JPH02167278A - 細胞生長抑制物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は細胞生長抑制に関するもので、更に詳しくは、
インド洋に産するアメフラシ（ｓｅａ　ｈａｒｅ）（ト
ラベラ属　ＤｏＬａｂｅｌ　ｌａ）から得られ、「ドラ
スタチンＩＯＪ　（Ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ　１０）　　
と命名される活性な細胞生長抑制物質、ドラスタチンｌ
Ｏを本質的な活性成分として含有する医薬製剤、及び該
製剤を用いて患者を治療する方法に関するものである。

（従来の技術） 偉人なローマの自然科学者ガイウス・ブリニウス（第２
番めの）は彼の研究途上、西暦６０年ころにトラベラ属
の、最強力なインド洋アメフラシについて最初に記述し
た。しかし本島の現代の医学問題についての活性の検討
は、ごく最近のことである。例えば、Ｐｅｔｉｔのアメ
リカ特許４，４１４，２０５（１９８３年１１月８日、
ドラスタチン１−３）及び４．４８６，４１４　　（１
９８４年１２月４日、ドラスタチンＡ及びＢ）を参照。

ドラスタチン類は、Ｄ、ａｕｒｉｃｕｌａｒｔａの活性
成分に対応すると考えられる。（Ｍ、Ｗａｔｓｏｎの１
９６９年の学位論文、ハワイ大学「ハワイ産アメフラシ
、特にり、ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ及びＡｐｌｙｓｉａ
　ｐｕｌｍｏｎｉｃａの中腸腺毒素の薬理学、化学及び
生物学；ミシガン州アンアーバー、ユニバシチー・マイ
クロフィルム・Ｉｎｃ、参照）。

アメフラシＤ、ａｕｒｔｃｕｌａｒｉａの生物学的性質
は何世紀にもわたり追求されたが、アメリカ国立がん研
究所（ＮＣＩ）のネズミＰ３８８　リンパ球白血病（Ｐ
Ｓ系）に対し有効（１００％以上の寿命増大）は抽出物
を、このアメフラシのインド洋採取品が有していること
をこの研究所が発見したのはやっと１９７２年のことで
あった。次いでこの研究所は、我々がドラスタチン１〜
９と称している９種の新規（かつ独力）な細胞生長阻害
及び／又は抗新生物（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓ　ｔｉｃ
）ペプチドの単離に成功した。

初期においては、ドラスタチンｌは当時知られていたち
の象中では、ＮＣｉ不ズξＢ１６黒色種（メラノーマ）
に対し１１μｇ／ｋｇ投与で３３％の治癒率を示す、最
も活性（最少用量）の抗新生物物質であった。ドラスタ
チンの活性の故に、アメフラシはごく少ｆｆ１（１００
に＋ｒから約１ｍｇ）を必要とするのみで、そのためこ
れらのペプチドの単離と構造解明は、極めて興味的なも
のであった。今回の開示は、ドラスタチン１０と命名さ
れた特異的な線状ペンタペプチドの単離と構造解明に基
づくものである。この新規物質は、今日まで得られたう
ちで最も重要なアメフラシ（Ｄｏｌａｂｅｌｌａ　ａｕ
ｒｉｃｕｌａｒｉａ）抗新生物活性である。実際このド
ラスタチン１０は、現在知られているうちで最も活性（
最小用量）の抗新生物物質であり、ＮＣＩ　ヒト黒色腫
クセノブラフ（ヌード・マウス）に対し３．２６−２６
μｇ／ｋｇで１７−６７％の治癒率を示し、ＢＩ３黒色
腫を用いたとき１．４４−１１、ｌμｇ／ｋｇで４２−
１３８％の延命率を示し、そしてｐｓ白血病（ＥＤ５゜
＝４．６　ＸＸｌ０−５ＩＪ／　　）に対しｌ−４μｇ
／ｋｇで６９−１０２％の延命率を示す。

（発明が解決しようとする課Ｂ） 本発明は、以下に詳述するようにインド洋のアメフラシ
（Ｄｏｌａｂｅｌ　ｌａ）から抽出し、ドラスタチン１
０と命名された新規かつ高度活性な細胞生長印刷物質の
発見に関するものである。本物質及びその合成品や非毒
性の医薬的に許容される誘導体は、アメリカのＮＣＩで
用いらているところの一般に認められているプロトコー
ルに従って測定した時、認められかつ確かめられ得る程
度の抗がん活性を有するところの有用な医薬製剤とする
ことができる。

従って本発明の第一の目的は、１つ又はそれ以上のタイ
プのがんの遅延又は寛解に有用な新規な剤を提供するこ
とである。

本発明の他の目的は、ヒトにおける１つ又はそれ以上の
タイプのがんの治療に容易かつ有用に使用しうるような
形での、海産物からの抗新生物物質の単離のための方法
を提供することにある。

さらに他の目的は、インド洋産アメフラシから得られる
因子（その合成品又は無毒性の医薬として許容される誘
導体）を本質的活性成分として含有する製剤を、抗生物
病の治療のために用いるところの新規な医薬製剤の製造
手段と方法を提供することにある。

（発明の構成） 生物の分類学についてのべる。この口ｏ１ａｂｅｌｌａ
種は、Ｍｏ１ｌｕｓｃａ門のＧａｓ　ｔｒｏｐｏｄａＸ
のＡｐｌｙｓｉｄａ科に分類される。Ｈ，Ｅｎｇｅｌの
ｒＺｏｏｌｏｇｉｓｃｈｅ　Ｍｅｄｅｄｅｅ−１ｉｎｇ
ｅｎＪ　（Ｌｅｉｄｅｎ、２４，１９７−２３９．１９
４５年）にはり。

１ａｂｅｌｌａの多くのカラー図がある。この文献には
また、かっては別種のＤｏｌａｂｅｌｌａと考えられて
おり、後になって同一とされそしてり、ａｕｒｉｃｕｌ
ａｒｉａと固定されたちの＼リストもある。これらの種
はり、ａｇａｓｓｉｚｉ＋　Ｄ、ａｕｄｅｒｓｏｎｉｉ
、＋　Ｄ、ｈａｓｓｅｌｔｉｉ。

