JPH02255095A - γ―サイクロデキストリンおよび／またはα―グルコシルグリチルリチンの効率的生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はγ−サイクロデキストリンおよび／またはα−
グルコシルグリチルリチンの製法に関し、更に詳しくは
、澱粉類とグリチルリチン類から主要部が同一の装置、
工程により包接作用を利用して近年食品、医薬品等に用
途を拡大しつつあるサイクロデキストリン類の中にあっ
て、その溶解度が高い、包接容量が大きいなどの機能を
持ったγ−サイクロデキストリンまたは甘味剤として、
あるいは食品の味質改良剤として用いられるα−グルコ
シルグリチルリチンを夫々単独で選択的に、或いは双方
を同時にまた混合物として高収率で効率良く生産するこ
とに関する。

〔従来の技術〕

特開昭６０−２２７６９３号に澱粉類にサイクロデキス
トリングルカノトランスフェラーゼを作用させるとき、
グリチルリチン等のテルペノイド類を共存させることに
よりγ−ザイクロデキストリンを増収する方法が開示さ
れ、特開昭５８８７０号にグリチルリチンと澱粉質にサ
イクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用
させて、α−グルコシルグリチルリチンを得る方法が開
示されている。

これらは夫々澱粉類とグリチルリチン類からサイクロデ
キストリングルカノトランスフェラーゼ′の作用により
、γ−サイクロデキストリンまたはα−グルコシルグリ
チルリチンを生産することに関するものであるが、いず
れもその選択的効率的な製造方法については開示がなく
、またいずれか一方の製造しか述べられておらず双方を
同時に生産する方法でもない。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、澱粉類とグリチルリチン類から主要部が同一
の装置、工程によりγ−サイクロデキストリンとα−グ
ルコシルグリチルリチンを単独または混合状態で更には
双方を同時に最も効率的に製造することについて詳細に
追及し、完成させたものであり、夫々の製品に適した酵
素処理条件を見出すとともに従来法にない工程を導入す
ることによって収率、純度１分離効率の向上をめざした
。

〔課題を解決するための手段〕

即ち本発明は澱粉類とグリチルリチン類に対してサイク
ロデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用させ
るに際して、 （Ａ）反応液のｐ＋＋を６．５〜８．０１基質濃度を５
〜２０％に保持し、反応中または反応後アミラーゼ類を
添加作用させ、更に陽イオン交換樹脂により　ｐＨを２
〜３として、非極性合成吸着剤に接触させ、吸着物を１
０〜５５％（Ｖ／Ｖ）メタノールまたは５〜３０％（Ｖ
／Ｖ）エタノールで溶出、晶析させてγ−ザイクロデキ
ストリンを選択的に高収率で生産分離する方法。

（Ｂ）反応液のｐＨを５．０〜６．５．基質濃度を２０
〜４０％に保持し、反応後陽イオン交換樹脂処理により
ｐＨを２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸着
物を６５〜９５％（Ｖ／Ｖ）低級アルコールに溶出させ
て、α−グルコシルグリチルリチンを選択的に生産分離
する方法。

（Ｃ）反応液のｐＨを６．０〜７．０．基質濃度を２０
〜２５％に保持し、反応中または反応後アミラーゼ類を
添加作用させ、更に陽イオン交換樹脂処理によりｐ）ｌ
を２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸着物を
４５〜５５％（Ｖ／Ｖ、）メタノールと８５〜９５％（
Ｖ／Ｖ）メタノールまたは２０〜３０％（Ｖ／Ｖ）　エ
タノールと６５〜７５％　（Ｖ／Ｖ）エタノールにより
夫々分別溶出させてγ−７サイクロデキスＩ・リンとα
−グルコシルグリチルリチンを同時生産分離する方法。

（Ｄ）反応液のｐｉｔを５．０〜８．０．基質濃度を５
〜４０％に保持し、反応後陽イオン交換樹脂処理により
　ｐＨを２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸
着物をメタノールまたはエタノールで溶出させてγ−サ
イクロデキストリンとα−グルコシルグリチルリチンの
混合物を得る方法。

