JPH02245197A - ２―アミノ―４―メチルホスフィノ―酪酸誘導体の酵素分割法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の利用分野１ 本発明は２−アミノ−４−メチル−ホスフィノ酪酸誘導
体の酵素分割法に関する。

［従来技術及び発明が解決しようとする課題］ドイツ特
許出願公開第２，９３９，２６９号明細書（米国特許第
４，２２６，９４１号明細書）およびドイツ特許出願公
開第２，７１７，４４０号明細書（米国特許第４，１６
８，９６３号明細書）には、ラセミ−ホスフィノトリシ
ンまたは、有機系または無機系塩基または一酸とのその
塩の除草作用が、Ｌ−型−２アミノ−４−メチルホスフ
ィノ酪酸（以下では、Ｌ−ホスフィノトリシンまたはＬ
−ＰＴＣと称する）またはその塩から生じることが開示
されている。

Ｄ−型は実質的には不活性である。ホスフィノトリシン
は容易に入手できるラセミ体に対して、Ｌ−ＰＴＣは従
来には比較的複雑な方法によってしか得るとかできなか
った。Ｌ−型を経済的方法で製造することを可能とする
有用な方法を開発することが必要であると思われていた
。

既に、Ｌ−ＰＴＣをＬ−ＰＴＣ−アラニル−アラニン即
ち、文献で知られており且つ微生物合成によって得られ
る抗生物質□を酸性加水分解することによって（特開昭
４８−８５，５３８号公報）または酵素分解（特開昭４
９−３１８９０号公報）によって得ることができること
が開示されている。

更に、化学的に合成されたラセミ−ＰＴＣ前駆体のラセ
ミ体を酵素分割することを基本とする方法も公知である
。ドイツ特許出願公開第２，９３９゜２６９号明細書に
は、Ｎ−アシル−ＰＴＣ，特にＮ−アセチル−ＰＴＣが
、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　、、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の微生物の特別に
繁殖させた菌株によって得ることのできるアシラーゼに
よって分割されることが開示されている。この方法では
Ｎ−アシル−Ｌ−ＰＴＣはＮ−アシル−Ｄ−ＰＴＣより
も非常に迅速に分割される。ドイツ特許出願公開第２，
９３９，２６９号明細書によって示された情報によれば
、用いるアシラーゼはＮ−アシル−Ｌ−ｒ’Ｔｃ以外の
物質、例えば通例のＬ−アミノ酸のＮ−アシル誘導体に
ほとんど影響を及ぼさないかまたは非常に僅かしか影響
を及ぼさない。

反対にドイツ特許出願公開第３，０４８，６１２号明細
書（米国特許第４，３８９，４８８号明細書）では、市
販のアシラーゼがｒａｃ−アシル−ＰＴＣを分割する試
みにおいて一般に成功していないことが断言されている
。反対に、ドイツ特許出願公開第３゜０４Ｂ、６１２号
明細書には、フェナセチル−ＰＴＣが用いられた時にペ
ニシリン−Ｇ−アシラーゼ（ｐｅｎＧ−アシラーゼ）の
活性および選択性が改善される有益な個別的ケースが開
示されている。要するにこのことは、八、Ｐｌａｓｋｉ
ｅ　、　Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ丼、７８３　（Ｉ
９７８）によれば、フェナセチル化された簡単な天然ア
ミノ酸、例えばフェナセチルアラニンまたはフェナセチ
ルバリンと比較すれば、基質のアミノ酸部分の変化がＬ
−異性体の脱アシルの為のｐｅｎ−Ｇ−アシラーゼ活性
または選択性の象、激な減少をもたらすことが予想され
ていたので、驚くべきことである。

ドイツ特許出願公開第２，９２７，５３４号明細書（米
国特許第４，３８９，４８９号明細書）およびドイツ特
許出願公開第２，２１５，８５３号明細書（米国特許第
３，８１３，３１７号明細書）には、天然−および合成
アミノ酸のラセミ体、特にアリール置換されたアミノ酸
をプロテアーゼによるカルボン酸エステル分解によって
分割することが開示されており、この場合も、Ｌ−エナ
ンチオマーは酵素的に有利に反応する。しかしながら燐
を含有する基を持つアミノ酸を分割することが可能であ
るかもしれないということは上記文献には何ら記載され
ていないことに注目すべきである。これは、多分、Ｐ　
（Ｖ）−含有化合物、特に一般式Ｒ’Ｒ″Ｐ　（０）　
ＯＲ”の誘導体が、それらの立体的配列（Ｍ、Ｄｉｘｏ
ｎ　ＸＥ、Ｗｅｂｂ、　”Ｅｎｚｙｍｅｓ″、ｅ、Ｅｄ
ｉｔｉｏｎ、Ｌｏｎｇｍａｎｓ、　Ｇｒｅｎｎ　＆　Ｇ
ｏ、　ＬＴＤ　、ロンドン、１９６４、第３４６〜３５
２頁参照）の為に、酵素的に加水分解されたカルボン酸
エステルの過渡的状態に類似しそして従って加水分解的
活性酵素への失活的影響を及ぼし得るという事実のため
である。ドイツ特許出願公開第３，０４８，６１２号明
細書には、エステラーゼ活性を有しそして通例のＤＬ−
アミノ酸の場合に高活性で且つ高選択性であるプロテア
ーゼがり、Ｌ−ＰＴＣエステル類の場合に活性を有さな
いかまたは非常に低下した活性しか有さないという事実
が実際に開示されている。

上述の従来技術に基づいて、ラセミ体の効果的な酵素分
割が、ＰＴＣの燐酸部分で変性された容易に入手し得る
二重保護または三重保護されたＰＴＣ誘導体を用いて実
施できることは断言できなかった。

［発明の構成１ 本発明は、一般式（Ｉ） ＣＨａ−Ｐ−ＣＨｚＣＨｚ−Ｃ１ｌ−ＣＯＲ２（Ｉ　）
ＯＲ’ＮＨＲ” ［式中、 ａ）　　Ｒ’　は一つまたは複数のハロゲン原子、例え
ば弗素原子、塩素原子、臭素原子または沃素原子によっ
て置換されているか非置換のまたはＣ０〜Ｃ８−アルコ
キシ基によってモノ置換されたまたはポリ置換された枝
なしまたは技分かれＣ３〜Ｃｏｏ−アルキル基であるか
、またはＲ１は０１〜Ｃ４−アルキル基、０１〜Ｃ４−
アルコキシ基およびハロゲン原子より成る群の内の一つ
または複数゛によって置換されていてもよい０３〜Ｃ６
−シクロアルキル基であるか、またはＲ１はＣ３〜Ｃ１
゜−アルケニル基、Ｃ３〜ＣＩＯアルキニル基またはベ
ンジル基であり、Ｒ２は水酸基フまたは、一つまたは複
数のハロゲン原子、例えば弗素原子、塩素原子、臭素原
子または沃素原子で置換されたまたは非置換のまたは、
０１〜Ｃ８−アルコキシ基でモノ置換またはポリ置換さ
れた枝なしまたは枝分かれＣ３〜Ｃ２゜−アルコキシ基
であるか、またはＲ２はアミノ基または（０１〜ＣＺＯ
−アルキル）アミノ基でありそして Ｒ３はホルミル基：水酸基、ハロゲン原子、０１〜Ｃ４
−アルコキシ基、０１〜Ｃ４−アルキルチオ基より成る
群の内の一つまたは複数の基によってアルキル基の部分
で置換されたまたは置換されていない枝なしまたは枝分
かれ（Ｃ０〜Ｃ１□−（アルキル）−カルボニル基；お
よび、Ｃ０〜Ｃ１□−アルキル基、Ｃ０〜Ｃ１□−アル
コキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基およびＣＦ３基より
成る群の内の三つまでの基で置換されていてもよいフェ
ニル基であるかまたは Ｒ３はベンゾイル基；またはＣ，−Ｃ，□−アルキル基
、Ｃ，−Ｃ，□−アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ
基およびＣＦ、基より成る群の内の１〜３個の基で置換
されているベンゾイル基であり または ｂ）　Ｒ’　はａ）で定義した通りであり、Ｒ２はｂ）
で定義した通りであるが、水酸基ではなくそして Ｒ３はｂ）で定義した通りであるかまたは、アミノ基に
とって通例の別の保護基であり、特に、水酸基、ハロゲ
ン原子、ＣＩ””Ｃ４−アルコキシ基、０１〜Ｃ４−ア
ルキルチオ基、フェニル基または、０１〜Ｃ１゜−アル
キル基、ＣＩ”ＣＩｚ−アルコキシ基、ハロゲン原子、
ニトロ基またはＣＦ３基の中から選択される１〜３個の
置換基を持つフェニル基より成る群の内の一つまたは複
数の基でアルキル基の部分で置換されているかまたは非
置換の技なしまたは枝分かれ（Ｃ０〜Ｃ１□−アルコキ
シ）−カルボニル基およびＣ０〜Ｃ１□−アルキルスル
ホニル基、および、ＣＩ”　Ｃ＋２−アルキル基、Ｃ１
〜ＣＩ□−アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基およ
びＣＦ３基の内の３個までの基で置換されていてもよい
フェニルスルホニル基から選択される一般的なＮ−保護
基である。１ で表されるＤ−型−およびＬ−型２−ＰＴＣ誘導体の混
合物を水性−または水性有機性媒体中で加水分解活性酵
素にて処理し、 好ましくはａ）の場合に、Ｎ−アシル基をはずす酵素［
アシラーゼ（ａｃｙｌａｓｅ）をそしてｂ）の場合には
プロテアーゼまたはエステラーゼ活性酵素を加水分解活
性酵素として用いることを特徴とする、ＰＴＣ誘導体の
酵素分割法に関する。

