JPH0320298A - 有機化合物の安定化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野） 本発明は有機化合物、更に詳細にはペプチド及びタンパ
ク質の安定化法に関する． （従来の技術及び発明が解決しようとする課題〉ペプチ
ド及びタンパク質は構造中に存在する−Ｃ−Ｎ一結合に
発生する分解（ｃｌｅａｖａｇｅ）により小分子を形成
するという不安定性を示す。アミノ酸残留物（　ｒｅｓ
ｉｄｕｅ　）が特に不安定性を招きやすいという別の理
論も進展しており、アミノ酸の同定の残留物はヒスチジ
ン及びプロリンである。

かかる安定性の欠如の結果として、上記化合物の製造及
び貯蔵にあたって重大な問題が生ずる。種々のペプチド
及びタンパク質のうち最も昔遍的なものの一つであり、
糖尿病の治療法において使用されるインシュリンに関し
て、上記の重大な問題が明らかにされている。このよう
にインシュリンは凝固体を形成し、それ自体は不利益で
はないが、化学的変成を施された場合には、生体内にお
いて凝固せず、インシュリンの生理学的活性を低下させ
る。更に、免疫系中において、患者のアレルギー反応を
進行させる可能性のある異物（　ｆｏｒｅｉｇｎ　）と
して認識される生戒物がインシュリンの化学的変戒にま
り生戒する。

（課題を解決するための手段） 治療又は他の目的に使用するペプチド及びタンパク質を
安定化させるために適切であるかどうかを、種々のキレ
ートについて研究した．ある種のキレート剤、例えば、
エチレンジアミンテトラー酢酸及び３−ヒドロキシ−２
−メチル−４−ピロンにはインシュリンを安定化する効
果はなく、むしろ非安定化効果を示すが、別のある種の
キレート剤は安定化効果を、特に約４℃において有する
ことを予想外にも発見した．かかる低温での安定化は特
に重要である。その理由はインシュリンは、使用前には
約４℃で、又は製品の製造及び出荷の種々の段階では約
−１０℃で、溶液の形又はフリーズドライされた状態で
貯蔵されるためである。

従って、本発明は、ペブチド又はタンパク質並びにヒド
ロキシピリドンの混合物からなり、ヒドロキシピリドン
は、 （１）３−ヒドロキシピリド−２−オンスは３−ヒドロ
キシピリド−４−オン又はこれらの塩であって、窒素原
子に結合した水素原子が脂肪族アシル基；脂肪族炭化水
素基；又は脂肪族アシル、アルコキシ、シクロアルコキ
シ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン及びヒド
ロキシ基から選択した１種以上の置換基により置換され
た脂肪族炭化水素基によって置換されており、更に必要
に応じて、環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子
が脂肪族アシル、アルコキシ、シクロアルコキシ、脂肪
族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキシ基
；脂肪族炭ｆヒ水素基；又はアルコキシ、シクロアルコ
キシ、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキシ基によ
り置換されており、（２）１−ヒドロキシピリド−２−
オン及びその塩であって、環の炭素原子に結合した水素
原子が、脂肪族アシル、脂肪族アミド、シアノ、脂肪族
エステル、ハロゲン及びヒドロキシ基：アルコキシ及び
シクロアルコキシ基、及びアルコキシ、シクロアルコキ
シ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒド
ロキシ基により置換されたアルコキシ基及びシクロアル
コキシ基；並びに脂肪族炭化水素基及びアルコキシ及び
シクロアルコキシ、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒド
ロキシ基により置換された炭化水素基から選択した置換
基により置換されているが、上記の水素原子の置換が脂
肪族炭化水素基、ハロゲン基及びハロゲン基により置換
された脂肪族炭化水素基から選択した置換基のみにより
為される化合物を除外する、又は（３冫３−ヒドロキシ
ピリド−２−オン、３−ヒドロキシピリド−４−オン及
び１−ヒドロキシピリドー２−オンから選択した、２以
上の環を有する化合物であーっで、隣接するヒドロキシ
及びオキソ基を保有する環と共有結合したものであって
、生体内に存在する混合物を除外する、である．本発明
は、種々のペプチド及びタンパク質中のＯ できる。特に、動物及び植物ホルモンを含めて、何らか
の生物活性を有するペプチド及びタンパク質、例えば、
バラチノイドホルモン（ｐａｒａｔｙｒｏｉｄｏｈｏｒ
ｍｏｎｅ）　、カルシトニン（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）
　，コルチコト０７４ン（ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉ
ｎ）　．チトキン（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）　、生長ホル
モン及び特に、他の化金物の分泌を制御するホルモンで
あるインシュリンが挙げられる．上記の他の化合物は、
多くの場合、それ自体がホルモンであり、例えば、ゴナ
ドト口フィン（ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ）分泌ホル
モン、ＬＨＲＨ及びＬＨＲＨきっ抗物質、イミュノグロ
ブリン（例としては、モノクロナール抗体）、血液凝固
因子（例としては、ファクター■）、酵素及び酵素阻害
剤（例としては、トロムビン〉、更にこれらの一部分（
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）が挙げられる．本明細書において
は、インシュリンという語は、種々の種の天然に存在す
るホルモン、例えば、ヒト、ウシ（ｂｏｖｉｎｅ）及び
ブタ（ｐｏｒｃｉｎｅ）のインシュリンのみでなく、天
然ホルモンの合成物及びホルモン活性を有し天然ホルモ
ンに類似する合成物をも含むものとする。