の４つの方法のいずれかにより、γ−サイクロデキスト
リンとα−グルコシルグリチルリチンの夫々または双方
を生産するものである。

澱粉類にサイクロデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼを作用させてから、グルコアミラーゼ単独でまたは
他のアミラーゼ類とともに添加すると、グルコアミラー
ゼ単独ではα、βγの各サイクロデキストリンはそのま
ま安定で分解しないが（特開昭５６−８０５号、特公昭
５２−８３８５号）、細菌糖化型アミラーゼの併用によ
りβ、γ−サイクロデキストリンは還元糖に分解するこ
とが知られ（特開昭５７−３（１７０２号）、グツ ルコアミラーゼとα−サイクロデキストリンへの親和性
の低いサイクロデキストリントランスフェラーゼを併用
するとβ、γ−ザイクロデキストリンはグルコース、マ
ルトース等に分解するといわれる（特開昭６２−１１７
０１号）。本発明のようにグリチルリチン類の存在下に
おいてサイクロデキストリングルカノトランスフェラー
ゼ処理の途中または処理後アミラーゼ類で処理をして更
に陽イオン交換樹脂および非極性合成吸着剤に接触させ
ると、きわめて選択的にγ−サイクロデキストリンが生
産分離され、澱粉類に対する収率は特開昭６０−２２７
６９３号に示される方法より高くなった。

即ち本発明により澱粉またはその加水分解物からのグリ
チルリチンまたはα−グルコシルグリチルリチン存在下
でのデキストリン類への酵素反応においてγサイクロデ
キストリンまたはα−グルコシルグリチルリチンが優先
的、選択的に得られる条件が見出された。これとともに
γ−サイクロデキストリンの分離に関してはγサイクロ
デキストリンは、グリチルリチンまたはα−グルコシル
グリチルリチンとアミラーゼ類の双方が存在することに
より、その包接作用によって選択的に分離精製されるこ
とが判明し、発明が完成された。

本発明に用いられる澱粉類とは、馬鈴薯、トウモロコシ
、小麦などから得られるα−１，４グルコシル糖化合物
を主要成分として含む澱粉および澱粉に対して酸または
アミラーゼなどによって加水分解処理して重合度を調整
したいわゆるデキストリンなどであり、その起源は問わ
ない。

本発明においては、澱粉を原料として用いる場合、予め
アミラーゼなどによって液化処理を行い、ＤＥ　（Ｄｅ
ｘｌｒｏｓｅ　Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）２〜Ｉｎに調整
したものが好適である。

グリチルリチン類とは、古くから薬用、甘味料として用
いられて来た、豆科の多年生植物である甘草のの根から
抽出精製したグリチルリチン酸（Ｇｌｙｃｙ＋＋ｈｉｘ
ｉｃ　ａｃｉｄ　）またはその塩類、および甘草中にグ
リチルリチンと共存しトリテルペン骨格をもつ、グリチ
ルリチンと類縁の配糖体、更にグリチルリチン酸または
その塩類とα−１，４−グルコシル糖化合物の混合物に
サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼを作
用させて得られるα−グルコシルグリチルリチンなどで
ある。

α−グルコシルグリチルリチンは、γ−サイクロデキス
トリンを選択的に生産する場合の原料として好適である
。

サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼとし
ては、多くの酵素が公知となっているが、本発明に適応
出来る酵素は、サイクロデキストリンを生産する能力が
あり、かつグリチルリチン類の糖部にα−１，４−グル
コシル糖転移能があればよく、本発明が規定する反応条
件と適合し、効率的にγ−ザイクロデキストリンまたは
α−グルコシルグリチルリチンを生産する酵素としては
、バチルスステアロザーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　５ｌｅａ＋ｏｌｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　）が生産す
るサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼが
適している。

アミラーゼ類とは、一般に高等動物、高等植物、カビ、
細菌など自然界に広く分布し、αグルコシル結合した多
糖類を加水分解する酵素であるが、本発明においてはα
−グルコシル結合した多糖類のα−１，４−グルコシル
結合に作用し、加水分解する酵素であればよく、その起
源については特に問わない。

非極性合成吸着剤としては、スチレンとジビニルベンゼ
ンの共重合体からなる巨大網状構造をもつ多孔性ポリマ
ーで、三菱化成工業■製のダイヤイオンＩＰ−２０，オ
ルガノ（横裂のＸＡＤ−２住友化学工業■製のデュオラ
イトＳ−８６１などである。

陽イオン交換樹脂としては、グリチルリチン酸のアルカ
リ金属塩、アンモニウム塩　アルカリ土類金属塩などと
接触し、これらの陽イオンを交換し、グリチルリチン酸
に交換する能力があればよく、例えばスチレンとジビニ
ルベンゼンの共重合体を骨格としてスルフォン基を導入
したアンバーライト　ＩＲ−１２０Ｂ　（オルガノ■製
）。

ダイヤイオン５ＫＩＢ　（三菱化成工業■製）などが適
している。

本発明に用いられる低級アルコールとはメタノール、エ
タノール、ノルマルブロパノールイソプパノールおよび
ブタノールなどである。

本発明におけるγ−サイクロデキストリンを選択的に生
産する最適条件は第１図に示す如くであり、基質濃度は
５〜５０％範囲において低い程よいが、効率的な生産に
は１０％程度が好適である。ｐＨは反応生成物の選択性
において最も重要なファクターであり、γ−サイクロデ
キストリンを選択する場合にはｐｔｌ？、Ｉ］が至適で
ある。