Ｄ、ｈｅｍｐｒｉｃｈｉｉ、　Ｄ、ｎｅｉｒａ＋　Ｄ、
ｐｅｒｏｎｉｉ、　Ｄ、ｒｕｍｐｈｉｉ。

Ｄ、ｔｅｒｅｍｉｄｉ、　Ｄ、ｔｏｎｇａｎａ、　Ｄ、
ｔｒｕｎｃａｔａ。

Ｄ、ｖａｒｉｅｇａｔａ及びり、５ｃａｐｕｌａである
。

用いられるＤｏｌａｂｅｌｌａの外観は、色はオリーブ
・グリーンであり、梨の形をしており、平均的長さに１
５−２０ｃｍである。）１．Ｅｎｇｅｌの文献には、全
世界で採集されたＤｏｌａｂｅｌｌａについての詳しい
説明がある。

ドラスタチンの初期の単離に用いたＤｏｌａｂｅｌｌａ
の採集地はインド洋のモーリシャス島の東部（大兄の位
置は南緯２１度、東経５６度）の海岸の水面下４へ・５
フイートのところであった。

Ｄｏｌａｂｅｌｌａの採集の別の場所は、フィリピンの
ネグロス島の近辺（北緯９度、東経１２３度）である。

別々の５カ所の採取地からのｐｏｌａｂｅｌｌａ種から
の抽出物はすべて抗新生物活性をもっていた。

次に、ドラスタチンの単離と精製について述べる。アメ
フラシの標品から種々のドラスタチンを単離し精製する
ためには、いろんな方法、たとえば溶媒抽出、パーティ
ション・クロマト、シリカゲル、クロマト、クレーブ又
はイト・−装置を用いる溶液分布、樹脂吸着、溶媒から
の再結晶などが用いうる。

次に、ドラスタチン１０の単離について述べる。

Ｄ、ａｕｒｉｃｌａｒｉａ　＜’／Ｗ重ｆｆ１１．００
０　ｋｇ、　１９８２年採集）のエタノール−２−プロ
パツール混液抽出Ｔｈ型、一連の溶媒分配操作によって
活性メチレンクロリド部分に濃縮する。ＰＳバイオアッ
セイ指標での勾配溶出法を用いる大量カラムクロマト分
離（セファデックスの立体排除と分配、シリカゲルでの
分配と吸着及び）ＩＰＬＣ）を行い、無色無定形粉（メ
チレンクロリドーメタノールから）として純粋なドラス
タチンｌＯの２８．７■を得る。ＨＲＥｒＭＳ　（Ｍ’
″実測値平均７８４．４８９９　；理論値７８４．４９
２１）によりＣ４□１１４．Ｊ６Ｇ６Ｓ　％融点１０７
−１１２℃（無定形固体）、Ｎｌ＋４０Ｈ）、　Ｕνλ
、、、　（ＣＩ！３０）り　、　２１６（ε２０．１８
０）及び２４２（８３，６０９）ｎｍ　　。

ドラスタチン１０を酸性（６ＮＩＩ（１，１１０℃、２
４時間、４８時間及び７０時間）又は塩基性（Ｂａ　（
Ｏｆｆ）　ｚ水溶液、１２０℃、２０時間）ではげしく
加水分解し、次いで、生成物をアミノ酸分析するとバリ
ンとフェニルアラニンの存在を示す。後者の観察は初期
のＮＭＲスペクトルデータとは完全な一致をせず、ドラ
フェニンとよばれる新しいマスクされたρｈｅの構造が
推論される迄は論議の種であった。そのうちに、ドラス
タチン１０は単純なアセチル化や鹸化には抵抗を示すこ
とがわかり、２これは環状ペプチド（但しデプシペブチ
ド構造を欠く）を示唆する。

線状のペンタペプチド構造のはっきりした証拠は、部分
的加水分解（上述の酸性及び塩基性条件に加えて、ｔｒ
ｉの濃１１ｃｌとプロピオン酸による１６０℃、１５分
間の加水分解を行う）及びその生成物の、２つのメトキ
シ基の脱［（Ｏｉｌ及びＤａｐからの）及び水の付加（
Ｄａｐへの）によるＤｏｖ−Ｖａｌ、ＤｉｌＤａｐ及び
Ｄｏｅ単位マイナスＣｇｌｌｅＯに対応するところのＮ
−１−リフルオロアセチル・ブチルエステルへの変換に
依り得られた。詳細なガスクロマド分離及び引きつづい
てのＨＲＥＩｆｆｆｆｉスペクトル（ＺＡ［１−２Ｆ、
　　クラトスＭＳ　−８０及び門Ｓ　−５０）により、
Ｃ端末単位Ｄｏｅはブチルエステルを欠き、またＮ端末
セグメント（ｎｏｖ−Ｖａｌ）はトリフルオロアセチル
基を欠くことがわかった。そこで更に高分解能の’［及
びＨ−とＣ−ＮＭＲ（４００ＭＩｌｚ、　’Ｈ−’Ｈ−
ＣＯ５Ｙ（Ｂａｘほか；Ｊ、Ｍａｇｎ、Ｒｅ５ｏｎ、　
１９Ｂ１．４４．５４２参照）、２Ｄ−Ｊ分解（八ｕｅ
ほか：　Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｐｈｙｓ、１９７６、６４．４
２２６参照）及び’Ｈ−”　Ｃ−２０シフト関連法（Ｂ
ｏｄｅｎｈａｕｓｅｎほか：Ｊ、Ｍａｇｎ、Ｒｅ５ｏｎ
、　１９７７、２８．４７１及びＢａｘほか：Ｊ。

Ｍａｇｎ、Ｒｅ５ｏｎ、　１９８０．４０．２１３参照
）使用〕スペクトル研究（下記の質量スペクトルフラグ
メンテーション参照）が既に分析され、これまで未知の
４つのアミノ酸配列についての構造が確認され、そして
正確な配列のみが未解決として残された。

ドラスタチン１０の配列は、５Ｐ−５ＩＮＳイオン（及
び脱カルボニルによるフラグメント；第２表参照）の単
分子及び衝突活性（誘導）分解（ＣＡＤ又は？！Ｓ／Ｍ
Ｓ又はタンデム’ｌｆｆ１分光）によるＳＰ−５ｌＭＳ
測定を基にして、はっきりと定められた。ｍ／ｚ　２２
７の３１３１ＭＳイオンは、インモニウムイオン（Ｃ）
１３ｈＮ　＝Ｃ１ｌ　（Ｃ）ｌ（ＣＨ３）ｚ）の良好な
安定性を示すほとんど唯一のＣＡＤフラグメントとして
ｍ／ｚ　１００を与える。