本発明の方法は、特に、上記式（Ｉ）中、ａ）　　Ｒ’
が技なしまたは技分かれＣ１〜Ｃｌ０−アルキル基また
は、ハロゲン原子、例えば弗素原子または塩素原子でま
たはＣ０〜Ｃ４−アルコキシ基で置換されている０１〜
Ｃｌ０−アルキル基であるかまたはＲ１は０５〜Ｃ６−
シクロアルキル基であり、 Ｒ２ば水酸基；または枝なしまたは技分かれ０１〜ＣＩ
＋−アルコキシ基；または、ハロゲン原子、例えば弗素
原子または塩素原子でまたは自〜Ｃ４−アルコキシ基で
モノ置換またはポリ置換された０１〜Ｃ８−アルコキシ
基であるか、またはＲ２はアミノ基または（０１〜Ｃ３
゜）−アルキ、ルアミノ基でありそして Ｒ３はホルミル基；水酸基、ハロゲン原子、フェニル基
、ＣＩ〜Ｃ４−アルコキシＬ　Ｃ，〜Ｃ４アルキルチオ
基より成る群の内の一つまたは一つの基によってアルキ
ル基の部分で置換されたまたは置換されていない技なし
または技分かれ（Ｃ＋〜ＣＩＧ−アルキル）−カルボニ
ル基；および、Ｃ，〜Ｃ４−アルキル基、６１〜Ｃ４−
アルコキシ基およびハロゲン原子の中から選択される１
〜３個の基で置換されているフェニル基であるかまたは
、Ｒ３はベンゾイル基；または、０１〜Ｃ４−アルキル
基、０１〜Ｃ４−アルコキシ基およびハロゲン原子の中
から選択される１〜３個の基で置換されているベンゾイ
ル基であるか または ｂ）　Ｒ’はａ）で定義した通りであり、Ｒ２はａ）で
定義した通りであるが、水酸基ではなくそして Ｒ３はａ）で定義した通りであるがまたは、水酸基、ハ
ロゲン原子、メトキシ基、エトキシ基、フェニル基また
は、０１〜０４−アルキル基、Ｃ〜Ｃ４−アルコキシ基
およびハロゲン原子の群の内の１〜３個のＮｔ’Ａ基を
持つフェニル基によって置換されたまたは置換されてい
ない（０１〜Ｃ１゜−アルコキシ）カルボニル基である
Ｄ−型一とＬ−型ＰＴＣ誘導体との混合物を使用するの
が特に興味が持たれる。

上記の式（Ｉ） ａ）　　Ｒ’　は枝なしまたは技分かれ０１〜ｃ６−ア
ルキル基であるかまたはシクロヘキシル基であり、 Ｒ２は水酸基；または枝なしまたは枝分かれ０１〜Ｃ６
−アルコキシ基、特にメトキシまたは工トキシ基、また
はアミノ基でありそしてＲ３は（０１〜Ｃ４−アルキル
）−カルボニル基、特にアセチル基；または、フェニル
基で置換されたまたは、０１〜Ｃ４−アルキル基、０１
〜Ｃ４アルコキシ基およびハロゲン原子の中から選択さ
れた１〜３個の置換基を持つモノー〜トリ置換されたフ
ェニル基で置換された（Ｃ０〜Ｃ４−アルキル）−カル
ボニル基であるかまたはＲ３はベンゾイル基である または ｂ）　Ｒ’は枝なしまたは枝分かれ０１〜Ｃ６−アルキ
ル基であるかまたはシクロヘキシル基であり、Ｒ２は枝
なしまたは枝分かれ０１〜Ｃ６−アルコキシ基またはア
ミノ基でありそして Ｒ３はａ）で定義した通りであるかまたは枝なしまたは
技分かれ（０１〜Ｃ４−アルコキシ）カルボニル基、好
ましくは第三ブチルオキシカルボニル基であるかまたは
、Ｃ０〜Ｃ４−アルキル基、ＣＩ”’−Ｃａ−アルコキ
シ基およびハロゲン原子の群の内の３個までの基によっ
てフェニル環が追加的に置換されていてもよいベンゾイ
ルオキシカルボニル基である Ｄ−型−およびＬ−型ＰＴＣ誘導体の混合物を使用する
ものが殊に有利である。

Ｃｌ−Ｃ６−アルキル基は特に、メチル基、エチル基、
１−プロピル基または２−プロピル基、ｎ−１ｉ−１第
三−または２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、
ｎ−１ｉ−１第三−１２−または３−ペンチル基、ｎ−
ヘキシル基または立体異性体ヘキシル基がある。

０１〜Ｃ６−アルコキシ基は特に、（Ｃ，〜Ｃ６−アル
キル）−オキシ基があり、この場合のアルキル基は上で
定義した通りである。

更に詳細に定義されていなければ、ハロゲン原子は弗素
原子、塩素原子、臭素原子および沃素原子、殊に弗素原
子および塩素原子、特に塩素原子である。

本発明に従う分割は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３がａ）につ
いて示した意味を持つ式（Ｉ）のり、Ｌ−ＰＴＣ誘導体
のＮ−アシル分割によって実施することができるしまた
はＲ１、Ｒ２およびＲ３がｂ）について示した意味を持
つ式（Ｉ）の相応するり、Ｌ−ＰＴＣ誘導体の酵素加水
分解によるカルボキシルエステル分割またはカルボキシ
アミド分割によって実施することができる。

アシル化したα−アミノ基のＮ＝ニアシル割は、慣用の
方法によって反応混合物の水溶液から単離することがで
き、例えば未反応のＤ−ＰＴＣ誘導体および分割除去さ
れた式Ｒ’−ＯＨの酸を酸性領域のｐＨで有機溶剤で抽
出することによって除くことによって単離することがで
きる、Ｒ３がＨである相応するＬ−ＰＴＣ誘導体をもた
らす。抽出の工程ではＬ−ＰＴＣ誘導体がアンモニウム
塩の形で水溶液中に残留しそして次いで該水溶液を蒸発
処理によって乾燥し単離することができる。更に、結晶
化、蒸留、クロマトグラフィー等による分離も行うこと
ができる。場合によっては、上記混合物を室温で例えば
１２またはそれ以上のｐＨにてアルカリ性加水分解に委
ねることも可能である。その際、ホスフィノトリシンの
光学対掌体は遊離Ｌ−ＰＴＣ（Ｒ３＝Ｈ）またはＮ−ア
シル−Ｄ−ＰＴＣの形で存在下にしており、このものは
次いで上記の如く精製することができる（前に挙げたド
イツ特許出願公開第２，９３９，２６９号明細書および
同第３，０４８，６１２号明細書参照）。

