JPH02504635A - 生体特異性ポリマー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生体特異性ポリマー 関連８願との相互関連 本出願は１９８２年８月１２日付で出願された米国特許出願第４０７，８１３号 および同第４０７．６１４号の１９８３年７月２０日付で出願された一部継続出 願である米国特許出願第５１５．９４９号、米国特許第４，６８７，８０８号の 一部継続出願である。

発明の背景 多くの症状の経過はしばしば特定の血液タンパク質およびその他の分子の濃度（ ｌｅｖｅｌ）の増加に反映される。

この現象は代表的には病状を定義し、臨床治療の経過を追跡する診断上の手段と して利用されている。多くのばあい、これらの特定血液タンパク質は、疾病過捏 を一次的または二次的に表わすために直接的または間接的に関係がある。「自己 免疫（ａｕｔｏｉｉａｕｎｅ）Ｊ疾患とは身体が正常な成長および維持を行なう ために必要な内因性基質（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　５ｕｂｓｔｒａｔｅｓ）およ び組織タンパク質に抗体を循環することを特徴とする疾患ということができる。

「腫瘍（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）Ｊ疾患の代表的な特徴は免疫抑制阻止因子（１ ｍｍｕｎｏｓｕｐｒｅｓｓｉｖｅ　ｂｌｏｃＮｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ）　、表面 の抗原をマスキングする成分および／または成長調節構成要素を生成することに よって身体の自然防御機構を回避またはこれと妥協する未分化形質転換細胞系列 の成長が制御されないことである。これらの病理学的作動体（ｐａｔｈｏｌｏｇ ｉｃａｌ　ｅｌｅｃｔｏｒｓ）、たとえばコウジティブエージェント（ｃａｕｓ ｌｔｌｖｅ　ａｇｅｎｔ）を生体適合性（ｂｉｏｃｏ■ｐａｔｌｂｌｅ）の基質 上に特定の区分化を行なうことはこれらの疾患過程の病理学的作動体を除去する ことによる「正常な」身体機能の回復と密接に関連する。

免疫系を含んでいる器官、細胞および分子の基本的な機能は異物を認識し体内か らこれを消滅させることである。これらの異物は異物と、これに対応して形成さ れた抗体との間の反応によって排出される。一般的にはこの機能は効果的に患者 に危険は及ぼすことなく発揮される。

しかしあるばあいには混乱が起ることがあり、たとえば制御されない応答性（ア レルギー性障害）または異常応答性（自己免疫疾患）のような病因性障害を起す 結果となることがある。これらの両障害による疾患の発生は周囲の抗原（アレル ゲン）または自己抗原に対して交差反応性をもつ抗体の産生に直接的または間接 的に関連している。

自己免疫疾患は患者が自己抗原に対して反応性がある抗体を生成して免疫的応答 を起す病理的状態である。自己免疫は身体のほとんどすべての部分の各々に作用 することがあり、一般的には自己抗原と免疫グロブリン（ＩｇＭまたはＩｇＧ） との間の反応をも含んでいる。代表的な自己免疫疾患は甲状腺、腎臓、膵臓、ニ ニーロン、胃粘膜、副腎、皮膚、赤血球および滑液膜ならびに甲状腺グロブリン 、インシユリン、デオキシリボ核酸類および免疫グロブリンの疾患である。

若干のタイプの自己免疫疾患および腫瘍疾患に対しては全身Ｘ線照射や細胞毒性 薬剤の投与などの非特異的免疫抑制治療法が行なわれてきたがその効果は限定的 であった。このような治療法の欠点は使用する薬剤に毒性があること、およびこ のような治療法に伴なつて種々の癌、とくにリンパ腫および細網細胞の肉腫の発 生率が増大することであった。さらに、慢性的に細胞を抑制する非特異的薬剤を 使用すると患者が、通常の状態ならば問題が起らないような周囲の菌類、細菌お よびウィルスによりて重篤な感染を著しく起しやすくなることである。本発明は 特定の疾患の徴候に関連しその原因となりうる病理学的作動体またはそれらの群 のみを除去する点で特異性をもつものである。

先行技術を調べると、極めて近年まで一般的に自己免疫および／または腫瘍疾患 の治療に２つの方法が研究されてきた。その１つは、特定のタイプの免疫学的耐 性を起すような物質を患者の体内に導入する方法である。この方法によって抗体 の反応性を抑制して、疾患を起す抗原に対する耐性を生ずる効果をうるであろう 。このタイプの研究の代表例は１９８１年９月１６日にカット（ｋａｔｚ）に与 えられた米国特許第４．２２２，９０７号である。この開示によると、患者にＤ −グルタミン酸とＤ−リジンとのコポリマーに結合した抗原の抱含体を導入する ことからなる治療を行なっている。

第２の研究は体外ルートを経るものであった。この方法は一般的に、全血液を排 除し、細胞性と可溶性の血液物質を分離し、血漿を置換または処置し、処置を施 した全血液で再度合わせて、注入する方法である。この研究の第１番目の例は「 テラビニ−ティク・プラズマ・エクスチニンジ（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ｐｌ ａｓｍａ　Ｅｘｃｈａｎｇｅ）　Ｊ　、Ｌａｂ。

Ｍｅｄ、１２（１２）、　７４５頁（１９８１年）、マックＯ−（ＭｃＣｕｌｌ ｏｕｇｈ）らが記載している血漿を塩、糖および／またはタンパク質溶液と置換 または交換する方法であろう。血漿の交換はかなり粗い技術であって、大容量の 置換用溶液が必要である。この研究の第２番目の例は全血液中の血漿部分の物理 的および／または生化学的修飾法である。この治療法の技術の代表的な状況はた とえばターマン（Ｔｅｒｍａｎ）らの論文「エクストラコーホリール・イムノア ドソープシ１ン：イニシャル・エクスペリエンス・イン・ヒニーマン・システミ ック・ルブス・エリテマトーサス（Ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ　ｌｍ５ｕｎ ｏａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ：　Ｉｎ１ｔｉａｌＥｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ｉｎ　Ｈｕ ｍａｎ　Ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ＬｕｐｕｓＥｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）　　Ｊ　 ％　Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　　１９７９年１０月２０日、８２４〜８２Ｂ頁に 記載されている。この論文にはＤＮＡコロジオン−チャコールフィルターを２個 の機械的フィルターの間にはさんでいるものを使用している血液透析装置が記載 されている。しかし、この技術の代表的な状況は、チャコール基質が処理した血 漿から、生命の維持に必要な多くの生体低分子量成分を非特異的に吸着するため に吸着剤のカラムが免疫成分に対して半時異的に機能するに過ぎない状況であつ た。この研究の第２番目の応用結果が、ターマン（Ｔｅｒｍａｎ）らの論文「ス ペシフィック・リムーバル−オン・サーキニレーテッド・アンチゲン・バイψミ ーンズ・オン・イＡノアドソープシジン（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　　Ｒｅｍｏｖａｌ 　　ｏｆ　　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｅｄ　　Ａｎｔｉｇｅｎ　　ｂｙ　　Ｍｅａｎｓ ｏｒ　Ｉｓｍｕｎｏａｄｓｏｒｐｔｊｏｎ）　Ｊ　％　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒ ｓ％Ｖｏ１．６１゜Ｎｏ、１．１９７６年１月、５９〜Ｂ２頁に記載されている 。この文献は抗体で処理したセルロース膜（ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｃｍｅｍｂｒａ ｎｅｓ）による放射性物質で標識された抗原の特異的除去を開示している。しか し、この著者はコントロールとして使用した膜がタンパク質を非特異的に吸着す る能力が著しく大きいことを報告している。

この研究の第３番目の応用はパンサル（Ｂａｎｓａｌ）らの論文「エクス・ビボ ・リムーバル・オン・セーラム・ＩｇＧ・イン・ア・ベージヤント拳ウィズ・コ ロン・カルシノー　ｖ　　（ＥＸ　　ｖｉｖｏ　　Ｒｅｍｏｖａｌ　　ｏｒ　　 Ｓｅｒｕｍ　　ＩｇＧ　　ｉｎ　　ａ　　ＰａｔｉｅｎｔＷｉｔｈ　　Ｃｏ１ｏ ｎ　　Ｃａｒｃｉｎｏｓａ）Ｊ　　、　Ｃａｎｃｅｒ、　４２　［１）、　　１ 〜１８頁（１９７８年）に記載されている。この報告は、血漿を生体外において ホルマリンと加熱して殺菌し、スタフィロコッカス・アウレアス（Ｓ　ａ　ｈ　 １ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅａｓ）で処理することによる免疫グロブリンの半時 異的吸着を開示している。ニス・アウレアス（Ｓ、　ａｕｒｅａｓ）のある種の 菌株の生物学的活性はタンパク質Ａと呼ばれている分子が細胞壁上に存在するた めとされており、このタンパク質Ａは相互に作用し、哺乳動物のＩｇＧのＦｃ部 分に結合する。このＦｃ部分との相互作用のためにこの処置法では正常なＩｇＧ 成分と病的なＩｇＧ成分とを識別することができず、また実験の結果、重大な副 作用の可能性が判明している。

本研究の第４の応用はマルケスキー（Ｍａｌｃｈｅｓｋｙ）らの論文「オン−ラ イン・セパレージジン・オン・マクロモレキニールズ・パイ・メンプラン・フィ ルトレージラン・ウィズ・クライオゲレーシジン（Ｏｎ−１ｉｎｅ　５ｅｐａｒ ａｔｉｏｎｏｆ　Ｍａｅｒｏｉｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｂｙ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｆ ｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ＷｉｔｈＣｒｙｏｇｅｌａｔｉｏｎ）　Ｊ　、Ａｒｔｌｆ 、Ｏｒｇａｎｓｓ　　４　：　２０５．１９８０年に記載されている。この論文 は、）濾過および低温処理室（ｃｈａｍｂｅｒｓ）の併用による血漿からのクラ イオグロプリン物質の手蒔異的除去を開示している。クライオグロブリン沈殿物 質の発生率およびその組成は必ずしも多くの自己免疫または腫瘍疾患と一致せず またはこれを示すものではない。

本技術の現状に関連するもう１つの問題は、機械的フィルターを使わなければ、 所望の除去すべき特定の病理学的作動体が患者の疾患を治療すべき効果がある程 度に充分大量に除去されないことであって、これはカラムが除去すべき特定の病 理学的作動体のみを充分特異的に吸着しないからである。

本発明によれば血液および／または血漿を処理することによって、病理学的作動 体を高度の特異性をもって経済的に除去することができることが見出された。

発明の概要 本発明は概略的に述べると、固定化された反応性の生物学的製剤を存する生体特 異性（ｂｊｏｓｐｅｃｉ　ｒｉｃ）ポリマーに関するものであって、該生物学的 製剤は病理学的作動体である補体と結合する高特異的活性を有するものである。

該生体特異性ポリマーは、それに付着する表面がら強制的に拡げる物理的大きさ をもうているスペーサーを有するか、または有しない生体適合性ポリマー支持体 、生体適合性ポリマー支持体または任意にスペーサー上に化学結合で固体化され た生物学的製剤または複数の生物学的製剤からなるものであって、該生物学的製 剤または複数の生物学的製剤が、それらの特定の病理学的作動体または特定の病 理学的作動体の群を結合するための反応性を保持していることを特徴とするもの である。

本発明はまた、患者の血液、血漿またはその他の体液を、固定化された反応性生 物学的製剤を有する生体特異性ポリマー上に流通し、これによって該患者の血液 または血漿から所望の病理学的作動体を除去しついで該血液を該患者に戻すこと からなる自己免疫疾患の治療の方法に関するものである。

本発明はまた、体液を所望の成分の除去に特異的な固定化された生物学的製剤を 有する生体特異性ポリマー上に流過し、該成分をポリマーから脱着させることに より体液から特定の成分を採取する養成法（ｒｅｇｌｓｅｎ）に関する。採取さ れた体液成分、たとえばタンパク質、ホルモン類、細胞、ビタミン類および免疫 成分は、のちに他の用途に用いられてもよい。

本発明はさらに、概略的にいって、病理学的作動体である補体を結合する高特異 的活性を有する固定化された反応性生物学的製剤を有する生体特異性ポリマーの 製造方法に関するものである。

また本発明と関連して、機械的支持体上に生体特異性ポリマーを製造しすぐれた 機械的完全性をうる方法もある。

本発明のこれらの目的およびその他の目的は後記詳細な説明および請求の範囲に 開示記載されている。

図面の簡単な説明 第１ａ図はＭＡＧＭＥ／）ＩＥＭＡ／ＭＭＡ　（３０／２０１５０）ターポリマ ー支持体の表面のプロフィルメータースキャン（スキャン長＝１．０００　ミク ロン）を示す。

第１ｂ図ハＧＭＡ／ＮＶＰ／ＨＥＭＡ　（５０／４Ｂ／４）ターポリマー支持体 の表面のプロフィルメータースキャン（スキャン長：１．０００ミクロン）を示 す。

第１ｃ図はポリカーボネート基質の表面のプロフィルメータースキャン（スキャ ン長：　１．０００ミクロン）を表す。

！　２　図ｉｔ　ＭＥＡ／ＨＥＭＡ／ＭＭＡオ、ｋ　ヒＧＭＡハＶＰ／）ＩＥＭ Ａター　ホ！Ｊ　ｖ−支持体の相対的細胞付着特性を比較するヒストグラムを示 す。

詳細な説明 １、生体適合性ポリマー支持体 本発明中に使用される生体適合性ポリマー支持体は、たとえば血漿または全血液 などの体液と接触したとき存寄な作用を起さず、同時に反応性のしがち固定化さ れた生物学的製剤が該ポリマー支持体の表面がら伸張して配列される状態を保持 する性質をもつ物質である。適当な物質はフィルム状またはその他の物理的な形 態に成形することができ、一方間時に該生物学的製剤を当該物質自身および結合 した生物学的製剤の双方に損傷を与えることなく化学的に容易に結合することが できる性質をもつ物質である。適当であると考えられる物質のタイプは当該技術 分野で一般にヒドロゲルとして知られるものでありコポリマーまたはホモポリマ ーのいずれであってもよい。