澱粉または澱粉加水分解物とグリチルリチン類の配合比
率は、γ−サイクロデキストリンの生成量に対して澱粉
類が過剰に存在する場合、γ−サイクロデキストリンの
最大生成量は、グリチルリチン類のアグリコンであるト
リテルペンペン骨格とほぼ等モルであり、澱粉または澱
粉加水分解物に対する生成量に限度があり、最適配合比
率が存在する。γ−サイクロデキストリンの効率的な生
産を行うためには、ＤＥ２〜１０の澱粉加水分解物が好
適で、その配合比率は、トリテルペン骨格量に対して、
５〜６倍が好適である。このときグリチルリチン類とし
てグリチルリチン酸またはその塩類を用いた場合には、
澱粉類に対するγ−ザイクロデキストリンの生成率は４
０％程度であるが、α−グルコシルグリチルリチンを用
いた場合には約５０％に達する。

α−グルコシルグリチルリチンを選択的に生産するとき
の最適条件は、第２図に示す如くであり、基質濃度は５
〜５０％の範囲において高い程生成率が高（なる。基質
濃度が高過ぎると原料の溶解性１反応液の粘度上昇など
作業性を低下させるので、３０％程度が好適である。

ｐＨは、６．０が至適で、それ以下では、生成率が急速
に低下する。

澱粉または澱粉加水分解物とグリチルリチン類の配合比
率は、澱粉類の比率が高い程、グリチルリチン類に対す
るα−グルコシルグリチルリチンの生成率は高くなり、
一定値に収斂する傾向を示すが、基質総量に対する生成
率は低下する。

したがって最も効率的な生産を行なうためには、グリチ
ルリチン類に対して３倍量の澱粉類の配合が好適である
。

このときグリチルリチン類の糖転移反応率は約６５％で
ある。γ−サイクロデキストリンとαグルコシルグリチ
ルリチンの双方を生産するときは、それぞれを単独に生
産する場合の最適条件の中間条件で双方の合計生成率が
最も高くなる。

即ち、基質濃度２０％、ｐｆ１６．５．基質の組成はグ
リチルリチン類１に対して澱粉類３の割合が好適である
。このときγ−サイクロデキストリンの生成率は３３％
、α−グルコシルグリチルリチンの生成率は５８％であ
る。

γ−ザイクロデキストリンとα−グルコシルグリチルリ
チンの混合組成物を生産する場合には、その用途、目的
に応じてγ−サイクロデキストリンとα−グルコシルグ
リチルリチンをそれぞれ単独に生産するときの最適条件
の中間領域で任意に選ぶことが出来る。

本発明は、糖転移反応と反応生成物の分離精製法の適切
な組合せによって、γ−サイクロデキストリンとα−グ
ルコシルグリチルリチンの効率的、選択的生産がなし得
るものである。

糖転移反応生産物中には、γ−ザイクロデキストリンを
主体にしたサイクロデキストリン類およびα−グルコシ
ルグリチルリチンと未反応物である澱粉加水分解物およ
びグリチルリチンなどを含む。これら反応生成物および
未反応物を非極性合成吸着剤に接触させるとき、それぞ
れの成分の極性の違いによる非極性合成吸着剤との親和
性の差を利用して分離、精製を行うものである。

この分離、精製において澱粉加水分解物の分子量が小さ
い程、またα−グルコシルグリチルリチンおよびグリチ
ルリチン類の官能基が酸型である場合に効率的な分離が
行なわれる。

澱粉類にサイクロデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼを作用させて得られる反応生成物からサイクロデキ
ストリンを分離、精製する前処理として、アミラーゼ類
を単独または組合せて作用せしめ、未反応物である澱粉
加水分解物および一部のサイクロデキストリンを少糖類
に分解する方法が開示されている（特開昭５６８０５号
、特開昭５７−３０７０２号、特開昭６２−１１７０１
号）。このときアミラーゼの選択、組合せによってγ−
サイクロデキストリンの分解が生起する。

しかし、本発明による糖転移反応生成物では、グリチル
リチン類が共存することによって、γサイクロデキスト
リンはグリチルリチン類と安定な包接複合体を作り、ア
ミラーゼ類に対する抵抗性が増し、分解を抑えることが
出来る。

このことは、第１表の実験結果が明白に示している。従
って、未反応の澱粉加水分解物を少糖類に分解する効率
的な方法は、糖転移反応率期にアミラーゼ類を添加し、
サイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼと競
合的に作用せしめることにある。