これら２つの最終配列、即ちＤｏｖ−シａｌ−Ｄａρ−
ＤｉｌＤｏｅ又はＤｏｖ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｄ
ｏｅのうち後者が、完全なペプチドを用いてのＩＩＲＥ
ＩＭｓ　（後記の質量スペクトルフラグメンテーション
参照）実験によるＣＡＤによって、正確であることがわ
かった。ドラスタチン１０の最終的な構造６１１ｙｔ＝
は第１表にまとめたｌ＋−（’Ｉり−ＮＯＥ示差ＮＭＲ
実験によって得られた。

ドラスタチン１０のアミノ酸配列はこれによる決定され
た。３種の溶媒（ｃｉ、ｏｂ、　ＣＤ２ＣＩ　Ｚ及びＣ
Ｄ３０Ｄ）中での２０−ＮＭＲＣ０５Ｙ技法を用いての
ＣＤ２ＣＡ　を中の゛ＯＥ試験は、ＤｉｌはＬｅｕｆｉ
ｉ体よりむしろＩｌｅであることを認識させた。加えう
るに、Ｌ　−Ｄｃｖ−ＯＭｅ及びラセミ体のＤｏｅ、　
ｌｌＢｒが合成され、対応する１Ｈ−及び”　Ｃ−ＮＭ
Ｒデータは、ドラスタチン１０のそれらの対応部分にア
サインされた化学シフトにうまく合うことがわかった。

興味あることにはＤｉｌ単位は、海産被嚢亜門の抗新生
物成分ジデムニン（ｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ａ　＝Ｃ（３Ｒ
＋４Ｓ）及び低級植物酸プロテアーゼ阻害例（例えば、
レニンやペプシンの）ペプスタチン（ｐｅｐｓ　ｔａ　
ｔ　１ｎ）（３Ｓ、４５）中に見出されるＬｅｕタイプ
のアミノ酸スタチン（ｓｔａｔｉｎｅ）　（３−ヒドロ
キシ−４−アミノ−６メチルへブタン酸）に関連する０
−メチルオキシ１ｉｅ−クラスのものである。２−メチ
ルＡｌａ−同族体は抗がん抗生物質プレオマイシン（３
Ｓ、４Ｒ）中に出現する。抗がん剤のドラッグデザイン
中の、そのようなアミノ酸誘導アルドール縮合物の重要
性は、次の構造式に対応するドラスタチン１０の今回の
発見により大いに増大した。

第１表 ジクロロメタン−ｄｚ　溶液中のドラスタチン１０の１
３０−及びＩ　Ｉ＋−１１１ＭＩ＋化学シフト（ｐｐｍ
） ｂ１ ６ｂ２．６ｂ６ 制、６ｈ５ ｔｙ１ １３Ｃ（ｍｕｌｔ） １７０．５Ｈａ） １４２．７７（ｄ） １１８．７６（ｄ） 詔、　０２　（ｄ） ４１．４８（ｔ） １ニア７．７４（ａ） １２８．７４（ｄ）　Ｘ２ １２９．８０（ｄ）　ｘ２ １２７．０２（ｄ） ’）ｌ（ｍｕｌｔ；Ｊ、Ｈｚ、Ｉｎｋｇｒａｔｉｏｎ）
ＯＥ ７．７１７（ｄ；　３．３；　１ｉｔ）７．２５４（ｄ
；　３．３；　ｉｌ＋）５．５１６（ｄｄｄ；　５．７
，７．２＋９．３；　１）Ｄ３．３３９（ｄｄ；　５．
７．１４；　１ｌｌ）３．２５６（ｄｄ、　５．７．１
４；　ＩＨ）７．２４３（ｄ；　７．９；　２Ｈ） ７．２１４（ｄｄ；　７．９．９．２；　２＋１）７．
１９４（ｔ；　９．２；　１１０ 次の第１表と第２表は、上にふれたところの質量スペク
トルフラグメンテーション及びナンバリングのシステム
を示ス。

侃、７９（ｄ） １４．４９（ｑ） 舵、Ｑ５（ｄ） の、８９０ 犯、８６（ｄ） ５．００（ｔ） ５．４５（ｔ） 侶、Ｑ３（ｔ） ２．２８２（ｑｕｉｎｔｅｔ；　７．２；　ＩＩＩ）　
　　　　７１．０８５＜ｄ；　７．１；　３）１）３．
８４５（ｄｄ；　２．０，８．２：　ＩＨ）３．３０９
（ａ；　３１０ ３．１Ｅ（ｍ；　１の １．８０４（ｄ山；　５．５，７．０；　１９ｉ　ｌ１
１）１．６０８（出出７．９．２；　１９；　ｉｌ＋）
１．４４６（ｄＭ、　４．７，７．１９；叩１．７１５
（ｄｄｄ、　４．７，７．８，１２．７；　１１０３．
４０１（ｄｄ；　７．８，１０；　１Ｎ）３、χ紛（ト
）；ＩＨ）ゝ １７４、０１　（ａ） あＪｌ（ｔ） ７８．８６（ｄ） 認、＋６（ｑ） 実、１１（ｄ） お、６２（ｄ） 加、２５（ｔ） ２．３！１４（ＡＢｑ；　９．（ｂ　２８）４．１２２
（ｂｒｏａｄ　ｔ；　８．７；　ＩＩＩ）３．３１３（
ａ；　３Ｎ） ３．２６−３．３９（１１０ｃ １．６８０（１１（ｐ １．３７０（ｂｒｏａｄ　ＩＩｌ：　１８）１、ｏｏｏ
（ｂｒｏａｄ　ｍ；　１ｔｌ）ｂｏ、８２３（ｔ；　７
．４．３ｏ） １．０Ｑ３（ｄ；　６．８；　３Ｈ） ３．０１２（ａ；　３１１） １０．９２（ｑ） １９．８２（ｑ） 加、０９（ｑ） １７１．３９（ａ） 繁、２０（ｄ）　　　　４．７６Ｈｄｄ：　６．５．８
．８；　ＩＩＩ）３］、４２（ｄ）　　　　１．９８３
（ｓｅｘｔｅｔ；　６．７；　ｌ１ｌ）１８．１８（ｑ
）　　　　０．９４Ｈｄ；　６．８ｉ　３＋１）１６．
０９（ｑ）　　　　０．９７Ｔ（ｄ；　６．８；　３ｔ
０６．８６１（ｄ；　８．９；　１）１）１７２、４４
　（ａ） ７６．７７（ｄ）　　　　２．４５４（ｄ、　６．９；
　１１０４９．９２（ｑ）　Ｘ２　２．２６２（ｓ；　
６１１）２８．０８（ｄ）　　　　２．７０３（ｓｅｘ
ＬｅＬ；　６．１：　ＩＩＩ）加、２４（ψ　　　０．
９６４（ｄｉ　６．８．３）１）１８．１８（ｑ）　　
　　０．９０２（ｄ；　６．８；　３１１）ａ）内部参
照として９１ＳＩＩＤｅ　ｌ　！　（５，３２９ｐｍ）
ｂ）オーバーランプしたシグナル ｃ）ＮＯＥデータからアサインしたシグナルな １８、１８ａｂ、２０．１９ ５ｂｃ 第２表 ドラスタチン１０のＳ　Ｐ　−５ｌＭ’　Ｉフラグメン
テーションからの幾つかの高次マスの衝突誘導会合 ３′７４ Ｚｆｆ十甜 ｚｔ＋２Ｈ １（Ｘｉ （Ｚｚ／’ｂａ） まぁ ｌ５４ （ｚｚ／ｅｚ＋ＩＯ−ＣＴｏＯＨ Δ巧 ｚ４＋２１１ （ｚｚ／ｅｚ＋Ｈ）　−ＣＩ＋３０Ｈ ０□／ｅａ）Ｊ （ｚＪｅ４）＋１ｌ−ＣＩＩｚＯｉ１ Ｚ＊＋２ｔ１ （ｚｚ／ｅ４）　＋１１ ３Ｂ （ｚｊ／ｅＪ　＋Ｈ−（ＪｈＯＨ 列 ｅ＋−０１ｔＯ１１ ｄｔ−ＣＨｉＯＨ （ｙＪｅ：＋）−１ ２迫 ａ）丁１みツ買量スペクトル・フラグメンテ−シラン参
照ｂ）　８つの最強力な子イオンを存在率の少くなる順
に記載ｃ）最も多く存在するｄｚ　１８８イオンｔＦコ
■ノ’ｚ　１８６（ｚＪｅ＋＋Ｈ）をマスクするようで
ある力匁その娘イオンＬｔａ／ｚ　１５４（に出現する
。

