JPH02174682A - 遺伝子発現調節因子 - Google Patents
遺伝子発現調節因子Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
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- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
一般的に本発明は遺伝子発現の調節に関する。
特に本発明はインターフェロン調節因子−１（ＩＲＦ−
１）の活性を有するタンパク質をコードする組換えＤＮ
Ａ分子、ｒＲＦ−１活性タンパク質をコードするＤＮＡ
配列及び該配列に機能的に結合するプロモーター及びレ
ギュレーター配列をコードする組換えＤＮＡ分子、該Ｉ
ＲＦ−１活性タンパク質の制御下にあり、かつ目的タン
パク質をコードするＤＮＡ分子により宿主細胞をトラン
スホームするための９１ Ｄ Ｎ Ａ分子の使用、医薬
的に活性なタンパク質をコードする配列及びＩＲＦ−１
活性分子に対する結合部位を含む該タンパク質遺伝子の
プロモーター？１域を含む該ＤＮＡ分子、及び該Ｄ Ｎ
Ａ分子によりトランスホームした適当な宿主細胞を培
養することによる該Ｉ ＲＦ １活性タンパク質及び
／又は該医薬的に活性なタンパク質の生産に関する。
１）の活性を有するタンパク質をコードする組換えＤＮ
Ａ分子、ｒＲＦ−１活性タンパク質をコードするＤＮＡ
配列及び該配列に機能的に結合するプロモーター及びレ
ギュレーター配列をコードする組換えＤＮＡ分子、該Ｉ
ＲＦ−１活性タンパク質の制御下にあり、かつ目的タン
パク質をコードするＤＮＡ分子により宿主細胞をトラン
スホームするための９１ Ｄ Ｎ Ａ分子の使用、医薬
的に活性なタンパク質をコードする配列及びＩＲＦ−１
活性分子に対する結合部位を含む該タンパク質遺伝子の
プロモーター？１域を含む該ＤＮＡ分子、及び該Ｄ Ｎ
Ａ分子によりトランスホームした適当な宿主細胞を培
養することによる該Ｉ ＲＦ １活性タンパク質及び
／又は該医薬的に活性なタンパク質の生産に関する。
ホ乳類細胞における遺伝子の転写は、制′４ｆｆＩＩ
Ｄ ＮＡ配列とトランス作用型ＤＮＡ結合タンパク質と
の相互作用が中心的役割を果す複雑なメカニズムで制御
される。転写制御に関し、インターフェロン（ＩＦＮ）
をコードする遺伝子は、多くのサイト力イン遺伝子に共
通する特徴をもつ、すなわち、これらの遺伝子の転写は
種々の細胞外シグナルに従い一時的に誘導される。ＩＦ
Ｎ−α及びＩＦＮ−βの遺伝子の転写は、種々の細胞に
おいてウィルスにより効率的に誘導され、一方ＩＦＮ−
Ｔをコードする遺伝子の転写は、Ｔリンパ球においてマ
イトジェン活性化後に誘導されることが報告されている
（レヴユーは、ワイズマン（Ｗｅｉｓｍａｎｎ）及びウ
ェーバ−（Ｗｅｂｅｒ ） 、１９８６ ；タニグチ（
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ） 、１９８ Ｂ参照）。
Ｄ ＮＡ配列とトランス作用型ＤＮＡ結合タンパク質と
の相互作用が中心的役割を果す複雑なメカニズムで制御
される。転写制御に関し、インターフェロン（ＩＦＮ）
をコードする遺伝子は、多くのサイト力イン遺伝子に共
通する特徴をもつ、すなわち、これらの遺伝子の転写は
種々の細胞外シグナルに従い一時的に誘導される。ＩＦ
Ｎ−α及びＩＦＮ−βの遺伝子の転写は、種々の細胞に
おいてウィルスにより効率的に誘導され、一方ＩＦＮ−
Ｔをコードする遺伝子の転写は、Ｔリンパ球においてマ
イトジェン活性化後に誘導されることが報告されている
（レヴユーは、ワイズマン（Ｗｅｉｓｍａｎｎ）及びウ
ェーバ−（Ｗｅｂｅｒ ） 、１９８６ ；タニグチ（
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ） 、１９８ Ｂ参照）。
元々強力な抗ウィルス活性により同定されたサイト力イ
ンであるＩＦＮ−βも、細胞増殖及び細胞分化をコント
ロールする上で重要な役割を果しているようである。こ
れに関し、ＩＦＮ−β遺伝子のよく知られているインジ
ューサーであるウィルス及びポリ（ｒｌ） ：ポリ（
ｒＣ）の他に、コロニー活性化因子−１（ｃＳＦ−１）
（ムーア（Ｍｏｏｒｅ）等、１９８４ ；ワレン（Ｗａ
ｒｒｅｎ）及びラルフ（Ｒａｌｆ）、１９８６；レスニ
スキー（Ｒｅｓｎｉ ｔｚｋｙ）等、１９８６）、腫瘍
ネタロシス因子（ＴＮＦＸオノザキ（Ｏｎｏｚａｋｉ）
等、１９８８）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）（ズ
ロ（Ｚｕｌｌｏ）等、１９８５）及びＩＦＮ類（コハセ
（Ｋｏｈａｓｅ）等、１９８７）等の多数のサイト力イ
ンも、特定の細胞中でＩＦＮ−βを誘導するようであり
、このことは、これらが標的細胞において同様の又は同
一のシグナルを誘導することを示唆している。
ンであるＩＦＮ−βも、細胞増殖及び細胞分化をコント
ロールする上で重要な役割を果しているようである。こ
れに関し、ＩＦＮ−β遺伝子のよく知られているインジ
ューサーであるウィルス及びポリ（ｒｌ） ：ポリ（
ｒＣ）の他に、コロニー活性化因子−１（ｃＳＦ−１）
（ムーア（Ｍｏｏｒｅ）等、１９８４ ；ワレン（Ｗａ
ｒｒｅｎ）及びラルフ（Ｒａｌｆ）、１９８６；レスニ
スキー（Ｒｅｓｎｉ ｔｚｋｙ）等、１９８６）、腫瘍
ネタロシス因子（ＴＮＦＸオノザキ（Ｏｎｏｚａｋｉ）
等、１９８８）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）（ズ
ロ（Ｚｕｌｌｏ）等、１９８５）及びＩＦＮ類（コハセ
（Ｋｏｈａｓｅ）等、１９８７）等の多数のサイト力イ
ンも、特定の細胞中でＩＦＮ−βを誘導するようであり
、このことは、これらが標的細胞において同様の又は同
一のシグナルを誘導することを示唆している。
ウィルス及びポリ（ｒｌ）：ポリ （ｒＣ）によるＩＦ
Ｎ遺伝子の誘導は、転写レベルで起こることが示された
（ラジ（Ｒａｊｉ）及びピサ（Ｐｉｔｈａ）、１９８３
；オーツ（Ｏｈｎｏ）及びタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈ
ｉ）、１９８３；ジンク−（Ｄｉｎｔｅｒ）等、１９８
３、ジン（Ｚｉｎｎ）等、１９８３）、このように誘導
促進因子として機能するシス型ＤＮＡ配列がヒトＩＦＮ
−β遺伝子の５′隣接領域内に同定された（フジタ（Ｆ
ｕｊｉｔａ）等、１９８５．１９８７ ｉグツトバーン
（Ｇｏｏｄｂｏｒｎ）等、１９８５．シンター（Ｄｉｎ
ｎｅｔ）及びハウザー（Ｈａｕｓｅｒ）、１９Ｂ？）、
誘導促進因子領域（すなわちＣＡＰ部位に関しては−６
５〜−１０５）には、事実多重化したときに転写の誘導
活性化に機能する反復へキサヌクレオチドを含む（フジ
タ（Ｆｕｊｉｔａ）、１９８７）、我々はマウス上９２
９細胞及びヒト細胞などのホ乳類細胞において、特異的
にＩＦＮ−β制御配列に結合する因子、ＩＲＦｌ及び機
能性反復へキサヌクレオチド配列＝（Ａ Ａ Ｇ Ｔ
Ｇ Ａ ） ｓを同定した。我々は、ＩＲＦｌが、同定
されたシス型成分と相互作用することにより、ＩＦＮ−
β遺伝子転写のウィルス誘導活性化におてい基本的役割
を果していることが分った。
Ｎ遺伝子の誘導は、転写レベルで起こることが示された
（ラジ（Ｒａｊｉ）及びピサ（Ｐｉｔｈａ）、１９８３
；オーツ（Ｏｈｎｏ）及びタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈ
ｉ）、１９８３；ジンク−（Ｄｉｎｔｅｒ）等、１９８
３、ジン（Ｚｉｎｎ）等、１９８３）、このように誘導
促進因子として機能するシス型ＤＮＡ配列がヒトＩＦＮ
−β遺伝子の５′隣接領域内に同定された（フジタ（Ｆ
ｕｊｉｔａ）等、１９８５．１９８７ ｉグツトバーン
（Ｇｏｏｄｂｏｒｎ）等、１９８５．シンター（Ｄｉｎ
ｎｅｔ）及びハウザー（Ｈａｕｓｅｒ）、１９Ｂ？）、
誘導促進因子領域（すなわちＣＡＰ部位に関しては−６
５〜−１０５）には、事実多重化したときに転写の誘導
活性化に機能する反復へキサヌクレオチドを含む（フジ
タ（Ｆｕｊｉｔａ）、１９８７）、我々はマウス上９２
９細胞及びヒト細胞などのホ乳類細胞において、特異的
にＩＦＮ−β制御配列に結合する因子、ＩＲＦｌ及び機
能性反復へキサヌクレオチド配列＝（Ａ Ａ Ｇ Ｔ
Ｇ Ａ ） ｓを同定した。我々は、ＩＲＦｌが、同定
されたシス型成分と相互作用することにより、ＩＦＮ−
β遺伝子転写のウィルス誘導活性化におてい基本的役割
を果していることが分った。
本発明の広範な特徴に従い、我々はインターフェロン調
節因子−１（ＩＲＦ−１）活性を有するタンパク質をコ
ードする組換えＤＮＡ分子を提供する。該ＤＮＡ分子は
、ヒ）ＩＲＦ−１又はマウスＩＲＦ−１をコードするか
、もしくはこれらをコードするＤＮＡ分子にハイブリダ
イズし得ることが望ましい。
節因子−１（ＩＲＦ−１）活性を有するタンパク質をコ
ードする組換えＤＮＡ分子を提供する。該ＤＮＡ分子は
、ヒ）ＩＲＦ−１又はマウスＩＲＦ−１をコードするか
、もしくはこれらをコードするＤＮＡ分子にハイブリダ
イズし得ることが望ましい。
該Ｄ Ｎ Ａ分子は、反復オリゴマー配列ＡＡＧＴＧＡ
及びヒトＩＦＮ−β遺伝子の上流制御要素に結合するタ
ンパク質をコードするものであることが好ましい。
及びヒトＩＦＮ−β遺伝子の上流制御要素に結合するタ
ンパク質をコードするものであることが好ましい。
該ＤＮＡ分子は、構成的、又は例えばニューキャンスル
病ウィルスなどによるウィルス誘導性、又はコンカナバ
リンＡを用いるなど、マイトジェン活性化により誘導さ
れるなど、誘導性のプロモーター領域を含み得る。
病ウィルスなどによるウィルス誘導性、又はコンカナバ
リンＡを用いるなど、マイトジェン活性化により誘導さ
れるなど、誘導性のプロモーター領域を含み得る。
１つの好ましいＤＮＡ分子は（ヒトＩＲＦ−１をコード
する）、以下の一般式ｉで表わされる構造遺伝子により
特徴づけられる。
する）、以下の一般式ｉで表わされる構造遺伝子により
特徴づけられる。
一般式Ｉ
ＡＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＡＧＣＣＡＧＡＴＣＣＣＡＡＧ
ＡＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＡＣＴＴＴＣＧＣＴＧＴＧ
ＡＴＧＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＣ
ＴＧＣＴＧＡＣＣＣＣＡＧＴＣＣＧＧＴＴＧＣＣＣＴＣ
ＧＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡ、ＧＴＣ
ＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＧＡＧＡＴＧＣＴＡＡＧＡＧＣ
ＡＧＧＡＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＣＴＣＴＧＣＣＴ
ＧＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＣＡＧＴＴＣ
Ｃ５］、０ ５２０ ５３０
５４０ ５５０ＡＧＧＣＴＡＣＡＴ
ＧＣＡＧＧＡＣＴＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣ
ＣＴＧＡＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴ又は、その変異体。
ＡＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＣＡＡＣＴＴＴＣＧＣＴＧＴＧ
ＡＴＧＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＣ
ＴＧＣＴＧＡＣＣＣＣＡＧＴＣＣＧＧＴＴＧＣＣＣＴＣ
ＧＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡ、ＧＴＣ
ＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＧＡＧＡＴＧＣＴＡＡＧＡＧＣ
ＡＧＧＡＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＣＴＣＴＧＣＣＴ
ＧＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＡＣＡＧＴＴＣ
Ｃ５］、０ ５２０ ５３０
５４０ ５５０ＡＧＧＣＴＡＣＡＴ
ＧＣＡＧＧＡＣＴＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣ
ＣＴＧＡＣＴＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴ又は、その変異体。
例えば、このＤＮＡ分子は、上記一般式で表わされる構
造遺伝子及び以下の一般式■内に含まれる上流及び下流
の隣接配列により特徴づけられる。
造遺伝子及び以下の一般式■内に含まれる上流及び下流
の隣接配列により特徴づけられる。
一般式■
ＣＧＣＣＡＴＧＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＴ
ＣＣＣＣＧＡＣＴＧＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＧＴＧＧＡＡ
ＧＴＴＧＴＧＣＣＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＴＧＡ’］
”ＣＴＧＴＡＣＡＡＣＴ’ｒＣＣＡＧＧＴＧＴＣＡＣＣ
ＣＡＴＧＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＣＴＡＣＡ
ＡＣＡＧＡＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＡＡＴ
ＴＡＣＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＣＡ
ＧＣＣＧＡＡ ＴＣＧ ＣＴＣＣＴＧＣＡ ＧＣＡ Ｇ
ＡＧＣＣＡ ＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧ
ＣＴＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＴＣＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＣ
ＣＡＡＣＡＡＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＧＭＧＧＧＧＴＡＣ
ＣＴＡＣＴＣＡＡＴＧＡＡＣＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＧＣ
ＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＡＧＡＣＴＴＴＡＧ
ＣＴＧＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＡＡＡＴＴＧＡＣ
ＡＧＣＣＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧ
ＡＴＡτＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＡＧＡＧ
ＣＡＧＧＡＡＣＧＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧ
ＡＡＡ’ＪＴＣＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＧＡＧＡＴＧＣ
ＴＡＡＧＡＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣ
ＡＧＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＣＴＧＧＣＡＣＡＴＣＣ
ＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＴＧＴＧＣＣＧＧＡＣＡＧＣＡＣ
ＣＡＧＴＧＡ’！’ＣＴＧＴＡＣＡ、ＡＣＴＴＣＣＡＧ
ＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＴＧＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧ
ＡＡＧＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡ
ＡＧＧＧＡＡＡＴＴＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＧ
ＡＡＧＣＴ’ＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＴＣＧＧＡＧＴＧＧ
ＣＡＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＡＡＡＡＡＣＴＴＧＧ
ＣＡＣＴＴＴＴＴＣＧＴＧＴＧＧＡＴＣＴＴＧＣＣＡＣ
ＡＴＴＴＣＴＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡ、ＴＧＧＧＡＡＧ
ＧＧＧＴＡＣＣＴＡＣＴＣＡＡＴＧＡＡＣＣＴＧＧＡＧ
ＴＣＣＡＧＣＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＡＧＡ
ＣＴＴＴＡＧＣＴＧＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＡＡ
ＡＴＴＧＡＣＡＧＣＣＣＡＧ８６０ ８７０
８［１０Ｂ２Ｏ９００ＧＧＧＧＧＧＡＴＡ
ＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＴＣＴＴ
ＣＡＣＡＧＡＴＣＴ’ＧＡＡＧＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＣ
Ｃ八ＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣ
ＣＣＡＧＴＣＣＧＧ’ｒＴＧＣＣＣＴＣ又は、その変異
体。
ＣＣＣＣＧＡＣＴＧＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＧＴＧＧＡＡ
ＧＴＴＧＴＧＣＣＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＡＧＴＧＡ’］
”ＣＴＧＴＡＣＡＡＣＴ’ｒＣＣＡＧＧＴＧＴＣＡＣＣ
ＣＡＴＧＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＣＴＡＣＡ
ＡＣＡＧＡＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＡＡＴ
ＴＡＣＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＣＡ
ＧＣＣＧＡＡ ＴＣＧ ＣＴＣＣＴＧＣＡ ＧＣＡ Ｇ
ＡＧＣＣＡ ＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧ
ＣＴＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＴＣＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＣ
ＣＡＡＣＡＡＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＧＭＧＧＧＧＴＡＣ
ＣＴＡＣＴＣＡＡＴＧＡＡＣＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＧＣ
ＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＡＧＡＣＴＴＴＡＧ
ＣＴＧＴＡＡＧＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＡＡＡＴＴＧＡＣ
ＡＧＣＣＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＧＣＣＡＧ
ＡＴＡτＣＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＡＧＡＧ
ＣＡＧＧＡＡＣＧＡＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧ
ＡＡＡ’ＪＴＣＧＡＡＧＴＣＣＡＧＣＣＧＡＧＡＴＧＣ
ＴＡＡＧＡＧＣＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＣＴＧＴＣＡＧＣ
ＡＧＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＣＴＧＧＣＡＣＡＴＣＣ
ＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＴＧＴＧＣＣＧＧＡＣＡＧＣＡＣ
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ＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＴＧＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧ
ＡＡＧＣＴＡＣＡＡＣＡＧＡＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡ
ＡＧＧＧＡＡＡＴＴＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＧ
ＡＡＧＣＴ’ＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＴＣＧＧＡＧＴＧＧ
ＣＡＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＧＡＡＡＡＡＡＡＣＴＴＧＧ
ＣＡＣＴＴＴＴＴＣＧＴＧＴＧＧＡＴＣＴＴＧＣＣＡＣ
ＡＴＴＴＣＴＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡ、ＴＧＧＧＡＡＧ
ＧＧＧＴＡＣＣＴＡＣＴＣＡＡＴＧＡＡＣＣＴＧＧＡＧ
ＴＣＣＡＧＣＣＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＡＧＡ
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Ｃ八ＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣ
ＣＣＡＧＴＣＣＧＧ’ｒＴＧＣＣＣＴＣ又は、その変異
体。
別の好ましいＤ Ｎ Ａ分子（マウスＩＲＦ−１をコー
ドする） は、 以下の一般式■で表わされる構 造遺伝子により特徴づけられる。
ドする） は、 以下の一般式■で表わされる構 造遺伝子により特徴づけられる。
一般式ｍ
ＡＴＧ ＣＣＡ ＡＴＣ▽▽ＡＣＴ ＣＧＡ
ＡＴＧ ＣＧＧ ＡＴＧ ＡＧＡ ＣＣＣ▽▽
ＴＧＧ ＣＴＡ ＧＡＧ@ 、ＡＴＧ ＣＡＧ
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上記一般式で表わされる構造で表わされる構造遺伝子及
び以下の一般式■内に含まれる上流及び下流の隣接配列
により特徴づけられる。
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ＧＡＧＧＧＴＣＴＴＡＴＣＧb １５１７▽▽ＴＧＧＧＣＴＧＧＣＣＣＴＧＡＧＧＧＧＡ
ＡＴＡＧＡＣＣＡＧＣＧＣＣＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＡ
ＴＡＧＣＡＣＴＧＧＣＣＣＴ`Ｇ １５７６ ＡＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＴＡＣＴＡＧＧＡＧ
ＡＣＡＡＴＴＧＣＡＣＴＡＡＡＴＧＡＧＴＣＣＴＡＴＴ
ＣＣＣＡＡＡＧＡＡＣＴＧＣs １６３５ＧＣＣＣＴＴＣＣＣＡＡＣＣＧＡＧＣＣＣＴＧ
ＧＧＡＴＧＧＴＴＣＣＣＡＡＧＣＣＡＧＴＧＡＡＡＴＧ
ＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＡＡ１６９４ ＡＡＴＧＧＧＧ
’ｌ’ＣＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＴＧＧＣＴＣＣＣＴＴＡ
ＧＣＣＴＣＡＧＡＧＧＧＡＡＴｃＴＧｃｃＴｃＡｃＴＡ
ｃモsＧ ▽７５３ ▽８１２ ▽８７１ ▽９３０ ▽９８９ ▽０４８ ＣＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡ’ｌ’ＧＧＣＡＣ’ｒＴＴＣＴＣＴＧＴＧＧＡ
ＣＴＴＴＧＣＣＡＣＡＴＴ’Ｉ’ＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧ
ＧＴＧＴＡＣＡＣＴＡＡＣＡＴＴＴＣＴＣＣＣＣＡＧＴ
ＣＴＡＧＧＣＣＴＴＴＧＣｆｆＴＡＴＡＧＴＧＣＣＴＴ
ＧＣＣＴＧＧＴＧＣＣ▽ＴＧＣＴＧ ＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＧＧＣＣ▽ＴＴＧ Ｇ ＣＡＧ ’！’ＣＣＴＣＡＧＣ
ＡＧ ＧbＣＣＡＧ ＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＴＴＧＴＧＡＧＣＧｑｃＴＴ
ＧＧＣＧＴＧＡＣＴＣＴＴＧＡＣＴＡＴＣＴＡＴＴＡＧ
ＡＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＡＣＴＧＣＴＡＡＡＴＧＧＴ
ＧＴＴＴＧＧＴＣＡＴＧＴＧＧＴＧＧＡＣＣＴＧＴＧＴ
ＡＡＡ’！’ＡＴＧＴＡＴＡＴＴＴＧＴＣＴＴＴＴＴＡ
ＴＡ／１−ＡＡＡＴＴＴＡＡＧＴＴＧＴＴＴＡＣＡＡ、
ＡＡＡＡＡＡＡＡ ２（１８２又は、その変異体。
ＩＲＦ−１活性を有するタンパク質をコードする本発明
のＤＮＡ配列は、ヒト及びマウスばかりでなく、例えば
ニワトリ、カエル及びイーストなどの真核性生物由来で
、先に述べたヒトまたはマウスのＩＲＦ−１のＤＮＡ配
列（第ｒ−４’図）にハイブリダイズし、がっＩＲＦ−
１活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含
んでいる。
のＤＮＡ配列は、ヒト及びマウスばかりでなく、例えば
ニワトリ、カエル及びイーストなどの真核性生物由来で
、先に述べたヒトまたはマウスのＩＲＦ−１のＤＮＡ配
列（第ｒ−４’図）にハイブリダイズし、がっＩＲＦ−
１活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含
んでいる。
第４Ａ図で定義したようにマウスのＩＲＦ−１のｃＤＮ
Ａにハイブリダイズする１つのｃ ＤＮＡ分子を以下の
一般式ｍａに示す。
Ａにハイブリダイズする１つのｃ ＤＮＡ分子を以下の
一般式ｍａに示す。
一般式ｍａ
＋０ ▽２０ ▽３０
▽４０ＡＴＧＣＣＧＧＴＧＧＡＡＣＧＧＡＴＧＣ
