JPH0322987A - 新規ｄｎａおよびその用途 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は脳の視床下部、精巣等由来の、生理活性を有す
る新規なペプチド、該ベプチドをコードするＤＮＡを含
有するＤＮＡ、該ＤＮＡを保持する形質転換体および該
形質転換体を用いる上記ベプチドの製造方法に関する。 〔従来の技術〕 脳の視床下部、下垂体から分泌されるボルモンには種々
のものが知られている．甲状腺刺激ホルモン放出ホルモ
ン（Ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈ
ｏｒｎｏｎｅ）や黄体形或ホルモン放出ホルモン（Ｌｅ
ｕｔａｎｉｚ１ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｌｅａｓｉ
ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）．ソマトスタチン（Ｓｏｍａｔ
ｏｓｔａｔｉｎ）、副腎皮質刺激ホルモン（＾ｄｒａｎ
ｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ）、成
長ホルモン（Ｇｒｏｖｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）、プロラ
クチン（Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ）などがその例で，これら
の作用についてはよく研究されている．本発明者等の一
人は、これ以外の新しい視床下部由来の生理活性のある
物質を，アデニレートサイクラーゼアクティヴイティ（
ａｄａｎｙｌａｔｅ ｃｙｃｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔ
ｙ）を指標にして探求した結果、それまでには報告され
ていない，３８個のアミノ酸残基からなるペブチドを発
見した．そして、その構造を決定し、それをＰＡＣＡＰ
３８と命名している． 本発明者等はヒッジＰＡＣＡＰ３８のｃ ＤＮＡの特許
出！［（特願平１−１５５７９１号、同１−２８４７７
１号），およびヒトＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡの部分構
造の特許出願（特願平１−２５９９２４号）を先に行な
っており、ヒツジ、ヒト両者のＰＡＣＡＰ３８の威熟部
分のアミノ酸配列は同一，前廓体においてはアミノ酸の
置換があることを見出している． 〔発明が解決しようとする課題〕 しかしながら上記のとおりＰＡＣＡＰ３８ベプチドの存
在は確認したものの，該ベプチドおよびその前駆体を視
床下部等から単離、精製することは非常に複雑な操作を
必要として困難である上に，少量しか目的のペプチドが
得られないという問題がある。したがって、該ベプチド
を容易に且つ大量に得る方法の提供が望まれているので
ある．〔課題を解決するための手段〕 本発明者らはＰＡＣＡＰ３８ベプチドの大量生産技術を
開発すべく種々研究の結果、このたび先のヒツジ、ヒト
に加えてラットからもＰＡＣＡＰ３８のベプチドをコー
ドするｃＤＮＡを、ラット脳由来のメッセンジャーＲＮ
Ａから作或したｃＤＮＡライブラリーから単離し、その
塩基配列を決定することに成功し、これら３種のＰＡＣ
ＡＰ３８成熟蛋白のアミノ酸配列が同一であることを見
出し、これに基き遺伝子組換え技術を用いることにより
ＰＡＣＡＰ３８ペプチドを大量に得ることを可能とし．
本発明に到達したものである．即ち、本発明は（１）Ｐ
ＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡ、（
２）ＰＡＣＡＰ３８の前騨体蛋白質、（３）ＰＡＣＡＰ
３８をコートするＤＮＡを含有するＤＮＡを保持する形
質転換体、（４）上記（３）記載の形質転換体の培養、
培養物中への蛋白質の生成蓄積、採取を包含する成熟Ｐ
ＡＣＡＰ３８の製造方法および（５）或熟ＰＡＣＡＰ３
８を構成しうる部分アミノ酸もしくはベプチドと残余部
分とを縮合させ、生或物が保護基を有する場合は保護基
を脱離することを特徴とする上記ポリベプチドの製造方
法に関するものである．本発明において，ヒッジＰＡＣ
ＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡとしては
、〔式２〕、〔式３〕の塩基配列を含有あるいはその一
部で表わされるものが挙げられる。 〔式２〕 ５’ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＴＣ Ｔ
ＴＣ ＡＣＴ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＡＣＡＧＣ ＣＧＣ
ＴＡＣ ＣＧＧ ＡＡＧ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ
ＧＴＴ ＡＡＧ ＡＡＡＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣ
Ｔ ＧＴＣ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ
ＡＡＡＣＡＡ ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＧ ＡＡＣ Ａ
ＡＡ ＧＧＡ ＣＧＧ ＣＧＡ ＡＴＡ ＣＣＧＴＡＣ
ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡ ＣＧＡ ＧＴＴ
ＡＣＣ ＡＧＣ ＴＡＴ ＣＣ丁本本本 〔式３〕 Ｉ ＣＴＧＣＴＡＡＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＡＡＡＴＡ
ＧＧＡＧＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＴＣＴＧＴ
ＡＡＴＡＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡ．ＧＣＡＧＴＡＧＡＡＧ
ＡＡＡＣＣＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＡＧ
ＡＧＡＧＡＣＴＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＡＡＧＧＣＧＣ
ＴＧＣＣＴＧＣＴＣＧＡＧＣＴＧＣＣＴＧＧＣＣＧＧＧ
ＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＧＣ
ＣＧＡＧＧＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ
ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣ丁Ｃ丁ＣＴＣ
ＴＣＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＣＴＴＡＴＣＡＣＴＣＣＴＴ
ＴＣＴＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＡＧＧＣＣＡＣＴ
ＴＴＧＴＣＴＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＣＧ
ＴＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＴＣＴＣＣＡ
ＴＣＴＣＴＣＣＴＣＴＣＧＣＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＴＣ
ＡＧＴＧＴＣＡＣＧＣＴＣＣＧＴＣＣＴＡＧＴＴＣＣＧ
ＡＧＣＧＴＣＧＴＣＡＡＡＣＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＡＡ
ＴＡＡＣＡＧＧＡＣＴＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＣＣＴ
ＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＣＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣ
ＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣ
ＴＡＡＣＧＣＣＡＧＡＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＣＴＴＧ
ＧＧＴＴＧＴＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＣＡＣＡＡＡＣＴＴ
ＧＧＡＧＡＡＧＣＴＣＴＴＴＧＣＣＣＧＣＣＧＴＣＣＴ
ＡＣＴＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＣ
ＡＧＣＧＡ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ
ＡＧＣ ＧＧＡ ＧＣＧ ＡＧＧ ＣＴＧ
ＧＣＣ ＣＴＧ ＣＴＣ ＧＴＴ ＴＡＣ ＧＧＧ
ＡＴＡ ＣＴＧ ＡＴＧ ＣＡＣ ＡＧＣＡＧｃ
ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣｃＴ
ＧＣＣ ＧＣＣ ＴＣＣ ＧＧＡ ｃｙＣＣ
ＧＧ ＴＴＣ ＣＣＧ ＧＧＧ ＾丁Ｃ Ａ
ＧＧ ＣＣＧ ＧＡＧ ＡＡＣ ＧＡＧ Ｇ
ＣＧ丁ＡＣ ＧＡＣ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＧＡ
ＡＡＣ ＣＣＧ ＣＡＧ ＣＡＧ ＧＡＣ
ＴＴＣＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＧ ＧＡＧ
ＣＣＧ ＣＣＡ ＧＧＣ ＧＴＧ ＧＧＧ
ＡＧＣ ＣＣＣＧＣＣ ＴＣＣ ＧＣＧ ＣＴＧ
ＣＧＣ ＧＡＴ ＧＣＣ ＴＡＣ ＧＣＧ
ＣＴＣ ＴＡＣＴＡＣ ＣＣＧ ＧＣＧ Ｇ
ＡＧ ＧＡＡ ＡＧＡ ＧＡＴ ＧＴＣ ＧＣ
Ｃ ＣＡＣ ＧＧＧＡτＣ ＣＴＴ ＧＡＴ
ＡＡＧ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＧＣ ＡＡＡ
ＧＴＧ ＣＴＧ ＧＡＣＣＡＧ ＣＴＧ ＴＣ
Ｃ ＧＣＣ ＡＧＧ ＡＧＡ ＴＡＣ ＣＴＧ
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１７６３本発明におけ
るヒツジＰＡＣＡＰ３８の前駆体としては，〔式８〕、
〔式９〕で表わされるものが挙げられる． 〔式８〕 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇ
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ードするＤＮＡを含有するＤＮＡとしては、〔式４）．
〔式５〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされ
るものが挙げられる． 吠４）５’ ＣＡＣ肛ωＣ（
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る新規なペプチド、該ベプチドをコードするＤＮＡを含
有するＤＮＡ、該ＤＮＡを保持する形質転換体および該
形質転換体を用いる上記ベプチドの製造方法に関する。 〔従来の技術〕 脳の視床下部、下垂体から分泌されるボルモンには種々
のものが知られている．甲状腺刺激ホルモン放出ホルモ
ン（Ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｈ
ｏｒｎｏｎｅ）や黄体形或ホルモン放出ホルモン（Ｌｅ
ｕｔａｎｉｚ１ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｌｅａｓｉ
ｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）．ソマトスタチン（Ｓｏｍａｔ
ｏｓｔａｔｉｎ）、副腎皮質刺激ホルモン（＾ｄｒａｎ
ｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ）、成
長ホルモン（Ｇｒｏｖｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）、プロラ
クチン（Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ）などがその例で，これら
の作用についてはよく研究されている．本発明者等の一
人は、これ以外の新しい視床下部由来の生理活性のある
物質を，アデニレートサイクラーゼアクティヴイティ（
ａｄａｎｙｌａｔｅ ｃｙｃｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔ
ｙ）を指標にして探求した結果、それまでには報告され
ていない，３８個のアミノ酸残基からなるペブチドを発
見した．そして、その構造を決定し、それをＰＡＣＡＰ
３８と命名している． 本発明者等はヒッジＰＡＣＡＰ３８のｃ ＤＮＡの特許
出！［（特願平１−１５５７９１号、同１−２８４７７
１号），およびヒトＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡの部分構
造の特許出願（特願平１−２５９９２４号）を先に行な
っており、ヒツジ、ヒト両者のＰＡＣＡＰ３８の威熟部
分のアミノ酸配列は同一，前廓体においてはアミノ酸の
置換があることを見出している． 〔発明が解決しようとする課題〕 しかしながら上記のとおりＰＡＣＡＰ３８ベプチドの存
在は確認したものの，該ベプチドおよびその前駆体を視
床下部等から単離、精製することは非常に複雑な操作を
必要として困難である上に，少量しか目的のペプチドが
得られないという問題がある。したがって、該ベプチド
を容易に且つ大量に得る方法の提供が望まれているので
ある．〔課題を解決するための手段〕 本発明者らはＰＡＣＡＰ３８ベプチドの大量生産技術を
開発すべく種々研究の結果、このたび先のヒツジ、ヒト
に加えてラットからもＰＡＣＡＰ３８のベプチドをコー
ドするｃＤＮＡを、ラット脳由来のメッセンジャーＲＮ
Ａから作或したｃＤＮＡライブラリーから単離し、その
塩基配列を決定することに成功し、これら３種のＰＡＣ
ＡＰ３８成熟蛋白のアミノ酸配列が同一であることを見
出し、これに基き遺伝子組換え技術を用いることにより
ＰＡＣＡＰ３８ペプチドを大量に得ることを可能とし．
本発明に到達したものである．即ち、本発明は（１）Ｐ
ＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡ、（
２）ＰＡＣＡＰ３８の前騨体蛋白質、（３）ＰＡＣＡＰ
３８をコートするＤＮＡを含有するＤＮＡを保持する形
質転換体、（４）上記（３）記載の形質転換体の培養、
培養物中への蛋白質の生成蓄積、採取を包含する成熟Ｐ
ＡＣＡＰ３８の製造方法および（５）或熟ＰＡＣＡＰ３
８を構成しうる部分アミノ酸もしくはベプチドと残余部
分とを縮合させ、生或物が保護基を有する場合は保護基
を脱離することを特徴とする上記ポリベプチドの製造方
法に関するものである．本発明において，ヒッジＰＡＣ
ＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡとしては
、〔式２〕、〔式３〕の塩基配列を含有あるいはその一
部で表わされるものが挙げられる。 〔式２〕 ５’ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＴＣ Ｔ
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１７６３本発明におけ
るヒツジＰＡＣＡＰ３８の前駆体としては，〔式８〕、
〔式９〕で表わされるものが挙げられる． 〔式８〕 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇ
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ｒ Ｌｓｕ本発明において、ヒトＰＡＣ，ＡＰ３８をコ
ードするＤＮＡを含有するＤＮＡとしては、〔式４）．
〔式５〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされ
るものが挙げられる． 吠４）５’ ＣＡＣ肛ωＣ（
自）ＡＴＣＴｒＣ ＡＣＧ ＧＡＣ ＡＧＣ 丁
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ｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ＬｅｕＡｒｇ
Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ＾ｓｎ Ｐｒｏ ＬＥｕＰｒｏ＾
ｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒ
ｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ ＳｅｒＰｒｏ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｌａ Ａ
ｌａ ，Ａｌａ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｐ
ｒｏ Ａｌａ ＧｌｙＡｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｙ ＩＩｓ ＬｓｌＡｓｎ Ｇ
ｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｖａ．１一』
＾ｓｐ Ｇｉｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌ
ｙｓ Ｉｌｉｓ Ｌｍ Ｇｌｒ＋ Ｓｅｒ Ｉ．ｅｕ
Ｖａｌ Ａｌａ ＡｒｇＧｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇ］
．ｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｕｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａ］
．ａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｐｒ
ｏし殉＊ 本発明において、ラットＰＡＣＡＰ３８をコードするＤ
ＮＡを含有するＤＮＡとしては、〔弐〇〕、〔式７〕の
塩基配列を含有あるいはその一部で表わされるものが挙
げられる。 〔式６ ） ＣＡＣ ＴＣＧ
ＧＡＣ ＧＧＣ＾ＴＣ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＴＡＴ ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＣＧＡ ＡＡＡ
ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＡ Ｔ
ＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＴＧＣＴＡ ＧＧ
Ｇ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＧ
ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＡ ＡＡＣＡＡＡ
ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡ ＡＴＡ ＧＣＧ
ＴＡＣ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡＴＧＡＧＴ丁Ｇ
ＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡＴ＾＾ＡＡＴＧＡＡ
＾＾ＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴＴＧＡＣＴＧＡＣＣ
ＡＧＴＣＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴ丁ＴＣＣＡ
ＡＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡＴＣＡＡＧＴＡＡＡ
ＧＣＣＡＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴ
ＡＡＴＡＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＣＧＡＡＧＣ
ＡＣＴＧＧＡＧＡＡ丁ＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴ
ＧＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡ
ＴＡＡＧτＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡ
ＧＧＴＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡＡτＴＣＡＴＡＡＧ
ＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＧ＾ＴＴＧＡＡＡＡＴＴＣＧＣＣ
ＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＡＴＡＴＡＡＡ
ＡＴＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣ＾＾ＣＣＡＴ
ＴＧＴＴＴＴＧ＾＾ＴＡＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＴＴτＴ
ＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＧＧＡＴＡＧＴＡＴ
ＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴ
ＡＣＣＡＡＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＣＡＡＡＡ
Ａ＾＾ＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴ
ＴＣ 〔式７〕 ＧＡＡＴＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＡＡＧＣＴＣＣＡＣ
ＡＡＴＧＧＣＧＣＣＣＡＧＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣ
ＡＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＧＧＣＴＴＣＧＧＣＴＡＧＴＴ
ＴＴＧＴＧＣＧＴＣＴＡＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＧ
ＧＡＡＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＣ
ＣＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＴＡＡＴＴＣＣＣ
ＧＣＧＡＣＴＴＣＴＣＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣ
Ｃ＾ＧＡＣＡＧＴＧＡＣＴＧＡＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧ
ＴτＧＴＧＡＴＴＣＣＡＧＣＧＣＡＧＡＡＡＣＴＣＧＡ
ＡＧＧＡＧＣＣＣＴＴＴＩＥＣＣＣＧＣＣＧＴＣＣＴＡ
ＴＴＴＡＧＴＣＡＡＣＴＣＴＴτＣＣＴＡＧＣＣＧＣＧ
Ａ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＧ
Ｃ ＧＧＡ ＧＣＡ ＡＧＧＴＴＧ ＧＣＣ Ｃ
ＴＧ ＴＴＧ ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＧＧ ＡＴ
Ａ ＡＴＡ ＡＴＧ ＣＡＴＡＡＣ ＡＧＣ
ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＴＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＧＡ ＣＴＣＡＧＣ ＴＴＣ
ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＴＣ ＡＧＡ ＣＣＡ
ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＣＴＴＡＣ ＧＡＴ
ＣＡＧ ＧＡＣ ＧＧＡ ＡＡＣ ＣＣＧ
ＣＴＧ ＣＡＡ ＧＡＣ ＴＴＣＴＡＧ ＧＡＣ
ＴＧＧ ＧＡＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＧＧＣ ＧＣＡ
ＧＧＧ ＡＧＣ ＣＣＣＧＣＣ ＴＣＣ Ｇ
ＣＧ ＣＴＧ ＣＧＴ ＧＡＣ ＧＣＣ Ｔ
ＡＣ ＧＣＣ ＣＴＴ ＴＡＣＴＡＣ ＣＣＡ
ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＧＧ ＡＧＡ ＧＡＴ
ＧＴＣ ＧＣＣ ＣＡＣ ＧＡＡＡＴＣ ＣＴＴ
ＡＡＣ ＧＡＡ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＧＣ
ＡＡＡ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＣＣＡＧ Ｃ
ＴＧ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＧＧ ＡＡＧ Ｔ
ＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＣＣ ＡＴＧＧＴＧ