修飾されたセルロースおよびセルロース誘導体類、とくに酢酸セルロースは本発 明に有用な生体適合性支持体として使用しうろことが知られている。修飾された セルロース誘導体類とは、セルロースポリマーがペンダントとなっている生体適 合性表面基をセルロース基質のポリマーに共有結合で結合して、その生体適合性 をさらに強くした、表面を修飾したものである。このような表面基は公知であっ て、本明細書に記載する必要はないが、本発明の目的に対してはアルブミンが修 飾基としてとくに有用であることが知られている。このような基を付着する方法 は後記のとおりである。

ホモポリマーも本発明の好適な生体適合性ポリマー支持体に使用することができ る。しかし、ホモポリマーとして記載したばあい、軽度に架橋結合したホモポリ マーとしても同定される物質をも包含されるものと解されたい。すなわち、これ らは比較的少量の第２成分をそのモノマーの製造時から本来的に含むがまたは意 図的に添加されて含んでおり、架橋結合が充分確実に形成して、ホモポリマーが 血液のような水性媒体に溶解し去ることを防止する。軽度に架橋結合されるばあ いが多いこのタイプのホモポリマーの例はヒドロキシエチルメタクリレート（Ｈ ＥＭＡ）である。

ヒドロゲルとして好適なポリマーはそのマトリックス中に他の物質を実質的に含 有しない規則性ホモポリマーであるか、または２種またはそれ以上のモノマーが ら製造したコポリマーであってもよい。あるばあいには、種々のコポリマーをも ってコポリマーをこのようなタイプに仕立てることによって生体適合性ポリマー 支持体の材料の所望の性質をさらに強めてもよい。共重合されてもよい好適なモ ノマーの例としては、たとえばヒドロキシエチルメタクリレートおよびグリシジ ルメタクリレートがあげられる。

重合される３種のモノマーを含有するコポリマーのすブクラスをなすターポリマ ーもまた有用である。好適なターポリマーの例としては、グリシジルメタクリレ ート／Ｎ−ビニルピロリドン／ヒドロキシエチルメタクリレ−）　（ＧＭＡ／Ｎ ＶＰ／ＨＥＭＡ）およびメチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル／ヒ ドロキシエチルメタクリレート／メチルメタクリレート（ＭＥＡ／ＨＥＭＡ／Ｍ ＭＡ）があげられる。メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテルはアメ リカン・シアナミド（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｙａｎａｍｉｄ）社より商標名ＭＡ ＧＭＥ”として販売されている。

前記に列記した特定のコポリマーおよびホモポリマーのほかに本発明に好適な種 々のモノマーを含有しまたは含有しないで製造したコポリマーおよびホモポリマ ーを下記のモノマー類を重合して製造してもよい。

アルキルアクリレート類およびアルキルメタクリレート類；ヒドロキシアルキル アクリレート類およびヒドロキシアルキルメタクリレート類、たとえばヒドロキ シエチルアクリレート、ヒドロキシプロピルアクリレート、およびヒドロキシブ チルメタクリレート；エポキシアクリレート類およびエポキシメタクリレート類 、たとえばグリシジルメタクリレートなど；アミノアルキルアクリレート類、ア ミノアルキルメタクリレート類および活性メチレン基含有モノマー、たとえばア セトアセトキシエチルアクリレートおよびメタクリレートなど；Ｎ−ビニル化合 物類、たとえばＮ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルカルバゾール、Ｎ−ビニルア セトアミド、およびＮ−ビニルコハク酸イミドなど；アミノスチレン類；適当な ポリマー前駆体から製造されるべきポリビニルアルコール類およびポリビニルア ミン類；アクリルアミド、メタクリルアミド；および種々の置換アクリルアミド 類およびメタクリルアミド類；たとえばメチルアクリルアミドグリコレートメチ ルエーテル、ビニルピリジン：ビニルスルホネートおよびポリビニルスルフニー ト：ビニレンカルボネート；ビニル酢酸、およびビニルクロトン酸；アリルアミ ンおよびアリルアルコール：ビニルグリシジルエーテルおよびアリルグリシジル エーテルである。前記モノマー類からコポリマーおよび／またはホモポリマーを 製造する方法および手順は公知であり特定の業界では理解されている。これらの パラメーターは本発明に対し臨界的なものではないが、最終的にえられるコポリ マーおよび／またはホモポリマーが、ヒトを含む動物に対して無害でなければな らないという警戒すべき問題が残っている。

これらの物質を本発明に使用されるに適した形態に形成するために用いられる方 法は、臨界的な問題ではない。

現在好んで使われている方法の１つは、ディップコーティング（ｄｉｐ　ｃｏａ ｔｉｎｇ）法であって実施例２．３および４に例示している。

■、生物学的製剤 本発明の文中、生物学的製剤および／または複数の生物学的製剤は生体適合性ポ リマー支持体またはスペーサー（以下に定義する）に共有結合する能力をもち、 一方間時に所望の成分と結合する活性を保持する、化学的化合物と定義すること ができる。さらに、使用される生物学的製剤または複数の生物学的製剤はポリマ ー支持体の表面に共有結合し、ポリマー支持体の多孔性マトリックスを通り抜け うるほど小さくはなく、したがうて支持体材料の内側または内部に化学的に結合 するような大きさであるべきである。この観点において、スペーサーは、所望の 病理学的成分と結合することができる保持している生物学的製剤の反応性部位が 実際上この成分の方に確実に指向させ、すなわち支持体から外方に向うように保 持され支持体上を流れる体液と接触するようにして使用される。もちろん前記の 事実から、所望の病理学的成分と結合する反応性が実際に生物学的製剤または複 数の生物学的製剤を生体適合性ポリマー支持体上に固定したのちも保持されてい ることは明らかである。生物学的製剤として使用される物質の例としては、たと えばアセチルコリン受容体タンパク質、組織適合性抗原（ｈｉｓｔｏｃｏｓｐａ ｔｉｂｌｌｉｔｙ　ａｎｔｉｇｅｎ）、リボ核酸類、基底膜タンパク質、免疫グ ロブリンクラス類およびサブクラス類、骨髄腫タンパク質受容体、補体成分、ミ ニリンタンパク質および種々のホルモン類、ビタミン類およびそれらの受容体成 分ならびに遺伝子工学的につくられたタンパク質（ｇｅｎｅｔｌｃａｌｌｙ　ｅ ｎｇｉｎｅｅｒｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）があげられる。

特定の例としては自己免疫疾患の抗インシュリン性に関連している抗インシニリ ン抗体を除去するべき生体適合性ポリマー支持体にインシユリンを結合したもの 、たとえばリニウマチ様関節炎および癌などの結合組織および増殖性疾患に関連 している免疫複合体を除去するための生体適合性ポリマー支持体に付着（ａｔｔ ａｃｈｉｎｇ　）　している抗ＣＩｑおよび／またはＣｆｆｑならびに遺伝子工 学的につくられた生合成タンパク質などである。

遺伝子工学的につくられたタンパク質に関しては、遺伝子工学的な処理を介して タンパク質性（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｌｏｕｓ）生物学的製剤に望ましい親和力お よび特異性を設計しうる。タンパク質性生物学的製剤の基本的な構造（たとえば アミノ酸配列および／または含りを変化させることにより、本質的な免疫成分に 対してその非特異的な親和力を減じるために、１以上のその活性結合部位を修飾 しうる。この技術では、免疫複合体にはかなり結合するが、本質的にフリーな免 疫グロブリンにはほとんど、または全く結合しない生合成タンパク質を生産する ことができる。たとえばＥＰＯｍ　１０７．５０９号、ＰＯＴ警０８４１００７ ７４号および米国特許第４．６１４．５１３号を参照されたい。先の２つの公報 には、ニス・アウレウス（針ａｕｒｅｕｓ）からタンパク質入、およびその種々 の類似体の生成に関する遺伝子工学技術が開示されている。米国特許は、血液か ら免疫反応物質を除去するための、タンパク質Ａのリガンドの利用を開示してい る。

免疫複合体に対する排他的特異性を達成するために免疫グロブリンモノマーに対 する減じられた親和力を有する遺伝子工学的につくられた生物学的製剤が、免疫 複合体の妨害されない結合を促進するために、本発明にしたがって固定される。

実際、固定された遺伝子工学的につくられた生物学的製剤を有する生体特異性ポ リマーを、複合化されていない本質的な免疫成分の正常のレベルとの干渉を最小 限度に保ちながら体液から免疫複合体を吸着するために利用されうる。

遺伝子工学的につくられた生物学的製剤の別の利点は、単一の特定な付着部位を 、生体適合性支持体上、の固定叫使用する際にタンパク質中に設計しうろことで ある。この付着部位は、タンパク貸玉の付着の影響を最小限にし、それによって 生物的活性を保護し、かつその意図されている目的のために生物学的製剤を適当 に配向するように、分子内に含むことができる。

遺伝子工学的につくられた生物学的製剤を利用するさらに別の利点は、その非反 応アミノ酸セグメントを排除し、それによって免疫毒性の可能性を減じることに より生物学的製剤の分子量を減らすことができることである。

高分子量の分子（＞　ＩＤ、０００Ｍ、Ｖ、）が体液内の不利な抗原の反応を引 出す可能性があることが一般に知られている。

生物学的製剤を生体適合性ポリマー支持体に付着するには一般的に知られている 化学的付着法がいずれも充分利用できるが、この生物学的製剤は特定の自己免疫 疾患に関連している成分のための少なくとも１つの活性部位をなお保持していな ければならない。使用される化学的付着法は一般に３種の付着方法工程に分けら れる。これら３種のルートは１）自然付着、２）末端官能基の化学的活性化、お よび３）カップリング試薬による付着である。生物学的製剤のポリマー支持体表 面への自然共有付着は、ポリマーバックボーン（ｂａｃｋｂｏｎｅ）から伸張し ている化学的反応性基を経て進行する。すなわち、たとえば、ポリマー支持体か ら伸張するアルデヒド基およびエポキシ基などのような反応性基が、使用しつる 水酸基、アミノ基またはチオール基を含有している生物学的製剤を直ちに結合（ ｃｏｕｐｌｅ）する。同様に、たとえばポリマー支持体上のフリーのアルデヒド 基は、アセタール結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を介して水酸基を含有している生物学 的製剤と結合し、イミド結合を介してアミノ基を含有している分子と結合する。

さらにたとえばフリーのオキシム基はアルキルアミン結合、エーテル結合および チオエーテル結合を介してアミン、水酸基およびチオ基をそれぞれ含有している 生物学的製剤と結合する。便宜上、本明細書では該付着および結合（ｃｏａｐｌ 　ｊｎｇｓ）はすべて固定化と定義することにする。これらの反応のより広範囲 にわたる説明は、たとえば「ケミカルーブロセダーズ参フォア−・エンザイム・ イモビライゼーシジン・オン・ポーラス・セルロース伊ビーズ（Ｃｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｆｏｒ　ＥｎｚｙｍｅＩｍｍｏｂｊｌｉｚａｔｊｏ ｎ　ｏｒ　Ｐｏｒｏｕｓ　Ｃｅ１ｌｕｌｏｓｅ　Ｂｅａｄｓ）Ｊ　、チェ２、エ ル・エフ（Ｃｈｅｎ、　Ｌ、　Ｆ、）ら、バイオテクノロジー・アンド・バイオ エンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄＢｉｏｅｎｇ！ｎｅｅ ｒｌｎｇ）、Ｖｏｗ、　ＸＩＸ％１４８３〜１４７３頁（１９７７年）および「 エポキシ・アクチベーテッド・セファロース（Ｅｐｏｘｙ　Ａｃｔｉｖａｔｅｄ 　５ｅｐｈａｒｏｓｅ）Ｊ　ｅＢ、ファルマシアゝファイン・ケミカルズ、アフ ィニテイ・クロマトグラフィ（Ｐｈａｒｍａｃｌａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａ ｌｓ、　ＡｆｆｉｎｉｔｙＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）　、２７−３２頁（ １９７９年）に記載されている。

末端官能基の化学的活性化はポリマー表面の官能基をそれらの末端成分を化学的 に修飾することにより達成してもよい。この方法の例としては末端二ボキシ官能 基（ｔｅｒｒＡｉｎａｌ　ｅｐｏｘｙ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）を過ヨウ素酸で酸 化して、活性アルデヒド基を形成するばあいなどがあげられる。

この方法はさらに、「イモビライゼーション・オン・アミロゲルコシドース・オ ン・ポリ［（グリシジルメタクリレート）コ（エチレンジメタクリレート）］・ キャリヤ・アンド・イッツ・デリバテイブズ（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｌｏ。

ｏｆ　Ａｍｙ〕ｏｇｌｕｃｏｓｌｄｏｓｅ　ｏｎ　Ｐｏ１ｙ［（Ｃｌｙｅｉｄｙ ｌＭｅｔｂａｃｒｙｌａｔｅ）Ｃｏ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ　　　Ｄｌｍｅｔｈａｃ ｒｙｌａｔｅ）コＣａｒｒ１ｅｒ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ） Ｊ　、スペック、エフ（５ｖｅｃ、　Ｆ、）ら、バイオテクノロジー・アンド・ バイオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇ ｉｎｅｅｒｌｎｇ）。

Ｖｏｌ、　ＸＸ　％１３１９〜１３２ｇ頁（１９７８年）に記載されテいル。

生物学的製剤の固定化は、前記のように進行する。たとえば「二ニー・アプロー チズ・ツー・ノンートロンボゲニツク−７テリアルズ（Ｎｅｗ　Ａｐｐｒｏａｃ ｈｅｓ　ｔｏ　Ｎｏｎ−Ｔｈｒｏｓｂｏｇｅｎｉｃ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）　Ｊ 　、ホフマン（）ｌｏｆｆｒＡａｎ）ら、コアギニレーシ３ンーカレント・リサ ーチ・アンド・クリニカル・アブリケーシッンズ（ＣＯａｇｔｌｌａｔｉＯｎ− ＣｕｒｒｅｎｔＲｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃ１ｊｎ１ｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａ ｔｉｏｎｓ　　％アカデミツク・プレス、ニニーヨーク（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ ｒｅｓｓ、　Ｎ、Ｙ、）　（１９７３年）に記載されているように、縮合反応は カルボキシル基のカルボジイミド活性化を経てフリーのカルボキシル基およびア ミン基の間で行なわれてもよい。簡単に述べると生物学的製剤の固定化はポリマ ーまたは生物学的製剤のカルボキシル基のいずれかによるカルボジイミド活　− 性化と、フリーのアミンによる縮合によって安定なペプチド結合を形成すること によフて行なわれる。一般に生物学的製剤の最終的配位によフてアミン含有ポリ マーを使用するか、カルボキシル含有ポリマーを使用するかが定まる。