インシュリンの安定化の他に、ペプチド及びタンパク質
の安定化に本発明を応用するのに特に適切である分野と
しては、ワクチン、即ち、抗原物質又は抗体、一般的に
は抗アレルギー性物質、及び特に種々の形の血液物質を
含有する物質である．かかる血液物質としては、ヒトの
血しょう、フィブリノーゲン、イミュノグロブリン、血
液凝固因子（例としては、ファクター■）及びトロムビ
ンがあり、インシュリンの場合と同等な貯蔵上の問題が
ある。

本発明は、ヘキサベブチド及び高級ペブチド又はタンパ
ク質に便宜的に使用でき、更に詳細には、デカペプチド
、特に、エイコサベ１チドと高級ベブチド及びタンパク
質に使用できる。分子量という語中では、５００又は６
００ドルトン以上，例えば、１２００又は２４００ドル
トン以上の分子量を称するものとする．このように、ベ
ブチド及びタンパク質が、それ自体の他の部分との相互
作用に伴う重なりが生じるために、鎖長が十分に長い場
合にはペプチド及びタンパク質の不安定性は大きいが、
ある種のアミノ酸、例えば、メチオニンは、上記のべプ
チド又はタンパク質の重なりが存在しなくても不安定性
である． 安定化された物質は、結合したアミノ酸残基以外の基、
例えばグリコシル基を当然含有しており、あるいはペプ
チド及びタンパク質と混合した他の化合物をも含有する
。

上記の（１）、（２）及び（３）のタイプのヒドロキシ
ピリドン化合物については、英国特許第２１，１８１，
７６８号、及び同第２１，３６８．０７Ｂ号；同第２１
，４６９，９０８号、並びに同第２１，４６９，８９８
号の各々に詳細に記載されており、体内から中毒量（ｔ
ｏｘｉｃ　ａａ＋ｏｕｎｔｓ）の金属を除去するための
上記の化合物の使用についての記載がある。これらの特
許中に記載される種々の好ましい、特定のタイプの化合
物は本発明中でも使用できる。（２）および（３）のタ
イプの特定の化合物は米国特許第４，６９８，４３１号
にも記載されている。

これらの先行する特許中で特に考察されている化合物は
、２又はそれ以上の環を含む化合物の場合には結合基か
ら離れた位置での環の置換がない。

そして、これらの化合物及び単環化合物の双方が、環が
脂肪族炭化水素基により（３−ヒドロキシピリドンの場
合、特に環の窒素原子上）、ヒドロキシ基又はシクロア
ルコキシ基又は特にアルコキシ基により置換された脂肪
族炭化水素基により、又は１以上の例えば２個の上記の
基により（１一及び３−ヒドロキシピリドンの場合、特
に３−ヒドロキシピリドンの場合の窒素原子上）、ある
いはアルコキシ基、シクロアルコキシ基、脂肪族アミド
基又はヒドロキシ基により置換された脂肪族アミド基又
はアルコキシ基又はシクロアルコキシ基により（１−ヒ
ド口キシピリドンの場合）置換された化合物である．上
記の基（脂肪族アミド基を含む）中の脂肪族炭化水素及
びアルキル又はシクリアルキル部分の大きさは、炭素原
子数が１ないし８、特にｌないし６であり、例えば１な
いし４（例としてはメチル及びエチル）である．本発明
において使用できるヒドロキシピリドンは、先行する特
許中に詳細に記載されているが、本発明に関連して特に
興味のある化合物としては、親水性を有する水溶性の天
然化合物がある。上記の先行する特許中に説明があるよ
うに、１種又はそれ以上の疎水性置換基を存在させるこ
とにより、親水性置換基の存在とのバランスをとっても
よい６しかし、化合物に適切な親水性を付与するために
は、例えば、脂肪族炭化水素中のアルコキシ部分及びシ
クロアルコキシ部分、並びにこれらの置換体の炭素数を
限定することが好ましい．このように脂肪族炭化水素基
の炭素原子数は、これらの基自体が置換されていない場
合には、エないし４、特に１又は２が便宜である２環状
基よりも非環状基が好ましく、非飽和結合を有する基よ
りも飽和結合基が好ましい。置換基のない好ましい脂肪
族炭化水素基及び脂肪族アミド基中の炭化水素基は、ア
ルキル基であり、エチル及び特にメチルが好ましい。置
換された脂肪族炭化水素基の炭素原子数は１ないし６で
あり、好ましくは１ないし４、特に１、２又は３が望ま
しい．この場合にも、環状基よりも非環状基が好ましく
、非飽和結合を有する基よりも飽和結合基が好ましい．
Ｒ換基を有する好ましい脂肪族炭化水素基は、置換メチ
ル、エチル、イソブロビル及びｎ−プロビル基である．
エチル、イソブロビル及びｎ−７口ビル基の末端は置換
されていることが好ましい．シクロアルコキシ基よりも
アルコキシ基が好ましく、アルコキシ基の炭素原子数は
ｌないし６が好ましく、特にエないし４が望ましく、更
に１又は２が特に好ましい。脂肪族アミド基１個より多
い脂肪族炭化水素を含有していてはならず、その炭化水
素は、例えば、エチル、特にメチルが好ましい。

