JPH02289532A - 生理活性物質ｔａｎ―１０８５，そのアグリコン，製造法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｗ策上鬼１公Ｍ 本発明は血管新生の異常増殖を伴う各種疾患に対する予
防治療に有効な生理活性物質ＴＡＮ−１０８５、および
そのアグリコンに関する。

藍未曵執迷 血管新生は、胚発生１女性性周期による排卵または胎盤
形成など、ヒト又は動物の通常の生理的状態、創傷治癒
、炎症などの修復過程および毛細血管が急激に増殖、増
大して組織に対して重篤な損傷をもたらす多くの病的状
態などに起ることが知られている。このような毛細血管
の病的増加による疾患としては、眼科領域における糖尿
病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角膜移植に伴う血管
新生、線内症、眼腫瘍およびトラコーマなどが、皮膚科
領域における乾せん及び化膿性肉芽腫などが、小児科領
域における血管腫及び線維性血管腫などが、外科領域に
おける肥大性はん痕及び肉芽などが、内科領域における
リューマチ性関節炎及び浮腫性硬化症などが、心臓疾患
におけるアテローム性動脈硬化症及び各種腫瘍などが知
られている。

特に、糖尿病性網膜症およびトラコーマにおける異常な
血管新生の増加は多くの人々を失明に追いやり、又リュ
ーマチ性関節炎においては関節における異常な血管新生
が関節中の軟骨の破壊を起こし多くの人を悩ましている
。したがって、このような血管新生の異常増殖を伴う疾
患の治療、予防薬として有用な化合物の開発が望まれて
いる。

また、腫瘍の急速な増殖進展は、腫瘍細胞の産生ずる血
管新生因子により誘導される新生血管形成によると考え
られており、血管新生阻害剤は各種腫瘍に対する新しい
治療薬になると期待され、血管新生阻害剤の探索研究が
開始されている［ジェ・フォルクマン（Ｊ、　Ｆｏｌｋ
ｓａｎ）；アトパンシス・イン０キヤンサー０リサーチ
（Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｃ
ｈ）土３　１７５．１９８５．ジョージ・クライン（Ｇ
ｅｏｒｇｅ　　Ｋｌｅｉｎ）およびシトニー・ワインハ
ウス（Ｓｉｄｎｅｙ　　Ｗｅｉｎｈｏｕｓｅ）編集］。

すでにヘパリンまたはヘパリンフラグメントとコーチシ
ンをはじめとするいわゆる血管新生阻害ステロイド（ａ
ｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ　　５ｔｅｒｏｉｄ）との併用に
よって血管新生が阻害されることが知られている［ジェ
・フォルクマン・エト　アル（Ｊ、　Ｆｏｌｋｍａｎ　
ｅｔ、　ａｌ、）；サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２２
１　７１９（１９８３）ジェ・フォルクマンエト　アル
（Ｊ、　Ｆｏｌｋｍａｎ　ｅｔ。

ａｌ、）；エナルズ・オブ・サージエリ−（Ａｎｎａｌ
ｓｏｆｓｕｒｇｅｒｙ）２０６　３７４（１９８７）］
。

さらに、アゼチジンカルボン酸（Ｌ−ａｚｅｔｉｄｉｎ
ｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ）やシス−ハ
イドロキシプロリン（ｃ　ｉｓ　−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒ
ｏｌ　１ｎｅ）などのコラーゲン合成阻害剤、およびコ
ラーゲン・プロリン・ハイドロキシラーゼ（ｃｏｌｌａ
ｇｅｎ　ｐｒｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）の
阻害剤やコラーゲン架橋形成阻害剤とβ−サイクロデキ
ストリン・テトラデカサルフェート（βｃｙｃｌｏｄｅ
ｘＬｒｉｎ　−ｔｅｔｒａｄｅｃａｓｕｌｆａｔｅ）又
はヘパリンとの併用によって血管新生阻害作用を示すこ
とが報告されている［デ・イングバーおよびジェ・７オ
ルク７　ン（Ｄ、　　ｌｒｉｇｂｅｒ　ａｎｄ　Ｊ、　
Ｆｏｌｌｖａｎ　）；ラボラトリ−・インベスティゲー
ション（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉ
ｏｎ）５９　４４　（１９８８）］。

また基底膜及び基底膜中のコラーゲン合成が血管新生に
おいて重要な役割をはたすことが指摘されている［エム
・イー壽マラゴウダキス、エム・サーモニカおよびエム
・パノウトサコボラス（Ｍ。