Ｎ−アシル分割を用いる本発明の方法の為の適するアシ
ラーゼは、水性または水性有機性媒体中で十分に高い加
水分解活性を示すものである。

か−る酵素は慣用のアシラーゼの群から予備実験にて容
易に選択することができる。

ホスフィン酸エステル保護された誘導体の本発明に従う
Ｎ−アシル分割に適する酵素は、特にＮ−アセチル誘導
体の為には例えばアシラーゼ■（ＥＣ３，５，１，１４
）　、および特にフェナセチル誘導体の為にはペニシリ
ン−〇−アシラーゼ（ＥＣ３，５゜１．１１）がある。

ペニシリン−Ｇ−アシラーゼはしばしば専門家の文献で
は例えばペニシリン−Ｇアミダーゼまたはペニシリン−
アミドヒドロラーゼと称されている。

場合によっては、カルボン酸エステル官能基またはカル
ボキシアミド官能基を酵素的に分割することも可能であ
る。この場合には、−ＣＯ−Ｏまたは−ＣＯ−ＮＨ−基
に対してα−位にある保護されたアミノ基をほとんどの
あらゆる所望のＮ−保。

護基、特に、Ｔｈ、Ｇｒｅｅｎｅ　、　”Ｐｒｏｔｅｃ
ｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ”、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ
。

ニューヨーク、１９８１年、特に第２１８頁以降参照に
記載されているような慣用のＮ−保護基によって保護す
ることができる。

最後に記載した場合の適当な酵素は、特にプロテアーゼ
またはエステラーゼ活性酵素、特にセリンプロテアーゼ
およびチオールプロテアーゼ、特にスプチリシン（ＥＣ
３，４，４，１６、新分類Ｎｏ、　ＥＣ３，４，２１，
４）、α−キモトリプシン（ＥＣ２，４゜４．５、新分
類Ｎｏ、　ＥＣ３，４，２１，１）、パパイン（ＥＣ３
，４，４，１０、新分類Ｎｏ、　ＥＣ３，４，２２，２
）、フィシン（ＥＣ３，４，２２，３）またはブロメラ
イン（ＥＣ３，４，２２，４）がある。最初の二つはア
ミノ酸鎖の活性中心に一連の基を有し、後者の一つはア
ミノ酸鎖の活性中心としてシスティンを有している。ス
ブチリジンが特に有利である。同様に工業品グレードの
酵素も公知の様に、例えば商標名Ｍａｘａｔａｓｅ（製
造元；　Ｇ１５ｔ−Ｂｏｒｃａｄｅｓ　Ｎ、Ｖ、、Ｄｅ
ｌｆ　ｔ／Ｎ’ｅｔｈｅｒｌ　ａ　ｎ’ｄ　ｓ　）およ
びＡｌｃａｌａｓｅ（製造元；　Ｎｏｖｏ　Ｔｎｄｕｓ
ｔｒｉｅ　ＡＳ　、コパンハーゲン／デンマーク）モ公
知のように使用することができる。

Ｒ２がＯＲである酵素的に加水分解したＬ−ＰＴＣ誘導
体は、慣用の方法でまたは原則として公知の方法、例え
ば結晶化、蒸留、カラムクトマトグラフィーまたはイオ
ン交換クロマトグラフィーによっておよび特に、場合に
よっては、適当な有機溶剤によって水性相（有利なｐＨ
は６〜９である）から未反応Ｄ−ＰＴＣを０〜１０°Ｃ
の低めた温度にて特に迅速な抽出によって上手く単離す
ることができる。抽出法においては、カルボン酸エステ
ル分割またはカルボキシアミド分割で得られるＬ−ＰＴ
Ｃ誘導体が水性相にカルボキシＬ−−ト塩（Ｒ２＝Ｏ−
Ｍ　”　”）の形で残留する。この方法では、ｐＨは化
学的加水分解が未だ開始しない様に選択するべきである
。Ｄ−ＰＴＣ誘導体を分離除去した後に、Ｌ−ＰＴＣ誘
導体を慣用の方法と同様にして、例えば水で希釈された
鉱酸を用いて１〜２４時間の反応時間、２０°Ｃ〜溶液
の沸点までの温度で化学的加水分解に委ねる。適する鉱
酸には例えば塩酸または硫酸、特に希硫酸から濃硫酸ま
でのものがある。個々の場合には、有機酸も良好に適し
得る。全体的化学的加水分解は、Ｌ−ＰＴＣ誘導体に加
えてアシル基Ｒ３に相当するカルボン酸ももたらし、カ
ルボン酸を蒸発または適当な有機溶剤を用いる抽出によ
って水性の酸性溶液から除くことができる。水性相を次
いで蒸発させて乾燥する場合には、Ｌ−ＰＴＣをアンモ
ニウム塩の形で残留させる。

残留するＤ−ＰＴＣ誘導体を抽出法、蒸留、結晶化また
はクロマトグラフィーによる後続の精製処理に場合によ
っては委ねることができ、次いで酵素加水分解の副生成
物を、また場合によってはラセミ化後に、例えば熱約手
段によってまたは塩基、例えばアルコラードのアルコー
ル溶液の作用によって浄化してもよく、Ｄ、Ｌ−混合物
として酵素加水分解に委ねることができる。塩基でのこ
のラセミ化は、特に物質にとって穏やかである条件のも
とで進める。

自由状態または固定後の上記酵素は、慣用の方法でまた
は当業者に知られている方法で用いることができる。こ
の特定の物質は水性媒体中に溶解した溶液または懸濁液
の状態で用いる。

可能な濃度は０．１χから濃度は飽和溶液までである（
方法を懸濁状態で実施する場合が後者である）。個々の
場合に、水溶性溶媒、例えばジメチルスルホキシドまた
はメタノールを添加することができ、また水不溶性有機
溶剤を添加して二相混合物の状態でこの方法を実施する
ことも可能である。

一般に酵素分割の反応温度は、１０〜６０°Ｃ１殊に２
０〜５０°Ｃ１特に２０〜４０°Ｃである。本方法は例
えば不連続的にもまたはカラム法として連続的にも実施
することができる。

酵素加水分解は好ましくは、５〜９、特に６〜８．５の
ｐＨで実施するのが有利である。個々の場合には、方法
をカルボン酸エステルまたはカルボキシアミドの一般的
な加水分解を抑制する為には、ｐＨ５〜６で実施するこ
とも可能である。

反応の進行は基質、例えばＨＰＬＣの減少を通して監視
することができる。個々の場合、特にカルボン酸エステ
ル分割の場合には、反応の進行を簡単な方法、例えば一
定のｐＨを達成する為に配量供給しなければならない塩
基の量によって測定することができる。

酵素分割の生成物中のし一型化合物の含有量は、Ｌ−Ｐ
ＴＣをもたらすアルカリ性または酸性加水分解を実施し
、後続の誘導体化を原則として自体公知の方法［Ｄ、Ａ
ｓｗａｄ、　”Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　１３７．４０５〜４０９　（Ｉ９８４）］
　に従ってＨＰＬＣによって測定することができる。

Ｒ２がアミノ基またはアルキル、アミン基である一般式
（Ｉ）の化合物を除く、該化合物の出発化合物は公知で
あるかまたは自体公知の方法で製造できる　［ＪＰ−７
５−７，２３７；　ＷＯ７９−１１１４；　ＪＰ　７３
−．９１０１９；明治製菓研究年報■肝、（２０）　３
３〜８行参照１゜この関係の個々の実施例は実験部分に
掲載しである。Ｒ２がアミノ基またはアルキルアミノ基
である一般式（Ｉ）の出発化合物は新規化合物であり、
選択的に加水分解および所望の場合には、カルボン酸ア
ミドに相応するニトリルを経るＮ−アルキル化によって
製造することができる。上記のニトリル類は例えばヨー
ロッパ特許出願公開筒１９４，５２１号明細書（米国特
許節４，６９２，５４１号明細書）に記載されている様
に製造することができる。それ故に本発明は、式に該当
する純粋なエナンチオマーおよびジアステレオマーを含
み且つ立体異性体も含むそれらの新規化合物にも関する
。