第１− 表 表中の記号の説明 γ−ＣＤ：　　γ−サイクロデキストリンＤｘ：　　デ
キストリン　　ＤＥ年７ ＧＬ：　　グリチルリチン Ｇｌｃ−ａｎｙ　　：　　グルコアミラーゼα−ａｍｙ
　　：　　α−アミラーゼ β−ａｍｙ　　：　　β−アミラーゼ Ｇｌｃ　　　　：　　グリコース Ｍａｌｌ　　　：　　マルトース Ｄｅｘｔｒａｎ　　；　　重合度３以上のデキストラン
酵素処理条件 基質濃度１０％、９１１：６．０．温度６０℃２時間４
１ｕ酵素添加量 アミラーゼ１％／（７−ＣＤ＋ＤＸ）、ＣＧＴａｓｃ　
５（ｌｕｎｉｌ／ｇ　（７−ＣＤ十〇Ｘ）成分含有率測
定：高速液体クロマトグラフィーによるＤｅｘｔｒａｎ
含有率＝　１００−１００−７−ＣＤ−Ｇｌｃ−本発明
における陽イオン交換樹脂処理は、糖転移反応の際に添
加したグリチルリチン類を非解離の酸型にし、非極性合
成吸着剤に対する親和性を高め、より効率的な分離を行
なって高純度のγ−サイクロデキストリンを得るためで
ある。

陽イオン交換樹脂処理後の反応液は、グリチルリチン酸
または、α−グルコシルグリチルリチン酸の特性ｐＨで
ある２〜３を示す。したがって、使用する陽イオン交換
樹脂量は処理液のｐ■を２〜３にするための必要量でよ
い。

第２表は、陽イオン交換樹脂処理の効果を示した実験例
である。

第２表 陽イオン交換樹脂はアンバーライトＩＲ−１２０ＢＩＤ
ｍｌ、非極性合成吸着剤はダイヤイオンＨＰ−２０１０
０ｍｌを使用した。

溶離は、水、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール、９０％（Ｖ
／Ｖ）メタノール各２００　ｍｌで行なった。各溶離液
に対応するフラクションを採取し、グリチルリチンの回
収率を高速液体クロマトグラフィーによって分析した。

本発明における非極性合成吸着剤による糖転移反応生成
物からγ−サイクロデキストリンまたはα−グルコシル
グリチルリチンの分離、精製は次のようにして行なわれ
る。

アミラーゼ処理、陽イオン交換処理を行なった反応液を
非極性合成吸着剤を充填したカラムに通液し、サイクロ
デキストリン類、グリチルリチン類を吸着せしめ、水で
十分に洗浄する。

このとき共存するグルコース、マルトースおよび低分子
のマルトオリゴ糖が流出して、吸着成分の純度が向上す
る。非極性合成吸着剤に対する非吸着成分量は、糖転移
反応後のアミラーゼ処理の程度によって決まり、アミラ
ーゼ処理が充分であれば、糖転移反応における未反応澱
粉類の大部分を水洗浄液中に溶出することが出来る。

γ−サイクロデキストリン、α−グルコシルグリチルリ
チン等吸着成分に対しては夫々の分別溶出を検討し、含
水率を変えたアルコールによって達せられることを見出
した。メタノールによる場合は、サイクロデキストリン
類の溶出に４５〜５５％（Ｖ／Ｖ）メタノールが、グリ
チルリチン類の溶出に８５〜９５％（Ｖ／Ｖ）メタノー
ルが適している。

エタノールによる場合は、サイクロデキストリン類の溶
出に１５〜２５％（Ｖ／Ｖ）エタノールが、グリチルリ
チン類の溶出に６５〜７５％（Ｖ／Ｖ）エタノールが適
している。

γ−サイクロデキストリンを選択生産する場合には、サ
イクロデキストリン類の溶出画分を採取し、晶析を行な
えば、はとんど純粋のγ−サイクロデキストリンを得る
ことが出来る。

サイクロデキストリン類の溶出画分にはαβ−サイクロ
デキストリンが少量含まれているが、含水メタノール中
からの晶析によって完全に除去することが出来る。

α−グルコシルグリチルリチンを選択生産する場合には
グリチルリチン類の溶出画分を採取し、アルコールを留
去した後任意の製品形態に加工することが出来る。

〔実施例〕

次に実施例を示し、本発明を更に詳細かつ具体的に説明
する。

実施例１ 市販デキストリン（サンデック＃７〇　　三相澱粉工業
■製）３７．５ｇと市販グリチルリチン（サンリチン３
１２　　山陽国策バルブ■製）１２．５ｇを水４５０ｍ
１に溶解し、ｐＨを７．０に調整した後、バチルス　ス
テアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｌｅａ＋ｏ
ｌｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）が生産するサイクロデキス
トリングルカノトランスフェラーゼを６００単位添加し
て、５０°０１２４時間酵素反応を行なった。