本発明の理解をさらに助けるため、更にくわしい実験法
を以下に示す。

一般法。クロマト処理に用いる溶媒は再蒸溜したもので
ある。ゲル濾過及び分配クロマトに用いるセファデツク
スＬＨ−２０（２５−１００ｕ）はスウェーデン、ウプ
サラのファルマシア、ファイン、ケミカルＡＢから入手
した。ギルマンＨＭ　ＵＶ−可視ホロクローム検出器に
接続するギルマンＦＣ−２００レース・トランクとＦＣ
−８０マイクロ精留塔を、クロマト精留実験に使用した
。シリカゲルのカラムクロマト処理は、Ｅ、メルク（ダ
ルムシュタソト）の供給する７０２３０メソシユ又はシ
リカゲル６０の予めパックされたカラムを用いた。パー
ティシルＭ　９　１０１５０００５２（Ｃ−１８逆相）
カラム（内径９．４關Ｘ　５００關）を１１ＰＬＣに使
用し、ニューシャーシー州りリフトンのワットマン社か
ら入手した。分取棚板もまたワットマン社から入手し、
シリカゲルＧＦユニプレート（ＴＬＣ用）はプラウエア
州ニューアークのアナルテック社から入手した。ＴＬＣ
のプレートは、アニスアルデヒド−酢酸−硫酸スプレー
（約１５０℃に１０分加熱〉又は硫酸セリウム−硫酸（
約１０分加熱）で展開し紫外線で観察した。

アミノ酸分析はベックマンのモデル１２１ユニツトで行
なった。紫外線スペクトルは、Ｉ（Ｐ　７２２５プロツ
ターを備えたヒューレントーバッカード８４５０Ａ　Ｕ
Ｖ／ＶＩＳ分光光度計に記録した。赤外スペクトルはニ
ュレソｌ−ＭＸ−Ｉ　ＦＴ器で記録した。高分解能ＳＰ
−５ＩＭＳ質量スヘクトルはＶ、Ｇ、分析用ＭＭ　２Ａ
Ｂ−２Ｆ及びクラトスＭＳ−５０トリプル・アナライザ
ーｔｆｆ１分光計によって得られた。高分解能電子衝撃
質量スベクｌ−ル（ｍ／Δｍ　〜１０，０００）は、Ｃ
ＡＤスペクトルと共にクラトス耶−８０及びＭＳ−５０
器に記録した。

適当な誘導体のガスクロマド−質量スペクトル（ＧＣ−
ＭＳ）　は、Ｊ＆Ｗの溶融シリカＤＢ−５（０，２４３
ｍｍ　Ｘ３０ｍ）カラムで行なった。引きつづ＜　ＧＣ
−ＭＳ処理は、化学イオン化（ｍ／Δｍ　ｔ、ｏｏｏ、
試薬ＮＨｘ）、低分解能（ｍ／Δｍ　１，０００）及び
高分解能（ｍ／Δｍ　３．０００）電子衝撃法を用いた
。ＮＭＲ実験（ブルーカー５−＋ａ亀ＩＨＩ３（：の二
重の切替可能プローブヘッドを用い、種々の溶媒中での
）は、’Ｈ−及び”　Ｃ−ＮＭＲについてそれぞれ４０
０．１３及び１００．６２Ｍ１ｌｚで作動するＡＳＰＥ
ＣＴ３０００コンピューター及びパルス・プログラマ−
のあるブルーカーＡＭ−４００ナロウ・ボア分光計を用
いて行なった。

動物の採集、抽出及び予備実験。西インド洋産のアメフ
ラシ（口、ａｕｒｉｃｌａｒｉａ）は始め１９７２年１
０月に採集した。１９７５年３月までに、ＮＣＩ　Ｐ３
８８リンパ球白血病ＣＰＳ系）に対し、エタノール抽出
物が確かな活性をもつことがわかり、６００■／蹟では
２３５の１７６■／　ｋｇでは１６７のＴ／Ｃを示した
。これ以降に再採集したアメフラシの同様な抽出物も同
等の結果を示した。こ覧に報告する実験は、エタノール
で保存した１９８２年の再採集品（同じ場所での）につ
いで行った。動物（〜１００１００Ｏとエタノール保存
品との総量は７００ガロンであった。