場合により誘導されるＰＴＣ誘導体のＤ−またはＬ−記
号は、カルボキシル基を基準としてα位にありそして場
合によって保護されたアミノ基に結合している炭素原子
の所での配置を示している。Ｒ１で保護されたＰＴＣ誘
導体中の燐原子が追加的掌性中心である為に、これらの
Ｄ−またはＬＰＴＣ誘導体は一般に純粋なエナンチオマ
ーでなく、ジアステレオマーの混合である。驚くべきこ
とに、酵素分割にとって重要である上記のα炭素原子の
所での配置だけが重要なのである。

基Ｒ１の加水分解の後に、燐原子の所での掌性中心は、
０１１とＨとの間のプロトンが迅速に交換される為に実
質的に失われる。

Ｄ、　Ｌ−ＰＴＣ誘導体の分割の為のおよびＬ−ＰＴＣ
の製造の為の本発明の方法は、副生成物として得られる
塩の量が少ないことと共に、基質および生成物混合物が
有効に分割されることに特徴がある。望まない場合には
、酵素分割後に得られるＤ−ＰＴＣ誘導体を、穏やかな
条件のもとで、場合によっては予め単離することなしに
、容易にラセミ化することができそしてそれ故に酵素分
割の為に再び使用することができる。

本発明に従うエステル保護されたｐ−ｏ酸基を持つＰＴ
Ｃ誘導体を用いる場合に、ＰＴＣ誘導体のエナンチオ選
択性分割の為に市販のアシラーゼを用いることが可能で
あるという事実は、特に予期できなかった長所である。

ホスフィン酸エステルによる加水分解活性の抑制または
場合によっである副反応□即ち、ホスフィン酸エステル
の加水分解□が一般に認められないことは驚くべきこと
である。エステルとしてのホスフィン酸の保護は、特に
酵素的カルボン酸エステル分割の場合に反応速度にプラ
スの影響を及ぼし、たま個々の場合には、酵素によって
基質の受入を始めて可能とされる。

更に、構造の大きな変更にもかかわらず、ドイツ特許出
願公開第３，０４８，６１２号明細書に従って使用され
る如きあるＮ−フェナセチル基によってだけ保護されて
いるＰＴＣに比較して、Ｒ３がフェナセチルである本発
明で使用される式（Ｉ）のＰＴＣ誘導体の化学的性質だ
けでなく、少なくとも同じであるか若干の場合には増加
する反応速度と組み合わせてｐｅｎ−Ｇ−アシラーゼで
の有効なＮ−フェナセチル分割が同様に観察されること
が判った。後処理についての上記の長所の為に、本発明
の方法はこの場合にも卓越している。

紅■光勉ｉ 実省Ｉ津迂 エチル−〇、　Ｌ−（３−フェニルアセトアミド−３−
エトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン酸塩
（式１　：　Ｒ１＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ２＝　０ＣｚＨｓ　、
Ｒ″＝　Ｃ６Ｈ５−ＣＨ２ＣＯ）　： ８．９７ｇ　（０，０３ｍｏ、ｆ）のり、Ｌ−（３−フ
ェールアセトアミド−３−カルボキシプロピル）メチル
ホスフィン酸−ＪＰ　５５−００２５またはヨーロッパ
特許出願公開節０５４　、８９７号明細書に従って製造
を、１０ｍＡの氷酢酸と８０ｍ！のトリエチル−オルト
ホルマートとの混合物に溶解し、この溶液を３時間、還
流する。この反応混合物を回転式蒸発器で回転させそし
てシリカ−ゲル−カラム（移動相ＣＨｚＣＩ！、ｚ／メ
タノール、９：１）で精製する。９．７ｇ　（理論値の
９１χ）の無色の樹脂が得られる。

Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＰ、３）　：δ−７，４（Ｃ６Ｉｂ
、ｓ　、　５１１）；　６゜７　（Ｎｉｌ、ｔ　、　Ｉ
Ｈ）；　４．６５　（Ｃｌｌ　、ｍ　、ＬＨ）；　３．
５５〜４．２　（２Ｘ　ＣＨ２Ｃｌ＋３、ｍ　、４Ｈ）
；３．６５　（ＣＨｚ；　ｓ、２Ｈ）；　１．１〜２．
２　（ＰＣｌ３、ＣＨ２ＣＨ２，２ｘ　　Ｃ１（３ＧＨ
ｚ、ｍ、１３Ｈ）。

実】ｌ彫り メチル−〇、　Ｌ−（３−フェニルアセトアミド−３−
ｎブトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン酸
塩（式１　：　Ｒ’＝　ＣＩｌ３　、Ｒ２＝　ｎ−０−
Ｃ４）１１、Ｒ′３゜Ｃ６Ｈ３−ＣＩｌ。Ｃ０−）： ａ）　Ｄ、Ｌ、−（３−フェニルアセトアミド−３−ｎ
−ブトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン酸
：５０．０ｇ（０，１６７ｍｏｌ　のり、Ｌ、−（３−
フェニルアセトアミド−３−カルボキシプロピル）−メ
チルホスフィン酸を、１５０ｍ　＋２のｎ−ブタノール
に溶解し、スパチュラの先端−杯のｐ−）ルエンスルホ
ン酸を添加し、この混合物を次いで５時間、還流する。

この反応混合物を次に蒸発処理しそして、残りをｎ−へ
ブタンと一緒に粉砕して結晶化させる。融点９０°Ｃの
無色結晶５０ｇ（理論値の８４χ）を得る。

Ｕメチル−Ｄ、Ｌ、−（３−フェニルアセトアミド−３
−ｎブトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン
酸塩： １０．０ｇ（０，２８ｍｏ　ｒ！　）のＡ２ａ）で得ら
れた生成物を実施例１と同様に１０ｍＩ！、の氷酢酸と
８０ｍｊ２のトリメチル−オルトホルマートとの混合物
と反応させる。６．０ｇ（理論値の５８．２χ）の無色
の樹脂が得られる。

Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｆｆｉ３）　　：δ＝７．２　（Ｃ
６Ｈ５、ｓ　、　５Ｈ）；　６゜８　（Ｎｉｌ、　ｔ　
、　ＩＨ）；　４．６５　（ＣＨ、、ｍ　、１１（）；
　４．０５（ＣＨ２Ｃｌ１２ＣＨ３、ｔ　、　２Ｈ）；
　３．８　（ＰＯＣｌ２　、ｄｄ、　３Ｈ）；３．７　
（ＣＨ２、ｓ　、　２Ｈ）　、０．８〜２．２　（ＣＨ
２Ｃｈ則武り、　ＰＣｌ３、Ｃ）ＩｚＣＨｚ、ｍ　、　
１４Ｈ）。

実１１引Ｕ エチル−〇、Ｌ−（３−フェニルアセトアミド−３−カ
ルボキシプロピル）−メチルホスフィン酸塩：、ＪＤ、
Ｌ−（３−フェニルアセトアミド−３−ベンジルオキシ
カルボニルプロビル）−メチルホスフィン酸： ２９．９ｇ（０，１ｍｏりのり、　Ｌ−（３−フェニル
アセトアミド−３−カルボキシ）−メチルホスフィン酸
を、１５０ｍ　ｌのメタノールに室温で懸濁し、この懸
濁液を１９．２ｇ　（０，１０６ｍｏ　ｌ　）のテトラ
メチルアンモニウム−ヒドロキシド−五水和物で処理す
る。

この溶液を回転式蒸発器で蒸発処理し、残りを２５０ｍ
ｊ２の無水ＤＭＦに溶解し、この混合物を１９゜３ｇ　
（０，１１３ｍｏｎ）のベンジルブロマイドにて０°Ｃ
で処理する。この反応混合物を室温で１８時間攪拌した
後に、これを６００ｍｊ２の氷水中で攪拌しそしてこの
混合物をＣＨ２Ｃβ２を用いて数回抽出処理する。ＣＨ
２Ｃｌ！、２抽出液を次いで硫酸ナトリウムで乾燥しそ
して回転式蒸発器で蒸発処理し、その粗生成物から溶剤
残留分を高減圧下に５０°Ｃで除く。更に精製すること
なく次の段階で使用される無色の油２８．６　ｇ（７３
，５χ）が得られる。