Ｅ、　Ｍａｒａｇｏｕｄａｋｉｓ、　Ｍ、　Ｓａｒｍｏ
ｎｉｋａ　　ａｎｄ　　Ｍ。

Ｐａｎｏｕｔｓａｃｏｐｏｕｌｏｕｓ）；　Ｊ、　Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈｅｒ。

２４４　７２９（１９８８）、デイ−・イー・イングバ
ー、ジェ・工・マトリ−およびジェ・フォルクマン（Ｄ
、　Ｅ、　　Ｉｎｇｂｅｒ、　Ｊ、　Ａ、　Ｍａｄｒｉ
　ａｎｄ　Ｊ。

Ｆｏｌｋｓａｎ）；　ｘンドクリノロジイー（Ｅｎｄｏ
ｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）１１９　１７６８（１９８６）］
。

アスペルギウス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｆｕｓｉｇａｔｕｓ）が産生じ、従来、抗菌剤及び抗原
虫剤として知られているフマギリン（ｆｕａ＋ａｇｉｌ
ｌｔｎ）が強力な血管新生阻害作用を示し、且つヘパリ
ンまたはβ−サイクロデキストリンテトラデカ硫酸塩と
の併用によって一層効果的に血管新生阻害作用を示すこ
とが認められている［ジェ・フォルクマンおよびティ・
カナマル（Ｊ、　Ｆｏｌｋ＋ｓａｎおよびＴ。

Ｋａｎａｓａｒｕ）ら、ＥＰ−Ａ−３２５１９９号公報
］。

以上の非タンパク性の血管新生阻害剤の他に、タンパク
性の血管新生阻害剤についても幾つかの報告、例えば軟
骨由来の因子［５ｃｉｅｎｃｅ、　　１９３７０（１９
７６）］、プロタミン（ｐｒｏｔａｍｉｎｅ）［Ｎａｔ
ｕｒｅ、２９７　３０７（１９８２）］　、ヒト網膜色
素上皮細胞由来因子［Ａｒｃｈ、　Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ
、　Ｉ　Ｏ旦　１８７０（１９８５）］　、インターフ
ェロン［Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅｒａｃｈ＋　４ユ５１
５５（１９８７）］などが知られているが、医薬として
の実用性には乏しいと考えられる。

発明が解決しようとする課題 血管新生阻害作用を示す化合物については、上述したよ
うない（つかの報告があるが、未だその阻害活性は臨床
応用に供するには不充分であると考えられる。したがっ
て、臨床的に使用しうる、低分子の強い血管新生阻害剤
の取得が強く望まれている。

課題を解決するための手段 このような背景をもとに、本発明者らは阻害活性がより
強力で副作用の少ない新規な血管新生阻害剤を目的とし
て多数の微生物を分離探索したところ、ある種の微生物
が新規な血管新生阻害剤を産生ずることを見い出した。

該微生物がストレプトミセス属に属する菌種であること
、該微生物を適宜の培地に培養することによって血管新
生を強く抑制する活性物質を培地中および菌体中に蓄積
しうることなどを認めた。この活性物質を単離し、その
物理化学的および生物学的諸物質から、当該活性物質が
新規物質であることを確め、これらの知見に基づいて、
さらに研究を続けた結果、本発明を完成するにいたった
。

すなわち、本発明は （１）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５またはそのアグリ
コン、 （２）ストレプトミセス属に属し、生理活性物質ＴＡＮ
−１０８５を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し、培養物中に該化合物を生成蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする生理活性物質ＴＡＮ−１０８５の
製造法、 （３）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５を化学的に変換し
、そのアグリコンを採取することを特徴とする生理活性
物質ＴＡＮ−１０８５アグリコンの製造法、 （４）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５または／およびそ
のアグリコンを含有してなる血管新生阻害剤および（５
）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５または／およびそのア
グリコンを含有してなるアロマターゼ阻害剤に関するも
のである。

本発明の生理活性物質ＴＡＮ−１０８５（以下、単にＴ
ＡＮ−１０８５と略称することがある）を生産する菌と
してはストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔ。

ｍｙｃｅｓ）属に属し、ＴＡＮ−１０８５を産生ずる能
力を有する微生物であればいずれのものでもよい。

その例としては、たとえば滋賀県神崎郡で採集された土
壌から分離されたストレプトミセス属放線菌Ｓ−１１１
０６株（以下ｒｌｌｌ１０６株」と略称することもある
。）が具体的に使用しうる例として挙げられ、本菌は以
下の菌学的性質を有する。

１１１１０６株について、インターナショナル・ジャー
ナル・オブ・システィマチイック・バクテリオロジ［Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒＳｙ
ｓｔｅａｉａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ］　　
１６（３）＋　　３１３−３４０（１９６０）］記載の
方法に準じて検討した性状は下記のとおりである。なお
、培地上の所見は、特に記載のないかぎり、２８℃にお
いて１４日間培養し、観察したものである。