ＧＣＣ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＧＣ
ＧＡＧ ＡＡＣ ＣＴＣ ＧＣＣ ＧＣＣ
ＧＣＣ ＧＣＧ ＧＴＧ ＧＡＣ ＧＡＣ
ＣＧＧ ＧＣＡ ＣＣＣ ＣＴＴ ＡＣＣ
ＡＡＡＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧ
Ｃ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＴＡＴＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＣＧＡ Ａ
ＡＡ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ Ａ
ＡＧ ＡＡＡＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣ
ＧＴＧ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＧ
ＴＡＴ ＡＡＡＣＡＧ ＡＧＧ ＧＴＴ ＾＾
Ａ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡ
ＡＴＡ ＧＣＧＴＡＣ ＴＴＧ ＴＡＧ Ｃ
ＧＡＴＧＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡ
ＴＡＡＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴ
ＴＧＡＣＴＧＡＣＣＡＧＴＣＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧ
ＴＴＣＴＴＴＣＣＡＡＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡ
ＴＣＡＡＧＴＡＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴ
ＴＴＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴ
ＴＴＡＣＧＡＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＣＡＣＡＧ
ＡＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴ＾丁ＴＧＡ
ＴＡＴＡＴＡＴＴＡＴ＾＾ＧＴＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡ
ＡＴＡＴＡＴＡＴＡＧＧＴＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡ
ＡＴＴＣＡＴＡＡＧＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＡ
ＡＡＡＴＴＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴ＾ＴＧＴＴＴ
ＴＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡ
ＧＡＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＴＴ丁ＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴ
ＣＣＴＡ丁ＴＴＴＴＧ丁ＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡ
ＧＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧ
ＣＴＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＡＡＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴ
ＴＧＴＡＣＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣ
ＣＡＧＧＡＧＡＡＴＴＣ本発明におけるラットＰＡＣＡ
Ｐ３８の前廓体としては、〔式１２〕、〔式１３〕で表
わされるものが挙げられる． 〔式１２〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｌａ ＡｌａＡｌａ ＾ｌ
ａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌ
ａ Ｐｒｏ Ｌａｕ Ｔｈｒ ＬｙｓＡｒｇ
｝Ｉｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ｐｈｅ
Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ ＴｙｒＳｅｒ Ａｒｇ Ｔｙ
ｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ ＬｙｓＴｙｒ Ｌ６ＬＩ ＾１ａ ＾ｌ
ａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒ
ｇ Ｔｙｒ ＬｙｓＧｉｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙ
ｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ
＾１ａＴｙｒ Ｌｅｕ ＊電本 〔式１３〕 Ｍａｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓａｒ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ ＬｅｕＬｅｕ Ｖａ
ｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｍｅｔ
Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｓｅｒ ＶａｌＳｅｒ Ｃ
ｙｓ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅ
ｕ Ｓｅｒ Ｐｈｅ ＰｒｏＧｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａ
ｓｐ ＧｉｎＡｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ ＴｒｐＡ
ｓｐ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｓ
ｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｓｅｒ ＡｌａＬａｕ Ａｒｇ
Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｓｕ Ｔｙｒ
Ｔｙｒ Ｐｒｏ ＡｌａＡｓｐ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓ
ｐ Ｖａｌ Ａｌａ ｔ｛ｉｓ Ｇｌｕ ＩＩｓ Ｌ
ｏｕ ＡｓｎＧｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｉｎ Ｌｅｕ ＳｅｒＡ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｎ Ｓｅｒ Ｍｅｔ ＶａＬ Ａｌａ Ａ
ｒｇＧｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｌｅｕ ＾ｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ
ＶａｌＡｓｐ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌ
ｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ｔｌｉｓ Ｓｅｒ
＾ｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓ
ｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ ＴｙｒＡｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＾１ａＡｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ａｒｇ ＶａｌＬｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒ
ｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＊＊
＊本発明方法におけるＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱく
または成熟ＰＡＣＡＰ３８をコードする塩基配列を有す
るＤＮＡを含有する発現型ベクターは、例えば、（ｉ）
ＰＡＣＡＰ３８産生細胞からメッセンジャーＲＮＡ （
ｍＲＮＡ）を分離し、（ｉｉ）該ｍ Ｒ Ｎ Ａから単
鎖の相補ＤＮＡ （ｃＤＮＡ）を、次いで二重鎖ＤＮＡ
を合戊し、（ｔｉｔ）該相補ＤＮＡをファージまたはプ
ラスミドに組み込み、（ ｉｖ ）得られた組み換えフ
ァージまたはプラスミドで宿主を形質転換し、（Ｖ）得
られた形質転換体を培養後、形質転換体から適当な方法
、例えばＰＡＣＡＰ３８の一部をコードするＤＮＡプロ
ーブとのハイブリダイゼーションにより、あるいは抗Ｐ
ＡＣＡＰ３８抗体を用いたイムノアッセイ法により目的
とするＤＮＡを含有するファージあるいはプラスミドを
単離し、（ｖｉ）その組み換えＴ．） Ｎ Ａから目的
とするクローン化ＤＮＡを切り出し．（ｖｉｉ）該クロ
ーン化ＤＮＡまたはその一部を発現ベクター中のプロモ
ーターの下流に連結する、ことにより製造することがで
きる。 ＰＡＣＡＰ３８をコードするｍＲＮＡは、種々のＰＡＣ
ＡＰ３８産生細胞、例えばヒツジ視床下部、ヒト視床下
部、精巣あるいはラット視床下部、精巣などから得るこ
とができる． ＰＡＣＡＰ３８産生細胞からＲＮＡを調製する方法とし
ては、グアニジンチオシアネート法〔（ジェー・エム・
チルグウィン（Ｊ．Ｍ． ．Ｃｈｉｒｇｗｉｎ）ら，バ
イオケミストリ−（Ｂｉｏ−ｃｈｓｍｉｓ’ｃｒｙ）
， １８．５２９４（１９７９））などが挙げられる． このようにして得られたｍＲＮＡを鋳型とし、逆転写酵
素を用いて、例えば岡山（Ｈ．Ｏｋａｙａｍａ）らの方
法〔モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ） ２＋１６１（１９８２）および同誌３
２８０（１９８３））に従いｃＤＮＡを合威し、得ら
れたｃＤＮＡをプラスミドに組み込む。 ｃＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、たとえば大腸
菌由来のＰＢ Ｒ３２２（ジーン（ｇｅｎｅ）４Ｌ９５
（１９７７）），ρＢＲ３２５（ジーン，４１２１（１
９７８）），ｐＵ Ｃ １．２（ジーン．■扉，２５９
（１９８２）），ｐＵ Ｃ ２３［ジーン，旦涜２５９
（１９８２））、枯草菌由来のｐＵＢ１１０（バイオケ
ミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーヨ
ン（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐ
ｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕ
ｎｉｃａｔｉｏｎ），１１２ ６７８（１９８３））な
どが挙げられるが、その他のものであっても、宿主内で
複製増殖されるものであれば、いずれをも用いることが
できる。またｃＤＮＡを組み込むファージベクターとし
ては、たとえばλｇｔｌｌ（ヤング及びデーヴイス（Ｙ
ｏｕｎｇ， Ｒ．． ａｎｄ Ｄａｖｊ．ｓ， Ｒ．ｅ
）プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユー・エス・二一
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．＾ｃａｄ． Ｓｃｉ．，Ｕ，Ｓ
．Ａ，），８０．１１９４（１９８３）３などが挙げら
れるが、その他のものであっても宿主内で増殖できるも
のであれば用いることができる．ブラスミドに組み込む
方法としては、たとえば、ティー・マニアティス（Ｔ．
Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら，モレキュラー・クローニング（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）コールド・スプ
リング・ハーバー・ラボラトリー（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），第２３９
頁（１９８２）に記載の方法などが挙げられる．またフ
ァージベクターにｃＤＮＡを組み込む方法としては、た
とえばヒューン（ｔ｛ｙｕｎｈ．τ．■．）らの方法〔
ディー・エヌ・エークローニングアプラクティカルアプ
ローチ（ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｐｒａｃｔｉ
ｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ） １ ． ４９（１９８５
）〕などが挙げられる． このようにして得られたプラスミドは、適当な宿主たと
えばエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属菌，バ
チルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属菌などに導入する．上記
エシェリキア属菌の例としては、エシェリキア・コリ（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｋ １２Ｄ ｝
｛ ｌ （プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．）彰扉１６０（
１９６８）），Ｍ１０３［ヌクレイック・アシッズ・リ
サーチ，（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ）．９３０！Ｊ（１９８１）Ｌ Ｊ Ａ ２２１（
ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ）），１２ム５１７（１９７８））， ＨＢＩＯＩ（
ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ−４１．
４５９（１９６９）） ， Ｃ ６００（ジェネティッ
クス（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ） ，影Ｌ４４０（１９５４）
）などが挙げられる． 上記バチルス属菌としては、たとえばバチルス・サチリ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｍ Ｉ
１１４（ジーン，２！ＬＬ２５５（１９８３）），２０
７−２１（ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊ
ｃｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｌ！
Ｊ−８７（１９８４））などが挙げられる． プラスミドで宿主を形質転換する方法としては，たとえ
ばティー・マニアティス（Ｔ， Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら
，モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ），コールド・スプリング・ハーバー・
ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），第２４９頁（１９８２）に
記載のカルシウムクロライド法あるいはカルシウムクロ
ライド／ルビジウムクロライド法などが挙げられる。 またファージ・ベクターを用いる場合には，たとえば増
殖させた大腸菌にインビトロバッケージング法を用いて
導入することができる．ヒツジ、ヒトあるいはラットの
各ＰＡＣＡＰ３８ ｅＤＮＡを含有するヒツジ，ヒト
あるいはラット・の各ｃＤＮＡライブラリーは上記の方
法などで得ることが出来る． 各ｃＤＮＡライブラリーからＰＡＣＡＰ３８ｃＤＮＡを
クローニングする方法としては、例えばファージベクタ
ーλｇｔｌｌと抗ＰＡＣ：ＡＰ３８抗体を用いたＨｕｙ
ｎｈらの方法〔ディーエヌエークローニング、アブラク
ティカルアブローチ（ＤＮＡ ｃ１ｏｎｉｎｇ， ａ
ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ），ｐ４９（１
９８５））あるいはＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸配列に基
づいて化学合成したオリゴヌクレオチドをプローブとし
て用いたコロニーハイブリダイゼーションまたはプラー
クハイプリダイゼーション法〔ティー・マニアティス（
Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら，モレキュラー・クローニン
グ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）コールド・
スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）， （
１９８２））などが挙げられる。 このようにしてクローン化されたＰＡＣＡＰ３８ ｃ
ＤＮＡは必要があればプラスミド、例えばｐＢＲ３２２
； ｐＵｃ１２．ｐＵｃ１３，ｐＵｃ１８，ｐＵＣ１９
，ｐＵｃ１１８，ｐＵｃ１１９などにサブクローニング
してヒツジＰＡＣＡＰ３８ ｃＤＮＡを得ることがで
きる． このようにして得られたＤＮＡの塩基配列を，たとえば
マキサム・ギルパート（Ｍａｘａｍ−Ｇｉｌｂｅｒｔ）
法（Ｍａｘａｍ． Ａ， Ｍ． ａｎｄ ＧＬｌｂａｒ
ｔ， ｗ．，プロシーデイングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・二一・
エス・二一（Ｐｒｏｅ． Ｎａｔｌ．＾ｅａｄ． Ｓｅ
ｉ．，Ｕ．Ｓ．＾．） ， ７４ ， ５６０ （１９
７７）’）あるいはジデオキシ法（Ｍｅｓｓｉｎｇ，
Ｊ．ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌ
ａｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）９３０９（１
９８１））によって決定し，既知のアミノ酸配列との比
較からＰＡＣＡＰ３８ ｃＤＮＡの存在を確認する。 以上のようにしで、ＰＡＣＡＰ３８の前酩体たんぱくの
一部をコードするＤＮＡ （ヒツジＰＡＣＡＰ３８
ｃＤＮＡ）（式２）が得られる．後述の実施例１で得ら
れたヒツジＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの−・部を
コードするＤＮＡの制限酵素断片地図を第ｌ図に示す．
またジデオキシ法で決定したｃ Ｄ Ｎ Ａの塩基配列
と、その塩基配列から判明したアミノ酸配列を第２図に
示す．上記のようにしてクローン化されたヒツジＰＡＣ
ＡＰ３８の前翻体たんぱくの一部をコードするＤＮＡは
目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化
して使用することが出来る．クローン化されたＤＮＡか
ら発現させたい領域を切り出し、発現に適したビークル
（ベクター）中のプロモーターの下流に連結して発現型
ベクターを得ることができる． 該ＤＮＡはその５′末端に翻訳開始コドンとしてのＡＴ
Ｇを有し，また３′末端には翻訳終止コドンとしてのＴ
ＡＡ，ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい．これら
の翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは，適当な合或ＤＮ
Ａアダプターを用いて付加することもできる。さらに該
ＤＮＡを発現させるにはその上流にプロモーターを接続
する。 ベクターとしては，上記の大腸菌由来のプラスミド（例
、ｐＢ Ｒ３２２， ｐＢ Ｒ３２５，ρＵＣｌ．２，
ρＵＣ１３），枯草菌由来プラスミド（例、ｐＵＢ１１
０， ｐＴＰ ５ ， ｐＣ １９４） ，酵母由来プ
ラスミド（例、ＰＳ｝｛ｌ９， ｐｓ Ｈ１５），ある
いはλファージなどのバクテリオファージおよびレトロ
ウィルス、ワクシニアウィルスなどの動物ウィルスなど
が挙げられる．本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい．形質転換する際
の宿主がエシェリキア属菌である場合は、ｔｒｐプロモ
ーター，Ｍａｃプロモーター ｒｅｃＡプロモーター
λＰＬプロモーター ＱＰＰプロモーターなどが、宿
主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯＩプロモーター
，ＳＰＯ２プロモーター，ｐｅｎＰプロモーターなど，
宿主が酵母である場合は、ＰＨ０５プロモーターＰＧＫ
プロモーター，ＧＡＰプロモーター，ＡＤＨプロモータ
ーなどが好ましい．とりわけ宿主がエシェリキア属菌で
プロモーターがｔｒｐプロモーターまたはλＰＬプロモ
ーターであることが好ましい． 宿主が動物細胞である場合には、ＳＶ４０由来のプロモ
ーター、レトロウイルスのプロモーターメタロチオネイ
ンプロモーター、ヒートショックプロモーターなどがそ
れぞれ利用できる．なお、発現にエンハンサーの利用も
効果的である． このようにして構築されたＰＡＣＡＰ３８の前翻体たん
ぱくや或熟ベプチドＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡ
を含有するベクターを用いて、形質転換体をｉ造する． 宿主としては、たとえばエシェリキア属菌、バチルス属
菌、酵母、動物細胞などが挙げられる．上記エシェリキ
ア属菌、バチルス属菌の具体例としては、前記したもの
と同様のものが挙げられる． 上記酵母としては、たとえばサツ力口マイセスセレビシ
エ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｓｓ ｃｅｒｓｖｉｓｉａ
ｅ） Ａ Ｈ ２２，ＡＨ２２Ｒ ，ＮＡ８７−１１Ａ
，ＤＫＤ−５Ｄなどが挙げられる． 動物細胞としては、たとえばサル細胞ＣＯＳ−７，Ｖａ
ｒｏ，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ，マウスＬ細
胞，ヒトＦＬ細胞などが挙げられる．上記エシェリキア
属菌を形質転換するには、たとえばプロシージング・オ
ブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス（
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ置，Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ＠υＳＡ），
６９．２１ｉ０（１９７２）やジーン，１７，１０７（
１９１１２）などに記載の方法に従って行なわれる．バ
チルス属菌を形質転換するには，たとえばモレキュラー
・アンド・ジェネラル・ジエネテイツクス（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ ＆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）
，１６８，ｌｉｌ（１９７９）などに記載の方法に従っ
て行Ａわれる．酵母を形質転換するには、たとえばプロ
シージング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ），７５， １９２９（１９７８）に記載の方
法に従って行なわれる。 動物細胞を形質転換するには、たとえばヴイロロジー（
Ｖｉｒｏ１ｏｇｙ）奴，４５６（１９７３）に記載の方
法に従って行なわれる． このようにして、ＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの一
部や戊熟ベプチド（ＰＡＣＡＰ３８）をコードするＤＮ
Ａを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体
が得られる． 宿主がエシェリキア属菌、パチルス属菌である形質転換
体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培
地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要
な炭素源，窒素源、無機物その他が含有せしめられる．
炭素源としては、たとえばグルコース、デキストリン、
可溶性澱粉、シヨ糖など、窒素源としては，たとえばア
ンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカーベ
ブトン、カゼイン、゛肉エキス、大豆粕、バレイショ抽
出液などの無機または有機物質、無機物としてはたとえ
ば塩化カルシウム，リン酸二水素ナトリウム、塩化マグ
ネシウムなどが挙げられる．また、酵母、ビタミン類、
生長促進因子などを添加してもよい。 培地のｐＨは約５〜８が望ましい。 エシェリキア属菌を培養する際の培地としては、例えば
グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔ミラー（Ｍｉ