置換された脂肪族炭化水素基置換基の例としては、ヒド
ロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシ
ブロビル、メトキシメチル、２一メトキシエチル、３−
メトキシプロビル、２−メトキシ−１−メチルエチル、
エトキシメチル、２−エトキシエチル、３−エトキシプ
ロビル及び２一エトキシ−１−メチルエチルを挙げるこ
とができる。Ｎ一置換体の場合番ごは、−Ｃ−Ｃ−Ｏ一
基と比較して−Ｎ−Ｃ−０一基の安定性が劣るため、酸
素原子が基中の結合炭素原子に結合している基は好まし
くない． 単環化合物及び２以上の環を含む化合物の双方について
は、３−ヒドロキシピリドン類のうち、最も好ましいの
は３−ヒドロキシピリド−４−オンであり、１−ヒドロ
キシピリド−２−オンも特に好ましい。従って、好まし
い化合物の第１のグループは、単環の３−ヒドロキシピ
リド−４−オンであって、各環の炭素原子が置換されて
いないもの、又は６一位著しくは２一位が脂肪族炭化水
素基、例えば上記の基、で置換されているものであり、
その窒素原子が脂肪族炭化水素基又はヒドロキシー置換
若しくはアルコキシ置換脂肪族炭化水素基、例えば、上
記の基、で置換されたもののグループである．このよう
な化合物の例を以下に掲げる。

３−ヒドロキシ−１．２−ジメチルピリドー４−オン、 ｌ一エチル−３−ヒドロキシ−２−メチルーピリド−４
−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２’　−ヒドロキシエチル）＝
２−メチルピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２’−ヒドロキシ−１゜ーメチ
ルエチル）一２−メチルピリド−４−オン、３−ヒドロ
キシ−１−（２’−ヒドロキシプロピル）一２−メチル
ピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（３゜−ヒドロキシプロビル）−
２−メチルピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−　ｉ一（２゜−メトキシエチル）−２
−メチルピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２’−メトキシ−１゜メチルエ
チル）−２−メチルピリド−４−オン、３−ヒドロキシ
−ｌ一（２゜−メトキシブ口ビル）−２−メチルピリド
−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−　（３’　−メトキシブ口ビル）
−２−メチルピリド−４−オン、 １−（２’一エトキシエチル）−３−ヒドロキシ＝２−
メチルピリド−４−オン、 １−（２゜一エトキシー１゜−メチルエチル）−３−ヒ
ドロキシ−２−メチルピリド−４−オン、１−（２’　
一エトキシブロビル）−３−ヒドロキシ−２−メチルピ
リド−４−オン、 １−（３’一エトキシプロピル）−３−ヒドロキシ−２
−メチルピリド−４−オン、及びこれらの塩類。他の特
定の例としては、上記の化合物の類似物が挙げられ、そ
れらの化合物においては２一位のメチル基がエチル基で
置換されており、例えば１，２−ジメチル−３−ヒドロ
キシピリド−４−オン及びその塩類がある。最も好まし
い化合物の例としては、メトキシ基を含有する化合物が
あり、特に３−ヒドロキシ−１−（２゜−メトキシエチ
ル）−２−メチルピリド−４−オン及びその塩類が好ま
しい。

好ましい第２の化合物のグループは、単環の１ヒドロキ
シピリド−２−オンからなり、この化合物においては環
の炭素原子が、好ましくは６位又は４一位にてアルコキ
シ、アルコキシアルコキシ若しくは脂肪族アミド置換体
により置換されている．このような化合物の特定の例と
しては、１−ヒドロキシ−４−　（２’　−メトキシエ
トキシ）ピリドー２−オン、１−ヒドロキシ−４−（２
’一エトキシエトキシ）一ビリドー２−オン、及び６−
力ルバモイル−■−ヒドロキシピリド−２−オン並びに
その６−（Ｎ−メチル力ルバモイル）及び６−（Ｎ一エ
チル力ルバモイル）類似体並びにこれらの化合物の塩類
が挙げられる。

好ましい第３の化合物のグループは、３−ヒドロキシピ
リド−２−置換体又は３−ヒドロキシピリド−４−置換
体の環３個を含有する化合物がらなり、この化合物中で
は環の炭素原子及び窒素原子が結合基から離れた位置で
置換されていないもの、又は４一置換体の場合には脂肪
族炭化水素基、例えば上記の基で、特に６一位又は更に
特に２位の位置で置換されているものである。