（１）形態的特徴 本菌株の気菌糸は良（分枝した基生菌糸から単純分枝状
に伸長しており、その先端には開放ないし閉鎖したラセ
ン状の胞子の連鎖（通常１０個以上）が認められるが、
輪生糸は形成されない。胞子は円形ないし楕円形で大き
さは０．８Ｘ０．８〜０．８Ｘ１．ｌＵｍ、その表面は
とげ状である。本菌株においては他の特殊な器官の形成
は認められない。

（２）各種培地上の生育状態 各種培地における生育の程度、気菌糸の色調、裏面の色
調、可溶性色素の色調およびその生成の有無などについ
ては第１表に示すとおりである。

なお、色の記載について（）で示す標準色語呂はコンテ
イナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒ
ｉｃａ）のカラー〇ハーモニー・マニュアル第４版、１
９５８年によった。

（３）生理的性状 ア）生育温度範囲（酵母エキス・麦芽エキス寒天培地、
１週間観察） ＝１３〜４１’Ｃ イ）ゼラチンの液化：陽性 つ）澱粉の加水分解：陽性 エ）脱脂乳の凝固　：陰性 脱脂乳のペプトン化：陽性 オ）メラニン様色素の生成 チロシン寒天：陰性 ペプトン・酵母エキス鉄寒天：陰性 （４）炭素源の同化性（プリートノ＼ム・ゴ・ソトリー
ブ寒天） 各種炭素源に対する同化性は次表に示すとおりである。

（５）細胞壁組成 全細胞加水分解物中の２，６ ン酸はエルエル型である。

ジアミノビメリ 以上の所見に示すように、本菌株は明らかにストレプト
ミセス属に属している。

本菌株の分類上の位置については［インターナショナル
・ジャーナル・オブ・システマティク・バクテリオロジ
ー」第１８巻（１９６８年）、同誌第１９巻（１９６９
年）、同誌第２２巻（１９７２年）、ニス・ニー・ワッ
クスマンの「ジ・アクチノミセテス」第２巻（１９６１
年）、アール・ヒュッターの「システマティク・デル・
ストレプトミセスンＪ（１９６７年）、「バージェイス
・マニュアル・オブ・データミネイテブ・バクテリオロ
ジー」第８巻（１９７４年）およびその他の菌種記載を
参照した。

その結果、本菌株に近似の既知菌種はみあたらなかった
。従って、本発明者らはＳ−１１１０６株をストレプト
ミセス・エスピー・５−ｚｔ。

６　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　　Ｓ　−１
１１０６）と称することにした。

上記ストレプトミセス・エスピーＳ−１１１０６株は財
団法人発酵研究所に昭和６３年１２月１２日から寄託番
号ＩＦＯ１４８０３として寄託されており、又本微生物
は日本国通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（
ＦＲＩ、日本国茨城県つくば巾乗１丁目１番３号）に平
成１年２月２０日から寄託番号Ｆ　Ｅ　ＲＭ　　Ｂ　Ｐ
　−２２９２として寄託されている。

本発明方法に用いられるストレプトミセスＦＡ放線菌は
、一般にその性状が変化しやすく、たとえば紫外線、Ｘ
線、化学薬品（例、ニトロソグアニンン、エチルメタン
スルホン酸）などを用いる人工変異手段で容易に変異し
うるちのであるが、どの様な変異株であっても、本発明
の対象とするＴＡＮ−１０８５の生産能を有するものは
すべて本発明方法に使用することができる。

ＴＡＮ−１０８５を生産する菌の培養に際しては、炭素
源としては、たとえばグルコース、麦芽糖、乳糖、廃糖
蜜、油脂類（例、大豆油、オリーブ油など）、有機酸類
（例、クエン酸、コハク酸。

グルコン酸など）など菌が資化しうるちのが適宜用いら
れる。窒素源としては、たとえば大豆粉。

綿実粉、コーン・ステイープ・リカー、乾燥酵母。

酵母エキス、肉エキス、ペプトン、尿素、硫酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸ア
ンモニウムなどの有機窒素化合物や無機窒素化合物が利
用できる。また、無機塩としては、たとえば塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム。

炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸−カリウム
、リン酸二ナトリウムなどの通常放線菌の培養に必要な
無機塩類が単独もしくは適宜、組合せて使用される。ま
た、ＴＡＮ−１０８５を生産する菌の資化しうる硫黄化
合物、たとえば硫酸塩（例、硫酸アンモニウムなど）、
チオ硫酸塩（例、チオ硫酸アンモニウムなど）、亜硫酸
塩（例、亜硫酸アンモニウム）などの無機硫黄化合物、
含硫アミノ酸（例、シスチン、システィン、Ｌ−チアゾ
リジン−４−カルボン酸）、ヒポタウリン、含硫ペプチ
ド（例、グルタチオン）などの有機硫黄化合物または、
これらの混合物を培地に添加すると目的物の生成量が増
大する場合がある。