■エチルーＤ、Ｌ、−（３−フェニルアセトアミド−３
ヘンシルオキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィ
ン酸塩： ２０．０ｇ（０，０５ｍｏ　！！、）のり、　Ｌ−（３
−フェニルアセトアミド−３−ベンジルオキシカルボニ
ルプロビル）−メチルホスフィン酸を、５０ｍｆｆ１の
氷酢酸と１５０ｍ　ｌのトリエチル−オルトホルマート
と一緒に３時間、還流する。この反応混合物を回転式蒸
発器で蒸発処理しそして生成物をシリカ−ゲルでのクロ
マトグラフィー（移動相；エチルアセテート／メタノー
ル、８：１）で精製する。１１゜９ｇ（理論値の５６．
７χ）の所望の生成物が得られる。

このものを更に精製することなしに次の段階で使用する
。

旦エチル−〇、　Ｌ、　−（３−フェニルアセトアミド
−３カルボキシプロピル）−メチルホスフィン酸塩：１
１．０ｇ（０，０２６ｍｏｊｌりのエチル−〇、Ｌ、−
（３−フェニルアセトアミド−３−ベンジルオキシカル
ボニルプロビル）−メチルホスフィン酸塩ヲ、２５０ｍ
　ｌのエタノールに溶解し、活性化炭素の上に５ｇのパ
ラジウムを担持した触媒（５χの物質）を添加し、この
混合物を次いで大気圧で水素化する。

２時間後に触媒を濾去し、濾液を回転式蒸発器で蒸発処
理し、残りをｎ−へブタンと一緒に粉砕する。１１２〜
１１７°Ｃの融点を持つ６．２　ｇ（理論値の７２．９
χ）の無色の結晶が得られる。

尖隻拠Ｍ メチル−Ｄ、　Ｌ−（３−アセトアミド−３−メトキシ
カルボニルプロピル）−メチルホスフィン酸塩：Ｌｏｇ
（０，０５ｍｏ　ｒ！、）のり、　Ｌ−（３−アミノ−
３−カルボキシプロピル）メチルホスフィン酸−アンモ
ニウム塩を４０ｍ！の氷酢酸に溶解し、５０ｍｊ２の１
゜ＬＬ−）リメトキシエタンを添加し、この混合物を３
時間、還流する。次いで濾過し、濾液を濃縮しそしてシ
リカ−ゲルの上でクロマトグラフィー処理（移動相　Ｃ
Ｈ２ＣＩ！、ｚ）する。８．７５ｇ（理論値の７５ｚ）
の所望の生成物が帯黄色の油の状態で得られる： ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＰ、３）　：δ＝７．１８（ＮＨ
，ｍ　、　ＬＨ）；　４．６−　（ＣＩ、　ｍ　、ＩＨ
）；３．７５　（Ｃ００ＣＨｚ、Ｓ、３■＞；３．７（
ＰＯＣｌ２　、ｄｄ、　３Ｈ）；　１．５〜２．２　（
ＣＨ２Ｃｌ！、ｍ。

４Ｈ）　、２．０５　（ＣＨ，Ｃ０−１ｓ　１３８）；
　１．４５　（ＰＣｌ３、ｄ　、　３Ｈ）。

実１釦■ エチル−〇、　Ｌ−（３−アセトアミド−３−エトキシ
カルボニルプロビル）−メチルホスフィン酸塩：Ｌｏｇ
　（０、０５ｍｏ　１　）のり、Ｌ−（３−アセトアミ
ノ−３カルボキシプロピル）メチルホスフィン酸−アン
モニウム塩を実施例４八）と同様に反応させるが、氷酢
酸／　トリエチル−オルトホルマートを用いる。８ｇ（
理論値の５７．６χ）の所望の生成物が無色の油の状態
で得られる： Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｎ３）　：δ−６，９５（ＮＨ，ｍ
　、　ＩＨ）；　４．６（Ｃ１１，、ｍ　、　１１（）
；　４．２４　（ＣＯＯＣ１１２Ｃ）１３、ｑ　、　３
１（）；４．０８　（ＰＯＣＨｚＣ１ｌ＋、ｍ　、　３
Ｈ）　；　２．０７　（Ｃ１１３ＧＯ１Ｓ１３Ｈ）；　
１．８〜２．２　（ＣＨ２ＣＨ２、ｍ　、　４８）　、
１．４７（ＰＣｌ３、ｄ、３Ｈ）；Ｌ、２〜１．４５（
ＰＯＣｌｌ、Ｃ１１，、ｍ　、　３Ｈ）。

尖施且旺 シクロへキシル−Ｄ、　Ｌ−（３−フェニルアセトアミ
ド−３−アミノカルボニルプロピル）−メチルホスフィ
ン酸塩： Ｕ　シクロへキシル−Ｄ、　Ｌ−（３−フェニルアセト
アミド−３−シアノプロピル）−メチルホスフィン酸塩
： ２８．７ｇ（０，１ｍｏ　ｐ、）のシクロへキシル−１
）、　Ｌ−（３アセトキシ−３−シアノプロピル）−メ
チルホスフィン酸塩（ヨーロッパ特許出願公開第１２７
，５７７号明細書と同様に製造）を、１時間の間に２０
°Ｃのもとで２９．６　ｍｊ２の濃アンモニアに滴加す
る。

この反応混合物を次いでＣＨ２１ｚを用いて抽出処理し
、ＣＨｚＣｊ２ｚ抽出液を硫酸ナトリウムにて乾燥し、
ｉｏ、２ｇ　（０，１ｍｏｆｆｉ）のトリエチルアミン
にて処理する。１５．４ｇ　（０，１ｍｏＩ！、）のフ
ェニルアセチル−クロライドを０°Ｃで滴加する。混合
物を室温で１８時間攪拌した後に、５０ｍｊ２の水で処
理し、０．５Ｎの塩酸を用いてｐＨ５に調整し、この混
合物をＣＬＣＩ！、ｚを用いて抽出処理する。Ｃ）１２
ＣｎＺ抽出液を蒸発処理した後に残留する油状物をシリ
カ−ゲルでのクロマトグラフィー（移動相；　ＣＨ２Ｃ
１２ｚ）で精製する。２７．５ｇ（理論値の７６χ）の
所望の生成物が得られる。

’＋１−ＮＭＲ（ＣＤＣｊ２３）　：δ＝９．４５（Ｎ
Ｈｌｍ　、　ＩＩ（）；　７．３（Ｃｂ　Ｈｓ、５１５
Ｈ）；　４．９５（ＣＨ，ｍ　、　ＩＨ）；　４．３６
　（ＣＨ、ｍ　、　ＩＨ）、；　３．６　（ＣＨｚ　、
ｓ　、　２Ｈ）；　１．２〜２．２（Ｃ）ＩｚＧＨｚ、
ＰＣｌｈ、Ｃ６ＨＩＯ、ｍ　、　１７８）。

Ｕシクロヘキシル−Ｄ、　Ｌ、　−（３−フェニルアセ
トアミド−３−アミノカルボニルプロピル）−メチルホ
スフィン酸塩： ６　ｇ（０，０１６５ｍｏＩ！、）のシクロへキシル−
Ｄ、Ｌ−（３フェニルアセトアミド−３−シアノプロピ
ル）−メチルボスフィン酸塩を、４０ｍｊ２の蟻酸に溶
解し、ＨＣＩ！、ガスを次いで室温で通す。３時間後に
反応混合物を蒸発処理し、残留液をメチレンクロライド
および水に溶解しそして炭酸水素ナトリウムを用いてｐ
ｎ　５にする。