抽出と溶媒分配により、大量分取１１ＰＬｃのためのメ
チレンクロリド濃縮物２．７５ｋｇを得た。一連の２つ
のカラム（６’Ｘ１０’）をシリカゲルでパ・ツタした
（ダビシル６３３　、２００−４００メツシユ、７：３
のヘキサン−酢酸エチル中にスラリーバック）。

濃緑黒色の濃縮物２．７５ｋｇを酢酸エチル２ガロンに
とかし、カラムへポンプで入れ、６０〜７２す・ノトル
／時の速度で次の溶媒を用いてクロマトを行った。

ドラスタヂン１０の単離。分取）ＩＰＬＣフラクション
のうち２つのものがＰ３８８系中で顕著な活性を示した
。すなわちフラクションＡ　（１３２，Ｏｇ　ＰＳ　Ｔ
／Ｃ毒注−１６５（３０で’）−７，５ｍｇ／ｋｇ、　
ＥＤ、。＜１Ｏ−２）及びフラクションＢ（７２゜Ｑｇ
　ＰＳ　Ｔ／Ｃ毒性−１４１（３５で）−＝８．７　ｍ
ｇ／ｋｇ、　ＩＥＤｓｏ＜１０−”）　、フラクション
を合併し乾燥すると１９０．４ｇとなる。その一部（３
８ｇ）を下記のシリース１、分離チャート第１部及び第
２部に示すように処理する。

Ｗｔω ε０５゜ Ｔ／Ｃ（ｍｇ） 分前チャート（第１部） フラクションＡ（３８ω ↑／Ｃ（ｍｇ）、ｔｏｘｉｃ　−１６，５（３０−７，
５）？、９　　　　４．１ ３．４　Ｘ１０−’　　２．３　Ｘ１０−’ｔｏｘｉｃ
　　　　　ｔｏｘｉｃ ｍ□□→３．６）　　（２２−２，７）３．９　　１．
７　　　５．９　　０．６１．５　　０．２５　　１．
１　　２．４ｔ＋ｔ（ｇ）０．３９５ 印、。　　１．９　Ｘｌ０−’ Ｔ／Ｃ侃紗　いｘｉｃ （１３−３，２） ０．７７１ １．９　Ｘｌ０−” ｔｏｘｉｃ （１１−２，７） １．４４ １．９　Ｘｌ０−” ｔｏｘｉｃ−１４０ （１１→２，７） ｏ、ｓｅ。

関 ｔｏｘｉｃ （１７−２，１） ？、２Ｘ１０−’ 分離チャート（第４部） 合併フラクションｊ及びｋ （１，２７ｇ） ２．９　Ｘｌ０−’ ９１．６ｍｇ ＥＤ、ｏｌ、４　ｘｌＱ−４ ５，９Ｘｌ０−２ 実験の典型的なシリーズは次のようである。フラクショ
ンＡ＋８３８ｇを、メチレンクロリド−メタノール（１
：　１）中でセファデツクスＬＨ−２０（１０ｘ１２０
　ｃｍ）のカラムクロマトする。同様のフラクションの
合併は上述の分離チャート（第ｉ部）に概説したフラク
ションＣ−Ｊを与える。生体内活性を示すフラクション
ＤとＥを合し、シリカゲル・カラムクロマトを用いての
分離のために等しい２つの部分（各々６．０）に分ける
。Ｉ−１シリースを、９９０：１０：０．１から１００
：１００：　１の勾配の酢酸エチル−エタノール−水に
よる乾燥カラムクロマトにより更に分離して、活性フラ
クションＫ、Ｌ及びＭとする。平行したＩ−２シリース
はまた９９：１から１：１の勾配のメチレンクロリド−
メタノールを用いた乾燥カラムクロマトで分離して活性
フラクションＮとする。Ｋ、Ｌ、Ｍの合併フラクション
（２，６８）を、乾燥カラム・シリカゲル・クロマト及
び９９：ｌから１：１勾配のメチレンクロリド−メタノ
ールで分離して、分離チャート（第２部）に詳記した活
性フラクションＯ−３（１，１５ｇ）とする。次いで、
０〜Ｓの合併フラクションを、９９：ｌから４：】勾配
のメチレンクロリド−メタノールを用いるシリカゲルカ
ラムで分離して１５５．８■の活性物をうる。後者のフ
ラクションを９９：１から１：１の酢酸エチル−メタノ
ールで、シリカゲル（湿った）のカラムで更に分離して
活性フラクション■及びＷを得る。ＶとＷの合併物（７
，４■）を次の３工程で最終的に分離する。

即ち、９：ｌ：０．８のメチレンクロリド−メタノール
−水による分取ＴＬＣ、次イテ、９：１：０，１酢酸エ
チル−メタノール−水により再度行い、次いで、セファ
デックスＬｌ＋−２０と５：５：１のヘキサン−メチレ
ンクロリド溶媒を用いた分配クロマトを行う。このよう
にしてシリーズｒ−ｔにより５．０■のドラスタチン１
０を得る。フラクションＮ（０，５８ｇ）を得るシリー
ズ！−２による分離を行うには４：５：１のヘキサン−
メチレンクロリド−メタノールによるＬ）ｌ−２０セフ
アデツクスの分配クロマトを必要とした。活性フラクシ
ョンＴとＵを合しく０．１９ｇ）　、９９　：　１から
１＝１の勾配のメチレンクロリド−メタノールを用いて
、シリカゲル（溶媒で湿らセたもの）のカラムで再に精
製する。

得た活性フラクション（１８，１■）を、１：ｌから９
；１の勾配のメタノール−水で、ＩＩＰＬｃ　（００Ｓ
−２カラム）を用い最終的精製を行う。シリーズＩ−２
によって続ドラスタチン１０を３．８■得た。