ＧＡＡＴＧＣＧＣＣＣＧＴＧＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣへ
Ｇ５０ ▽６０ ▽７０
▽８０ ▽９０ＡＴＡＡＡＴＴＣＣＡＡ
ＴＡＣＧＡＴＡＣＣＡＧＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＧＣＴＧ
ＡＡＣＡＡＧＧＡＧ１００ ＋１０
▽１２０ ▽１３０ＡＡＧＡＡＧＡＴ
ＴＴＴＣＣＡＧＡＴＣＣＣＣＴＧＧＡＴＧＣＡＴＧＣＧ
ＧＣＴＣＧＧＣＡＣＧＧＡＣＡＴＡＣＡＧＧ、ＡＡＡＧ
ＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＴＡＧＡ丁ＡＡＡＣＣＡＧ
Ａ丁ＣＣＡＡＡＡ又は、この変異体。
▽４０ＡＴＧＣＣＧＧＴＧＧＡＡＣＧＧＡＴＧＣ
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▽８０ ▽９０ＡＴＡＡＡＴＴＣＣＡＡ
ＴＡＣＧＡＴＡＣＣＡＧＧＧＣＴＡＡＡＧＴＧＧＣＴＧ
ＡＡＣＡＡＧＧＡＧ１００ ＋１０
▽１２０ ▽１３０ＡＡＧＡＡＧＡＴ
ＴＴＴＣＣＡＧＡＴＣＣＣＣＴＧＧＡＴＧＣＡＴＧＣＧ
ＧＣＴＣＧＧＣＡＣＧＧＡＣＡＴＡＣＡＧＧ、ＡＡＡＧ
ＣＡＴＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＴＡＧＡ丁ＡＡＡＣＣＡＧ
Ａ丁ＣＣＡＡＡＡ又は、この変異体。
例えば、このＤＮＡ分子は、上記一般式で表わされる構
造遺伝子及び以下の一般式ＩＶａ内に含まれる上流及び
下流の隣接配列により特徴づけられる。
造遺伝子及び以下の一般式ＩＶａ内に含まれる上流及び
下流の隣接配列により特徴づけられる。
一般式ＩＶａ
丁Ｃ丁ＣＡＧＧＣＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＣＴＡＡＣＴＴ
丁ＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＡＴＴＡＴＴＣ声
へＣＴＧへＣＧＧＧＣＴＴＴＣＡ丁丁丁ＣＣＡＴ丁ＴＴ
ＡＣＡＣＡＣＣＣＴＡＡＣＡへＣＡＣＴＣＡＣＡＣＣＴ
ＴＧＣＧＧＧへＴＡＧ丁ＧＡＴＧＡＡＧＡＧＡＡＣＧＣ
ＡＧＡＧＧＧＧＡＧＡＬＬＡＬＡＬＴＣｙ（ｗＡＧＣｓ
ＡＡ（ａＡＧＣｙＴＧＴＡＴＴＧＧＴＡＧＣＧＴＧＧＡ
ＡへへΔ、Δ、＃、Δ、ＡＡＡＧＣＡＣＡＴＴＧＡＧＡ
ＧＧＣ丁ＡＣＣＧＴＡＡＧＴＧＧＣ丁丁ＴＴＣＴＣＣＴ
ＧＡＧＴ！１．ＴＧＣＧＧＴＣＣ丁Ｇ、ＡＣＴＴＣＡＧ
Ｃ丁ＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ、ＡＡＧＣＡＡＡ ＴＴＴＴ
ＣＧＡ ＴＧＴＧＣＣＡＴＧＡＡＴＴＣＣ（ＴＧＣＣＣ
Ｇ、ＡＣＡＴＣＡＡＧＣＡＡＧＡＡ、ＣＣＡＧＴＴＧＡ
ＧＴＣＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＣＴＴＡＧＴＡＡＴＧＧ、
：１ＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＡＡＣＴＡＧＣ丁ＧＧＡＡＴ
ＴＴＴＴＴＴＡＴＴＣＴ丁Ｇ 丁ＧＡ、４ＴＡＴＧＴ丁
ＡＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＴ
ＧＧへＴＧＣＣＴＣＡＧＡＡ、ＣＧＧＡ、ＧＧＡＣＡＴ
ＡＧＧＧＣＡＧＴＡＣＧＡＧＣ，４，ＡＴＧＴＣＧＣＧ
ＧＧＣＴＧＣ丁ＴＣＴＧＣＡ（ＣＴ 丁ＡＴＣＴＴＧＡ
、ＡＧＣＡＣＴＴＡ、Ｃ，ＡＡＴＡＧＧＣＣＴＴＣ’ｒ
ＴＧＴＡ、ＡＴＣＴｌ”ＧＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＡＧ
ＣＡＣＡＣＴＣＧＧＣＧＡＣＣＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＣ
ＣＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＣＣＣＣ丁ＣＣＣ
ＴＣＣＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＣＣＴ
Ｃ丁ＡＴＧＣＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＣＣＡＡ
ＴＣＣＣＡＴＣＡＣＡへＣＣＴＣＴＴＡＣＣＴＡＴＣＣ
丁ＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＴ丁Ｃ丁ＡＴＣＣＣ
ＡＧＣＣＣ，ＡＣＣＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＣＴＣＣＴＣ
ＣＣＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＡτＴＣＴＡＧＣＣＣＡＴＴ
ＡＣＣＣＡＣＧＣＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＣＡＧ
ＣＣ丁ＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴ丁
ＴＣＣ丁ＣＣＡＧ丁丁ＴＣＣＴＣＴＣＣＴＣＡ Ａ Ａ
ＧＧＣＡ Ａ ＧＧＣＴＣＴ ＡＣＡ ＴＣＴＴＧＧ
Ａ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＡ ＡＧ Ａ
Ａ／１．ＡＴＧＡＧＴＴＴＣＴＴＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣ
ＣＣＡＴＴＴＴＡＡＧＡＣＴＧＣＴＴＧＡへＴ、Ａ又は
この変異体。
丁ＴＡＧＴＴＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＡＴＴＡＴＴＣ声
へＣＴＧへＣＧＧＧＣＴＴＴＣＡ丁丁丁ＣＣＡＴ丁ＴＴ
ＡＣＡＣＡＣＣＣＴＡＡＣＡへＣＡＣＴＣＡＣＡＣＣＴ
ＴＧＣＧＧＧへＴＡＧ丁ＧＡＴＧＡＡＧＡＧＡＡＣＧＣ
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ＧＧＣ丁ＡＣＣＧＴＡＡＧＴＧＧＣ丁丁ＴＴＣＴＣＣＴ
ＧＡＧＴ！１．ＴＧＣＧＧＴＣＣ丁Ｇ、ＡＣＴＴＣＡＧ
Ｃ丁ＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡ、ＡＡＧＣＡＡＡ ＴＴＴＴ
ＣＧＡ ＴＧＴＧＣＣＡＴＧＡＡＴＴＣＣ（ＴＧＣＣＣ
Ｇ、ＡＣＡＴＣＡＡＧＣＡＡＧＡＡ、ＣＣＡＧＴＴＧＡ
ＧＴＣＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＣＴＴＡＧＴＡＡＴＧＧ、
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ＡＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＴ
ＧＧへＴＧＣＣＴＣＡＧＡＡ、ＣＧＧＡ、ＧＧＡＣＡＴ
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ＧＧＣＴＧＣ丁ＴＣＴＧＣＡ（ＣＴ 丁ＡＴＣＴＴＧＡ
、ＡＧＣＡＣＴＴＡ、Ｃ，ＡＡＴＡＧＧＣＣＴＴＣ’ｒ
ＴＧＴＡ、ＡＴＣＴｌ”ＧＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＡＧ
ＣＡＣＡＣＴＣＧＧＣＧＡＣＣＣＣＴＴＣＴＧＴＧＴＣ
ＣＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＴＡＣＣＣＡＣＣＣＣ丁ＣＣＣ
ＴＣＣＴＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＣＣＴ
Ｃ丁ＡＴＧＣＧＣＣＣＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＣＣＡＡ
ＴＣＣＣＡＴＣＡＣＡへＣＣＴＣＴＴＡＣＣＴＡＴＣＣ
丁ＴＴＣＣＣＴＣＣＣＡＡＣＣＣＣＴ丁Ｃ丁ＡＴＣＣＣ
ＡＧＣＣＣ，ＡＣＣＡＣＣＴＡＣＣＣＣＡＣＴＣＣＴＣ
ＣＣＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＡτＴＣＴＡＧＣＣＣＡＴＴ
ＡＣＣＣＡＣＧＣＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＣＡＧ
ＣＣ丁ＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴ丁
ＴＣＣ丁ＣＣＡＧ丁丁ＴＣＣＴＣＴＣＣＴＣＡ Ａ Ａ
ＧＧＣＡ Ａ ＧＧＣＴＣＴ ＡＣＡ ＴＣＴＴＧＧ
Ａ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＧＡ ＡＧ Ａ
Ａ／１．ＡＴＧＡＧＴＴＴＣＴＴＣＡＣＣＧＣＴＧＴＣ
ＣＣＡＴＴＴＴＡＡＧＡＣＴＧＣＴＴＧＡへＴ、Ａ又は
この変異体。
以下にヒト細胞及びマウス細胞由来のヒト及びマウスｔ
ＲＦ−１をコードするｃＤＮＡ分子及びマウス細胞及び
イースト由来の各々マウスＩＲＦ−１及びヒトＩＲＦ−
１のｃＤＮＡにハイブリダイズするｃＤＮＡの単離につ
いて説明する。
ＲＦ−１をコードするｃＤＮＡ分子及びマウス細胞及び
イースト由来の各々マウスＩＲＦ−１及びヒトＩＲＦ−
１のｃＤＮＡにハイブリダイズするｃＤＮＡの単離につ
いて説明する。
この組換ＤＮＡ分子は、以下の一般式Ｖ内に含まれるプ
ロモーター及びレギュレータ配列も含み得る。
ロモーター及びレギュレータ配列も含み得る。
一般式■
Ｃ’Ｉ’ＧＣＡＧＡＡＡＧＡＧＧＧＧＧＡＣＧＧＴＣＴ
ＣＧＧＣ’Ｉ’ＴＴＣＣＡＡＧＡＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧ
ＧＧ▽２９９ ゜ＡＧＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＣ＝鴫侮ＣＣＣ
ＧＣＧＧＴＡＧＣＣＣＣ雲ＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＣＧＡ
ＧＧＧＧＧ’ｒＧＧＧＧＡＧＣＡＣＡＧＣＴＧＣＣＴ’
ｒＧ’ｌ？ＡＣＴ’Ｌ’ＣＣＣＣＴＴＣＧＣＣＧＣ’ｒ
ＴＡＧＣＴＣＴ`Ｃ ▽１９３ ＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＴＴＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＧＡ’
ｌ’ＧＡＧＧＣＣＧＡＧＴＧ９９ｑ二△△工ＥＧＧＣＧ
ＣＧＣＡＧＧＡＧＣＧ＝１３５ マイナー ｃａｐ 部位 ＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＣＧＡＧ’ｒＣ
ＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＡ’Ｉ’ＣＣＣＧＣＴＡＡＧＴ
ＧＴＴＴＡＧＡＴ冨▽７７ ″“−０°ｐ ′Ｒ▽▽▽▽▽▽▽▽ｒ−’”２−。
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ＧＣＧＣＡＣＣＡＣＴＣＣＴＴＣＧＴＣＧＡＧＧＴＡＧ
ＧＡＣＧＴＧＣＴ＋ １９
＋ １ＴＴＣＡＣＡＧＴＣＴＡＡＧＣＣＧＡＡＣＣＧＡ
ＡＣＣＧＡＡＣＣＧＡＡＣＣＧＡＡＣＣＧＡＡＣＣＧＧ
ＧＣＣＧＡＧＴＴＧＣＧ＋３９ ＣＣＧＡＧＧＴＣＡＧＣＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧ
ＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＣＧＧＧＣＡＴＣＴＴＴＣ
ＧＣＴＴＣＧＴＧＣＧＣＧＣＡＴＣＧＣＧＴＡＣＣＴＡ
ＣＡＣＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧＴＧＣＣＴＣＧＣＴＣＴＣ
ＣＧＧＣＡＣＣＣＴＣＴＧＣＧＡＡ＋１５５ ▽ｓｔＩ ’Ｉ’ＣＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧ ＋２１３ ＋２２５ 又はこの変異体。
ＧＣＧＣＡＣＣＡＣＴＣＣＴＴＣＧＴＣＧＡＧＧＴＡＧ
ＧＡＣＧＴＧＣＴ＋ １９
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この組換えＤＮＡ分子は、例えばサイト力イン又はプラ
スミトゲン活性化因子などの医学的に活性のあるタンパ
ク質を発現するように設計し得るし、またこの型のもの
においてはＩＲＦ−１活性分子に対する結合部位を含む
該タンパク質の遺伝子のプロモーター領域を機能的に結
合した該クンバク質の構造遺伝子を含むことが望ましい
。
スミトゲン活性化因子などの医学的に活性のあるタンパ
ク質を発現するように設計し得るし、またこの型のもの
においてはＩＲＦ−１活性分子に対する結合部位を含む
該タンパク質の遺伝子のプロモーター領域を機能的に結
合した該クンバク質の構造遺伝子を含むことが望ましい
。
従って本発明の組換えＤＮＡ分子は、先に定義したＤＮ
Ａ配列及び該ＤＮＡ配列によりコードされる■ＲＦ−１
活性タンパク質の制御下の、目的とする医学的に活性な
タンパク質の構造遺伝子を含む。このような組換えＤＮ
Ａ分子において、ＩＲＦ−１活性分子をコードする遺伝
子は、構成的プロモーターの制御下にあることが好まし
く、又は誘導性プロモーターの制御下にあることが最も
好ましい。目的とする医学的に活性なタンパク質の遺伝
子は、反復、Ａ Ａ ＣＴ Ｇ Ａ配列を含むＩＲＦ結
合部位を含むことが望ましい。
Ａ配列及び該ＤＮＡ配列によりコードされる■ＲＦ−１
活性タンパク質の制御下の、目的とする医学的に活性な
タンパク質の構造遺伝子を含む。このような組換えＤＮ
Ａ分子において、ＩＲＦ−１活性分子をコードする遺伝
子は、構成的プロモーターの制御下にあることが好まし
く、又は誘導性プロモーターの制御下にあることが最も
好ましい。目的とする医学的に活性なタンパク質の遺伝
子は、反復、Ａ Ａ ＣＴ Ｇ Ａ配列を含むＩＲＦ結
合部位を含むことが望ましい。
また、本発明は、先に定義した組換えＤＮＡ分子でトラ
ンスホームした、例えば大腸菌などの細菌、又はイース
ト細胞、又は例えばＣＨＯ細胞又はＬ９２９などのマウ
ス細胞などのホ乳類細胞などの宿主細胞も含む。理想的
には、これらの宿主細胞は、内在するＩ ＲＦ−１活性
が無いか、又は実質的に含まない細胞系列から選ばれた
ものであることが望ましい。
ンスホームした、例えば大腸菌などの細菌、又はイース
ト細胞、又は例えばＣＨＯ細胞又はＬ９２９などのマウ
ス細胞などのホ乳類細胞などの宿主細胞も含む。理想的
には、これらの宿主細胞は、内在するＩ ＲＦ−１活性
が無いか、又は実質的に含まない細胞系列から選ばれた
ものであることが望ましい。
別に、医学的に活性なタンパク質の生産のため、宿主細
胞がＩＲＦ−１活性を有するタンパク質をコードする配
列を含む第１のＤＮＡ分子、及び第１のＤＮＡ分子にコ
ードされているＩＲＦ−１活性タンパク質の制御下の、
目的とする医学的に活性なタンパク質をコードする遺伝
子を含む別個の第２のＤＮＡ分子でトランホームされる
。ｒＲＦ−１活性分子をコードする第１のＤＮＡ分子は
、ＩＲＦ−１活性化合物をコードする遺伝子に機能的に
結合する構成的プロモーター配列又は最も望ましくは誘
導性プロモーター配列を含むことが好ましい、また、第
２のＤＮＡ分子は反復ＡＡＧＴＡＧ配列を含む、ＩＲＦ
−１活性タンパク質の結合部位を含むことが望ましい。
胞がＩＲＦ−１活性を有するタンパク質をコードする配
列を含む第１のＤＮＡ分子、及び第１のＤＮＡ分子にコ
ードされているＩＲＦ−１活性タンパク質の制御下の、
目的とする医学的に活性なタンパク質をコードする遺伝
子を含む別個の第２のＤＮＡ分子でトランホームされる
。ｒＲＦ−１活性分子をコードする第１のＤＮＡ分子は
、ＩＲＦ−１活性化合物をコードする遺伝子に機能的に
結合する構成的プロモーター配列又は最も望ましくは誘
導性プロモーター配列を含むことが好ましい、また、第
２のＤＮＡ分子は反復ＡＡＧＴＡＧ配列を含む、ＩＲＦ
−１活性タンパク質の結合部位を含むことが望ましい。
ＩＲＦ−１活性タンパク質又は医学的に活性なタンパク
質は、これらの形質転換細胞の培養及び従来法による生
産タンパク質の単離により生産し得る。うまいことに、
宿主細胞は、以下に説明するように、ＩＲＩ”ｌをコー
ドする遺伝子に機能的に結合するプロモーターに適当な
処理を行うこまた、一般式■ａのｃＤＮＡ配列によって
コードされる別の好ましいタンパク質は、一般式■で表
わされる配列を有している。
質は、これらの形質転換細胞の培養及び従来法による生
産タンパク質の単離により生産し得る。うまいことに、
宿主細胞は、以下に説明するように、ＩＲＩ”ｌをコー
ドする遺伝子に機能的に結合するプロモーターに適当な
処理を行うこまた、一般式■ａのｃＤＮＡ配列によって
コードされる別の好ましいタンパク質は、一般式■で表
わされる配列を有している。
一般式■：
ＭｅｔＰｌ’ＯＶａｌＧｌｕＡｒｇ１ｙｉｅｔＡｒｇニ
ー：ｅｔＡｒ’１ＰｒｃＴｒｐＬ：ｕＧ１ｕｃ！ＵＣＪ
二１１１ ａＡ５ ｎ５ｅｒ Ａｓ ｎＴｈｒ １１
ｅＰｒＯＧ Ｉ ｙＬ：ｕＬｙ ５ Ｔｒ ｐＬｅＬＪ
Ａ５１１Ｌ４’５ Ｇ Ｉ ＵＬｙｓＬｙｓ Ｉ ｌ
ｅＰｈｅＧｌ ｎ Ｉ １ ｅＰｒｏＴｒｐｌｖｌａｔ
ＨＩ ｓＡ １ａＡｌ ａＡ、ｒｇＨｌ５Ｇ１ ｙ丁ｒ
ｐＡｓｐＶａｌＧｌｕＬｙｓＡｓｐＡ１ａＰｒｏＬｅｕ
ＰｈｅＡｒｇＡｓｎＴｒｐＡ１ａ１１ａＨ１ｓＴｈｌ−
ＧｌｙＬｙｓＨｌｓＧｌｎＰｒｏＧｌｙＩｌｅＡｓｐＬ
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＋ｒ）ＡＩ’ｇＡ１ａＳｅｌ−（ｊａ１口ｅＬｙｓＬｙ
ｓＴｈｒｓｅｒＡｓｐ＋１ｅ丁！＋ｒＧｌｒ′！Ａ１ａ
へｒ９〜ｒａＩＬｙｓｓｅｒｃｙｓ 以下にＩＲＦ−１活性を有するＤＮＡ結合クンバク質を
コードするマウス及びヒトのｃ ＤＮＡの分子クローニ
ング及び特性化を説明する。
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コードするマウス及びヒトのｃ ＤＮＡの分子クローニ
ング及び特性化を説明する。
クローン化ｃ ＤＮＡの解析により°７ウス及びヒトの
ＩＲＦ分子の間に著しい配列保存性があることが明らか
になる。さらにＩＲＦ−１をコードする遺伝子の発現は
、マウス１．、９２９細胞及び肺臓リンパ球において各
々ニューキラスル病つィルス（ＮＤＶ）及びコンカナバ
リン（ＣｏｎＡ）により；、！；導されることが示され
ている。
ＩＲＦ分子の間に著しい配列保存性があることが明らか
になる。さらにＩＲＦ−１をコードする遺伝子の発現は
、マウス１．、９２９細胞及び肺臓リンパ球において各
々ニューキラスル病つィルス（ＮＤＶ）及びコンカナバ
リン（ＣｏｎＡ）により；、！；導されることが示され
ている。
１、 大腸菌におけるＩＲＦ−１のクローニング及び発
現 Ａ、ポリ （Ａ）” ＲＮＡを未誘導のマウス上９２９
細胞から単離し、ｃＤＮＡの合成に用いた（アルボ（Ａ
ｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅｄ）の方法に従う、１
９８７）。生成したｃＤＮＡをＥｃｏＲＩ切断したλｇ
ｉｌｌベクターにクローン化し、ついで宿主株として大
腸菌Ｙ １（１９０を用い、パイン（Ｈｕｙｎｈ）等ｃ
ｔ９ｓ５）の標準操作に従がいｃＤＮＡライブラリーを
構築した。
現 Ａ、ポリ （Ａ）” ＲＮＡを未誘導のマウス上９２９
細胞から単離し、ｃＤＮＡの合成に用いた（アルボ（Ａ
ｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅｄ）の方法に従う、１
９８７）。生成したｃＤＮＡをＥｃｏＲＩ切断したλｇ
ｉｌｌベクターにクローン化し、ついで宿主株として大
腸菌Ｙ １（１９０を用い、パイン（Ｈｕｙｎｈ）等ｃ
ｔ９ｓ５）の標準操作に従がいｃＤＮＡライブラリーを
構築した。
このλｇｔｌｌライブラリーをプローブとして多重化（
４個）ＡＡＧＴＧＡ配列（以後ＣＩオリゴマーと呼ぶ、
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ）等、１９８７）を用いてスクリ
ーニングした。
４個）ＡＡＧＴＧＡ配列（以後ＣＩオリゴマーと呼ぶ、
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ）等、１９８７）を用いてスクリ
ーニングした。
このスクリーニング操作では、組換えλｇｔｌｌファー
ジを感染した大腸菌￥１（１９０を１０×１３ｃｍ四角
プレート上にブレーティングした。
ジを感染した大腸菌￥１（１９０を１０×１３ｃｍ四角
プレート上にブレーティングした。
それからこのプレートを１２°Ｃで４〜５時間インキュ
ベートすると、プレート当り約２０．０００個のプラー
クが出現した。
ベートすると、プレート当り約２０．０００個のプラー
クが出現した。
スクリーニング用のメンブレンフィルターはナイロン製
（ナイトラン、シュレイチャー・アンド・シュネル社製
）又はニトロセルロース製（シュレイチャー・アンド・
シェネル社）の膜である。このフィルターを１０ｍＭＩ
ＰＴＧ（適当な）１−ジプラークにおけるλａｃＺ遺伝
子発現を誘導する）に浸し、空気乾燥後プレート上に置
いて、３７°Ｃで２．５時間インキュベートした。もし
、ｃＤＮＡがｆａｃＺ遺伝子と読み枠がそろっていれば
、そのプラークは、そのｃＤＮＡによりコードされてい
るタンパク質を生産するであろう。
（ナイトラン、シュレイチャー・アンド・シュネル社製
）又はニトロセルロース製（シュレイチャー・アンド・
シェネル社）の膜である。このフィルターを１０ｍＭＩ
ＰＴＧ（適当な）１−ジプラークにおけるλａｃＺ遺伝
子発現を誘導する）に浸し、空気乾燥後プレート上に置
いて、３７°Ｃで２．５時間インキュベートした。もし
、ｃＤＮＡがｆａｃＺ遺伝子と読み枠がそろっていれば
、そのプラークは、そのｃＤＮＡによりコードされてい
るタンパク質を生産するであろう。
その後、このフィルターを取り出し、４ ”Ｃで２０分
分間中した後、乾燥させないようにしてスクリーニング
を行った。
分間中した後、乾燥させないようにしてスクリーニング
を行った。
検定のため、メンブレンフィルターを以下のように調製
した。
した。
マウス上９２９細胞から核抽出物を調製し１、それをメ
ンブレン上にスポツティングした（約ｌＯμｇのタンパ
ク質相当■）。
ンブレン上にスポツティングした（約ｌＯμｇのタンパ
ク質相当■）。
ＤＮＡ結合を行う前に、１０ｎＭヘベス（ｐ１１７、５
） 、５．０ｍＭ Ｎａ（、ｅ、１ｍＭＤＴＴ、１ｍ
ＭＥＤＴＡ、５％グリセリンを含む結合バッファを用い
た。５％脱脂粉乳（ユキジルシ社製）をこのバッファに
加え、この混合物中でフィルターを４°Ｃ１１時間イン
キュベーションした後、粉乳を含まない同バッファ中に
１分間洗浄した。
） 、５．０ｍＭ Ｎａ（、ｅ、１ｍＭＤＴＴ、１ｍ
ＭＥＤＴＡ、５％グリセリンを含む結合バッファを用い
た。５％脱脂粉乳（ユキジルシ社製）をこのバッファに
加え、この混合物中でフィルターを４°Ｃ１１時間イン
キュベーションした後、粉乳を含まない同バッファ中に
１分間洗浄した。
その後、このフィルターを、約３００ｂｐ平均長のサケ
精子ＤＮＡ３５０μｇ／ｌｎｌ及び３２Ｐラベル化プロ
ーブＣ１オリゴマーＤＮＡ（１０ｈｃｐｓ／ ｎｉｌ、
比活性２０００ｃｐｍ／ｆ ｍｏｌｅ） （フジタ（
Ｆｕｊ ｉ ｔａ）等、１９８７参照）を含む結合バ・
ソファ（１成）中でインキュベートした。このプローブ
ＤＮＡは、Ｔ４キナーゼと（ｒ−”Ｐ）ＡＴＰを用いて
、５′末端ラベルを行った。
精子ＤＮＡ３５０μｇ／ｌｎｌ及び３２Ｐラベル化プロ
ーブＣ１オリゴマーＤＮＡ（１０ｈｃｐｓ／ ｎｉｌ、
比活性２０００ｃｐｍ／ｆ ｍｏｌｅ） （フジタ（
Ｆｕｊ ｉ ｔａ）等、１９８７参照）を含む結合バ・
ソファ（１成）中でインキュベートした。このプローブ
ＤＮＡは、Ｔ４キナーゼと（ｒ−”Ｐ）ＡＴＰを用いて
、５′末端ラベルを行った。
結合後、室温で１〜２時間、結合バッファを５回交換し
ながら（１０ｄ／フイルター）フィルターを洗浄した。
ながら（１０ｄ／フイルター）フィルターを洗浄した。
さらにフィルターを空気乾燥し、オートラジオグラフィ
ーにかけた。この検定において、ナイロンノ°ンプレン
は、過剰の非ラベルＣｌオリゴマーを含めることにより
特異的に阻害されるポジティブシグナルを与えた。
ーにかけた。この検定において、ナイロンノ°ンプレン
は、過剰の非ラベルＣｌオリゴマーを含めることにより
特異的に阻害されるポジティブシグナルを与えた。
一方、ニトロセルロースメンブレンはそういう事はなか
った。
った。
この方法により、約１．４ＸＩＯｂ個の組換え体がスク
リーニングされた。第１回目のスクリニングで同定され
た３２個のポジティブファージクローンの中で、１個の
クローン（λＬ２８−８と命名）は、ひきつづ（スクリ
ーニング操作の中で、プローブＤＮＡと再現的に結合す
ることが分った。
リーニングされた。第１回目のスクリニングで同定され
た３２個のポジティブファージクローンの中で、１個の
クローン（λＬ２８−８と命名）は、ひきつづ（スクリ
ーニング操作の中で、プローブＤＮＡと再現的に結合す
ることが分った。
２、形質転換大腸菌におけるタンパク質の生産及び精製
大腸菌Ｙ１０Ｂ’９をλＬ２Ｂ−１１でトランスフェク
トすることにより、溶加性バクテリアクローンを調製し
、た。λＬ２Ｂ−８を宿す溶加体−晩培養物を４００Ｉ
ｎρＬ培地中１％濃度となるよう接種した。この細菌を
、０Ｄ６００値が１．０となるまで３１゛Ｃで増殖した
。その後、温度を２０分子８１４２°Ｃにシフトした。
トすることにより、溶加性バクテリアクローンを調製し
、た。λＬ２Ｂ−８を宿す溶加体−晩培養物を４００Ｉ
ｎρＬ培地中１％濃度となるよう接種した。この細菌を
、０Ｄ６００値が１．０となるまで３１゛Ｃで増殖した
。その後、温度を２０分子８１４２°Ｃにシフトした。
それからＩＰＴＧを１０ｄとなるように加え、３８゛Ｃ
でさらに２０分間インキュベートした後この培養物を迅
速にベレット化してから、２０ｍＭ”□ベス（ｐＨ７，
９） 、０．２ｍＭＥＤＴＡ、０．５１Ｍスペルミジン
、０．１５ｍＭスペルミン、０．１ ｍＭＤ Ｔ Ｔ、
１０％グリセロール、０．５ｍＭフェニルメチオニル
スルホニルフルオライド（Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ）、１μｇ／
ｍρヘフスクチンＡ、１μｇｌｔｄロイペプチン、５０
０μＭＬ−１−トシルアミド−２−フェニレンクロロメ
チルベンズアミジン、１０ｍＭモリブデン酸ナトリウム
、２ｍＭビロリン酸ナト・リウム及び２ｎ＋Ｍオルトバ
ナデン酸ナトリウムを含む溶菌バッファ１０ｄ中に懸濁
した。この細胞サスペンションに、３回凍結−融解操作
を行ない、つづいて、ベックマン５０Ｔｉローターヲ用
い、４°Ｃ２３０，０００ｒｐｍで１時間の遠心を行っ
た。上清は一１直接ゲル遅延検定法（以下参照）に用い
るか、又はさらに精製した。
でさらに２０分間インキュベートした後この培養物を迅
速にベレット化してから、２０ｍＭ”□ベス（ｐＨ７，
９） 、０．２ｍＭＥＤＴＡ、０．５１Ｍスペルミジン