この混合物を次いでＣＨ２ＣＡ　２を用いて抽出処理し
、ＣＨ２ＣＨ２，ｚ抽出液をＮａ２ＳＯ４で乾燥しそし
て回転式蒸発器で蒸発処理する。残留する粗生成物をシ
リカ−ゲルでのクロマトグラフィー（移動相；ＣＨ２Ｃ
Ｈ２ｚ／ＭｅＯＨ９：１）で精製する。４．１８ｇ（理
論値の６６．７χ）の淡黄色の油状物が得られる；’　
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　：δ＝　７．２（ｃ６ｕ６
、ｓ　、　５Ｈ）；　７゜２（ＣＯＮＨｚ、ｄ　、　２
Ｈ）；　５．６（ＮＨＸｓ　、　ＩＨ）；　４．２〜４
．８　（２ＸＣＩ（、ｍ　、：２Ｈ）；　　３．６　（
Ｃ）＋２、ｓ　、２１１）；　１．２〜２．３　（Ｃ，
Ｈ２ＣＨ２、’ＰＣＨ３、Ｃ６ＨＩＯ、ｍ　、１７Ｈ）
。

ＰＴＣＩＩ　　　　ＯＨＨ ｌ、２　ｇのエチル−〇、Ｌ−（３−フェニルアセトア
ミド−３−カルボキシプロピル）−メチルホスフィン酸
塩（Ｄ、Ｌ−（Ｉ）　）を４０ｍｆｆのｎｚｏに取り、
ｐＨを７．８に調整した後に、この混合物を０．２Ｎの
水性アンモニア溶液と一緒に２ｍｌの固定されたペニシ
リン−Ｇ−アシラーゼ（６６単位／ｍｊ２）の存在下に
３５°Ｃで攪拌する。ｐＨを０．２Ｎの水性アンモニア
溶液の添加によって一定に維持する。２時間後に酵素を
濾去し、濃ＨＣｊ２を用いてｐＨを２．５にし、残留す
る化合物Ｄ−（Ｉ）およびフェニル酢酸を、メチルイソ
ブチルケトンを用いて徹底的に迅速に抽出処理する。減
圧下に水性相を蒸発処理して乾燥させ、純粋物としてＮ
１（４（４を含有する５５０ｍｇのエチル−Ｌ−（３−
アミノ−３−カルポキシプロピル）−メチルホスフィン
酸塩−ヒドロクロライド（Ｌ−（２））を得る： ［α１２２・＋８．３°（Ｃ・５；水中濃度）：Ｌ−（
２）の’Ｈ−ＮＭＲ（Ｄｚｏ）　：　　δ＝３．９〜４
．３　（ＣＨ：１ＣＨ２−０、ＣＩ（−ＮＨ２、ｍ　、
　３Ｈ）；　１．８〜２．４　（ＣＨ２ＣＨ２、ｍ　、
　４Ｈ）；　　１．６５（ＰＣｈ、ｄ　、　３Ｈ）；　
　１．３　（ＣＨ３Ｃ）１．０　、ｔ　、３Ｈ）　　。

酵素分割の選択性を測定する為に、Ｌ−（２）−ヒドロ
クロライドを最初に２０ｍｎの濃ＨＣｌ１中で６時間の
間遠流し、生成物を蒸発して乾燥する（即ち化学的に加
水分解する）。次いで１０ｍｇのサンプルをｐＨ１０で
１０ｍ１の緩衝溶液に溶解し、その溶液を、１ｇのＢＯ
Ｃ−シスチンをエタノールに溶解した１３４μ！の溶液
にて、５ｍｌのエタノールに３３３　ｍｇの０−フタル
酸ジアルデヒドを溶解した溶液６７　μ℃と一緒に処理
し、１０分後にこの混合物を１（ＰＬＣ（カラム：　Ｌ
ｉＣｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１８；移動相：　５０　ｍ
ｍｏｎの燐酸塩緩衝剤／メタノール／テトラヒドロフラ
ン７１／２８／１）で分析する。Ｒｔ　（Ｌ−ＰＴＣ）
　−６，０分；　　Ｒｔ　（Ｄ−ＰＴＣ）　−６゜６分
。酵素分割の後の純粋のＬ−（２）−ヒドロクロライド
の割合は、Ｌ−ＰＴＣを経て間接的に少なくとも９４χ
と算出される。

２００ｍｇのエチル−Ｄ、Ｌ−（３−フェニルアセトア
ミド−３−エトキシカルボニルプロピル）−メチルホス
フィン酸塩（Ｄ、Ｌ−（３）　）を４０ｍｊ２のＨｚＯ
に懸濁させ、０．２Ｎのアンモニア水溶液を用いてｐＨ
を８に調整する。１０ｍｇのスプチルシンを添加した後
に、該混合物を３５°Ｃで２時間反応させる。Ｄ−（３
）をメチル−イソブチル−ケトンを用いて溶液から徹底
的に抽出処理する。水性相を１ｌｉＨｃｊ２を用いてｐ
Ｈ２に調節しそして同様に、メチルイソブチルケトンを
用いて徹底的に抽出処理する。水性相を蒸発処理して乾
燥して、７５ｍｇのエチル−しく３−フェニルアセトア
ミド−３−カルボキシプロピル）−メチルホスフィン酸
塩（Ｌ−（Ｉ）　）を得る。

このものは以下の旋光度を有する： ［α］２２＝　＋２５　’　（ＣＨＣＩ！、３中４χ濃
度）；’Ｈ−ＮＭＲ（ＤｚＯ）　：　　δ＝　７．３　
（フェニル、５Ｈ）；４．６〜４．３飢−ＮＨ、ｍ　、
　ＩＨ）；　４．３〜３．７　（ＣＨ３駐０　、　ｍ　
、２Ｈ）；　３．６５（ＣＩ２Ｃ６Ｈ５、ｓ　、ＬＨ）
；　２．４〜１．５　　（ＣＨ２Ｃ）１２　、ｍ　、４
Ｈ）；　　１．５（Ｐ−ＣＨｓ、ｄ　、　３Ｈ）；　　
１゜２５（印。Ｃ１（，０、ｔ　、　３Ｈ）　　。

Ｌ−（Ｉ）を濃塩酸中に取り、この混合物を６時間還流
しそして次いで蒸発処理して乾燥する。ＬＰＴＣの割合
は実施例Ｂ１に記載した如きＨＰＬＣによって測定され
る。Ｌ−化合物の割合は少なくとも９２χである。

２ｇのエチル−Ｄ、　Ｌ−（３−フェニルアセトアミド
３−エトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン
酸塩（Ｄ、Ｌ−（３）　）を４０ｍｎのＨ２ｏに懸濁さ
せ、ｐＨを８に調整し、この混合物を固定したペニシリ
ン−Ｇ−アミダーゼ２ｍ１１３２単位）の存在下に３５
°Ｃで攪拌する。ｐｉ（を０．２Ｎのアンモニア水を加
えて一定に維持する。２時間後に、酵素を濾去し、反応
溶液を濃塩酸を用いてｐｎ　２に調節しそして未反応の
Ｄ　−（３）およびフェニル酢酸をメチルイソブチルケ
トンを用いて徹底的に抽出処理する。水性相を減圧下に
蒸発処理して乾燥し、ＮＨ４Ｃｊ２の不純物を含有する
７２９ｍｇのエチルＬ−（３−アミノ−３−エトキシカ
ルボニル）−メチルホスフィン酸塩（Ｌ−（４）　）を
得る。このものは以下の旋光度を有する： ［α１２２＝　＋１５°（ｃ＝５　、ＨｚＯ中濃度）；
’Ｈ−ＮＭＲ（０２０）　：　　６＝　４．５〜３．７
５　（２ＸＣＨ，１０、ＣＨＮＨ２、ｍ　、　５Ｈ）；
　　２．４〜１．７５　　（ＣＨ２ＣＨ２、ｍ、４Ｈ）
：　　１．６　ＣＰ−ＣＨ，、ｄ　、　３Ｈ）；　１．
３＋１．３３　　（２×研３ＣＨ２０、ｔ　、　６Ｈ）
　　。