ｌｌｅｒ） ，ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・
イン・モレキュラー・ジェネティックス（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ），４３１−４３３，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ ｌ＋ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ， Ｎｅｗｙｏｒｋ １９７２）が好ましい．こ
こに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために
、たとえば３β一インドリルアクリル酸のような薬剤を
加えることができる， 宿主がエシェリキア属菌の場合、培養は通常約１５〜４
３℃で約３〜２４時間行い、必要により，通気や攪拌を
加えることもできる。 宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃
で約６〜２４時間行ない、必要により通気や攪拌を加え
ることもできる。 宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地として
は、たとえばパークホールダ−（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ
）最小培地（Ｂｏｓｔｉａｎ， Ｋ． Ｌ．ら、「プロ
シージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オ
ブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ）７７．４５０５（１９８０）〕が挙げられ
る。培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培
養は通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行い、必
要に応じて通気や攪拌を加える。 宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地と
しては、たとえば約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥ
Ｍ培地〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １２２，５０
１（１９５２））． ＤＭＥＭ培地〔ヴイロロジー（Ｖ
ｉｒｏ−Ｌｏｇｙ），８，３９６（１９５９））， Ｒ
Ｐ Ｍ Ｉ １ ６ ４ ０培地〔ジャーナル・オブ
・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（Ｔ
ｈｅ Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）１９９，５
１９（１９６７）），１ ９ ９培地〔プロシージング
・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカ
ル・メディスン（Ｐｒｏ−ｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ）７３， １ （１９５０）３
などが挙げられる．ｐＨは約６〜８であるのが好ましい
。培養は通常約３０℃〜４０℃で約↓５〜６０時間行い
、必要に応じて通気や撹拌を加える． 上記培養物からＰＡＣＡＰ３８の前馳体たんぱくの一部
や成熟ペプチド（ＰＡＣＡＰ３８）を分離精製するには
、例えば下記の方法により行なうことができる。 ＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの一部や或熟ベプチド
（ＰＡＣＡＰ３８）を培養菌体あるいは細胞から抽出す
るに際しては，培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞
を集め，これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチ
ームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは
細胞を破壊したのち，遠心分離やろ過によりビッジＰＡ
ＣＡＰ３８の前輛体たんぱくの一部や成熟ペプチドの粗
抽出液を得る方法などが適宜用い得る．緩衝液の中に尿
素や塩酸グアニジンなどのたんぱく変性剤や、トリＦ・
ンＸ−１００などの界面活性剤が含まれていてもよい。 培養液中にＰＡＣＡＰ３８前翻体たんぱくの一部や成熟
ペプチドが分泌される場合には，培養終了後、それ自体
公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清
を集める．このようにして得られた培養上清、あるいは
抽出液中に含まれるヒツジＰＡＣＡＰ３８前邸体たんぱ
くの一部や或熟ベプチドは，自体公知の分離・精製法を
適切に組み合わせて行なうことができる．これらの公知
の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解
度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、
およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法など
の主として分子量の差を利用する方法，イオン交換クロ
マトグラフイーなどの荷電の差を利用する方法，アフィ
ニティーク口マトグラフイーなどの特異的親和性を利用
する方法、逆相高速液体クロマトグラフイーなどの疎水
性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点
の差を利用する方法などが挙げられる．かくして生或す
るＰＡＣＡＰ３８前馳体たんぱくの一部や成熟ペプチド
は特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイなどによ
り測定することができる．また生戒物に血圧降下作用が
ある場合は、該活性を指標にして測定することもできる
．止血騒妃象 本発明のＤＮＡでＤＮＡ感染または形質転換した菌体や
細胞では、大量のＰＡＣＡＰ３８の前翻体や、ＰＡＣＡ
Ｐ３８蛋白を得ることが出来、これを実験動物で使用す
ることにより、その作用，特に脳の機能に関する研究、
特にホルモン類による脳機能の理解に応用し、さらにこ
れらの知見はヒトの脳機能の解明に役立つ知見をもたら
すものである。 そして、このＰＡＣＡＰ３８はｃ Ａ Ｍ Ｐの上昇活
性があることから、ヒト、ラット脳神経の成長，維持等
に関する情報を得ることができ、またヒトの各種神経障
害の治療薬として利用することがでできる． 以上、ヒツジ，ヒトおよびラットのＰＡＣＡＰ３８をコ
ードするｃＤＮＡのクローニング、ヒツジ、ヒトおよび
ラットのＰＡＣＡＰ３８前廓体の一部および成熟ベプチ
ドの発現ベクターの作製と、それらによる形質転換体の
製造、該形質転換体を用いたＰＡＣＡＰ３８前駆体たん
ぱくの一部および成熟ベプチドの製造及びその有用性等
について詳細に述べた。 本発明明細書および図面において，塩基やアミノ酸など
を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｃｏｍｍ
ｉｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅ＋＋ｉｃａｌ Ｎｏｍ
ｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野におけ
る慣用略号に基づくものであり、その例を下記する．ま
たアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明
示しなければＬ一体を示すものとする．ＤＮＡ ：デ
オキシリボ核酸 ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ：デオキシアデノシン三リン酸ｄＴＴＰ：デオ
キシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸ｄＣＴＰ：デオ
キシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＢＨＡ ：ベンツヒドリルアミン ＣＩｌ−Ｚ：２−クロローペンジルオキシカルボニルＢ
ｒ−Ｚ：２−プロモーベンジルオキシ力ルボニルＢｚｌ
：ベンジル ＯＢｚｌ：ベンジルエステル ＨＯＢｔ：１−ペンゾトリアゾール ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’ジシクロへキシル力ルポジイミド Ｇ１ｙまたはＧ ：グリシン ＡｌａまたはＡ ：アラニン Ｖａｌまたは■ ：パリン ＬｅｕまたはＩ，：ロイシン Ｉ１ｅまたはＩ ：インロイシン ＳｅｒまたはＳ ：セリン ＴｈｒまたはＴ ：スレオニン ＣｙｓまたはＣ ：システイン ＭｅｔまたはＭ ：メチオニン ＧｌｕまたはＥ ：グルタミン酸 ＡｓｐまたはＤ ：アスパラギン酸 ＬｙｓまたはＫ ：リジン ＡｒｇまたはＲ ：アルギニン ＨｉｓまたはＨ ：ヒスチジン ＰｈｅまたはＦ ：フエニールアラニンＴｙｒまたはＹ
：チロシン Ｔ ｒ ｐまたはＷ ：トリプトファンＰｒｏまたはＰ
：プロリン ＡｓｎまたはＮ ：アスパラギン ＧｌｎまたはＱ ：グルタミン なお、本発明のＰＡＣＡＰ３８前馳体蛋白や或熟ペプチ
ドにおいては、そのアミノ酸配列の一部が修飾（付加、
除去、その他のアミノ酸への置換など）されていてもよ
い． 見笈旌 以下の参考例および実施例により本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない
． 後述の実施例２で得られた形質転換体エシェリキア・コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｄ Ｈ ５
ａ ／ ｐ Ｏ Ｈ ３８Ｐ７は平或１年６月１９日
に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ Ｒ
Ｉ ）に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２４８４として寄
託され、また該微生物は平或１年６月１５日から財団法
人発酵研究所（ＩＦ○）に受託番号Ｉ Ｆ ０ １４８
８４として寄託されている。 後述の実施例３で得られた形質転換体エシェリキア コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｄ ｝ｉ
５ ａ ／ ｐ ＨＴ３８Ｐ８は平成１年１０月４日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２６２２として寄託され
、また該微生物は平成ｌ年９月２８日から財団法人発酵
研究所（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦ○ １４９５３として
寄託されている． 後述の実施例４で得られた形質転換体エシエリキア コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｊ Ｍ １
０９／ ｐ Ｒ Ｂ３８Ｐ２１は平或２年２月１９日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２７６２として寄託され
ている． 参】四殊１ ヒトとヒツジのＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸配列は同一で
あるが、ヒツジ視床下部から精製したＰＡ Ｃ Ａ Ｐ
３ ８ （Ｎａｔ．３８ｐ）と合或Ｐ Ａ Ｃ Ａ
Ｐ ３ ８ （Ｓｙｎ．３８ｐ）をラット下垂体細胞に
ｉｎ ｖｉｔｒｏで作用させるとＡｄｅｎｙｌａｔｅ
ｃｙｃｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙの上昇が認められる
．有効最少量は１０″″”Ｍで濃度が高くなるにつれて
、その活性を高まることが示された．また合或の２７−
ＮＨ，（第２図のアミノ酸１３２〜１５８番目（成熟Ｐ
ＡＣＡＰ３８の１〜２７番目、次表のＳｙｎ．２７ｐ−
ＮＨ，）にも同様な活性を認められた．それに反して合
成ブタＶ Ｉ Ｐ （ｖａｓｏａｃｔｌｖａ ｉｎｔｅ
ｓｔｆｎａｌ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）にはそれ相当
の活性は認められなかった． 対照（ブランク） Ｓｙｎ．ｐＶＩＰ １０″″１２月 ｐＶＩＰ １０″″１１ Ｍ ｐＶＩＰ １０″″１０ Ｍ ｐＶＩＰ １０−ｇＭ ＰＶＩＰ １０″″″ Ｈ ｐＶＩＰ １０″″７Ｍ Ｓｙｎ．２７ｐ−Ｎ｝Ｉｍ １０″″１２２７Ｐ−ＮＨ
２１０−” ２７ｐ−ＮＨ， １０−” ２７ｐ−Ｎ｝ｌ， １０″″″ ２７Ｐ−Ｎ｝ｌよ１０１ ２７ｐ−ＮＨ， １０″″゛′ Ｓｙｎ．３８ｐ １０″″１１ Ｈ ｅＡＭＰ ｐモル／ｍｌ （Ｍ±ＳＥＭ）１．５５±０
．１５ １．３５±０．０５ １．４０±０．００ １．４５士０．１５ １．７５±０．０５ ２．５５±０．２５ ３．３０＋Ｏ。２０ ２．０５±０．１５ ２．５５±０．１５ ４．００±０．２０ ７．９０±０．３０ ９．２０±０．００ ９．２０±０．２０ ２．１５±０．０５ ３８ｐ １０”−” Ｍ ３８ｐ １０−１ｌｌＭ ３８ｐ １０−’ Ｍ ３８ｐ １０−” Ｈ ３８ρ １０” Ｍ Ｎａｔ．３８ｐ １０−” Ｍ ３８ｐ １０−” ！’１ ３８ｐ １０″″１０ 阿 ３８ｐ １０−９ Ｎ ３８ｐ １０−” Ｍ 対照（ブランク） 艷生鮭−１ 参考例１で用いた物質をラット下垂体細胞に同様に作用
させたところ、そこでのプロラクチン（ＰＲＬ）、ＡＣ
ＴＨ．ＧＨの放出活性も確認された．去一獲掬」２ ヒ
ッジＰＡＣＡＰ３８の一部をコードするＤＮＡプローブ
の作製 ヒツジＰＡＣＡＰ３８のｌ〜２７残基目のアミ３．０５
±０．３５ ４．６０±０．２０ ６．２０±０．１０ ８．６０±０６２０ ８．７０±０．２０ １．５０±０．１０ １。７５±０．０５ ２．６０±ｏ．ｉｏ ４．６０±０．００ ８．０５±０．３５ １．３５±０．０５ ノ酸配列 Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓａｒ＾ｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｉｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ ＴｙｒＬｅｕ Ａｌａ Ａｌａ
Ｖａｌ Ｌｅｕから予想されるメッセンジャーＲＮ
Ａの配列を推定し、次のような配列を持つ、ＤＮＡブロ
ーブを化学合或した． ５’ −ＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＡＡＴＣＴＴＣＡＣＡ
ＧＡＴＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴＡＴＡＧＡＡＡＧＣ
ＡＡＡＴＧ−３’および３’ −ＴＣＧＧ Ｃ Ｇ Ａ
Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｔ Ｔ
Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ ＣＡＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＡＡＣ
ＣＧＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴ−５’ このＤＮＡプローブの５′端をＴ４ボリヌクレオチドキ
ナーゼを用いて３２Ｐ−りん酸化し、ｃＤＮＡライブラ
リのスクリーニングに用いた．去』４ロ』２ ヒツジ・
ＰＡＣＡＰ３８前駒体ｃＤＮＡの単離とその塩基配列の
決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述のヒツジ視床下部ｃ ＤＮＡ
ライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ， Ｉｎｃ，製）を感染させてブレーティングし
、ファージプラークを出現せしめた．ベントンとディビ
ス（Ｂｅｎｔｏｎ，１，， Ｄａｖｉｓ＋ Ｒ．）の報
告〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０
−１８２（１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部
をニトロセルロース膜にうつしとり、３１Ｐで標識した
前項のＤＮＡプローブとプラークハイプリダイゼーショ
ンを行なった。ハイブリダイゼーションは、ホルムアミ
ド非存在下，６０℃で行なった。 ハイブリダイゼーション陽性の５個のクローンをそれぞ
れ単離し、そのうちのひとつであるλＯＨ３８Ｐ７のｃ
ＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩで切り出してプラスミドｐＵｃ
１８のＥｃｏＲ１部位にリクローニングし，プラスミド
ｐ ＯＨ３８Ｐ７を作製した．このプラスミドで大腸菌
ＤＨ５αを形質転換し、形質転換体エシエリキア・コリ
Ｄ Ｈ ５α／ｐＯＨ３８Ｐ７を得た。このブラスミド
に含まれるｃＤＮＡ部分は１．８Ｋｂｐであり、その簡
単な制限酵素地図を第１図に示した．図中の区域は以下
のものを示す． ■：ヒツジＰＡＣＡＰ３８或熟体コード域このｃＤＮＡ
部分の塩基配列をサンガー（Ｓａｎｇａｒ）の方法〔プ
ロシージングオブザナショナルアカデミーオブサイエン
ス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｅａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）
７４．５４６３−５４６７ （１９７７） ）によっ
て決定した．この塩基配列、およびそれより推定される
ヒツジＰＡＣＡＰ３８前翻体のアミノ酸配列の一部を第
２図に示した．［コで囲った領域が、ヒツジＰＡＣＡＰ
３８或熟ペプチド部である． ３ｄ逍１１』− ヒト・ＰＡＣＡＰ３８前翻体ｃ ＤＮ
Ａの単離とその塩基配列の決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述の精巣ｃＤＮＡライブラリ−
（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉ
ｎｃ．製）を感染させてプレーティングし，ファージブ
ラークを出現せしめた．ベントンとデイビス（Ｂｅｎｔ
ｏｎ， １４．， Ｄａｖｉｓ，Ｒ．）の報告〔サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０−１８２（
１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部をニトロセ
ルロース膜にうつしとり、３２Ｐで標識した前項のＤＮ
Ａプローブとプラークハイプリダイゼーションを行なっ
た．ハイブリダイゼーションは、ホルムアミド非存在下
、６０℃で行なった。ハイブリダイゼーション陽性の５
個のクローンをそれぞれ単離し，そのうちのひとつであ
るλＨＴ３８Ｐ８のｃＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩで切り出
してブラスミドｐＵｃ１８のＥｃｏＲ１部位にリクロー
ニングし、ブラスミドｐＨＴ３８Ｐ８を作製した。この
プラスミドで大腸菌ＤＨ５αを形質転換し、形質転換体
エシェリキア・コリＤ Ｈ ５α／ｐＨＴ３８Ｐ８を得
た。このブラスミドに含まれるｃＤＮＡ部分は２．３Ｋ
ｂｐであり、その簡単な制限酵素地図を第３図に示した
。図中の区域は以下のものを示す．■：ヒトＰＡＣＡＰ
３８成熟体コード域このｃＤＮＡ部分の塩基配列をサン
ガー（Ｓａｎｇｅｒ）の方法〔プロシージングオブザナ
ショナルアカデミーオブサイエンス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ） ７４．５４６３−５
４６７ （１９７７） ）によって決定した。 この塩基配列、およびそれより推定されるヒトＰＡＣＡ
Ｐ３８前翻体のアミノ酸配列の一部を第４図に示した。 〔コで囲った領域が、ヒトＰＡＣＡＰ３８或熟ペプチド
部である． 夫笈鼻土 ラット・ＰＡＣＡＰ３８前艶体ｃＤＮＡの単
離とその塩基配列の決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述のラット脳ｃＤＮＡライブラ
リー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ｉｎｃ，製）を感染させてプレーティングし、ファー
ジプラークを出現せしめた．ベントンとデイビス（Ｂｅ
ｎｔｏｎ， Ｗ．， Ｄａｖｉｓ， Ｒ．）の報告〔サ
イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０−１８
２（１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部を二ｌ
一ロセルロース膜にうつしとり，３２Ｐで標識した前項
のＤＮＡプローブとプラークハイプリダイゼーションを
行なった。ハイブリダイゼーションは、ホルムアミド非
存在下，６０℃で行なった．ハイブリダイゼーション陽
性の４個のクローンをそれぞれ単離し、そのうちのひと
つであるλＲＢ３８Ｐ６８のｃＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩ
で切り出してプラスミドｐＵｃｌ＆のＥｃｏＲ１部位に
リクローニングし、ブラスミドｐ Ｒ８３８Ｐ２１を作
製した。 このプラスミドで大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し，形質
転換体エシェリキア・コリＪＭ１０９／ＰＲＢ３８Ｐ２
↓を得た．このブラスミドに含まれるｃＤＮＡ部分は１
．２ＫｂＰであり、その簡単な制限酵素地図を第５図に
示した．図中の区域は以下のものを示す． ■：ラソトＰＡＣＡＰ３８或熟体コード域このｃＤＮＡ
部分の塩基配列をサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）の方法（プ
ロシージングオブザナショナルアカデミーオブサイエン
ス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ）
７４．５４６３−５４６７ （１９７７） ）によっ
て決定した．この塩基配列、およびそれより推定される
ラットＰＡＣＡＰ３８前駆体のアミノ酸配列を第６図に
示した．口で囲った領域が、ラットＰＡＣＡＰ３８戊熟
ペブチド部である。 去』１赳５ ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ，の合或市販
のｐ−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシステム
ズ社製） １．０４ｇ（０．５ｍ ｍｏｌｅ）を用い、
ペプチド合成基（アプライド バイオシステムズ社製モ
デル４３０Ａ）を使用し、合威した。 最初のアミノ酸、ＢｏＣ−Ｌｙｓ（ＣＩ４）をＨＯＢｔ
／ＤＣＣで活性化し、樹脂に縮合した後、樹脂上のＢｏ
ａ基を５０％トリフルオ口酢酸／塩化メチレンで処理し
，アミン基を遊離させ、このアミノ基に、Ｂｏａ−Ａｓ
ｎ，Ｂｏｃ−Ｌｙｇ（Ｃｌ ・Ｚ），Ｂｏａ−Ｖａ ｌ
，Ｂｏａ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ），Ｂｏｃ−Ｇｌｎ，Ｂｏ
ａ−Ｔｙｒ （Ｂｒ Ｎ Ｚ），Ｂｏｃ−Ｇｌｙ．Ｂ
ｏｃ−Ｌｅｕ，Ｂｏａ−Ａｌａ，ＢｏＣ−Ｍｅｔ，Ｂｏ
Ｃ−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ），Ｂｏｃ−Ａｓｐ （ＯＢ
ｚｌ），Ｂｏａ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）， Ｂｏｃ
−Ｐｈｅ， Ｂｏｃ−Ｉ１ｅ，Ｂｏａ−Ｈｉｓ （
Ｔｏｓ）をＰＡＣＡＰ−３８のアミノ酸配列通り順にＨ
ＯＢ ｔ／ＤＣＣで活性化し縮合した．各反応終了後、
残存するアミノ基は無水酢酸でアセチル化し、保護ＰＡ
ＣＡＰ−３８ ＮＨ，樹脂２．４２ｇを得た。 この保護ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ２樹脂０．５１ｇを
ｐ−クレゾール０．６ｇ共存下フッ化水素５ｍＲでＯ℃
，６０分間処理した後、フッ化水素を減圧留去し、残渣
をエチルエーテル５ｍＱで２回洗浄した後、残査を５０
％一酢酸水６ｍＡで抽出した。不溶物をろ去し，５０％
酢酸水５ｒｎ！で洗浄した．ろ液，洗液を合し２〜３ｍ
ｆｌに減圧濃縮し、セファデックスＬＨ−２０ （２Ｘ
９０ｃｍ）のカラムに付し、５０％一酢酸で溶出した。 主要画分を集め減圧留去ののち、残留物を、０．ｌ％ト
リフルオロ酢酸水１００ｍ Ｑに溶解し，ＹＭＣ−ＯＤ
Ｓ ＡＭ１２０ Ｓ−５０４１脂カラム（２．６ｘ
７ ｃ ｍ）につけ、０．１％トリフルオロ酢酸水と５
０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）
の間での直線型濃度勾配で溶出した．主要画分を合し、
凍結乾燥し６０ｍｇの白色粉末を得た．これを０．０５
Ｍ−酢酸アンモニア水２０ｍＱに溶解し、ＣＭ−セル口
ファインの樹脂力ラム（ＩＸ６ｃｍ）につけ、０．０５
ＭからＩＭ一酢酸アンモニアの直線型濃度勾配で溶出し
た．主要画分を合し、再度ＭＭＣ−ＯＤＳ力ラム（２．
６Ｘ ７ ｃｍ）につけ、０〜４０％までのアセトニト