また、硫酸第１鉄、硫酸銅などの重金属類、ビタミンＢ
　Ｉ＋　　ビオチンなどのビタミン類なども必要に応じ
て添加される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレ
ングリコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地
に添加してもよい。その他菌の発育を助け、ＴＡＮ−１
０８５の生産を促進するような有機物や無機物を適宜に
添加してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置培養、撹拌培養。

振盪培養２通気培養などいずれを実施してもよいが、と
くに通気撹拌培養が好ましい。又培養温度は約１５°Ｃ
ないし３５℃の範囲が好ましく、さらに好ましくは約２
４°Ｃないし２８℃であり、培地のｐＨは約４ないし８
の範囲、さらに好ましくは約６ないし７の範囲であり、
約８時間ないし１６８時間、好ましくは約２４時間ない
し１４４時間培養する。

生成した生理活性物質ＴＡＮ−１０８５は、培養物を遠
心分離或いは濾過などによって上清液と菌体とに分離し
、その上清液及び菌体からそれぞれ精製することもでき
るが、培養物に直接メタノール、アセトン、ブタ／−ル
などの有機溶媒を添加して得られる抽出液から精製する
方がより有利である場合もある。

当該物質は脂溶性物質であるので、そのような微生物代
謝産物を採取する為に通常用いられる分離、精製の手段
が適宜利用される。例えば、夾雑物との溶解度の差を利
用する方法、非イオン性ハイポーラス樹脂、活性炭、シ
リカゲル、アルミナ。

デキストランゲル等の各種担体を用いるクロマトグラフ
ィーなどがそれぞれ単独又は組合わせて利用される。

培養物中に生産される生理活性物質ＴＡＮ−１０８５を
採取する方法を具体的に説明すると、まず培養液をハイ
ツロスーパーセルなどのｌｉ５ｊＭ　助剤を用いて濾過
して、菌体とが液に分離する。培養が液は、ｐＨを中性
又は弱酸性として、酢酸エチルのような水と混和しない
有機溶媒で抽出する。

当該物質を培養が液より抽出するのに用いられる有機溶
媒としては、例えば酢酸エチル、酢酸イソブチルなどの
脂肪酸エステル類、イソブタノール。

ｎ−フタノールなどのアルコール類、クロロホルム、塩
化メチレンなどのハロゲン化炭化水素類。

メチルイソブチルケトンなどのケトン類などが挙げられ
る。

当該物質を含む抽出液は濃縮後、シリカゲルなどの吸着
担体に吸着させ、適当な溶媒で展開することにより精製
される。吸着剤として例えばシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ社
、　Ｋｉｅｓｅｌ　　Ｇｅｌなど）を用いる場合、展開
溶媒として一般に極性有機溶媒と非極性有機溶媒との組
合わせ、例えば酢酸エチルとｎ−へ牛サン、或いはメタ
ノールしクロロホルム又は塩化メチレンなどの混合溶媒
を用い、順次極性有機溶媒の含量を増すことにより、他
の夾雑物と分離して溶出することができる。薄層クロマ
トグラフィーで単一スポットを示す両分を集めて濃縮し
、残さを酢酸エチル−ｎ−ヘキサンなどで処理すると、
化合物ＴＡＮ−１０８５が赤褐色結晶性粉末として得ら
れる。

このようにして精製された生理活性物質ＴＡＮ−１０８
５の物理化学的性質は次に示す通りである。

ｌ）形状：赤褐色固体（結晶性粉末） ２）元素分析値（％）： 実測値：Ｃ６２，０４；　　Ｈ６，ｓ。

計算値（Ｃ！ＳＨｚ４０　ｍ・Ｈ，Ｏとして）：Ｃ６１
，７２：　　Ｈ５，３９ ３）分子式：Ｃ□）ｌ　ｔ　４０− ４）分子量：４６８（質量分析による）５）融点　：１
３９〜１４０℃（分解）６）比旋光度：　［α］　　＋
６３°（ｃｍ　０．０２゜メタノール） ７）紫外線吸収スペクトル： λＭｅＯＨ（Ｅ　１％）：　２１２（６０８）、２５４
（２５８）。