Ｌ−（４）をＬ−ＰＴＣに転化し、実施例Ｂ１に記載の
如く分析する。純粋Ｌ−（４）の割合は９６χである。

抽出されそして酵素で反応しなかった化合物Ｄ−（３）
をメチルイソブチルケトンに取り、−度ＩＮのＮａＯＨ
で洗浄しそしてカラムークロマゴグラフィ−（ＣＨｚＣ
ｊ２　ｚ：Ｍｅ０１１＝１０：１）によって精製する。

収量：　７００　ｍｇのＤ　−（３） ［α］２２＝　−９°（ｃｏｃＬ） 実１ル則 １．２ｇ　（３，８ｍｍｏｌ）のメチル−Ｄ、　Ｌ−（
３−フェニルアセトアミド−３−メトキシカルボニルプ
ロピル）−メチルホスフィン酸塩を、５０ｍ１の０．０
１Ｍ水性燐酸カリウム緩衝液中でｐＨ７にて１．２ｇの
固定したペニシリン−ｇ−アミダーゼ（２４０μ）と反
応させる。２４時間後に、酵素を濾去し、濾液をｐＨ３
に８周整しそしてメチルイソフ゛チルケトンを用いて徹
底的に抽出処理する。水性相を蒸発処理して乾燥し、濃
塩酸を添加することによってｐＨを１にし、この混合物
を６時間、還流する。

蒸発乾燥すると４２０ｍｇのし一ホスフィノトリシンが
得られる。実施例Ｂ１と同様にＨＰＬＣを介して測定さ
れるＬ−ＰＴＣの割合は９３χである。

尖胤桝刹 ７００ｍｇ　（２，９５ｍｍｏｌ）のメチル−〇、　Ｌ
−（３−アセトアミド−３−メトキシカルボニルプロピ
ル）−メチルホスフィン酸塩を、２５　ｍｌの水に取り
、７００ｍｇのアシラーゼＩおよび０．３７　ｍｌの０
．Ｉ　Ｍ　ＣｏＣｌ２溶液の添加後に室温で攪拌する。

１９時間後に、ｐＨを１２〜１３にし、混合物を室温で
２４時間攪拌する。この溶液を蒸発処理して乾燥し、次
いで酸性イオン交換器（＋１２０展開）でイオン交換ク
ロマトグラフィーによって精製する。ＰＴＣ含有留分（
ＨＰＬＣによって制御されたニンヒドリン試験）を−緒
にしそして蒸発処理して乾燥する。

９５″Ａより多い割合でＬ−ＰＴＣを含有する褐色粉末
２５０Ｂが得られる　（実施例Ｂｌと同様に）ＩＰＬｃ
を介して測定）。

遺ｕＬ（ホ津 ５００ｍｇの光学的に純粋のエチル−〇、Ｌ−（３−フ
ェニルアセトアミド−３−エトキシカルボニルプロピル
）−メチルホスフィン酸塩（Ｄ−（３））　一実施例Ｂ
２に記載した如き酵素分割から生ずるーを、１５ｍｆｆ
１のＨ２Ｏに取り、ｐＨを８にし、次いでこの混合物を
３５°Ｃで、１ｍｊ２のペニシリン−Ｇ−アシラーゼ（
６６単位）を含有する２ＮのＮＨ４ＯＨと一緒に攪拌す
る。反応をＨＰＬＣ（カラム：　ＬｉＣｈｒｏｓ。

ｒｂ　ＲＰ−８、Ｍｅｒｃｋ　Ｈ４ｂａｒ；移動相：１
８のＴＢＡＨ５＋１０ｇのＫＨ２ＰＯ４（Ｉ１！のＨ２
Ｏ中）；Ｈ３ＰＯ４＋１１のメタノールを用いてｐＨを
２．１に調節、紫外線検出器２０６　ｎｍ）を介して監
視した時、フェニル酢酸は８時間後にもはや検出できな
い。従って、Ｐｅｎ−Ｇ−アシラーゼはＬ−（３）だけ
を分割できるが、Ｄ−（３）を分割できない。

尖施汎刊 ５００ｍｇのシクロへキシル−Ｄ、　Ｌ−（３−フェニ
ルアセトアミド−３−アミノカルボニルプロピル）−メ
チルホスフィン酸塩を、ｐＨ８の０．５Ｍ　ｔ１８酸カ
リウム２０ｍ　Ｉ！、に取り、２ｍ　ｌ　（Ｉ３０単位
）の固定したｐｅｎ−Ｇ−アシラーゼを添加し、次いで
この混合物を３５°Ｃで攪拌する。０．２ＮのＮＨ３溶
液をビユレットから連続的に添加することによって一定
に維持する。１８時間後に、酵素を濾去し、濾液をメチ
レンクロライドで徹底的に抽出処理する。

水性相を濃塩酸を用いてｐＨ２に調節し、フェニル酢酸
をメチレンクロライドを用いて抽出処理し、そして水性
相を蒸発処理して乾燥する。残留液を２０ｎｌの濃塩酸
に取り、この溶液を７時間、還流し、次いで再び蒸発処
理して乾燥する。

Ｌ−ＰＴＣ含有量を、実施例Ｂ１に記載の如＜　ＨＰＬ
Ｃを介して測定する。Ｌ−ＰＴＣの割合は９４χである
。

、ＬｉＶ！ｌｕ（ラセミ化） 旋光度［α］２０　＝−９°（ＣＩＣ１３）を持つ１０
０ｍｇのエチル−〇−（３−フェニルアセトアミド−３
−エトキシカルボニルプロピル）−メチルホスフィン酸
塩（Ｄ−（３）　）を１２ｍｊ２のＥｔＯｌｌに溶解し
、この溶液を２ｍｇのナトリウム−エタノラードで処理
する。