リル水溶液（０．１％トリフルオロ酢酸含有）の直線型
濃度勾配溶出を行ない、アセトニトリル２８〜３０％の
区分を集め凍結乾燥し、白色粉末２１．６ｍｇ得た．ア
ミノ酸分析値 Ａｓｐ ２．９０（３）， Ｔｈｒ Ｏ．８４（１），
Ｓｅｔ ２．１０（３），Ｇｌｕ ２．２１（２），
Ｇｌｙ ２．００（２）， Ａｌａ ３．２９（３）
，Ｖａｌ ３．１９（３）． Ｍａｔ １．０１（１）
， ＩＩｓ ０．８７（１），Ｌａｕ ２．１９（２）
， Ｔｙｒ ３．９３（４）， Ｐｈｅ Ｏ．９２（１
），Ｌｙｓ ７．１ｇ（７）， Ｈｉｓ Ｏ．９６（１
）， Ａｒｇ ４．１９（４）質量分析（ＳＩＭＳ）に
よる（Ｍ＋Ｈ） ４５３０ＨＰＬＣ 溶出時間 １
９．６分 カラム条件 カラム ： ＹＭＣ−ＯＤＳ （＾Ｍ−３０１，Ｓ−５
１２ＯＡ）溶離液 ：Ａ液（０．１％一トリフルオロ
酢酸水）Ｂ液（０．１％一トリフルオロ酢酸含有アセト
ニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（５０分）流
速 ： １．０ｍ Ｑ ／分 夫産鼻見 ＰＡＣＡＰ−２７ ＮＨ，の合或市販のＰ
−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシステムズ社
ｍ１） １．．０４ｇ（０．５ｍ ｍｏｌｅ）を用い、
ペプチド合或基（アプライド バイオシステムズ社製モ
デル４３０Ａ）を使用し、合威した。 最初のアミノ酸、Ｂｏｃ−ＬｅｕをＨＯＢ ｔ／ＤＣＣ
で活性化し、樹脂に縮合した後、樹脂上のＢｏｃ基を５
０％トリフルオロ酢酸／塩化メチレンで処理し、アミノ
基を遊離させこのアミノ基に、Ｂｏａ−Ｖａ１， Ｂｏ
ｃ−Ａｌａ， Ｂｏａ−Ｌｅｕ， Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｒ−Ｚ）， Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）， Ｂｏａ−
Ｍｅｔ， Ｂｏａ−Ｇｌｎ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ
）＋？ｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）， Ｂｏｃ−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）， Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｂｏａ−
Ｐｈｅ， Ｂｏ ｃ−Ｉｃｅ， Ｂｏａ−Ｈｉｓ（
Ｔｏｓ） を ＰＡＣＡＰ−３８（１−２７）のアミノ
酸配列通り順にＨＯＢ ｔ／ＤＣＣで活性化し縮合した
。各反応終了後、残存するアミノ基は無水酢酸でアセチ
ル化し、保護ＰＡＣＡＰ−２７ ＮＨ■樹脂２．３１
ｇを得た．コノ保ｆｆＰＡｃＡＰ−２７ ＮＨ．樹脂
０．５０ｇヲｐ−クレゾール０．６ｇ共存下フッ化水素
５ｍＱでＯ℃，６０分間処理した後，フッ化水素を減圧
留去し、残査をエチルエーテル５ｍＱで２回洗浄した後
、残査を５０％一酢酸水６ｍｆｌで抽出した。不溶物を
ろ去し、５０％酢酸水５ｍｆｌで洗浄した．ろ液，洗液
を合し２〜３ｍＭに減圧濃縮し、セファデックスＬ Ｈ
−２０ （ ２ Ｘ９０ｃ ｍ）のカラムに付し、５０
％−酢酸で溶出した．主要画分を集め，凍結乾燥し白色
粉末１ ２９ｍｇを得た．これを、０．１％一トリフル
オロ酢酸水５ｍｇに溶解し、ＴＳＫ−ＧＥＬ（Ｏ Ｄ
Ｓ−１２０Ｔ）のカラム（２１．５Ｘ３００ｍｍ） Ｌ
：付し、０．１％一トリフルオ口酢酸含有する２７％−
アセトニトリルで溶出した．主要画分を集め、凍結乾燥
し白色粉末１７．２ｍ ｇを得た。 アミノ酸分析値 Ａｓｐ ｔ．９９（２）， Ｔｈｒ Ｏ．９８（１），
Ｓｅｔ ２．７６（３），Ｇｌｕ １．２５（１），
Ｇｌｙ １．０５（１），＾ｌａ ３．０ （３），
Ｖａｌ １．５６（２）， Ｎｅｔ ０．７８（１），
Ｉｌｅ ０．７２（１），Ｌｅｕ １．８８（２），
Ｔｙｒ ２．２２（３）， Ｐｈｅ Ｏ．７５（１）
，Ｌｙｓ ２．７３（３）， Ｈｉｓ １，５１（１）
， Ａｒｇ １．９４（２）質量分析（ＳＩＭＳ）によ
る（Ｍ＋Ｈ）３１４５ＨＰＬＣ 溶出時間 ２１．２
分 カラム条件 カラム ： Ｙ Ｍ Ｃ − Ｏ Ｄ Ｓ （ＡＭ−３
０１，Ｓ−５ １２ＯＡ）１１１１１ ：Ａ液（０．
１％一トリフルオ口酢酸水）Ｂ液（０．１％一トリフル
オロ酢酸含有アセトニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（５０分）流
速 ： １．Ｏｍ Ｑ ／分 失笈箆１ 体重３５０ｇの雄性ウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）系ラッ
トを用い，ネンブタール麻酔下に測定した血圧降下活性
を第１表に示す． 第１角 第５図はラットＰＡＣＡＰ３８前開体や戊熟ペプチドｃ
ＤＮＡの簡単な制限酵素地図である．第６図はラットＰ
ＡＣＡＰ３８前駆体や或熟ペプチドｃＤＮＡの塩基配列
およびそれより推定されるラットＰＡＣＡＰ３８前暇体
やＩ戊熟ペプチドのアミノ酸配列を示す．
ｌ℃ＧＣＣ ＣＡＣ ＧＧＩｌｉＡＴＣ ＣＴｒ ＡＡ
Ｃ ＧＡＧ （Ｅ ＴＡＣ ＣＧＣ ＡＡＡ ＧＴＧＣ
ＴＧ ＧＡＣ ＣＡＧ ＣＴＧ ＴＣＣ Ｇｆ：．（Ｅ
ＡＡＧ ＣＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＤ ＣＴＣ Ｇ
ＴＧ ＧＣＣ ＣＧ３（Ｅ ＧＴＧ （Ｈ Ｇｆｆｉ
ＡＧＣ ＣＴＣ ＧＧＣ （Ｅ （Ｅ ｆｌＩＥαｉ
ＧＡＣ ＧＡＣα右ＧＡＧα右ＣｒＣ ＴＣＣ ＡＡＧ
ＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ （Ｅ ＡＴＣ Ｉ
ＴＣ ＡＣＧ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＡＣ ＡＧＣ ＣＧ
Ｉ：ＴＡＣ ＣＧＧ ＡＡＡ ＣＡＡ ／ＴＧ ｉＩＴ
０℃Ａ焔Ｍ心Ｔ絋Ｌ℃α万α℃ＣにＣＴＡαｔＡＡＧ
ＡＧＩＥ ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＡ Ａ（ｎ ＧＴｒ
ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＣＡ Ｑ３Ｚ ＣＧＡ Ａ
ＴＡ ＧＣＴ ＴＡＴＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣｆｆＡＡＴ
ｒＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴＡＴｒＡＴＡＡＡＴＡＴＡＴＡ
ＴんｕＧＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴ本発明におけるヒトＰ
Ａ．ＣＡ．Ｐ３Ｂの前翻体としては、〔式１０）、〔式
１１〕で表わされるものが挙げられる． Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｐ
ｒｏ Ｌｅａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ［ｓ Ｓｅｒ
Ａｓ０イウ匡〔式１１〕 Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｔｍ Ｖａ
ｌ Ｔｙｒ ＧｌｙＩ１ｅ Ｉｌａ Ｍｅｔ Ｈｉｓ
Ｓａｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐ
ｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ＬｅｕＡｒｇ
Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ＾ｓｎ Ｐｒｏ ＬＥｕＰｒｏ＾
ｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒ
ｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ ＳｅｒＰｒｏ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｌａ Ａ
ｌａ ，Ａｌａ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｐ
ｒｏ Ａｌａ ＧｌｙＡｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｙ ＩＩｓ ＬｓｌＡｓｎ Ｇ
ｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｖａ．１一』
＾ｓｐ Ｇｉｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌ
ｙｓ Ｉｌｉｓ Ｌｍ Ｇｌｒ＋ Ｓｅｒ Ｉ．ｅｕ
Ｖａｌ Ａｌａ ＡｒｇＧｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇ］
．ｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｕｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａ］
．ａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｐｒ
ｏし殉＊ 本発明において、ラットＰＡＣＡＰ３８をコードするＤ
ＮＡを含有するＤＮＡとしては、〔弐〇〕、〔式７〕の
塩基配列を含有あるいはその一部で表わされるものが挙
げられる。 〔式６ ） ＣＡＣ ＴＣＧ
ＧＡＣ ＧＧＣ＾ＴＣ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＴＡＴ ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＣＧＡ ＡＡＡ
ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＡ Ｔ
ＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＴＧＣＴＡ ＧＧ
Ｇ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＧ
ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＡ ＡＡＣＡＡＡ
ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡ ＡＴＡ ＧＣＧ
ＴＡＣ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡＴＧＡＧＴ丁Ｇ
ＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡＴ＾＾ＡＡＴＧＡＡ
＾＾ＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴＴＧＡＣＴＧＡＣＣ
ＡＧＴＣＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴ丁ＴＣＣＡ
ＡＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡＴＣＡＡＧＴＡＡＡ
ＧＣＣＡＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴ
ＡＡＴＡＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＣＧＡＡＧＣ
ＡＣＴＧＧＡＧＡＡ丁ＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴ
ＧＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡ
ＴＡＡＧτＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡ
ＧＧＴＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡＡτＴＣＡＴＡＡＧ
ＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＧ＾ＴＴＧＡＡＡＡＴＴＣＧＣＣ
ＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＡＴＡＴＡＡＡ
ＡＴＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣ＾＾ＣＣＡＴ
ＴＧＴＴＴＴＧ＾＾ＴＡＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＴＴτＴ
ＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＧＧＡＴＡＧＴＡＴ
ＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴ
ＡＣＣＡＡＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＣＡＡＡＡ
Ａ＾＾ＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴ
ＴＣ 〔式７〕 ＧＡＡＴＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＡＡＧＣＴＣＣＡＣ
ＡＡＴＧＧＣＧＣＣＣＡＧＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣ
ＡＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＧＧＣＴＴＣＧＧＣＴＡＧＴＴ
ＴＴＧＴＧＣＧＴＣＴＡＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＧ
ＧＡＡＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＣ
ＣＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＴＡＡＴＴＣＣＣ
ＧＣＧＡＣＴＴＣＴＣＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣ
Ｃ＾ＧＡＣＡＧＴＧＡＣＴＧＡＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧ
ＴτＧＴＧＡＴＴＣＣＡＧＣＧＣＡＧＡＡＡＣＴＣＧＡ
ＡＧＧＡＧＣＣＣＴＴＴＩＥＣＣＣＧＣＣＧＴＣＣＴＡ
ＴＴＴＡＧＴＣＡＡＣＴＣＴＴτＣＣＴＡＧＣＣＧＣＧ
Ａ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＧ
Ｃ ＧＧＡ ＧＣＡ ＡＧＧＴＴＧ ＧＣＣ Ｃ
ＴＧ ＴＴＧ ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＧＧ ＡＴ
Ａ ＡＴＡ ＡＴＧ ＣＡＴＡＡＣ ＡＧＣ
ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＴＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＧＡ ＣＴＣＡＧＣ ＴＴＣ
ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＴＣ ＡＧＡ ＣＣＡ
ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＣＴＴＡＣ ＧＡＴ
ＣＡＧ ＧＡＣ ＧＧＡ ＡＡＣ ＣＣＧ
ＣＴＧ ＣＡＡ ＧＡＣ ＴＴＣＴＡＧ ＧＡＣ
ＴＧＧ ＧＡＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＧＧＣ ＧＣＡ
ＧＧＧ ＡＧＣ ＣＣＣＧＣＣ ＴＣＣ Ｇ
ＣＧ ＣＴＧ ＣＧＴ ＧＡＣ ＧＣＣ Ｔ
ＡＣ ＧＣＣ ＣＴＴ ＴＡＣＴＡＣ ＣＣＡ
ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＧＧ ＡＧＡ ＧＡＴ
ＧＴＣ ＧＣＣ ＣＡＣ ＧＡＡＡＴＣ ＣＴＴ
ＡＡＣ ＧＡＡ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＧＣ
ＡＡＡ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＣＣＡＧ Ｃ
ＴＧ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＧＧ ＡＡＧ Ｔ
ＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＣＣ ＡＴＧＧＴＧ
ＧＣＣ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＧＣ
ＧＡＧ ＡＡＣ ＣＴＣ ＧＣＣ ＧＣＣ
ＧＣＣ ＧＣＧ ＧＴＧ ＧＡＣ ＧＡＣ
ＣＧＧ ＧＣＡ ＣＣＣ ＣＴＴ ＡＣＣ
ＡＡＡＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧ
Ｃ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＴＡＴＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＣＧＡ Ａ
ＡＡ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ Ａ
ＡＧ ＡＡＡＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣ
ＧＴＧ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＧ
ＴＡＴ ＡＡＡＣＡＧ ＡＧＧ ＧＴＴ ＾＾
Ａ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡ
ＡＴＡ ＧＣＧＴＡＣ ＴＴＧ ＴＡＧ Ｃ
ＧＡＴＧＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡ
ＴＡＡＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴ
ＴＧＡＣＴＧＡＣＣＡＧＴＣＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧ
ＴＴＣＴＴＴＣＣＡＡＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡ
ＴＣＡＡＧＴＡＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴ
ＴＴＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴ
ＴＴＡＣＧＡＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＣＡＣＡＧ
ＡＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴ＾丁ＴＧＡ
ＴＡＴＡＴＡＴＴＡＴ＾＾ＧＴＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡ
ＡＴＡＴＡＴＡＴＡＧＧＴＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡ
ＡＴＴＣＡＴＡＡＧＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＡ
ＡＡＡＴＴＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴ＾ＴＧＴＴＴ
ＴＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡ
ＧＡＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＴＴ丁ＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴ
ＣＣＴＡ丁ＴＴＴＴＧ丁ＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡ
ＧＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧ
ＣＴＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＡＡＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴ
ＴＧＴＡＣＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣ
ＣＡＧＧＡＧＡＡＴＴＣ本発明におけるラットＰＡＣＡ
Ｐ３８の前廓体としては、〔式１２〕、〔式１３〕で表
わされるものが挙げられる． 〔式１２〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｌａ ＡｌａＡｌａ ＾ｌ
ａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌ
ａ Ｐｒｏ Ｌａｕ Ｔｈｒ ＬｙｓＡｒｇ
｝Ｉｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ｐｈｅ
Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ ＴｙｒＳｅｒ Ａｒｇ Ｔｙ
ｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ ＬｙｓＴｙｒ Ｌ６ＬＩ ＾１ａ ＾ｌ
ａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒ
ｇ Ｔｙｒ ＬｙｓＧｉｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙ
ｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ
＾１ａＴｙｒ Ｌｅｕ ＊電本 〔式１３〕 Ｍａｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓａｒ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ ＬｅｕＬｅｕ Ｖａ
ｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｍｅｔ
Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｓｅｒ ＶａｌＳｅｒ Ｃ
ｙｓ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅ
ｕ Ｓｅｒ Ｐｈｅ ＰｒｏＧｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａ
ｓｐ ＧｉｎＡｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ ＴｒｐＡ
ｓｐ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｓ
ｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｓｅｒ ＡｌａＬａｕ Ａｒｇ
Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｓｕ Ｔｙｒ
Ｔｙｒ Ｐｒｏ ＡｌａＡｓｐ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓ
ｐ Ｖａｌ Ａｌａ ｔ｛ｉｓ Ｇｌｕ ＩＩｓ Ｌ
ｏｕ ＡｓｎＧｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｉｎ Ｌｅｕ ＳｅｒＡ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇ
ｌｎ Ｓｅｒ Ｍｅｔ ＶａＬ Ａｌａ Ａ
ｒｇＧｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｌｅｕ ＾ｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ
ＶａｌＡｓｐ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌ
ｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ｔｌｉｓ Ｓｅｒ
＾ｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓ
ｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ ＴｙｒＡｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＾１ａＡｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ａｒｇ ＶａｌＬｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒ
ｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＊＊
＊本発明方法におけるＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱく
または成熟ＰＡＣＡＰ３８をコードする塩基配列を有す
るＤＮＡを含有する発現型ベクターは、例えば、（ｉ）
ＰＡＣＡＰ３８産生細胞からメッセンジャーＲＮＡ （
ｍＲＮＡ）を分離し、（ｉｉ）該ｍ Ｒ Ｎ Ａから単
鎖の相補ＤＮＡ （ｃＤＮＡ）を、次いで二重鎖ＤＮＡ
を合戊し、（ｔｉｔ）該相補ＤＮＡをファージまたはプ
ラスミドに組み込み、（ ｉｖ ）得られた組み換えフ
ァージまたはプラスミドで宿主を形質転換し、（Ｖ）得
られた形質転換体を培養後、形質転換体から適当な方法
、例えばＰＡＣＡＰ３８の一部をコードするＤＮＡプロ
ーブとのハイブリダイゼーションにより、あるいは抗Ｐ
ＡＣＡＰ３８抗体を用いたイムノアッセイ法により目的
とするＤＮＡを含有するファージあるいはプラスミドを
単離し、（ｖｉ）その組み換えＴ．） Ｎ Ａから目的
とするクローン化ＤＮＡを切り出し．（ｖｉｉ）該クロ
ーン化ＤＮＡまたはその一部を発現ベクター中のプロモ
ーターの下流に連結する、ことにより製造することがで
きる。 ＰＡＣＡＰ３８をコードするｍＲＮＡは、種々のＰＡＣ
ＡＰ３８産生細胞、例えばヒツジ視床下部、ヒト視床下
部、精巣あるいはラット視床下部、精巣などから得るこ
とができる． ＰＡＣＡＰ３８産生細胞からＲＮＡを調製する方法とし
ては、グアニジンチオシアネート法〔（ジェー・エム・
チルグウィン（Ｊ．Ｍ． ．Ｃｈｉｒｇｗｉｎ）ら，バ
イオケミストリ−（Ｂｉｏ−ｃｈｓｍｉｓ’ｃｒｙ）
， １８．５２９４（１９７９））などが挙げられる． このようにして得られたｍＲＮＡを鋳型とし、逆転写酵
素を用いて、例えば岡山（Ｈ．Ｏｋａｙａｍａ）らの方
法〔モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ） ２＋１６１（１９８２）および同誌３
２８０（１９８３））に従いｃＤＮＡを合威し、得ら
れたｃＤＮＡをプラスミドに組み込む。 ｃＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、たとえば大腸
菌由来のＰＢ Ｒ３２２（ジーン（ｇｅｎｅ）４Ｌ９５
（１９７７）），ρＢＲ３２５（ジーン，４１２１（１
９７８）），ｐＵ Ｃ １．２（ジーン．■扉，２５９
（１９８２）），ｐＵ Ｃ ２３［ジーン，旦涜２５９
（１９８２））、枯草菌由来のｐＵＢ１１０（バイオケ
ミカル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーヨ
ン（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐ
ｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕ
ｎｉｃａｔｉｏｎ），１１２ ６７８（１９８３））な
どが挙げられるが、その他のものであっても、宿主内で
複製増殖されるものであれば、いずれをも用いることが
できる。またｃＤＮＡを組み込むファージベクターとし
ては、たとえばλｇｔｌｌ（ヤング及びデーヴイス（Ｙ
ｏｕｎｇ， Ｒ．． ａｎｄ Ｄａｖｊ．ｓ， Ｒ．ｅ
）プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・ユー・エス・二一
（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．＾ｃａｄ． Ｓｃｉ．，Ｕ，Ｓ
．Ａ，），８０．１１９４（１９８３）３などが挙げら
れるが、その他のものであっても宿主内で増殖できるも
のであれば用いることができる．ブラスミドに組み込む
方法としては、たとえば、ティー・マニアティス（Ｔ．
Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら，モレキュラー・クローニング（
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）コールド・スプ
リング・ハーバー・ラボラトリー（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），第２３９
頁（１９８２）に記載の方法などが挙げられる．またフ
ァージベクターにｃＤＮＡを組み込む方法としては、た
とえばヒューン（ｔ｛ｙｕｎｈ．τ．■．）らの方法〔
ディー・エヌ・エークローニングアプラクティカルアプ
ローチ（ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｐｒａｃｔｉ
ｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ） １ ． ４９（１９８５
）〕などが挙げられる． このようにして得られたプラスミドは、適当な宿主たと
えばエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属菌，バ
チルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属菌などに導入する．上記
エシェリキア属菌の例としては、エシェリキア・コリ（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｋ １２Ｄ ｝
｛ ｌ （プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．）彰扉１６０（
１９６８）），Ｍ１０３［ヌクレイック・アシッズ・リ
サーチ，（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ）．９３０！Ｊ（１９８１）Ｌ Ｊ Ａ ２２１（
ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ）），１２ム５１７（１９７８））， ＨＢＩＯＩ（
ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ−４１．
４５９（１９６９）） ， Ｃ ６００（ジェネティッ
クス（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ） ，影Ｌ４４０（１９５４）
）などが挙げられる． 上記バチルス属菌としては、たとえばバチルス・サチリ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｍ Ｉ
１１４（ジーン，２！ＬＬ２５５（１９８３）），２０
７−２１（ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊ
ｃｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｌ！
Ｊ−８７（１９８４））などが挙げられる． プラスミドで宿主を形質転換する方法としては，たとえ
ばティー・マニアティス（Ｔ， Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら
，モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ），コールド・スプリング・ハーバー・
ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），第２４９頁（１９８２）に
記載のカルシウムクロライド法あるいはカルシウムクロ
ライド／ルビジウムクロライド法などが挙げられる。 またファージ・ベクターを用いる場合には，たとえば増
殖させた大腸菌にインビトロバッケージング法を用いて
導入することができる．ヒツジ、ヒトあるいはラットの
各ＰＡＣＡＰ３８ ｅＤＮＡを含有するヒツジ，ヒト
あるいはラット・の各ｃＤＮＡライブラリーは上記の方
法などで得ることが出来る． 各ｃＤＮＡライブラリーからＰＡＣＡＰ３８ｃＤＮＡを
クローニングする方法としては、例えばファージベクタ
ーλｇｔｌｌと抗ＰＡＣ：ＡＰ３８抗体を用いたＨｕｙ
ｎｈらの方法〔ディーエヌエークローニング、アブラク
ティカルアブローチ（ＤＮＡ ｃ１ｏｎｉｎｇ， ａ
ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ），ｐ４９（１
９８５））あるいはＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸配列に基
づいて化学合成したオリゴヌクレオチドをプローブとし
て用いたコロニーハイブリダイゼーションまたはプラー
クハイプリダイゼーション法〔ティー・マニアティス（
Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら，モレキュラー・クローニン
グ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）コールド・
スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）， （
１９８２））などが挙げられる。 このようにしてクローン化されたＰＡＣＡＰ３８ ｃ
ＤＮＡは必要があればプラスミド、例えばｐＢＲ３２２
； ｐＵｃ１２．ｐＵｃ１３，ｐＵｃ１８，ｐＵＣ１９
，ｐＵｃ１１８，ｐＵｃ１１９などにサブクローニング
してヒツジＰＡＣＡＰ３８ ｃＤＮＡを得ることがで
きる． このようにして得られたＤＮＡの塩基配列を，たとえば
マキサム・ギルパート（Ｍａｘａｍ−Ｇｉｌｂｅｒｔ）
法（Ｍａｘａｍ． Ａ， Ｍ． ａｎｄ ＧＬｌｂａｒ
ｔ， ｗ．，プロシーデイングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンス・オブ・ザ・二一・
エス・二一（Ｐｒｏｅ． Ｎａｔｌ．＾ｅａｄ． Ｓｅ
ｉ．，Ｕ．Ｓ．＾．） ， ７４ ， ５６０ （１９
７７）’）あるいはジデオキシ法（Ｍｅｓｓｉｎｇ，
Ｊ．ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌ
ａｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）９３０９（１
９８１））によって決定し，既知のアミノ酸配列との比
較からＰＡＣＡＰ３８ ｃＤＮＡの存在を確認する。 以上のようにしで、ＰＡＣＡＰ３８の前酩体たんぱくの
一部をコードするＤＮＡ （ヒツジＰＡＣＡＰ３８
ｃＤＮＡ）（式２）が得られる．後述の実施例１で得ら
れたヒツジＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの−・部を
コードするＤＮＡの制限酵素断片地図を第ｌ図に示す．
またジデオキシ法で決定したｃ Ｄ Ｎ Ａの塩基配列
と、その塩基配列から判明したアミノ酸配列を第２図に
示す．上記のようにしてクローン化されたヒツジＰＡＣ
ＡＰ３８の前翻体たんぱくの一部をコードするＤＮＡは
目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化
して使用することが出来る．クローン化されたＤＮＡか
ら発現させたい領域を切り出し、発現に適したビークル
（ベクター）中のプロモーターの下流に連結して発現型
ベクターを得ることができる． 該ＤＮＡはその５′末端に翻訳開始コドンとしてのＡＴ
Ｇを有し，また３′末端には翻訳終止コドンとしてのＴ
ＡＡ，ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい．これら
の翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは，適当な合或ＤＮ
Ａアダプターを用いて付加することもできる。さらに該
ＤＮＡを発現させるにはその上流にプロモーターを接続
する。 ベクターとしては，上記の大腸菌由来のプラスミド（例
、ｐＢ Ｒ３２２， ｐＢ Ｒ３２５，ρＵＣｌ．２，
ρＵＣ１３），枯草菌由来プラスミド（例、ｐＵＢ１１
０， ｐＴＰ ５ ， ｐＣ １９４） ，酵母由来プ
ラスミド（例、ＰＳ｝｛ｌ９， ｐｓ Ｈ１５），ある
いはλファージなどのバクテリオファージおよびレトロ
ウィルス、ワクシニアウィルスなどの動物ウィルスなど
が挙げられる．本発明で用いられるプロモーターとして
は、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモ
ーターであればいかなるものでもよい．形質転換する際
の宿主がエシェリキア属菌である場合は、ｔｒｐプロモ
ーター，Ｍａｃプロモーター ｒｅｃＡプロモーター
λＰＬプロモーター ＱＰＰプロモーターなどが、宿
主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯＩプロモーター
，ＳＰＯ２プロモーター，ｐｅｎＰプロモーターなど，
宿主が酵母である場合は、ＰＨ０５プロモーターＰＧＫ
プロモーター，ＧＡＰプロモーター，ＡＤＨプロモータ
ーなどが好ましい．とりわけ宿主がエシェリキア属菌で
プロモーターがｔｒｐプロモーターまたはλＰＬプロモ
ーターであることが好ましい． 宿主が動物細胞である場合には、ＳＶ４０由来のプロモ
ーター、レトロウイルスのプロモーターメタロチオネイ
ンプロモーター、ヒートショックプロモーターなどがそ
れぞれ利用できる．なお、発現にエンハンサーの利用も
効果的である． このようにして構築されたＰＡＣＡＰ３８の前翻体たん
ぱくや或熟ベプチドＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡ
を含有するベクターを用いて、形質転換体をｉ造する． 宿主としては、たとえばエシェリキア属菌、バチルス属
菌、酵母、動物細胞などが挙げられる．上記エシェリキ
ア属菌、バチルス属菌の具体例としては、前記したもの
と同様のものが挙げられる． 上記酵母としては、たとえばサツ力口マイセスセレビシ
エ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｓｓ ｃｅｒｓｖｉｓｉａ
ｅ） Ａ Ｈ ２２，ＡＨ２２Ｒ ，ＮＡ８７−１１Ａ
，ＤＫＤ−５Ｄなどが挙げられる． 動物細胞としては、たとえばサル細胞ＣＯＳ−７，Ｖａ
ｒｏ，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ，マウスＬ細
胞，ヒトＦＬ細胞などが挙げられる．上記エシェリキア
属菌を形質転換するには、たとえばプロシージング・オ
ブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス（
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ置，Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ＠υＳＡ），
６９．２１ｉ０（１９７２）やジーン，１７，１０７（
１９１１２）などに記載の方法に従って行なわれる．バ
チルス属菌を形質転換するには，たとえばモレキュラー
・アンド・ジェネラル・ジエネテイツクス（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ ＆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）
，１６８，ｌｉｌ（１９７９）などに記載の方法に従っ
て行Ａわれる．酵母を形質転換するには、たとえばプロ
シージング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ），７５， １９２９（１９７８）に記載の方
法に従って行なわれる。 動物細胞を形質転換するには、たとえばヴイロロジー（
Ｖｉｒｏ１ｏｇｙ）奴，４５６（１９７３）に記載の方
法に従って行なわれる． このようにして、ＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの一
部や戊熟ベプチド（ＰＡＣＡＰ３８）をコードするＤＮ
Ａを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体
が得られる． 宿主がエシェリキア属菌、パチルス属菌である形質転換
体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培
地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要
な炭素源，窒素源、無機物その他が含有せしめられる．
炭素源としては、たとえばグルコース、デキストリン、
可溶性澱粉、シヨ糖など、窒素源としては，たとえばア
ンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカーベ
ブトン、カゼイン、゛肉エキス、大豆粕、バレイショ抽
出液などの無機または有機物質、無機物としてはたとえ
ば塩化カルシウム，リン酸二水素ナトリウム、塩化マグ
ネシウムなどが挙げられる．また、酵母、ビタミン類、
生長促進因子などを添加してもよい。 培地のｐＨは約５〜８が望ましい。 エシェリキア属菌を培養する際の培地としては、例えば
グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地〔ミラー（Ｍｉ
ｌｌｅｒ） ，ジャーナル・オブ・エクスペリメンツ・
イン・モレキュラー・ジェネティックス（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ），４３１−４３３，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ ｌ＋ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ， Ｎｅｗｙｏｒｋ １９７２）が好ましい．こ
こに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために
、たとえば３β一インドリルアクリル酸のような薬剤を
加えることができる， 宿主がエシェリキア属菌の場合、培養は通常約１５〜４
３℃で約３〜２４時間行い、必要により，通気や攪拌を
加えることもできる。 宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常約３０〜４０℃
で約６〜２４時間行ない、必要により通気や攪拌を加え
ることもできる。 宿主が酵母である形質転換体を培養する際、培地として
は、たとえばパークホールダ−（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ
）最小培地（Ｂｏｓｔｉａｎ， Ｋ． Ｌ．ら、「プロ
シージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オ
ブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ）７７．４５０５（１９８０）〕が挙げられ
る。培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培
養は通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行い、必
要に応じて通気や攪拌を加える。 宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地と
しては、たとえば約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥ
Ｍ培地〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １２２，５０
１（１９５２））． ＤＭＥＭ培地〔ヴイロロジー（Ｖ
ｉｒｏ−Ｌｏｇｙ），８，３９６（１９５９））， Ｒ
Ｐ Ｍ Ｉ １ ６ ４ ０培地〔ジャーナル・オブ
・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（Ｔ
ｈｅ Ｊｏｕｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）１９９，５
１９（１９６７）），１ ９ ９培地〔プロシージング
・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイオロジカ
ル・メディスン（Ｐｒｏ−ｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ）７３， １ （１９５０）３
などが挙げられる．ｐＨは約６〜８であるのが好ましい
。培養は通常約３０℃〜４０℃で約↓５〜６０時間行い
、必要に応じて通気や撹拌を加える． 上記培養物からＰＡＣＡＰ３８の前馳体たんぱくの一部
や成熟ペプチド（ＰＡＣＡＰ３８）を分離精製するには
、例えば下記の方法により行なうことができる。 ＰＡＣＡＰ３８の前翻体たんぱくの一部や或熟ベプチド
（ＰＡＣＡＰ３８）を培養菌体あるいは細胞から抽出す
るに際しては，培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞
を集め，これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチ
ームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは
細胞を破壊したのち，遠心分離やろ過によりビッジＰＡ
ＣＡＰ３８の前輛体たんぱくの一部や成熟ペプチドの粗
抽出液を得る方法などが適宜用い得る．緩衝液の中に尿
素や塩酸グアニジンなどのたんぱく変性剤や、トリＦ・
ンＸ−１００などの界面活性剤が含まれていてもよい。 培養液中にＰＡＣＡＰ３８前翻体たんぱくの一部や成熟
ペプチドが分泌される場合には，培養終了後、それ自体
公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清
を集める．このようにして得られた培養上清、あるいは
抽出液中に含まれるヒツジＰＡＣＡＰ３８前邸体たんぱ
くの一部や或熟ベプチドは，自体公知の分離・精製法を
適切に組み合わせて行なうことができる．これらの公知
の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解
度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、
およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法など
の主として分子量の差を利用する方法，イオン交換クロ
マトグラフイーなどの荷電の差を利用する方法，アフィ
ニティーク口マトグラフイーなどの特異的親和性を利用
する方法、逆相高速液体クロマトグラフイーなどの疎水
性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点
の差を利用する方法などが挙げられる．かくして生或す
るＰＡＣＡＰ３８前馳体たんぱくの一部や成熟ペプチド
は特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセイなどによ
り測定することができる．また生戒物に血圧降下作用が
ある場合は、該活性を指標にして測定することもできる
．止血騒妃象 本発明のＤＮＡでＤＮＡ感染または形質転換した菌体や
細胞では、大量のＰＡＣＡＰ３８の前翻体や、ＰＡＣＡ
Ｐ３８蛋白を得ることが出来、これを実験動物で使用す
ることにより、その作用，特に脳の機能に関する研究、
特にホルモン類による脳機能の理解に応用し、さらにこ
れらの知見はヒトの脳機能の解明に役立つ知見をもたら
すものである。 そして、このＰＡＣＡＰ３８はｃ Ａ Ｍ Ｐの上昇活
性があることから、ヒト、ラット脳神経の成長，維持等
に関する情報を得ることができ、またヒトの各種神経障
害の治療薬として利用することがでできる． 以上、ヒツジ，ヒトおよびラットのＰＡＣＡＰ３８をコ
ードするｃＤＮＡのクローニング、ヒツジ、ヒトおよび
ラットのＰＡＣＡＰ３８前廓体の一部および成熟ベプチ
ドの発現ベクターの作製と、それらによる形質転換体の
製造、該形質転換体を用いたＰＡＣＡＰ３８前駆体たん
ぱくの一部および成熟ベプチドの製造及びその有用性等
について詳細に述べた。 本発明明細書および図面において，塩基やアミノ酸など
を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｃｏｍｍ
ｉｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅ＋＋ｉｃａｌ Ｎｏｍ
ｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野におけ
る慣用略号に基づくものであり、その例を下記する．ま
たアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明
示しなければＬ一体を示すものとする．ＤＮＡ ：デ
オキシリボ核酸 ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ：デオキシアデノシン三リン酸ｄＴＴＰ：デオ
キシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸ｄＣＴＰ：デオ
キシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＢＨＡ ：ベンツヒドリルアミン ＣＩｌ−Ｚ：２−クロローペンジルオキシカルボニルＢ
ｒ−Ｚ：２−プロモーベンジルオキシ力ルボニルＢｚｌ
：ベンジル ＯＢｚｌ：ベンジルエステル ＨＯＢｔ：１−ペンゾトリアゾール ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’ジシクロへキシル力ルポジイミド Ｇ１ｙまたはＧ ：グリシン ＡｌａまたはＡ ：アラニン Ｖａｌまたは■ ：パリン ＬｅｕまたはＩ，：ロイシン Ｉ１ｅまたはＩ ：インロイシン ＳｅｒまたはＳ ：セリン ＴｈｒまたはＴ ：スレオニン ＣｙｓまたはＣ ：システイン ＭｅｔまたはＭ ：メチオニン ＧｌｕまたはＥ ：グルタミン酸 ＡｓｐまたはＤ ：アスパラギン酸 ＬｙｓまたはＫ ：リジン ＡｒｇまたはＲ ：アルギニン ＨｉｓまたはＨ ：ヒスチジン ＰｈｅまたはＦ ：フエニールアラニンＴｙｒまたはＹ
