JPH0314596A

JPH0314596A - アントシアニン及びその塩

Info

Publication number: JPH0314596A
Application number: JP1146759A
Authority: JP
Inventors: Toshio Honda; 本多　利雄; Norio Saito; 斎藤　規夫; Takashi Kusano; 草野　尚; Hiroyuki Ishisone; 石曽根　博之; Nobuo Funayama; 船山　宣夫; Takeshi Kubota; 久保田　武志; Shigeharu Araogi; 新荻　繁晴
Original assignee: HORIUCHIITAROU SHOTEN KK
Current assignee: HORIUCHIITAROU SHOTEN KK
Priority date: 1989-06-12
Filing date: 1989-06-12
Publication date: 1991-01-23

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は、下記一般式（Ｔ）で表されるアントシアニン
及びその塩に係る。

一般式（１）［式中、Ｒ１、Ｒ，はＣＧＣＧＳＣＧＣ，　ＣＧ及びＣ
（ここで、Ｃは任意の位置で結合しているｐ−クマル酸
残基であり、Ｇは任意の位置で結合しているＤ−グリコ
ース残基である）から選ばれる残基を表わす。］本発明
は、さらに、上記アントンアニン及びその塩の製法及び
該化合物の少なくとも１を含有せしめた血栓症予防を目
的とする機能性食品にも係る。

従来の技術アントシアニンは、酸性溶媒中で紅色を呈し、アルカリ
性溶液中で青色を呈する一群の色素であるアントシアニ
ンのうちの配糖体である。

かかるアントシアニンの調製に当たっては、個々のアン
トシアニンによって異なるが、一般的には、下記の方法
が利用されている。

すなわち、Ｉ−２％の塩酸酸性メタノールで材料を抽出
し、酢酸鉛を添加して塩化鉛の沈殿を炉別し、生じた青
色の鉛塩を集める。ついで、３％メタノール塩酸に再溶
解し、エーテルを加えて沈殿させ、鉛塩として精製する
か又はビクリン酸塩として析出させる。最後に、塩化物
に変え結晶させる。

このようにして得られるアントシアニンは、天然にはア
ントシアニジンの３及び５位、又は両方の水酸基に糖が
付着した構造を有するものである。

発明が解決しようとする課題上述の如く、アントシアニンは一般に植物色素として知
られているが、安定性に難点があるため、その利用は限
られており、わずかに一部の化合物が食品等の着色剤と
して使用されているのみであり、アントシアニンの有効
利用は図られていなかった。

課題を解決するための手段発明者らは、Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　ｃ
ｖ．　ｒＤｏｕｂｌｅｂｌｕｅＪの花びら中に数種の新
規なアントシアニンが含有されており、しかも該アント
シアニンは血小板凝集阻害作用及び血管平滑筋弛緩作用
を有すると共に、安定性に優れていることを見出だし、
本発明に至った。

従って、本発明の第１の目的は、下記一般式（１）で表
されるアントシアニン及びその塩にある。

一般式（１）も１を含有せしめたことを特徴とする機能性食品［式中
、Ｒ，、Ｒ，はＣＧＣＧＳＣＧＣ．．ＣＧ及びＣ（ここ
で、Ｃは任意の位置で結合しているｐ−クマル酸残基で
あり、Ｇは任意の位置で結合しているＤ−グリコース残
基である）から選ばれる残基を表わす。］本発明の第２
の目的は、Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　ｃｖ
ｒＤｏｕｂｌｅ　ｂｌｕｅＪの花びらを温水で抽出し、
抽出物をクロマトグラフィー法によって分離、精製する
ことを特徴とするアン｝・シアニンの製法にある。

さらに、本発明の第３の目的は、上記一般式（Ｉ）で表
されるアントシアニン又はその塩の少なくとにある。

作用本発明に係るアントシアニン及びその塩は、Ｃｌｉｔｏ
ｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　ｃｖ．　ｒＤｏｕｂｌｅ　
ｂｌｕｅＪの乾燥花びらから抽出される。抽出に当たり
、抽出溶媒として水を使用する。抽出溶媒の温度は、一
般に０ないし１００℃、好ましくは２０ないし６０℃で
ある。