好ましい第４の化合物のグループは、１−ヒドロキシピ
リド−２−オンの環３個を含有する化合物からなり、こ
の化合物中では環の炭素原子及び窒素原子が結合基から
離れた位置で置換されていないもの、又は脂肪族炭化水
素基若しくは脂肪族アミド基、例えば上記の基で、特に
６一位又は更に特に２一位の位置で置換されているもの
である。

３−ヒドロキシピリドンの場合、炭素原子又は特に窒素
原子による環の結合は、脂肪族炭化水素の性質を有する
結合基又は更に１以上の一ＮＨ一基、Ｎ一基、−ＣＯＮ
Ｈ一基及び−ＣＯＮ基を含有する結合基によるものが好
ましい。このような化合物の特定の例は、英国特許第２
１，４６９，８９Ｂ号の実施例８に記載のＮ，Ｎ−ジー
［２−　（３−ヒドロキシ−２−オキソビリド−１−イ
ルアセトアミド）一エチル］　−２−　（３−ヒドロキ
シ−２−オキソビリド−１−イルーアセトアミド）エチ
ルアミン（同特許の第４表に掲げてある化合物６８，６
０．９及び１０）が挙げられる。

特定の条件において使用するには、特定のタイプのヒド
ロキシピリドン化合物が他の化合物よりも好ましい場合
がある。ペプチド及びタンパク質は種々のｐＨで貯蔵さ
れ、特に、インシュリンの製造法によっては酸性又はア
ルカリ性のいずれのｐＨでも貯蔵される可能性がある。

約３ないし５の範囲のｐＨ条件では、１−ヒドロキシピ
リドー２−オンは単環であるか多環（例えば三環）であ
るかを問わず、特に興味のある化合物であり、これより
もｐＨが高い場合には３−ヒドロキシピリド−４一置換
体が単環であるか多環（例えば三環）であるかを問わず
、特に興味のある化合物である．ヒドロキシピリドンは
上記の４件の先行する特許中にて説明されている方法に
より製造できる。

特に、Ｃ一カルバモイル及びＣ−アルキル化力ルバモイ
ル−１−ヒドロキシピリドンは米国特許第４，６９８，
４３１号に記載の方法により製造することができ、更に
、Ｎ−アルコキシアルキル及びＮ−ヒドロキシアルキル
　３−ヒドロキシピリド−４−オン化合物は英国特許第
２１，３６８．０７Ｂ号に記載の方法により製造できる
。この英国特許の方法は対応する３−ヒドロキシ−４−
ピロン、又は所望のヒドロキシピリドン中に存在するＣ
一置換体に転換の可能な基を含有する３−ヒドロキシ−
４−ピロンと、Ｒ’ＮＨ（式中、Ｒ“は所望の１ヒ合物
の窒素原子上に存在する基又はかかる基に転換可能な基
を表わす）との反応を含み、その反応は塩基、例えばア
ルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナｌ・リウムの存在
下で実施される。この方法は英国特許第２１，３６８，
０７８号中に３−ヒドロキシ−１−（２’一ヒドロキシ
エチル）一２−メチルピリド−４−オン及びＮ−ヒドロ
キシアルキルを含有する化合物について記載されており
、対応するＮ−アルコキシアルキル化合物の製造につい
て完全に類似する態様で応用できる．このように、英国
特許第２１，３６８，０７Ｂ号の実施例１１中の２−ヒ
ドロキシエチルアミンの代わりに２−メトキシエチルア
ミンを使用する方法により、かなり興味の持てる３−ヒ
ドロキシ−１−（２゜−メトキシエチル）−２一メチル
ビリドー４−オンを製造できる．適切である場合には、
ヒドロキシピリドンは塩、特に生理学的に許容される塩
の形で使用できる．ヒドロキシ基のプロトンの損失によ
るアニオン及び例えばアルカリ金属イオンのようなカチ
オン、例えばＮａ、４価のアンモニウムイオン又はプロ
トン化されたアミン（例えばトリス（トリスは２一アミ
ノー２−ヒドロキシメチルプロパン１．３−ジオールを
表示する〉）の間で塩が形戒される．塩基との塩の形成
の代わりに、３−ヒドロキシピリドン環の窒素原子を、
塩を形戒するために十分に塩基性にして、塩酸のような
酸と反応させることもできる、ペプチド及びタンパク質
が溶液の形である場合には、塩の使用が適当であるか否
かという問題は、溶液のｐａｌに依存し、カチオンから
形成される塩は１−ヒドロキシピリドンの場合には約ｐ
Ｈ５以上が使用に適しており、及び３−ヒドロキシ−４
−オンの場合には約ｐＨ９以上が使用に適しており、一
方では、アニオンから形成される３−ヒドロキシピリド
−４−オン塩では約ｐＨ７以上が使用に適している． 本発明は、室温又はそれ以下の温度、例えば−１０℃よ
り低い温度、特に１０℃以下、そして更に４℃以下、に
おけるペブチド及びタンパク質の安定化に特に適してい
るが、１種以上のヒドロキシピリドン環、例えばヘキサ
デンテートの三環化合物を組み合わせた化合物を使用す
る場合には、約３７℃での使用も興味深いものである．
ヒドロキシピリドン化合物とペプチドとの割合は、個々
の物質の性質及び安定化ベブチド及びタンパク質の蒙る
条件により変化する。しかしながら、ガイダンスとして
は、ヒドロキシピリドン：ペプチドまたはタンパク質の
重量比が０．０１：１ないし１００：１、特に０．１　
：　１ないし１０：１、例えば２：１が通常好ましいと
いえる．所望の場合には、１種以上のヒドロキシピリド
ン化合物を使用でき、例えば、単環性ビデンテート化合
物及び三環性ヘキサデンテート化合物の双方が使用でき
る。この場合には上記の割合はヒドロキシピリドン化合
物の合計量で適用する。