カップリング試薬による付着はポリマーと生物学的製剤との間の共存結合架橋を 形成する種々のカップリング試薬を使用して行なわれうる。このばあいフリーの 水酸基および／またはアミンを含有するポリマーと生物学的製剤とは、たとえば 臭化シアン、ジイソシアネート類、ジアルデヒド類およびトリクロロ−６−トリ アジンのような試薬を用いて共有結合的に連結させる。本技術に関するさらに詳 細な議論はたとえば前記のチェ２（Ｃｈｅｎ）らの論文に記載されている。

所定のばあいに、生体適合性ポリマー基買上に反応性の生物学的製剤を固定化さ せる好ましい方法は一般的に共存結合で結合しうるポリマー基質および生物学的 製剤の反応性の結合部分および該生物学的製剤上の官能基の分子配置によって定 められる。たとえば、末端に水酸官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）またはアミン官 能基としてもつポリマー基質のばあいには臭化シアンのアルカリ性溶液（１０〜 ２０％Ｗ／Ｖ）で処理することによって活性化する方法が現在好まれている。代 表的な方法では反応混合物を約３０分間室温（２０〜２５℃）に保持する。溶液 のｐ）ｌはアルカリ性物質、たとえばＫＯ）１またはＮａＯＨを添加して約ｌＯ ないし１２の範囲内に保持される。ポリマーは生理食塩水（０，９ｇ％）で充分 洗浄され、微アルカリ性緩衝溶液中で２℃ないし８℃において１２ないし１６時 間溶解した、精製された生物学的製剤の溶液とともにインキユベーシヨンする。

ポリマーは生理食塩水で充分にすすぎ、結合していないまたは非特異的に結合し た生物学的製剤成分が除去される。

生物学的製剤はエーテル、チオエーテルまたはアルキルアミン結合を介してグリ シジル基を含有しているポリマーに固定化される。エポキシ基が活性化されたポ リマー基質は室温において中性の緩衝剤水溶液ですすぎ膨潤させる。微アルカリ 性（ｐ）１８．［ｌより大きい）ホウ酸塩、炭酸塩または燐酸塩の緩衝溶液に溶 解した精製された生物学的製剤は４℃ないし３０℃において１２ないし２０時間 グリシジルポリマー基質とインキユベーシヨンされる。過剰なおよび非特異的に 結合した生物学的製剤はポリマーを生理食塩水、酢酸（０，２ないし１．０モル ）および燐酸塩（ｐｌｌ−７，２±０．２）で緩衝した食塩水ですすぎ、除去す る。アミンおよびカルボキシル基を含有するポリマーマトリックスの活性化は水 溶性カルボジイミドを溶解している微酸性（ｐＨ−４，５ないし８．’５）緩衝 溶液中に溶解した、精製された生物学的製剤で処理して行なわれうる。

生物学的製剤はポリマー、生物学的製剤および反応剤であるカルボジイミドを２ ℃ないし８℃において１２ないし１６時間インキニベーシジンしポリマー基質に 共有結合させる。ポリマーと生物学的製剤包合物は、洗浄液が生物学的製剤およ びカルボジイミド反応剤を含まなくなるまでまず酸性すすぎ液、つぎにアルカリ 性すすぎ液で交互にすすがれる。

ポリマーに固定化された生物学的製剤の特異的結合特性を決定するために、相補 的な生体分子（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｂｉｏｓｏｌｅｃｕｌｅｓ）の生理 学的血清溶液を活性化された生体特異性ポリマーで処理した。生体分子の量を分 光光度的に（’５ｐｅｅｔｒＯｐｈＯ１Ｏ１ｅｔｒｉｅａｌｌｙ）に測”定した 。特定の生体分子の有意な減少が、生物学的に修飾されたポリマー基質に短時間 暴露したのちに起こった。

■、スペーサ一 本発明においては、スペーサーとは生体特異性ポリマー支持体の表面に付着する ことができ、該支持体の表面から伸張するに充分な大きさをもち生物学的製剤お よび／または複数の生物学的製剤を固定化することができる分子または化合物で あると定義される。スペーサーは生物学的製剤の活性部位が支持体から外方に向 って保持され体液と一層効果的に接触することができるようにする。

もちろん、前記の記載から、所望の疾患複合体と結合する反応性が事実上、生物 学的製剤または複数の生物学的製剤をスペーサー上に固定化したのちも保持され ており、したがって生体適合性ポリマー支持体上にも保持されることは明白であ る。

スペーサーは通常分子の両端に位置する少なくとも２つの反応性官能基を有する 有機分子からつくられる。このような基はスペーサーをポリマー支持体および生 物学的製剤と結合することができる付着用媒体の役割を果す。

スペーサー上の反応性官能基は同一のものでも異種のものでも良いが、これらは 共有結合を形成するポリマー支持体の表面中の官能基および生物学的製剤から伸 張している官能基と反応するものでなければならない。このようなカップリング 反応を行なうには存意の公知の反応で充分である。たとえば、生物学的製剤をポ リマー支持体上に直接付着させるための前記に概説した結合経路が使用されても よい。

スペーサー上の官能基が、生物学的製剤上のまたはポリマー支持体上の官能基と 反応しないばあい、生物学的製剤またはポリマー支持体に共有付着を達成するた めに適した反応性官能基を有するヘテロ２官能性の架橋剤（ｈｅｔｅｒｏｂＨ’ ｕｎｃｔ１ｏｎａｌ　ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）を用いてもよい こともまた、理解されるべきである。本発明において有用なヘテロ２官能性の薬 剤の例としては以下の、鳳−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイ ミドエステル、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサ ン−１−カルボキシレート、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル） ブチレート、鳳−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ ル、スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１ −カルボキシレート、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル ）ブチレートである。２つの官能基を連結する化合物部分が非反応性であるばあ いに、一方の末端上にマレイミド部位と、もう一方の末端上にＮ−ヒドロキシス フシイミドエステルを有する化合物もまた用いてもよい。マレイミド代替物（ａ ｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ）％たとえば、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセ チル）アミノベンゾエート、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）ア ミノベンゾエートおよびＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）ブロ ブリオネートなどの活性ハロゲン類およびピリジルジスルフィドもまた利用して もよい。さらにまた、一方の末端上にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル部 位およびもう一方の末端上に活性ハロゲンまたはピリジルジスルフィドのいずれ かをもつ化合物が、２つの官能基を連結する化合物の部分が非反応性でさえあれ ば利用してもよい。ここで定義したように、スペーサーは、ヘテロ２官能性架橋 剤を含んでも、含まなくてもよい。スペーサーがないばあいに、ポリマー支持体 と生物学的製剤との直接共有結合（ｌｉｎｋａｇｅ）を達成するためにヘテロ２ 官能性架橋剤が利用されてもよいこともまた、理解されるべきである。

本発明に使用してもよいスペーサーの好適な例としては、反応性官能基が同一の ものであるばあいにはたとえば、炭素数２〜１２のジアミン１ｉｉ（たとえば、 １．６−ジアミツヘキサン）、ジビニルスルホン、グルタルアルデヒド、１．４ −シクロヘキサン−ジカルボン酸、エチレンジアミン四酢酸、トリエチレングリ コール、１．４−ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびメチレン−ｐ−フ ェニルジイソシアネートがあげられる。反応性官能基が同一でないスペーサーの 例としては、たとえば、６−アミノカプロン酸、ｐ−ニトロベンゾイルクロリド 、１．２−エポキシ−３−（ｐ−二トロフェノキシ）プロパン、アミノプロピル トリエトキシ−シランおよびホモシスティンチオラクトンがあげられる。

ポリペプチド類およびタンパク質類もまた本発明のスペーサーとして使用されて もよい。たとえば低親和性タンパク質であるアルブミンはスペーサーとして使用 され好結果をえている。さらにアルブミンおよびその他の天然タンパク質はポリ マー支持体の生体適合性をさらに強化する効果がある。

最後に、ある種の物質はスペーサーと生体適合性支持体とを結合するのに用いら れる反応において同時にスペーサーおよび反応の活性化剤の作用をすると考えら れている。このような化合物の例としては、たとえば、グルタルアルデヒドおよ び１．４−ブタンジオールグリシジルエーテルがあげられる。

■、支持体部材（ＳＵＰＰＯＲＴ　ＭＥＭＢＥＲ）好適とされている生体適合性 ポリマー支持体の大部分は、全部ではないが、機械的安定性が極めて小さい。実 際これらの物質の大部分はたとえばポリブロビレンシートのような高機械的安定 性ををする物質とは異ってゲルまたはゲル様である。したがって本発明を利用す る大部分の実施態様においては機械的に安定な支持体部材が必要である。この支 持体部材によって大きい表面積で、免疫疾患に関連する成分の除去を迅速に、医 学的にかつ商業的に許容される程度に行なうために使用できるようになる。支持 体部材は機械的に安定であるばかりでなく、廉価でなければならないし、また、 患者の血液を本発明により処理する装置系内での使用に適するように滅菌しつる ものでなければならない。本発明に支持体部材として好適な材料の例としては、 たとえば２戸紙、ポリエステルファイバー、ポリカーボネート類、網状にしたポ リウレタン類、ノリル■（ＮＯＲＹＬ■）、ザ・ゼネラル・エレクトリック会カ ンパニー（ｔｈｅ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｅｌｅｃｔｒｉｃ　Ｃｏｍｐａｎｙ）製の ポリフェニレンオキシドポリマー、セネラーゼ・コーボレーシ５ン（Ｃｅｌａｎ ｅｓｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により商品名セルガード（ＣＥＬＧＡＲＤ■ ）として販売される微孔を有するポリプロピレンのような微孔ををするポリマー 類および綿布である。

化学的に付着させた生物学的製剤を有する生体適合性ポリマー支持体を付着させ る方法には多くの方法が用いられるであろう。すなわち、たとえば回転塗布法、 水平成形法、真空含浸法、ディップコーティング法、ディップコーティング法を 行ないあとで架橋する方法、カーテンコーティング法および溶液重合法などの方 法を用いればよい。これらの方法の具体例は後記の実施例中に記載する。

概略的に言うと、本発明の治療方法は患者の血液または血漿を固定化された反応 性生物学的製剤を有する生体特異性ポリマーに暴露し、これによって患者の血液 または血漿から特定の病理学的作動体を除去し、ついで該血液を患者に戻すこと からなる自己免疫その他の疾患を治療する方法である。この治療処理には血液分 離技術を使用してもよいし使用しなくてもよい。すなわちこの処置法は透析処理 法と同様の方法で実施するように考えられており、全血液を分離する必要がなく 、正常な血液成分がもし物理的損傷を与えられたとしてもきわめて小さいもので ある点がその長所である。

本発明および本発明の方法を血漿の処理に使用することももちろん可能である。

血漿は全血液から現在公知のかつ実際的に使用されているいかなる方法によって えられてもよい。すなわち、たとえば血漿は公知の方法で患者の血液から分離せ られ、本発明により処理され、次に他の血液成分と再合併して、現在知られてい る方法によって患者に戻される。さらに公知の医学的治療法に使用されている血 漿は該血漿が、血液銀行などからの患者が必要とする血漿を患者に投与する前に 処理するために本発明を利用してもよい。血液銀行から供給される全血液は本発 明の方法によって処理され、本発明Φ恩恵を受けることになるであろう。

本発明は病理学的作動体の除去を行なうべき他の「体液」に対しても使用するこ とができるものと考えられる。

前記の本発明の利点ならびに当業者には明らかに認識されるその他の利点のため に多くの種類の疾患の治療に本発明を使用することが考えられる。概括的に言っ て６つの群の疾患が有利に治療されるであろう。これらの６つの疾患の範躊は免 疫成分の異常、過剰の薬剤、毒素との接触１身体の「物質（”５ｕｂｓｔａｎｃ ｅｓ’　）　Ｊの不均衡、感染、および腫瘍状態である。多くの疾患が現在血漿 搬出法や細胞搬出法で治療されており、その求めているところは特定の物質の除 去にある。

本発明および本発明の方法は現在血漿搬出法および細胞搬出法によって治療され ているこれらの疾患に適用されるであろう。

治療されうる免疫複合疾患は、たとえば抗体、抗原、抗体−抗原、抗原−抗原お よび抗体−抗体間の相互作用、細胞表面の複合体、細胞形質複合体などにかがわ るいずれかの病状である。

治療しうる過剰薬による障害は、たとえば、鉄、ジゴキシン、アスピリン、ティ レノール■（ＴＹＬＥＮＯＬ■）、アセトアミノフェン、メトトレキセートおよ びその他の３環式化合物の過剰投与である。

本発明に適している毒物および毒素は、たとえば鉛、アルミニウム、キノコ類（ アナトキシン）および有機ホスフェート類である。

身体の「物質」はこれが過剰に存在するばあいには疾患を起すことがある。本発 明を用いて排出しうるこれらの疾患物質の例としては、たとえばコレステロール 、尿酸、免疫グロブリン類、錐状赤血球、尿の毒素物質、ビリルビン、ポルフィ リン、コルチゾールおよびプロスタグランディン類である。

治療しうる感染の原因となるものは、たとえばサイトメガロウィルスのようなウ ィルス性疾患；マラリャ、トリプトシーマ病およびレーシ二マニアのような原生 動物による疾患；連鎖状球菌などの細菌感染；自縛のような菌類による感染；胸 膜−肺炎一様疾患の生物のようなマイコプラズマ類；チフスおよび斑点熱などの リケッチアによる疾患；梅毒などのスピロヘータ類およびオウム病すンパー肉芽 腫−トラコーマ症群におけるクラミジア−薬剤（ｃｈｌａｍｙｄｊａ−ａｇｅｎ ｔｓ）である。