、０．１５ｍＭスペルミン、０．１ ｍＭＤ Ｔ Ｔ、
１０％グリセロール、０．５ｍＭフェニルメチオニル
スルホニルフルオライド（Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ）、１μｇ／
ｍρヘフスクチンＡ、１μｇｌｔｄロイペプチン、５０
０μＭＬ−１−トシルアミド−２−フェニレンクロロメ
チルベンズアミジン、１０ｍＭモリブデン酸ナトリウム
、２ｍＭビロリン酸ナト・リウム及び２ｎ＋Ｍオルトバ
ナデン酸ナトリウムを含む溶菌バッファ１０ｄ中に懸濁
した。この細胞サスペンションに、３回凍結−融解操作
を行ない、つづいて、ベックマン５０Ｔｉローターヲ用
い、４°Ｃ２３０，０００ｒｐｍで１時間の遠心を行っ
た。上清は一１直接ゲル遅延検定法（以下参照）に用い
るか、又はさらに精製した。
精製は以下のように行った。
約４ｄの上清をべ・ラド体積２ ｍｉｌの、溶菌バッフ
ァで平衡化したポリ（ｄｉ−Ｃ） ；ポリ（ｄｉＣ）
カラムにかけた。溶出物質（４ｄ）を、バッファＺ（２
５ｍｈヘペス、ｐＨ７，８，１２，５１ＭＭｇＣ２２，
１ｍＭ ＤＴＴ、２０％グリセロール、０．１％ＮＰ−
４０，０，５ｍＭ ＰＭＳＦ）で平衡化したベツド体
積２−の〇Ｅ５２（ワットマン製）カラムにかけた。Ｄ
ＮＡ結合活性成分は、０、ＩＩＢＭ ＫＣｌを含むバッ
ファＺで溶出した。さらにこの溶出物（約４ｄ）をコン
セントリコン−１Ｏ（アミコン製）を用いて濃縮した。
ァで平衡化したポリ（ｄｉ−Ｃ） ；ポリ（ｄｉＣ）
カラムにかけた。溶出物質（４ｄ）を、バッファＺ（２
５ｍｈヘペス、ｐＨ７，８，１２，５１ＭＭｇＣ２２，
１ｍＭ ＤＴＴ、２０％グリセロール、０．１％ＮＰ−
４０，０，５ｍＭ ＰＭＳＦ）で平衡化したベツド体
積２−の〇Ｅ５２（ワットマン製）カラムにかけた。Ｄ
ＮＡ結合活性成分は、０、ＩＩＢＭ ＫＣｌを含むバッ
ファＺで溶出した。さらにこの溶出物（約４ｄ）をコン
セントリコン−１Ｏ（アミコン製）を用いて濃縮した。
最終的タンパク質濃度は２８ｆｆ１ｇ／Ｉｎ！であった
。
。
３、 クローンλＬ２Ｂ−８のタンパク質産物の特性（
ｉ）ゲル遅延検定法 λＬ２８−８を宿す溶加性細菌クローンを、大腸菌Ｙ１
（１８９のトランスフェクションにより調製し、バイン
（）Ｉｕｙｎｈ）等の操作を用い、高レベルのクローン
化ｃＤＮＡ発現を誘導した。
ｉ）ゲル遅延検定法 λＬ２８−８を宿す溶加性細菌クローンを、大腸菌Ｙ１
（１８９のトランスフェクションにより調製し、バイン
（）Ｉｕｙｎｈ）等の操作を用い、高レベルのクローン
化ｃＤＮＡ発現を誘導した。
コントロールとして、ｃＤＮＡ挿入物を欠くファージ（
λ６と命名）を用い、同様の方法で溶加性クローンの調
製及び処理を行った。
λ６と命名）を用い、同様の方法で溶加性クローンの調
製及び処理を行った。
各々３μｇのタンパク質を含む抽出物を溶加棒の誘導培
養物（λＬ２８−８ａ、λＬ２８８ｂ及びλ６ａ及びλ
６ｂと命名した４個の調製物）から調製した。
養物（λＬ２８−８ａ、λＬ２８８ｂ及びλ６ａ及びλ
６ｂと命名した４個の調製物）から調製した。
また核抽出物（３μｇタンパク質）をマウス上９２９細
胞から調製した。
胞から調製した。
この抽出物を、先に示した、比活性８０００ ｃｐｍ／
ｆｍｏｌｅを有するラベル化ＣＩオリゴマープローブｌ
ｆ ｍｏｌｅとインキュベー］・した。
ｆｍｏｌｅを有するラベル化ＣＩオリゴマープローブｌ
ｆ ｍｏｌｅとインキュベー］・した。
このインキュベーション物に種々の濃度の競合ＤＮＡを
加える競合検定法を、各抽出物について行った。
加える競合検定法を、各抽出物について行った。
この検定結果を第１図に示す。各レーンは以下に示すも
のに対応する。
のに対応する。
レーン 抽 出 物
ｌ なし
２ λ６ａ
３ ス６ｂ
４ λ６ｂとｔｏｏｏ倍モル過剰の未ラベル
Ｃｌオリゴマー λ６ｂとｔｏｏｏ倍モル過剰の未ラ ベルＣ５Ａオリゴマー１ λＬ２８−８ａ λＬ２８−８ｂ λＬ２Ｂ−８ｂと１０００倍モル過 剰の未ラベルＣ１オリゴマー λＬ２８−８ｂと１０００倍モル過 剰の未ラベルＣ５Ａオリゴマー Ｌ９２９細胞 Ｌ９２９細胞とｔｏｏｏ倍モル過剰 の未ラベルＣ１オリゴマー １２ Ｌ９２９細胞と１０００倍モル過剰の
未ラベルＣ１オリゴマー８ ＊Ｃ５Ａオリゴマーはフジタ（Ｐｕｊｉｔａ）等、１９
８５で説明されており、ＧＡＡＡの６回反復配列である
。
Ｃｌオリゴマー λ６ｂとｔｏｏｏ倍モル過剰の未ラ ベルＣ５Ａオリゴマー１ λＬ２８−８ａ λＬ２８−８ｂ λＬ２Ｂ−８ｂと１０００倍モル過 剰の未ラベルＣ１オリゴマー λＬ２８−８ｂと１０００倍モル過 剰の未ラベルＣ５Ａオリゴマー Ｌ９２９細胞 Ｌ９２９細胞とｔｏｏｏ倍モル過剰 の未ラベルＣ１オリゴマー １２ Ｌ９２９細胞と１０００倍モル過剰の
未ラベルＣ１オリゴマー８ ＊Ｃ５Ａオリゴマーはフジタ（Ｐｕｊｉｔａ）等、１９
８５で説明されており、ＧＡＡＡの６回反復配列である
。
第１図から、結合プローブは、レーン６．７９．１０及
び１２に検出されていることは明白である。
び１２に検出されていることは明白である。
第１図に示されているように、λＬ２Ｂ−８溶原体から
のタンパク質抽出物は、シフトしたバンドを与えている
（レーン６及び７）。この出現は過剰の未ラベルＣ１オ
リゴマーＤＮＡで阻害されたが、同量のＣ５Ａオリゴマ
ーでは阻害されない（レーン８及び９）。
のタンパク質抽出物は、シフトしたバンドを与えている
（レーン６及び７）。この出現は過剰の未ラベルＣ１オ
リゴマーＤＮＡで阻害されたが、同量のＣ５Ａオリゴマ
ーでは阻害されない（レーン８及び９）。
λＬ２Ｂ−８由来のタンパク質とは対照的に、誘導され
たλ６由来の熔原体から調製したものはこのようなシフ
トバンドを与えない（レーン２−５）、シフトバンドは
マウス上９２９細胞由来の天然のＩＲＦ−１のバンドと
非常に類似していると見ることができる（レーン１０及
び１２）、２組のシフトバンドに存在する差異は、プロ
ーブＤＮＡに結合するタンパク質の量が異なる結果であ
ると考えられる。
たλ６由来の熔原体から調製したものはこのようなシフ
トバンドを与えない（レーン２−５）、シフトバンドは
マウス上９２９細胞由来の天然のＩＲＦ−１のバンドと
非常に類似していると見ることができる（レーン１０及
び１２）、２組のシフトバンドに存在する差異は、プロ
ーブＤＮＡに結合するタンパク質の量が異なる結果であ
ると考えられる。
さらに、このシフトバンドはλＬ２８−８でトランスフ
ェクトしたＩＰＴＣ；３１導Ｙ１（１８９細胞由来のタ
ンパク質についてのみ検出可能であることが分った。
ェクトしたＩＰＴＣ；３１導Ｙ１（１８９細胞由来のタ
ンパク質についてのみ検出可能であることが分った。
（ｉｉ ） Ｄ Ｎａ５ｅフンドブリンティング分析フ
ットプリンティング分析は、ＩＦＮ−β遺伝子上流領域
をコードするＤＮＡに対する、λＬ２Ｂ−８ｃＤＮＡに
よりコードされるタンパク質の結合性をテストすること
で行った。
ットプリンティング分析は、ＩＦＮ−β遺伝子上流領域
をコードするＤＮＡに対する、λＬ２Ｂ−８ｃＤＮＡに
よりコードされるタンパク質の結合性をテストすること
で行った。
λＬ２８−８ｃＤＮＡにコードされるタンパク質を誘導
溶加体から抽出し、先に述べたカラムクロマトグラフィ
ーにより部分的に精製し、ＩＦＮ−β遺伝子上流領域を
含むＤＮＡに対する結合性をテストした。
溶加体から抽出し、先に述べたカラムクロマトグラフィ
ーにより部分的に精製し、ＩＦＮ−β遺伝子上流領域を
含むＤＮＡに対する結合性をテストした。
プローブＤＮＡはＰ １２５ｃａｔ （野生型のＩ
ＦＮ−β遺伝子を含む）及びｐ−１２５ＤＰｃａｔ（Ｉ
ＦＮ−β遺伝子変異体を含む）から単離した５ａｆＩ−
旧ｎｄｌＩ［フラグメントとして調製した。プラスミド
゛Ｐ １２５ｃａｔは、ｐｓＥ１２５（フジタ（Ｆｕ
ｊｉＬａ）等、セル（Ｃｅｌｌ）、４１．４８９−４９
６．１９８５）由来のＢａａ＋ＨＩ（−１２５） −Ｔ
ａｇｌ （＋１９）フラグメントを用いること以外Ｐ
１０５ｃａＬ（フジタ（Ｆｕｊ ｉ Ｌａ）等、１
９８７）と同様に構築した。［ＦＮ−β制御要素内に点
突然変異を含むプラスミドｐ−１２５ＤＰｃａｔは、ハ
タケヤマ（）Ｉａ ｔａｋｅｙａｍａ）等、（プロシー
ディング・イン・ナショナル、アカデミ−・オブ・サイ
エンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
ＦＮ−β遺伝子を含む）及びｐ−１２５ＤＰｃａｔ（Ｉ
ＦＮ−β遺伝子変異体を含む）から単離した５ａｆＩ−
旧ｎｄｌＩ［フラグメントとして調製した。プラスミド
゛Ｐ １２５ｃａｔは、ｐｓＥ１２５（フジタ（Ｆｕ
ｊｉＬａ）等、セル（Ｃｅｌｌ）、４１．４８９−４９
６．１９８５）由来のＢａａ＋ＨＩ（−１２５） −Ｔ
ａｇｌ （＋１９）フラグメントを用いること以外Ｐ
１０５ｃａＬ（フジタ（Ｆｕｊ ｉ Ｌａ）等、１
９８７）と同様に構築した。［ＦＮ−β制御要素内に点
突然変異を含むプラスミドｐ−１２５ＤＰｃａｔは、ハ
タケヤマ（）Ｉａ ｔａｋｅｙａｍａ）等、（プロシー
ディング・イン・ナショナル、アカデミ−・オブ・サイ
エンス（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、８３，９６５０ ９６５４．１９８
６）により報告されているように、ｐ−１２５ｃａｔの
合成オリゴヌクレオチド指定突然変異誘発により得た。
６）により報告されているように、ｐ−１２５ｃａｔの
合成オリゴヌクレオチド指定突然変異誘発により得た。
両ＤＮＡはＴ４キナーゼを用い（ｒ−”Ｐ）ＡＴＰによ
り、その旧ｎｄＩ１１部位をラベル化した。
り、その旧ｎｄＩ１１部位をラベル化した。
プローブＤＮＡ４ｆ ａ＋ｏｌｅ （比活性３，０００
ｃｐｍ／ｆ ｍｏｌｅ）を２５１１ＩＭトリスーＩＩ
ＣＩ！、、ｐＨ７，９，６，２５ｍＭ ＭｇＣ１ｚ、
５０ｍＭ ＭＣ１，１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５ｍＭＤＴ
Ｔ、１０％グリセリン、２％ポリビニルアルコールを含
む２０′μｌの反応混合物中、精製タンパク質２８０μ
ｇの有無の条件下でインキュベートした。
ｃｐｍ／ｆ ｍｏｌｅ）を２５１１ＩＭトリスーＩＩ
ＣＩ！、、ｐＨ７，９，６，２５ｍＭ ＭｇＣ１ｚ、
５０ｍＭ ＭＣ１，１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５ｍＭＤＴ
Ｔ、１０％グリセリン、２％ポリビニルアルコールを含
む２０′μｌの反応混合物中、精製タンパク質２８０μ
ｇの有無の条件下でインキュベートした。
この検定においては、５Ｘ１０−’ユニットのＤＮａｓ
ｅ Ｉ （ワーシントン製）を添加し、２５°Ｃで１
分間インキュベートした。
ｅ Ｉ （ワーシントン製）を添加し、２５°Ｃで１
分間インキュベートした。
第２図は以下に示す操作を行って得られたすンブル由来
のＤＮＡフラグメントのオートラジオグラムを示す。第
２図の左側は、野生型ＩＦＮ−βプローブのＤＮＡ配列
の一部であり、また第２図の右側は変異体ＩＦＮ−βプ
ローブのＤＮＡ配列の一部である。
のＤＮＡフラグメントのオートラジオグラムを示す。第
２図の左側は、野生型ＩＦＮ−βプローブのＤＮＡ配列
の一部であり、また第２図の右側は変異体ＩＦＮ−βプ
ローブのＤＮＡ配列の一部である。
１、野生型ＩＦＮ−βプローブをＡ＋Ｇ反応で切断した
（メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）６５． ４９９−５６
０参照）。結果をレーン１に示す。
（メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）６５． ４９９−５６
０参照）。結果をレーン１に示す。
２、野生型ＩＦＮ−βプローブを保護なしにＤＮａｓｅ
Ｉで部分消化した。結果をレーン２に示す。
Ｉで部分消化した。結果をレーン２に示す。
３、 野生型ＩＦＮ−βプローブをタンパク質と反応さ
せた後ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。結果をレーン３に
示す。
せた後ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。結果をレーン３に
示す。
４６ 野生型ＩＦＮ−βプローブを、１０００倍モル
過剰の未ラベルＣ１オリゴマーの存在下でタンパク質と
反応させた後、ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。
過剰の未ラベルＣ１オリゴマーの存在下でタンパク質と
反応させた後、ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。
結果をレーン４に示す。
５、 変異体ＩＦＮ−βプローブをタンパク質と反応さ
せた後、ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。結果をレーン５
に示す。
せた後、ＤＮａｓｅ Ｉで消化した。結果をレーン５
に示す。
６、変異体ＩＦＮ−βプローブをＡ十Ｇ反応で切断した
。結果をレーン６に示す。
。結果をレーン６に示す。
第２図において、レーン３及びレーン５から明らかであ
るように保護領域は、各々オートラジオグラムの左及び
右に示されている配列上に表われている。ヘキサマーモ
チーブを枠で囲んだ。
るように保護領域は、各々オートラジオグラムの左及び
右に示されている配列上に表われている。ヘキサマーモ
チーブを枠で囲んだ。
第２図の結果から、保護領域は−１００〜−６４のヌク
レオチドに相当し、この領域がＬ９２９細胞由来のＩＲ
Ｆ−１により保護されることが分る。
レオチドに相当し、この領域がＬ９２９細胞由来のＩＲ
Ｆ−１により保護されることが分る。
この保護は、過剰の未ラベルＣｌオリゴマーの使用によ
り阻止される（レーン４）。またより低いタンパク質濃
度では、選択的保護が、ＡＡＧＴＧＡモチーフを含む領
域（’−８０〜−７０）に起こることが示されている。
り阻止される（レーン４）。またより低いタンパク質濃
度では、選択的保護が、ＡＡＧＴＧＡモチーフを含む領
域（’−８０〜−７０）に起こることが示されている。
これらの結果は、このタンパク質がＡＡＧＴＧＡモチー
フを含む領域により高い親和性を有し、かつ、その周囲
の領域にはより低い親和性を持つことを示している。
フを含む領域により高い親和性を有し、かつ、その周囲
の領域にはより低い親和性を持つことを示している。
変異体ＩＦＮ−β遺伝子セグメントは、部位−１０６、
−１００、−７３及び−６７にＴ−Ｇ突然変異をもって
いる。同様の検定条件のレーン５及び２の比較により、
この組換えタンパク質により提供される保護は、非変異
領域に限定されるようである（レーン２）、この観察は
、これら変異体の導入がＬ９２９細胞におけるＮＤＶに
よる転写誘導の著しい減少（２０倍）を招き、かつ、変
異体ＩＦＮ遺伝子に対するＩＲＦ−１のインビトロにお
ける結合が非変異領域のみに顕著であるという観察と一
致している。
−１００、−７３及び−６７にＴ−Ｇ突然変異をもって
いる。同様の検定条件のレーン５及び２の比較により、
この組換えタンパク質により提供される保護は、非変異
領域に限定されるようである（レーン２）、この観察は
、これら変異体の導入がＬ９２９細胞におけるＮＤＶに
よる転写誘導の著しい減少（２０倍）を招き、かつ、変
異体ＩＦＮ遺伝子に対するＩＲＦ−１のインビトロにお
ける結合が非変異領域のみに顕著であるという観察と一
致している。
さらに、Ｃ１オリゴマーの使用は、このタンパク質がこ
のオリゴマー配列を含む領域を特異的に保護することを
明らかにした。この保護は、Ｌ９２９細胞由来の本来の
Ｉ′ＲＦ −１によって提供されるものと一致した。
のオリゴマー配列を含む領域を特異的に保護することを
明らかにした。この保護は、Ｌ９２９細胞由来の本来の
Ｉ′ＲＦ −１によって提供されるものと一致した。
３、ＤＮＡ競合検定
この検定は、既知の転写制御ＤＮＡ配列を含む種々のＤ
ＮＡ配列に対する、この組換えタンパク質の親和性をテ
ストするために行った。その操作を以下に示す。
ＮＡ配列に対する、この組換えタンパク質の親和性をテ
ストするために行った。その操作を以下に示す。
ｐ−１２５ｃａｔ （フジタ（Ｆｕｊｉｔａ）等、１
９８７）から、ＩＦＮ−βプローブのＨｉｎｄ ｍ −
５ａｔ １フラグメントを単離した。このフラグメン
トは、＋１９〜−１２５のヒトＩＦＮ−β遺伝子配列を
含んでいる。このＤＮＡを、クレノーフラグメントを用
いた〔α−”ｐ ） ｄｃｒｐによる両端の充填により
３′端ラベルした。
９８７）から、ＩＦＮ−βプローブのＨｉｎｄ ｍ −
５ａｔ １フラグメントを単離した。このフラグメン
トは、＋１９〜−１２５のヒトＩＦＮ−β遺伝子配列を
含んでいる。このＤＮＡを、クレノーフラグメントを用
いた〔α−”ｐ ） ｄｃｒｐによる両端の充填により
３′端ラベルした。
プローブＤＮＡの比活性は８０００ ｃｐｍ／ｆ ｍｏ
ｌｅであった。
ｌｅであった。
先に述べた条件下で、ゲル遅延検定を行った。
競合検定において、そのＤＮＡを、第３図に示した結合
混合物中、種々の濃度の競合ＤＮＡの存在下でそのタン
パク質は反応させた。
混合物中、種々の濃度の競合ＤＮＡの存在下でそのタン
パク質は反応させた。
複合体形成度は、オートラジオグラムの濃度解析により
定量した。競合ＤＮＡ非存在下での複合体形成を１００
％とした。
定量した。競合ＤＮＡ非存在下での複合体形成を１００
％とした。
競合ＤＮＡの構造を以下に示す。
ａ ） ＡＰ−１：以下の配列を有する合成りＮＡ５
’ＣＴＡＧＡ（ＴＧＡＣＴＣＡ）６Ｇ ３’３’Ｔ（Ａ
ＣＴＧＡＧＴ）６ＣＣＴＡＧ ５’ｂ） ＴＮＦ ：
ＴＮＦ−α第１イントロンの＋１１６２〜＋２１１６
に渡る３７ｂｐのフラグメント（ネトウィン（Ｎｅｄｗ
ｉｎ）等、１９８５）。
’ＣＴＡＧＡ（ＴＧＡＣＴＣＡ）６Ｇ ３’３’Ｔ（Ａ
ＣＴＧＡＧＴ）６ＣＣＴＡＧ ５’ｂ） ＴＮＦ ：
ＴＮＦ−α第１イントロンの＋１１６２〜＋２１１６
に渡る３７ｂｐのフラグメント（ネトウィン（Ｎｅｄｗ
ｉｎ）等、１９８５）。
Ｃ） ？ウスＨ２−Ｄｄ ：コーバー（Ｋｏｒｂｅｒ
）等（１９８８）により報告されているＩＲ３要素（−
１５９〜−１２３）に当る３７ｂｐの合成りＮへ〇 ｄ） ヒトＩＦＮ−α：ウィルス応答要素に対応する４
ｂｂｐの合成りＮＡ、ライアルス（Ｒｙａｌｓ）等（１
９８５）参照。
）等（１９８８）により報告されているＩＲ３要素（−
１５９〜−１２３）に当る３７ｂｐの合成りＮへ〇 ｄ） ヒトＩＦＮ−α：ウィルス応答要素に対応する４
ｂｂｐの合成りＮＡ、ライアルス（Ｒｙａｌｓ）等（１
９８５）参照。
ｅ） ヘキサマー配列Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４及びＣ５
Ａ。
Ａ。
Ｃ１及びＣ５Ａの配列は先に述べた。Ｃ２、Ｃ３及びＣ
４の配列は、セル（Ｃｅｌｌ） 、４９．３５２−３６
７ （１９８７）に公表されている。
４の配列は、セル（Ｃｅｌｌ） 、４９．３５２−３６
７ （１９８７）に公表されている。
それらは各々
ＡＡＧＧＡ
で表わされる。
ｆ） ＋１９〜−６６のＩＦＮ−β遺伝子配列。
第３図において、左側のパネルは、反復ヘキサマーを競
合者として用いたときに得られた結果を示している。中
央のパネルはヒトのＩＦＮ遺伝子セグメントを競合者と
して使用したときの結果を示しており、右側のパネルは
、パネル中に示した種々のＤＮＡセグメントを用いたと
きの結果を示している。
合者として用いたときに得られた結果を示している。中
央のパネルはヒトのＩＦＮ遺伝子セグメントを競合者と
して使用したときの結果を示しており、右側のパネルは
、パネル中に示した種々のＤＮＡセグメントを用いたと
きの結果を示している。
第３図の結果から、シフトバンドの出現は、Ｃ１、Ｃ２
、Ｃ３、Ｃ４の効率順でヘキサマー配列と競合している
が、Ｃ５Ａとは有意に競合しなかったことが分る。
、Ｃ３、Ｃ４の効率順でヘキサマー配列と競合している
が、Ｃ５Ａとは有意に競合しなかったことが分る。
また、ヒトＩＦＮ−α１又はマウスＨ−２Ｄ’遺伝子の
制御要素に渡る合成りＮＡ上セグメント、競合活性を示
すことが観察された。このことは、Ｈ−２Ｄ’遺伝子の
ＤＮＡセグメントが、細胞がＩＦＮに応答するとき、促
進因子として機能するいわゆるＩＦＮ一応答配列を含む
ことから特に興味深い（スジタ（Ｓｕｇｉ Ｌａ）等、
１９８７；イスラエル（Ｉｓｒａｅｌ）等、１９８６．
コーバー（Ｋｏｒｂｅｒ）等、１．９８８ ）。
制御要素に渡る合成りＮＡ上セグメント、競合活性を示
すことが観察された。このことは、Ｈ−２Ｄ’遺伝子の
ＤＮＡセグメントが、細胞がＩＦＮに応答するとき、促
進因子として機能するいわゆるＩＦＮ一応答配列を含む
ことから特に興味深い（スジタ（Ｓｕｇｉ Ｌａ）等、
１９８７；イスラエル（Ｉｓｒａｅｌ）等、１９８６．
コーバー（Ｋｏｒｂｅｒ）等、１．９８８ ）。
事実、ＩＦＮ−β遺伝子にみられるものと同様又は同一
の配列モチーフが、核因子が特異的に結合すると考えら
れるＩＦＮ誘導性遺伝子の多数のプロモーター中に見い
出される（コーバー（Ｋｏｒｂｅｒ）等、１９８８、レ
リー（Ｌｅｒｙ）等、１９８８）。
の配列モチーフが、核因子が特異的に結合すると考えら
れるＩＦＮ誘導性遺伝子の多数のプロモーター中に見い
出される（コーバー（Ｋｏｒｂｅｒ）等、１９８８、レ
リー（Ｌｅｒｙ）等、１９８８）。
第３図に示される結果は、Ｌ９２９細胞に由来する天然
のタンパク質を用いたときと同様の条件下でこの検定を
再現したとき得られる結果と非常によくイ以ている。
のタンパク質を用いたときと同様の条件下でこの検定を
再現したとき得られる結果と非常によくイ以ている。
（マウスＩＲＦ−１をコードするｃＤＮＡの構造）クロ
ーン化したＤＮＡのＤＮＡ配列は、ダイデオキシ法（シ
ークエナーゼ、コナイテッドステートバイオケミカルス
′製）又は、標準マキサム・ギルバート法（マキサム（
Ｍａｘａｍ）及びギルバート（Ｇｉｌｂｅｒｔ）、１９
８０）により決定した。
ーン化したＤＮＡのＤＮＡ配列は、ダイデオキシ法（シ
ークエナーゼ、コナイテッドステートバイオケミカルス
′製）又は、標準マキサム・ギルバート法（マキサム（
Ｍａｘａｍ）及びギルバート（Ｇｉｌｂｅｒｔ）、１９
８０）により決定した。
大腸菌Ｙ１（１８９におけるλＬ２Ｂ−８挿入物を以下
のように単離した。そのファージＤＮＡを標準操作で調
製し、ＥｃｏＲＩで消化後、このファージＤ Ｎ Ａか
ら切り出したｃＤＮＡを単離してから、ダイデオキシ法
（シークエナーゼ；ユナイテント′ステートバイオケミ
カル社製）で配列決定した。
のように単離した。そのファージＤＮＡを標準操作で調
製し、ＥｃｏＲＩで消化後、このファージＤ Ｎ Ａか
ら切り出したｃＤＮＡを単離してから、ダイデオキシ法
（シークエナーゼ；ユナイテント′ステートバイオケミ
カル社製）で配列決定した。
λＬ２Ｂ−８中のｃＤＮＡ挿入物は１．８ｋｂ長である
ことが分った。そのヌクレオチド配列分析によりβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子と相を同じくした大きい読み枠配
列が明らかになった。
ことが分った。そのヌクレオチド配列分析によりβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子と相を同じくした大きい読み枠配
列が明らかになった。
より大きいｃＤＮＡ挿入物を含むクローンをスクリーニ
ングするため、二本鎖ｃＤＮＡをＬ９２９細胞由来のポ
リ（Ａ）”ＲＮＡで合成し、アルフｔ （Ａｒｕｆｆｏ
）及びシード（Ｓｅｅｄ） （プロシーディング・イ
ン・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒ
ｏｃ＋ Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ５ｃｉ） Ｕ Ｓ
Ａ、８４゜８５７３．１９８７）及びシード（Ｓｅｅｄ
） （ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ） １．−′３２９．
８４０−８４２．１９８７）の公表されている操作に従
ってベクターＣＤＭＳ中にクローニングした。
ングするため、二本鎖ｃＤＮＡをＬ９２９細胞由来のポ
リ（Ａ）”ＲＮＡで合成し、アルフｔ （Ａｒｕｆｆｏ
）及びシード（Ｓｅｅｄ） （プロシーディング・イ
ン・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒ
ｏｃ＋ Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 ５ｃｉ） Ｕ Ｓ
Ａ、８４゜８５７３．１９８７）及びシード（Ｓｅｅｄ
） （ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ） １．−′３２９．
８４０−８４２．１９８７）の公表されている操作に従
ってベクターＣＤＭＳ中にクローニングした。
この組換えプラスミドを大腸菌ＭＣ１０６１／２３株に
導入しくアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅ
ｄ）の操作に従かう、上述）、ｃＤＮＡのクローンを、
ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションのための低イオ
ン強度条件下でλＬ２８−８由来の（３２Ｐラベル化）
ｃＤＮＡプローブでスクリニングして（カシマ（Ｋａｓ
ｈｉｍａ）等、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ） 、３１３
．４０２−４０４．１９８５）次の実験のためのクロー
ンｐＩＲＦ−Ｌを選択した。
導入しくアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅ
ｄ）の操作に従かう、上述）、ｃＤＮＡのクローンを、
ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーションのための低イオ
ン強度条件下でλＬ２８−８由来の（３２Ｐラベル化）
ｃＤＮＡプローブでスクリニングして（カシマ（Ｋａｓ
ｈｉｍａ）等、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ） 、３１３
．４０２−４０４．１９８５）次の実験のためのクロー
ンｐＩＲＦ−Ｌを選択した。
ｐＩＲＦ−Ｌの目的とするｃＤＮＡ挿入物は、Ｈｉｎｄ
ＩＩＩ及びＸｂａ Ｉによる消化で入手し、先に示した
方法で配列決定した。この配列を一般式■及び第４図に
示す。
ＩＩＩ及びＸｂａ Ｉによる消化で入手し、先に示した
方法で配列決定した。この配列を一般式■及び第４図に
示す。
λＬ２Ｂ−８由来のｃＤＮＡ配列は、１個のＡ残基がヌ
クレオチド１７７３及び１７８１の間で欠失しているこ
と以外、重複領域に同一配列を含んでいることが分っ′
た。
クレオチド１７７３及び１７８１の間で欠失しているこ
と以外、重複領域に同一配列を含んでいることが分っ′
た。