ｗａｘ　　　　ｌ　ｃｍ ２８６（２０１）、４３７（１１４）ｎｍ８）赤外線吸
収スペクトル（ＫＢｒ錠法による主要ピーク、ｃｌｌ−
９＝ ３４４０、２９５０．１６３５．１４６０．１３７０．
１３１０．１２６０．１２２０゜１１６５．１１１５，
１０６５．１０１５．　９７５．　９４０．　７６０．
　７１０９）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ
、重メタノール中でのケミカルシフト、δｐｐｍ）　：
０、７４（３■、　ｄ）、　１．３１（１Ｂ、　ｌ）、
　１．４８（２＋１．　Ｉ）、　１．８９（０１゜ａ＋
）、　３．２１（ＩＨ，ｍ）、　３．４７（ＩＩＩ、　
ｄｑ）、　４．６１（２Ｈ，ｓ）、　４．７１（ＩＨ，
ｄ）、　５．１６（ＩＨ，ｄ）、　５．１９（１Ｂ、　
ｄ）、　６．９２（１）１．　ｍ）。

６、９６（１１，ｍ）、　７．２６（１１，ｄｄ）、　
？、　５８（ＩＨ，ｄｄ）、　７．６８（ＩＩＩ、ｄｄ
） 但し、ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ、　ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ、　
　ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ。

ｑ：ｑｕａｒｔｅｔ、　ｍ：ａ＋ｕｌｔｉｐｌｅｔ（以
下同意義を示す）ｔｏ）１３ｃ核磁気共鳴スペクトル（
７５ＭＨｚ、重メタノール中でのケミカルシフト、δｐ
ｐｍ）　：１６、９（ｑ）、　２４．６（ｔ）、　２６
．４（ｔ）、　６４．５（ｔ）、　６７、８（ｄ）。

６８、３（ｄ）、　６９．４（ｄ）、　７０．４（ｄ）
、　９７．７（ｄ）、　１１６．０（ｓ）。

１１６、２（ｓ）、　１１７．０（ｄ）、１１９．９（
ｄ）、　１２０．９（ｄ）。

１２４、５（ｄ）、　１３５．７（ｓ）、　１３７．３
（ｄ）、　１４１．０（ｓ）。

１４１、４（ｓ）、　１４４．２（ｓ）、　１４７．８
（ｓ）、　１５７、？（ｓ）。

１６２、１（ｓ）、　１８６．１（ｓ）、　１９０．１
（ｓ）１１）溶解性 可溶；クロロホルム、酢酸エチル、メタノール、ジエチ
ルエーテル 難溶；水、ｎ−ヘキサン １２）薄層クロマトグラフィー（担体、シリカゲルガラ
スプレート６０　Ｆ　ｔｓ４，０　、２５　ａｍ、西独
メルク社製）： 分子式、紫外線吸収スペクトル　ＩＨ及び１３ｃ核磁気
共鳴スペクトルデータなどから、生理活性物質ＴＡＮ−
１０８５はベンズアンスラキノン配糖体系の新規物質で
ある。

又、当該化合物ＴＡＮ−１０８５は酸性条件下、溶媒中
で加水分解されてアグリコン及びロジノースを生成する
が、アグリコンも分子式（Ｃ１，Ｈ１４０、）、’Ｈ及
び１３０核磁気共鳴スペクトルなどから新規物質と判断
された。ＴＡＮ−１０８５の酸加水分解に用いられる酸
としては、塩酸、硫酸。

リン酸、ギ酸、酢酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸等の無
機或いは有機の酸が用いられ、反応は一般に？ＢｈＨ中
、例えば水、メタノール、エタノール。

ジオキサン、テトラヒドロフランなどの無機又は有機溶
媒中で行われるが、用いられる酸が液体の場合はそのま
ま溶媒をかねて用いることもできる。

反応温度は用いる酸によって異なるが、一般に２０°Ｃ
ないし１００°Ｃ２好ましくは０℃ないし６０°Ｃの間
で行われ、又反応時間も用いる酸及び温度によって異な
るが、通常５分から２４時間の間で反応が終了する。

酸加水分解で生成したアグリコンは、脂溶性であるので
、通常の精製法、即ち、溶媒による抽出。

及びシリカゲルなどの担体を用いるクロマトグラフィー
などにより精製、単離される。

このようにして得られたＴＡＮ−１０８５アグリコンの
物理化学的性質は次に示す通りである。

ｌ）形状】赤褐色固体（粉末） ２）元素分析値（％）： 実測値：　Ｃ６１，５７；　Ｈ４，１？計算値　（Ｃ１
ｅＨ１４０？・ＨｔＯとして）：Ｃ６１，２９；　　Ｈ
４，３３ ３）分子式：　Ｃ、、Ｈ、，０゜ ４）融点　：１８２〜１８６°Ｃ（分解）５）比旋光度
：　［α］　　　＋４６０°（ｃ＝　０．０１゜メタ７
−ル） ６）紫外線吸収スペクトル λ　　　　　　ロｍ（Ｅｊ？μ　）：　　２１２（１３
２６）、２５６（５２３）。