フラクションＡ　十Ｂ　（１５２ｇ）の大量を、上述の
分離チャート第３部シリーズ■に示すように、５つのメ
チレンクロリド−メタノール（１：　１）中でセファデ
ックスＬ１１−２０のカラム（１０Ｘ１２０　ｃｍ）で
クロマトを行う。活性フラクションを合し、段階的勾配
変化をするメチレンクロリド−メタノール（４９：　１
　、２３：２．９：１．２２：３．１７：３．４：ｌ　
、１：１及び最後は１００％メタノール）とシリカゲル
カラム（４，５Ｘ８０ｃｍ、　１．２　ｋｇ）を用いて
更に分離して、活性フラクションｂ　（６，８７ｇ）を
うる。これを９９：１から１＝１勾配のメチレンクロリ
ド−メタノールを用いてのシリカゲル（乾燥）上で再び
クロマトし、得た活性フラクションｄ　−ｉ　（４，６
ｇ）を合し、９９：１から１：１勾配の酢酸エチル−メ
タノールを用いてのシリカゲル（乾燥カラム）クロマト
により、活性フラクションｊとｋ　（１，２７ｇ）両フ
ラクション（ｊとｋを合併）をヘキサン−メチレンクロ
リド−メタノール（５：５：ｌ）を用いてのセファデッ
クスＬＨ−２０上でクロマトし、活性フラクションｍを
得、次いで、これを９９：ｌから（；ｌの勾配のメチレ
ンクロリド−メタノールでのシリカゲル（サイズＢ、メ
ルク社の既パック品）で分離して、分離チャート、シリ
ース■、第２部に示すような活性フラクションｐ　（３
９，２■）とｑ（４４■）をうる。

こ＼で、フラクションｐとｑは平行して別々に、分取Ｔ
ＬＣ（酢Ｊ　エチル７　タ／　　／Ｌ、−水Ｃ９０：　
１０：１〕移動相）により−、そして次いでヘキサン−
メチレンクロリド−メタノールｃ　５：５：１）　　ヘ
キサン−酢酸エチル−メタノール（５：５：１）及び最
後にヘキサン−トルエン−メタノール（５：５：１）　
ヲ次々に用いてのセファデックスＬＨ−２０分配ステッ
プに付し精製する。フラクションｐ及びｑは、純ドラス
タチンＩＯをそれぞれ８．６　Ｎ及び１１　、３　＋ｎ
ｇ与える。総収−１２８，７■、メチレンクロリド−メ
タノールから無品系（無色）粉末（ｍｐ　１０７−１１
２　’　）。

ＴＬＣ（第３表、紫外線又はヨード上記で良く観察でき
る。

〔α）　　　−６８，０（Ｃ＝０．０１、ＣＩＩ＋ＯＨ
）　：　１１ν（Ｃ１１３０）１）！　、、、　２０９
（ε　８，１００）　、２１６（ε２０．１８０）及び
２４２（６３，６０９）ｎｎ＋　　；　ＩＲ（ＫＢｒ）
　　γ、、、２９７５，２９４０゜２８９０．２８７０
，１６８０，１６５０．１５４０，１４６０，１３９０
゜１１００、７５０及び７００　ｃｍ−’、’ＩＩ−及
び”Ｃ−ＮＭＲ（第２表を見よ）；及びＩＩＲＥＩｎｓ
　（第１表及び第３表）　ｍ／ｚ　７８４．４８９０（
ＣｎＪ６ａＮ６０ｂＳ　７８４，４９２２として計算）
：ＥＳＣＡ　（硫汝について）（１）。ドラスタチン１
０の薄層クロマトの性質を第３表に示す。またドラスタ
ナン１０の顕著な抗がん活性を第４表に要約する。

基 第３表 ドラスタチン１０の８Ｍクロマトの性質質 溶媒系 Ｒｆ値 シリカゲル Ｐ−８ Ｐ−１８ ＣＨ２Ｃ！　２−ＣＴｏＯＨ−ＨｚＯ（９０：　ＬＱ：
０．８）ＣＨｚ（Ｊ　ｔ−ＣＨ：＋０１１−ＨｚＯ−Ｎ
）１４０１１（９０：１０：０．８：０．２）ＥｔＯＡ
Ｃ−ＣＨ３０Ｈ−８２０（９０：１０：０．１）ＥｔＯ
Ａｃ−ＣＴｏＯＨ−ＨｚＯ−ＮｔＬＯＩ（（９０：１０
：１．０：０．２）ＣＨｆｆＣＮ−）１２０　　　　　
　　　　（３：１）Ｃ１１３０１１−）＋２０　　　　
　　　　　（３：１）ＣＨＩＣＮ−ＨｚＱ　　　　　　
　　　（３：１）Ｃ１１３０１（−１−１２０（３：１
）０．３８ ０．４３ ０．３１ ０．３７ ０．４２ ０．１９ ０．２７ ０．１２ 第 表 リンパ球白血病 （１３，５） （２〉 黒色腫 （６，６７） （４，０） （３，４） （１，４４） ｏｘｉｃ ｏｘｉｃ リンフ１求白証す丙 （６，５） （３，２５） （１，６３） 卵巣肉腫 （６，５） （３，２５） ３０１　　及び３３．３％治癒　（１３）２０６　　及
び１６．６％ン台癒　　（６，５）１７０　　　　　　
　　　　　　（３，２５）（６，２５） Ｔ／Ｃ＝テスト／コントロール（何れも腫瘍を有するも
ので、生存時間であられす） Ｔ／Ｃ−１ｏｏ　＝％延命率 ドラスタチン１０の加水分解。

ドラスタチンｌＯのサンプル少量を第４表に示す条件で
加水分解して、バリンとフェニルアラニンの存在を確認
した。

ドラスタチン１０のアセチル化や酸化の試み。

ドラスタチンＩＯの０．１■を、０．ＩＮの苛性ソーダ
０．１からつくった溶液で室温で６時間処理し、得た液
を酸性とし、窒素気流中で溶媒を除き、残渣をＴＬＣで
分析したところドラスタチン１０に対応するＲｆの単一
成分を示した。

ドラスタチン１０の０．１■を０．０７■の無水酢酸及
びＯ，ｍＬのピリジンで室温で２４時間処理し、窒素気
流中で溶媒を除き、残渣をＴＬＣで分析したところ単一
成分を認めそのＲｆはドラスタチン１０と一敗した。

ドラスタチン１０、その合成品及びその薬理的に活性で
生理的に許容しうる誘導体は、例えば、急性骨髄白血病
、急性リンパ球白血病、慢性黒色腫、肺の線癌、神経芽
腫、肺の小細胞癌、胸部癌、結腸癌、卵巣癌、ぼうこう
癌などの新生物疾患にか＼っでいる動物やヒトの治療に
有用である。

投与量は新生物病の内容や、年令・健康状態・体重など
の患者の状態、もし行っておれば併用している治療法、
治療の頻度や速度などにより決まる。

例示すれば、静脈注射では０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ
、筋肉注射では１から約５０ｍｇ／ｋｇ　、経口では５
から約１００　ｑ／ｋｇ　、経鼻吸入では５から約１０
０　ｍｇ／ｋｇ、そしてエアゾルでは５から約１００ｍ
ｇ／ｋｇが活性成分の投与レベルである。