：チロシン Ｔ ｒ ｐまたはＷ ：トリプトファンＰｒｏまたはＰ
：プロリン ＡｓｎまたはＮ ：アスパラギン ＧｌｎまたはＱ ：グルタミン なお、本発明のＰＡＣＡＰ３８前馳体蛋白や或熟ペプチ
ドにおいては、そのアミノ酸配列の一部が修飾（付加、
除去、その他のアミノ酸への置換など）されていてもよ
い． 見笈旌 以下の参考例および実施例により本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない
． 後述の実施例２で得られた形質転換体エシェリキア・コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｄ Ｈ ５
ａ ／ ｐ Ｏ Ｈ ３８Ｐ７は平或１年６月１９日
に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ Ｒ
Ｉ ）に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２４８４として寄
託され、また該微生物は平或１年６月１５日から財団法
人発酵研究所（ＩＦ○）に受託番号Ｉ Ｆ ０ １４８
８４として寄託されている。 後述の実施例３で得られた形質転換体エシェリキア コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｄ ｝ｉ
５ ａ ／ ｐ ＨＴ３８Ｐ８は平成１年１０月４日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２６２２として寄託され
、また該微生物は平成ｌ年９月２８日から財団法人発酵
研究所（ＩＦＯ）に受託番号ＩＦ○ １４９５３として
寄託されている． 後述の実施例４で得られた形質転換体エシエリキア コ
リ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） Ｊ Ｍ １
０９／ ｐ Ｒ Ｂ３８Ｐ２１は平或２年２月１９日に
通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−２７６２として寄託され
ている． 参】四殊１ ヒトとヒツジのＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸配列は同一で
あるが、ヒツジ視床下部から精製したＰＡ Ｃ Ａ Ｐ
３ ８ （Ｎａｔ．３８ｐ）と合或Ｐ Ａ Ｃ Ａ
Ｐ ３ ８ （Ｓｙｎ．３８ｐ）をラット下垂体細胞に
ｉｎ ｖｉｔｒｏで作用させるとＡｄｅｎｙｌａｔｅ
ｃｙｃｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙの上昇が認められる
．有効最少量は１０″″”Ｍで濃度が高くなるにつれて
、その活性を高まることが示された．また合或の２７−
ＮＨ，（第２図のアミノ酸１３２〜１５８番目（成熟Ｐ
ＡＣＡＰ３８の１〜２７番目、次表のＳｙｎ．２７ｐ−
ＮＨ，）にも同様な活性を認められた．それに反して合
成ブタＶ Ｉ Ｐ （ｖａｓｏａｃｔｌｖａ ｉｎｔｅ
ｓｔｆｎａｌ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）にはそれ相当
の活性は認められなかった． 対照（ブランク） Ｓｙｎ．ｐＶＩＰ １０″″１２月 ｐＶＩＰ １０″″１１ Ｍ ｐＶＩＰ １０″″１０ Ｍ ｐＶＩＰ １０−ｇＭ ＰＶＩＰ １０″″″ Ｈ ｐＶＩＰ １０″″７Ｍ Ｓｙｎ．２７ｐ−Ｎ｝Ｉｍ １０″″１２２７Ｐ−ＮＨ
２１０−” ２７ｐ−ＮＨ， １０−” ２７ｐ−Ｎ｝ｌ， １０″″″ ２７Ｐ−Ｎ｝ｌよ１０１ ２７ｐ−ＮＨ， １０″″゛′ Ｓｙｎ．３８ｐ １０″″１１ Ｈ ｅＡＭＰ ｐモル／ｍｌ （Ｍ±ＳＥＭ）１．５５±０
．１５ １．３５±０．０５ １．４０±０．００ １．４５士０．１５ １．７５±０．０５ ２．５５±０．２５ ３．３０＋Ｏ。２０ ２．０５±０．１５ ２．５５±０．１５ ４．００±０．２０ ７．９０±０．３０ ９．２０±０．００ ９．２０±０．２０ ２．１５±０．０５ ３８ｐ １０”−” Ｍ ３８ｐ １０−１ｌｌＭ ３８ｐ １０−’ Ｍ ３８ｐ １０−” Ｈ ３８ρ １０” Ｍ Ｎａｔ．３８ｐ １０−” Ｍ ３８ｐ １０−” ！’１ ３８ｐ １０″″１０ 阿 ３８ｐ １０−９ Ｎ ３８ｐ １０−” Ｍ 対照（ブランク） 艷生鮭−１ 参考例１で用いた物質をラット下垂体細胞に同様に作用
させたところ、そこでのプロラクチン（ＰＲＬ）、ＡＣ
ＴＨ．ＧＨの放出活性も確認された．去一獲掬」２ ヒ
ッジＰＡＣＡＰ３８の一部をコードするＤＮＡプローブ
の作製 ヒツジＰＡＣＡＰ３８のｌ〜２７残基目のアミ３．０５
±０．３５ ４．６０±０．２０ ６．２０±０．１０ ８．６０±０６２０ ８．７０±０．２０ １．５０±０．１０ １。７５±０．０５ ２．６０±ｏ．ｉｏ ４．６０±０．００ ８．０５±０．３５ １．３５±０．０５ ノ酸配列 Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ ＩＩｓ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓａｒ＾ｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｉｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ ＴｙｒＬｅｕ Ａｌａ Ａｌａ
Ｖａｌ Ｌｅｕから予想されるメッセンジャーＲＮ
Ａの配列を推定し、次のような配列を持つ、ＤＮＡブロ
ーブを化学合或した． ５’ −ＣＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＡＡＴＣＴＴＣＡＣＡ
ＧＡＴＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴＡＴＡＧＡＡＡＧＣ
ＡＡＡＴＧ−３’および３’ −ＴＣＧＧ Ｃ Ｇ Ａ
Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｔ Ｔ
Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ ＣＡＣＴＴＣＴＴＴＡＴＧＡＡＣ
ＣＧＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴ−５’ このＤＮＡプローブの５′端をＴ４ボリヌクレオチドキ
ナーゼを用いて３２Ｐ−りん酸化し、ｃＤＮＡライブラ
リのスクリーニングに用いた．去』４ロ』２ ヒツジ・
ＰＡＣＡＰ３８前駒体ｃＤＮＡの単離とその塩基配列の
決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述のヒツジ視床下部ｃ ＤＮＡ
ライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ， Ｉｎｃ，製）を感染させてブレーティングし
、ファージプラークを出現せしめた．ベントンとディビ
ス（Ｂｅｎｔｏｎ，１，， Ｄａｖｉｓ＋ Ｒ．）の報
告〔サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０
−１８２（１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部
をニトロセルロース膜にうつしとり、３１Ｐで標識した
前項のＤＮＡプローブとプラークハイプリダイゼーショ
ンを行なった。ハイブリダイゼーションは、ホルムアミ
ド非存在下，６０℃で行なった。 ハイブリダイゼーション陽性の５個のクローンをそれぞ
れ単離し、そのうちのひとつであるλＯＨ３８Ｐ７のｃ
ＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩで切り出してプラスミドｐＵｃ
１８のＥｃｏＲ１部位にリクローニングし，プラスミド
ｐ ＯＨ３８Ｐ７を作製した．このプラスミドで大腸菌
ＤＨ５αを形質転換し、形質転換体エシエリキア・コリ
Ｄ Ｈ ５α／ｐＯＨ３８Ｐ７を得た。このブラスミド
に含まれるｃＤＮＡ部分は１．８Ｋｂｐであり、その簡
単な制限酵素地図を第１図に示した．図中の区域は以下
のものを示す． ■：ヒツジＰＡＣＡＰ３８或熟体コード域このｃＤＮＡ
部分の塩基配列をサンガー（Ｓａｎｇａｒ）の方法〔プ
ロシージングオブザナショナルアカデミーオブサイエン
ス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｅａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）
７４．５４６３−５４６７ （１９７７） ）によっ
て決定した．この塩基配列、およびそれより推定される
ヒツジＰＡＣＡＰ３８前翻体のアミノ酸配列の一部を第
２図に示した．［コで囲った領域が、ヒツジＰＡＣＡＰ
３８或熟ペプチド部である． ３ｄ逍１１』− ヒト・ＰＡＣＡＰ３８前翻体ｃ ＤＮ
Ａの単離とその塩基配列の決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述の精巣ｃＤＮＡライブラリ−
（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉ
ｎｃ．製）を感染させてプレーティングし，ファージブ
ラークを出現せしめた．ベントンとデイビス（Ｂｅｎｔ
ｏｎ， １４．， Ｄａｖｉｓ，Ｒ．）の報告〔サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０−１８２（
１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部をニトロセ
ルロース膜にうつしとり、３２Ｐで標識した前項のＤＮ
Ａプローブとプラークハイプリダイゼーションを行なっ
た．ハイブリダイゼーションは、ホルムアミド非存在下
、６０℃で行なった。ハイブリダイゼーション陽性の５
個のクローンをそれぞれ単離し，そのうちのひとつであ
るλＨＴ３８Ｐ８のｃＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩで切り出
してブラスミドｐＵｃ１８のＥｃｏＲ１部位にリクロー
ニングし、ブラスミドｐＨＴ３８Ｐ８を作製した。この
プラスミドで大腸菌ＤＨ５αを形質転換し、形質転換体
エシェリキア・コリＤ Ｈ ５α／ｐＨＴ３８Ｐ８を得
た。このブラスミドに含まれるｃＤＮＡ部分は２．３Ｋ
ｂｐであり、その簡単な制限酵素地図を第３図に示した
。図中の区域は以下のものを示す．■：ヒトＰＡＣＡＰ
３８成熟体コード域このｃＤＮＡ部分の塩基配列をサン
ガー（Ｓａｎｇｅｒ）の方法〔プロシージングオブザナ
ショナルアカデミーオブサイエンス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ） ７４．５４６３−５
４６７ （１９７７） ）によって決定した。 この塩基配列、およびそれより推定されるヒトＰＡＣＡ
Ｐ３８前翻体のアミノ酸配列の一部を第４図に示した。 〔コで囲った領域が、ヒトＰＡＣＡＰ３８或熟ペプチド
部である． 夫笈鼻土 ラット・ＰＡＣＡＰ３８前艶体ｃＤＮＡの単
離とその塩基配列の決定 大腸菌Ｙ １０９０に前述のラット脳ｃＤＮＡライブラ
リー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
Ｉｎｃ，製）を感染させてプレーティングし、ファー
ジプラークを出現せしめた．ベントンとデイビス（Ｂｅ
ｎｔｏｎ， Ｗ．， Ｄａｖｉｓ， Ｒ．）の報告〔サ
イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ） １９６， １８０−１８
２（１９７７））に従ってプラークＤＮＡの一部を二ｌ
一ロセルロース膜にうつしとり，３２Ｐで標識した前項
のＤＮＡプローブとプラークハイプリダイゼーションを
行なった。ハイブリダイゼーションは、ホルムアミド非
存在下，６０℃で行なった．ハイブリダイゼーション陽
性の４個のクローンをそれぞれ単離し、そのうちのひと
つであるλＲＢ３８Ｐ６８のｃＤＮＡ部分をＥｃｏＲＩ
で切り出してプラスミドｐＵｃｌ＆のＥｃｏＲ１部位に
リクローニングし、ブラスミドｐ Ｒ８３８Ｐ２１を作
製した。 このプラスミドで大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し，形質
転換体エシェリキア・コリＪＭ１０９／ＰＲＢ３８Ｐ２
↓を得た．このブラスミドに含まれるｃＤＮＡ部分は１
．２ＫｂＰであり、その簡単な制限酵素地図を第５図に
示した．図中の区域は以下のものを示す． ■：ラソトＰＡＣＡＰ３８或熟体コード域このｃＤＮＡ
部分の塩基配列をサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）の方法（プ
ロシージングオブザナショナルアカデミーオブサイエン
ス（ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ）
７４．５４６３−５４６７ （１９７７） ）によっ
て決定した．この塩基配列、およびそれより推定される
ラットＰＡＣＡＰ３８前駆体のアミノ酸配列を第６図に
示した．口で囲った領域が、ラットＰＡＣＡＰ３８戊熟
ペブチド部である。 去』１赳５ ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ，の合或市販
のｐ−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシステム
ズ社製） １．０４ｇ（０．５ｍ ｍｏｌｅ）を用い、
ペプチド合成基（アプライド バイオシステムズ社製モ
デル４３０Ａ）を使用し、合威した。 最初のアミノ酸、ＢｏＣ−Ｌｙｓ（ＣＩ４）をＨＯＢｔ
／ＤＣＣで活性化し、樹脂に縮合した後、樹脂上のＢｏ
ａ基を５０％トリフルオ口酢酸／塩化メチレンで処理し
，アミン基を遊離させ、このアミノ基に、Ｂｏａ−Ａｓ
ｎ，Ｂｏｃ−Ｌｙｇ（Ｃｌ ・Ｚ），Ｂｏａ−Ｖａ ｌ
，Ｂｏａ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ），Ｂｏｃ−Ｇｌｎ，Ｂｏ
ａ−Ｔｙｒ （Ｂｒ Ｎ Ｚ），Ｂｏｃ−Ｇｌｙ．Ｂ
ｏｃ−Ｌｅｕ，Ｂｏａ−Ａｌａ，ＢｏＣ−Ｍｅｔ，Ｂｏ
Ｃ−Ｓｅｒ （Ｂｚｌ），Ｂｏｃ−Ａｓｐ （ＯＢ
ｚｌ），Ｂｏａ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）， Ｂｏｃ
−Ｐｈｅ， Ｂｏｃ−Ｉ１ｅ，Ｂｏａ−Ｈｉｓ （
Ｔｏｓ）をＰＡＣＡＰ−３８のアミノ酸配列通り順にＨ
ＯＢ ｔ／ＤＣＣで活性化し縮合した．各反応終了後、
残存するアミノ基は無水酢酸でアセチル化し、保護ＰＡ
ＣＡＰ−３８ ＮＨ，樹脂２．４２ｇを得た。 この保護ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ２樹脂０．５１ｇを
ｐ−クレゾール０．６ｇ共存下フッ化水素５ｍＲでＯ℃
，６０分間処理した後、フッ化水素を減圧留去し、残渣
をエチルエーテル５ｍＱで２回洗浄した後、残査を５０
％一酢酸水６ｍＡで抽出した。不溶物をろ去し，５０％
酢酸水５ｒｎ！で洗浄した．ろ液，洗液を合し２〜３ｍ
ｆｌに減圧濃縮し、セファデックスＬＨ−２０ （２Ｘ
９０ｃｍ）のカラムに付し、５０％一酢酸で溶出した。 主要画分を集め減圧留去ののち、残留物を、０．ｌ％ト
リフルオロ酢酸水１００ｍ Ｑに溶解し，ＹＭＣ−ＯＤ
Ｓ ＡＭ１２０ Ｓ−５０４１脂カラム（２．６ｘ
７ ｃ ｍ）につけ、０．１％トリフルオロ酢酸水と５
０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）
の間での直線型濃度勾配で溶出した．主要画分を合し、
凍結乾燥し６０ｍｇの白色粉末を得た．これを０．０５
Ｍ−酢酸アンモニア水２０ｍＱに溶解し、ＣＭ−セル口
ファインの樹脂力ラム（ＩＸ６ｃｍ）につけ、０．０５
ＭからＩＭ一酢酸アンモニアの直線型濃度勾配で溶出し
た．主要画分を合し、再度ＭＭＣ−ＯＤＳ力ラム（２．
６Ｘ ７ ｃｍ）につけ、０〜４０％までのアセトニト
リル水溶液（０．１％トリフルオロ酢酸含有）の直線型
濃度勾配溶出を行ない、アセトニトリル２８〜３０％の
区分を集め凍結乾燥し、白色粉末２１．６ｍｇ得た．ア
ミノ酸分析値 Ａｓｐ ２．９０（３）， Ｔｈｒ Ｏ．８４（１），
Ｓｅｔ ２．１０（３），Ｇｌｕ ２．２１（２），
Ｇｌｙ ２．００（２）， Ａｌａ ３．２９（３）
，Ｖａｌ ３．１９（３）． Ｍａｔ １．０１（１）
， ＩＩｓ ０．８７（１），Ｌａｕ ２．１９（２）
， Ｔｙｒ ３．９３（４）， Ｐｈｅ Ｏ．９２（１
），Ｌｙｓ ７．１ｇ（７）， Ｈｉｓ Ｏ．９６（１
）， Ａｒｇ ４．１９（４）質量分析（ＳＩＭＳ）に
よる（Ｍ＋Ｈ） ４５３０ＨＰＬＣ 溶出時間 １
９．６分 カラム条件 カラム ： ＹＭＣ−ＯＤＳ （＾Ｍ−３０１，Ｓ−５
１２ＯＡ）溶離液 ：Ａ液（０．１％一トリフルオロ
酢酸水）Ｂ液（０．１％一トリフルオロ酢酸含有アセト
ニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（５０分）流
速 ： １．０ｍ Ｑ ／分 夫産鼻見 ＰＡＣＡＰ−２７ ＮＨ，の合或市販のＰ
−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシステムズ社
ｍ１） １．．０４ｇ（０．５ｍ ｍｏｌｅ）を用い、
ペプチド合或基（アプライド バイオシステムズ社製モ
デル４３０Ａ）を使用し、合威した。 最初のアミノ酸、Ｂｏｃ−ＬｅｕをＨＯＢ ｔ／ＤＣＣ
で活性化し、樹脂に縮合した後、樹脂上のＢｏｃ基を５
０％トリフルオロ酢酸／塩化メチレンで処理し、アミノ
基を遊離させこのアミノ基に、Ｂｏａ−Ｖａ１， Ｂｏ
ｃ−Ａｌａ， Ｂｏａ−Ｌｅｕ， Ｂｏａ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｒ−Ｚ）， Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）， Ｂｏａ−
Ｍｅｔ， Ｂｏａ−Ｇｌｎ， Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ
）＋？ｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）， Ｂｏｃ−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）， Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｂｏａ−
Ｐｈｅ， Ｂｏ ｃ−Ｉｃｅ， Ｂｏａ−Ｈｉｓ（
Ｔｏｓ） を ＰＡＣＡＰ−３８（１−２７）のアミノ
酸配列通り順にＨＯＢ ｔ／ＤＣＣで活性化し縮合した
。各反応終了後、残存するアミノ基は無水酢酸でアセチ
ル化し、保護ＰＡＣＡＰ−２７ ＮＨ■樹脂２．３１
ｇを得た．コノ保ｆｆＰＡｃＡＰ−２７ ＮＨ．樹脂
０．５０ｇヲｐ−クレゾール０．６ｇ共存下フッ化水素
５ｍＱでＯ℃，６０分間処理した後，フッ化水素を減圧
留去し、残査をエチルエーテル５ｍＱで２回洗浄した後
、残査を５０％一酢酸水６ｍｆｌで抽出した。不溶物を
ろ去し、５０％酢酸水５ｍｆｌで洗浄した．ろ液，洗液
を合し２〜３ｍＭに減圧濃縮し、セファデックスＬ Ｈ
−２０ （ ２ Ｘ９０ｃ ｍ）のカラムに付し、５０
％−酢酸で溶出した．主要画分を集め，凍結乾燥し白色
粉末１ ２９ｍｇを得た．これを、０．１％一トリフル
オロ酢酸水５ｍｇに溶解し、ＴＳＫ−ＧＥＬ（Ｏ Ｄ
Ｓ−１２０Ｔ）のカラム（２１．５Ｘ３００ｍｍ） Ｌ
：付し、０．１％一トリフルオ口酢酸含有する２７％−
アセトニトリルで溶出した．主要画分を集め、凍結乾燥
し白色粉末１７．２ｍ ｇを得た。 アミノ酸分析値 Ａｓｐ ｔ．９９（２）， Ｔｈｒ Ｏ．９８（１），
Ｓｅｔ ２．７６（３），Ｇｌｕ １．２５（１），
Ｇｌｙ １．０５（１），＾ｌａ ３．０ （３），
Ｖａｌ １．５６（２）， Ｎｅｔ ０．７８（１），
Ｉｌｅ ０．７２（１），Ｌｅｕ １．８８（２），
Ｔｙｒ ２．２２（３）， Ｐｈｅ Ｏ．７５（１）
，Ｌｙｓ ２．７３（３）， Ｈｉｓ １，５１（１）
， Ａｒｇ １．９４（２）質量分析（ＳＩＭＳ）によ
る（Ｍ＋Ｈ）３１４５ＨＰＬＣ 溶出時間 ２１．２
分 カラム条件 カラム ： Ｙ Ｍ Ｃ − Ｏ Ｄ Ｓ （ＡＭ−３
０１，Ｓ−５ １２ＯＡ）１１１１１ ：Ａ液（０．
１％一トリフルオ口酢酸水）Ｂ液（０．１％一トリフル
オロ酢酸含有アセトニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（５０分）流
速 ： １．Ｏｍ Ｑ ／分 失笈箆１ 体重３５０ｇの雄性ウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）系ラッ
トを用い，ネンブタール麻酔下に測定した血圧降下活性
を第１表に示す． 第１角 第５図はラットＰＡＣＡＰ３８前開体や戊熟ペプチドｃ
ＤＮＡの簡単な制限酵素地図である．第６図はラットＰ
ＡＣＡＰ３８前駆体や或熟ペプチドｃＤＮＡの塩基配列
およびそれより推定されるラットＰＡＣＡＰ３８前暇体
やＩ戊熟ペプチドのアミノ酸配列を示す．
第１図はヒツジＰＡＣＡＰ３８前翻体や或熟ベプチドｃ
ＤＮＡの簡単な制限酵素地図である．第２図はヒツジＰ
ＡＣＡＰ３８前翻体や或熟ペブチドｃＤＮＡの塩基配列
およびそれより推定されるヒツジＰＡＣＡＰ３８前能体
の一部や成熟ベプチドのアミノ酸配列を示す． 第３図はヒトＰＡＣＡＰ３８前駐体や或熟ペプチドｃＤ
ＮＡの簡単な制限酵素地図である．第４図はヒトＰＡＣ
ＡＰ３８前翻体や或熟ベプチドｃＤＮＡの塩基配列およ
びそれより推定されるヒトＰＡＣＡＰ３８前齢体や成熟
ベプチドのアミノ酸配列を示す。
ＤＮＡの簡単な制限酵素地図である．第２図はヒツジＰ
ＡＣＡＰ３８前翻体や或熟ペブチドｃＤＮＡの塩基配列
およびそれより推定されるヒツジＰＡＣＡＰ３８前能体
の一部や成熟ベプチドのアミノ酸配列を示す． 第３図はヒトＰＡＣＡＰ３８前駐体や或熟ペプチドｃＤ
ＮＡの簡単な制限酵素地図である．第４図はヒトＰＡＣ
ＡＰ３８前翻体や或熟ベプチドｃＤＮＡの塩基配列およ
びそれより推定されるヒトＰＡＣＡＰ３８前齢体や成熟
ベプチドのアミノ酸配列を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）ＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤ
ＮＡ。 （２）（式１） Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ ＴｙｒＳｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｉｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
ＬｙｓＬｖｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ ＡｒｇＴｙｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓで表
わされるポリペプチドをコードするＤＮＡを含有するＤ
ＮＡ。 （３）ヒツジＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが〔式
２〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請
求項１記載のＤＮＡ。 （式２） ５′ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＴＣ ＴＴ
Ｃ ＡＣＴ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＡＣＡＧＣ ＣＧＣ
ＴＡＣ ＣＧＧ ＡＡＧ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ Ｇ
ＴＴ ＡＡＧ ＡＡＡＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＴ
ＧＴＣ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ
ＡＡＡＣＡＡ ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＡ
Ａ ＧＧＡ ＣＧＧ ＣＧＡ ＡＴＡ ＣＣＧＴＡＣ
ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡ ＣＧＡ ＧＴＴ ＡＣＣ Ａ
ＧＣ ＴＡＴ ＣＣＴ＊＊＊ （４）ヒツジＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが〔式
３〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請
求項３記載のＤＮＡ。 〔式３〕 １ ＣＴＧＣＴＡＡＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＡＡＡＴＡＧ
ＧＡＧＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＴＣＡＣＣＴＣＴＧＴＡ
ＡＴＡＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＴＡＧＡＡＧＡＡ
ＡＣＣＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧ
ＡＧＡＣＴＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＡＡＧＧＣＧＣＴＧ
ＣＣＴＧＣＴＣＧＡＧＣＴＧＣＣＴＧＧＣＣＧＧＧＣＧ
ＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＡＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＧＣＣＧ
ＡＧＧＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴ
ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣ
ＴＧＣＴＴＣＴＴＴＣＣＴＴＡＴＣＡＣＴＣＣＴＴＴＣ
ＴＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＴＴＣＡＧＧＣＣＡＣＴＴＴ
ＧＴＣＴＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＣＧＴＣ
ＧＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＴＴＣＴＣＣＡＴＣ
ＴＣＴＣＣＴＣＴＣＧＣＣＣＣＣＣＴＴＣＴＣＴＣＡＧ
ＴＧＴＣＡＣＧＣＴＣＣＧＴＣＣＴＡＧＴＴＣＣＧＡＧ
ＣＧＴＣＧＴＣＡＡＡＣＴＴＴＴＧＡＡＣＡＧＡＡＴＡ
ＡＣＡＧＧＡＣＴＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＣＣＴＣＣ
ＡＧＣＴＣＣＴＣＣＣＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴ
ＴＣＣＴＧＣＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＴＡ
ＡＣＧＣＣＡＧＡＣＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＣＴＴＧＧＧ
ＴＴＧＴＧＡＣＴＡＣＡＧＣＧＣＡＣＡＡＡＣＴＴＧＧ
ＡＧＡＡＧＣＴＣＴＴＴＧＣＣＣＧＣＣＧＴＣＣＴＡＣ
ＴＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧ
ＣＧＡ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＧＣ Ｇ
ＧＡ ＧＣＧ ＡＧＧ ＣＴＧＧＣＣ ＣＴＧ ＣＴＣ
ＧＴＴ ＴＡＣ ＧＧＧ ＡＴＡ ＣＴＧ ＡＴＧ
ＣＡＣ ＡＧＣＡＧＣ ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＧＣ ＴＣ
Ａ ＣＣＴ ＧＣＣ ＧＣＣ ＴＣＣ ＧＧＡ ＣＴＣ
ＣＧＧ ＴＴＣ ＣＣＧ ＧＧＧ ＡＴＣ ＡＧＧ Ｃ
ＣＧ ＧＡＧ ＡＡＣ ＧＡＧ ＧＣＧＴＡＣ ＧＡＣ
ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＧＡ ＡＡＣ ＣＣＧ ＣＡＧ
ＣＡＧ ＧＡＣ ＴＴＣＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＧ ＧＡ
Ｇ ＣＣＧ ＣＣＡ ＧＧＣ ＧＴＧ ＧＧＧ ＡＧＣ
ＣＣＣＧＣＣ ＴＣＣ ＧＣＧ ＣＴＧ ＣＧＣ Ｇ
ＡＴ ＧＣＣ ＴＡＣ ＧＣＧ ＣＴＣ ＴＡＣＴＡＣ
ＣＣＧ ＧＣＧ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＧＡ ＧＡＴ
ＧＴＣ ＧＣＣ ＣＡＣ ＧＧＧＡＴＣ ＣＴＴ ＧＡ
Ｔ ＡＡＧ ＧＣＣ ＴＡＣ ＣＧＣ ＡＡＡ ＧＴＧ
ＣＴＧ ＧＡＣＣＡＧ ＣＴＧ ＴＣＣ ＧＣＣ Ａ
ＧＧ ＡＧＡ ＴＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＡＣＧ ＣＴ
ＣＡＴＧ ＧＣＣ ＡＡＧ ＧＧＣ ＴＴＧ ＧＧＴ
ＧＧＧ ＡＣＣ ＣＣＧ ＧＧＣ ＧＧＣＧＧＣ ＧＣ
Ｇ ＧＡＣ ＧＡＣ ＧＡＣ ＴＣＧ ＧＡＧ ＣＣＧ
ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＧＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ Ｇ
ＡＣ ＧＧＣ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＣＴ ＧＡＣ ＡＧ
Ｃ ＴＡＣＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＣＧＧ ＡＡＧ
ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＴ ＡＡＧ ＡＡＡＴＡ
Ｃ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＴ ＧＴＣ ＣＴＡ ＧＧＧ
ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ ＡＡＡＣＡＡ ＡＧＧ Ｇ
ＴＴ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＧ ＣＧ
Ａ ＡＴＡ ＣＣＧＴＡＣ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡＣ
ＧＡＧＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＴＣＣＴＧＴＧＴＡＴＡＣ
ＡＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＣＧＴＴ
ＴＴＴＣＣＣＡＡＣＴＧＡＣＴＧＡＡＣＴＧＴＣＡＴＣ
ＧＣＴＧＣＴＧＴＧＴＴＣＴＧＴＣＣＣＡＣＡＴＧＴＡ
ＴＴＴＡＴＧＴＡＴＧＡＡＧＴＣＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡ
ＡＴＧＡＡＴＡＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＴ
ＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＣＧＡＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＡ
ＡＴＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＧＧＡＣＣＡ
ＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＴＧＡＣＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡ
ＣＧＡＡＴＡＴＡＴＡＡＡＧＡＧＴＡＴＡＴＡＴＡＴＡ
ＴＡＴＡＴＡＴＡＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＡＧＡＧＣＣＧ
ＴＴＣＡＴＡＣＡＧＴＧＴＧＣＡＣＡＡＧＧＡＣＴＧＡ
ＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＧＴＴＴＴＴ
ＡＴＡＴＡＡＡＡＴＡＡＡＴＡＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＣ
ＡＡＴＣＡＴＴＧＴＴＴＴＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴＣＣＴ
ＡＴＴＴＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＡＧＧ
ＡＴＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＴＡＧＧＣＣ
ＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＡＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＴＴＴＧ
ＣＴＡＣＴＧＴＡＣＡＴＡＡＡＣＡＧＴＧＡＴＧＣＣＣ
ＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＧＴＡＡＴ
ＧＡＴＴＴＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＧＴＣＴ
ＣＴＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＧＡＧＴＣＴＣＴＧＧＧＧＣ
ＡＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＣＣＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴ
ＣＧＡＣＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＴＣＴＡＣＣＣＣＴＴＧ
ＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＡＴＧＣＣＡＡＴＡＣＴＴＣＣＧ
ＣＴＴＴＣＴＴＴＧＡＴＴＣＴＡＴＴＴＴＴＡＴＧＴＧ
ＴＡ １７６３ （５）ヒトＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが〔式４
〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請求
項１記載のＤＮＡ。 〔式４〕５′ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧＧ ＡＴ
ＣＴＴＣ ＡＣＧ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＡＧ ＡＧＣ
ＣＧＣ ＴＡＧ ＣＧＧ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＧ Ｇ
ＣＴ ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＧＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ
ＧＣＣ ＧＴＣ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＧ ＡＧＧ
ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＡ Ａ
ＡＣＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡ ＡＴＡ ＧＣＴ
ＴＡＴ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡ ＴＧＧ ＧＴＴ
ＡＣＣ ＡＧＣ ＴＡＧ ＣＣＴ＊＊＊ ＧＴＧ ＴＡＴ Ａｃ ３′ （６）ヒトＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが（式５
）の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請求
項５記載のＤＮＡ。 〔式５〕 Ａ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＧＡ
ＧＣＧ ＡＧＧ ＣＴＧ ＧＣＣ ＣＴＧ ＣＴＧ
ＧＴＣ ＴＡＴ ＧＧＧＡＴＡ ＡＴＣ ＡＴＧ ＣＡ
Ｃ ＡＧＣ ＡＧＣ ＧＴＣ ＴＡＧ ＡＧＣ ＴＣＡ
ＣＣＴ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＧＡ ＣＴＣＣ
ＧＧ ＴＴＣ ＣＣＣ ＧＧＧ ＡＴＣ ＡＧＧ ＣＣ
Ａ ＧＡＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＣＧ ＴＡＧ ＧＧＣ
ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＧＡＡＡＣ ＣＣＧ ＣＴＧ Ｃ
ＣＡ ＧＡＣ ＴＴＣ ＧＧＴ ＧＧＣ ＴＣＧ ＧＡ
Ｇ ＣＣＧ ＣＣＧ ＧＧＣ ＧＣＡ ＧＧＧ ＡＧＣ
ＣＣＣ ＧＣＣ ＴＣＣ ＧＣＧ ＣＣＧ ＣＧＣ Ｇ
ＣＣ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＣＣ ＴＧＧ ＴＡＣ ＣＧ
Ｃ ＣＣＧ ＧＣＣ ＧＧＧＡＧＡ ＡＧＡ ＧＡＴ
ＧＴＣ ＧＣＣ ＣＡＣ ＧＧＧ ＡＴＣ ＣＴＴ Ａ
ＡＣ ＧＡＧ ＧＣＣ ＴＡＧ ＣＧＣ ＡＡＡ ＧＴ
ＧＣＴＧ ＧＡＣ ＣＡＧ ＣＴＧ ＴＣＣ ＧＣＣ
ＧＧＧ ＡＡＧ ＣＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＣＧ Ｃ
ＴＣ ＧＴＧ ＧＣＣ ＣＧＧＧＧＣ ＧＴＧ ＧＧＴ
ＧＧＧ ＡＧＣ ＣＴＣ ＧＧＣ ＧＧＣ ＧＧＣ
ＧＣＧ ＧＧＧ ＧＡＣ ＧＡＣ ＧＣＧ ＧＡＧ Ｃ
ＣＧＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＧ ＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ
ＧＡＣ ＧＧＧ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＣＧ ＧＡＣ
ＡＧＣ ＴＡＣ ＡＧＣ ＣＧＣＴＡＣ ＣＧＧ ＡＡ
Ａ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＧ
ＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＴＣ ＣＴＡ
ＧＧＧＡＡＧ ＡＧＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＧ
Ｇ ＧＴＴ ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ
ＣＧＡ ＡＴＡ ＧＣＴ ＴＡＴＴＴＧ ＴＡＧＣＧ
ＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＴＧＴＡＴ
ＡＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＧＣＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＧ
ＴＴＴＴＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣ ＴＣＡＡＣＡＧＴＣＡ
ＴＣＱＣＴＣＧＴＧＴＧＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＡＣＡＴ
ＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＡＧＴＡＡＡＧＣＣＡ
ＴＴＡＡＡＴＧＡＡＴＡＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡ
ＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＣＴＡＣＡＡＡＧＣＡＣＴＡ
ＧＡＧＡＡＴＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＧＧ
ＡＣＣＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡＴＡＡＡ
ＴＡＴＡＴＡＴＡＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴＡ
ＴＡＴＡＴＡＴＡＴＡＡＡＧＴＡＴＡＧＡＧＡＧＡＡＧ
ＴＴＣＡＴＡＣＡＡＡＧＣＧＴＧＣＡＣＡＡＧＧＡＴＴ
ＧＡＡＡＡＴＴＣＧＣＣＣＧＡＧＣＴＧＴＴＴＡＴＧＴ
ＴＴＴＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＡＧＡＡＡＡＧＴＡ
ＧＡＣＡＡＴＣＡＴＴＧＴＴＴＴＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴ
ＣＣＴＡＴＴＴＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡ
ＡＧＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＡＴＧＡＣＡＧ
ＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＡＣＴＡＣＴＴＡＣＣＡＴ
ＴＴＧＣＴＡＣＴＧＴＡＣＡＴＡＡＡＣＡＡＴＧＡＴＧ
ＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＧＡＴＴＴＴＧＡＧＧＴ
ＡＡＡＧＡＴＡＴＧＧＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＧＧ
ＣＡＴＴＣＴＴＴＣＣＣＡＧＴＧＡＧＴＣＴＣＴＧＧＧ
ＧＣＡＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＡＴＣＣＣＡＧＣＣＴＡＡ
ＣＴＣＡＡＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＣＣＣＣＣＴＧＧＴ
ＴＧＧＧＴＧＧＣＡＡＴＴＣＣＡＡＴＡＴＴＴＣＴＧＣ
ＴＴＴＣＴＴＴＧＡＴＴＣＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＴＧＴ
ＡＧＴＴＧＴＣＴＣＴＣＴＴＣＡＧＡＣＴＣＴＣＡＧＣ
ＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡＴＴＣＴＣＣＴＧＡＴＡＡＡＡ
ＣＡＡＣＡＧＣＴＣＧＡＴＣＣＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＴ
ＣＴＣＣＣＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴ
ＡＧＧＡＧＡＡＧＡＧＴＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＴＡＣＡ
ＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＧＣＴＴＣＧＴＴＡＧＡＣＣＧＣ
ＴＣＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＡＣＴＴＣＣＴＧＡＧＴＧＧ
ＣＣＡＧＧＧＡＡＴＣＴＡＡＴＡＴＣＣＣＣＡＡＡＴＴ
ＡＧＧＧＣＡＡＴＴＧＧＡＡＣＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＡ
ＣＡＴＡＧＡＧＧＴＡＴＡＴＴＧＧＡＡＧＡＧＧＣＡＧ
ＡＧＣＣＴＧＡＧＧＴＧＧＴＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＣＣ
ＣＴＧＧＡＡＡＴＧＧＡＣＴＧＧＴＴＴＧＡＧＡＴＴＧ
ＣＣＣＣＡＧＧＴＣＴＧＧＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＧＣＡ
ＡＡＴＣＣＡＧＴＣＣＣＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＡＣＴＴ
ＴＧＧＧＣＧＣＴＧＧＧＴＡＴＴＧＧＡＡＡＴＧＧＡＴ
ＧＣＡＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＴＧＴＴＴＴＴＣＴＣＣＡ
ＧＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＧＣＴＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ
ＧＡＡＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＴＴＧ
ＡＡＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＣＴＡＣＣＣＴ
ＴＴＴＣＣＴＴＴＧＴＧＧＴＴＴＴＡＴＧＧＡＧＡＣＣ
ＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＡＣＣＣＴＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴ
ＴＴＡＡＧＴＡＣＴＧＴＴＴＡＣＣＡＴＴＴＴＴＣＡＴ
ＴＣＡＣＴＴＣＴＣＴＴＡＡＡＣＴＴＧＴＧＡＡＴＧＣ
ＴＴＣＴＣＡＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＧＡＴ
ＧＣＡＧＧＣＡＣＴＴＡＴＴＧＴＡＡＡＴＴＴＴＡＧＡ
ＡＡＣＣＣＣＴＣＴＧＴＡＧＣＣＡＣＴＡＧＴＡＡＧＴ
ＡＡＴＴＡＴＧＣＡＣＴＡＡＡＴＡＴＧＡＡＣＣＣＴＴ
ＴＧＴＴＴＣＴＴＧＴＴＴＡＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＡＧ
ＧＴＡＡＡＡＴＧＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＣＡＴＴＡＴＴ
ＧＣＴＴＡＴＴＧＣＴＴＡＧＴＡＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴ
ＣＡＴＡＡＡＡ （７）ラットＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが〔式
６〕の塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請
求項１記載のＤＮＡ。 〔式６〕ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＴＣ Ｔ
ＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧＣＴＡＴ ＡＧＣ ＣＧＣ
ＴＡＣ ＣＧＡ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＧ ＧＣＴ
ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＡ ＴＡＣ ＴＴＧ ＧＣＧ Ｇ
ＣＣＧＴＧ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＡＴ
ＡＡＡ ＣＡＧ ＡＧＧ ＧＴＴ ＡＡＡ ＡＡＣ
ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡＡＴＡ ＧＣＧ ＴＡ
Ｃ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡＴＧＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣ
ＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣ
ＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴＴＧＡＣＴＧＡＣＣＡＧＴＣＡ
ＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴＴＴＣＣＡＡＡＣＡＴ
ＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡＴＣＡＡＧＴＡＡＡＧＣＣＡＴ
ＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡＴ
ＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＣＧＡＡＧＣＡＣＴＧＧ
ＡＧＡＡＴＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＧＧＡ
ＣＣＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡＴＡＡＧＴ
ＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡＧＧＴＡＴ
ＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡＡＴＴＣＡＴＡＡＧＣＧＴＧＣ
ＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＡＡＡＡＴＴＣＧＣＣＴＧＡＧＣ
ＴＧＴＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＡＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡ
ＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＡＡＣＣＡＴＴＧＴＴＴ
ＴＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴＴＴＴＴＧＴＡＡＡ
ＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＧＧＡＴＡＧＴＡＴＴＴＴＴＡ
ＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＡＡ
ＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＣＡＡＡＡＡＡＡＴＧ
ＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴＴＣ（８）
ラットＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡが〔式７〕の
塩基配列を含有あるいはその一部で表わされる請求項７
記載のＤＮＡ。 〔式７〕 ＧＡＡＴＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＣＡＡＡＧＣＴＣＣＡＣ
ＡＡＴＧＧＣＧＣＣＣＡＧＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣ
ＡＡＣＡＧＡＣＴＧＡＡＧＧＣＴＴＣＧＧＣＴＡＧＴＴ
ＴＴＧＴＧＣＧＴＣＴＡＣＡＡＡＧＣＴＴＴＧＡＧＣＧ
ＧＡＡＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＧＧＣＡＡＡＣＡＡＧＴＣ
ＣＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣＴＡＡＴＴＣＣＣ
ＧＣＧＡＣＴＴＣＴＣＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣ
ＣＡＧＡＣＡＧＴＧＡＣＴＧＡＴＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧ
ＴＴＧＴＧＡＴＴＣＣＡＧＣＧＣＡＧＡＡＡＣＴＣＧＡ
ＡＧＧＡＧＣＣＣＴＴＴＧＣＣＣＧＣＣＧＴＣＣＴＡＴ
ＴＴＡＧＴＣＡＡＣＴＣＴＴＴＣＣＴＡＧＣＣＧＣＧＡ
ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＧＡ
ＧＣＡ ＡＧＧ ＴＴＧ ＧＣＣ ＣＴＧＴＴＧ ＧＴ
Ｃ ＴＡＣ ＧＧＧ ＡＴＡ ＡＴＡ ＡＴＧ ＣＡＴ
ＡＡＣ ＡＧＣ ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＴＣＡ
ＣＣＴ ＧＣＣＧＣＣ ＧＧＡ ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＴ
Ｃ ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＴＣ ＡＧＡ ＣＣＡ ＧＡＡ
ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＣＴ ＴＡＣ ＧＡＴＣＡＧ Ｇ
ＡＣ ＧＧＡ ＡＡＣ ＣＣＧ ＣＴＧ ＣＡＡ ＧＡ
Ｃ ＴＴＣ ＴＡＣ ＧＡＣ ＴＧＧ ＧＡＣ ＣＣＴ
ＣＣＧ ＧＧＣＧＣＡ ＧＧＧ ＡＧＣ ＣＣＣ Ｇ
ＣＣ ＴＣＣ ＧＣＧ ＣＴＧ ＣＧＴ ＧＡＣ ＧＣ
Ｃ ＴＡＣ ＧＣＣ ＣＴＴ ＴＡＣ ＴＡＣＣＣＡ
ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＧＧ ＡＧＡ ＧＡＴ ＧＴＣ Ｇ
ＣＣ ＣＡＣ ＧＡＡ ＡＴＣ ＣＴＴ ＡＡＣ ＧＡ
Ａ ＧＣＣ ＴＡＣＣＧＣ ＡＡＡ ＧＴＣ ＴＴＧ
ＧＡＣ ＣＡＧ ＣＴＧ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＧＧ Ａ
ＡＧ ＴＡＣ ＣＴＧ ＣＡＧ ＴＣＣ ＡＴＧＧＴＧ
ＧＣＣ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＧＣ ＧＡＧ
ＡＡＣ ＣＴＣ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＣＧ Ｇ
ＴＧ ＧＡＣ ＧＡＣＣＧＧ ＧＣＡ ＣＣＣ ＣＴＴ
ＡＣＣ ＡＡＡ ＣＧＣ ＣＡＣ ＴＣＧ ＧＡＣ
ＧＧＣ ＡＴＣ ＴＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＧＣＴＡ
Ｔ ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＧ ＣＧＡ ＡＡＡ ＣＡＡ
ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＣ ＡＡＧ ＡＡＡ ＴＡＣ
ＴＴＧ ＧＣＧ ＧＣＣＧＴＧ ＣＴＡ ＧＧＧ ＡＡ
Ａ ＡＧＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＣＡＧ ＡＧＧ ＧＴＴ
ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＧＡＡ
ＴＡ ＧＣＧ ＴＡＧ ＴＴＧ ＴＡＧ ＣＧＡＴＧＡ
ＧＴＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＣＧＴＧＴＧＴＡＴＡＡＡＡ
ＴＧＡＡＡＡＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴＴＧＡＣＴ
ＧＡＣＣＡＧＴＧＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＴＧＴＴＣＴＴ
ＴＣＣＡＡＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＡＴＣＡＡＧ
ＴＡＡＡＧＣＣＡＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＡＴＴＴＴＧＡ
ＴＡＡＴＡＡＴＡＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＣＧ
ＡＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＣＡＣＡＧＡＴＡＴＡ
ＣＴＴＴＧＴＧＧＡＣＣＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＡＴ
ＡＴＴＡＴＡＡＧＴＡＴＡＴＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＴＡ
ＴＡＴＡＧＧＴＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡＡＴＴＣＡ
ＴＡＡＧＣＧＴＧＣＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＡＡＡＡＴＴ
ＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＡＴＡ
ＴＡＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＧＡＣＡＡ
ＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＧＡＡＴＡＴＴＡＣＴＣＣＴＡＴ
ＴＴＴＴＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＡＡＡＧＧＡＴＡ
ＧＴＡＴＴＴＴＴＡＴＣＣＡＣＡＡＣＣＧＧＣＴＴＧＡ
ＡＧＡＴＡＣＣＡＡＴＡＡＴＧＧＣＣＡＴＴＴＧＴＡＣ
ＡＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡ
ＧＡＡＴＴＣ（９）〔式１〕のアミノ酸配列を包含する
ＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。 〔式１〕 Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ ＳｅｒＡｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ ＴｙｒＬｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ
ＧｌｎＡｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ （１０）〔式１’〕のアミノ酸配列を包含する請求項９
記載のＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。 〔式１’〕 Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉ
ｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ ＳｅｒＴｙｒ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ
Ａｌａ Ｖａｌ ＬｙｓＬｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｌ
ａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ
ＴｙｒＬｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａ
ｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ（１１
）〔式８〕のアミノ酸配列で表わされるヒツジＰＡＣＡ
Ｐ３８前駆体蛋白質。 〔式８〕 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｙ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ＧｌｙＧｌｙ Ａｌａ
Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ ＬｙｓＡｒｇ ￥Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａ
ｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅ
ｒ ＴｙｒＳｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ ＬｙｓＴｙ
ｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ ＬｙｓＧｌｎ Ａｒｇ Ｖ
ａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ￥ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ ＰｒｏＴｙｒ Ｌｅｕ （１２）〔式９〕のアミノ酸配列で表わされるヒツジＰ
ＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。 〔式９〕 Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｖ Ａ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ ＬｅｕＬｅｕ Ｖａｌ
Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｉｉｅ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｈｉｓ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ ＶａｌＴｙｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒ
ｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｒｇ
ＰｈｅＰｒｏ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｇ
ｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ ＡｓｐＧｌｕ
Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｇｌｎ
Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｙｒ ＡｓｐＳｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒ
ｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ａｌａ ＳｅｒＡｌａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ａ
ｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｐｒ
ｏＡｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｉｉｅ ＬｅｕＡｓｐ Ｌｙ
ｓ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ
Ａｓｐ Ｇｌｎ ＬｅｕＳｅｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ａ
ｒｇ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｍｅ
ｔ ＡｌａＬｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ＡｌａＡｓ
ｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ￥ＨｉｓＳｅｒ Ａｓｐ
Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔ
ｙｒ Ｓｅｒ ＡｒｇＴｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
ＬｅｕＡｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙ
ｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ ＡｒｇＶａｌ
Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ￥ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ
Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｅｕ（１３）〔式１０〕の
アミノ酸配列で表わされるヒトＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋
白質。 〔式１０〕
１
７ Ｇ
ｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌ
ｙ １
９ ２３Ａｌａ Ｇｌｙ
Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｓ
ｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ ￥Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇ
ｌｙ Ｉｌｅ
３９Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ
Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙ
ｓ４０
５５Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ
Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔ
ｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓ
ｎ５６
６３Ｌｙｓ￥ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ（１４）〔式１１〕のア
ミノ酸配列で表わされるヒトＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白
質。 〔式１１〕 Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｒ Ａ
ｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｖａ
ｌ Ｔｙｒ ＧｌｙＩｌｅ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｈｉｓ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐ
ｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ＬｅｕＡｒｇ
Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｐ ＧｌｙＡｓｎ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ
Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ ＳｅｒＰｒ
ｏ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｌａ
Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ａｌａ ＧｌｙＡｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａ
ｌ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ ＶａｌＬ
ｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌ
ｙ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ａｌａ ＡｒｇＧｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌ
ａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａ
ｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅ
ｔ Ｔｙｒ Ｓｅｒ ＡｒｇＴｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔ
ｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌ
ｙＬｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａ
ｒｇ Ｉｌｅ Ａｌａ ＴｙｒＬｅｕ ＊ （１５）〔式１２〕のアミノ酸配列で表わされるラット
ＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。 〔式１２〕 Ｖａｌ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌ
ａ Ｖａｌ Ａｓｐ ＡｓｐＡｒｇ Ａｌａ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａ
ｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅ
ｒＴｙｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔ
ｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ ＡｌａＶａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａ
ｒｇＩｌｅ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＊＊＊ （１６）〔式１３〕のアミノ酸配列で表わされるラット
ＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。 〔式１３〕Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ ＬｅｕＬｅ
ｕ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｍｅｔ
Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｃｙｓ
Ｓｅｒ Ｐｒｏ ＡｌａＡｌａ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅ
ｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｙｒ ＡｓｐＧ
ｌｎ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌ
ｎ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ａｓｐ
Ｐｒｏ Ｐｒｏ ＧｌｙＡｌａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐ
ｒｏ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓ
ｐ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｔｙｒ
Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖ
ａｌ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓ
ｎ Ｇｌｕ Ａｌａ ＴｙｒＡｒｇ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａ
ｒｇ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｍｅ
ｔＶａｌ Ａｌａ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ
Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａ
ｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ ＡｓｐＡｒｇ Ａｌａ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓ
ｅｒＴｙｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｌａ ＡｌａＶａｌ Ｌｅｕ Ｇｌ
ｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｒｇ
Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ
ＡｒｇＩｌｅ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ ＊＊＊ （１７）〔式１”〕のアミノ酸配列を有するポリペプチ
ド。 〔式１”〕 Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ ＳｅｒＡｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ ＴｙｒＬｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ （１８）請求項１記載のＤＮＡを保持する形質転換体。 （１９）請求項１８記載の形質転換体を培養し、培養物
中に成熟ＰＡＣＡＰ３８を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする成熟ＰＡＣＡＰ３８蛋白質の製造
方法。 （２０）請求項３もしくは４記載のＤＮＡを保持する形
質転換体。 （２１）請求項２０記載の形質転換体を培養し、培養物
中に成熟ＰＡＣＡＰ３８を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする成熟ＰＡＣＡＰ３８蛋白質の製造
方法。 （２２）請求項５もしくは６記載のＤＮＡを保持する形
質転換体。 （２３）請求項２２記載の形質転換体を培養し、培養物
中に成熟ＰＡＣＡＰ３８を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする成熟ＰＡＣＡＰ３８蛋白質の製造
方法。 （２４）請求項７もしくは８記載のＤＮＡを保持する形
質転換体。 （２５）請求項２４記載の形質転換体を培養し、培養物
中に成熟ＰＡＣＡＰ３８を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする成熟ＰＡＣＡＰ３８蛋白質の製造
方法。 （２６）〔式１〕 Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｉｅ Ｐｈｅ Ｔ
ｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｙｒ ＳｅｒＡｒｇ Ｔｙｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ
Ｌｙｓ Ｌｙｓ ＴｙｒＬｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｙｓ
ＧｌｎＡｒｇ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ で表わされるポリペプチドを構成しうる部分アミノ酸も
しくはペプチドと残余部分とを縮合させ、生成物が保護
基を有する場合は保護基を脱離することを特徴とする上
記ポリペプチドの製造方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/540,105 US5198542A (en) | 1989-06-20 | 1990-06-10 | Dna encoding a pitvitary adenylate cyclase activating protein and use thereof |
| EP90111490A EP0404034B1 (en) | 1989-06-20 | 1990-06-19 | Novel DNA and use thereof |
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