約２０℃以下では抽出効率が低すぎるため好ましくない
。また、水以外の溶媒としては、たとえばメタノール、
エタノール、プロバノール等のアルコール類、又、アセ
トン、メチルエチルケトン等のケトン類を単独で又は希
塩酸、希酢酸等との混合溶媒として使用できるが、抽出
効率、取扱いの便利さ等の点で水が最適である。

次に、抽出液をＨＰ−　２０カラムに吸着させ、１％酢
酸−７０％メタノールにて溶出する。溶出液から溶媒を
留去した後、ペーパークロマトグラフィーに付して、ブ
タノール：酢酸：水（４・１：２）で展開し、各分画を
１％酢酸−７０％メタノールで溶出する。溶出液は、後
述するように、テルナチンＡ＋＋Ａ，、ＢＩ＋Ｂ２、Ｄ
，　＋　Ｄｔをそれぞれ含有する。

ついで、各混合物を高速液体クロマトグラフィーに付し
、Ａ液（リン酸：水＝１．５：９８．５）：　Ｂ液（リ
ン酸：酢酸：アセトニトリル：水＝　１．５：２０：２
５：５３．５）＝５０：５０、４５：５５及び３０：７
０でそれぞれ溶出する。これにより、各テルナチンＡＩ
，Ａｔ，Ｂ，，Ｂｔ．Ｄ，及びＤ，が得られる。

最後に、必要であれば、これらテルナチンを常法に従っ
て精製する。

このようにして得られたテルナチンは深紫色の粉末状で
ある。

次に、実施例により本発明をさらに詳述する。

実施例ｌテルナチンＡ．，Ａ！，Ｂ，，Ｂ，，Ｄ．．Ｄ，の単離
Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　ｃｖ．　ｒＤｏ
ｕｂｌｅ　ｂｌｕｅＪの乾燥花びら５０９を温水２Ｑに
て抽出後、抽出液を濃縮し、ＨＰ−　２０カラム（４５
φ×１５０■）に吸着させ、水洗後１％酢酸−７０％メ
タノールにて溶出した。溶出液の溶媒を留去し、残留物
をペーパークロマトグラフィ−［Ｎｏ．　５２６（東洋
炉紙）、ブタノール；酢酸：水＝４　：１　：２］に付
し、ついで、各分画を１％酢酸−７０％メタノールにて
溶出し、テルナチンＡ＋＋Ａｔ、Ｂ＋十Ｂｔ，　Ｄ＋＋
Ｄｔをそれぞれ得た。さらに、それぞれの混合物を高速
液体クロマトグラフィーに付し、それぞれＡ液（リン酸
：水＝　１．５：９８．５）二Ｂ液（リン酸：酢酸：ア
セトニトリル：水−１．５：２０＋２５：５３．５）＝
　５０：５０，　４５：５５及び３０：７０にて溶出し
分離した。次に得られたテルナチンＡｔ，Ａｔ，Ｂ＋，
Ｂｚ，Ｄ＋及びＤ，をそれぞれＨＰ−　２０カラムクロ
マトグラフィーに付し、水洗後１％酢酸−７０％メタノ
ールにて溶出し、溶媒を留去した。さらに、それぞれの
残留物をトリフロロ酢酸に溶解後エーテルを加え、次い
で溶媒を留去するとテルナチンＡ．，Ａ，，Ｂ，，Ｂ，
，Ｄ，及びＤ２がそれぞれ深紫色の粉末として得られた
。

各テルナチンの構造の決定得られたテルナチンを酸加水分解すると、デルフィニジ
ン（Ｄｐ）、グルコース（Ｇ）、ｐ−クマル酸（Ｃ）及
びマロン酸（Ｍ）を生成する。さらに、２Ｎ　ＮａＯＨ
による加水分解では、すべてのテルナチンがデアシルテ
ルナチン（Ｄａ−Ｔ）、Ｃ，　Ｇ及び鯖を与えた。Ｃは
テルナチンＢ，，Ｂ，，Ｄ，及びＤ，のアルカリ加水分
解物より検出されたが、テルナチンＡ，，Ａ，のアルカ
リ加水分解物からは検出されなかった。このことは、前
者はその側鎖中に加水分解可能な末端Ｃを有するが、後
者は持っていないことを示している。