指摘したように、必要な場合には混合物はヒドロキシピ
リドン及びペプチドまたはタンパク質のみからなってい
てよいが、多くの例においては、混合物中に他の成分を
含有していてもよく、例えば希釈剤、特に溶剤の形での
例えば水等、及び／又はペプチド若しくはタンパク質の
安定性を更に増大させる化合物が他の成分の例である。

ペプチドまたはタンパク質の安定性を更に増大させる化
合物としての潜在的価値のある成分の例としては、生理
学的に許容される形及び量がしばしば要求されるもので
はあるが、種々のタイプの亜鉛含有化合物として供給さ
れる亜鉛である．適切な化合物の例としては、亜鉛塩、
例えばベブチド又はタンバク質がｐＨ≦５．０という環
境にある場合には、特に塩化亜鉛を、及びペプチド又は
タンパク質のｐＨが５．０という環境にある場合には特
に亜鉛ヒドロキシピリドン錯体を挙げることができ、こ
のような錯体としては上記のヒドロキシピリドンが便宜
であり、例えば金属を含有しない形で存在する上記の化
合物がある。このような錯体は、更に、単環性３−ヒド
ロキシピリドン化合物について英国特許第２，１４８，
８９６号に記載されており、単環性及び三環性の１−ヒ
ドロキシピリドンの亜鉛錯体一般的に同等の方法により
製造できる。便宜には、亜鉛に対して過剰のヒドロキシ
ピリドンを使用することが好ましく、例えばモル比で亜
鉛１モルに対して少なくとも４モルのヒドロキシピリド
ンを使用する。

多くの場合に、混合物は、ペブチド又はタンパク質、及
びヒドロキシピリドン物質に更に生理学的に許容できる
希釈剤又は担体をも含有する医薬品の形の混合物であっ
てよい、かかる化合物の性質は種々であり、その多くは
先行する５件の特許中に治療剤としてのヒドロキシピリ
ドンの処方として記載されている．インシュリンに関し
ては、注射用の殺菌した発熱物質（　ｐｙｒｏｇｅｎ　
）を含まない水溶液及び懸濁液が特に好ましい。本発明
を適用できるペプチド又はタンパク質のこの他の処方は
当業界で問題となっているペプチド又はタンパク質に関
し記載されている。

ヒドロキシピリドンは比較的無毒な化合物であり、上記
の割合でヒドロキシピリドンにより安定化されたペプチ
ド又はタンパク質が活性成分である医薬品であり、通常
直接使用に極めて適している。

従って、本発明は、更に、治療用化合物をも含むもので
あって、生理学的に活性名ペプチド又はタンパク質及び
ヒドロキシピリドンの混合物からなり、 （１）３−ヒドロキシピリド−２−オンスは３一ヒドロ
キシピリド−４−オン又はこれらの塩であって、窒素原
子に結合した水素原子が脂肪族アシル基；脂肪族炭化水
素基；又は脂肪族アシルアルコキシ、シクロアルコキシ
、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン及びヒドロ
キシ基から選択した１種以上の置換基により置換された
脂肪族炭化水素基によって置換されており、更に必要に
応じて、環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子が
脂肪族アシル、アルコキシ、シクロアルコキシ、脂肪族
アミド、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキシ基：
脂肪族炭化水素基；又はアルコキシ、シクロアルコキシ
、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキシ基により置
換されており、（２）ｌ−ヒド口キシビリド−２−オン
及びその塩であって、環の炭素原子に結合した水素原子
が、脂肪族アシル、脂肪族アミド、シアノ、脂肪族エス
テル、ハロゲン及びヒドロキシ基；アルコキシ及びシク
ロアルコキシ基、及びアルコキシ、シクロアルコキシ、
脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキ
シ基により置換されたアルコキシ基及びシクロアルコキ
シ基；並びに脂肪族炭化水素基及びアルコキシ及びシク
ロアルコキシ、脂肪族エステル、ハロゲン又はヒドロキ
シ基により置換された炭化水素基から選択した置換基に
より置換されているが、上記の水素原子の置換が脂肪族
炭化水素基、ハロゲン基及びハロゲン基により置換され
た脂肪族炭化水素基から選択した置換基のみにより為さ
れる化合物を除外する、又は（３）３−ヒドロキシピリ
ド−２−オン、３−ヒドロキシピリド−４−オン及び１
−ヒドロキシピリド−２−オンから選択した、２以上の
環を有する化合物であって、隣接するヒドロキシ及びオ
キソ基を保有する環と共有結合したものであって、更に
、生理学的に許容される希釈剤及び担体も含まれる。