ｅＯＨ ６３Ｘ ２８ｇ（４１４）、　４４４（２５２）７）’Ｈ核磁気
共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ、重メタノール中でのケ
ミカルシフト、δｐｐｍ）　：４．６２（２Ｈ，ｓ）、
４．６４（ｌｉｔ、ｄ）、５．１０（ＬＨ，ａ）、６．
９３（目（。

ａ）、　６．９７（ＩＨ，ｍ）、　７．２６（ＩＨ，ｄ
ｄ）、　７．５７（ＩＨ，ｄｄ）。

７、６７（１Ｂ、　ｄｄ） ８）”Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨ２，トリフル
オロ酢酸１滴を含む重メタノール中でのケミカルシフト
、δｐｐｍ）　： ６４、５（ｔ）、　６４．５（ｄ）、　７２．６（ｄ）
、　１１５．８（ｓ）、　１１６．０（ｓ）１１７、２
（ｄ）、　１２０．０（ｄ）、　１２１．４（ｄ）、　
１２４．８（ｄ）。

１３５、６（ｓ）、　１３７．３（ｄ）、　１４０．８
（ｓ）、　１４１．１（ｓ）。

１４５、８（ｓ）、　１４８．１（ｓ）、　１５７．７
（ｓ）、　１６２．１（ｓ）。

１８６、４（ｓ）、　１８９．９（ｓ）さらに、ＴＡＮ
−１０８５およびそのアグリコンの化学構造は下式で表
わすことができる。

〔式中、Ｒはロジノシル基（ＴＡＮ−１０８５）または
水素原子（ＴＡＮ−１０８５アグリコン）を示す〕 ＴＡＮ−１０８５およびそのアグリコンは、アルカリ金
属（ナトリウム、カリウムなど）やアルカリ土類金属（
カルシウム、マグネシウムなど）の塩基との生理学的に
許容される塩を形成することができる。

ＴＡＮ−１０８５およびそのアグリコンは強力な血管新
生阻害活性を示し、先に述べた血管新生の異常増殖に基
づく多くの疾患の予防治療薬として極めて有用である。

又強い血管新生阻害作用に基づく抗腫瘍活性も期待しう
る。

該化合物は経口的または非経口的に哺乳動物（例えば、
ラット、うさぎ、さる及びヒト）に錠剤。

顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、＃１剤、注射剤。

局所投与のクリームまたは点眼薬などの形態に調剤され
て投与される。形削により活性物質と共に用いられる製
薬組成物には、慣用されている適当な添加剤（製剤原料
）２例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤１着色剤、
矯味剤、安定化剤などが含まれていてもよい。また組成
物は徐放性ポリマーなどを用いた５ｕｓｔａｉｎｅｄ　
　ｒｅｌｅａｓｅの手法を用いて投与をされてもよい。

例えば組成物をｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｖｉｎｙｌ　ａｃｅ
ｔａｔｅ　ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ　ｐｅｌｌｅｔに取り込
ませて、このペレットを治療すべき組織中に外科的に移
植することができる。

例えば、糖尿病性網膜症の治療に用いる場合、薬理学的
に許容されるキャリヤーを含有する組成物を経口的また
は静脈内注射で投与される。さらに具体的には、患者の
状態、疾患の程度によるが、たとえば１日０．５〜５０
０ｍｇを２〜３回に分けて経口的又は非経口的に投与す
るのが望ましい。

ＴＡＮ−１０８５およびそのアグリコンはこのような投
与量において電篤な毒性は認められない。

上記網膜症及びトラコーマの治療には点眼薬としても用
いられ、患者の状態により日に１〜４回の頻度で眼に滴
下作用することができる。

さらに、生理活性物質ＴＡＮ−１０８５及びそのアグリ
コンが、それぞれアロマターゼを強く阻害することが見
い出された。したがって、哺乳動物におけるニストロジ
エン依存性疾患２例えば乳癌の治療及び予防に有用であ
る［キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａ
ｒｃｈ）、　４２．　３２６１　Ｓ　（１９８２）］。

またアロマターゼ阻害剤により治療または予防できるニ
ストロジエン依存性疾患としては、乳癌の他に例えば、
子宮内膜症、子宮体癌。

卵巣癌、多のう飽性卵巣疾患、前立腺肥大症等があげら
れ、又受胎調節にも有用と考えられる。

乍■ １、血管新生阻害作用 以下およびそのアグリコンの血管新生阻害活性について
具体的に説明する。

ＴＡＮ−１０８５及びそのアグリコンの血管新生阻害活
性を、無殻鶏胚漿尿膜（５ｈｅｌｌ−１ｅｓｓｃｈｏｒ
ｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ、　ＣＡＭ
）を用い、Ｊ。

