JPH02234690A - 発酵法による5’―イノシン酸の製造法 - Google Patents
発酵法による5’―イノシン酸の製造法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は発酵法による5′−イノシン酸の製造法に関す
る。5′−イノシン酸は調味料などに用いられ、種々の
分野で有用である。
る。5′−イノシン酸は調味料などに用いられ、種々の
分野で有用である。
従来の技術
5′−イノシン酸の発酵生産において、0.01〜0.
1%のし−プロリンを培地に添加してブレヒ゛ノくクテ
リウム属に属する微生物の変異株を培養した結果、5′
−イノシン酸の収量を向上させたという報告が知られて
いる。〔アブライド ミクロノくイオロジ−(Appl
ied Microb9ogy)工 981(1968
) ]しかし、これは添加濃度も0.01〜0,1%と
低く、収量も工業的生産を満足させるものではない。
1%のし−プロリンを培地に添加してブレヒ゛ノくクテ
リウム属に属する微生物の変異株を培養した結果、5′
−イノシン酸の収量を向上させたという報告が知られて
いる。〔アブライド ミクロノくイオロジ−(Appl
ied Microb9ogy)工 981(1968
) ]しかし、これは添加濃度も0.01〜0,1%と
低く、収量も工業的生産を満足させるものではない。
発明が解決しようとする課題
5′−イノシン酸は加工食品として広く使われており、
工業的に効率よく経済的な製造方法が望まれている。
工業的に効率よく経済的な製造方法が望まれている。
課題を解決するための手段
本発明者は、5′−イノシン酸の発酵生産において、L
−プロリンの培地への添加章を検討した結果、0.2〜
5.0%のL−プロリンを培地に添加することにより、
5′−イノシン酸の収率がより向上することを見出した
。
−プロリンの培地への添加章を検討した結果、0.2〜
5.0%のL−プロリンを培地に添加することにより、
5′−イノシン酸の収率がより向上することを見出した
。
本発胡によれば、L−プロリンおよび/またはその類縁
化合物を単独あるいは2種以上を組合わせて0.2〜5
.0%範囲で添加した培地に、5′−イノシン酸生産能
を有する微生物を培養することにより、培養物中にw!
5′−イノシン酸を生成蓄積させ、該培養物から5′−
イノシン酸を高収率で得ることができる。
化合物を単独あるいは2種以上を組合わせて0.2〜5
.0%範囲で添加した培地に、5′−イノシン酸生産能
を有する微生物を培養することにより、培養物中にw!
5′−イノシン酸を生成蓄積させ、該培養物から5′−
イノシン酸を高収率で得ることができる。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に使用する微生物としては、5′−イノシン酸生
産能を有する微生物であればいずれでも用いることがで
きる。具体的には、プレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネスKY13184(FBRM P−3790)および
KY13184を変異処理して得られたプレビバクテリ
ウム・アンモニアゲネスKY13196(FBRM P
−3791)などがあげられる。
産能を有する微生物であればいずれでも用いることがで
きる。具体的には、プレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネスKY13184(FBRM P−3790)および
KY13184を変異処理して得られたプレビバクテリ
ウム・アンモニアゲネスKY13196(FBRM P
−3791)などがあげられる。
本発明で用いる培地としては、炭素源、窒素源、無機塩
類あるいはその他の生育因子などを程よく含有している
天然または合成培地に、L−プロリンおよびその類縁化
合物より選ばれる1種以上の物質を0.2〜5.0%の
範囲で添加した培地を用いることができる。
類あるいはその他の生育因子などを程よく含有している
天然または合成培地に、L−プロリンおよびその類縁化
合物より選ばれる1種以上の物質を0.2〜5.0%の
範囲で添加した培地を用いることができる。