λＬ２Ｂ−８由来のｃＤＮＡの５′及び３′末端を、第
４図中に矢印で示した。おそら（ｒｎ ＲＮへの不安定
性に関するＡＴＴＴＡＴＴＴＡ及びＡＴＴＴ＾配列を枠
で囲んだ。
４図中に矢印で示した。おそら（ｒｎ ＲＮへの不安定
性に関するＡＴＴＴＡＴＴＴＡ及びＡＴＴＴ＾配列を枠
で囲んだ。
第４Ａ図から明白なように、ｐＩＲＦ−Ｌ、由来のマウ
スｃＤＮＡは、λＬ２８ ８ｃＤＮＡのＣＤＮＡより、
５″及び３′末端で各々１９８ｂｐ及び２０ｂρ長かっ
た。
スｃＤＮＡは、λＬ２８ ８ｃＤＮＡのＣＤＮＡより、
５″及び３′末端で各々１９８ｂｐ及び２０ｂρ長かっ
た。
この遺伝子のプロモーター領域を含むゲノムＤＮＡ配列
の分析は、ｐＩＲＦ−ＬのｃＤＮＡは、主要ＣＡＰ部位
から約３０ｂｐを欠失していることが明らかになった。
の分析は、ｐＩＲＦ−ＬのｃＤＮＡは、主要ＣＡＰ部位
から約３０ｂｐを欠失していることが明らかになった。
以下及び一般式Ｖ及び第７図参照。
第１のＡＴＧコドンの直ぐ上流の配列、ＧＧＡ同相のＡ
ＴＣ配列は、上述のＡＴＣ配列の上流配列中には見い出
されず、このことは、事実それがＩＲＦ−１ｍＲＮＡに
対する開始コドンであることを確認した。
ＴＣ配列は、上述のＡＴＣ配列の上流配列中には見い出
されず、このことは、事実それがＩＲＦ−１ｍＲＮＡに
対する開始コドンであることを確認した。
先に述べたように、３′側非コード領域以外、重複領域
内のλＬ２Ｂ−８及びｐＩＲＦ−ＬのＣＤＮＡのヌクレ
オチド配列間に差がないことが検出された。
内のλＬ２Ｂ−８及びｐＩＲＦ−ＬのＣＤＮＡのヌクレ
オチド配列間に差がないことが検出された。
従って、マウスＩＲＦ−Ｉは、３７゜３ｋＤの計算上の
分子量を有する３２９個のアミノ酸からなることが分っ
た。規範的なＮ−グリコシレージジン部位はこの配列内
には見い出されない。
分子量を有する３２９個のアミノ酸からなることが分っ
た。規範的なＮ−グリコシレージジン部位はこの配列内
には見い出されない。
タンパク質配列データベース（ナショナル・バイオメデ
ィカル・リサーチ・ファンデーシゴン（Ｎａｔｌ、 Ｂ
ｉｏｍｅｄ、 Ｒｅｓ、 Ｆｏｕｎｄ、）ワシントン、
Ｄ。
ィカル・リサーチ・ファンデーシゴン（Ｎａｔｌ、 Ｂ
ｉｏｍｅｄ、 Ｒｅｓ、 Ｆｏｕｎｄ、）ワシントン、
Ｄ。
Ｃ，）及びより最近に公表された配列の検索によっては
その他のタンパク質に対して有意な相同性は検出されな
かった。
その他のタンパク質に対して有意な相同性は検出されな
かった。
カイト（Ｋｙｔｅ）及びトウーリトル（Ｄｃｏｌｉｔｔ
ｌｅ）（１９８２ンに従うバイトロバシープロットＭ析
は、このタンパク質は全体として非常に親水性が高いこ
とを示した（第４Ｂ図）。
ｌｅ）（１９８２ンに従うバイトロバシープロットＭ析
は、このタンパク質は全体として非常に親水性が高いこ
とを示した（第４Ｂ図）。
マウスＩＲＦの推゛定される一次配列の洞察により、次
の性質が明らかになった。
の性質が明らかになった。
アミノ酸（ａ、ａ、）１４０までのアミノ末端側半分は
、リジン（Ｌｙｓ）及びアルギニン（Ａｒｇ）が豊富で
ある。事実、全Ｌｙｓ及びＡｒｇ残基３９個のうちの３
１個は、この領域に存在する。第４Ｂ図の下側パネルに
は、塩基性アミノ酸（Ａｒｇ 、 Ｌｙｓ）（上欄）
及び酸性アミノ酸（Ａｓｐ 、 Ｇｌｕ） （下欄）の
位置を図的にまとめて示しである。
、リジン（Ｌｙｓ）及びアルギニン（Ａｒｇ）が豊富で
ある。事実、全Ｌｙｓ及びＡｒｇ残基３９個のうちの３
１個は、この領域に存在する。第４Ｂ図の下側パネルに
は、塩基性アミノ酸（Ａｒｇ 、 Ｌｙｓ）（上欄）
及び酸性アミノ酸（Ａｓｐ 、 Ｇｌｕ） （下欄）の
位置を図的にまとめて示しである。
第４Ｂ図に示しであるように、この領域は強い親和性を
示し、特異的ＤＮＡ配列へのＩＲＦ−１の結合を主とし
て担っている領域であると考えられている。
示し、特異的ＤＮＡ配列へのＩＲＦ−１の結合を主とし
て担っている領域であると考えられている。
これと関連して、ジンクフィンガーやヘリツタスーター
ンーへりツタスモチーフなどの（パボ（Ｐａｂｏ）及び
サウア（Ｓａｕｅｒ） 、１９８４、エバンス（Ｈｖａ
ｎｓ）及びホレンバーグ（ｔｌｏｌｌｅｎｂｅｒｇ）、
１９８８）多くのＤＮＡ結合タンパク質に特徴的なモチ
ーフは、ＩＲＦ−１タンパク質には検出されなかった。
ンーへりツタスモチーフなどの（パボ（Ｐａｂｏ）及び
サウア（Ｓａｕｅｒ） 、１９８４、エバンス（Ｈｖａ
ｎｓ）及びホレンバーグ（ｔｌｏｌｌｅｎｂｅｒｇ）、
１９８８）多くのＤＮＡ結合タンパク質に特徴的なモチ
ーフは、ＩＲＦ−１タンパク質には検出されなかった。
対照的に、この分′子の残りの部分（すなわちカルボキ
シル末端半分）は、比較的アスパラギン酸（Ａｓｐ）、
グルタミン酸（Ｇｌｕ）、セリン（ｓｅ ｒ）及びスレ
オニン（Ｔｈｒ）を多く含んでいる。１８９個のアミノ
酸のうち、３３個（１７％）は酸性アミノ酸であり、ま
た３６個（１９％）はＳｅｔ及びＴｈｒである。特に、
５個の連続した酸性アミノ酸クラスターが２２７〜２３
１のアミノ酸内に見られる。
シル末端半分）は、比較的アスパラギン酸（Ａｓｐ）、
グルタミン酸（Ｇｌｕ）、セリン（ｓｅ ｒ）及びスレ
オニン（Ｔｈｒ）を多く含んでいる。１８９個のアミノ
酸のうち、３３個（１７％）は酸性アミノ酸であり、ま
た３６個（１９％）はＳｅｔ及びＴｈｒである。特に、
５個の連続した酸性アミノ酸クラスターが２２７〜２３
１のアミノ酸内に見られる。
Ｓｅｔ及びＴｈｒに関しては、多くのものがこのクラス
ターを形成しているようである（ １５３−１５６．１
９０−１９２．２０６−２（１８．２２０−２２２のア
ミノ酸領域、以後Ｓ−Ｔ領域と呼ぶ）。このＳ Ｔ領
域は、第４Ｂ図の下側パネル中、小さな逆三角形で示し
た。
ターを形成しているようである（ １５３−１５６．１
９０−１９２．２０６−２（１８．２２０−２２２のア
ミノ酸領域、以後Ｓ−Ｔ領域と呼ぶ）。このＳ Ｔ領
域は、第４Ｂ図の下側パネル中、小さな逆三角形で示し
た。
（ヒトＩＲＦ−ＩをコードするｃＤＮＡの構造）マウス
［ＲＦ−１に対する操作と同様の操作に従がい、ヒトの
ＴＲＦ−１ｃＤＮＡをクローン化し、かつ配列決定した
。
［ＲＦ−１に対する操作と同様の操作に従がい、ヒトの
ＴＲＦ−１ｃＤＮＡをクローン化し、かつ配列決定した
。
ヒトのｃＤＮＡライブラリーを、ヒトＴ細胞系列ジャー
カド（Ｊａｒｋａｔ）由来のポリ （Ａ） ”ＲＮＡ
を用い、ｃＤＮＡを゛合成することにより調製した。
カド（Ｊａｒｋａｔ）由来のポリ （Ａ） ”ＲＮＡ
を用い、ｃＤＮＡを゛合成することにより調製した。
二本鎖ｃＤＮＡ合成及びひきつづ（プラスミドヘクタ−
ＣＤＭ８へのクローニングはアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）
及びシード（Ｓｅｅｄ） （プロシーディング・イン
・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａ１１．八ｃａｄ、 Ｓｃｉ、） ＵＳＡ、
、８４．８５７３−８５７７．１９８７）及びシード（
Ｓｅｅｄ）（ネイチャー（Ｎａ Ｌｕｒｅ）、３２９，
８４０−８４２．１９８７）の操作に従って行った。
ＣＤＭ８へのクローニングはアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）
及びシード（Ｓｅｅｄ） （プロシーディング・イン
・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａ１１．八ｃａｄ、 Ｓｃｉ、） ＵＳＡ、
、８４．８５７３−８５７７．１９８７）及びシード（
Ｓｅｅｄ）（ネイチャー（Ｎａ Ｌｕｒｅ）、３２９，
８４０−８４２．１９８７）の操作に従って行った。
この組換えプラスミドを、先に述べたアルフォ（Ａｒｕ
ｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅｄ）の操作を用い、大腸菌
ＭＣ１０６１／ｐ３株に導入した。
ｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅｄ）の操作を用い、大腸菌
ＭＣ１０６１／ｐ３株に導入した。
マウスＩＲＦ−１ｃＤＮＡとクロスハイブリダイズする
ｃＤＮＡのクローンをＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼー
ションのための低イオン強度条件下、プローブとしてλ
Ｌ２Ｂ−８ｃＤＮＡ（３！Ｐラベル化）を用いてスクリ
ーニングした。
ｃＤＮＡのクローンをＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼー
ションのための低イオン強度条件下、プローブとしてλ
Ｌ２Ｂ−８ｃＤＮＡ（３！Ｐラベル化）を用いてスクリ
ーニングした。
使用した条件は、カシマ（Ｋａｓｈｉｍａ）等（ネイチ
ャー（Ｎａｔｕｒｅ） 、３１３．４０２ ４０４．１
９８５）により報告されているものと全く同じである。
ャー（Ｎａｔｕｒｅ） 、３１３．４０２ ４０４．１
９８５）により報告されているものと全く同じである。
クローンｐＨＩＲＦ３１の目的ｃＤＮＡ配列は、このプ
ラスミドＤＮＡをＸｈｏ Ｉで消化し、単離後、上述の
方法によって配列決定した。ヒ）ＩＲＦＩ遺伝子の構造
を一般式■及び第８図に示した。
ラスミドＤＮＡをＸｈｏ Ｉで消化し、単離後、上述の
方法によって配列決定した。ヒ）ＩＲＦＩ遺伝子の構造
を一般式■及び第８図に示した。
推定されるマウス及びヒトのＩＲＦ−１の配列を比較の
ため並列して第５図に示した。
ため並列して第５図に示した。
ヒトＤＮＡの分析は、このＩＲＦ−１がマウスＩＲＦ−
１に比ペアミノ酸４個短かくなっていることを示した。
１に比ペアミノ酸４個短かくなっていることを示した。
アミノ酸配列の強い保存性が２つのＩ ＲＦ−Ｉ分子間
に見ることができる。特に、アミノ末端側半分の１４０
個のアミノ酸のうちの１３３個（９５％）は、同一であ
ると言い得る。
に見ることができる。特に、アミノ末端側半分の１４０
個のアミノ酸のうちの１３３個（９５％）は、同一であ
ると言い得る。
合せて言うと、上述の観察は、ＩＲＦ−１が新しいクラ
スのＤＮＡ結合タンパク質であることを示している。
スのＤＮＡ結合タンパク質であることを示している。
また、多くのサイト力イン及びプロトオンコジーンｍＲ
ＮＡ中に見られる配列ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ及びＡＴＴＴ
Ａは、マウスのＩＲＦ−１ｃＤＮＡの３′非翻訳領域内
に存在し、また、配列ＡＴＴＴＡは、同様に、ヒトＩＲ
Ｆ−’ｌ ｃＤＮＡの相当する領域内に存在すること
は特筆すべきである。これらの配列は、遺伝子の翻訳後
の制御において、ｍＲＮＡに不安定性を与えることによ
る役割を果していると考えられている（ショウ（Ｓｈａ
ｗ）及びカメン（Ｋａｍｅｎ）、１９８６；カプト（Ｃ
ａｐｕｔ）等、１９８６）。
ＮＡ中に見られる配列ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ及びＡＴＴＴ
Ａは、マウスのＩＲＦ−１ｃＤＮＡの３′非翻訳領域内
に存在し、また、配列ＡＴＴＴＡは、同様に、ヒトＩＲ
Ｆ−’ｌ ｃＤＮＡの相当する領域内に存在すること
は特筆すべきである。これらの配列は、遺伝子の翻訳後
の制御において、ｍＲＮＡに不安定性を与えることによ
る役割を果していると考えられている（ショウ（Ｓｈａ
ｗ）及びカメン（Ｋａｍｅｎ）、１９８６；カプト（Ｃ
ａｐｕｔ）等、１９８６）。
プラスミドｐＴＲＦ−Ｌを大腸菌ＭＣ１０６１／ｐ３に
トランスフェクトし、これを、ブタペスト協定に基づき
、１９８８年８月１９日、ファーメンテ−ジョン・リサ
ーチ・インスチチュート・エイジエンシー・オブ・イン
ダストリアル・サイエンス・アンド・テクノロジー（Ｆ
ｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｒ＋５ｔ
ｉｔｕｔｅ Ａｇｅｎｃｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａ
ｌＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
（Ｆ ＲＩ ） （日本茨城県筑波市、東−丁目１
−３）に、登録番号ＦＥＲＭＢＰ−２００５、大腸菌Ｍ
Ｃｌ０さグＰ３（ｐＩＲＦ−Ｌ）として登録した。
トランスフェクトし、これを、ブタペスト協定に基づき
、１９８８年８月１９日、ファーメンテ−ジョン・リサ
ーチ・インスチチュート・エイジエンシー・オブ・イン
ダストリアル・サイエンス・アンド・テクノロジー（Ｆ
ｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｒ＋５ｔ
ｉｔｕｔｅ Ａｇｅｎｃｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａ
ｌＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）
（Ｆ ＲＩ ） （日本茨城県筑波市、東−丁目１
−３）に、登録番号ＦＥＲＭＢＰ−２００５、大腸菌Ｍ
Ｃｌ０さグＰ３（ｐＩＲＦ−Ｌ）として登録した。
同様にプラスミドｐ ＩＲＦ３１を大腸菌ＭＣ１０６１
／ｐ３にトランスフェクトし、これを、ブタペスト協定
に基づき、１９８８年８月１９日、た。
／ｐ３にトランスフェクトし、これを、ブタペスト協定
に基づき、１９８８年８月１９日、た。
ｒＲＦ遺伝子の制御
１、 ＩＲＦ−１ｍＲＮＡの発現
ＩＲＦ−１がＩＦＮ−β遺伝子以外の遺伝子の制御配列
に対する親和性を表わし、かつ種々の細胞における一群
の遺伝子の制御に関係しているという事実から、種々の
組織及び器官由来のマウス細胞におけるＩＲＦ−１ｍＲ
ＮＡの発現試験を、プローブとしてマウスｃＤＮＡを用
いて行った。
に対する親和性を表わし、かつ種々の細胞における一群
の遺伝子の制御に関係しているという事実から、種々の
組織及び器官由来のマウス細胞におけるＩＲＦ−１ｍＲ
ＮＡの発現試験を、プローブとしてマウスｃＤＮＡを用
いて行った。
このプローブを調製するため、ＩＲＦ−１遺伝子のＰｓ
ｔＴフラグメントのセンス鎖を含むＭ１３ｍｐｌｏファ
ージＤＮＡ （以下参照）をテンブレー４として用い、
３２Ｐラベル化アンチセンス［＞ＮＡを合成し、この産
物をＥｃｏＲＩで消化後、このプローブＤＮＡをフジタ
（Ｆｕｊｉｔａ）等の方法に従がい単離した。
ｔＴフラグメントのセンス鎖を含むＭ１３ｍｐｌｏファ
ージＤＮＡ （以下参照）をテンブレー４として用い、
３２Ｐラベル化アンチセンス［＞ＮＡを合成し、この産
物をＥｃｏＲＩで消化後、このプローブＤＮＡをフジタ
（Ｆｕｊｉｔａ）等の方法に従がい単離した。
全ＲＮＡをアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅ
ｅｄ）（１９８７）により確立された操作法により単離
した。
ｅｄ）（１９８７）により確立された操作法により単離
した。
ついでプロッティング分析を基本的に１・−マス（Ｔｈ
ｏｍａｓ） （１，９８０）の方法を用いて行ない、
Ｘ線フィルムは３日間露光した結果を第６Ａ図に示す９
種々のレーンは、以下の組織に由来する総細胞ＲＮＡを
用いて行った実験結果を示している。
ｏｍａｓ） （１，９８０）の方法を用いて行ない、
Ｘ線フィルムは３日間露光した結果を第６Ａ図に示す９
種々のレーンは、以下の組織に由来する総細胞ＲＮＡを
用いて行った実験結果を示している。
レーン１ 脳
レーン２ 心臓
レーン３ 肝臓
レーン４ 肺
レーン５ 肺臓（非活性化）
レーン６ 胸腺
レーン７ 腎臓
レーン８ 筋肉
レーン９ 腸
レーン１０ 肺臓（非活性化）
レーン１１ ＣｏｎＡ−活性化肺臓レーン８では１
．２μｇのＲＮＡを用いた以外は各レーンとも５μｇの
総細胞ＲＮＡを用いた。
．２μｇのＲＮＡを用いた以外は各レーンとも５μｇの
総細胞ＲＮＡを用いた。
第６Ａ図から、約’２．０ ｋｂに相当するバンドは本
プロッティング分析により、はとんどのＲＮＡサンプル
から検出されたことが分る。もっともｍＲＮＡ発現レベ
ルは低いようである。肺臓由来のリンパ球におけるｍＲ
ＮＡ発現レベルは、ＣｏｎＡによる活性化後著しく増加
したことは重要である（レーン１１）。
プロッティング分析により、はとんどのＲＮＡサンプル
から検出されたことが分る。もっともｍＲＮＡ発現レベ
ルは低いようである。肺臓由来のリンパ球におけるｍＲ
ＮＡ発現レベルは、ＣｏｎＡによる活性化後著しく増加
したことは重要である（レーン１１）。
さらに検定するため、先に示されているように（フジタ
（Ｆｕｊｉｔａ）等、１９８５）ＮＤＶを用いてマウス
上９２９細胞を誘導し、ついでアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ
）及びシード（Ｓｅｅｄ） 、１９８７の操作により、
感染後３時間口に、細胞質性ＲＮＡを抽出した。
（Ｆｕｊｉｔａ）等、１９８５）ＮＤＶを用いてマウス
上９２９細胞を誘導し、ついでアルフォ（Ａｒｕｆｆｏ
）及びシード（Ｓｅｅｄ） 、１９８７の操作により、
感染後３時間口に、細胞質性ＲＮＡを抽出した。
プロブＤＮＡを以下に示す種々の配列から調製し、マル
チプライムラベル化反応により（アマージャム社）ラベ
ル化した。
チプライムラベル化反応により（アマージャム社）ラベ
ル化した。
（ｉ） λＬ２８−８由来の１．８ ｋｂ ＥｃｏＲ
Ｉフラグメント（比活性２ Ｘ １０” ｃｐｍ／μｇ
）。
Ｉフラグメント（比活性２ Ｘ １０” ｃｐｍ／μｇ
）。
（ｉｉ） マウスＩＦＮ−βゲノムクローン由来の０
．５ ｋｂ Ｂａｍｔｌ Ｉ −Ｂｇｌ ＩＩフラグ
メント（比活性５ Ｘ １０ ’ ｃｐｍ／μｇ’）及
び（ｉｉｉ ） ヒトβ−アクチンシュードジーンを
含むクローンの２．０ｋｂ ＢａｍＨＩ Ｐｖｕ Ｕ
フラグメント（比活性５Ｘ１０’ｃｐｍ／μｇ）。
．５ ｋｂ Ｂａｍｔｌ Ｉ −Ｂｇｌ ＩＩフラグ
メント（比活性５ Ｘ １０ ’ ｃｐｍ／μｇ’）及
び（ｉｉｉ ） ヒトβ−アクチンシュードジーンを
含むクローンの２．０ｋｂ ＢａｍＨＩ Ｐｖｕ Ｕ
フラグメント（比活性５Ｘ１０’ｃｐｍ／μｇ）。
この結果を第６Ｂ図に示す。プロッティング分析は、ト
ーマス（Ｔｈｏｍａｓ） （１９８０）の操作を用い
、先に述べたように行った。
ーマス（Ｔｈｏｍａｓ） （１９８０）の操作を用い
、先に述べたように行った。
各レーンは１０μｇの細胞質性ＲＮＡを含んでいる。Ｘ
線フィルムは３時間露光した。濃度分析で、ＩＲＦ−１
ｍＲＮＡはＮＤＶ感染から９〜１２時間後に、約２５倍
増加したことが分った。
線フィルムは３時間露光した。濃度分析で、ＩＲＦ−１
ｍＲＮＡはＮＤＶ感染から９〜１２時間後に、約２５倍
増加したことが分った。
ｍＲＮＡの増加は劇的であるが、誘導から９〜１２時間
後にピークに達し、１５時間後に元に戻るという一時的
なものであった。ｍＲＮＡの蓄積はＩＦＮ−βｍＲＮＡ
の蓄積を促進した。すなわち第６Ｂ図から分るように、
ＩＲＦ−１ｍＲＮＡの誘導は、ＮＤＶ感染から３時間後
すでに観測し得るが、一方、ＩＦＮ−βｍＲＮＡは、両
ＲＮＡに対し同様のプロッティング条件下、感染から６
時間後に検出された。
後にピークに達し、１５時間後に元に戻るという一時的
なものであった。ｍＲＮＡの蓄積はＩＦＮ−βｍＲＮＡ
の蓄積を促進した。すなわち第６Ｂ図から分るように、
ＩＲＦ−１ｍＲＮＡの誘導は、ＮＤＶ感染から３時間後
すでに観測し得るが、一方、ＩＦＮ−βｍＲＮＡは、両
ＲＮＡに対し同様のプロッティング条件下、感染から６
時間後に検出された。
（ＩＲＦ−１１０千′−クー）
先に説明したように、ＩＲＦ−１遺伝子は、ウィルス及
びマイトジェンなどの種々の試剤により転写時に制御さ
れる。染色体ＤＮＡのサウザーンプロット分析は、ＩＲ
Ｆ−１遺伝子がマウス中でスプライスされ、かつ多重化
されないことを示している。
びマイトジェンなどの種々の試剤により転写時に制御さ
れる。染色体ＤＮＡのサウザーンプロット分析は、ＩＲ
Ｆ−１遺伝子がマウス中でスプライスされ、かつ多重化
されないことを示している。
新生マウスＤＮＡを含むλフアージライブラリーを、先
に使用した同λＬ２８−８由来のｃＤＮＡプローブを用
い、ＩＲＦ−１プロモ一ター配列を宿すクローンに関す
るスクリーニングした。４個のポジティブクローンが同
定され、その全てが同ゲノムＤＮＡを含むことが分った
。そのうちの１つ、λｇ１４−２をさらに分析するため
に使用した。ＰｓｔｌフラグメントをｐＵｃ１９のＰｓ
ｔ１部位にサブクローンし、ｐ１９１ＲＦＰを構築した
。
に使用した同λＬ２８−８由来のｃＤＮＡプローブを用
い、ＩＲＦ−１プロモ一ター配列を宿すクローンに関す
るスクリーニングした。４個のポジティブクローンが同
定され、その全てが同ゲノムＤＮＡを含むことが分った
。そのうちの１つ、λｇ１４−２をさらに分析するため
に使用した。ＰｓｔｌフラグメントをｐＵｃ１９のＰｓ
ｔ１部位にサブクローンし、ｐ１９１ＲＦＰを構築した
。
その後、同ＤＮＡをＭ１３ｍｐｌＯ及びＭＩ３ｍｐＨの
ＰｓＬＴ部位にクローン化し、それらを配列分析用のＤ
ＮＡを作るのに用いた。
ＰｓＬＴ部位にクローン化し、それらを配列分析用のＤ
ＮＡを作るのに用いた。
上記クローン由来のＰｓｔｌフラグメントのヌクレオチ
ド配列分析を′先に示した方法で行った。メジャー及び
マイナＣＡＰ部位を３１マツピング分析で同定した。
ド配列分析を′先に示した方法で行った。メジャー及び
マイナＣＡＰ部位を３１マツピング分析で同定した。
決定された配列を第７Ａ図に示す。ここから分るように
、このＤＮＡの下流配列は、ｐＩＲＦＬ由来のｃＤＮＡ
の下流配列と完全に一致している。
、このＤＮＡの下流配列は、ｐＩＲＦＬ由来のｃＤＮＡ
の下流配列と完全に一致している。
Ｓ１ヌクレア一ゼ分析は、ＩＲＦ−Ｉ ｍＲＮＡに対
する２つのＣＡＰ部位の存在を示している。
する２つのＣＡＰ部位の存在を示している。
メジャ一部位は、マイナ一部位の約２０ヌクレオチド下
流に存在する。典型的なＴＡＴＡボックス配列は、この
遺伝子の上流領域には存在しない。
流に存在する。典型的なＴＡＴＡボックス配列は、この
遺伝子の上流領域には存在しない。
ＣｐＧ配列が異常に多いことから、おそらくこの領域は
’１（ＴＦアイランドパ（バード（Ｂｉｒｄ）、１９８
６）を構成しているのであろう。
’１（ＴＦアイランドパ（バード（Ｂｉｒｄ）、１９８
６）を構成しているのであろう。
このプロモーター領域は２つのＧＣボックス及び１つの
ＣＡＡＴボックスを含んでいる（第７Ａ図参照）。前者
のボックスはＳｐＩと結合しくカドガン（にａｄｏｇａ
ｎ）等、１９８６Ｌまた後者はＣＰ−１又はＣＰ−２と
結合する（チョドシュ（Ｃｈｏｄｏｓｈ）等、ｌ ９’
８ Ｂ ）。
ＣＡＡＴボックスを含んでいる（第７Ａ図参照）。前者
のボックスはＳｐＩと結合しくカドガン（にａｄｏｇａ
ｎ）等、１９８６Ｌまた後者はＣＰ−１又はＣＰ−２と
結合する（チョドシュ（Ｃｈｏｄｏｓｈ）等、ｌ ９’
８ Ｂ ）。
その後、このプロモーター配列を含むＰｓｔｌフラグメ
ントについて例えば以下の方法におけるウィルス誘導性
等、細胞外シグナルに応答する反応性をテストした。
ントについて例えば以下の方法におけるウィルス誘導性
等、細胞外シグナルに応答する反応性をテストした。
Ｐｓｔｒセグメントの下流にレポーター遺伝子、すなわ
ち細菌性クロラムフニニコール、アセチルトランスフェ
ラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子を組込んだキメラ遺伝子を構築
した。これは、ｐ１９１ＲＦ由来のＰｓＬＩフラグメン
ト（上述）をＢａｍＨＩ及び旧ｎｄｌｌｌで切断し、生
成したフラグメントをｌ１ｌＡ＋。
ち細菌性クロラムフニニコール、アセチルトランスフェ
ラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子を組込んだキメラ遺伝子を構築
した。これは、ｐ１９１ＲＦ由来のＰｓＬＩフラグメン
ト（上述）をＢａｍＨＩ及び旧ｎｄｌｌｌで切断し、生
成したフラグメントをｌ１ｌＡ＋。
ｃａｔ２のＢｇｌ Ｉｆ−旧ｎｄＩＩ［メジャーフラ
グメント（ローゼンタル（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ）等、１
９８３）にクローニングすることによって行ない、ｐＩ
ＲＦｃａｔを構築した。
グメント（ローゼンタル（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ）等、１
９８３）にクローニングすることによって行ない、ｐＩ
ＲＦｃａｔを構築した。
さらにいくつかの構築物を以下のように調製した。
メジャーＣＡＰ部位から−３０〜−３５に位置する唯一
のＨａｅ ■部位を含むＰ１９１ＲＦＰ由来のＢａｍ）
Ｉ Ｉ Ｈｉｎｄ ＤＩフラグメントをＨａｅ ＩＩ
で消化することによりｐ Ｉ Ｒ’ＦΔｃａｔを調製し
た（第５Ａ図参照）、生成したＨａｅｍ−旧ｎｄｌＩ［
フラグメントを９Ａ＋ｏ ｃａｔｚのＢｇｌ ＩＩ−
旧ｎｄＩ［ｒメジャーフラグメント及び以下の合成りＮ
Ａ ５’ＧＡＴＣＣＴＡＧＡＴＴＴＣＴＴＣＧＣＧＧＣＧＣ
３’３’ＧＡＴＣＴＡＡＡＧＡＡＧＣＧＣ５’にライゲ
ーションした。
のＨａｅ ■部位を含むＰ１９１ＲＦＰ由来のＢａｍ）
Ｉ Ｉ Ｈｉｎｄ ＤＩフラグメントをＨａｅ ＩＩ
で消化することによりｐ Ｉ Ｒ’ＦΔｃａｔを調製し
た（第５Ａ図参照）、生成したＨａｅｍ−旧ｎｄｌＩ［
フラグメントを９Ａ＋ｏ ｃａｔｚのＢｇｌ ＩＩ−
旧ｎｄＩ［ｒメジャーフラグメント及び以下の合成りＮ
Ａ ５’ＧＡＴＣＣＴＡＧＡＴＴＴＣＴＴＣＧＣＧＧＣＧＣ
３’３’ＧＡＴＣＴＡＡＡＧＡＡＧＣＧＣ５’にライゲ
ーションした。
従って、ｐＩＲＦｃａｔ及びｐＩＲＦΔｃａｔは、メジ
ャーＣＡＰ部位から各々−３２０及び−４８までの位置
に配列を含んでいる。
ャーＣＡＰ部位から各々−３２０及び−４８までの位置
に配列を含んでいる。
ｐ−１２５ｃａｔは、フジタ（Ｆｕｊｉｔａ）等（１９
８７）により述べられているように、ヒトのＩＦＮ−β
遺伝子のプロモーター配列を含んでいる。
８７）により述べられているように、ヒトのＩＦＮ−β
遺伝子のプロモーター配列を含んでいる。
ｐＳＶ２ｃａｔはゴーマン（Ｇｏｒｍａｎ）等（サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２２１．５５１−５５３）に
より報告されている。
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２２１．５５１−５５３）に
より報告されている。
レファレンス遺伝子として、ｐ ＲＳ ＶＨｔを使いた
（ゴーマン（Ｇｏｒｍａｎ）等、上述参照）。
（ゴーマン（Ｇｏｒｍａｎ）等、上述参照）。
リン酸カルシウム法を用い、マウスｌ−９２９ｍ胞中に
種々の遺伝子をトランスフェクトした（フジタ（Ｆｕｊ
ｉｔａ）等、’１９８５）。５Ｘ１０’細胞を、７．５
μｇのＣＡＴレポーター遺伝子を含むテストプラスミド
及び２．５μｇのｐＲ３Ｖ旺［でトランスフェクトした
。この細胞をＮＤＶで誘導するか、又は、偽誘導した後