本発明で治療しうる腫瘍疾患は、たとえば、リンパ腫、肉腫、癌および白血病で ある。これらは細胞系列、阻害剤、疾患の開始剤およびそれらの組合せの特定の 除去により除去してもよい。

さらに本発明を用いて治療することができると考えられる疾患の例は次の通りで ある。

感染病、たとえば；後連鎖球菌性糸球体腎炎、亜急性細菌性心内膜炎、二次梅毒 、肺炎球菌性敗血症、癩、脳室短絡感染症、感染性の単核細胞症、チフス性の熱 、亜急性硬化性脳炎、ランドリーギランーバレ症候群、Ｂ型肝炎感染症、四日熱 マラリャ、住血吸虫症、およびトリプトシーマ病など。

腫瘍、たとえば；ヘパドーム、リンパ腫、ホジキンス病、急性白血病、副腎腫、 結腸癌、気管支癌、およびバーケラトリンパ腫など。

結合組織の疾患、たとえば；結節状動脈周囲炎、慢性糸球体腎炎、急性または亜 急性甲状腺炎、塩化ビニル中毒、慢性肝臓疾患、混合寒性グロブリン血症、ベル ゲル病またはＩｇＡ腎臓病、急進行性糸球体腎炎、および錐状赤血球貧血など。

血液学的疾患、たとえば；トロンビン血小板減少症性紫斑病、自己免疫溶血性貧 血、自然発生的血小板減少症紫斑病、自然発生的好中球減少症、低温赤血球凝集 素疾患、発作性基柱へそグロビン尿症、循環性抗凝血因子（Ｃｌｒｃｕｌａｔｉ ｎｇ　ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔｓ）鴬後天性血友病、白血病−リンパ腫、胎 児赤芽球症、悪性貧血、およびＲｈ疾患など。

神経疾患、たとえば；急性脱髄脳炎、多発性硬化症、ランドリー麻痺、ギランー バレ症候群、神経周囲炎、および重症筋無力症など。

コラーゲン疾患、たとえば；レーノ−（Ｒａｙｎａｕｄ’ｓ）病、紅斑性側り結 節性多発動脈炎、鷺皮症、皮膚筋炎、シｅ−グレン症候群、変形関節炎、リニー マチ熱、および結節性紅斑など。

内分泌疾患、たとえば；クッレンジ症候群およびクッシング病、甲状腺炎、甲状 腺中毒症、アジラン病、および精液形成欠如症。

胃腸疾患、たとえば−門脈硬変、急性肝炎、慢性活性肝炎、類狼癒肝炎、胆汁黄 色症、潰瘍性大腸炎、局所性回腸炎、および膵炎など。

種々の疾患、たとえば：高コレステロール血症、糸球体腎炎、基症膜疾患、精神 状態−麻酔、後大動脈弁補綴−溶血性貧血、剥脱性皮膚炎、イド反応、乾癖、ベ ーチェット症候群、癌、亜急性細菌性心内膜症、高血圧、喘息、遺伝性血管神経 性浮腫、髄膜炎菌血症、クローン病、肝臓性脳疾患およびシーノー病など。

さらに細胞核抗原、細胞質抗原、細胞表面抗原、およびそのサブクラスに対する 抗体を特徴とする疾患を本発明によって治療してもよい。その好適な例としては 天然のＤＮＡ　　（二本鎖）または一本鎖および二本鎖ＤＮＡに対する抗体、Ｓ Ｓ　ＤＮＡに対する抗体、デオキシリボ核酸タンパク質に対する抗体、ヒストン に対する抗体、Ｓ龜に対する抗体、ＲＮＰに対する抗体、Ｓｃ　１−１−　窒皮 症に対する抗体、５Ｓ−Ａ−リューグレン症候群に対する抗体、５ｉｃｃａ複合 体、ＲＡＰ−慢性関節リューマチに対する抗体、リューグレン症候群、ＰＨ−１ −多筋炎一皮膚筋炎に対する抗体、細胞核性全身系硬化症に対する抗体、および リューグレン症候群があげられる。

また、特異的自己免疫疾患に関係する抗体、たとえば平滑筋−慢性肝炎に対する 抗体、アセチルコリン受容体−重症筋無力症に対する抗体、皮膚−表皮接合部位 における基底膜−類天庖癒に対する抗体、ムコ多糖類タンパク質複合体または細 胞内接合物質−天庖癒に対する抗体、免疫グロブリン−慢性関節りニーマチに対 する抗体、糸球体基底膜−系球体腎炎に対する抗体、グツドパスチャ自己免疫性 溶血性貧血に対する抗体、甲状腺−橋本病に対する抗体、内因子−悪性貧血に対 する抗体、血小板−特発性血小板減少症紫斑症に対する抗体、異常免疫、ミトコ ンドリア−原発性胆汁性肝硬変に対する抗体、唾液管細胞−シニーグレン症候群 に対する抗体、副腎−特発性副腎萎縮に対する抗体、甲状腺小体−グレーラス病 に対する抗体、チログロプリンーアジソン病に対する抗体、および島細胞−糖尿 病に対する抗体など。

バラプロティン血症、たとえば多発性骨髄腫、マクログロブリン血症、基柱グロ ブリン血症、およびＬ鎖疾患（Ｌｉｇｈｔ　ｃｈａｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅ）、高 り貧血症、たとえば原発性胆汁性肝硬変、および家族性高コレステロール血症、 内分泌障害、たとえば；グレーラス病および糖尿病など。

異常免疫、たとえば−新生児溶血性疾患および腎臓の同種移植拒絶反応など。

また、本発明を用いて治療することが適当なもの、たとえば、輸血後の紫斑なら びにグツドパスチャー病症候群、重症性筋無力症、尋常性天痘癒、血液学的疾患 、特発性（自己免疫性）血小板減少症紫斑症、自己免疫性溶血性貧血、第■因子 に対するインヒビターおよび多発性神経根病／ギランーバレ症候群のような自己 抗体疾患。

全身系狼癒紅斑、結節性多発動脈炎、皮膚脈管炎、りニーマチ様関節炎、糸球体 腎炎、および皮膚筋炎などの免疫複合体疾患も本発明の方法で治療されてもよい 。

どれか１つの特定の説に賛成するわけではないが、信頼性がある自己免疫病理学 の研究の進歩の結果によれば、病理学的な段階はフリーの抗原のチャレンジによ って開始され抗体の生成、および複合化が続いて起り最後に生成した複合体の過 剰の抗体および補体の固定が起るとされている。したがって生体特異性ポリマー の処方を適当に選択し適当な効能をうるためには、自己免疫作動体の支配的な形 態を決定するために予備的な診断手順が必要である。リューマチ様疾患の治療に 際して本方法の詳細実施例が下記に示されている。簡単に述べるとりニーマチ様 疾患の特徴は、ａ）フリーのＲＦ抗原（非典型的１ｇ）（リューマチ状態）、ｂ ）フリーのＲＦ−抗体生成および１１１’複合化、および最後のＣ）過剰の抗体 および補体で活性化したＲＦ複合体の固定が起ることである。このようにリュー マチ様疾患の治療はモノクローナルリニーマチ様因子（ｓｏｎｏｃｌｏｎａｌ　 ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ｆａｃｔｏｒ）（ｓ−ＲＰ）抗体によって異はｍ−ＲＦ 活性化生体特異性ポリマーによって攻撃性抗原を除去しこれによつて内因性（ｅ ｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）ＲＦ　（ｅ−ＲＦ）抗体の生成を防止することによって最 も良好な結果かえられるであろう。ｅ−ＲＰの診断学的証明結果から■−ＲＦお よび凝集したガンマ−グロブリン型活性生物学的製剤（ＲＰ−抗原）の両者を有 する生体特異性ポリマーが有効に使用されることが示されるであろう。また、そ れぞれ活性生物学的製剤の１つの型を存する生体特異性ポリマーの２種を順次に 使用することもできる。この■−ＲＦおよび凝集ガンマ−グロブリンの組合せを 用いるといずれのばあいにおいても攻撃性抗原も抗体分子も共に吸着されて疾患 の進行を抑制することができるであろう。ＲＦ抗原−抗体複合物が有意な濃度で 検出されるばあいにはＣ＃ｑおよび／またはコラーゲン作動体分子を含有する生 体特異性ポリマーが存在することが示される。最後に、疾患の過程が生成した免 疫複合体の補体の固定される段階まで進行したばあいには、効果がある生体特異 性ポリマーは、たとえば、抗Ｃ＃Ｑ、抗Ｃｓ、または抗０４などの１種またはそ れ以上の抗補体抗体を含有するであろう。また、１種以上の生物学的製剤が望ま れるばあいには、これらの生物学的製剤は単一の生体適合性支持体上に固定化し てもよいし、またはそれぞれを別々の支持体上に存在させ血液または血漿の流れ に対して直列的に連結してもよい。

前記のごとく、効果的な疾患の治療には免疫応答の動力学および段階を完全に定 めることによって本発明の有効な利用を行なうことができる。

現在、血漿搬出法（ｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ）および細胞質搬出法（ｃｙ ｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ）は血液から有毒物質または細胞を除去することによる疾 患の治療法となっている。特定の物質の除去によって好ましい結果かえられるば あいには血漿搬出法および／または細胞質搬出法によって治療される疾患はすべ て本発明による製品および方法によって有利に治療することができると考えられ る。

さらに具体的に述べると、全血液の治療方法として現在考えられている方法は次 の通りである。

ａ）血管アクセスを装着し、これによってｂ）約３０ｍ１／分ないし約２００ｍ １／分の血液を流し、Ｃ）血液に抗凝固剤を加え、 ｄ）ポンプ手段を装着し、 ｅ）血液を本発明の物質と接触させつつ流過させ、ｒ）使用した抗凝血剤の種類 のいかんによって、該処理された血液に対する抗凝血作用を中和することを必要 とするか、またはこれを望むばあいには追加的薬剤添加を行ない、 ｇ）処理した血液を患者に戻す。

前記の方法の実施のために考えられている所要時間は現在約２時間ないし約４時 間である。もちろん状況のいかんによってこの時間は短縮または延長することが ありうる。

血漿の処理法として現在考えられている治療法は下記の通りである。

ａ）血管アクセスを装着し、これによってｂ）約３０ｍ１／分ないし約２００ｍ １／分の割合で血液を流し、Ｃ）血液に抗凝固剤を添加し、 ｄ）ポンプ手段を設け、 ｅ）血漿を形成した血液成分から分離する手段を設け、ｆ）血漿を本発明の物質 と接触させつつ流過させ、ｇ）塞栓、細菌および／または菌類をすべて除去する ために０．２　ミクロンの濾過器を通し、ｈ）処理した血漿と形成した血液成分 とを再び合併し、１）使用した抗凝血剤の種類のいかんによって、該処理血液に 対する抗凝血作用を中和することが必要または望まれるばあいには追加的薬剤の 添加を行ない、ｊ）処理した血液を患者に戻す。

血管アクセスは医学技術上公知の技術および手段で行なわれればよい。すなわち 、たとえば静脈または動脈に大口径のカニニーラを内在させる。適当な静脈およ び動脈は前腕前部静脈、鎖骨下静脈、および上腕または撓骨動脈である。動脈の 静脈側路または痩孔（ＡＶ　５ｈｕｎｔ）　（房室側路）もまた使用される。こ のばあいには心臓がポンプ手段である。もしＡＶ　５ｈｕｎｔ　（房室側路）ま たは痩孔を使用しないばあいには、血管アクセス中の好ましいポンプ手段は約３ ０ｍ１／分ないし約２００ｍ１／分の流量を出すことができるローラ一式嬬動ポ ンプである。

本発明の方法に好適に使用される抗凝血剤は、たとえば酸性クエン酸デキストロ ース（全血液毎８　ｍｌに対し約１ｍ１）、ヘパリン、ヘパリン／酸性クエン酸 デキストロース混合物（たとえばＩＮ、中酸性クエン酸デキストロース１２５ｍ １あたりヘパリン１２５０１Ｕ）　、およびプロスタグランジンである。ヘパリ ンおよびプロスタグランジンのような抗凝血剤を使用するばあいには該血液また は血漿を患者に戻す前に処理した血液または血漿に中和作用を存する薬品の添加 を行なっておくべきであると一般的に理解されている。

さらに、血漿の処理については、形成された血液成分を除くための公知の方法の すべてを使用することができると考えられている。血漿を、形成された血液成分 から分離する方法の好適な例は血漿運搬法、細胞の遠心分離法および血漿袋中へ の細胞の沈降法である。連続的分離および間欠約分Ｍ（バッチ法）がいずれも可 能であるばあいには前記の分離法は本発明およびその使用とは関係がない。

最後に述べたことは、本発明の形式が一般的に言って限定的なものでないという ことである。すなわち本発明はシート、ホローファイバー、円筒形ファイバー、 綱状構造、円筒形もしくは網状の溝、球数玉状のものまたはそれらの組合せの形 態の生物学的製剤を含宵している生体適合性支持体を利用するものである。流動 床を利用することもまたいくつかのばあいにおいて有利なことである。

実施例１ 本実施例は生体適合性ポリマー支持体の成形法の１つおよび生物学的製剤を直接 ポリマー支持体に付着する方法を示す。本実施例はまた生物学的製剤と関連する 機械的支持体をもたない系の使用を述べる。

インシユリンで活性化されたポリヒドロキシエチルメタクリレート（ｐ−ＨＥＭ Ａ）を使用する抗インシニリン抗体の吸着 Ａ、ポリマーの成形　２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ポリサイエンシー ズ・インク（ＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓＩｎｃ、）　　：ツーリントン。ビーニ ー（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、　ＰＡ））１５．０ｇ、エチレングリコール（フッ シャー・サイエンティフック（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔ１ｆｉｃ）　、ビッ ッパーグ、ピーニー（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、　ＰＡ））１５．０ｇ　、亜硫酸水 素ナトリウム（フッシャー（Ｆｌｓｈｅｒ））　０．０８ｇおよび過硫酸アンモ ニウム（フッシャー　（Ｆｉｓｈｅｒ））　０．０３６ｇを混合してモノマー溶 液を製造した。溶液を室温で１５分間かく拌した。４７′Ｘ　４／１の窓のガス ケットに成形するように切断したポリエチレン製スペーサー（厚さ１０ミル）の 中心部のガラス板（長さ　５″Ｘ幅５″×厚さ　３７８″）上に溶液的５ｍｌを 載せた。