５時間後に、この溶液を蒸発処理して乾燥する。

生成物の旋光度は［α］２０＝　Ｏｏ（ＣＨＣＩ！、３
）である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ［式中、 ａ）Ｒ＾１は一つまたは複数のハロゲン原子によって置
   換されているか非置換のまたはＣ＿１〜Ｃ＿８アルコキ
   シ基によってモノ置換されたまた はポリ置換された枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿２
   ＿０−アルキル基であるか、 またはＲ＾１はＣ＿１〜Ｃ＿４−アルキル基、Ｃ＿１〜
   Ｃ＿４−アルコキシ基およびハロゲン原子より成る群の
   内の一つまたは複数によって置換されていてもよいＣ＿
   ３〜Ｃ＿８−シクロアルキル基であるか、またはＲ＾１
   はＣ＿３〜Ｃ＿１＿０−アルケニル基、Ｃ＿３〜Ｃ＿１
   ＿０−アルキニル基またはベンジル基であり、 Ｒ＾２は水酸基；または、一つまたは複数のハロゲン原
   子で置換されたまたは非置換のまたは、Ｃ＿１〜Ｃ＿８
   −アルコキシ基でモノ置換またはポリ置換された枝なし
   または枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿２＿０−アルコキシ基であ
   るか、 またはＲ＾２はアミノ基または（Ｃ＿１〜Ｃ＿２＿０−
   アルキル）アミノ基でありそして Ｒ＾３はホルミル基；水酸基、ハロゲン原子、Ｃ＿１〜
   Ｃ＿４−アルコキシ基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキルチオ
   基より成る群の内の一つまたは複数の基によってアルキ
   ル基の部分で置換されたまたは置換されていない枝なし
   または枝分かれ（Ｃ＿１〜Ｃ＿２＿０−（アルキル）−
   カルボニル基；および、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−アルキル
   基、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−アルコキシ基、ハロゲン原子
   、ニトロ基およびＣＦ＿３基より成る群の内の三つまで
   の基で置換されていてもよいフェニル基であるかまたは Ｒ＾３はベンゾイル基；または、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−
   アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−アルコキシ基、ハロ
   ゲン原子、ニトロ基およびＣＦ＿３基より成る群の内の
   １〜３個の基で置換されているベンゾイル基であり または ｂ）Ｒ＾１はａ）で定義した通りであり、 Ｒ＾２はａ）で定義した通りであるが、水酸基ではなく
   そして Ｒ＾３はａ）で定義した通りであるかまたは、アミノ基
   にとって通例の別の保護基である。］ で表されるＤ−型−とＬ−型２−アミノ−４−メチルホ
   スフィノ酪酸誘導体との混合物を水性−または水性有機
   性媒体中で加水分解活性酵素にて処理することを特徴と
   する、２−アミノ−４−メチルホスフィノ酪酸誘導体の
   酵素分割法。 ２）ａ）の場合に、Ｎ−アシル基をはずす酵素［アシラ
   ーゼ（ａｃｙｌａｓｅ）をそしてｂ）の場合にはプロテ
   アーゼまたはエステラーゼ活性酵素を加水分解活性酵素
   として用いる請求項１に記載の方法。 ３）Ｒ＾２が水酸基でなくそしてＲ＾３が請求項１に記
   載のａ）の所で定義した通りであるかまたは、水酸基、
   ハロゲン原子、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルコキシ基、Ｃ＿１
   〜Ｃ＿４−アルキルチオ基、フェニル基または、Ｃ＿１
   〜Ｃ＿１＿２−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−アル
   コキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基またはＣＦ＿３基の
   中から選択される１〜３個の置換基を持つフェニル基よ
   り成る群の内の一つまたは複数の基でアルキル基の部分
   で置換されているかまたは非置換の枝なしまたは枝分か
   れ（Ｃ＿１〜Ｃ＿２＿０−アルコキシ）−カルボニル基
   およびＣ＿１〜Ｃ＿２＿０−アルキルスルホニル基、お
   よび、Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿２−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿
   １＿２−アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基および
   ＣＦ＿３基の内の３個までの基で置換されていてもよい
   フェニルスルホニル基から選択される他の一般的なＮ−
   保護基である請求項１または２に記載の方法。 ４）請求項１に記載の式（ I ）で表され、その式中に
   おいて ａ）Ｒ＾１は枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿１＿０
   −アルキル基または、ハロゲン原子またはＣ＿１〜Ｃ＿
   ４−アルコキシ基で置換されているＣ＿１〜Ｃ＿１＿０
   −アルキル基であるかまたはＲ＾１はＣ＿５〜Ｃ＿６−
   シクロアルキル基であり、 Ｒ＾２は水酸基；または枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜
   Ｃ＿８−アルコキシ基；または、ハロゲン原子またはＣ
   ＿１〜Ｃ＿１−アルコキシ基でモノ置換またはポリ置換
   されたＣ＿１〜Ｃ＿８−アルコキシ基であるか、または Ｒ＾２はアミノ基または（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−アル
   キルアミノ基でありそして Ｒ＾３はホルミル基；水酸基、ハロゲン原子、フェニル
   基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルコキシ基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−
   アルキルチオ基より成る群の内の一つまたは二つの基に
   よってアルキル基の部分で置換されたまたは置換されて
   いない枝なしまたは枝分かれ（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０−ア
   ルキル）−カルボニル基；および、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−ア
   ルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルコキシ基およびハロゲ
   ン原子の中から選択される１〜３個の基で置換されてい
   るフェニル基であるかまたは、Ｒ＾３はベンゾイル基；
   または、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４
   −アルコキシ基およびハロゲン原子から選択される１〜
   ３個の基で置換されているベンゾイル基であるか または ｂ）Ｒ＾１はａ）で定義した通りであり、 Ｒ＾２はａ）で定義した通りであるが、水酸基ではなく
   そして Ｒ＾３はａ）で定義した通りであるかまたは、水酸基、
   ハロゲン原子、メトキシ基、エトキシ基、フェニル基ま
   たは、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−
   アルコキシ基およびハロゲン原子の群の内の１〜３個の
   置換基を持つフェニル基によって置換されたまたは置換
   されていない（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０−アルコキシ）カル
   ボニル基であるＤ−とＬ−ＰＴＣ誘導体との混合物を使
   用する請求項１または２に記載の方法。 ５）請求項１に記載の式（ I ）で表され、その式中に
   おいて ａ）Ｒ＾１は枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿６−ア
   ルキル基であるかまたはシクロヘキシル基であり、 Ｒ＾２は水酸基；または枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜
   Ｃ＿６−アルコキシ基またはアミノ基でありそして Ｒ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキル）−カルボニル基
   ；または、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿
   ４−アルコキシ基およびハロゲン原子の中から選択され
   た１〜３個の置換基を持つモノ−〜トリ置換された（Ｃ
   ＿１〜Ｃ＿４−アルキル）−カルボニル基であるかまた
   はＲ＾３はベンゾイル基である または ｂ）Ｒ＾１は枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿６−ア
   ルキル基であるかまたはシクロヘキシル基であり、Ｒ＾
   ２は枝なしまたは枝分かれＣ＿１〜Ｃ＿６−アルコキシ
   基またはアミノ基でありそして Ｒ＾３はａ）で定義した通りであるかまたは枝なしまた
   は枝分かれ（Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルコキシ）カルボニル
   基、好ましくは第三ブチルオキシカルボニル基であるか
   または、Ｃ＿１〜Ｃ＿４−アルキル基、Ｃ＿１〜Ｃ＿４
   −アルコキシ基およびハロゲン原子の群の内の３個まで
   の基によってフェニル環が追加的に置換されていてもよ
   いベンゾイルオキシカルボニル基である。］ Ｄ−型−とＬ−型ＰＴＣ誘導体との混合物を使用する請
   求項１または２に記載の方法。 ６）ａ）Ｒ＾１はメチル基、エチル基、プロピル基、ブ
   チル基、ペンチル基、ヘキシル基またはシクロヘキシル
   基であり、 Ｒ＾２は水酸基、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ
   基、ブトキシ基、ペントキシ基、ヘキソキシ基またはＮ
   Ｈ＿２基でありそして Ｒ＾３はアセチル基またはフェナセチル基であるかまた
   は ｂ）Ｒ＾１はａ）で定義した通りであり、 Ｒ＾２はａ）で定義した通りでありそして Ｒ＾３はａ）で定義した通りであるかまたは第三ブチル
   オキシカルボニル基またはベンゾイルオキシカルボニル
   基である 請求項１または２に記載の方法。 ７）ａ）の場合にはアシラーゼ I またはｐｅｎ−Ｇ−
   アシラーゼを使用しそしてｂ）の場合にはスブチリシン
   、α−キモトリプシン、パパイン、フィシン、ブロメラ
   イン、Ｍａｘａｔａｓｅ（商標）またはＡｌｃａｌａｓ
   ｅ（商標）を加水分解活性酵素として用いる請求項１〜
   ６のいずれか一つに記載の方法。 ８）酵素分割を２０〜６０℃の温度で実施する請求項１
   〜７のいずれか一つに記載の方法。 ９）酵素的に反応してないＤ−ＰＴＣ誘導体を、有機溶
   剤での抽出による酵素分割の後に除く請求項１〜８のい
   ずれか一つに記載の方法。 １０）得られるＬ−ＰＴＣ誘導体を化学的加水分解に委
   ねそしてＬ−ＰＴＣを単離する請求項１〜９のいずれか
   一つに記載の方法。 １１）酵素分割をｐＨ５〜９、特に６〜８．５で実施す
   る請求項１〜１０のいずれか一つに記載の方法。 １２）Ｒ＾１およびＲ＾３が請求項１〜４のいずれか一
   つに記載された通り定義され、そしてＲ＾２がアミノ基
   またはＣ＿１〜Ｃ＿２＿０−アルキルアミノ基であるこ
   とを特徴とする、請求項１に記載の一般式（ I ）の化
   合物。 １３）Ｒ＾２がアミノ基である請求項１２に記載の化合
   物。 １４）Ｒ＾１およびＲ＾３が請求項５または６に定義し
   た通りである請求項１３に記載の化合物。 １５）Ｒ＾１がシクロヘキシル基でありそしてＲ＾３が
   フェナセチル基である請求項１４に記載の化合物。 １６）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるニトリル基を酸性媒体中でシアノ基の所で選
   択的に加水分解しそして所望の場合には、得られるアミ
   ドを慣用の方法によってアルキル化して式（ I ）の（
   Ｃ＿１〜Ｃ＿２＿０−アルキル）−アミドを得ることを
   特徴とする、請求項１３で定義した化合物の製造方法。