、フジタ（ＦｕｊｉＬａ）等（１９８５）により報告さ
れている酵素検定法で試験した。
種々の遺伝子をトランスフェクトした（フジタ（Ｆｕｊ
ｉｔａ）等、’１９８５）。５Ｘ１０’細胞を、７．５
μｇのＣＡＴレポーター遺伝子を含むテストプラスミド
及び２．５μｇのｐＲ３Ｖ旺［でトランスフェクトした
。この細胞をＮＤＶで誘導するか、又は、偽誘導した後
、フジタ（ＦｕｊｉＬａ）等（１９８５）により報告さ
れている酵素検定法で試験した。
相対的ＣＡＴ活性を計算するために、ｐｓＶ２ｃａｔで
トランスフェクトした偽誘導細胞由来のＣＡＴ活性を１
００％とした。各ＣＡＴ活性は、各サンプルのＥｃｏｆ
ｉＬにより（ムリガン（ｒａｕｌｌｉｇａｎ）及びバー
ブ（［ｌａｒｇ） 、プロシーディング・イン・ナショ
ナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 八ｃａｄ、 Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、
７ Ｂ 、 ２０７２−２０７６）標準化した。Ｃ
ＡＴがバックグランドレベル以下のサンプルについては
、ｂ、 ｂ、 と印した。
トランスフェクトした偽誘導細胞由来のＣＡＴ活性を１
００％とした。各ＣＡＴ活性は、各サンプルのＥｃｏｆ
ｉＬにより（ムリガン（ｒａｕｌｌｉｇａｎ）及びバー
ブ（［ｌａｒｇ） 、プロシーディング・イン・ナショ
ナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 八ｃａｄ、 Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、
７ Ｂ 、 ２０７２−２０７６）標準化した。Ｃ
ＡＴがバックグランドレベル以下のサンプルについては
、ｂ、 ｂ、 と印した。
その結果を第７Ｂ図に示す。
マウスＬ９２９へのｐＩＲＦｃａｔのトランスフェクシ
ョンは、低レベルのＣＡＴ活性を与えることが分る。こ
のＣＡ’Ｔ発現レベルはトランスフェクションた細胞を
ＮＤＶで活性化した時増加した。
ョンは、低レベルのＣＡＴ活性を与えることが分る。こ
のＣＡ’Ｔ発現レベルはトランスフェクションた細胞を
ＮＤＶで活性化した時増加した。
実際に、ＩＲＦ−１遺伝子の３００ｂｐ上流配列の欠失
（ｐＩＲＦΔｃａｔ）はＣＡＴ遺伝子の構成的及び誘導
性の発現を阻害した。このことは、このプロモーター配
列が３００ｂｐ上流領域内に存在し、かつウィルス誘導
性であることを示している。
（ｐＩＲＦΔｃａｔ）はＣＡＴ遺伝子の構成的及び誘導
性の発現を阻害した。このことは、このプロモーター配
列が３００ｂｐ上流領域内に存在し、かつウィルス誘導
性であることを示している。
（発現プラスミドの構築）
１、 クローンスＬ２Ｂ−８のファージＤＮＡをＥｃｏ
ＲＩで消化し、ｃＤＮＡ挿入物を回収した。そのｃＤＮ
ＡのＥｃｏＲＩ部位をＴ４ＤＮＡポリメラーゼで平滑化
した後、アルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅ
ｄ） （１９８７）の方法に従がい、配列ｐＧＡＴＣＣ
ＡＴＴＧＴＧＣＴＧＧ 及びｐＣＣＡＧＣＡＣＡＡＴ
Ｇで表わされる合成アダプターＤＮＡとライゲーション
した。
ＲＩで消化し、ｃＤＮＡ挿入物を回収した。そのｃＤＮ
ＡのＥｃｏＲＩ部位をＴ４ＤＮＡポリメラーゼで平滑化
した後、アルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（Ｓｅｅ
ｄ） （１９８７）の方法に従がい、配列ｐＧＡＴＣＣ
ＡＴＴＧＴＧＣＴＧＧ 及びｐＣＣＡＧＣＡＣＡＡＴ
Ｇで表わされる合成アダプターＤＮＡとライゲーション
した。
５−２０％酢酸カリウム密度勾配遠心によりその合成り
ＮＡを除去後（アルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（
Ｓｅｅｄ） （１９８７） ） 、両端に結合したア
ダプターＤＮＡを含むＩＲＦ−１ｃＤＮＡをＢｓＬＸＩ
切断ＣＤ Ｍ ８′ベクターＤＮＡとライゲーションし
た（シード（Ｓｅｅｄ） 、Ｂ、ネイチャー（Ｎａｔｕ
ｒｅ） 、３２９．８４０−８４２．１９８７）。
ＮＡを除去後（アルフォ（Ａｒｕｆｆｏ）及びシード（
Ｓｅｅｄ） （１９８７） ） 、両端に結合したア
ダプターＤＮＡを含むＩＲＦ−１ｃＤＮＡをＢｓＬＸＩ
切断ＣＤ Ｍ ８′ベクターＤＮＡとライゲーションし
た（シード（Ｓｅｅｄ） 、Ｂ、ネイチャー（Ｎａｔｕ
ｒｅ） 、３２９．８４０−８４２．１９８７）。
ＣＭＶプロ・モーターに関し、各々センス及びアンチセ
ンス配同性のＩＲＦ−１ｃＤＮＡ、を含むｐＩＲＦ−Ｓ
及びｐＩＲＦ−Ａを単離した。
ンス配同性のＩＲＦ−１ｃＤＮＡ、を含むｐＩＲＦ−Ｓ
及びｐＩＲＦ−Ａを単離した。
各プラスミドＤＮＡを、ｐ−５５ｃａｔ又はｐ５５ＣＩ
ＢとともにＬ９２９細胞ヘコトランスフェクトし、つい
でそのＣＡＴ発現レベルを測定した。
ＢとともにＬ９２９細胞ヘコトランスフェクトし、つい
でそのＣＡＴ発現レベルを測定した。
その結果を以下の第１表に示す。
第 １ 表
ｐＩＲＦ−Ａ
く １１
ＤＮＡのトランスフェクション効率は、受容細胞の状態
に依存して変化する（この場合、マウスＬ９２９細胞）
。この効率は実験１に比べ実験２では非常に低かった。
に依存して変化する（この場合、マウスＬ９２９細胞）
。この効率は実験１に比べ実験２では非常に低かった。
それゆえ、ＣＡ Ｔ発現レベルは実験２において相対的
に低かった。
に低かった。
上記表から分るように、有意なＣＡＴ活性は、ｐ−５５
ＣＩＢ及びｐＩＲＦ−３でトランスフェクトした細胞に
おいてのみ検出された。それらは、［ＲＦ−Ｉがｐ−５
５ＣＩＢ中のＣＡＴ遺伝子の上流に存在する反復（８回
）＾ＡＧＴＧＡ配列に結合し、それにより末端のＣＡＴ
遺伝子の転写を促進することを示している。
ＣＩＢ及びｐＩＲＦ−３でトランスフェクトした細胞に
おいてのみ検出された。それらは、［ＲＦ−Ｉがｐ−５
５ＣＩＢ中のＣＡＴ遺伝子の上流に存在する反復（８回
）＾ＡＧＴＧＡ配列に結合し、それにより末端のＣＡＴ
遺伝子の転写を促進することを示している。
さらにこの結果は、ＣＡＴ発現レベルがＮＤＶでその細
胞をトランスフェクトすることにより増加する（２倍以
上）ことを示し、このことは、ウィルスのような種々の
刺激剤で遺伝子発現をコントロールし得ることを示して
いる。
胞をトランスフェクトすることにより増加する（２倍以
上）ことを示し、このことは、ウィルスのような種々の
刺激剤で遺伝子発現をコントロールし得ることを示して
いる。
２、 ＩＲＦ−１，ＤＮＡ結合ドメイン及びイースト
ＧＡＬ４の転換活性化ドメインからなるタンパク質生産
のための発現プラスミドを以下のように構築した。
ＧＡＬ４の転換活性化ドメインからなるタンパク質生産
のための発現プラスミドを以下のように構築した。
プラスミドｐＩＲＦ−３を旧ｎｄＩ［Ｉ及びＰｓｔｌで
消化し、そのｃＤＮＡ挿入物を単離した。このＣＤＮＡ
をＯｒａ ｍで消化し、そのｌｌ１ｎｄＩＩｌ −Ｄｒ
ａｗｌフラグメント（約５５０ｂρ）を回収してフラグ
メントＡと命名した。
消化し、そのｃＤＮＡ挿入物を単離した。このＣＤＮＡ
をＯｒａ ｍで消化し、そのｌｌ１ｎｄＩＩｌ −Ｄｒ
ａｗｌフラグメント（約５５０ｂρ）を回収してフラグ
メントＡと命名した。
発現ベクターＣＤＭ８を旧ｎｄｎｌ及びＸｂａ Ｉで消
化しそのメジャーＤＮＡを単離しフラグメントＢと命名
した。
化しそのメジャーＤＮＡを単離しフラグメントＢと命名
した。
イーストのＧＡＬ４転写活性化ドメインをコードするＤ
ＮＡを以下のようにプラスミドｐＲ８９６８（マ（Ｍ’
ａ）及びバシン（Ｐｔａｓｈｎｅ） ）から単離した。
ＮＡを以下のようにプラスミドｐＲ８９６８（マ（Ｍ’
ａ）及びバシン（Ｐｔａｓｈｎｅ） ）から単離した。
まずｐＲ８９６ＢＤＮＡを旧ｎｄｌＩＩで消化し、その
末端を７４ＤＮＡポリメラーゼにより平滑化した。この
ＤＮＡに合成Ｘｂａ Ｉリンカ−ＤＮＡを付加し、つづ
いてそのＤＮＡをＰｖｕ Ｕ及びＸｂａ ［で消化した
。
末端を７４ＤＮＡポリメラーゼにより平滑化した。この
ＤＮＡに合成Ｘｂａ Ｉリンカ−ＤＮＡを付加し、つづ
いてそのＤＮＡをＰｖｕ Ｕ及びＸｂａ ［で消化した
。
生成したおよそ６００ｂｐのＰｖｕ ＩＩ Ｘｂａ
ｌフラグメントを回収しフラグメントＣと命名した。
ｌフラグメントを回収しフラグメントＣと命名した。
さらに、以下に示す配列の合成りＮＡを合成し、（５’
）ＧＴＧＴＣＧＴＣＣＡＧ（３’）（３’）ＧＣＡＣＡ
ＣＡＧＣＡＧＧＴＣ（５’）フラグメントＤを命名した
。
）ＧＴＧＴＣＧＴＣＣＡＧ（３’）（３’）ＧＣＡＣＡ
ＣＡＧＣＡＧＧＴＣ（５’）フラグメントＤを命名した
。
フラグメントＡ、、Ｂ、Ｃ及びＤをライゲーションする
ことにより発現ベクターＰＩＲＦＧＡＬ４を構築した。
ことにより発現ベクターＰＩＲＦＧＡＬ４を構築した。
コントロールプラスミドとして、フラグメントＡ、Ｂ、
Ｃ及び以下の配列；（５’ ） ＧＴＧＴＣＴＧＡＣＡ
Ｇ （３’ ）（３’ ） ＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＴＧ
ＴＣ（５’ ）の合成りＮＡをライゲーションしてプラ
スミドｐ ＩＲＦΔＧＡＬ４を構築した。
Ｃ及び以下の配列；（５’ ） ＧＴＧＴＣＴＧＡＣＡ
Ｇ （３’ ）（３’ ） ＧＣＡＣＡＣＡＧＡＣＴＧ
ＴＣ（５’ ）の合成りＮＡをライゲーションしてプラ
スミドｐ ＩＲＦΔＧＡＬ４を構築した。
ターミネータ−トリブレット、ＴＧＡが、ｐＩＲＦΔＧ
ＡＬ４中のＩＲＦ−１及びＧＡＬ４配列の間に相を同じ
くして存在するので、その発現タンパク賞はＧＡＬ４活
性化ドメインを欠除しているはずである。
ＡＬ４中のＩＲＦ−１及びＧＡＬ４配列の間に相を同じ
くして存在するので、その発現タンパク賞はＧＡＬ４活
性化ドメインを欠除しているはずである。
プラスミドにコードされているキメラ転写因子の機能性
をテストするため、ｐＩＲＦＧＡＬ４及びｐ ＩＲＦΔ
ＧＡＬ４を各々、ｐ−５５ＣＩＢとともにＬ９２９細胞
にコトランスフエクトと、そのＣＡＴ発現をモニターし
た。この結果を以下の第２表に示す。
をテストするため、ｐＩＲＦＧＡＬ４及びｐ ＩＲＦΔ
ＧＡＬ４を各々、ｐ−５５ＣＩＢとともにＬ９２９細胞
にコトランスフエクトと、そのＣＡＴ発現をモニターし
た。この結果を以下の第２表に示す。
第２表
宿主細胞：マウス上９２９細胞、細胞はＮＤＶによる誘
導を行なわな′かった。
導を行なわな′かった。
これらの結果は、インターロイキン、インターフェロン
（α、β及びγ）、プラスミノーゲン活性化因子、エリ
スロボイエチン、顆粒球コロニ活性化因子、インシュリ
ン、ヒト成長ホルモン又はスーパーオキシドジスミュー
ターゼ（又はヒト遺伝子の変異体）をコードする遺伝子
のような目的遺伝子の発現は、ＩＲＦ−１で増加し得る
ことを示している。
（α、β及びγ）、プラスミノーゲン活性化因子、エリ
スロボイエチン、顆粒球コロニ活性化因子、インシュリ
ン、ヒト成長ホルモン又はスーパーオキシドジスミュー
ターゼ（又はヒト遺伝子の変異体）をコードする遺伝子
のような目的遺伝子の発現は、ＩＲＦ−１で増加し得る
ことを示している。
ＩＦＮ−α、ｒＦＮ−β、ＩＦＮ−ｒ、ＩＦＮオメガ等
のインターフェロン遺伝子及びｔ−ＰＡ。
のインターフェロン遺伝子及びｔ−ＰＡ。
プロウロキナーゼ又はウロキナーゼ等のプラスミノーゲ
ン活性化因子などの上記の目的遺伝子は、例えばＡＡＧ
ＴＧＡなどのｆＲＦ−１に対する種々の長さの認識配列
と融合したプロモーターを含めることによってもより効
率的に発現し得る。
ン活性化因子などの上記の目的遺伝子は、例えばＡＡＧ
ＴＧＡなどのｆＲＦ−１に対する種々の長さの認識配列
と融合したプロモーターを含めることによってもより効
率的に発現し得る。
例えばその目的遺伝子は本来のＩＲＦ−［又はキトラＩ
ＲＦ−１遺伝子と共に、種々の宿主細胞に誘導し得る。
ＲＦ−１遺伝子と共に、種々の宿主細胞に誘導し得る。
例えばＡＡＧＴＧＡ反復数の増加複数等、ＩＲＦ−Ｉ認
識部位ＤＮＡの長さを増加すること、及び転写因子′の
発現レベルの増加により、目的遺伝子の高レベルの発現
が達成し得る。
識部位ＤＮＡの長さを増加すること、及び転写因子′の
発現レベルの増加により、目的遺伝子の高レベルの発現
が達成し得る。
例えばＡＡＧＴＧＡ反復配列を、ＩＦＮ−βプロモータ
ー又はＳＶ４０ウィルス初期プロモーターなどの適当な
プロモーターに付加し得る。 Ｌ−ＰＡ又はＩＦＮ−
β遺伝子などの目的遺伝子をこれらのプロモーターの下
流に結合し得る。すなわちこのように構築した遺伝子の
構造は、 （ＡＡＧＴＧＡ）、 （プロモーター’）（ｔ−ＰＡ
遺伝子などの目的遺伝子）さらにこのような遺伝子を、
例えばＣＨＯＤＸＢ Ｕ （ｄｈｆｒ株）細胞のような
（アーローブ（Ｕｒｌａｕｂ）及びチャシン（Ｃｈａｓ
ｉｎ）プロシーディング・イン・ナショナル・アカデ
ミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｗａｔｔ、＾ｃ
ａｄ、 Ｓｃｉ、） Ｕ ＳＡ、７エ、４２１６−４２
２０．１９８０）ＣＨＯ細胞に導入し、これを増殖した
。
ー又はＳＶ４０ウィルス初期プロモーターなどの適当な
プロモーターに付加し得る。 Ｌ−ＰＡ又はＩＦＮ−
β遺伝子などの目的遺伝子をこれらのプロモーターの下
流に結合し得る。すなわちこのように構築した遺伝子の
構造は、 （ＡＡＧＴＧＡ）、 （プロモーター’）（ｔ−ＰＡ
遺伝子などの目的遺伝子）さらにこのような遺伝子を、
例えばＣＨＯＤＸＢ Ｕ （ｄｈｆｒ株）細胞のような
（アーローブ（Ｕｒｌａｕｂ）及びチャシン（Ｃｈａｓ
ｉｎ）プロシーディング・イン・ナショナル・アカデ
ミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、 Ｗａｔｔ、＾ｃ
ａｄ、 Ｓｃｉ、） Ｕ ＳＡ、７エ、４２１６−４２
２０．１９８０）ＣＨＯ細胞に導入し、これを増殖した
。
先に述べたように、理想的には、宿主細胞が内在性のＩ
ＲＦ−１活性を持たないか、又は実質的に持たない細胞
から選ばれることが望ましい。好ましくはＣＭＶプロモ
ーターなどの強力なプロモーター又はメタロチ′オネン
遺伝子プロモーターなどの誘導性プロモーターを有する
ＩＲＦ−１遺伝子を従来法により種々の宿主細胞に導入
し得る。
ＲＦ−１活性を持たないか、又は実質的に持たない細胞
から選ばれることが望ましい。好ましくはＣＭＶプロモ
ーターなどの強力なプロモーター又はメタロチ′オネン
遺伝子プロモーターなどの誘導性プロモーターを有する
ＩＲＦ−１遺伝子を従来法により種々の宿主細胞に導入
し得る。
このＩＲＦ遺伝子は目的遺伝子と共に導入し、増殖し得
るが、一方、ＩＲＦ−１遺伝子及び目的遺伝子を別別に
宿主細胞に導入し得る。
るが、一方、ＩＲＦ−１遺伝子及び目的遺伝子を別別に
宿主細胞に導入し得る。
このようにトランスフェクトした細胞においては、ＩＲ
Ｆ−１は構成的にも（例えばＣＭＶプロモーターの場合
）又は誘導的にも（例えばメタロチオネンプロモーター
の場合、亜鉛のような二価金属により誘導される）生産
され得る。発現したｒＲＦ−１はＡＡＧＴＧＡ反復に結
合し、そして例えばｔ−ＰＡ又はＩＦＮ遺伝子などの末
端目的遺伝子を増加させる。
Ｆ−１は構成的にも（例えばＣＭＶプロモーターの場合
）又は誘導的にも（例えばメタロチオネンプロモーター
の場合、亜鉛のような二価金属により誘導される）生産
され得る。発現したｒＲＦ−１はＡＡＧＴＧＡ反復に結
合し、そして例えばｔ−ＰＡ又はＩＦＮ遺伝子などの末
端目的遺伝子を増加させる。
さらに、このような発現は、第１表から分るように、Ｎ
ＤＶ誘導のようにウィルスにより増大し得た。このよう
な誘導がＩＲＦ−１の活性を増大させる実験２からも同
様の事が言える。
ＤＶ誘導のようにウィルスにより増大し得た。このよう
な誘導がＩＲＦ−１の活性を増大させる実験２からも同
様の事が言える。
（一般式ｍのマウスＩＲＦ−１ｃＤＮＡとクロスハイブ
リダイズするマウスｃＤＮＡ配列）マウスｃＤＮＡう′
イブラリーを先に述べたように調製した。ｃＤＮＡはマ
ウスＬ９２９ＩＩ胞由来のｍＲＮＡを用い、標準操作に
より合成し、これを標準操作によりλｇｔｎベクターに
挿入した。生じたλｇｔｌＴライブラリーを、スクリー
ニングし、以下のように、上述したマウスＩＲＦ−１ｃ
ＤＮＡとクロスハイブリダイズする挿入物を有するＣＤ
ＮＡを単離した。
リダイズするマウスｃＤＮＡ配列）マウスｃＤＮＡう′
イブラリーを先に述べたように調製した。ｃＤＮＡはマ
ウスＬ９２９ＩＩ胞由来のｍＲＮＡを用い、標準操作に
より合成し、これを標準操作によりλｇｔｎベクターに
挿入した。生じたλｇｔｌＴライブラリーを、スクリー
ニングし、以下のように、上述したマウスＩＲＦ−１ｃ
ＤＮＡとクロスハイブリダイズする挿入物を有するＣＤ
ＮＡを単離した。
ファージプラークＤＮＡを含むニトロセルロースフィル
ターを以下に示す段階のインキュベーションを行った。
ターを以下に示す段階のインキュベーションを行った。
（１３３Ｘ Ｓ Ｓ Ｃ中、６５°Ｃ１３０分間、つづ
いで （２） デンハート溶液（０，２％ウシ血清アルブミ
ン、０．２％フィコール、０．２％ポリビニルピロリド
ン２５）を含むａＸＳＳＣ中６０分間のインキュベーシ
ョン、つづいて （３） ＩＭ ＮａＣｊ２． ５０ｍＭ）リス−ＨＣ
ｆ （ｐｉｌｅ、 Ｏ）、１０ｗＭＥＤＴＡ、０．１％
ＳＤＳ、５０ｇｇ／ｍｌ−末鎖キャリャーＤＮＡ （例
えばサケ精子ＤＮＡ）及びデンハート溶液′を含む溶液
中、６５°Ｃ１１２時間のインキュベーションを含むプ
レハイブリダイゼーションステップ、つづいて、 （４） プローブとして３２Ｐラベル化マウスＩＲＦ
−Ｉ ｃＤＮＡを含めること以外は第３段階のインキ
ュベーションを繰り返す。このｃ ＤＮＡプローブは、
λＬ２Ｂ−８由来のＥｃｏＲＩ切断挿入物として調製し
、マルチプライムラベリングシステムにより（上述）ラ
ベル化した。このインキュベーションは６５°Ｃで１２
時間行った。
いで （２） デンハート溶液（０，２％ウシ血清アルブミ
ン、０．２％フィコール、０．２％ポリビニルピロリド
ン２５）を含むａＸＳＳＣ中６０分間のインキュベーシ
ョン、つづいて （３） ＩＭ ＮａＣｊ２． ５０ｍＭ）リス−ＨＣ
ｆ （ｐｉｌｅ、 Ｏ）、１０ｗＭＥＤＴＡ、０．１％
ＳＤＳ、５０ｇｇ／ｍｌ−末鎖キャリャーＤＮＡ （例
えばサケ精子ＤＮＡ）及びデンハート溶液′を含む溶液
中、６５°Ｃ１１２時間のインキュベーションを含むプ
レハイブリダイゼーションステップ、つづいて、 （４） プローブとして３２Ｐラベル化マウスＩＲＦ
−Ｉ ｃＤＮＡを含めること以外は第３段階のインキ
ュベーションを繰り返す。このｃ ＤＮＡプローブは、
λＬ２Ｂ−８由来のＥｃｏＲＩ切断挿入物として調製し
、マルチプライムラベリングシステムにより（上述）ラ
ベル化した。このインキュベーションは６５°Ｃで１２
時間行った。
その後このフィルターを洗浄し、２ｘ Ｓ Ｓ Ｃｆａ
液で簡単にすすいだ後、０．１％ＳＤＳを含む３×ＳＳ
Ｃ溶液を用い、６５゛Ｃで３０分間洗浄した。
液で簡単にすすいだ後、０．１％ＳＤＳを含む３×ＳＳ
Ｃ溶液を用い、６５゛Ｃで３０分間洗浄した。
この操作を２回繰返した。
ｐＨＨ−４５と命名したポジティブクローンの１つを選
択し、これがｒＲＦのコード配列の一部のみをカバーす
るｃＤＮＡを含むことを明らかにした。
択し、これがｒＲＦのコード配列の一部のみをカバーす
るｃＤＮＡを含むことを明らかにした。
ｐ）ＩＨ−４５中のｃＤＮＡ挿入物を単離し、゛マウス
ＩＲＦ−１をコードするｃＤＮＡの構造°”という表題
の基、ｐ’１ＲＦ−Ｌの調製のため、上述のより大きい
挿入物を含むクローンのスクリーニングに用いた。
ＩＲＦ−１をコードするｃＤＮＡの構造°”という表題
の基、ｐ’１ＲＦ−Ｌの調製のため、上述のより大きい
挿入物を含むクローンのスクリーニングに用いた。
ポジティブクローンと同定されたものの中からｐＩＲＦ
２−５と命名される１つのクローンを選択し、マウスＩ
ＲＦ−１について述べた操作を用いて特徴づけた。完全
にハイブリダイズするｃＤＮＡ配列を一般式ＩＶａに示
し、対応するＩＲＦタンパク質のアミノ酸配列を一般式
■に示す。
２−５と命名される１つのクローンを選択し、マウスＩ
ＲＦ−１について述べた操作を用いて特徴づけた。完全
にハイブリダイズするｃＤＮＡ配列を一般式ＩＶａに示
し、対応するＩＲＦタンパク質のアミノ酸配列を一般式
■に示す。
年、１１月２２日にベダペスト協定に基づき登録番号Ｆ
ＥＲＭＢＰ−２１５７でＦＲＩに登録した。
ＥＲＭＢＰ−２１５７でＦＲＩに登録した。
（ヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡ配列とハイブリダイズするイ
ーストゲノム由来のｃＤＮＡ）イーストのＤＮＡを標準
操作で調製し、ＥｃｏＲ１で消化した。この消化ＤＮＡ
５μεを０．８％アガロースゲルで電気泳動し、標準操
作によりＤＮＡプロッティングを行った。
ーストゲノム由来のｃＤＮＡ）イーストのＤＮＡを標準
操作で調製し、ＥｃｏＲ１で消化した。この消化ＤＮＡ
５μεを０．８％アガロースゲルで電気泳動し、標準操
作によりＤＮＡプロッティングを行った。
プロットしたフィルターを以下に示したちの以外はマウ
スＩＲＦ−，１とハイブリダイズするマウスＤＮＡを単
離した先の操作と同様に処理した。
スＩＲＦ−，１とハイブリダイズするマウスＤＮＡを単
離した先の操作と同様に処理した。
ステップ（３）における温度は５５゛Ｃで行ない、また
ステップ（４）におけるインキュベーションも、５５°
Ｃで行なった。また放射性プローブは、ｐＨｒＲＦ３１
のＸｈｏ Ｉ消化で単離したヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡを
、マウスＩＲＩＩに対して先に述べた例で示したように
ラベル化して用いた。
ステップ（４）におけるインキュベーションも、５５°
Ｃで行なった。また放射性プローブは、ｐＨｒＲＦ３１
のＸｈｏ Ｉ消化で単離したヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡを
、マウスＩＲＩＩに対して先に述べた例で示したように
ラベル化して用いた。
フィルターは２ＸＳＳＣ中５５°Ｃで洗浄した。ポジテ
ィブクローンは、オートラジオグラフィーで同定した（
第１０図参照）。
ィブクローンは、オートラジオグラフィーで同定した（
第１０図参照）。
１支文献
アプリニー（＾ｂｒｅｕ） Ｓ、Ｌ、、バンクロフト（
Ｂａｎｃｒｏｆ ｔ）Ｆ、Ｃ，、ａｎｄスチワート（Ｓ
ｔｅｗａｒｔ） ＩＩ Ｅ、Ｗ。
Ｂａｎｃｒｏｆ ｔ）Ｆ、Ｃ，、ａｎｄスチワート（Ｓ
ｔｅｗａｒｔ） ＩＩ Ｅ、Ｗ。
（１９７９） 、 Ｉｎ−ｔｅｒｆｅｒｏｎ ｐｒｉ
ｍｉｎｇ。
ｍｉｎｇ。
Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、 ２５４．４１４−４
１８゜アルフォ（八ｒｕｆｆｏ） Ａ、、 ａｎｄ シ
ード（Ｓｅｅｄ） Ｂ。
１８゜アルフォ（八ｒｕｆｆｏ） Ａ、、 ａｎｄ シ
ード（Ｓｅｅｄ） Ｂ。
（１９８７） 、 Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉ
ｎｇ ｏｆ ａ ｃＤＮＡｂｙ ａ ｈｉｇｈ−ｅｆｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ ＣＯＳ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｓｙｓｔｅｍ。
ｎｇ ｏｆ ａ ｃＤＮＡｂｙ ａ ｈｉｇｈ−ｅｆｆ
ｉｃｉｅｎｃｙ ＣＯＳ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｓｙｓｔｅｍ。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、Ａｃ５ｄ、Ｓｃｉ、ｔｌＳＡ
８土、８５７３−８５７７゜ バード（Ｂｉｒｄ） Ａ、Ｐ、 （１９８６） 、
ＣｐＧ−ｒｉｃｈｉｓｌａｎｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉ
ｏｎ。
８土、８５７３−８５７７゜ バード（Ｂｉｒｄ） Ａ、Ｐ、 （１９８６） 、
ＣｐＧ−ｒｉｃｈｉｓｌａｎｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉ
ｏｎ。
Ｎａｔｕｒｅ ３２１．２（１９−２１３゜カプト（
Ｃａｐｕｔ） Ｄ、、ビュートラ−（Ｂｅｕｔｌｅｒ）
Ｂ、。
Ｃａｐｕｔ） Ｄ、、ビュートラ−（Ｂｅｕｔｌｅｒ）
Ｂ、。
バードグ（Ｉｌａｒｔｏｇ） Ｋ、、 セイヤー（Ｔ
ｈａｙｅｒ） Ｒ１゜ブラウンシャイマー（Ｂｒｏｉｖ
ｎ−５ｃｈｉｍｅｒ） Ｓ、、 ａｎｄセラミ（Ｃｅｒ
ａｍｉ） Ａ、 （１９８６）、 Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ｏｆａ ｃｏｍｍｏｎ ｎｕｃｌｅｏ−ｔ
ｉｄｅ ５ｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ３
’ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏ
ｆ ｍＲＮＡ ｍｏｌｅｃｕ−１ｅｓｓｐｅｃｉｆ
ｙｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔ
ｏｒｓ。
ｈａｙｅｒ） Ｒ１゜ブラウンシャイマー（Ｂｒｏｉｖ
ｎ−５ｃｈｉｍｅｒ） Ｓ、、 ａｎｄセラミ（Ｃｅｒ
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ａｔｉｏｎ ｏｆａ ｃｏｍｍｏｎ ｎｕｃｌｅｏ−ｔ
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Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃ５ｄ、 Ｓｃｉ ＵＳＡ
８３．１６７０１６７４゜ カバリエイ（Ｃａｖａｌｉｅｒｉ） Ｒ，Ｌ、、 ヘイ
ベル（Ｈａｖｅｌｌ）Ｅ、Ｚ、 、ヴイルセク（Ｖｉｌ
ｃｅｋ） Ｊ、、 ａｎｄペスト力（Ｐｅｓｔｋａ）
Ｓ、 （１９７７） 、 Ｉｎｄｕｃｔｊｏｎ
ａｎｄ ｄｅｃａｙｏｆ ｈｕｏ＋ａｎ ｆｉｂｒ
ｏｂｌａｓｔ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｍＲＮＡ
。
８３．１６７０１６７４゜ カバリエイ（Ｃａｖａｌｉｅｒｉ） Ｒ，Ｌ、、 ヘイ
ベル（Ｈａｖｅｌｌ）Ｅ、Ｚ、 、ヴイルセク（Ｖｉｌ
ｃｅｋ） Ｊ、、 ａｎｄペスト力（Ｐｅｓｔｋａ）
Ｓ、 （１９７７） 、 Ｉｎｄｕｃｔｊｏｎ
ａｎｄ ｄｅｃａｙｏｆ ｈｕｏ＋ａｎ ｆｉｂｒ
ｏｂｌａｓｔ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｍＲＮＡ
。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃ５ｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳ
Ａ ７４．４４１５４４１９゜ チョドシｓ （Ｃｈｏｄｏｓｈ） Ｌ、Ａ、、 パル
トウイン（Ｂａｌｄｗｉｎ） Ａ、Ｓ、、カーシュ（Ｃ
ａｒｔｈｅｗ） Ｒ，Ｗ、 、 ａｎｄシャープ（Ｓｈ
ａｒｐ） Ｐ、＾、 （１９８８） 、 Ｉｌｕｍａ
ｎＣＣＡＡＴ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｈ
ａｖｅ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ５ｕｂｕｎ ｉ
ｔｓ 。
Ａ ７４．４４１５４４１９゜ チョドシｓ （Ｃｈｏｄｏｓｈ） Ｌ、Ａ、、 パル
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ａｒｔｈｅｗ） Ｒ，Ｗ、 、 ａｎｄシャープ（Ｓｈ
ａｒｐ） Ｐ、＾、 （１９８８） 、 Ｉｌｕｍａ
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Ｃｅ１ｌ ５３、 １１−２４゜
デインター（Ｄｉｎｔｅｒ） Ｈ，、ハウザー（Ｉｌａ
ｕｓｅｒ） Ｈ，。
ｕｓｅｒ） Ｈ，。
メイ（Ｍａｙｒ） ＩＪ、、 レイマース（Ｌａｍｍ
ｅｒｓ） Ｒ，、ブランス（Ｂｒｕｎｓ） Ｗ、、
グロス（Ｇｒｏｓｓ） Ｇ、、 ａｎｄコリンズ（Ｃｏ
ｌｌｉｎｓ） Ｊ、 （１９８３） 、 Ｈｕｍａｎ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ ａｎｄ ｃｏ−４ｎ
−ｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅｓ ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
５ｔｕｄｉｅｓ、Ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇ
ｙ ｏｒ ｔｈｅＩｎｔｅｒ−ｆｅｒｏｎ Ｓｙ
ｓｔｅｍ １９８３ 、 Ｅ、 Ｄｅ Ｍａｅｙｅ
ｒ ａｎｄ！ｌ、５ｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ＋ ｅｄｓ
。
ｅｒｓ） Ｒ，、ブランス（Ｂｒｕｎｓ） Ｗ、、
グロス（Ｇｒｏｓｓ） Ｇ、、 ａｎｄコリンズ（Ｃｏ
ｌｌｉｎｓ） Ｊ、 （１９８３） 、 Ｈｕｍａｎ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ ａｎｄ ｃｏ−４ｎ
−ｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅｓ ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
５ｔｕｄｉｅｓ、Ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇ
ｙ ｏｒ ｔｈｅＩｎｔｅｒ−ｆｅｒｏｎ Ｓｙ
ｓｔｅｍ １９８３ 、 Ｅ、 Ｄｅ Ｍａｅｙｅ
ｒ ａｎｄ！ｌ、５ｃｈｅｌｌｅｋｅｎｓ＋ ｅｄｓ
。
（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ ５ｃ
ｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｂｅｒｓ）３３−３４゜ デンター（Ｄｉｎｔｅｒ） ｆｌ、、 ａｎｄ ハウザ
ー（）Ｉａｕｓｅｒ） ｌＩ。
ｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｂｅｒｓ）３３−３４゜ デンター（Ｄｉｎｔｅｒ） ｆｌ、、 ａｎｄ ハウザ
ー（）Ｉａｕｓｅｒ） ｌＩ。
（１９８７） 、 Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ １ｎ
ｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅ ＤＮＡ
ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａ
ｎ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎβ ｐｒｏｍｏｔｅｒ。
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ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａ
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Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ｌ ５５、１
０３−１（１９゜エバンス（Ｅｖａｎｓ） Ｒ，Ｍ、、
ａｎｄホレンバーグ（ｌｌｏｌｌｅｎｂｅｒｇ）
Ｓ、Ｍ、 （１９８Ｂ ） 、 Ｚｉｎｃ Ｆｉ
ｎｇｅｒｓ ：Ｇ１１ｔ ｂｙ ａｓｓｏｃｉａｔ
ｉｏｎ。
０３−１（１９゜エバンス（Ｅｖａｎｓ） Ｒ，Ｍ、、
ａｎｄホレンバーグ（ｌｌｏｌｌｅｎｂｅｒｇ）
Ｓ、Ｍ、 （１９８Ｂ ） 、 Ｚｉｎｃ Ｆｉ
ｎｇｅｒｓ ：Ｇ１１ｔ ｂｙ ａｓｓｏｃｉａｔ
ｉｏｎ。
Ｃｅ１ｌ ５２、１−３゜
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） Ｔ、、 サイト−（Ｓａｉｔ
ｏ） Ｓ、、 ａｎｄコーノ （Ｋｏｈｎｏ） Ｓ、
（１９７９） 、 Ｉ’ｒｉｍｉｎｇｔｎｃｒｅ
ａｓｅｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ １ＩＩＲＮＡ １ｎｐｏｌｙ
（ｒｌ） ： ｐｏｌｙ（ｒＣ）−ｔｒｅａｔｅｄ Ｌ
ｃｅｌｌｓ。
ｏ） Ｓ、、 ａｎｄコーノ （Ｋｏｈｎｏ） Ｓ、
（１９７９） 、 Ｉ’ｒｉｍｉｎｇｔｎｃｒｅ
ａｓｅｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ １ＩＩＲＮＡ １ｎｐｏｌｙ
（ｒｌ） ： ｐｏｌｙ（ｒＣ）−ｔｒｅａｔｅｄ Ｌ
ｃｅｌｌｓ。
Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉｏｌ、 ４５、３０１−３（１８゜
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） Ｔ、、オーツ（Ｏｈｎｏ）
Ｓ、、ヤスミツ（Ｙａｓｕｏ＋１ｔｓｕ） ｔｌ、 、
ａｎｄタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）Ｔ、 （１
９８５） 、 Ｄｅｌ、１ｍ１ｎａＬｉｏｎ ａｎｄ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ＤＮＡ ５ｅｑｕｅ
ｎｃｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ
ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｒ ｈ
ｕｍａｎ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β ｇｅｎｅＣｅ
１１４１．４８９−４９６゜ フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） Ｔ、ｔ シブヤ（Ｓｈｉｂ
ｕｙａ） Ｉｌ、 、 ホソタ（ｌｌｏｔｔａ） １
１．、 ヤマニシ（Ｙａｍａｎｉｓｈｉ） Ｋ、＋ａ
ｎｄタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、 （１９８
７）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏ −β ｇｅｎｅ ｒｅｑ
ｕｌａｔｉｏｎ ： Ｔａｎｄｅｍｌｙｒｅｐｅａ
ｔｅｄ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｒ ａ
５ｙｎｔｈｅｔｉｃ ６ ｂｐｏｌｉｇｏｍｅ
ｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ａ ｖｉｒｕｓ
−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｅｎｈａｎｃｅｒ。
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） Ｔ、、オーツ（Ｏｈｎｏ）
Ｓ、、ヤスミツ（Ｙａｓｕｏ＋１ｔｓｕ） ｔｌ、 、
ａｎｄタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）Ｔ、 （１
９８５） 、 Ｄｅｌ、１ｍ１ｎａＬｉｏｎ ａｎｄ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ＤＮＡ ５ｅｑｕｅ
ｎｃｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ
ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｒ ｈ
ｕｍａｎ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β ｇｅｎｅＣｅ
１１４１．４８９−４９６゜ フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） Ｔ、ｔ シブヤ（Ｓｈｉｂ
ｕｙａ） Ｉｌ、 、 ホソタ（ｌｌｏｔｔａ） １
１．、 ヤマニシ（Ｙａｍａｎｉｓｈｉ） Ｋ、＋ａ
ｎｄタニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、 （１９８
７）Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏ −β ｇｅｎｅ ｒｅｑ
ｕｌａｔｉｏｎ ： Ｔａｎｄｅｍｌｙｒｅｐｅａ
ｔｅｄ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｒ ａ
５ｙｎｔｈｅｔｉｃ ６ ｂｐｏｌｉｇｏｍｅ
ｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｓ ａ ｖｉｒｕｓ
−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｅｎｈａｎｃｅｒ。
Ｃｅ１ｌ ４９．３５７−３６７゜ガラプル（Ｇａ
）ａｂｒｕ） Ｊ、、 ａｎｄホバネシアン（Ｈｏｖ
ａｎｅｓｓｉａｎ） 八、Ｇ、 （１９８５）、
Ｔｗｏ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β１ｎｄｅｃｅ
ｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ １ｎｖｏｌｖｅｄ １
ｎｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｃｏｍｐ
ｌｅｘ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎｄｅｕｂｌｅ−ｓｔ
ｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ。
）ａｂｒｕ） Ｊ、、 ａｎｄホバネシアン（Ｈｏｖ
ａｎｅｓｓｉａｎ） 八、Ｇ、 （１９８５）、
Ｔｗｏ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−β１ｎｄｅｃｅ
ｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｒｅ １ｎｖｏｌｖｅｄ １
ｎｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｃｏｍｐ
ｌｅｘ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎｄｅｕｂｌｅ−ｓｔ
ｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ。
Ｃｅ１ｌ ４３、６８５−６９４゜グツドバーン（
Ｇｏｏｄｂｏｕｒｎ） Ｓ、、 ジン（Ｚｉｎｎ）に
、。
Ｇｏｏｄｂｏｕｒｎ） Ｓ、、 ジン（Ｚｉｎｎ）に
、。
ａｎｄ７；アチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ） Ｔ、 （１
９８５） 。
９８５） 。
ｔｌｕｍａｎ β−１ｎ−ｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎ
ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｓｒｅｑｕｌａｔｅｄ
ｂｙ ａｎ １ｎｄｕｃｉｂｌｅ ｅｎ−ｈ
ａｎｃｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ。
ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ １ｓｒｅｑｕｌａｔｅｄ
ｂｙ ａｎ １ｎｄｕｃｉｂｌｅ ｅｎ−ｈ
ａｎｃｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ。
Ｃｅ１１４１、５（１９−５２０゜
バイン（Ｉｌｕｙｎｈ） Ｔ、Ｖ、 、 ヤング（Ｙ
ｏｕｎｇ） Ｒ，Ａ、。
ｏｕｎｇ） Ｒ，Ａ、。
ａｎｄデービス（Ｄａｖｉｓ） Ｒ，Ｗ、 （１９８
５） 。
５） 。
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉ
ｎｇ ｃＤＮＡ １ｉｂｒａｒｉｅｓｉｎ ｇｔｌｏ
ａｎｄ １１． １ｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ−
Ａ ＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ、Ｖｏｌｕｍ
ｅ Ｌ Ｄ、Ｍ、Ｇｌｏｖｅｒ、ｅｄ。
ｎｇ ｃＤＮＡ １ｉｂｒａｒｉｅｓｉｎ ｇｔｌｏ
ａｎｄ １１． １ｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ−
Ａ ＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ、Ｖｏｌｕｍ
ｅ Ｌ Ｄ、Ｍ、Ｇｌｏｖｅｒ、ｅｄ。
（Ｏｘｆｏｒｄ ： ＩＲＬ Ｐｒｅ’ｓｓ）
、 ｐｐ、 ４９−７８゜イスラエル（Ｉｓｒａｅ
ｌ）＾、１キムラ（にｉｍｕｒａ） Ａ、＋フｙ−二＋
（Ｐｏｕｒｎｉｅｒ） Ａ、 ＊フェラス（Ｆｅｌｌ
ｏｕｓ） Ｍ、。
、 ｐｐ、 ４９−７８゜イスラエル（Ｉｓｒａｅ
ｌ）＾、１キムラ（にｉｍｕｒａ） Ａ、＋フｙ−二＋
（Ｐｏｕｒｎｉｅｒ） Ａ、 ＊フェラス（Ｆｅｌｌ
ｏｕｓ） Ｍ、。
ａｎｄ力ウリルスキー（Ｋｏｕｒｉｌｓｋｙ） Ｐ、
（１９８Ｇ ） 。
（１９８Ｇ ） 。
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ５ｅｑｕ
ｅｎｃｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｒｅｓａｃＬｉｖｉｔｙ
ｏｆ ａｎ ｅｎｂａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈ
ｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ ｏｒ ａ
ｍｏｕｓｅ ｌｌ−２ｇｅｎｅＮａｔｕｒｅ ３２
２．７４３−７４６゜カドナガ（にａｄｏｎａｇａ）
Ｊ、Ｔ、、 ジョンズ（Ｊｏｎｅｓ） Ｋ。
ｅｎｃｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｒｅｓａｃＬｉｖｉｔｙ
ｏｆ ａｎ ｅｎｂａｎｃｅｒ ｉｎ ｔｈ
ｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ ｏｒ ａ
ｍｏｕｓｅ ｌｌ−２ｇｅｎｅＮａｔｕｒｅ ３２
２．７４３−７４６゜カドナガ（にａｄｏｎａｇａ）
Ｊ、Ｔ、、 ジョンズ（Ｊｏｎｅｓ） Ｋ。
Ａ、、 ａｎｄチアン（Ｔｊｉａｎ） Ｒ，（１９８６
） 。
） 。
Ｐｒｏｍｏｔｅｒ−ｓｐｅ−ｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｖａ
ｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｕ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｐ １
． Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ。
ｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｕ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｐ １
． Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｓｃｉ、１上、２０−２３゜
カキダニ（Ｋａｋｉｄａｎｉ） ＩＣ，ａｎｄｎシタ（
Ｐｔａｓｈｎｅ）Ｍ、 （１９８６） 、 ＧＡＬ
４ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌ
ｌｓ。
Ｐｔａｓｈｎｅ）Ｍ、 （１９８６） 、 ＧＡＬ
４ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅ
ｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌ
ｌｓ。
Ｃｅ１ｌ ５２、１６１−１６７
ケラー（Ｋｅｌｌｅｒ） Ａ、Ｄ、、 ａｎｄマニアチ
ス（Ｍａｎ ｉａ ｔ １ｓ）Ｔ、 （１９８８） 、
ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａＬｔｏｎ ｏｆ ａｎ １ｎｄ
ｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ
ｔｏ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａＬｏｒｙ
ｅｌｅｍａｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ β−１
ｎｔｅｒ４ｅｒｏｎ ｇｅｎｅ。
ス（Ｍａｎ ｉａ ｔ １ｓ）Ｔ、 （１９８８） 、
ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａＬｔｏｎ ｏｆ ａｎ １ｎｄ
ｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ
ｔｏ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａＬｏｒｙ
ｅｌｅｍａｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ β−１
ｎｔｅｒ４ｅｒｏｎ ｇｅｎｅ。
Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、 ＾ｃａｄ、Ｓｃｉ ＬＩＳ
＾ ８５、３３（１９−３３１３゜ コハセ（にｏｈａｓｅ） Ｍ−＋ メイ（Ｍａｙ） Ｌ
、Ｔ、、タム（Ｔａｍｍ） １．、 ヴイルセク（Ｖ
ｉｌｃｅｋ） Ｊ、、 ａｎｄセーガル（Ｓｅｈｇａｌ
） Ｐ、Ｂ、 （１９８７） 、 Ａ ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｐｌ
ｏｉｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ：１ｎｔｅｒ
ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｅｔａ １ｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎｓ、 ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓｆａ
ｃｔｏｒ＋ Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄｉｎｔｅｒｌ
ｅｕｋｉｎ−１，Ｍｏｌ。
＾ ８５、３３（１９−３３１３゜ コハセ（にｏｈａｓｅ） Ｍ−＋ メイ（Ｍａｙ） Ｌ
、Ｔ、、タム（Ｔａｍｍ） １．、 ヴイルセク（Ｖ
ｉｌｃｅｋ） Ｊ、、 ａｎｄセーガル（Ｓｅｈｇａｌ
） Ｐ、Ｂ、 （１９８７） 、 Ａ ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅｎｅｔｗｏｒｋ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｉｐｌ
ｏｉｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ：１ｎｔｅｒ
ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｅｔａ １ｎｔｅｒｆ
ｅｒｏｎｓ、 ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓｆａ
ｃｔｏｒ＋ Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄｉｎｔｅｒｌ
ｅｕｋｉｎ−１，Ｍｏｌ。
Ｃｅ１１． Ｂｉｏｌ、 ７、２７２−２８０゜コ
ーバー（Ｋｏｒｂｅｒ） Ｂ、、マーモト（Ｍｅｒｍｏ
ｄ） Ｎ、。
ーバー（Ｋｏｒｂｅｒ） Ｂ、、マーモト（Ｍｅｒｍｏ
ｄ） Ｎ、。
フード（Ｈｏｏｄ） Ｌ、、 ａｎｄストロイノフスキ
ー（Ｓｔｒｏｙｎｏｗｓｋｉ） Ｉ 、 （１９８
Ｂ ） 、 Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ ｇｅｎｅ ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ
： Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆ Ｈ−２Ｐｒｏｍｏｔｅｒ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ。
ー（Ｓｔｒｏｙｎｏｗｓｋｉ） Ｉ 、 （１９８
Ｂ ） 、 Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ ｇｅｎｅ ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ
： Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆ Ｈ−２Ｐｒｏｍｏｔｅｒ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ。
５ｃｉｅｎｃｅ ２３９．１３０２−１３０６゜コザク
（Ｋｏｚａｋ） Ｍ、 （１９８７） 、八ｎ ａｎ
ａｌｙｓｉｓｏｆ ５ ’ −ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ
５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ６９９ｖｅｒｔｅｂｒ
ａｔｅ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ５゜Ｎｕｃｌ、
Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ＋ ’Ｌ ５．８１２５−８１４
３゜タレブス（Ｋｒｅｂｓ） Ｅ、、 アイゼンマン
（Ｅｉｓｅｎｏ＋ａｎ）Ｒｏｌ クエンゼル（にｕｅｎ
ｚｅｌ） Ｅ、、 リッチフィールド（Ｌｉｔｃｈｆ
ｉｅｌｄ） Ｄ、、 ローズマン（Ｌｏｚｅｍａｎ）
Ｆ、 、 リーラ＋ （Ｌｉｉｓｃｈｅｒ） Ｂ
、、 ａｎｄツマ−コーン（Ｓｏｍｍｅｒｃｏｒｎ）
Ｊ、 （１９８８） 、 Ｃａ５ｅｉｎ Ｋｉｎａｓ
ｅｌｌａｓ ａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｍｐｏｒ
ｔａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｃｏｎｃｅｒｎｅｄｗｉｔｈ
ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ、ｌｎ
ｔｈｅ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃ−ｔｉｏｎ （Ｃｏ
ｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ ： Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ １ｌａ
ｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ） Ａｂｓｔｒａ
ｃｔ Ｐ、 ３５゜タル（Ｋｕｈｌ） Ｄ、、デラフ
エンテ（ｄｅ ｔａ Ｆｕｅｎｔｅ）Ｊ、３ チャター
ベジ（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ） Ｍ、＋ パリモー（
Ｐａｒｉｓｏｏ） Ｓ、、 レイルス（Ｒｙａｌｓ）
Ｊ、、メーヤー（Ｍａｙｅｒ） Ｐ、、 ａｎｄ ワ
イズマン（Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ） Ｃ（１９８７）、
Ｒｅｖｅｒｓｉｂ！ｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ
ｅｎｈａｎｃｅｒｓｂｙ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｄｅ
ｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＩＦＮ
−αｐｒｏ−ｍｏｔｅｒ。
（Ｋｏｚａｋ） Ｍ、 （１９８７） 、八ｎ ａｎ
ａｌｙｓｉｓｏｆ ５ ’ −ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ
５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ６９９ｖｅｒｔｅｂｒ
ａｔｅ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ５゜Ｎｕｃｌ、
Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ＋ ’Ｌ ５．８１２５−８１４
３゜タレブス（Ｋｒｅｂｓ） Ｅ、、 アイゼンマン
（Ｅｉｓｅｎｏ＋ａｎ）Ｒｏｌ クエンゼル（にｕｅｎ
ｚｅｌ） Ｅ、、 リッチフィールド（Ｌｉｔｃｈｆ