本発明の化合物は、所望の生理学的効果を得るのに適切
であると文献に記載されている、治療効果を発揮する量
の上記のペプチド及びタンパク質を一般的に含有してい
る． 混合物の製造にあたって、ヒドロキシピリドン及びペプ
チド若しくはタンパク質成分を、安定化する混合物の物
理的性質に応じて固体の状態又は溶液の形で混合するこ
とができ、標準的な混合方法が便宜に使用できる。しか
しながら、非常に多くの場合、ペブチド若しくはタンパ
ク質／ヒドロキシピリドン混合物を含有する安定化され
た治療薬の最終製品は溶液の形で保存されるが、フリー
ズドライされる場合もある。溶液の形ではペプチド及び
タンパク質は安定性に欠けるため、ペプチド及びタンパ
ク質をフリーズドライすることは極めて一般的ではある
が、本発明により通常は凍結乾燥される物質を、ヒドロ
キシピリドン化合物の安定化効果により溶液の形での製
造を可能とした．更に安定化効果に加えて、ヒドロキシ
ピリドンは一定の条件下では別の利点をも有する。合成
及び生化学（　ｂｉｏｅｎＦｉｉｎｅｅｒ）的方法によ
るペプチド及びタンパク質のいずれもが、ＨＰＬＣ精製
法により、鉄、ニッケル、亜鉛及びアルミニウムで汚染
されるという潜在的な問題が存在する。これらの金属は
、ベブチド又はタンパク質よりもヒドロキシピリドンと
選択的に結合するが、処理を行う場合には、汚染された
ペプチド又はタンパク質も許容できる．著しく汚染され
た場合には、ヒドロキシピリドン：ペプチド又はタンパ
ク質の割合を増加させることが適切である。

本発明を以下の実施例により更に詳細に説明する． ［実施例］ 罠旌透ユ　：　　　が　　ｔ　ンシュリンの無菌状態に
て、殺菌した、発熱物質を含有しない水中に以下に記載
の濃度の以下の成分を溶解して、 重炭酸ナトリウム　　　　（１２輪Ｍ）燐酸ナトリウム
　　　　　（５４ｍＭ）７ｚ／　−ル　　　　　　（０
．２％　　Ｗ／Ｖ）グリセロール　　　　　（１．６％
　−／Ｖ）インシュリン　　　（牛、豚又は人間−１０
単位／噛１；約１０　Ｍ） ３−ヒドロキシ−１−（２’−メトキシエチル）−２−
メチルピリド−４−オン 〈１００μＭ〉 を含有する、ｐＨが７．０の殺菌した、発熱物質を含ま
ない水溶液を製造し、注射の可能なインシュリンを提供
した。

注：インシュリンの処方の別の形としては、他の標準的
なタイプのものがあり、例えば速効性（ｐｒｏｍｐｔ）
インシュリン亜鉛懸濁液、グロビン亜鉛インシュリン注
射液、イソファンインシュリン懸濁液、インシュリン亜
鉛懸濁液及びブロタミン亜鉛インシュリンが挙げられる
が、更に追加成分としての３−ヒドロキシ−１−（２゜
−メトキシエチル）−２−メチルピリド−４−オンを含
有する。

実施例１の記載に対応して、発熱物質を含まないが殺菌
していない豚のインシュリンを含有する溶液を製造した
．比較のために、ヒドロキシピリドンの代わりに別のキ
レート剤である３−ヒドロキシ−２−メチル−４−ビロ
ンを含有する溶液を製造した． この溶液を４℃又は３７℃で培養し、セイプゲ等（Ｓｅ
ｉｐｋｅ　ｅｔ　ａｌ）が＾ｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｗ．　
Ｉｎｔ，　Ｅｄ．　Ｅｎｇｌ．，　１９８６，　２５，
　５３５−５５２に、及びグラウ（　Ｇｒａｕ　）がＤ
ｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，　１９８５，　２８，　４５
８−４６３に記載した逆転相ＨＰＬＣ法を使用して、イ
ンシュリンの安定性を１２週間にわたって測定した．４
周、８周及び１２周後に溶液中に存在したインシュリン
の量を、元の量の百分率として計算した。

その結果を添付の図面に示す。図面より、３−ヒドロキ
シ−２−メチル−４−ビロンではインシュリンは３７℃
及び４℃のいずれの場合も安定化できなかったのに対し
て、３−ヒドロキシ−１−（２゜−メトキシエチル）−
２−メチルピリド−４−オンを使用した場合には、３７
℃ではインシュリンをある程度安定化した程度であった
が，しかし、４℃では１２週間にわたって劣化は観察さ
れなかった．