Ｆｏｌｋｍａｎらの方法［Ｒ，Ｃｒｕｍ　　ｅｔ、　ａ
ｌ：　５ｃｉｅｎｃｅ２３０　１３７５（１９８５）］
を若干改変した方法によって測定した。すなわち、３日
間培養した鶏受精卵の卵殻を割って、得られた鶏胚をプ
ラスチック製カップ内でポリ塩化ビニリデンを用いてハ
ンモック状につるし無菌的にさらに５日間培養を続けた
。

検定試料の調製は以下の通りに行った。すなわち無菌的
に調製したＴＡＮ−１０８５及びそのアグリコンのメタ
ノール溶液と１％メチルセルロース水溶液を等容にまぜ
合せ、その混合溶液ｌＯμＱをテフロンプレート上に静
かに滴下して、これを無菌的に風乾すると、試料を含有
する直径約４Ｉｌｓのメチルセルロース・ディスクが得
られる。卵割培養５日目の鶏胚上に、上記の方法で調製
したメチルセルロース・ディスクを静かにのせて、さら
に鶏胚の培養を無菌的に続け２４時間後及び４８時間後
に、ディスクの周辺に形成された血管新生阻止ゾーンを
顕微鏡下（Ｘ２０．ＳＭＺ−１０゜Ｎ１ｋｏｎ）に観察
した。血管新生阻害活性（％）は、試験に用いた全ディ
スクの数当り、血管新生阻害ゾーンが認められたディス
クの比で算出した。

次表に示す結果から、ＴＡＮ−１０８５及びそのアグリ
コンが血管新生阻害活性を有することが明らかになった
。

第２表 サンプル量 ＴＡＮ−１０８５１１１％ ３　　　　　　　２２％ ＴＡＮ−１０８５ ２，７０マタ一ゼ阻害作用 アロマターゼ活性の測定方法及び阻害活性：人胎盤ミク
ロゾームの調製はＰ、　Ａ、　Ｔｈｏｍｐｓｏｎらの方
法［ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー
（Ｊ、　　Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）２４９　、　５
３６４（１９７４）］を一部改良して行なった。すなわ
ち、胎盤を予め冷した０、１５ＭＫＣＣで洗浄し、付着
している膜や大きな血管を除去後ハサミで十分細切した
。細切組織に０．２５Ｍシュークロースを含有した冷０
．０２Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，４をＩｇ組織重量当り
２−を加えポリトロンホモゲナイザーを使用してホモゲ
ナイズ（３０秒、３回。

水中で）し、８００Ｘｇで１０分間遠心した上澄液を２
０．ＯＯＯＸｇで３０分間遠心した後、更に１４８，０
００Ｘｇで４５分間遠心して得たペレットをミクロゾー
ム画分として使用した。得られたミクロゾームは上記リ
ン酸緩衝液に湿胎盤重量ｌｏｇ当りｌｄに懸濁して一８
０℃にて保存し、使用時に５〜６倍に希釈して使用した
。さらに、アロマターゼ活性の測定方法及び阻害活性は
Ｆ、　Ａ。

Ｔｈｏｍｐｓｏｎらの方法［上記文献参照］を一部改良
して以下のように行なった。

４−アンドロステン−３，１７−ジオン　４ｇＭ、１．
２　［３Ｈ］−アンドロステンジオン１４０゜０００ｄ
ｌ）ｍ、ＮＡＤＰＨ５５Ｑ、ｃｚＭ、上記ミクロゾーム
２０μＱおよび緩衝液５μＱまたは阻害剤を含む溶液５
μＱを含む反応溶液２２５μＱで３７°Ｃ１１時間反応
を行なった。この測定法によれば、アンドロステンジオ
ンの芳香族化によって［３Ｈ］−ｆ（、０が生成するの
で、この反応液をクロロホルム０．５Ｔｎ１．で抽出す
ることによって分離し、得られた水層を５％活性炭０．
２５ｄで処理して遊離のステロイドを除き、低速遠心分
Ｒ［Ｕ上清０　、２　ｈｆｌに３　ｔａのシンチレータ
−を加え、液体シンナレーションカウンターにより放射
活性を測定した。その結果を阻害剤を加えずに反応して
得た対照試料における結果と比較することにより、阻害
率（％）を算出した。

第３表 ０．３９　　　　　　　　　　　　　　　　２３０．７
ｇ　　　　　　　　　　　　　　　　　４７１．５６　
　　　　１６　　　　　　　　６８３．１３　　　　　
３９　　　　　　　　８９６．２５　　　　　６４　　
　　　　　　９４１２．５　　　　　　７９ ＴＡＮ−１０８５及びＴＡＮ　　１０８５アグリコンの
５０％阻害濃度（ＩＣ５，）はそれぞれ４２μｇ／ｍｌ
及び０．９μｇ／ｄであった。