炭素源としては、グルコース,フルクトース,シューク
ロース,グリセロール,澱粉,澱粉加水分解液,糖蜜,
糖蜜加水分解液などの炭水化物やグルコン酸,ピルビン
酸,乳酸,酢酸などの各種有機酸.グリシン,グルタミ
ン酸,アラニン,アスパラギン酸などのアミノ酸などが
あげられる。
ロース,グリセロール,澱粉,澱粉加水分解液,糖蜜,
糖蜜加水分解液などの炭水化物やグルコン酸,ピルビン
酸,乳酸,酢酸などの各種有機酸.グリシン,グルタミ
ン酸,アラニン,アスパラギン酸などのアミノ酸などが
あげられる。
窒素源としては、アンモニア,塩化アンモニウム,燐酸
アンモニウム.硫酸アンモニウム,硝酸アンモニウム,
炭酸アンモニウムあるいは酢酸アンモニウムなどの各種
無機および有機アンモニウム塩,尿素,ペプトン,肉エ
キス,酵母エキス,コーン・スチーブ・リカー,カゼイ
ン加水分解物.フィッシュミールまたはその消化物大豆
粕またはその加水分解物あるいはアミノ酸・核酸発酵の
発酵菌体またはその消化物などの窒素性有機物,グリシ
ン,グルタミン酸などのアミノ酸などがあげられる。
アンモニウム.硫酸アンモニウム,硝酸アンモニウム,
炭酸アンモニウムあるいは酢酸アンモニウムなどの各種
無機および有機アンモニウム塩,尿素,ペプトン,肉エ
キス,酵母エキス,コーン・スチーブ・リカー,カゼイ
ン加水分解物.フィッシュミールまたはその消化物大豆
粕またはその加水分解物あるいはアミノ酸・核酸発酵の
発酵菌体またはその消化物などの窒素性有機物,グリシ
ン,グルタミン酸などのアミノ酸などがあげられる。
無機物としては、リン酸塩,マクネシウム塩,カルシウ
ム塩,鉄塩.亜鉛塩,マンガン塩などがあげられる。
ム塩,鉄塩.亜鉛塩,マンガン塩などがあげられる。
また必要に応じて、微生物の生育に必要なビタミン類,
核酸などを添加することができるが、前記したような他
の培地成分に伴って培地に供給されればとくに加えなく
てもよい。しかし、栄養要求性を示す微生物を使用する
場合、当然その生育要求を満足せる物質を培地に添加し
なければならない。
核酸などを添加することができるが、前記したような他
の培地成分に伴って培地に供給されればとくに加えなく
てもよい。しかし、栄養要求性を示す微生物を使用する
場合、当然その生育要求を満足せる物質を培地に添加し
なければならない。
L−プロリン(以下、L−Proと略す。)およびその
類縁化合物は、発酵生産物、濃縮物などの純品でも粗精
製品でもよく、0.2〜5.0%の範囲で使用する。L
−プロリンの類縁化合物としては、D−プロリン(以下
、D−Proと略す。)D.L−プロリン(以下、D,
L−Proと略す。)、L−ヒドロキシプロリン(以下
、L−ProOHと略す。)D−ヒドロキシブロリン(
以下、DProOHと略す。)、ビペコール酸(以下、
PAと略す。)、コハク酸イミド(以下、SIと略す。
類縁化合物は、発酵生産物、濃縮物などの純品でも粗精
製品でもよく、0.2〜5.0%の範囲で使用する。L
−プロリンの類縁化合物としては、D−プロリン(以下
、D−Proと略す。)D.L−プロリン(以下、D,
L−Proと略す。)、L−ヒドロキシプロリン(以下
、L−ProOHと略す。)D−ヒドロキシブロリン(
以下、DProOHと略す。)、ビペコール酸(以下、
PAと略す。)、コハク酸イミド(以下、SIと略す。
)などがあげられる。
L−Proおよびその類縁化合物は、単独あるいは2種
以上を組み合わせて用いられ、発酵培地中に0.2〜5
.0%の範囲となるように含有させる。
以上を組み合わせて用いられ、発酵培地中に0.2〜5
.0%の範囲となるように含有させる。
とくに0.5〜5.0%の範囲が好ましい。あらかじめ
発酵培地に加えておいてもよいし、培養中に1回あるい
は数回に分けて、またげ連続的に途中添加してもよい。
発酵培地に加えておいてもよいし、培養中に1回あるい
は数回に分けて、またげ連続的に途中添加してもよい。
培養は、振盪培養または通気攪拌深部培養など好気的条
件下で通常2〜7日おこなう。培養温度は20〜40℃
が好ましく、pHはアンモニア水、尿素液あるいは水酸
化ナトリウム溶液などで中性に保つことが好ましい。
件下で通常2〜7日おこなう。培養温度は20〜40℃
