良反应多于5例；或2级皮肤不良反应的人数多于2例；或出现任何1例3级或3级以上皮肤不良反应时，判定受试物对人体有皮肤不良反应。

4）结果分析：实验结果如上表所示，受试组30例受试者皮肤全部呈阴性反应，按照上表的判定标准，本发明的复方提取物对人体皮肤无不良反应。

Claims (7)

1.一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物，是由以下原料组分和工艺制备而得：

原料组分：以下重量份计：淫羊藿20～40份、黄芪15～25份、人参15～20份、佛手8～15份、茯苓5～10份、药用层孔菌5～10份、牡丹根皮5～10份；

制备工艺：包括如下步骤：

（1）将各组分药材炮制后混合粉碎，过12 mm筛网，得到药材混合物；

（2）将步骤（1）所得药材混合物加入提取溶剂中，在冷媒温度2～30℃下低温破壁提取；

（3）将提取液用卧式螺旋离心机除去滤渣，陶瓷膜纯化除去大分子杂质，再通过反渗透膜进行浓缩，得到抗衰老复方植物提取物。

2.如权利要求1所述一种具有抗衰老功效的化妆品用复方植物提取物，其特征在于：所述各原料按以下重量份配比：淫羊藿25～35份、黄芪15～20份、人参15～20、佛手10～15份、茯苓7～8份、药用层孔菌5～8份、牡丹根皮5～8份。

3.如权利要求1所述一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物，其特征在于：制备工艺中，提取溶剂为水和/或低级醇，提取溶剂与药材混合物的质量比为5:1～30:1。

4.如权利要求1所述一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物，其特征在于：制备工艺中，采用0.8μm陶瓷膜。

5.如权利要求1所述一种具有抗衰老功效的护肤品用复方植物提取物在制备护肤品中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：是以复方植物提取物为活性组分，并采用生产护肤品的常规辅料和工艺制备成洁面乳、柔肤水、乳液、面霜、精华素、面膜。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述复方植物提取物在护肤品品中添加量以质量分数计为1～20％。

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