濃度で表現すると、経皮膚、経鼻、経咽頭、経気管支、
経膣、経直腸、経眼などに用いる本発明活性成分組成物
は、約０．０１−５０％−／ｗ、好ましくは、約１−２
０％−／−の成分を含有し、また非経口投与の場合は、
約０．０５−５０％−／榊、好ましくは、約５−２０％
−／−の成分を含有する。

本発明の組成物は、人間や動物に対し、活性戊分を適量
含有するところの単位用量形態（例えば、錠剤、カプセ
ル、ピル、散剤、諜粒、坐剤、無菌の非径口用溶液又は
懸濁剤、無菌の経口用溶液または懸濁剤など）でこのま
しくに投与される。

経口投与のためには固形又は液状の単位用量形態が用い
られる。

散剤は、活性成分を適当な細かいサイズにし、これを同
様に処理した希釈剤と混合することにより極めて簡単に
製造される。希釈剤は乳糖やデンプンのような可食性の
炭水化物であって良い。有利には、賦香油と同じく甘味
剤や砂糖が用いられる。

カプセル剤は、上述の方法で得た粉末混合物をゼラチン
のさやに充填して製造される。有利には、充填作業を助
けるためにタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステア
リン酸カルシウム等の潤滑剤を充填前に粉末混合物に添
加する。

ソフトゼラチンカプセル剤は、活性成分のスラリーを、
使用可能な植物油、軽質液状ペトロラタムや他の不活性
の油やトリグリセリドと共に機械的にカプセル充填して
作られる。

錠剤には粉状混合物をつくり、課粒化又はスラグ化し、
滑剤を加え圧縮して錠剤とする。粉状混合物は、好まし
くは粉末とした活性成分を、デンプン、ラクトース、カ
オリン、燐酸シカルシウムの如き希釈剤と混合して作ら
れる。該粉状混合物は、コーンシロップ、ゼラチン液、
メチルセルロース？夜又はアラビアゴムン夜で’ＩＮら
せたのち、ふるいを強制通過させて課粒とする、課粒に
する代りに、該粉状混合物をスラグ化する、すなわち錠
剤機を通過させ、こ＼に得た不完全形態の錠剤を小片す
なわちスラグに砕く。このスラグはステアリン酸、ステ
アリン酸塩、タルクや鉱物油の如きものを添加して、錠
剤整形具にくっつかぬように潤滑化する。・潤滑化され
た混合物は、次いで圧縮して錠剤とする。

有利には、錠剤は、シェラツクの密閉又はｎ’Ａ　溶コ
ーティング、砂糖とメチルセルロースの被覆及びカルナ
ウバロウの磨き用被覆から成る保護被覆を施される。

経口投与のための液状単位用量形態たとえばシロップ、
エリキシル、懸濁液は、その茶さし一杯が、投与される
べき活性成分の一定量を含有するようにして製造される
。水溶性のものは砂糖、賦香剤及び保存剤と共に水性ビ
ヒクル中に溶解してシロップとする。エリキシルは適当
な甘味剤や賦香剤と共に、水性アルコールベヒクルを用
いて製造する。懸濁剤は不溶性の形態のものを、アラビ
アゴム、トラガカント、メチルセルロースのような懸濁
用剤の助けをかり、適当なベヒクルを用いて製造する。

非経口投与のためには、液状単位投与形態を活性成分と
無菌のベヒクル（水が好ましい）を用いて製造する。使
用される形態や濃度に応じて、活性成分はベヒクル中に
懸濁させるか又は溶解さ一仕る。溶液を作るには、水溶
性の活性成分を注射用水に溶かし、適当なバイアルやア
ンプルに入れ閉じる前に滅菌濾過をする。有利にはベヒ
クル中に局所麻酔剤、保存剤及び緩衝剤の如き助剤を溶
解させる。非経口用の懸濁剤を作るには、活性成分をベ
ヒクル中に溶解させずに懸濁させ、かつ滅菌を濾過によ
り行い得ないという点を除き、実質的に上述と同様にし
て製造される。活性成分は、滅菌ベヒクルに懸濁させる
前にエチレンオキサイドで滅菌する。有利には、界面活
性剤や湿潤剤を組成物に包含させ、活性成分を均一に分
布させるのを助ける。

経口や非経口の投与のほかに、直腸や膣からの投与も用
いられる。活性成分は生剤という手段で投与できる。体
温付近の融点をもつ−、ヒクル又は容易に可溶となるベ
ヒクルが用いられる。たとえばカカオ脂やいろんなポリ
エチレングリコール類（カーボワソクス類）がベヒクル
として使用できる。

経鼻点滴のためには活性成分と適当な医薬用ベヒクル（
好ましくはＰ、Ｆ、水）を用いて液状単位用量形態をつ
くる。もし吸入が望まれるときはドライバウダーを処方
することができる。

エロゾルとして用いるために、必要とあればまた所望に
応じ通常の助剤（たとえば共溶剤や湿潤剤）と共に気状
又は液状の噴射剤（たとえばジクロロジフルオロメタン
、二酸化炭素、窒素、プロパンなと）を活性成分と一緒
に加圧エロゾル容器につめることができる。

本明細書及びクレームにおける「単位容量形態」という
用語は人間や動物に対する単位容量として適当な物理的
に個々の単位を意味し、こ＼に各々の単位は、必要とさ
れる医薬用希釈剤、担体又はヘヒクルと関連して所望の
治療効果を生ずるべく計算されたところの活性成分の一
定量を含有するものとする。本発明における新規な単位
用量形態の明細は、直接的に下記のものに支持され依存
する。すなわち（ａｌｌ活性骨分ユニークな特性及び達
成されるべき特別の治療効果、及び＋ｂ１本明細書に開
示されたような人間の治療用に活性な材料を処方する技
術い固有の限界、こ＼にこれらは本発明の態様を威すも
のである。本発明に関しての適当な単位用量形態の例は
錠剤、カプセル剤、トローチ、坐剤、粉末の一定量、ウ
ェファ又はカシエ、茶さじ一杯分、大さじ一杯分、滴数
、アンプル、バイアル、これらの適当な組合セ、その他
これ迄に説明したもの等である。

抗腫瘍剤として用いられる活性成分は、それ自体公知で
ありまた確立された製法により製造できる医薬材料の使
用により、容易に上述のような単位用量形態にすること
ができる。以下に本発明の単位用量形態の製造の説明の
ための例を示す。これらは本発明を限定するものではな
い。