χ路側 以下に実施例をもって本発明を、さらに具体的に説明す
るが、これらは本発明を限定するものではない。

実施例１ グルコース２％、　可ｍ性Ｒ粉３％、コーン・スチーブ
・リカー１％、生大豆粉１％、ペプトン０．５％、塩化
ナトリウム０．３％、沈降性炭酸カルシウム０．５％（
ｐＨ７，０）からなる種培養培地５００ｄを２Ｑ容坂ロ
フラスコに分注し、１２０°Ｃで２０分間滅菌したのち
、ストレプトミセス・エスピーＳ−１１１０６株を接種
し、２８℃で４０時間往復振盪機上で培養した。かくし
て得られた種培養物５００滅を上記と同−刊成の種培養
培地３０Ｉ２を含む５０＆容タンクに移植し、２８°Ｃ
て４８時間通気撹拌培養（通気量１００％（３０Ｑ／分
）、撹拌：毎分２８０回転）した。

かくして得られた種培養物５Ｑをグルコース０５％、デ
キストリン５％、コーン・グルテン・ミール３．５％、
沈降性炭酸カルシウム０．７％（ｐｆ（７、０）からな
る主培養培地１００ρを含む２００Ｑ容タンクに移植し
、２８°Ｃで１１４時間通気撹拌培養（通気量１００％
（１００（／分）、撹拌：毎分１５０回転）し、培養物
９５Ｉ２を得た。

実施例２ 実施例１で得られた培養１＆（２５１にハイフロス−パ
ーセル（Ｊｏｈｎｓ−Ｍａｎｖｉｌｌｅ社、米国）を濾
過助剤として用いて濾過した。炉液（１８１２）をｐＨ
７として、酢酸エチル（１８ｃ）で抽出し、酢酸エチル
層を水洗後濃縮して、油状残さ２ｇを得た。

この油状残さをシリカゲル（４０ｇ、　　メルク社西独
）のカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−ｎ
−へキサン（１：　ｌ）、ｆｆｌエチル−ｎヘキサン（
４：ｌ）、及び酢酸エチルで順次展開し、活性画分を集
めて濃縮して、油状の粗物質０．６ｇを得た。

更にこの粗物質をシリカゲル（ｌｏｇ、　　メルク社）
のカラムクロマトグラフィーに付し、初めにメタノール
２％を含むクロロホルム、次いでメタノール５％を含む
クロロホルムで展開し、薄層クロマトグラフィーで単一
スポットを示す両分を集めて濃縮、乾固し、残さを酢酸
エチル−〇−へキサンで処理することにより、ＴＡＮ−
１０８５の赤褐色結晶性粉末（１５０ｍｇ）を得た。

実施例３ 生理活性物質ＴＡＮ　　１０８５（８０％ｇ）をメタ／
−ル５７に溶解し、これにトリフルオロ酢酸１００μＱ
を加えて、３０分間室温で撹拌した後、反応液を濃縮、
乾固し、残さを酢酸エチルに溶かして、０．１Ｎ−塩酸
、水で順次洗浄した。酢酸エチル層は、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥後、濃縮。

乾固し、残る残さをシリカゲル（５ｇ、メルク社）のカ
ラムクロマトグラフィーに付し、５％メタノールを含む
クロロホルムで展開して、薄層クロマトグラフィーで単
一スポットを示す画分を集めて濃縮し、赤褐色粉末状の
ＴＡＮ−１０８５のアグリコン（３５ｍｇ）を得た。

発明の効果 ’ｒＡＮ−１０８５およびそのアグリコンは血管新生の
異常増殖を伴う各種疾患の予防・治療及びニストロジエ
ン依存性疾患の予防・治療に有用である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒはロジノシル基または水素原子を示す〕で表
   わされるＴＡＮ−１０８５またはそのアグリコン。
2. （２）ストレプトミセス属に属し、生理活性物質ＴＡＮ
   −１０８５を生産する能力を有する微生物を培地に培養
   し、培養物中に該化合物を生成蓄積せしめ、これを採取
   することを特徴とする生理活性物質ＴＡＮ−１０８５の
   製造法。
3. （３）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５を化学的に変換し
   、そのアグリコンを採取することを特徴とする生理活性
   物質ＴＡＮ−１０８５アグリコンの製造法。
4. （４）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５または／およびそ
   のアグリコンを含有してなる血管新生阻害剤。
5. （５）生理活性物質ＴＡＮ−１０８５または／およびそ
   のアグリコンを含有してなるアロマターゼ阻害剤。