各テルナチンのＵＶ−ＶＩＳスペクトルでは、第１表に
示すように２９０ｎｍ付近に大きな吸収が見られ、かか
る事実は各テルナチンがＣによって高度にアシル化され
ていることを示す。テルナチン中のＣの数を示すＥａｃ
ｙｌ／　Ｅｖｉｓ（％）の値は３ないし４である。テル
ナチン類の構造が高度にアシル化されたものであること
は，　ＩＲスペクトルにおいて１７００ｃ『’付近に強
い吸収が認められることによっても確認される。

第２表に示したテルナチンのＦＡＢＭＳはテルナチン類
が大きな分子量を有することを示し、特にテルナチンＡ
＋はこれまで知られているアントシアニンモノマーの中
では最大（２１０８）である。テルナチンＡＩとＢ，、
又はテルナチンＢ，とＤ．との分子量の違いは１６２で
あり、テルナチンは同じマスユニッ｝・てあるカフェー
酸を含まないことより、グルコース分子のマスフラグメ
ントとして説明できる。同様に、テルナチンＡ＝　Ｂ＊
及びＤ，のそれぞれについても同じ関係である。

Ｌｏｔ酸化では、すべてのテルナチンからマロニルグル
コースかえられる。この事実から、Ｍはテルナチンの３
位のＧに結合していることがわかる。

上記の知見より、各テルナチンの構造は、下記のように
３位のＧがＭでアンル化され、さらに３′位及び５′位
のグルコースが種々の長さのＣＧ側鎖でアシル化された
デルフィニジン３，３’，５’−　トリグルコシドであ
ると推定された。

各テルナチンのアルカリ加水分解物中のＣ：ＣＧの比は
、逆層（ＯＤＳ）ＨＰＬＣによって決定され、その比は
それぞれのテルナチンの推定構造から得られた理論値と
一致し、このことからも推定構造式が正しいことが示さ
れた（第２表）。

さらに、各テルナチンは３′位及び５′位の側鎖の２種
類の末端残基の親水性により、Ｇ−Ｇ（テルナチン＾１
及びＡ．）、Ｇ−Ｃ（テルナチンＢ，及びＢｔ）、Ｃ−
Ｃ（テルナチンＤ１及びＤ，）の３つのタイプに分類で
きる。テルナチンのＨＰＬＣにおける溶出速度は、その
側鎖末端置換基の極性に比例して増大する。

ＯＤＳ−　ＨＰＬＣにおいては、極性の低い溶質は高い
ものよりクロマトグラフィーの固定層により緊密に吸着
されることより、ここで得られた結果は側鎖の推定構造
が正しいことを支持している。

テルナチンＤ，の薬理試験上述の如くして得られたテルナチンのうちテルナチンＤ
，を使用して薬理試験を行った。

ニュージーランドホワイト雄性ウサギを実験に用い、摘
出胸部大動脈標本及び血小板凝集に対する作用をテルナ
チンＤ．終濃度１０−’Ｍにて検討した。

（１）血小板凝集に対する作用頚動脈より、３．８％クエン酸ナトリウム１／１０容加
にて全採血を行い、７６０ｒｐｍで２０分間の遠心分雌
にて多血小板血漿（ＰＲＰ）を、２６０Ｏｒｐｍ，　１
０分間の遠心分離により乏血小板血漿（ＰＰＰ）ををそ
れぞれ分離した。

凝集能の測定にはへマトレーサー６０１（日本バイオサ
イエンス社）を用い、ＰＰＰを１分間プレインキユベー
トした後被験物質を添加し、３分間インキュベートを行
い、凝集剤を加えた。活性の評価は被験物質の代りに水
を添加したコントロールの最大凝集率に対する抑制率で
表現した。