【図面の簡単な説明】

図は実施ｇ７４２におけるインシュリンの安定化効果を
示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ペプチドまたはタンパク質ならびにヒドロキシピリ
   ドンの組成物であつて、ヒドロキシピリドンが （１）３−ヒドロキシピリド−２−オンまたは３−ヒド
   ロキシピリド−４−オンまたはこれらの塩であって、窒
   素原子に結合した水素原子が脂肪族アシル基；脂肪族炭
   化水素基；または脂肪族アシル、アルコキシ、シクロア
   ルコキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、
   およびヒドロキシ基から選択された１個以上の置換基に
   より置換された脂肪族炭化水素基によって置換されてお
   り、更に必要に応じて、環の炭素原子に結合した１個以
   上の水素原子が脂肪族アシル、アルコキシ、シクロアル
   コキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、ま
   たはヒドロキシ基に；脂肪族炭化水素基に；またはアル
   コキシ、シクロアルコキシ、脂肪族エステル、ハロゲン
   、またはヒドロキシ基により置換された脂肪族炭化水素
   基に置換されたもの、 （２）１−ヒドロキシピリド−２−オンおよびその塩で
   あって、環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子が
   、脂肪族アシル、脂肪族アミド、シアノ、脂肪族エステ
   ル、ハロゲン、およびヒドロキシ基；アルコキシ、およ
   びシクロアルコキシ基、およびアルコキシ、シクロアル
   コキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、ま
   たはヒドロキシ基により置換されたアルコキシ基および
   シクロアルコキシ基；ならびに脂肪族炭化水素基および
   アルコキシおよびシクロアルコキシ、脂肪族エステル、
   ハロゲン、またはヒドロキシ基により置換された炭化水
   素基から選択した置換基により置換されているが、上記
   の水素原子の置換が脂肪族炭化水素基、ハロゲン基およ
   びハロゲン基により置換された脂肪族炭化水素基から選
   択した置換基のみによりなされる化合物を除外したもの
   、または （３）３−ヒドロキシピリド−２−オン、３−ヒドロキ
   シピリド−４−オンおよび１−ヒドロキシピリド−２−
   オンから選択した、２個以上の環を有する化合物であっ
   て、隣接するヒドロキシおよびオキソ基を保有する環と
   共有結合したものであって、生体内に存在する混合物を
   除外したもの、である上記組成物。 ２、ペプチドまたはタンパク質がホルモン、イミュノグ
   ロブリン、血液凝固因子、酵素もしくは酵素阻害剤、ま
   たはそれらの一部である請求項１に記載の組成物。 ３、ペプチドまたはタンパク質がインシュリンまたはそ
   れらの一部である請求項２に記載の組成物。 ４、ヒドロキシピリドンが（１）のタイプの３−ヒドロ
   キシピリド−４−オンである請求項１、２または３に記
   載の組成物。 ５、各３−ヒドロキシピリド−４−オンの環の炭素原子
   が置換されていない、または脂肪族炭化水素基により置
   換されており、窒素原子が脂肪族炭化水素基またはヒド
   ロキシ基またはアルコキシ−置換脂肪族炭化水素物基に
   より置換されている請求項４に記載の組成物。 ６、３−ヒドロキシピリド−４−オンが、 ３−ヒドロキシ−１，２−ジメチルピリド−４−オン、
   １−エチル−３−ヒドロキシ−２−メチルピリド−４−
   オン、 １，２−ジエチル−３−ヒドロキシピリド−４−オン、
   ３−ヒドロキシ−１−（２′−ヒドロキシエチル）−２
   −メチルピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２′−ヒドロキシ−１′−メチ
   ルエチル）−２−メチルピリド−４−オン、３−ヒドロ
   キシ−１−（３′−ヒドロキシプロピル）−２−メチル
   ピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２′−メトキシエチル）−２−
   メチルピリド−４−オン、 ３−ヒドロキシ−１−（２′−メトキシ−１′−メチル
   エチル）−２−メチルピリド−４−オン、３−ヒドロキ
   シ−１−（３′−メトキシプロピル）−２−メチルピリ
   ド−４−オン、 １−（２′−エトキシエチル）−３−ヒドロキシ−２−
   メチルピリド−４−オン、 １−（２′−エトキシ−１′−メチルエチル）−３−ヒ
   ドロキシ−２−メチルピリド−４−オン、１−（３′−
   エトキシプロピル）−３−ヒドロキシ−２−メチルピリ
   ド−４−オン、およびこれらの塩類から選択されたもの
   である請求項５に記載の組成物。 ７、３−ヒドロキシピリド−４−オンが３−ヒドロキシ
   −１−（２′−メトキシエチル）−２−メチルピリド−
   ４−オンまたはその塩である請求項６に記載の組成物。 ８、ヒドロキシピリドンがタイプ（２）の化合物である
   請求項１、２または３に記載の組成物。 ９、ヒドロキシピリドン：ペプチドまたはタンパク質の
   重量比が０．１：１ないし１０：１の範囲である請求項
   １ないし８に記載の組成物。 １０、生理学的に活性なペプチドまたはタンパク質なら