が好ましく、pHはアンモニア水、尿素液あるいは水酸
化ナトリウム溶液などで中性に保つことが好ましい。
培養終了後、培養物から菌体などの沈殿物を除去し、イ
オン交換樹脂処理法、吸着法、沈殿法あるいは抽出法な
どを併用することによって5′−イノシン酸を回収する
ことができる。
オン交換樹脂処理法、吸着法、沈殿法あるいは抽出法な
どを併用することによって5′−イノシン酸を回収する
ことができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例1
120℃、10分間加熱滅菌した種培地〔グルコース5
0g/Cベプトン10g/It、酵母エキスLog/J
,硫酸アンモニウム5g/Il,尿素5g/1、KH2
P0. 1g/1、K 2 H P O s3 g/R
,Mg SO4・・7H.0 1g/1、CaCf
a・2HzO L O Omg/J!、F e S
O 4iH.0 10mg/II、ZnSOa’
7H.01 mg/ IlSMn S04 ・4 Hz
0 8mg/j!、CuSO<・5H20 0.2
mg/ Il,L−システインlQmg/j!,パント
テン酸カルシウム20mg/12,ビオチン0.04m
g/Il,サイアミン塩酸塩10mg/’1,アデニン
100mg/j!、グアニン100■/lの組成からな
り、p H 7. 2に調整した培地〕7ml中でプレ
ビバクテリウム・アンモニアゲネスKY13184を3
0℃、30時間培養した。
0g/Cベプトン10g/It、酵母エキスLog/J
,硫酸アンモニウム5g/Il,尿素5g/1、KH2
P0. 1g/1、K 2 H P O s3 g/R
,Mg SO4・・7H.0 1g/1、CaCf
a・2HzO L O Omg/J!、F e S
O 4iH.0 10mg/II、ZnSOa’
7H.01 mg/ IlSMn S04 ・4 Hz
0 8mg/j!、CuSO<・5H20 0.2
mg/ Il,L−システインlQmg/j!,パント
テン酸カルシウム20mg/12,ビオチン0.04m
g/Il,サイアミン塩酸塩10mg/’1,アデニン
100mg/j!、グアニン100■/lの組成からな
り、p H 7. 2に調整した培地〕7ml中でプレ
ビバクテリウム・アンモニアゲネスKY13184を3
0℃、30時間培養した。
得られた種菌を、80ml容大型試験管に分注し120
℃でlO分間加熱滅菌した6mlのL − P roを
0〜10%含有させた下記発酵培地に、10%容量接種
し、30℃でグルコースを消費するまで振盪培養した。
℃でlO分間加熱滅菌した6mlのL − P roを
0〜10%含有させた下記発酵培地に、10%容量接種
し、30℃でグルコースを消費するまで振盪培養した。
(グルコースを消費するまでの時間は、L−プロリンお
よびその類縁化合物の添加量によって異なる。0〜2.
0%の濃度範囲では約80時間、3.0〜5.0%の濃
度範囲では約100時間、10.0%の濃度では約14
0時間培養をおこなった。) 〔発酵培地組成;グルコース50g/1、KH2P0.
9g/矛、K2HPO4 9g/R,コーン・スチーブ
・リカ−20g/R,FeSO<−7H20 10m
g/IV.、ZnSOa7HzOlmg/L MnSO
a・4H20 4mg/j!、CuSOa・5H20
2mg/I/.、L−システイン20mg/j!,
パントテン酸カルシウム10mg/j!,ニコチン酸5
+++g/Il、ビオチン20■/Il、フエノルレッ
ド20県g/!、アデニン45mg/j!、グアニン4
5+++g/j!、M g S O 4 ・7 H 2
0 (別殺菌)9g/β、尿素(別殺菌)3.5g/f
およびサイアミン塩酸塩(別殺菌)5mg/J!の組成
からなり、pH6.3に調整した培地〕 培養終了後、培養液lmlをメスフラスコで200倍に
希釈し、フィルターでp過した。得られたP液を高速液
体クロマトグラフィーで定量した。5′イノシン酸の生
成量を第1表に示す。
よびその類縁化合物の添加量によって異なる。0〜2.
0%の濃度範囲では約80時間、3.0〜5.0%の濃
度範囲では約100時間、10.0%の濃度では約14
0時間培養をおこなった。) 〔発酵培地組成;グルコース50g/1、KH2P0.