ガスケットおよび溶液の上に第２のガラス板を載せその場所にクランプし、組立 てたものの全体を８０”Ｃにおいて一夜インキニベーシジンした。クランプを除 去しガラス板を僅かに押し上げて離し少なくとも２４時間脱イオン水の浴中に移 した。ガラス板から膨潤したポリマー支持体を注意深く除去し新しい脱イオン水 （５００ｍｌ／日）中に少なくとも３日間すすいで水和（ｒｉｎｓｅｄ−ｈｙｄ ｒａｔｅｄ）　した。

Ｂ、ポリマーの活性化　ポリマーのシートからディスク（直径５　ｍｍ）を切り 取って活性化用および分析用とした。臭化シアン（イーストマン・コダック・コ （Ｅａｓｔ＋ｅａｎＫｏｄａｋ　Ｃｏ、）　、ロー／ケスター、二ニーヨーク（ Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ。

ＮＹ））１０〜２０グラム％溶液を、ＢｒＣＮ結晶の微粉１．Ｈｇを１０ｍ１の ０．２　Ｍ　Ｎａ２ＣＯｘ　（ｐＨ１１，１）に４℃において連続的にかく拌し ながら溶解して製造した。溶液のｐＨを５Ｎ　Ｎａ０）ｌを滴下して加え、結晶 が溶解しｐＨが安定化するまで滴下して１１以上に保持した。小さい篩上に４枚 のディスクを載せ０．１Ｎ　ＩＩＣｊ！約５ｍｌ約５ナｌ、臭化シアン溶液中に おいて１５分間インキニベーシ膠ンした。ディスクはり、ｌＮＢＣｊＪＳｍｌづ つで少なくともさらに２回すすぎ、５．０ｍｌの１）ｉ　ＮａＯＨを加えてｐＨ を８．７に調節されているり−１０［）レギユラー　インチン■（ＩＬＥＴＩＮ ■）インシュリン注射溶液（エリイ・リリイ（Ｅｌｉ　Ｌｉ１ｌｙ）　、インデ ィアナポリス、インド（１ｎｄ１ａｎａｐｏ１１ｓ、　Ｉｎｄ、））中において 一夜インキニベーシシンした。ディスクを０．５　Ｍ　ＮａＣｇ、　０．ＩＭＮ ａｚＣＯｓ溶液５ｍｌ、燐酸塩（０，０５Ｍ）で緩衝した生理食塩（０，９グラ ム％）溶液（ｐｎ−７，４）の一部分５　ｍｌで３回すすいだ。

−争イングランド・ヌクレアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）、 ボストン、エムニー（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ））　５６０１）ｇ　（ピコグラム） と標識されていないブタインシュリン（キャンプリッジ−ヌクレアー（Ｃａｍｂ ｒｉｄｇｅ　Ｎｕｃｌｅａｒ）　、ビレリカ、エムオ（Ｂ１１１ｅｒｉｃａ、Ｍ Ａ））の一系列の希釈物とをｐ−ＨＥＭＡディスクと、モルモットの抗ブタイン シニリン抗体にニー・イングランド・ヌクレアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎ ｕｃｌｅａｒ））　２８０ｐｇを１グラム％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）　 （シグマ・ケミカル・コ（Ｓｉｇｓａ　Ｃｈｅｇ＋１ｃａｌ　Ｃｏ、）、セント ルイス、エムオー（Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））を含有している０、０５Ｍ燐酸 塩で緩衝した生理食塩水（ＰＢＳ）　（ｐｌｌ）、４）　０．５　ｍｌ中で室温 で２時間インキュベージランしてダブル抗体競合結合ラジオイムノアッセイを行 なった。各試験溶液からｐ−ＨＥ）４Ａのディスクを取り出した。ヤギの抗モル モットガンマーグロブリン０．１ｍｌづつを各テストチニーブに加えた。試験溶 液を混合してさらに２時間室温でインキユベーションした。

各チニーブに低温（２〜４℃）の燐酸塩で緩衝した生理食塩水（ｐ）Ｉ　７．４ ）各１．０ｍｌを加え、各試験溶液を混合して７５００Ｇで４℃において１５分 間遠心分離を行ない、上澄液を２０ｍ１のシンチレーシ■ンバイアル中にデカン トした。

上澄液は５．０ｍｌのアクアソール（Ａｑｕａｓｏｌ）液体シンチレーシ１ン用 液（二ニー・イングランド・ヌクレアー□ｌｅｖＥｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａ ｒ））でゲル化させ、インカップ３００カウンター＜１ｓｏｃａｐ　Ｚｏｏ　Ｃ ｏｕｎｔｅｒ）　（ジアール・アナリテ４−／り・インク（Ｓｅａｒｌｅ　Ａｎ ａｌｙｔｉｃ　Ｉｎｃ、）、デスプラインズ、アイエル（Ｄｅｓｐｌａｌｎｅｓ 、ＩＬ））において４分間カウントした。

インシュリンで飽理されたディスクは溶液からｌｌｌｐｇ　。

あるいは表面積ＩＣ−あたり２８３９ｇの抗インシュリン抗体を吸着した。

実施例２ 本実施例は支持されていない生体特異性ポリマーの製法を示す。本実施例はまた インシュリン抗体の除去およびインシュリンで活性化したポリヒドロキシエチル メタクリレ−）　（ｐ−ＨＥＭＡ）ポリマーを使用する抗インシュリン抗体類を 吸着するために使用される生体適合性ポリマー支持体にインシュリンを付着させ るスペーサーとして用いられる（炭素六員環の）６−アミノカプロン酸の使用法 を記載している。

Ａ１重合物の成形　２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ポリサイエンシーズ ・インク（Ｐｏｌｙｓｃｌｅｎｃｅｓ　Ｉｎｃ、）、ワーリントン・ピーニー（ Ｗａｒｒｌｎｇｔｏｎ、ＰＡ））１５．０ｇ　％　ｙ−チレングリコール（フィ ッシャー争すイニンティフック（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔ１ｆ１ｃ）　、ピ ッツバーグ、ビーニー（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ））１５．０ｇ、亜硫酸水素 ナトリウＡ　（７−／　シ＋−（Ｆｌｓｈｅｒ））　０．０８ｇおよび過硫酸ア ンモニウム（フッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ））０．０３６ｇを混合してモノマー溶 液を製造した。溶液を室温において１５分間かく拌した。溶液的５ｍｌを４１４ 　ｘ　４＃の窓のガスケットを形成するように切断したポリエチレン製スペーサ ーのガラス板（長さ５″ｘ幅５″ｘ厚さ　３／８”）の中心にのせた。第２のガ ラス板をガスケットおよび溶液上に置きその場でクランプし、この組立品全体を ６０℃で一夜インキニベーシ四ンした。クランプを除去してガラス板を僅かに持 ち上げて離し脱イオン水浴中に移して少なくとも２４時間保持した。ガラス板か ら膨潤したポリマーを注意深く除去し新しく取りかえた脱イオン水（５００ｍｌ 　７日）中で少なくとも３日間すすぎ洗いして水和した。

Ｂ、ポリマーの活性化　先に実施例１に記載したようにポリマーディスクを製造 した。ＢｒＣ）ｉの微粉砕した結晶１．８９ｇ（イーストマン・コダック・コ（ Ｅａｓｔｍａｎ　ＫｏｄａｋＣｏ、）、ロチニスター、ニニーヨーク（Ｒｏｃｈ ｅｓｔｅｒ、ＮＹ））を０．２Ｍ　Ｎａ２ＣＯｓ　（ｐＨ１１，１）１０ｍｌ中 に４℃において連続的にかく拌しながら溶解してｌｏ〜２０グラム％の臭化シア ンの溶液を製造した。結晶が溶解し、ＰＲが安定化するまで５ＮＮａＯＨを滴下 して加え溶液のｐＨを１１以上に保持した。４枚のディスクを小さい連中に置き 約５ｍｌの０．１Ｎ　ＨＣｌ）ですすぎ、臭化シアン溶液中で１５分間インキニ ベーシ１ンした。ディスクを０．ＩＮ　ＨＣＩ　５　ｍｌづつで少なくともさら に２回すすいで、０．ＩＭ　Ｎａ２ＣＯｊ、　　０．５Ｍ　ＮａＣｌで緩衝した ｐｎ　８．８の溶液中で製造した６−アミノカプロン酸（シグマ・ケミカル・コ （Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、））のｌＯグラム％（Ｖ／Ｖ）溶液１ ０ｍ１中で一夜インキニベーシーンした。ポリマーディスクを０．ＩＭ　Ｎａ２ ＣＯｓ、０．５Ｍ　ＮａＣ＃緩衝液緩衝液５燐ｌ塩（０，０５Ｍ）で緩衝した（ ｐＨ−７，４）生理食塩（０，９グラム％）溶液５ｍｌづつで３回すすいだ。す すぎ液からディスクを取り出し０．１Ｍの（２［Ｎ−モルホリノ］−二タンスル ホン酸）　（ＭＥＳ）中で製造したｌ−シクロへキサルー３−（２−モルホリノ エチル）カルボジイミド（シグマ拳ケミカルゆコ（Ｓｌｇｓａ　Ｃｈｅｍｌｃａ ｌ　Ｃｏ、））の１０％（Ｗ／Ｖ）溶液１０ｍ１中で室温で３０分間インキニベ ーシジンして活性化し、各ディスクを低温（４℃）の燐酸塩で緩衝した食塩溶液 ５ｍｌ中ですすいだ。２つのディスクをυ−１００のレギュラーイレチン（ＩＬ ＥＴＩＮ）インシュリン注射液またはブタインシニリンレギニラーイレチン溶液 （エリイ・リリイ（Ｅｌｉ　Ｌｉ１ｌｙ）　、インディアナポリス、アイエン（ Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ））　５．０ｍｌ中で４℃で一夜インキニペー シ璽ンした。ポリマーディスクをタンパク質溶液から取り出し燐酸塩で緩衝した 食塩溶液５ｍｌ中で３回すすいだ。

・イングランド・ヌクレアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）、ボ ストン、エムニー（Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ））　５６０ピコグラムおよび標識され ていないブタインシュリン（キャンプリッジ・ヌクレアー（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ 　Ｎｕｃｌｅａｒ）　、ビレリカ、エムニー（Ｂｉｌｌｅｒｌｃａ、　ＨＡ）） の−県側の希釈品またはｐ−ＨＥＭＡポリマーディスクをモルモットの抗ブタイ ンシニリン抗体（二ニー・イングランド中ヌクレアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ 　Ｎｕｃｌｅａｒ））２８０９ｇを用いて１グラム％のウシ血清アルブミン（シ グマ・ケミカル・コ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）、セントルイス 、エムオー（Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））を含有している燐酸塩（０，０５Ｍ） で緩衝した（ｐ）１−７．４）食塩水（０，９グラム％）０．５ｍｌ中で室温で ２時間インキニベーシリンしてダブル抗体競合結合ラジオイムノアッセイを行な った。ｐ−ＨＥＭＡのディスクを各試験溶液から取出した。各テストチューブに ヤギ抗モルモットガンマーグロブリンを０．１　ｍｌづつ加えた。試験溶液を混 合し室温でさらに２時間インキニベーシヨンした。

各チューブに低温（２〜４℃）の燐酸塩で緩衝した食塩水（ｐＨ７，４）を１． Ｏｍｌづつ加えた。各試験溶液を混合し７５００Ｇで４℃において１５分間遠心 分離し、上澄液を２０ｍ１のシンチレーション用バイアルにデカントした。上澄 液を５．Ｏｍｌまでのアクアソール液体シンチレーション用液（二ニー・イング ランド・ヌクレアー（Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ））でゲル化し４ ．０分間イソキャブ３００カウンタ（ｌｓｏｃａｐ　３００　Ｃｏｕｎｔｅｒ） 　（シャール・アナリティク・インク（Ｓｅａｒｌｅ　Ａｎａｌｙｔｌｃ　Ｉｎ ｃ、）、デスプラインズ、アイエル（Ｄｅｓｐｌａｉｎｅｓ、　ＩＬ））中でカ ウントした。インシュリンで処置されたディスクには溶液から抗インシュリン抗 体２７１ｐｇ−すなわち表面積１ｃ−あたり６９０ｐｇが吸着された。

実施例３ 本実施例は回転成形法によって機械的支持体を有するもの、有しないものの両方 の生体適合性ポリマτを成形する方法を記載する。本実施例はまた生物学的製剤 を生体適合性ポリマー支持体に化学的に結合する第２の方法をも記載する。

免疫グロブリンで活性化したポリヒドロキシエチレンよる支持体で支持されたポ リマー支持体および支持されないポリマーの両者の製造を記載する。

Ａ０回転成形装置　回転成形装置は１／４インチの厚さの壁を有する密閉したア ルミニウムドラムよりなっている。ドラムの内側の寸法は直径４インチおよび長 さ５インチである。ドラムはドラムを回転するモーター（フィッシャー・ダイナ −ミックス；フィッシャー・サイエンティフック・コ（Ｆｉｓｈｅｒ　Ｄｙｎａ −Ｍｉｘ；　Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣＯ９）、ピッツバーグ、ピ ーニー（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ））と接続しておりドラムの回転数（ｒｐｍ ）はストロボ光回転速度計（型式１８９１Ｍ　、パワー・インスツルメンツ・イ ンク（Ｐｏｗｅｒ　Ｉｚ＋５ｔｒｕａｅｎｔ　Ｉｎｃ、）、スコキー、アイエル （Ｓｋｏｋｉｅ、　ＩＬ））で測定される。熱線放射銃（フィッシャー・サイエ ンティフック・コ（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏ、））で回転し ているドラムを加熱する。熱電対でドラムの内温とドラム上を流れる空気の温度 を測定する。重合を行なう前および重合中にはドラム内の空気を窒素で置換する 。