続いて市販のグルコアミラーゼ（長潮産業■製グルコチ
ーム）０．５ｇを添加して５０℃で４時間保持して、残
留デキストリンの加水分解を行ない、１００℃、１５分
間加熱して酵素を失活させた。

このとき反応液中の成分は高速液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、γ−サイクロデキストリン１５
ｇ、β−サイクロデキストリン０．２ｇ、　　α−サイ
クロデキストリン０．８ｇ。

α−グルコシルグリチルリチン３．３ｇが生成している
ことが確認された。γ−ザイクロデキストリンの対デキ
ストリン生成率は４０％であった。

この反応液は濾過後、アンバーライト　ｌＲ１２ＯＢ　
（オルガノ■製）　　］［ｌ［１ｍｌを充填したカラム
とダイヤイオンＩＩＰ−２１１（三菱化成工業■製）８
００　ｍｌを充填したカラムを直列に配置し、ＨＰ−２
０に対してＳＶ−＋、Ｏの速度で通液し、続いて水８０
０ｍ１．５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール８００ｍ１．９０
％（Ｖ／Ｖ）メタノール８　［１０ｍｌで溶出を行なっ
た。

水溶出画分にはデキストリンの加水分解生成物であるグ
ルコースを主体とした少糖類が溶出し、５０％（Ｖ／Ｖ
）メタノール溶出画分にはγ−サイクロデキストリンを
主体としたサイクロデキストリン類が溶出し、高速液体
クロマトグラフィーで分析した結果、γ−サイクロデキ
ストリンの純度８０％１回収率９５％であった。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノールによる溶出画分は、グリチ
ルリチンおよびα−グルコシルグリチルリチンが溶出し
、はぼ完全に回収出来た。

５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分は濃縮後メタノー
ル濃度が７０％（Ｖ／Ｖ）になるようにメタノールを加
え、冷却放置し、γ−サイクロデキストリンの結晶を得
た。母液を分離後の乾燥結晶は、１２．１ｇあり、高速
液体クロマトグラフィーによる分析の結果、水晶はモノ
ピークであり、和光紬薬工業■製γ−サイクロデキスト
リン試薬（含量９７％以上）を基準にして、同等以上の
純度を示した。晶析によるγ−サイクロデキストリンの
回収率は８５％であり、原料デキストリンに対する収率
は３２．３％であった。

母液中にはαおよびβ−サイクロデキストリンが濃縮さ
れ、α、β、γ−サイクロデキストリンの混合物として
、食品グレードでの利用価値がある。

実施例２゜ 市販デキストリン（サンデック＃７〇三和澱粉工業■製
）７５ｇと市販グリチルリチン（サンリチン３１２山陽
国策パルプ■製）２５ｇを水２００ｍ１に溶解し、ｐＨ
を６，０に調整した後、バチルスステアロサーモフィラ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｔｅａ「。

ｌｈｅ＋ｍｏｐｈｉｌｕｓ）が生産するサイクロデキス
トリングルカノトランスフェラーゼを１２００単位添加
して反応液とした。

この液を７０°Ｃで２４時間保持して酵素反応を行なっ
た後、１００℃で１５分間熱処理して酵素失活させた。

このとき反応液中の成分は高速液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、α−グルコシルグリチルリチン
１６ｇとサイクロデキストリン類が５ｇ生成しているこ
°とが確認された。グリチルリチンに対する糖転移反応
率は６５％であり、デキストリンに対するγ−サイクロ
デキストリンの生成率は６％であった。

反応液は濾過後アンバーライトＩＲ］２０Ｂ　（オルガ
ノ（掬製）　　２ＱＱｍｌを充填したカラムとダイヤイ
オンＩ（Ｐ−２０（三菱化成工業■製）　　８０［１ｍ
ｌを充填したカラムを直列に配置して、３０°Ｃ以下ま
で冷却した酵素反応液をＩＩＰ−２０に対してＳＶ＝＋
、Ｏで通液し、５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール８００ｍ１
で洗浄後。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール８ｆＪ　ＩＩ　ｍｌで溶出
を行なった。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分を濃縮乾固して２
５ｇの粉末を得た。

本市は、液体クロマトグラフィーによって分析した結果
、α−グルコシルグリチルリチン７５％を含み、グリチ
ルリチン特有の苦味、嫌味が全くないまろやかな１」味
を有し、あらゆる飲食物の旧味付に利用し得るばかりで
なく、各種の飲食物、食品累月、医薬品などの呈味改良
剤、矯味剤として利用し得るものである。