ｉｅｌｄ） Ｄ、、 ローズマン（Ｌｏｚｅｍａｎ）
Ｆ、 、 リーラ＋ （Ｌｉｉｓｃｈｅｒ） Ｂ
、、 ａｎｄツマ−コーン（Ｓｏｍｍｅｒｃｏｒｎ）
Ｊ、 （１９８８） 、 Ｃａ５ｅｉｎ Ｋｉｎａｓ
ｅｌｌａｓ ａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｍｐｏｒ
ｔａｎｔ ｅｎｚｙｍｅ ｃｏｎｃｅｒｎｅｄｗｉｔｈ
ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ、ｌｎ
ｔｈｅ ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃ−ｔｉｏｎ （Ｃｏ
ｌｄ ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、 Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ ： Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ １ｌａ
ｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ） Ａｂｓｔｒａ
ｃｔ Ｐ、 ３５゜タル（Ｋｕｈｌ） Ｄ、、デラフ
エンテ（ｄｅ ｔａ Ｆｕｅｎｔｅ）Ｊ、３ チャター
ベジ（Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ） Ｍ、＋ パリモー（
Ｐａｒｉｓｏｏ） Ｓ、、 レイルス（Ｒｙａｌｓ）
Ｊ、、メーヤー（Ｍａｙｅｒ） Ｐ、、 ａｎｄ ワ
イズマン（Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ） Ｃ（１９８７）、
Ｒｅｖｅｒｓｉｂ！ｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ
ｅｎｈａｎｃｅｒｓｂｙ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｄｅ
ｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＩＦＮ
−αｐｒｏ−ｍｏｔｅｒ。
Ｃｅ１ｌ ５０． １０５７−１０６９゜カイト（
にｙｔｅ） Ｊ、、 ａｎｄ トウーリトル（Ｄｏｏ
ｌｉｔ口ｅ）Ｒ，Ｆ、 （１９Ｂ ２ ） 、、ｈ
ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｉｓ−ｐｌ
ａｙｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｃｈ
ａｒａｃｔｅｒ ｏｆ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ。
にｙｔｅ） Ｊ、、 ａｎｄ トウーリトル（Ｄｏｏ
ｌｉｔ口ｅ）Ｒ，Ｆ、 （１９Ｂ ２ ） 、、ｈ
ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｉｓ−ｐｌ
ａｙｉｎｇ ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｃｈ
ａｒａｃｔｅｒ ｏｆ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ。
Ｊ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 １５７、１０５−
１３２゜レヴイ （Ｌｅｖｙ） Ｄ、Ｅ、、ケスマー（
Ｋｅｓｓｌｅｒ） Ｄ、Ｓ。
１３２゜レヴイ （Ｌｅｖｙ） Ｄ、Ｅ、、ケスマー（
Ｋｅｓｓｌｅｒ） Ｄ、Ｓ。
パイン（Ｐｉｎｅ） Ｒ，、レイチ（Ｒｅｉｃｈ） Ｎ
、、 ａｎｄダーネル（Ｄａｒｎｅｌｌ） Ｊ、Ｅ、
（１９８Ｂ ） 、 Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｎｄｕ
ｃｅｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈ
ａｔ ｂｉｎｄ ａ ｓｈａｒｅｄｐｒｏｍｏｔ
ｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｒｔｈ
ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅ ｔｒ
ａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ。
、、 ａｎｄダーネル（Ｄａｒｎｅｌｌ） Ｊ、Ｅ、
（１９８Ｂ ） 、 Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｎｄｕ
ｃｅｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈ
ａｔ ｂｉｎｄ ａ ｓｈａｒｅｄｐｒｏｍｏｔ
ｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｒｔｈ
ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅ ｔｒ
ａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ。
Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
２ 、３８３−３９３ 。
２ 、３８３−３９３ 。
マ（Ｍａ） Ｊ−＋ ａｎｄｎシタ（Ｐｔａｓｈｎｅ）
Ｍ、 （１９８７） 。
Ｍ、 （１９８７） 。
Ｔｈｅ ｃａｒｂｏｘｙ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ３０
ａｏ＋ｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｏｆ ＧＡＬ４ａｒｅ
ｒｅｃｏｇｎｉｓｅｄ ｂｙ ＧＡＬ８０゜Ｃｅ１ｌ
５０，１３７−１４２゜ マキサム（Ｍａｘａｍ） Ａ、、 ａｎｄ ギルバー
ト（Ｇｉｌｂｅｒｔ）Ｗ、 （１９８０） 、Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｉｎｇ ｅｎｄ−ｔａｂｅｌｅｄ ＤＮＡｗｉｔ
ｈ ｂａｓｅ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｌｅａｖａｇｅｓ。
ａｏ＋ｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｏｆ ＧＡＬ４ａｒｅ
ｒｅｃｏｇｎｉｓｅｄ ｂｙ ＧＡＬ８０゜Ｃｅ１ｌ
５０，１３７−１４２゜ マキサム（Ｍａｘａｍ） Ａ、、 ａｎｄ ギルバー
ト（Ｇｉｌｂｅｒｔ）Ｗ、 （１９８０） 、Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｉｎｇ ｅｎｄ−ｔａｂｅｌｅｄ ＤＮＡｗｉｔ
ｈ ｂａｓｅ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｌｅａｖａｇｅｓ。
Ｍｅｔｈ、 Ｅｎｚｙｍ、 ６５．４９９−５６０゜ム
ーア（Ｍｏｏｒｅ） Ｒ，Ｎ、、 マーセン（Ｌａｒ
ｓｅｎ） １１．ｓ、 ＋ホロホフ（）Ｉｏｒｏｈｏｖ
） Ｄ、Ｗ、、 ａｎｄルーゼ（Ｒｏｕｓｅ） Ｂ。
ーア（Ｍｏｏｒｅ） Ｒ，Ｎ、、 マーセン（Ｌａｒ
ｓｅｎ） １１．ｓ、 ＋ホロホフ（）Ｉｏｒｏｈｏｖ
） Ｄ、Ｗ、、 ａｎｄルーゼ（Ｒｏｕｓｅ） Ｂ。
Ｔ、 （１９８４） 、 Ｉ！ｎａｏｇｅｎｏｕ
ｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆｍａｃｒｏｐｈａ
ｓｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａＬｉｖｅ ｅｘｐａｎｓｉｏ
ｎ ｂｙ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉＩＩＩｕｌａｔｉｏｎ−
ｆａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ １ｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ。
ｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆｍａｃｒｏｐｈａ
ｓｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａＬｉｖｅ ｅｘｐａｎｓｉｏ
ｎ ｂｙ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉＩＩＩｕｌａｔｉｏｎ−
ｆａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ １ｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ。
ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｂｙ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕ
ｌａｔｉｏｎ−ｆａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ。
ｌａｔｉｏｎ−ｆａｃｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ。
５ｃｉｅｎｃｅ ２２３、１７Ｂ−１８０ネトウイン
（Ｎｅｄｗｉｎ） ｃ、ｌ ネイラー（Ｎａｙｌｏｒ
） Ｓ、。
（Ｎｅｄｗｉｎ） ｃ、ｌ ネイラー（Ｎａｙｌｏｒ
） Ｓ、。
サカグチ（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ） Ａ、、スミス（ＳＩ
Ｉｌｉｔｈ） Ｄ、、ジャレットネトシン（Ｊａｒｒｅ
ｔｔ−Ｎｅｄｓｉｎ） Ｊ、１ ベニ力（Ｐｅｎｎｉ
ｃａ） Ｄ、ｔ グーデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ） Ｄ、、
ａｎｄグルイ （Ｇｒａｙ） Ｐ、 （１９８
５） 、 Ｈｕｍａｎ ｌｙｍ−ｐｈｏｔｏｘｉ
ｎａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏ
ｒ ｇｅｎｅｓ ： ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ。
Ｉｌｉｔｈ） Ｄ、、ジャレットネトシン（Ｊａｒｒｅ
ｔｔ−Ｎｅｄｓｉｎ） Ｊ、１ ベニ力（Ｐｅｎｎｉ
ｃａ） Ｄ、ｔ グーデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ） Ｄ、、
ａｎｄグルイ （Ｇｒａｙ） Ｐ、 （１９８
５） 、 Ｈｕｍａｎ ｌｙｍ−ｐｈｏｔｏｘｉ
ｎａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏ
ｒ ｇｅｎｅｓ ： ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ。
ｈｏｍｏ−１ｏｇｙ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ
Ｉｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎ。
Ｉｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎ。
Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 １３．６３６１−
６３７３゜ナー（Ｎｉｒ）Ｕ、、コエン（Ｃｏｈｅｎ）
Ｂ、ｌチェノ（Ｃｈｅｎ）Ｌ、、 ａｎｄ レベル（
Ｒｅｖｅｌ） Ｍ、 （１９８４） 、 Ａ ｈｕ＋ｎ
ａｎＩＦＮ−β１ ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｅｄ ｏｆ
ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｕｐｓｔｒｅａ
ｍ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＴＡＴＡ ｂｏｘ ｉｓ ｃｏ
ｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏ
ｎａｌｌｙ ｂｙ ｄｓＲＮＡ。
６３７３゜ナー（Ｎｉｒ）Ｕ、、コエン（Ｃｏｈｅｎ）
Ｂ、ｌチェノ（Ｃｈｅｎ）Ｌ、、 ａｎｄ レベル（
Ｒｅｖｅｌ） Ｍ、 （１９８４） 、 Ａ ｈｕ＋ｎ
ａｎＩＦＮ−β１ ｇｅｎｅ ｄｅｌｅｔｅｄ ｏｆ
ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｕｐｓｔｒｅａ
ｍ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＴＡＴＡ ｂｏｘ ｉｓ ｃｏ
ｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏ
ｎａｌｌｙ ｂｙ ｄｓＲＮＡ。
Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 １２．６９７９−
６９９３゜オーツ（Ｏｈｎｏ） Ｓ、、、ａｎｄタニグ
チ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）Ｔ、 （１９８３） 、 Ｔ
ｈｅ ５ ’ −ｆｌａｎｋｉｎｇ ５ｅｑｕｅｎｃｅ
ｏｆ ｈｕｔａａｎ ｒｎＬｅｒｆｅｒｏｎ−βｇｅｎ
ｅ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒ ｖｉｒａｌ
１ｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ
ｏｎ。
６９９３゜オーツ（Ｏｈｎｏ） Ｓ、、、ａｎｄタニグ
チ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）Ｔ、 （１９８３） 、 Ｔ
ｈｅ ５ ’ −ｆｌａｎｋｉｎｇ ５ｅｑｕｅｎｃｅ
ｏｆ ｈｕｔａａｎ ｒｎＬｅｒｆｅｒｏｎ−βｇｅｎ
ｅ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒ ｖｉｒａｌ
１ｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ
ｏｎ。
Ｎｕｃｌ、 Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、 １１．５４０３−
５４１２゜オノザキ（ｏｎｏｚａｋｉ） Ｋ、＋ ウ
ラワ（ｕｒａｗａ） Ｉｌ、 ＋ タマタニ（Ｔａｍａ
ｔａｎｉ） Ｔ、、イワムシ（Ｉｗａｎ＋ｕｒａ） Ｙ
。
５４１２゜オノザキ（ｏｎｏｚａｋｉ） Ｋ、＋ ウ
ラワ（ｕｒａｗａ） Ｉｌ、 ＋ タマタニ（Ｔａｍａ
ｔａｎｉ） Ｔ、、イワムシ（Ｉｗａｎ＋ｕｒａ） Ｙ
。
ハシモト（ｌｌａｓｈｉｍｏｔｏ） Ｔ、 、ババ（Ｂ
ａｂａ） Ｔ、 、スズキ（Ｓｕｚｕｋｉ） Ｈ，＋
ヤマダ（Ｙａｍａｄａ） Ｍ、＋ ヤマモト（Ｙａｍ
ａｍｏＬｏ） Ｓ、 ＋ オッペンヘイム（Ｏｐｐｅ
ｎｈｅｉｍ）Ｊ−Ｊ−＋ ａｎｄマツシマ（Ｍａｔｓｕ
ｓｈｉｍａ）に、（１９８８）。
ａｂａ） Ｔ、 、スズキ（Ｓｕｚｕｋｉ） Ｈ，＋
ヤマダ（Ｙａｍａｄａ） Ｍ、＋ ヤマモト（Ｙａｍ
ａｍｏＬｏ） Ｓ、 ＋ オッペンヘイム（Ｏｐｐｅ
ｎｈｅｉｍ）Ｊ−Ｊ−＋ ａｎｄマツシマ（Ｍａｔｓｕ
ｓｈｉｍａ）に、（１９８８）。
Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ １ｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ
ｏｆ １ｎｔｅｒ−１ｅｕｋｉｎ１、 １ｎｔ
ｅｒｆｅｒｏｎ−β ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒ
ｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒｉｎ ｔｅｒ−ｍｉｎａｌ
ｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ ａ ＩＩｒｏ
ｕｓｅｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌ
１ｉｎｅ（旧）。
ｏｆ １ｎｔｅｒ−１ｅｕｋｉｎ１、 １ｎｔ
ｅｒｆｅｒｏｎ−β ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒ
ｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒｉｎ ｔｅｒ−ｍｉｎａｌ
ｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ ａ ＩＩｒｏ
ｕｓｅｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌ
１ｉｎｅ（旧）。
Ｊ、 Ｉｎｕｗｕｎｏｌ、 １ ４０、１１２−１
１９゜パボ（Ｐａｂｏ） Ｃ，０，、ａｎｄサウア（Ｓ
ａｕｅｒ） Ｒ，Ｔ。
１９゜パボ（Ｐａｂｏ） Ｃ，０，、ａｎｄサウア（Ｓ
ａｕｅｒ） Ｒ，Ｔ。
（１９８４） 、 Ｐｒｏｔｅｉｎ−ＤＮＡ ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔｉｏｎ、 Ａｎｎ。
ｏｇｎｉｔｉｏｎ、 Ａｎｎ。
Ｒｅｖ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ５３．２９３−３２１
゜ラグ（Ｒａｊｉ） Ｎ、Ｂ、に、、 ａｎｄ ピサ（
Ｐｉｔｈａ） Ｐ、Ｍ。
゜ラグ（Ｒａｊｉ） Ｎ、Ｂ、に、、 ａｎｄ ピサ（
Ｐｉｔｈａ） Ｐ、Ｍ。
（１９８１）、 八ｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
１ｎｔｅｒ−ｆｅｒｏｎ ｍＲＮＡ１ｎ ｈｕｍ
ａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ １ｎｄｕ
ｃｅｄ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
。
１ｎｔｅｒ−ｆｅｒｏｎ ｍＲＮＡ１ｎ ｈｕｍ
ａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ １ｎｄｕ
ｃｅｄ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
ｔｌｓ＾ ７８．７４２６−７４３０゜ ラグ（Ｒａｊｉ） Ｎ、Ｉｌ、に、、 ａｎｄ ピサ（
Ｐｉｔｈａ） Ｐ、Ｍ。
ｔｌｓ＾ ７８．７４２６−７４３０゜ ラグ（Ｒａｊｉ） Ｎ、Ｉｌ、に、、 ａｎｄ ピサ（
Ｐｉｔｈａ） Ｐ、Ｍ。
（１９８３） 、 Ｔｗｏ １ｅｖｅｌｓ ｏｆ ｒ
ｅｇｕｌａＬｉｏｎ ｏｒ β−１ｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍ
ａｎ ｃｅｌｌｓ。
ｅｇｕｌａＬｉｏｎ ｏｒ β−１ｎｔｅｒｆｅｒｏ
ｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍ
ａｎ ｃｅｌｌｓ。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａ１１． Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
ＵＳＡ ８０．３９２３−３９２７゜ レスニラスキー（Ｒｅｓｎｉｔｚｋｙ） ｏ、ｌ ヤ
ーデン（Ｙａｒｄｅｎ）＾１．ジボリ（Ｚｉｐｏｒｉ）
ｏ、ｌ ａｎｄキムチ（Ｋｉｍｃｈｉ） 八、
（１９８６）、 Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ β−ｒｅ
ｌａｔｅｄ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｓ
ｃ−粒Ｌｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ ｇｒｏｗｔ
ｈ ａｒｒｅｓｔ ｄｕｒｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉ
ｅＬｉｃ ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ。
ＵＳＡ ８０．３９２３−３９２７゜ レスニラスキー（Ｒｅｓｎｉｔｚｋｙ） ｏ、ｌ ヤ
ーデン（Ｙａｒｄｅｎ）＾１．ジボリ（Ｚｉｐｏｒｉ）
ｏ、ｌ ａｎｄキムチ（Ｋｉｍｃｈｉ） 八、
（１９８６）、 Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ β−ｒｅ
ｌａｔｅｄ １ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌｓ
ｃ−粒Ｌｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ ｇｒｏｗｔ
ｈ ａｒｒｅｓｔ ｄｕｒｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉ
ｅＬｉｃ ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ。
Ｃｅ１ｌ ４６．３１−４０゜
ロゼンタル（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ） Ｎ、、 クレス
（Ｋｒｅｓｓ） Ｍ、。
（Ｋｒｅｓｓ） Ｍ、。
グラス（Ｇｒｕｓｓ） Ｐ、、 ａｎｄコーリー（Ｋｈ
ｏｕｒｙ） Ｇ。
ｏｕｒｙ） Ｇ。
（１９８３） 、 ＢＫ ｖｉｒａｌ ｅｎｈａｎｃｅ
ｒ ｅｌｅａ＋ａｎｔ ａｎｄａ ｈｕｍａｎ ｃｅｌ
ｌｕｌａｒ ｈ′Ｏｍｏｌｏｇ。
ｒ ｅｌｅａ＋ａｎｔ ａｎｄａ ｈｕｍａｎ ｃｅｌ
ｌｕｌａｒ ｈ′Ｏｍｏｌｏｇ。
５ｃｉｅｎｃｅ ２２２．７４９−７５５゜レイルス（
Ｒｙａｌｓ） Ｊ、、 ディークス（Ｄｉｅｋｓ）Ｐ
、。
Ｒｙａｌｓ） Ｊ、、 ディークス（Ｄｉｅｋｓ）Ｐ
、。
ラグ（Ｒａｇｇ） ｕ、ｌ ａｎｄ ワイズマン（Ｗｅ
ｉｓｓｍａｎｎ） Ｃ。
ｉｓｓｍａｎｎ） Ｃ。
（１９８５）、＾４６−ｎｕｃｌｅｏＬｉｄｅ ｐｒｏ
ｏ＋ｏｔｅｒｓ＋４ｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ａｎ ＩＮＦ
−αｇｅｎｅ ｒｅｎｄｅｒｓ ａｎｕｎｒｅｌａｔｅ
ｄ ｐｒｏｍｏｔｅｒ １ｎｄｕｃｉｂｌｅ ｂｙ ｖ
ｉｒｕｓ。
ｏ＋ｏｔｅｒｓ＋４ｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ａｎ ＩＮＦ
−αｇｅｎｅ ｒｅｎｄｅｒｓ ａｎｕｎｒｅｌａｔｅ
ｄ ｐｒｏｍｏｔｅｒ １ｎｄｕｃｉｂｌｅ ｂｙ ｖ
ｉｒｕｓ。
Ｃｅｌ！ ４上、４９７−５０７゜
シａ −（Ｓｈａｗ） Ｇｏ、ａｎｄケイメン（Ｋａｍ
ｅｎ） Ｒ。
ｅｎ） Ｒ。
（１９８６）、＾ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＡＵ ５ｅｑｕ
ｅｎｃｅ ｆｒｏｍｔｈｅ ３ ’ ｕｎｔｒａｎｓ
ｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＧＭ−Ｃ３Ｆ ｍＲ
ＮＡｍｅｄｉａｔｅｓ ５ｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍＲＮＡ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ。
ｅｎｃｅ ｆｒｏｍｔｈｅ ３ ’ ｕｎｔｒａｎｓ
ｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＧＭ−Ｃ３Ｆ ｍＲ
ＮＡｍｅｄｉａｔｅｓ ５ｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍＲＮＡ
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ。
Ｃｅ１ｌ −先」−１６５９−６６７゜サイン（Ｓｉ
ｎｇｈ） Ｉｌ、、 レボウィッ（ＬｅＢｏｗｉｔｚ
） Ｊ。
ｎｇｈ） Ｉｌ、、 レボウィッ（ＬｅＢｏｗｉｔｚ
） Ｊ。
１１１．パルドウイン（Ｂａｌｄｉｖｉｎ） Ｊｒ、八
−Ｓ、＋ ａｎｄ シャープ（Ｓｈａｒｐ） Ｐ、Ａ、
（１９８Ｂ ） 、 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉ
ｎｇ ｏｆ ａｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ ：ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｓ
ｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｌｉｂｒａｒｙ ｗｉｔｈ ａ ｒｅ−ｃｏｇｎＨｉｏ
ｎ ５ｉＬｅ ＤＮＡ。
−Ｓ、＋ ａｎｄ シャープ（Ｓｈａｒｐ） Ｐ、Ａ、
（１９８Ｂ ） 、 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉ
ｎｇ ｏｆ ａｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ ：ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｓ
ｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｌｉｂｒａｒｙ ｗｉｔｈ ａ ｒｅ−ｃｏｇｎＨｉｏ
ｎ ５ｉＬｅ ＤＮＡ。
Ｃｅ１ｌ ５２ ４１５−４２３゜
スギク（Ｓｕｇｉｔａ） Ｋ、’、 ミャザキ（Ｍｉ
ｙａｚａｋｉ） Ｊ、１．ｔアペラ（Ａｐｐｅｌｌａ）
Ｅ、、 ａｎｄオザト（ＯｚａＬｏ）に。
ｙａｚａｋｉ） Ｊ、１．ｔアペラ（Ａｐｐｅｌｌａ）
Ｅ、、 ａｎｄオザト（ＯｚａＬｏ）に。
（１９Ｂ ？ ） 、 Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ １ｎ
ｃｒａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉ−ｂｉｌｉＬｙ
ｃｌａｓｓ １ｇｅｎｅ ｖｉａ ａ５ ’ １ｎｔ
ｅｒｆｅｒｏｎ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃ
ｅ。
ｃｒａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉ−ｂｉｌｉＬｙ
ｃｌａｓｓ １ｇｅｎｅ ｖｉａ ａ５ ’ １ｎｔ
ｅｒｆｅｒｏｎ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃ
ｅ。
Ｍｏ１． Ｃｅ１１． Ｂｉｏｌ、 ７．２６２５−
２６３０、タニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、、
マツイ（Ｍａｔｓｕｉ） Ｉｆ、。
２６３０、タニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、、
マツイ（Ｍａｔｓｕｉ） Ｉｆ、。
フジタ（Ｆｕｊｉｔａ） １’、ｌ タカ才力（Ｔａｋ
ａｏｋａ） ｃ、ｌ カシマ（Ｋａｓｈｉｍａ） Ｎ、
、 ヨシモト（Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ） Ｒ＋１ａｎｄ
ハム口（Ｈａａ＋ｕｒｏ） Ｊ、 （１９８３）、
５ｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ａ ｃｌｏｎｅｄ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｈｕ
ｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２゜ Ｎａｔｕｒｅ ３０２．３０５−３１０゜タニグチ（
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、 （１９８８） 、 ｒ
ｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｇｅｎ
ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ。
ａｏｋａ） ｃ、ｌ カシマ（Ｋａｓｈｉｍａ） Ｎ、
、 ヨシモト（Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ） Ｒ＋１ａｎｄ
ハム口（Ｈａａ＋ｕｒｏ） Ｊ、 （１９８３）、
５ｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ａ ｃｌｏｎｅｄ ｃＤＮＡ ｆｏｒ ｈｕ
ｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２゜ Ｎａｔｕｒｅ ３０２．３０５−３１０゜タニグチ（
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ） Ｔ、 （１９８８） 、 ｒ
ｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｇｅｎ
ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ。
Ａｎｎ、 Ｒｅｖ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、６．４３９
−４６４トーマス（Ｔｈｏｍａｓ） Ｐ、Ｓ、 （１９
８０） 、 Ｈｙｂｒｉｄｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎ
ａｔｕｒｅｄ ＲＮＡ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ＤＮＡ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｔｏ
ｎ１ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ。
−４６４トーマス（Ｔｈｏｍａｓ） Ｐ、Ｓ、 （１９
８０） 、 Ｈｙｂｒｉｄｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｎ
ａｔｕｒｅｄ ＲＮＡ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ＤＮＡ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｔｏ
ｎ１ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ。
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、
ＩＳＡ ７７．５２０１−５２０５、 チワリ （Ｔｉｗａｒｉ） Ｒ，Ｊ、、 クサリ （
Ｋｕｓａｒｉ） Ｊ、。
ＩＳＡ ７７．５２０１−５２０５、 チワリ （Ｔｉｗａｒｉ） Ｒ，Ｊ、、 クサリ （
Ｋｕｓａｒｉ） Ｊ、。
ａｎｄセン（Ｓｅｎ） Ｇ、Ｃ，（１９８７） 、 Ｆ
ｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓ ｏｆ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−＋ｗｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａ
ｌｓｎｅｅｄｅｄ ｆｏｒ １ｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａ ｍＲＮＡ ｃａｎ ｂｅ ｇｅｎｅｒａＬｅｄ
ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ
ａｎｄ ｇｒｏｗｔｔ＋ ｆａｃｔｏｒｓ。
ｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓ ｏｆ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−＋ｗｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａ
ｌｓｎｅｅｄｅｄ ｆｏｒ １ｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａ ｍＲＮＡ ｃａｎ ｂｅ ｇｅｎｅｒａＬｅｄ
ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ
ａｎｄ ｇｒｏｗｔｔ＋ ｆａｃｔｏｒｓ。
ＥＭＢＯＪ、 ６．３３７３−３３７８゜ワレン（Ｗ
ａｒｒｅｎ） Ｍ、に、、 ａｎｄラルフ（Ｒａｌｆ）
Ｐ。
ａｒｒｅｎ） Ｍ、に、、 ａｎｄラルフ（Ｒａｌｆ）
Ｐ。
（１９８６） 、 Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｇｒｏｗ
ｔｈ ｆａｃｔｏｒ ＣＳＦ−１ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ
ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ、 ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｃｏｊ
ｏｎｙｓｔｊｍｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ。
ｔｈ ｆａｃｔｏｒ ＣＳＦ−１ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ
ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｏｆｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ、 ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｃｏｊ
ｏｎｙｓｔｊｍｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ。
Ｊ、 ｌ＋ｙｍｕｎｏ１． １３７．２２８１−２２
８５゜ウェブスター（Ｗｅｂｓ Ｌｅｒ） Ｎ、 、ジ
ン（Ｊｉｎ） Ｊ、Ｒ，、グリーン（Ｇｒｅｅｎ） Ｓ
、、 ポリス（）Ｉｏｌｌｉｓ） Ｍ、ｌ ａｎｄチ
ャンポン（ＣｈａｍｂＯｎ） Ｐ、 （１９８Ｂ ）
、 Ｔｈｅ ｙｅａｓｔＵＡＧｓ ｉｓ ａ ｔ
ｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｅｎｈａｎｃｅｒ
ｉｎ ｈｕｍａｎｔｌｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＧＡ
Ｌ４ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ。
８５゜ウェブスター（Ｗｅｂｓ Ｌｅｒ） Ｎ、 、ジ
ン（Ｊｉｎ） Ｊ、Ｒ，、グリーン（Ｇｒｅｅｎ） Ｓ
、、 ポリス（）Ｉｏｌｌｉｓ） Ｍ、ｌ ａｎｄチ
ャンポン（ＣｈａｍｂＯｎ） Ｐ、 （１９８Ｂ ）
、 Ｔｈｅ ｙｅａｓｔＵＡＧｓ ｉｓ ａ ｔ
ｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｅｎｈａｎｃｅｒ
ｉｎ ｈｕｍａｎｔｌｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＧＡ
Ｌ４ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ。
Ｃｅ１ｌ ５２、１６９−１７８゜ワイズマン（Ｗ
ｅｉｓｓｍ’ａｎｎ） Ｃ，、ａｎｄウェバー（Ｗｅｂ
ｅｒ）Ｉｌ、 （１９８６） 、 Ｔｈｅ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎｅｓ、 Ｐｒｏｃ。
ｅｉｓｓｍ’ａｎｎ） Ｃ，、ａｎｄウェバー（Ｗｅｂ
ｅｒ）Ｉｌ、 （１９８６） 、 Ｔｈｅ １
ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎｅｓ、 Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃ１ｄ Ｒｅｓ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ
、、 ３３．２５１−ヤング（Ｙｏｕｎｇ） Ｒ，八
、、 ａｎｄデービス（Ｄａｖｉｓ）Ｒ，Ｗ、 （
１９８３） 、 Ｙｅａｓｔ ＲＮＡ Ｐｏｌ
ｙｍｅｒｓｅ ＩＩ）Ｈｅｎｅｓ ： ｌ５ｏｌ
ａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｂｅ
ｓ。
、、 ３３．２５１−ヤング（Ｙｏｕｎｇ） Ｒ，八
、、 ａｎｄデービス（Ｄａｖｉｓ）Ｒ，Ｗ、 （
１９８３） 、 Ｙｅａｓｔ ＲＮＡ Ｐｏｌ
ｙｍｅｒｓｅ ＩＩ）Ｈｅｎｅｓ ： ｌ５ｏｌ
ａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｂｅ
ｓ。
５ｃｉｅｎｃｅ ２２２．７７Ｂ−７８２゜シフ （
Ｚｉｎｎ）に１ジマイオ（Ｄｉｍａｉｏ） Ｄ、、 ａ
ｎｄ マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ） Ｔ、 （１
９８３） 。
Ｚｉｎｎ）に１ジマイオ（Ｄｉｍａｉｏ） Ｄ、、 ａ
ｎｄ マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ） Ｔ、 （１
９８３） 。
ＩｄｅｎｔｔｆｉｃａＬｊｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｄｉ
ｓｔｉｎｃＬ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｅｇｉｏｎｓ
ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｏ ｔｈｅ ｈｕｌｌａｎ β
−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇｅｎｅ。
ｓｔｉｎｃＬ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｅｇｉｏｎｓ
ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｏ ｔｈｅ ｈｕｌｌａｎ β
−ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｇｅｎｅ。
Ｃｅ１ｌ ３４．８６５−８７９゜
ズロ（Ｚｕｌｌｏ） Ｊ、Ｎ、、 コチャン（Ｃｏｃ
ｈａｎ） Ｂ、Ｈ，＋ハング（Ｈｕａｎｇ） Ａ、Ｓ、
、 ａｎｄスタイルス（Ｓｔｉｌｅｓ）Ｃ，Ｄ、
（１９８５） 、 Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅ
ｄ ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ
−ｓｔｒａｎｄｅｄ ｒｉｂｏｎｕｃ−１ｅｉｃ ａｃ
ｉｄｓａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｇｅｎｅｓｉｎ
３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ。
ｈａｎ） Ｂ、Ｈ，＋ハング（Ｈｕａｎｇ） Ａ、Ｓ、
、 ａｎｄスタイルス（Ｓｔｉｌｅｓ）Ｃ，Ｄ、
（１９８５） 、 Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅ
ｄ ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ
−ｓｔｒａｎｄｅｄ ｒｉｂｏｎｕｃ−１ｅｉｃ ａｃ
ｉｄｓａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｇｅｎｅｓｉｎ
３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ。
Ｃｅ１ｌ ４３．７９３’−８００゜
第１図は種々の熔原性クローンに由来する核抽出物に関
する競合検定法の結果を示す。 第２図は、ＩＦＮ−βプローブの保護領域決定実験のオ
ートラジオグラムを示している。 第３図は、この組換えタンパク質の、種々のＤＮＡに対
する親和性を試験するため各濃度の競合ＤＮＡの存在下
で競合実験を行った結果を示す。 第４Ａ図はｐＩＲＦ−Ｌの望ましいｃＤＮＡ挿入物の配
列を示している。 第４Ｂ図は、マウスＩ ＲＦ−１の推定されるアミノ酸
配列中の塩基性及び酸性アミノ酸の位置を図的に示した
ものである。 第５図は推定されるマウス及びヒトのＩＲＦ−１の配列
を比較のため並列して示しである。 第６Ａ図は種々の器官及び組織由来の総ＲＮＡを、プロ
ーブとしてマウスｃＤＮＡを用いたプロッティング分析
した結果を示す。 第６Ｂ図は、Ｎ Ｄ Ｖ 誘導したマウスＬ９２９由来
の細胞質ＲＮＡの′、種々のプローブを用いたプロッテ
ィング分析の結果を示す。 第７Ａ図は、ＴＲＦ−１プロモーターを有するクローン
のＰｓｔｌフラグメントの配列分析で決定された配列を
示す。 第７Ｂ図はＣＡＴ遺伝子を含む各プラスミドを有する細
胞をＮＯＶで誘導したときのＣＡＴ活性を示す。 第８図はヒトのＩＲＦ−１遺伝子の構造を示す。 第９図はヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡとコハイプリダイズす
る、イースト及びヒトＤＮＡを示すオートラジオグラフ
を示す。 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ ７ ＦＩＧ、ｌ、Ａ （その１） ＦＩＧ ｌ、Ａ （その２） Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａ！ＩＰ ｘｅｔ Ｇｌｕ Ａｒｇ
Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓ
ｅｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ７２２ ＧＡＣＴＴＧ ＧＡＴ
ＡＴＧ ＧＡＡ ＡＧＧ ＧＡＣＡＴＡ ＡＣＴ
ＣＣＡ ＧＣＡ ＣＴＧ ＴＣＡ ＣＣＧ ＴfＴ ＩＩｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｓｅｔ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ａｉｎ
Ｌｅｕ Ｇｌｎ ｖａｌ @Ｓｅｒ Ｐｒ。 １１１２ ＡＴＡ ＣＣＡ ＧＡＴ ＡＧＣＡ
ＣＣＡＣＴ ＣＨＡＴ ＣＴＧ ＴＡ’ｒ Ａ
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１０３７ （、ＡＡ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＴＴ
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ＣＡＴＴ ＧＧＧ ＡＴ` ＧＧＣＡＴ八 八ツ２ ０ｅ七Ａｓｐ５ｅｒＬｅｕＬｅｕＧｌｙＡｓｎＳａｒｖ
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ＣＸＥＥＰＥｒＤｓＰＧＧＤｒ（：ＬＳＬＱＲＶＦＴＤ
ＬＫＮＭＤＡＴ−ＷＬＤＳＬＬＴＰ−ＶＲＬＰ−５ＩＱ
ＡＩＰＣＡＰ保存アミノ酸はアステリスクで印した。 配列は以下の１文字コードで表しである。 アラニン システィン アスパラギン酸 グルタミン酸 フェニルアラニン グリジン ヒスチジン イソロイシン リジン ロイシン メチオニン アスパラキン プロリン グルタミン アルギニン セリン スレオニン バリン トリプトファン チロシン ＦＩＧ ７Ａ マイナー Ｃａｐ 部位 ＋１ ＋３９ ＣＣＧＡＧＧＴＣＡＧＣＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧ
ＧＡＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＣＧＧＧＣＡＴＣＴＴＴＣ
ＧＣＴＴＣＧＴＧ＋９７ ＋２１３ ＋２２５ ＦＩＧ、７Ｂ ＡＧＴ’ＧＴＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣ
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ＴＦＩＧ ９゜ ヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡとコハイブリダイズするイース
ト中に存在するＤＮＡ配列 手 続 補 正 書 （方式） １、事件の表示 平成１年特許願第２１７１７０号 ２、発明の名称 遺伝子発現調節因子 ３、補正をする者 事件との関係 出 願 人 氏 名 谷 口 維 紹 ４、代 理 人 ５、補正命令の日付 平成１年１１月２８日 ６、補正の対象 代理権を証明する書面 全図面 ７、補正の内容 別紙のとおり
する競合検定法の結果を示す。 第２図は、ＩＦＮ−βプローブの保護領域決定実験のオ
ートラジオグラムを示している。 第３図は、この組換えタンパク質の、種々のＤＮＡに対
する親和性を試験するため各濃度の競合ＤＮＡの存在下
で競合実験を行った結果を示す。 第４Ａ図はｐＩＲＦ−Ｌの望ましいｃＤＮＡ挿入物の配
列を示している。 第４Ｂ図は、マウスＩ ＲＦ−１の推定されるアミノ酸
配列中の塩基性及び酸性アミノ酸の位置を図的に示した
ものである。 第５図は推定されるマウス及びヒトのＩＲＦ−１の配列
を比較のため並列して示しである。 第６Ａ図は種々の器官及び組織由来の総ＲＮＡを、プロ
ーブとしてマウスｃＤＮＡを用いたプロッティング分析
した結果を示す。 第６Ｂ図は、Ｎ Ｄ Ｖ 誘導したマウスＬ９２９由来
の細胞質ＲＮＡの′、種々のプローブを用いたプロッテ
ィング分析の結果を示す。 第７Ａ図は、ＴＲＦ−１プロモーターを有するクローン
のＰｓｔｌフラグメントの配列分析で決定された配列を
示す。 第７Ｂ図はＣＡＴ遺伝子を含む各プラスミドを有する細
胞をＮＯＶで誘導したときのＣＡＴ活性を示す。 第８図はヒトのＩＲＦ−１遺伝子の構造を示す。 第９図はヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡとコハイプリダイズす
る、イースト及びヒトＤＮＡを示すオートラジオグラフ
を示す。 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ ７ ＦＩＧ、ｌ、Ａ （その１） ＦＩＧ ｌ、Ａ （その２） Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａ！ＩＰ ｘｅｔ Ｇｌｕ Ａｒｇ
Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓ
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ＬＫＮＭＤＡＴ−ＷＬＤＳＬＬＴＰ−ＶＲＬＰ−５ＩＱ
ＡＩＰＣＡＰ保存アミノ酸はアステリスクで印した。 配列は以下の１文字コードで表しである。 アラニン システィン アスパラギン酸 グルタミン酸 フェニルアラニン グリジン ヒスチジン イソロイシン リジン ロイシン メチオニン アスパラキン プロリン グルタミン アルギニン セリン スレオニン バリン トリプトファン チロシン ＦＩＧ ７Ａ マイナー Ｃａｐ 部位 ＋１ ＋３９ ＣＣＧＡＧＧＴＣＡＧＣＣＧＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧ
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ＴＦＩＧ ９゜ ヒトＩＲＦ−１ｃＤＮＡとコハイブリダイズするイース
ト中に存在するＤＮＡ配列 手 続 補 正 書 （方式） １、事件の表示 平成１年特許願第２１７１７０号 ２、発明の名称 遺伝子発現調節因子 ３、補正をする者 事件との関係 出 願 人 氏 名 谷 口 維 紹 ４、代 理 人 ５、補正命令の日付 平成１年１１月２８日 ６、補正の対象 代理権を証明する書面 全図面 ７、補正の内容 別紙のとおり
Claims (29)
- （１）インターフェロン調節因子−１（ＩＲＦ−１）の
活性を有するタンパク質をコードする組換えＤＮＡ分子
。 - （２）ヒトＩＲＦ−１又はマウスＩＲＦ−１をコードす
る請求項（１）記載のＤＮＡ分子。 - （３）反復オリゴマー配列ＡＡＧＴＧＡ（Ｃ１配列）及
びヒトＩＦＮ−β遺伝子の上流制御要素に結合するタン
パク質をコードする請求項（１）又は（２）記載のＤＮ
Ａ分子。 - （４）ＩＲＦ−１活性タンパク質をコードするＤＮＡ配
列に機能的に結合するプロモーター領域を含む請求項（
１）乃至（３）のいずれか１項に記載のＤＮＡ分子。 - （５）前記プロモーターが構成的プロモーター又は誘導
可能プロモーターである請求項（４）記載のＤＮＡ配列
。 - （６）組換えＤＮＡ分子であって、一般式：【遺伝子配
列があります】 で表わされる構造遺伝子を特徴とするＤＮＡ分子、又は
その変異体。 - （７）組換ＤＮＡ分子であって、一般式： 【遺伝子配列があります】 で表わされる請求項（６）記載のＤＮＡ分子、又はその
変異体。 - （８）組換えＤＮＡ分子であって、一般式：【遺伝子配
列があります】 で表わされる構造遺伝子を特徴とするＤＮＡ分子、又は
その変異体。 - （９）組換えＤＮＡ分子であって、一般式：【遺伝子配
列があります】 で表わされる請求項（８）記載のＤＮＡ分子、又はその
変異体。 - （１０）組換えＤＮＡ分子であって、一般式：【遺伝子
配列があります】 で表わされる構造遺伝子を特徴とするＤＮＡ分子、又は
その変異体。 - （１１）組換えＤＮＡ分子であって、一般式：【遺伝子
配列があります】 で表わされる請求項（１０）記載のＤＮＡ分子、又はそ
の変異体。 - （１２）請求項（６）乃至（２）のいづれか１項に記載
のＤＮＡ分子にハイブリダイズし、かつＩＲＦ−１活性
を有するタンパク質をコードする組換えＤＮＡ分子。 - （１３）組換えＤＮＡ分子であって、以下の一般式：【
遺伝子配列があります】 で表わされる配列中に含まれているプロモーター及び調
節配列を含む請求項（１）乃至（１２）のいずれか１項
に記載のＤＮＡ分子。 - （１４）請求項（１）乃至（１３）のいずれか１項に記
載のＤＮＡ分子を含み、かつ該ＤＮＡ配列によりコード
されるＩＲＦ−１タンパク質の制御下に目的とする医薬
的活性を有するタンパク質の遺伝子を含む組換えＤＮＡ
分子。 - （１５）ＩＲＦ−１活性分子をコードする遺伝子が構成
的プロモーター又は誘導性プロモーターの制御下にある
請求項（１４）記載の組換えＤＮＡ分子。 - （１６）目的とする医薬的活性を有するタンパク質が多
数のＡＡＧＴＧＡ反復配列を含むＩＲＦ−１結合部位を
含む請求項（１４）又は（１５）記載の組換えＤＮＡ分
子。 - （１７）目的とする医薬的活性を有するタンパク質がサ
イトカイン又はプラスミノーゲン活性化因子である請求
項（１４）乃至（１６）のいずれか１項に記載の組換え
ＤＮＡ分子。 - （１８）請求項（１）乃至（１７）のいずれか１項に記
載の組換えＤＮＡ分子でトランスホームした宿主細胞。 - （１９）ＩＲＦ−１活性を有するタンパク質をコードす
る配列を含む第１のＤＮＡ分子と、該第１のＤＮＡ分子
によりコードされるＩＲＦ−１タンパク質の制御下の、
目的とする医薬的活性を有するタンパク質をコードする
遺伝子を含む別個の第２のＤＮＡ分子によりトランスホ
ームした請求項（１８）記載の宿主細胞。 - （２０）ＩＲＦ−１活性分子をコードする遺伝子が構成
的プロモーター又は誘導性プロモーターの制御下にある
請求項（１９）記載の宿主細胞。 - （２１）目的とする医薬的活性を有するタンパク質の遺
伝子が多数のＡＡＧＴＧＡ反復配列を含む、ＩＲＦ−１
活性タンパク質に対する結合部位を含む請求項（１９）
及び（２０）記載の宿主細胞。 - （２２）細菌細胞又はイースト細胞又はホ乳類細胞であ
る請求項（１８）乃至（２１）のいずれが１項に記載の
形質転換細胞。 - （２３）請求項（１８）乃至（２２）のいずれか１項に
記載の宿主細胞を培養することを含む、目的とする医薬
的活性を有するタンパク質の製造法。 - （２４）宿主細胞にウィルスを感染させる請求項（２３
）記載の方法。 - （２５）請求項（６）、（８）又は（１０）記載の構造
遺伝子で定義される構造を有するタンパク質。 - （２６）プラスミドｐＨＩＲＦ３１。
- （２７）プラスミドＰＩＲＦ−Ｌ。
- （２８）プラスミドｐＩＲＦ２−５。
- （２９）ナイロン膜であるメンブレンフィルターを検討
するファージに接触させ、該フィルターを目的タンパク
質が生成し得る条件下でインキュベートし、さらに目的
タンパク質と結合し得る放射性プローブの存在下でイン
キュベートした後、未結合のプローブを除去するために
該フィルターを洗浄してからオートラジオグラフィーに
よる目的クローンの位置を同定することを含む、目的タ
ンパク質を生産して得るクローンを単離するファージプ
ラークのスクリーニング法。
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Family Applications (2)
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