Ｂ、支持されているポリマーの製造　ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）のグレード ５０の硬化濾紙（フィッシャー・サイエンティフック（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅ ｎｔｊｒ１ｃ）　、ピッツバーグ・ピーニー（Ｐｉｔｔｓｔ＋ｕｒｇ、ＰＡ）） を支持体の裏張りとして使用し、これらの回転成形に対する機械的強度を強くし た。

濾紙を長方形の（４−１５／１８　Ｘ　１２−７／１６インチ）のシートに切断 し、つぎに室温で３０分間エチレングリコール（ＥＣ）　（フィッシャー・サイ エンティフック・コ（ＦｉｓｈｅｒＳｃｌｅｎｔｉｆｌｃ　Ｃｏ、）　％カタロ グナンバー（Ｃａｔ、Ｎｏ、　、　Ｅ　−１７７）中に浸漬した。過剰のグリコ ールを濾紙から排除し、液を除いたのちの濾紙はＥＧ２〜４ｇを含有していた。

処理後の濾紙を円筒形に巻いて、これを回転成形ドラムの内側に入れた。濾紙の 外側の端をドラムの壁に押しつけて壁と濾紙との間の空気を全部追い出した。紙 を取りつけるにあたって、紙の両端が互いに接するようにすることは望ましいけ れども必ずしも必要ではない。いくらかの重なり合いがあってもよい。とじこめ られている空気のポケットがあるかどうかを濾紙の裏張りについて調べて、もし 存在するばあいにはゴム製のポリスマンで除去する。

粘着性が極めて強いポリマーを生成する重合を行なうばあいには、回転成形用円 筒に１枚のシリコン樹脂離型紙を先に張りつけ、この際離型紙のシリコン樹脂を 塗布しない方の面を円筒と反対側に置く。つぎに前記の処理をしたのちのワット マン濾紙を離型紙に対して注意深く取りつけることによって空気のとじこめがな いようにすることができる。

Ｃ１重合の処方　下記は現在広く行なわれている代表的な重合処方である。各々 のばあいにおいて、開始剤を室温において３０分間または開始剤が溶解するまで 反応性モノマー（またはその複数）とかく拌した。

ＧＭＡ−ＨＥＭＡ（５０１５０）コポリマー８．２５ｇ　　　　２−ヒドロキシ エチルメタクリレート（）ＩＥＭＡ） ６．２５ｇ　　　　グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ） １２．５ｇ　　　　エチレングリコール（ＥＣ）０．０２ｇ　　　　２．２°− アゾビス（２−アミノプロパン）塩酸塩（ＡＢＡＰ） ＣＭＡ−ＮＶＰ−ＨＥＭＡ（５０／４０／１０）　：ｌポリマー［ｉ、２５ｇ　 　　　Ｇ　Ｍ　Ａ １．２５ｇ　　　　Ｎ　Ｖ　Ｐ ５．００ｇ　　　　ＨＨＭ　Ａ １２．５ｇ　　　　　ＥＧ’ ０．０２ｇ　　　　ｐ、　Ｂ　Ａ　Ｐ 本エチレングリコールの重量はワットマン濾紙上に存在する２〜４ｇをも含む。

Ｄ０回転成形法　開始剤をモノマー（または複数のモノマー）に溶解している間 に、ドラムを回転成形装置に取付けた。ドラムを室温で１４００ｒｐａで回転し 、１５分間窒素で置換した。そののち開始剤−モツマー溶液（２５，０ｍｌ）を フレキシブル・テフロン［Ｆ］（ＴＥＦＬＯＮ■）の先端を有する皮下注射器（ ｈｙｐｏｄｅｒｉｉｃ）でドラムに注入した。窒素置換を再開しドラムの回転速 度を２９００ｒｐ磨に増加した。

送風機（約３５４ｔ”　／５ｉｎ）および加熱銃上の加熱器を起動しドラムを７ ０〜７５℃において９０分間加熱した。つぎに加熱を止めたが送風機はドラムの 内温を約３０℃に低下するまで冷却するために運転したままとした。冷却したド ラムを回転成形装置から取除いて脱イオン水で満たした。

１時間浸漬後成型物をドラムから取出した。

■、ポリマーの活性化　ポリマーディスクを実施例１に記載したような方法で製 造した。１４枚の各ディスクをそれぞれ１．０ｍｌの１．ＯＭ　１．６−ヘキサ ンジアミン（イーストマン・コダック（Ｅａｓｔｍａｎ　Ｋｏｄａｋ）　、ロチ ｘスター、二ニーヨーク（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、Ｎ、Ｙ、））溶液中で４℃に７ ２時間インキニベーシッンした。ディスクをヘキサンジアミン溶液から取出し、 ２ｍｌの燐酸塩で緩衝した食塩水で３回洗浄した。４０グラム％のヒトガンマ− グロブリン（）ＩＧＧ）（ジグｖ−ケミカル・コ（Ｓｌｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ ｌ　Ｃｏ、））溶液をり、１ＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６，０）１００　ｍｌ中に 室温で静かにかく拌して溶解して製造した。タンパク質が完全に溶解したのちタ ンパク質溶液１．０ｍｌを逐次９．０ｍｌのＭＥＳ溶液に移して４■／ｍｌ、４ ００ｇｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、および４ｕｔ、１ｍｌのタンパク質濃度の緩 衝液を系列的希釈によってえた。

１−エチル−３−（３−ジメチル−アミノプロピル）カルボジイミド（シグマ・ ケミカル・コ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ，ｏ、））溶液のＭＥＳ緩衝 液に溶解してつくった０、２５　Ｍ溶液０．５ｍｌと、タンパク質溶液０．５ｍ ｌ中で２個の別々のポリマーディスクを４℃において７２時間インキニベーシッ ンした。

タンパク質溶液から各ディスクを取り出し低温（４℃）の燐酸塩で緩衝した食塩 水２　ｍｌで３回すすいだ。

■、生理学的溶液からの抗ＩＣ抗体の生体特異性ポリ。

マーへの吸着の評価　各ディスクを１．０グラム％のヒト血清アルブミン（シグ マ・ケミカル・コ（Ｓｌｇｍａド・ヌクレアー（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕ ｃｌｅａｒ））とともに室温で２時間インキニベーシ■ンしてラジオイムノアッ セイを行なった。放射能トレーサー溶液を除き、各ディスクを２．０ｍＩＰＢＳ 溶液で３回すすいだ。ディスクを最後のすすぎ用の溶液中において４℃で一夜イ ンキニベーシジンした。個々のディスクをすす゛ぎ液から取出してインノドロン ・ハイドラガンマ−・カウンター（Ｉｎｎｏｔｒｏｎ）１ｙｄｒａｇａｍｍａ　 ｃｏ、ｕｎｔｅｒ）（サイエンテイフ４−／り・プロダク）　（Ｓｃｉｅｎｔｉ ｆｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ））中で各１分間計数を測定した。１分間のカウント 数を検出器の効率で割って１分あたりの壊変率ＣＤＰＭ）に換算した。吸着した 抗体の量は平均　ＤＰ）ｌを放射能トレーサーの比放射能で割うてその近似値と した。下記の結果かえられた。

ＨＧＧ処理　　　　吸着した抗免疫グロブリン（■／ｍｌ）　　　　　　　（１ ｃ−当り）＊２０．０　　　　　　　　　　２４５８２．０　　　　　　　　　 　１９１９ ０．２　　　　　　　　　　１２７１ ０．０２　　　　　　　　　　６８４ ［１，０（１２木本 ＊　ポリマー１　ｃｊあたりの放射線トレーサー物質のビ＊＊　バックグラウン ドの放射能 実施例４ 本実施例はガンマ−グロブリンに対するスペーサーとしてアミノカプロン酸を使 用したばあいを示す。

免疫グロブリンで活性化したポリヒドロキシエチルメタクリレート／グリシジル メタクリレ−）　（ｐ−ＨＥＧＬ）コポリマーを使用したばあいの抗ヒト免疫グ ロブリンＧ　（ＩｇＧ）抗体（ソニーマチ様型「因子」）の吸着Ａ６ポリマーの 成形　実施例３と同様にして回転成形したｐ−ＨＥＧＬポリマーを製造した。

Ｂ、ポリマーの誘導体化および活性化　ポリマーディスクを誘導体化用およびス ペーサー用の材料として１．０Ｍの６−アミノカプロン酸（シグマ・ケミカル番 コ（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、））をヘキサンジアミンの代りに使用 した点を除いては実施例３と同様にして製造し処理した。

Ｃ０生理学的溶液からの抗１ｇＧ抗体の生体特異性ポリマーへの吸着の評価　実 施例３に記載した方法と同様にしてラジオイムノアッセイを行ない下記の結果を えた。

ＨＯＧ処理　　　　吸着した抗免疫グロブリン２０．０　　　　　　　　　２３ ９５ ２・０　　　　　　　　　１８２８ ０．２　　　　　　　　　　ＨＩＯ ｏ、０２　　　　　　　　　７３２ ０．００２　　　　　　　　１５８ ＊　ポリマー１　ｃＪあたりの放射線トレーサー物質のピコグラム 実施例５ 本実施例は葉酸塩に対するスペーサーとしてアルブミン（分子量８７．０００） を使用したばあいを示す。葉酸塩は葉酸結合タンパク質の分離に用いられる。

葉酸塩−アルブミンで活性化したポリヒドロキシエチルメタクリレ−）　（ｐ− ＨＥＭＡ）ポリマーによる葉酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）の吸着 Ａ、ポリマーの成形　）戸紙で支持されたｐ−ＨＥＭＡポリマーシートを下記の ポリマー処方を用いて実施例２の記載と同様にして回転成形した。

１５．０ｇ　　　　２−ヒドロキシエチルメタクリレート１５．０ｇ　　　　エ チレングリコールＤ、ＤＢｇ　　　　メタ重亜硫酸ナトリウム０．０３６ｇ　　 　過硫酸アンモニウムＢ、ポリマーの誘導体化および活性化　葉酸ウシ血清アル ブミン複合体を葉酸塩のカルボキシル基とアルブミンの末端アミン基とをカルボ ジイミド縮合させて製造した。そのため、’！！＊（シグマ・ケミカル・コ（Ｓ ｉｇ量ａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、））　２００　ｔｔｒｇを８ｍｌのＯ，ｌＮ 　Ｎ！ＬＯＨに溶解し、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）− カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート 争コ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．））　４Ｈ　ｕを０．１１４　Ｍ ＥＳ緩衝液＜ｐＨ　Ｂ．Ｏ）２．０　ｍｌに溶解し、１．０ｇのウシ血清アルブ ミン（ＢＳＡ）を０．１Ｍ　ＭＥＳ緩衝液４０．０ｍｌに溶解した。溶液を混合 して４℃において７２時間インキニベーシ窪ンした。混合物２０ｍｌをＢＳＡ（ ２．５グラム％）−チャコール（１．２５グラム％）の懸濁液２０ｍｌで４℃に おいて３０分間処理して未反応の葉酸とカルボジイミドを溶液から除去した。懸 濁液を４℃において３４００Ｇで１５分間遠心分離を行ないデカントしてから　 ０．２２　ミクロンの濾過器で枦遇した。

ポリマーディスクはさきに実施例１中に記載したような方法で製造し臭化シアン 溶液で処理した。ディスクを低温の食塩水中ですすいだのち、８個１組のディス クを生理的食塩水と　１６０ミリグラム％のＢＳＡまたはさきに製造した葉酸ア ルブミン複合体溶液２０ｍｌ中に入れてインキニベーシ３ンした。ディスクを４ ℃において７２時間インキニベーシ１ンした。各々ディスクの組を溶液から取り 出し、液を拭い、４℃の食塩溶液２０ｍ１中に入れて少なくとも２４時間すすい だ。２組の複製したディスクを１％のグルタルアルデヒド溶液８ｍｌで１分間処 理し、燐酸塩で緩衝した食塩水緩衝液２０ｍ１中で一夜すすいだ。

Ｃ０生理学的溶液からの葉酸結合蛋白質（ＦＡＢＰ）の生体特異性ポリマーへの 吸着の評価　ｓｙｏｐｇの３Ｈ−プテロイルグルタミン酸（ＰＧＡ）　（アメル シャム・コープ（ＡｍｅｒｓｈａｍＣｏｒｐ、）、アーリントン＆　ハイツ、ア イエル（ＡｒｌｉｎｇｔＯｎＨｅＡｒｌｌｎ、　ＩＬ））および非放射性ＰＧＡ 　　（シグマ・ケミカル・コ（Ｓｌｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、））の標 準希釈溶液（４８ないし３４８ｐｇ）またはｐ−ＨＥＭＡポリマーディスクを２ ３４１）ｇの結合活性をもつＦＡＢＰ　（カーメン、ビーニー・アンド・カスト ン、ジニーデイ−（Ｅａｔｅｎ、Ｂ、Ａ、　ａｎｄ　Ｃａ５ｔｏｎ、Ｊ、Ｄ、） 　（ｒダイレクト・ラジオケミカル・アッセイ・フォー・シーラム・ホレート： コンベティシタン・ビイトウィーン・　３Ｈ−ポリックアシッド・アンド・５− メチルーテトラヒドロホリックアシッド・フォー・ア・ホレート・バインダー（ ”Ｄｉｒｅｃｔ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｌｃａｌ　Ａｓ５ａｙ　ｆｏｒ　Ｓｅｒｕ ｍ　Ｐｏ１ａｔｅ　：Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　　”Ｈ−Ｆｏ ｌｉｃ　Ａｃ１ｄ　ａｎｄ　５−Ｍｅｔｈｙｌ−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌｉ ｃ　Ａｃ１ｄ　ｆｏｒ　ａ　Ｆｏｌａｔｅ　Ｂｉｎｄｅｒ’　）　Ｊ　、ジェー ・ラブ・クリソ・メッド（Ｊ、Ｌａｂ、Ｃｌ１ｎ、Ｍｅｄ、）　、８３巻、１Ｈ ４頁（１９７４年〉）を用いて２０ｔｔｆｌの葉酸を含まない正常ヒト血清およ び５■のアスコルビン酸ナトリウム（シグマ・ケミカル・コ（Ｓｌｇｗａ　Ｃｈ ｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、））を含有している０、０５　Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７，６ ）　１　ｍｌ中でインキュベーションし、競合タンパク質結合ラジオアッセイを 行なった。