実施例３ 市販デキストリン（パインテックス＃　１００松谷化学
工業（株制）３０ｇと実施例２て得たα−グルコシルグ
リチルリチン２０ｇを水４５０ｍ１に溶解し、ｐｌ＋を
７．０に調整した後、バチルス　ステアロサーモフィラ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｌｅａ＋ｏｌｌ＋ｅｒｍｏ
ｐｈｉｌｕｓ）が生産するサイクロデキストリングルカ
ノトランスフェラーゼを６００単位添加して、５０℃、
２４時間酵素反応を行なった。続いて市販のグルコアミ
ラーゼ（長潮産業掬製グルコチーム）Ｉ］、５ｇを添加
して５０°Ｃで４時間保持して、残留デキストリンの加
水分解を行ない、］００’Ｃ１１５分間加熱して酵素を
失活させた。

このとき反応液中の成分は高速液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、γ−ザイクロデキストリン１５
．２ｇ、　　β−サイクロデキストリン０．３ｇ、　　
α−サイクロデキストリン０．８ｇが生成していること
が確認された。またα−グルコシルグリチルリチンには
変化が認められなかった。この反応によるγ−ザイクロ
デキストリンの対デキストリン生成率は５０．７％であ
った。

アンバーライト　ＩＲ−１２０Ｂ　（オルガノ掬製）１
００　ｍｌを充填したカラムとダイヤイオンＩ　Ｐ　−
２（＋（三菱化成工業■製）　　８００ｍ１を充填した
カラムを直列に配置し、３０°Ｃ以下まで冷却した酵素
反応液をＨＰ−２０に対してＳＶ＝　１．０で通液し、
続いて水８００ｍ１．５０％（Ｖ／Ｖ）　メタ／−ル８
００ｍ１．９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール８００ｍ１で溶
出を行なった。

水溶出画分にはデキストリンの加水分解生成物であるグ
ルコースを主体とした少糖類が溶出し、５０％（Ｖ／Ｖ
）メタノール溶出画分にはγ−サイクロデキストリンを
主体としたサイクロデキストリン類が溶出し、高速液体
クロマトグラフィーで分析した結果、γ−ザイクロデキ
ストリンの純度は７９％９回収率９６％であった。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノールによる溶出画分は、α−グ
ルコシルグリチルリチンが溶出し、はぼ完全に回収出来
た。

５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分は濃縮後メタノー
ル濃度が７０％（Ｖ／Ｖ）になるようにメタノールを加
え、冷却放置してγ−サイクロデキストリンの結晶を得
た。母液を分離後の乾燥結晶は、１２．３ｇあり、高速
液体クロマトグラフィーによる分析の結果、本市はモノ
ピークであり、和光紬薬工業掬製のγ−サイクロデキス
トリン試薬（含量９７％以上）を基準にして、同等以上
の純度を示した。晶析によるγ−サイクロデキストリン
の回収率は８４．３％であり、原料デキストリンに対す
る収率は４１％であった。

実施例４゜ 市販デキストリン（パインテックス＃１００松谷化学工
業■製）３７．５ｇと市販グリチルリチン（サンリチン
３１２山陽国策パルプ■製）１２．５ｇを水２００　ｍ
ｌに溶解し、ｐ）ｌを６．５に調整した後、バチルス　
ステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａ＋
ｏｌｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）が生産するサイクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼを６００単位添加
して、７０°Ｃで２４時間酵素反応を行なった。

続いて反応液を５０℃まで冷却し、市販のグルコアミラ
ーゼ（長潮産業掬製グルコチーム）０．５ｇを添加して
５０℃で４時間保持して、残留デキストリンの加水分解
を行ない、　１００°０１１５分間加熱して酵素を失活
させた。

このとき反応液中の成分は高速液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、γ−サイクロデキストリン１２
．５　ｇ　、　　β−サイクロデキストリン０．２ｇ、
　　α−サイクロデキストリン０．６ｇ。

α−グルコシルグリチルリチン７．０ｇが生成している
ことが確認された。この反応によるγ−サイクロデキス
トリンの対デキストリン生成率は３３．３％、グリチル
リチンに対する糖転移反応率５８％であった。

アンバーライト　ＩＲ−１２０Ｂ　（オルガノ■製）１
００ｍｌを充填したカラムとダイヤイオンＨＰ−２０（
三菱化成工業■製）　　８００　ｍｌを充填したカラム
を直列に配置して、３０℃以下まで冷却した酵素反応液
をｌｌｌ’−２（ｌに対して５Ｖ＝１．［ｌで通液し、
続イテ水８０［１ｍｌ、　５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール
８Ｑ（１ｍｌ。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール８００　ｍｌで溶出を行な
った。