9g/矛、K2HPO4 9g/R,コーン・スチーブ
・リカ−20g/R,FeSO<−7H20 10m
g/IV.、ZnSOa7HzOlmg/L MnSO
a・4H20 4mg/j!、CuSOa・5H20
2mg/I/.、L−システイン20mg/j!,
パントテン酸カルシウム10mg/j!,ニコチン酸5
+++g/Il、ビオチン20■/Il、フエノルレッ
ド20県g/!、アデニン45mg/j!、グアニン4
5+++g/j!、M g S O 4 ・7 H 2
0 (別殺菌)9g/β、尿素(別殺菌)3.5g/f
およびサイアミン塩酸塩(別殺菌)5mg/J!の組成
からなり、pH6.3に調整した培地〕 培養終了後、培養液lmlをメスフラスコで200倍に
希釈し、フィルターでp過した。得られたP液を高速液
体クロマトグラフィーで定量した。5′イノシン酸の生
成量を第1表に示す。
第
表
5. 2 1 0. 46、0
12、0 6. 4 1 2. 87. 5
1 5. 08.7
17、4 g. 7 1 7. 47. 6
1 5. 27. 1
1 4. 2実施例2 実施例1と同様に種培養をおこなった。得られた種菌を
、80ml容大型試験管に分注し120℃、10分間加
熱滅菌した6−のL−Proおよびその類縁化合物を第
2表に示すように添加した発酵培地に接種した。培養は
実施例1と同様に30℃でグルコースを消費するまでお
こなった。
12、0 6. 4 1 2. 87. 5
1 5. 08.7
17、4 g. 7 1 7. 47. 6
1 5. 27. 1
1 4. 2実施例2 実施例1と同様に種培養をおこなった。得られた種菌を
、80ml容大型試験管に分注し120℃、10分間加
熱滅菌した6−のL−Proおよびその類縁化合物を第
2表に示すように添加した発酵培地に接種した。培養は
実施例1と同様に30℃でグルコースを消費するまでお
こなった。
培養終了後得られた5′−イノシン酸の生成量を第2表
に示す。
に示す。
第 2 表
Pro
Pro
L−P ro
P rooH
ProoH
Pro +L−Pro011
Pro 十〇−ProOH
PA
10.8
17.8
12.8
14.2
15.4
16.0
16.8
16.6
15,0
実施例3
2[容三角フラスコ中の種培地〔グルコース20g/1
、ペプトン10g/It,肉エキス10g/f,酵母エ
キス5g/R,NaCj! 3g/1、ビオチン20
■/矛、アデニン100mg/A、グアニン100mg
/j!の組成からなり、pH 7. 2に調整した培地
〕300mにプレビバクテリウム・アンモニアゲネスK
Y13184およびプレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネスKY13196をそれぞれ植菌し、30℃で24時
間振盪培養した。
、ペプトン10g/It,肉エキス10g/f,酵母エ
キス5g/R,NaCj! 3g/1、ビオチン20
■/矛、アデニン100mg/A、グアニン100mg
/j!の組成からなり、pH 7. 2に調整した培地
〕300mにプレビバクテリウム・アンモニアゲネスK
Y13184およびプレビバクテリウム・アンモニアゲ
ネスKY13196をそれぞれ植菌し、30℃で24時
間振盪培養した。
得られた2つの培養物を、5l容培養槽に分注し120
℃で10分間加圧蒸煮殺菌した3lの下記生産培地およ
び生産培地にL−Pro2%を添加した培地にそれぞれ
10%容量で植菌し、30℃で毎分600回転の攪拌お
よび毎分3βの通気をおこないながら培養した。培養中
、アンモニア水でpHを6.8前後に保持した。
℃で10分間加圧蒸煮殺菌した3lの下記生産培地およ
び生産培地にL−Pro2%を添加した培地にそれぞれ
10%容量で植菌し、30℃で毎分600回転の攪拌お
よび毎分3βの通気をおこないながら培養した。培養中
、アンモニア水でpHを6.8前後に保持した。
〔生産培地組成;グルコース150g/42、KH2P
0.1 0g/j!,K2HPO4 1 0g/j!,
MgSO.・7H20 1 0g/1、C a C
R 2 ・2H20 D.lg/1、ZnSO.’7
H205mg/n、FesOs・7H20 2 0m
g/j2,MnCR2・4H20 5mg/J21ビ
オチン30Q/R,パントテン酸カルシウム10mg/
j!,ビタミンB + 5 mg/ 1、ニコチン酸
5 mg/ Il,アデニンloomg/A、グアニン
100mg/j!、コーン・スチープ・リカ−20g/
Rおよび尿素(別殺菌)2g/j!の組成からなりp
H 7. 6に調整した培地〕 培養終了後得られた5′−イノシン酸の生成量を第3表
に示す。なお、生産培地をA、生産培地にL−Proを