ラジオアッセイチューブを混合し、室温で３０分、および４℃で１０分間インキ ニベーションした。試験溶液から各ディスクを取出し低温（４℃）のＢＳＡ（２ ，５グラム％）−チャコール（１，２５グラム％）の懸濁液０．５ｍｌを各チュ ーブに加えた。全試験溶液を４℃で１０分間インキニベーシジンし２０００Ｇで ４℃で１５分間遠心分離を行なりた。上澄液を２０ｍ１のシンチレータ」ン用バ イアルにデカントして入れた。液体シンチレーション用液（フィッシャー・サイ エンティフ４　ツク（Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃ１ｅｎｔｉｆｌｃ）　、ピッツバーグ 、ピーニー（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ、ＰＡ））　１２ｍ１を各シンチレーションバ イアルに加えた。試料を各２分間イソカップ３００カウンター（Ｉｓｏｃａｐ　 ３００　Ｃｏｕｎｔｅｒ）　（シャール・アナリチック・インク（Ｓｅａｒｌｅ 　Ａｎａｌｙｔｉｃ　Ｉｎｃ、））でカウントした。下記の結果をえた。

ポリマー処理　　　　吸着したＦＡＢＰ（ｐｇ／ｅシ）食塩水　　　　　　　６ ７ 臭化シアン　　　　　　　　　　５４ ウシ血清アルブミン　　　　　　３９ 葉酸ＢＳＡ　ｔ！会合体　　　　　　７５８実施例６ Ａ、ポリマーの製造　重合開始剤（ＨＥＭ　２０ｇに溶解した２、２°−アゾビ ス−（２，４−ジメチルバレロニトリル１．７ｇ）の存在下でＭＥＫ／ＭｅＯＨ 溶媒系においてメチルアクリルアミドグリコレートメチルニーチルモノマーＨ９ ，２ｇ、　２−ヒドロキシエチルメタクリレートモノマー８６．４ｇおよびメチ ルメタクリレートモノマー２１６．０ｇを混合することによって３０／２０１５ ０　（重量％）のＭＥＡ／）ＩＥＭＡ／ＭＭＡターポリマーを製造した。成分を ６０℃、２４時間反応させ３０％固形分含量のターポリマー溶液をえた。

溶媒（ＭＥＫ／ＭｅＯＨ）および水を加えて１０％固形分含量になるまで、ター ポリマー溶液を希釈した。ＭＥＫ対Ｎｅｏ）Ｉの比は、最初の重合反応に用いら れたものに一致させた。各々のポリカーボネートテストチューブ（フィッシャー ・ブランド（Ｆｉｓｈｅｒ　Ｂｒａｎｄ）ｌｌｘ　７５ｓ＋ｍ）にターポリマー 溶液を充填し、そののちチューブから溶液をデカントしてチューブの内壁にター ポリマー溶液をコーティングした。

ターポリマーをコーティングしたチューブを反転しく開放端部を下にして）、− 夜空気乾燥させるためにラック内に置き、薄い硬化した粘着フィルムをえた。

Ｂ、生物学的製剤の固定化　５０１５０のＭＥＳ／ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９）中 に、化学的に凝集されたヒト免疫グロブリン（Ａｇ１ｇ）の０．１グラム％溶液 を調製した。この溶液の１ｍｌを各々のポリマーをコーティングしたチューブに 加え、室温で４時間、ポリマーと反応させた。Ａｇ１ｇ溶液を、チューブからデ カントした。各々のチューブを脱イオン水で３回すすぎ、そののち２回連続して １５分間、洗浄水溶液（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ　ｗａｓｈ　５ｏ１ｕｔｉｏｎ）（ ０，０５％ツイーン−２０（ＴＷＥＥＮ−２０）／生理食塩水）につけ、結合さ れていないＡｇ１ｇを除去するために脱イオン水で３回以上すすいだ。

固定化された生物学的製剤を保持するチューブを、バイオアッセイするまで、防 腐剤としてアジ化ナトリウムを含有するＰＢＳ内に貯蔵した。

ポリマーの表面上に固定化されたＡｇ１ｇの量を決定するために放射性標識され たヒト凝集化免疫グロブリン１２５　Ｉ　ＡｇＩｇを生物学的製剤として用いる ことを除いては前記と同様に、２組のポリｖ　−（ａ　ｄｕｐｌｉｃａｔｅ　ｓ ｅｔ　ｏｆｐｏｌｙ＋ｍｅｒ）をコーティングしたチューブを用意した。固定化 された　１２５１　Ａｇ１ｇを有するポリマーをコーティングしたチューブを、 インノドラン・ハイドラガンマ−・ラジ工−シッン争カウンター（Ｉｎｎｏｔｒ ａｎ　Ｈｙｄｒａｇａｍｍａｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｃｏｕｎｔｅｒ）　　（サイ エンティフィック会プロダクツ（Ｓｃ１ｅｎｔｉｒｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）） でカウントした。検出された１分あたりのカウント（ＣＰＭ）を、検出器の効率 で割ってＤＰＭに変換した。多数（ｒｅｐｌ　１ｃａｔｅ）のチューブからの平 均ＤＰＭをラジオトレーサー特異活性で割って、固定化されたＡｇ１ｇの量を計 算した。結果を、第１表に示す。

決定するために、ラジオイムノアッセイを行なった。固定化されたＡｇ１ｇを有 するポリマーをコーティングした各々のチューブに、１グラム％ＢＳＡブロッキ ング剤（ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）を３　ｍｌ加えた。チューブをおおい 、４℃で一夜貯蔵した。ブロッキング剤をチューブからデカントし、各々のチュ ーブに１％ＢＳＡを含量するＰＢＳに溶解したマウスモノクロナール抗ヒト凝集 化免疫グロブリンＧ（抗Ａｇ１ｇ）を加えた。チューブをおおい、３７℃で２時 間インキュベーションを行なった。抗Ａｇ１ｇ溶液を、チューブからデカントし た。各チューブのポリマーを、０．０５％ツイーン−２０ノ生理食塩水洗浄液で ３回（１０分間、つけて）洗浄した。チューブから直接デカントしたツイーン− ２０溶液で、各−チューブのポリマーをもう１回洗浄標識された（ｔａｇｇｅｄ 　ｗｉｔｈ　　　Ｉ　）ヤギ抗マウス免疫グロブリン（抗マウスＩｇ）を各チュ ーブに加え、３７℃で３時間インキュベーションを行なりた。放射標識された抗 マウス１ｇ溶液を各チューブから吸引した。

そののちポリマーを、前記のように、ツイーン−２０／生理食塩水洗浄液で洗浄 した。ポリマーをコーティングした各チューブを、前記のようにラジエーシ廖ン カウンターでカウントした。ＣＰＮをＤＰＨに変換し、かつ多数のチューブから の平均ＤＰＭをトレーサ溶液の特異活性で割って、吸着された抗マウス１ｇの量 を計算した。結果を、第１表に示す。

カラーメトリックアッセイ（Ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ｓ生体特異 性ポリマーの活性を決定するために、代わりの方法として、ＥＬＩＳＡカラーメ トリックアッセイを行なった。固定化されたＡｇ１ｇを有するポリマーをコーテ ィングした各チューブおよび固定化された生物学的製剤をもたないコントロール のチューブに、ＰＢＳ中の１グラム％ＢＳＡブロッキング剤を３．５ｍｌ加えた 。チューブを室温で１時間インキニベーシッンし、かつＢＳＡ溶液をチューブか らデカントした。１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中のＨＲＰ−標識マウスモノクロ ナール抗ヒトＡｇ１ｇ　（ＨＲＰ−モノクロナール抗体）を各チューブに注意深 く加え、室温で２時間インキニベーシ蓼ンを行なうた。ＨＲＰ−モノクロナール 抗体溶液を、各チ二−ブから吸引した。０．０５％ツイーン−２０７生理食塩水 洗浄液で、各チューブを３回（１０分間つけて）洗浄した。各洗浄ののち、洗浄 液を各チューブから吸引した。３回目の洗浄に続いて、ツイーン−２０／生理食 填水洗浄液を各チューブに再度充填した。溶液を直ちにチューブからデカントし 、チューブを脱イオン水ですすいだ。

時間がゼロのとき、８．０ｍｌのＡＢＴＳ／ハイドロゲン・パーオキシド呈色試 薬（ＡＢ丁Ｓ／ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｃｏｌｏｒｒｅａｇｅｎ ｔ）　　（カークガード・アンド・べり−・ラボラトリーズ〜インク（Ｋｉｒｋ ｅｇａａｒｄ　＆　Ｐｅｒｒｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

Ｉｎｃ、）、ゲイサースバーグ、ニムディ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ。

ＨＤ）　）を１５秒間隔で各チューブに加えた。呈色試薬を加えたのち３０分間 ボルテックスーゲニー■（ＶＯＲ丁ＥＸ−ＧＥＮＩＥ■）ミキサーで各チューブ を振とうした。そののち、各チューブの内容物を分光光度分析のためのキニベッ トにあけた。ｕｖ−ｖ＋ｓ分光光度計（ヒユーレット・バラカード・モデル（Ｈ ｅｖｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　Ｍｏｄｅｌ）１１４５０）で４１４ｎ＠で試料 を分析した。結果を第１表に示す。

Ｄ、比較試験　比較のために、１０％の固形分含量を有すル５０／４Ｂ／４重量 パーセントｃｏ　ＧＭＡ／ＮＶＰ／ＨＥＮＡ　（標準）ポリマー溶液を調製し、 前記のようにポリカルボネートテストチューブの内壁にコーティングした。空気 乾燥したのち、ポリマーをコーティングした各チューブに３ｍｌの０．２５剥６ −アミノカプロン酸を入れ（ｐｌａｃｉｎｇ）、室温で３時間反応させることに より、ポリマーをＡＣＡ　（アミノカプロン酸）で誘導（ｄｅｒｌｖａｔｌｚｅ ）　した。各チューブからＡＣＡ溶液をデカントし、ポリマーを脱イオン水で３ 回すすいだ。ＡＣＡで誘導されたポリマー上の未反応のエポキシ基を加水分解す るために、チューブに１ＮＨｃ＃を充填した。１時間後、酸をデカントして出し くｄｅｃａｎｔ　ｏｎ）、ポリマーを脱イオン水で３回すすいだ。そののち、ア ジ化ナトリウムを含をするＰＢＳをチューブに充填し、室温で一夜貯蔵した。Ｐ ＢＳ溶液をチューブからデカントし、ペンダント＾ＣＡスペーサーアームをもつ ポリマーを脱イオン水で３回すすいだ。０．０５　Ｍ　ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６， ５）中の０、Ｉ　Ｍ　ＥＤＣを３　ｍｌ各チ二−ブに加えることによりＡＣＡペ ンダントスペーサーアームを３０分間、活性化した。ＥＤＣ溶液をデカントして 出し、ポリマーを脱イオン水で３回すすいだ。５（１１５（ｌのＨＥＳ／ホウ酸 塩緩衝液（ｐＨ９）中の１グラム％ｋｇ１ｇを３　ｍｌ各チニーブに加え、室温 で４時間反応させた。生体特異性ポリマーを洗浄し、洗浄液で前記と同様にすす いだ。放射標識した（　　　１　）　Ａｇ１ｇを用いることを除いて同様に２組 のポリマーをコーティングしたチューブを調製した。ＭＥＡ／ＨＥＭＡ／ＨＭＡ およびＧＭＡ／ＮＶＰ／ＨＥＭＡターポリマーの両方に用いた試薬容量は、タン パク質固定化および放射活性アッセイのために１ｍ１／チユーブおよびＥＬＩＳ Ａカラーメトリックアッセイのために３ｍｌ／チューブを用いた。

前記Ｂ項および０項で述べたように、タンパク質固定化およびポリマー吸着のた めに、ＧＭＡ／ＮＶＰ／ＨＥＭＡポリマーを評価した。

［以下余白］ 実施例７ 硬化したのちのポリマーの表面特性における３０／２０１５０のＭＥＡ／ＨＥＭ Ａ／ＭＭＡポリマー製剤中の水および固形分含量を変化させる効果を決定するた めに、ポリマーの試料をスキャニング−エレクトロンＯマイクロスコピー（ｓｃ ａｎｎｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍ１ｃｒｏｓｃｏｐｙ）（ＳＥＸ）で試験し た。７５／２５（重量）　ＭＥＮ対メタノールの溶媒比を用いることを除いては 、実施例Ｃで述べたようにポリマー製剤を調製した。水および固形含有物を以下 に示すように変化させた。２×３インチポリカーボネートストリップを各ポリマ ー製剤でディップコーティングしくｄｉｐ　ｃｏａｔｅｄ）、−夜された試料を 、表面多孔度に対して６０００倍でＳＥＸにより試験した。

固形分含量　含水量　　表面外観　　細孔の大きさ１０　　　　０　　　滑らか 　　　　　−ｍ−１０２滑らか　　　　　−一− １５８低多孔性　　　０．２〜２．０ １０　　　　８　　　中間多孔性　　０，２〜２．０５　　　１５　　　高多孔 性　　　０．３〜３．０実施例８ ヒトＩｇＧ　、凝集体を結合するための固定化された遺伝工学的生物学的につく られた製剤を有する生体特異性ポリマーの製造法および有効性を示す（凝集され たＩｇＧは、免疫複合体疾患を研究する際に用いる標準モデルである）。