尚、凝集剤はＡＤＰ（終濃度３　Ｘ　Ｊ．Ｏ−５Ｍ）及
びコラーゲン（終濃度ＩＵ５９／ｘＱ）を用いた。

得られた結果を下記第３−５表に示す。

第　　３　　表テルナチンＤ，の血小板凝集抑制作用（抑制率％）コラ
ーゲン　　　　　　　／．ＤＰ２８．２±８．９１　　　　　　４４．８±７．１６第
　　４　　表テルナチンＤＩと各種環状ヌクレオチド増加薬の用量反
応性（ＡＤＰ凝集）テノレナチンＤ，　　　　　　ナトリウムニトｕフ０ル
シット゛　　　　　ホルスコリ　ン２５　　　　　−８
３５０　　　　　　１９．４１００　　　　　　４４．４８，８　　　　　　ｌ１４．７　　　　　　　３３８．２　　　　　　１０８．６５．７３７．１第　　５　　表テルナチンＤ，と環状ヌクレオチド増加薬との相互作用（ＡＤＰ凝集）Ｔ−Ｄ．とＳＮＰとの　　　　　　Ｔ−Ｐ．とＦＫとの
相互作用（抑制率％）　　　相互作用（抑制率％）Ｓｔ
ＩＰ　０．３μ輩　　　　６．７　　　　ＦＫ１μＭ２
．７Ｔ−Ｄ．２５μＭ　　　　１７．８　　　　７−Ｄ
，２５μＭ２．７（２）血管に対する作用全採血後のウサギより胸部大動脈を摘出し、速かにＴｒ
ａｎｒｅｒｓｅ　Ｓｔｒｉｐ標本を作製し、予め３７℃
に保温し、９５％Ｏ，−５％ＣＯ，を通気しているＫｒ
ｅｂｓ液を満たした５ｘＱのＯｒｇａｎ　ｂａｔｈ中に
懸垂した。約１９の静止張力のもとて１時間平衡化した
後、ノルエピネフリン（ＮＥ）１０−　５　Ｍで収縮さ
せた。

ＮＥ収縮後に、被験薬物をＯｒｇａｎ　ｂａｔｈ中に添
加して張力変化を等尺性に記録した。活性の評価はＮＥ
添加による収縮張力を１００％とし、被験物質添加によ
る張力の減少を百分率で示した。得られた結果を第６表
に示す。

第　　６　　表テルナチンＤ，の血管（ＮＥ収縮）に対する弛緩作用（％）内皮細胞（＋）　　　　　内皮細胞（−）１５．８１２　８第３表から、テルナチンＤ，はＡＤＰ及びコラーゲン凝
集を顕著に抑制する事が示された。又、第４表に示した
ように、テルナチンＤ，の血小板凝集抑制作用には用量
反応性が示された。作用機序としては、第５表に示した
ように、アデニレートサイクラーゼの活性化剤であるホ
ルスコリンに対して相乗的に作用し、Ｃ−　ＧＭＰホス
ホジエステラーゼの阻害剤として知られるＳＮＰに対し
ては相加的に作用した。従って本物質は何らかの機序に
より細胞内のＣ−　ＧＭＰ濃度を増加させる事によりそ
の作用を発揮するものと考えられる。

血管に対する作用としては、第６表に示したように、血
管内皮の有無に拘わらすＮＥ収縮に対して弛緩的に作用
した。従って、テルナチンＤ，は平滑筋に直接作用して
弛緩作用を示すものと考えられる。

テルナチンＤ，以外の他のテルナチンＡ＋，Ａｖ＋ｔ３
＋，Ｂ，及びＤ！も、同様の薬理活性を有する。

実施例２上述のテルナチンが天然の植物色素でありかっ血小板凝
集抑制作用を有する点に鑑み、血栓症等の発生を予防す
る目的の機能性食品としての各種飲料に該テルナチンを
配合した。

調製した各種飲料の処方を以下に示す。これら飲料にお
いて、本発明に係るテルナチンは優れた安定性を示した
。

処方例ＩＣｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　　エキスカフェ
イン安息香酸ナトリウムアスコルビン酸香料（ブドウ）ブドウ果汁ソルビット液水を加えて全量３０ｍＱとした。

処方例２Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　　エキスカフェ
イン安息香酸ナトリウムクエン酸香料（ブドウ）ブドウ果汁ソルビット液水を加えて全量３０村とした。