水溶出画分にはデキストリンの加水分解生成物であるグ
ルコースを主体にした少糖類が溶出し、５０％（Ｖ／Ｖ
）メタノール溶出画分にはγ−サイクロデキストリンを
主体にしたサイクロデキストリン類が溶出し、９０％（
Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分には、α−グルコシルグリ
チルリチンおよびグリチルリチンが溶出した。

各溶出画分を高速液体クロマトグラフィーによって分析
した結果、水溶出画分にはγ−サイクロデキストリンが
少量混入している他は、デキストリンの加水分解生成物
であるグルコースを主体にした少糖類であった。５０％
（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分はγ−サイクロデキスト
リンを主体にしたサイクロデキストリン類で、γ−サイ
クロデキストリンの回収率は９４％であった。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分は、α−グルコシ
ルグリチルリチンおよびグリチルリチンで、これらグリ
チルリチン類の回収率はほぼ１００％であった。

５０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分については、実施
例１と同様の方法て晶析を行いγ−サイクロデキストリ
ンの乾燥結晶９．５ｇを得た。このγ−ザイクロデキス
トリンの純度は、和光紬薬工業（用製試薬（含量９７％
以上）に比べ同等以上であり、デキストリンに対する収
率は２５３％であった。

９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分については、実施
例２と同様に濃縮乾固して９．４ｇの糖（＝Ｊ加グリチ
ルリチンの粉末を得た。分析の結果、αグルコシルグリ
チルリチンの含有率は、７４．５％であった。

実施例５゜ 市販デキストリン（パインデックス＃１００松谷化学工
業■製）３７．５ｇと市販グリチルリチン（サンリチン
３１２山陽国策バルブ■製）１２．５ｇを水２００ｍ１
に溶解し、ｐＨを６．５に調整した後、バチルス　ステ
アロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｌｅａｒｏｌ
ｈｅ＋ｍｏｐｈｉｌｕｓ）が生産するサイクロデキスト
リングルカノトランスフェラーゼを６００単位添加して
、７０°Ｃで２４時間酵素反応を行なった。

反応液は１００℃で１５分間加熱して酵素を失活させた
。

このとき反応液中の成分は高速液体クロマトグラフィー
によって分析した結果、γ−サイクロデキストリン１２
．３　ｇ　、　　β−サイクロデキストリン０．２ｇ、
　　α−ザイクロデキストリン０．６ｇα−グルコシル
グリチルリチン７．１　ｇが生成していることが確認さ
れた。この反応によるγサイクロデキストリンの対デキ
ストリン生成率は３２．８％　グリチルリチンに対する
糖転移反応率５９％であった。

アンバーライト　ＩＲ−１２０Ｂ　（オルガノ■製）１
００ｍｌを充填したカラムとダイヤイオンＨＰ−２０（
三菱化成工業■製）　　８００ｍ１を充填したカラムを
直列に配置して、３０°Ｃ以下まで冷却した酵素反応液
を）ＩＰ−２０に対してＳＶ＝　１．　［１で通液し、
続イテ水８００　ｍｌと９０％　（Ｖ／Ｖ）　メタ／　
−ル８０［１ｍｌ　で順次溶出を行なった。水溶出画分
は廃棄し、９０％（Ｖ／Ｖ）メタノール溶出画分を採取
して、メタノール分を留去した後乾燥して粉末製品２８
．５ｇを得た。

この粉末製品は高速液体クロマトグラフイーで分析した
結果、γ−サイクロデキストリン４１％、β−サイクロ
デキストリン０．７％、α−サイクロデキストリン２，
０％　α−グルコシルグリチルリチン２４．９％、グリ
チルリチン１１．５％を含む組成物であることがわかっ
た。