２パーセントの含水量を有する３０／２０１５０のＭＥＡ／ＨＥＭＡ／訃Ａポリ マー溶液を実施例６のように製造した。３００μｇのターポリマー溶液をマイク ロタイターウェルにピペッティングした（３７５μｇ容量、ダイナチック・ラブ ダ（Ｄｙｎａｔｅｅｈ　Ｌｂｓ、））。ウェルの内壁上にターポリマー溶液を分 散するために、ウェルを振り動かした。過剰のターポリマーをウェルからデカン トした。ターポリマーウェルを反転しく開放端部を下にし）、１６時間、室温で 空気乾燥し、硬化した粘着フィルムをえた。ウェルを脱イオン水中に２時間沈め て、各ウェル内のターポリマーを水和させた（そののち、水を変えて、さらに２ 時間、ウェルを沈めた）。

Ｂ、ポリマーのジアミン誘導　０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐｔ（１２， ０）中の２５ｍＭ　　プトレッシンジヒドロクロライド２００ｕｆＩを、ポリマ ーをコーティングした各ウェルに加え、室温で２時間インキュベージジンした。

プトレッシン溶液をデカントし、各ウェルに脱イオン水を充填し、ウェルを乾燥 するように吸引（ｓｕｃｔｉｏｎｌｎｇ　ｔｈｅνｅｌｌ　ｄｒｙ）することに よってポリマーを４回洗浄した。

７．２）中の５ｏＭ　　マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（ Ｓ−ＭＢＳ）　１００μｇを各ウェルに入れ、プトレッシン由来のターポリマー で、１時間室温で反応させた。

そののち、５−ＭＢ５溶液を吸引して出し、５−ＭＢ５活性化プトレッシンター ポリマーを脱イオン水で前記と同様に３回すすいだ。

Ｄ、生物学的製剤の付着　３つの異なる遺伝子工学的につくられたタンパク質Ａ 結合フラグメント（クリエイティブ・パイオモリキ二−ルズ、インク（Ｃｒｅａ ｔｉｖｅＢｉｏｓｏｌｅｃｕｌｅｓ、　Ｉｎｃ、）　、ホブキントン、エムニー （Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ））から入手したＦＢ−３２，３Ｂおよび３７）を 下記のように３組のポリマーをコーティングしたウェル上に固定化した。ＰＢＳ （２００μｇ／ｍｌ）中に溶解された遺伝子工学的につくられたタンパク質Ａ結 合フラグメント１００μｇをポリマーをコーティングした各ウェル内に入れ、室 温で２時間インキュベージジンした。そののち、結合フラグメント溶液を各ウェ ルから吸引し、０．０２％ツイーン−２０／生理食塩水洗浄液で４回洗浄し、そ れぞれの洗浄の間に洗浄液で５分間のインキニベーション期間をモノｖ　−Ｉｇ Ｇ（ｓｏｎｏｍｅｒｉｃ　ＩｇＧ）および凝集化されたＩｇＧを有する３組のポ リマーをコーティングしたウェルの各々に関して１競合結合アッセイ（ｃｏｍｐ ｅｔｉｔｉｖｅ　ｂｉｎｄｉｎｇａｓｓａｙｓ）を行ない、免疫複合体に対する 生体特異性ポリマーの特異性を決定した。凝集化されたＩｇＧは免疫複合体疾患 を研究するための標準的なモデルである。

非特異的結合を除去するためにブロッキング溶液（ＰＢＳ中の１パーセントＢＳ Ａ　）中で、ウェル内の生体特異性ポリマーを１時間インキュベージジンした。

ブロッキング溶液をウェルからデカントし、ブロッキング溶液中の標識されてい ないおよび　　ｌで標識されたモノマー１８Ｇ（Ｉｇ）ならびに熱凝集化された ＋ｇｃ（Ａｇ１ｇ）の濃度を変化させ（第２表参照）、それらの１００μｇを単 独および組合わせてポリマーをコーティングした各ウェルに加え、おだやかにか く拌しながら室温で２時間インキュベージジンした。そののち、ポリマーを０． ０２％ツイーン−２０／生理食塩水ＰＢＳ中で６回洗浄し、洗浄の間に５分間の インキユベーシヨンを行なった。ウェルを別個に分け、１３ＸｌｏＯＩ１１テス トチニーブに入れ、ガンマ−カウンターでカウントした。ＣＰＭを検出器の効率 で割って、ＤＰＭに変換した。

多数のチニーブからの平均ＤＰＭをラジオトレーサー特異活性で割って、モノマ ーまたは結合された凝集体の量を計算した。

［以下余白］ 実施例９ 実施例８で述べたように、ポリマーをコーティングしたウェルを製造し、誘導化 （ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ）　した。遺伝子工学的につくられたタンパク質Ａ結 合フラグメント（ＦＢ−３２および４７　　クリエイティブ・バイオモレキュー ルズ・インク（Ｃｒｅａｔｉｖｅ　Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、ｌｎｃ、））を −異なる２組のポリマーをコーティングしたウェル上で各々固定化した。各組の 生体特異性ポリマー上で競合結合アッセイを行ない、免疫複合体に対するその特 異性を決定した。

Ａｇ１ｇのアッセイ手順および濃度は、モノマーｔｇの濃度を１０倍１３．００ ０μｔｒ／ｍｌまで増加させたことを除いては実施例８で述べたものと同様であ る。アッセイ結果を以下に示す。

［以下余白コ 実施例１０ ＭＥＡ／ＨＥＭＡ／ＭＭＡおよびＧＭＡハＶＰ／ＨＥＭＡターポリマー支持体の 相対的表面粗さを比較するために、各ポリマー表面について表面のプロフィルメ ータースキャン（デクタフ■（ＤＥＫＴＡＫ　ＩＩ）表面プロフィルメーター、 スローンテクノロジー、コーポレーション（Ｓｌｏａｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 。

Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）　、サンタバーバラ、力ＩＪ　７　ｔ　／ｌ、、：、 ７）　ヲとった。実施例６で述べたように、ポリマー製剤を調製した。ポリマー 製剤の固形分含量は１０％とした。　ＭＥＡ／）ＩＥＭＡ／ＭＭＡおよびＧＭＡ ／ＮＶＰ／ＨＥＭＡ（７）含水量をそれぞれ２％および１５％とした。ポリカー ボネートストリップを各々のポリマー製剤でディップコーティングし、−夜エア ーキニアリングした。スキャンの結果を第１図に示す。その結果は、）４ＥＡ／ ）ＩＨＭＡ／１４ＭＡターポリマー表面がＧＩ４Ａ／ＮＶＰ／ＨＥＭＡ標準より 不規則ではないことを示す。

実施例１１ 本実施例は、非特異性細胞接着のためのＭＥＡ／ＨＥＭＡ／ＭＭＡおよびＧＭＡ ハＶＰ／）ＩＥＭＡターポリマー支持体の相対的な細胞接着特性を示す。

２つのポＩＪ　７−　Ｉｔ　剤、標準５０−４６−４　ノＧＭＡ−ＮＶＰ−）Ｉ ＥＭＡおよび３０−２０−５０のＭＡＧＭＥ−ＨＥＭＡ−ＭＭＡを実施例６のよ うに製造した。硬化されたポリマー支持体（生物学的製剤をもたない）の細胞性 吸着を、同一構造をもつ、混合された癌細胞系列（ＨＬＪＯ−白血病および）ｌ ＴＢ６７−黒色腫）を用いて比較した。細胞懸濁液を加水分解されたターポリマ ー支持体を通過させて再循環し、定期的にサンプリングし、コ［Ｆ］ −ルター　（ＣｏυＬＴＥＲ＠　）セルカウンター（コールタ−・エレクトロニ クス・エルティディ（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ４ｃｓＬｔｄ、））で 定量した。循環前の最初の細胞の総数から差し引いた再循環媒体に残存する細胞 の総数は、ターポリマー支持体上に非特異的に吸着された細胞数を示す、第２図 に示された結果は個々の細胞系列を試験したばあい、ＭＥＡ／）ＩＥＭＡ／ＭＭ Ａポリマーが、優れた非特異性吸着特性を有することを示す。

前記の実施例は本発明の説明に役立つものであるが、本発明に何らの制限も与え るものではない。当業者にとっては本発明の精神および範囲から逸脱しないで種 々の改変や修飾が行なわれうろことは明らかであろう。

ミクロン（μＭ） ミクロン（）ＬＭ） 一減少率 国際調査報告 １１Ｉ＋−一−＾−”””Ｎ・Ｐｃ？／１ｌｐＨ，／（ｉ；ｇｌＩＱ

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．ａ）メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチル メタクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支 持体、および ｂ）化学結合を介して該ターポリマー支持体上に固定化されていて特定の病理学 的作動体または特定の病理学的作動体の群を吸着するそれらの反応性を保持して いる生物学的製剤または複数の生物学的製剤からなる生体特異性ポリマー。
2. ２．ａ）メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチル メタクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支 持体、ｂ）該生体適合性ターポリマー支持体に結合されているスペーサー、およ び ｃ）化学結合を介して該スペーサー上に固定化されていて特定の病理学的作動体 または特定の病理学的作動体の群を吸着するそれらの反応性を保持している生物 学的製剤または複数の生物学的製剤 からなる生体特異性ポリマー。
3. ３．さらに該ターポリマー支持体が機械的に安定な支持体部材に固定されている ことを特徴とする請求項１または２記載の生体特異性ポリマー。
4. ４．該機械的に安定な支持体部材がポリエステルファイバー、微孔性のポリオレ フィン類、綿布、ポリスチレン、ポリカルボネート、ポリフェニレンオキシド、 ガラスビーズ、網状ポリウレタン類およびそれらの組合せからなる群より選ばれ たものである請求項３記載の生体特異性ポリマー。
5. ５．該生物学的製剤がアセチルコリン受容体タンパク質、組織適合性抗原、リボ 核酸類、基底膜タンパク質、遺伝子工学的につくられたタンパク質、免疫グロブ リンクラス類およびサブクラス類、骨髄タンパク質受容体、インシュリン補体成 分、ミエリンタンパク質類、ホルモン類およびそれらの受容体成分、ビタミン類 およびそれらの受容体成分またはそれらの組合せからなる群より選ばれたもので ある請求項１または２記載の生体特異性ポリマー。
6. ６．ａ）メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチル メタクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支 持体、および ｂ）化学結合を介して該ターポリマー支持体上に固定化されていて特定の体液成 分を吸着するそれらの反応性を保持している生物学的製剤または複数の生物学的 製剤 からなる生体特異性ポリマー。
7. ７．ａ）メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチル メタクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支 持体、ｂ）該生体適合性ターポリマー支持体に結合されているスペーサー、およ び ｃ）化学結合を介して該スペーサー上に固定化されていて特定の体液成分を吸着 するそれらの反応性を保持している生物学的製剤または複数の生物学的製剤から なる生体特異性ポリマー。
8. ８．該生物学的製剤が免疫複合体疾患に関連している免疫成分の除去に用いられ る遺伝子工学的につくられた生合成タンパク賞である請求項１または２記載の生 体特異性ポリマー。
9. ９．該スペーサーが炭素数２〜１２のジアミン類、グルタルアルデヒド、１，４ −シクロヘキサンジカルボン酸、エチレンジアミン四酢酸、トリエチレングリコ ール、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、メチレン−ｐ−フェニル ジイソシアネート、６−アミノカブロン酸、ｐ−ニトロベンゾイルクロリド、１ ，２−エポキシ−３−（ｐ−ニトロフェノキシ）プロバン、アミノプロピルトリ エトキシーシラン、無水コハク酸、ホモアプテインチオラクトンおよびアルブミ ンならびにそれらの組合せからなる群より選ばれたものである請求項２記載の生 体特異性ポリマー。
10. １０．患者の症状と関連している特定の病理学的作動体または特定の病理学的作 動体の群を吸着する固定化した反応性生物学的製剤を有する、メチルアクリルア ミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチルメタクリレートおよびメチ ルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支持体からなる生体特異性ポ リマーと患者の体液を接触するように流過させることおよび該体液を患者に戻す ことからなる疾患の治療処理。
11. １１．メチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチルメ タクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体適合性ポリマー支持体、 該生体適合性ターポリマー支持体に付着したスペーサーおよび該スペーサー上に 固定化した生物学的製剤からなる、該生物学的製剤が患者の症状に関連している 特定の病理学的作動体または特定の病理学的作動体の群を吸着する生体特異性ポ リマーと患者の体液を接触するように流過させることおよび該体液を該患者に戻 すことからなる疾患の治療処理。
12. １２．患者に投与すべき体液を、これを該患者に投与するに先立って、固定化し た反応性生物学的製剤を有するメチルアクリルアミドグリコレートメチルエーテ ル、ヒドロキシエチルメタクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体 適合性ターポリマー支持体からなる生体特異性ポリマーと接触するように流過さ せ、これによって該体液から特定の病理学的作動体を吸着しかつ除去し、ついで 該体液を該患者に導入することからなる疾患の治療処理。
13. １３．患者に投与すべき体液を、これを該患者に投与するに先立って、メチルア クリルアミドグリコレートメチルエーテル、ヒドロキシエチルメタクリレートお よびメチルメタクリレートからなる生体適合性ターポリマー支持体、該生体適合 性ターポリマー支持体に付着したスペーサーおよび該スペーサー上に固定化され た生物学的製剤からなる生体特異性ポリマーと接触するように流過させ、それに より該体液から特定の病理学的作動体を除去し、ついで該体液を該患者に導入す ることからなる疾患の治療処理。
14. １４．固定化された同種または異種の反応性生物学的製剤または生物学的製剤の 群をそれぞれ有する２種またはそれ以上の生体特異性ポリマーが直列的に用いら れ、該特定の病理学的作動体を除去することからなる請求項１０、１１、１２ま たは１３記載の治療処理。
15. １５．該処理すべき体液が血液、全血液、血液血漿および脳脊髄液からなる群よ り選ばれたものである請求項１０、１１、１２または１３記載の治療方法。
16. １６．メチルアクリルアミドグリコレートメチルェーテル、ヒドロキシエチルメ タクリレートおよびメチルメタクリレートからなる生体特異性ポリマーである、 該生体特異性ポリマー上に固定化された採取すべき所望の体液成分に特異的な反 応性生物学的製剤を有する生体特異性ポリマーと体液を接触するように流過させ 、これによって所望の成分を該体液から吸着することからなる体液から成分を採 取する方法。