処方例３Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　　エキスカフェ
イン安息香酸ナトリウム１００ｇ９３０Ｈ１８ｌ９５０ｘｙ６０友２９次Ｑ６ｇ１００定９３０ｌ９１ｇｘｆ５０朽６０肩９９ｘ（１６ｇ１００Ｂ３０ｔｘｇ１８ｕクエン酸香料（ブドウ）ブドウ果汁マルチトール５０Ｈ６０ｘｇ９ｍＱ６９水を加えて全量３０村とした。

紋立艶上Ｃｌｉｔｏｒｉａ　ｔｅｒｎａｔｅａ　　エキス　　　
　！００１９カフェイン　　　　　　　　　　　　’ａ
ｗａｙ安息香酸ナトリウム　　　　　　　　１８ｒｌｇ
酒石酸　　　　　　　　　　　　　　５０ｙｔｔｇ香料
（ブドウ）　　　　　　　　　　　　　６０叶ブドウ果
汁　　　　　　　　　　　　９ｌｇマルチトール　　　
　　　　　　　　　６ｇ水を加えて全量３０ｊＩｉ２と
した。

発明の効果本発明に係る一般式（Ｉ）で表されるアントシアニン及
びその塩は、従来のアントシアニン系色素との対比にお
いて、安定性に優れると共に、新たに血小板凝集抑制作
用及び血管平滑筋弛緩作用を有するものであり、血栓症
等の予防を目的とする機能性食品等への利用が可能とな
る。

Claims

【特許請求の範囲】１　下記一般式（ I ）で表されるアントシアニン及び
その塩。一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２はＣＧＣＧ、ＣＧＣ、ＣＧ及び
Ｃ（ここで、Ｃは任意の位置で結合しているｐ−クマル
酸残基であり、Ｇは任意の位置で結合しているＤ−グリ
コース残基である）から選ばれる残基を表わす。］２請求項１記載のものにおいて、前記アントシアニンが
、一般式（ I ）においてＲ＿１及びＲ＿２が共にＣＧ
ＣＧであるテルナチンＡ＿１である、アントシアニン及
びその塩。３　請求項１記載のものにおいて、前記アン
トシアニンが、一般式（ I ）においてＲ＿１がＣＧＣ
Ｇ又はＣＧであり、Ｒ＿２がＣＧ又はＣＧＣＧであるテ
ルナチンＡ＿２である、アントシアニン及びその塩。４　請求項１記載のものにおいて、前記アントシアニン
が、一般式（ I ）においてＲ＿１がＣＧＣＧ又はＣＧ
Ｃであり、Ｒ＿２がＣＧＣ又はＣＧＣＧであるテルナチ
ンＢ＿１である、アントシアニン及びその塩。５　請求項１記載のものにおいて、前記アントシアニン
が、一般式（ I ）においてＲ＿１がＣＧＣ又はＣＧで
あり、Ｒ＿２がＣＧ又はＣＧＣであるテルナチンＢ＿２
である、アントシアニン及びその塩。６　請求項１記載のものにおいて、前記アントシアニン
が、一般式（ I ）においてＲ＿１及びＲ＿２が共にＣ
ＧＣであるテルナチンＤ＿１である、アントシアニン及
びその塩。７　請求項１記載のものにおいて、前記アン
トシアニンが、一般式（ I ）においてＲ＿１がＣＧＣ
又はＣであり、Ｒ＿２がＣ又はＣＧＣであるテルナチン
Ｄ＿２である、アントシアニン及びその塩。８　請求項１記載のアントシアニン及びその塩を製造す
る方法において、Ｃｌｉｔｏｒｉａｔｅｒｎａｔｅａｃ
ｖ、「Ｄｏｕｂｌｅｂｌｕｅ」の花びらを温水で抽出し
、抽出物をクロマトグラフィー法によって分離、精製す
ることを特徴とする、アントシアニンの製法。９　請求項１記載のアントシアニン及びその塩の中から
選ばれる少なくとも１のアントシアニン又はその塩を含
有せしめたことを特徴とする、機能性食品。