〔発明の効果〕

本発明によれば、澱粉類とグリチルリチン類にサイクロ
デキストリングルカノトランスフェラーゼを作用させる
に際して、アミラーゼ類を共存させ、更に反応条件の選
択と非極性合成吸着剤を用いた分別法の組合せによって
、γ−サイクロデキストリン単独、α−グルコシルグリ
チルリチン単独　γ−サイクロデキストリンおよびα−
グルコシルグリチルリチン双方、およびγ−サイクロデ
キストリンとα−グルコシルグリチルリチンの混合物を
高収率で効率よく、しかも任意に選択生産出来る。γ−
サイクロデキストリンは、包接能力、溶解度に優れた機
能を有し、食品、医薬品、化粧品などの分野で利用出来
る。α−グルコシルグリチルリチンおよびγ−ザイクロ
デキストリンとα−グルコシルグリチルリチンの混合組
成物はマイルドな甘味と、矯味性を有することから、飲
食物の甘味付けや呈味性の改良に利用出来る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、基質の組成をデキストリン３：グリチルリチ
ン１とし、基質濃度１０％、サイクロデキストリングル
カノトランスフェラーゼ添加量１２．５ｕｎｉｌ／基質
固形分（ｇ）、処理温度５０°Ｃ処理時間２４時間で糖
転移反応を行なった場合の基質ｐＨに対するγ−サイク
ロデキストリンの生成率と、α−グルコシルグリチルリ
チンの生成率の関係を示すグラフである。第２図は基質
組成をデキストリン３：グリチルリチン１とし、基質濃
度３０％、サイクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼ添加量１２．５ｕｎｉｌ／基質固形分（ｇ）、処
理温度７０℃、処理時間２４時間で糖転移反応を行なっ
た場合の基質ｐＨに対するγサイクロデキストリンの生
成率と、α−グルコシルグリチルリチンの生成率の関係
を示すグラフである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）澱粉またはその加水分解物とグリチルリチンまた
   はα−グルコシルグリチルリチンに対してサイクロデキ
   ストリングルカノトランスフェラーゼを作用させるに際
   して、以下の（Ａ）（Ｂ）（Ｃ）（Ｄ）のうちのいずれ
   かの方法によることを特徴とする （Ａ）γ−サイクロデキストリン単独 （Ｂ）α−グルコシルグリチルリチン単独 （Ｃ）γ−サイクロデキストリンおよびα−グルコシル
   グリチルリチンの双方 （Ｄ）γ−サイクロデキストリンとα−グルコシルグリ
   チルリチンの混合物 の高収率生産分離方法。 （Ａ）反応液のｐＨを６．５〜８．０、基質濃度を５〜
   ２０％に保持し、反応中または反応後アミラーゼ類を添
   加作用させ、更に陽イオン交換樹脂により　ｐＨを２〜
   ３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸着物を１０〜
   ５５％（Ｖ／Ｖ）メタノールまたは５〜３０％（Ｖ／Ｖ
   ）エタノールで溶出、晶析させる。 （Ｂ）反応液のｐＨを５．０〜６．５、基質濃度を２０
   〜４０％に保持し、反応後陽イオン交換樹脂処理により
   　ｐＨを２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸
   着物を６５〜９５％（Ｖ／Ｖ）低級アルコールに溶出さ
   せる。 （ｃ）反応液のｐＨを６．０〜７．０、基質濃度を２０
   〜２５％に保持し、反応中または反応後アミラーゼ類を
   添加作用させ、更に陽イオン交換樹脂処理により　ｐＨ
   を２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸着物を
   ４５〜５５％（Ｖ／Ｖ）メタノールと８５〜９５％（Ｖ
   ／Ｖ）メタノールまたは２０〜３０％（Ｖ／Ｖ）エタノ
   ールと６５〜７５％（Ｖ／Ｖ）エタノールにより夫々分
   別溶出させる。 （Ｄ）反応液のｐＨを５．０〜８．０、基質濃度を５〜
   ４０％に保持し、反応後陽イオン交換樹脂処理によりｐ
   Ｈを２〜３として非極性合成吸着剤に接触させ、吸着物
   を低級アルコールで溶出させる。
2. （２）澱粉またはその加水分解物とグリチルリチンまた
   はα−グルコシルグリチルリチンに対してサイクロデキ
   ストリングルカノトランスフェラーゼを作用させ、反応
   液のｐＨを５．０〜８．０、基質濃度を５〜４０％に保
   持した後、陽イオン交換樹脂でｐＨを２〜３として非極
   性合成吸着剤に接触させた吸着物のメタノールまたはエ
   タノール溶出区分を含有するγ−サイクロデキストリン
   とα−グルコシルグリチルリチンの混合された組成物。
3. （３）澱粉またはその加水分解物に対して、サイクロデ
   キストリングルカノトランスフェラーゼを作用させるに
   際して、グリチルリチンまたはα−グルコシルグリチル
   リチンとアミラーゼ類とを共存させ、反応後陽イオン交
   換樹脂および非極性合成吸着剤に接触させることを特徴
   とする反応生成物からのγ−サイクロデキストリンの選
   択的分離方法。
4. （４）澱粉またはその加水分解物に対してサイクロデキ
   ストリングルカノトランスフェラーゼを作用させて得ら
   れるサイクロデキストリン類にグリチルリチンまたはα
   −グルコシルグリチルリチンとアミラーゼ類とを共存さ
   せ、更に陽イオン交換樹脂および非極性合成吸着剤に接
   触させることを特徴とする反応生成物からのγ−サイク
   ロデキストリンの選択的分離方法。