2%添加した培地をBとする。
0.1 0g/j!,K2HPO4 1 0g/j!,
MgSO.・7H20 1 0g/1、C a C
R 2 ・2H20 D.lg/1、ZnSO.’7
H205mg/n、FesOs・7H20 2 0m
g/j2,MnCR2・4H20 5mg/J21ビ
オチン30Q/R,パントテン酸カルシウム10mg/
j!,ビタミンB + 5 mg/ 1、ニコチン酸
5 mg/ Il,アデニンloomg/A、グアニン
100mg/j!、コーン・スチープ・リカ−20g/
Rおよび尿素(別殺菌)2g/j!の組成からなりp
H 7. 6に調整した培地〕 培養終了後得られた5′−イノシン酸の生成量を第3表
に示す。なお、生産培地をA、生産培地にL−Proを
2%添加した培地をBとする。
第 3 表
KY13184 A 2 6.
1B 3 7. I KY13196 Δ 26.5B
.37.7 KY13184を用いて5′−イノシン酸を生成蓄積さ
せた培地A, Bから遠心分離により菌体を.除去した
。得られた上清液1j2を塩酸でpH1、4とし、ダイ
ヤイオンSK”l (H型)(三菱化成社製)の樹脂
塔に通塔してρ液を得た。その後、直ちに蒸留水を通塔
し水洗した。水洗初期の流水液をすでに得られているP
液と合わせて、水酸化ナトリウムでp H 7. 2に
調整し、減圧濃縮した。
1B 3 7. I KY13196 Δ 26.5B
.37.7 KY13184を用いて5′−イノシン酸を生成蓄積さ
せた培地A, Bから遠心分離により菌体を.除去した
。得られた上清液1j2を塩酸でpH1、4とし、ダイ
ヤイオンSK”l (H型)(三菱化成社製)の樹脂
塔に通塔してρ液を得た。その後、直ちに蒸留水を通塔
し水洗した。水洗初期の流水液をすでに得られているP
液と合わせて、水酸化ナトリウムでp H 7. 2に
調整し、減圧濃縮した。
その結果、5′−イノシン酸ナトリウムの粗結晶が、培
地Aから2 0. 0 g、培地Bから2 8. 5
g得られた。
地Aから2 0. 0 g、培地Bから2 8. 5
g得られた。
発明の効果
本発明により、5′−イノシン酸を効率よく経済的に製
造することができる。
造することができる。
Claims (2)
- (1)L−プロリンおよび/またはその類縁化合物を添
加した培地で、5′−イノシン酸生産能を有する微生物
を培養し、培養物中に5′−イノシン酸を生成蓄積させ
、該培養物より5′−イノシン酸を採取することを特徴
とする発酵法による5′−イノシン酸の製造法。 - (2)L−プロリンおよび/またはその類縁化合物は、
単独あるいは2種以上を組合せて用いられ、発酵培地中
に0.2〜5.0%となるように添加されることを特徴
とする請求項1記載の製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5583589A JP2922213B2 (ja) | 1989-03-08 | 1989-03-08 | 発酵法による5’―イノシン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5583589A JP2922213B2 (ja) | 1989-03-08 | 1989-03-08 | 発酵法による5’―イノシン酸の製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02234690A true JPH02234690A (ja) | 1990-09-17 |
JP2922213B2 JP2922213B2 (ja) | 1999-07-19 |
Family
ID=13010042
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5583589A Expired - Fee Related JP2922213B2 (ja) | 1989-03-08 | 1989-03-08 | 発酵法による5’―イノシン酸の製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2922213B2 (ja) |
-
1989
- 1989-03-08 JP JP5583589A patent/JP2922213B2/ja not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Publication date |
---|---|
JP2922213B2 (ja) | 1999-07-19 |
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