   びにヒドロキシピリドンの混合物からなる医薬組成物で
   あって、ヒドロキシピリドンが（１）３−ヒドロキシピ
   リド−２−オンまたは３−ヒドロキシピリド−４−オン
   またはこれらの塩であって、窒素原子に結合した水素原
   子が脂肪族アシル基；脂肪族炭化水素基；または脂肪族
   アシル、アルコキシ、シクロアルコキシ、脂肪族アミド
   、脂肪族エステル、ハロゲン、およびヒドロキシ基から
   選択された１個以上の置換基により置換された脂肪族炭
   化水素基によって置換されており、更に必要に応じて、
   環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子が脂肪族ア
   シル、アルコキシ、シクロアルコキシ、脂肪族アミド、
   脂肪族エステル、ハロゲン、またはヒドロキシ基に；脂
   肪族炭化水素基に；またはアルコキシ、シクロアルコキ
   シ、脂肪族エステル、ハロゲン、またはヒドロキシ基に
   より置換された脂肪族炭化水素基に置換されたもの、 （２）１−ヒドロキシピリド−２−オンおよびその塩で
   あって、環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子が
   、脂肪族アシル、脂肪族アミド、シアノ、脂肪族エステ
   ル、ハロゲン、およびヒドロキシ基；アルコキシ、およ
   びシクロアルコキシ基、およびアルコキシ、シクロアル
   コキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、ま
   たはヒドロキシ基により置換されたアルコキシ基および
   シクロアルコキシ基；ならびに脂肪族炭化水素基および
   アルコキシおよびシクロアルコキシ、脂肪族エステル、
   ハロゲン、またはヒドロキシ基により置換された炭化水
   素基から選択した置換基により置換されているが、上記
   の水素原子の置換が脂肪族炭化水素基、ハロゲン基およ
   びハロゲン基により置換された脂肪族炭化水素基から選
   択した置換基のみによりなされる化合物を除外したもの
   、または （３）３−ヒドロキシピリド−２−オン、３−ヒドロキ
   シピリド−４−オンおよび１−ヒドロキシピリド−２−
   オンから選択した、２個以上の環を有する化合物であっ
   て、隣接するヒドロキシおよびオキソ基を保有する環と
   共有結合したものであるヒドロキシピリドンであって、 生理学的に許容される希釈剤または担体をともに有する
   上記組成物。 １１、インシュリンまたは血液製品からなり、またはワ
   クチンである請求項１０に記載の医薬組成物。 １２、ヒドロキシピリドンが請求項４ないし８のいずれ
   かに記載のヒドロキシピリドンである請求項１０または
   １１に記載の医薬組成物。 １３、ペプチドまたはタンパク質ならびにヒドロキシピ
   リドンの治療用の混合物であって、ヒドロキシピリドン
   が、 （１）３−ヒドロキシピリド−２−オンまたは３−ヒド
   ロキシピリド−４−オンまたはこれらの塩であって、窒
   素原子に結合した水素原子が脂肪族アシル基；脂肪族炭
   化水素基；または脂肪族アシル、アルコキシ、シクロア
   ルコキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、
   およびヒドロキシ基から選択された１個以上の置換基に
   より置換された脂肪族炭化水素基によって置換されてお
   り、更に必要に応じて、環の炭素原子に結合した１個以
   上の水素原子が脂肪族アシル、アルコキシ、シクロアル
   コキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、ま
   たはヒドロキシル基に；脂肪族炭化水素基に；またはア
   ルコキシ、シクロアルコキシ、脂肪族エステル、ハロゲ
   ン、またはヒドロキシ基により置換された脂肪族炭化水
   素基に置換されたもの、 （２）１−ヒドロキシピリド−２−オンおよびその塩で
   あって、環の炭素原子に結合した１個以上の水素原子が
   、脂肪族アシル、脂肪族アミド、シアノ、脂肪族エステ
   ル、ハロゲン、およびヒドロキシ基；アルコキシ、およ
   びシクロアルコキシ基、およびアルコキシ、シクロアル
   コキシ、脂肪族アミド、脂肪族エステル、ハロゲン、ま
   たはヒドロキシ基により置換されたアルコキシ基および
   シクロアルコキシ基；ならびに脂肪族炭化水素基および
   アルコキシおよびシクロアルコキシ、脂肪族エステル、
   ハロゲン、またはヒドロキシ基により置換された炭化水
   素基から選択した置換基により置換されているが、上記
   の水素原子の置換が脂肪族炭化水素基ハロゲン基および
   ハロゲン基により置換された脂肪族炭化水素基から選択
   した置換基のみによりなされる化合物を除外したもの、
   または（３）３−ヒドロキシピリド−２−オン、３−ヒ
   ドロキシピリド−４−オンおよび１−ヒドロキシピリド
   −２−オンから選択した、２個以上の環を有する化合物
   であって、隣接するヒドロキシおよびオキソ基を保有す
   る環と共有結合したもの、である上記組成物。 １４、ペプチドまたはタンパク質が請求項２または３に
   記載のペプチドまたはタンパク質である請求項１３に記
   載の組成物。 １５、ヒドロキシピリドンが請求項４ないし８のいずれ
   かに記載のヒドロキシピリドンである請求項１３に記載
   の組成物。