本発明の実施化のために幾つもの用量形態を製造したが
、これは以下に例示される。こ＼に「活性成分」とはド
ラスタチンｌＯ１その合成的等価物及びその非毒性かつ
医療活性ＦＡＲ体をあられす。

組成物Ａ（硬ゼラチンカプセル剤） １カプセル中に活性成分２０■を含有するところの二鞘
式硬質ゼラチンカプセル剤１０００個を、次のタイプと
分量の成分から製造する。

活性成分（微粉化）２０ｇ トウモロコシデンプン　　　　　　　２０ｇタルク　　
　　　　　　　　　　　　２０ｇステアリン酸マグネシ
ウム　　　　　　２ｇエア・マイクロナイザーで微粉化
した活性成分を、他の微粉化成分に加え、完全に混合し
、常用に従ってカプセルに充填する。

こ白こ得たカプセル剤は、１回１〜２カプセル１日１〜
４回経口投与すれば新生物病（腫瘍）の治療に有用であ
る。

上記方法に４！！し、活性成分量を２０ｇの代りに５ｇ
、２５ｇ又は５０ｇ用いることにより、ｌカプセル中に
活性成分を夫々５■、２５■又は５゜ｊ■金含有る製剤
を製造することができる。

組成物Ｂ（軟ゼラチンカプセル剤） まず最初に化合物をトウモロコシ油０．５　　に：き濁
して材料をカプセル化できるようにし、次いで上述の方
法でカプセル化して、ｌカプセル中に活性成分（エア・
マイクロナイザーで微粉化）２０■を含有する経口投与
用の一鞘弐ソフトゼラチンカプセル剤を製造する。

このカプセル剤は１回１〜２カプセルを１日１〜４回経
口投与すれば折生物病（腫瘍）の治療に有用である。

組成物Ｃ（錠剤） １錠中に活性成分２０■を含有する錠剤１０００１を、
次のタイプと分量の成分から製造した。

活性成分（微粉化）２０ｇ 乳　　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
０　ｇトウモロコシデンプン　　　　　　　５０ｇステ
アリン酸マグネシウム　　　　　４ｇ軽質液状ペトロレ
ータム　　　　　　５ｇエアマイクロナイザーで微粉化
した活性成分を他の成分に加え、完全に混合しスラグ化
し、このスラグを１６番篩を通して力を加えて粉砕し、
得られた課粒を圧縮して錠剤とし、■錠中に活性成分が
２００■含まれるようになる。

上述の錠剤は１回１〜２錠、１日ｌ〜４回経口投与する
ことによって、新生物病を治療するのに有用である。

上述と同様にして、活性成分２０ｇの代りに２５ｇ又は
ｉｏｇを用いることにより、１錠中に活性成分を２５ｎ
ｖ又は１０■含有する錠剤を製造できる。

組成物Ｄ（経口用懸濁剤） 次のタイプと量の成分を用いて、各条さじ１杯（５ｍｌ
）用量あたり５■の活性成分を含有する水性懸濁？＆、
１０００ｍｇを製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　　１ｇクエン酸
　　　　　　　　　　　　　　　　２ｇ安急患加酸　　
　　　　　　　　　　１ｇ蔗　　　糖　　　　　　　　
　　　　　　　　７９０　ｇトラガカント　　　　　　
　　　　　　　５ｇレモン油　　　　　　　　　　　　
　　２ｇ脱イオン水を加え全量　　　　　　１０１００
Ｏクエン酸、安息香酸、蔗糖、トラガカント及びレモン
油を充分な量の水に分散させ８５０ｍ　ｌの懸濁液とす
る。エアマイクロナイザーで微粉化した活性成分を、そ
れが均一に分布するまでシロップ中で攪拌し、充分な量
の水を加え１０１００Ｏとする。

このようにして製造された組成物は１同条さじ１杯（１
５ｍｌ）１日３回投与することにより、新生物病を治療
するのに有用である。

組成物Ｅ（非経口用製品） 新生物病治療用活性物質３０ｎｗをその１ｍｌ中に含有
する非経口注射用無菌水性懸濁液を、次のタイプと量の
成分から製造する。

活性成分（微粉化）３０ｇ ポリソルベート８０　　　　　　　　　　５　　　ｇメ
チルバラヘン　　　　　　　　　　　２．５ｇプロピル
パラベン　　　　　　　　　　０．１７ｇ注射用水を加
え全量　　　　　　　　１０００　　ｍｌ活性成分比外
のすべての成分を水に溶かし、溶液を濾過して無菌とし
、これにエアマイクロナイザーで微粉化した無菌の活性
成分を添加し、得られる懸′濁液を無菌のバイアルに充
填し、バイアルを密閉する。

このようにして得られる組成物は、１回１ｍｌ（ＩＭ）
を１日３回用いることにより新生物病の治療に有用であ
る。

組成物Ｆ（経直腸及び経膣坐剤） 次のタイプ量の成分を用い、１個の重ｆ１２．５　ｇで
かつ活性成分２０■を含有する坐剤１０００個を製造す
る。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　　１．５　ｇプ
ロピレングリコール　　　　　　　１５０　　ｇポリエ
チレングリコール４０００を加え全１２５００　ｇ活性
成分をエアマイクロナイザーを用いて微粉化し、プロピ
レングリコールに添加し、混合物が均一に分散されるま
でコロイドミルを通過させるｑポリエチレングリコール
を融かし、プロピレングリコール分散液をゆっくりと、
撹拌しつつ添加する、この懸濁液を、冷却してない型（
４０℃）に注入し、組成物を放冷して固化させ、型から
取り出し、各々の坐剤をホイルで包む。

上述の坐剤は新生物病の治療のために直腸又は膣に挿入
する。

Ｍｉ　ｔｃ　’ｈ　Ｇ　（経ｎ用懸濁剤）次のタイプと
分量の成分を用いて、１ｍｌあたり２０■の活性成分を
含有する経鼻点滴用の無菌水性）き濁液１０１００Ｏを
製造する。

活性成分（微粉化）　　　　　　　　　　１．５　ｇポ
リソルベート８０　　　　　　　　　　５　　　ｇメチ
ルパラベン　　　　　　　　　　　２．５ｇプロピルパ
ラベン　　　　　　　　　　０．１７ｇ脱イオン水を加
え全量　　　　　　１０００　　ｍｌ活性戒”分以外の
すべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過して無菌と
し、この無菌液に、エアマイクロナイザーで徽ワ）化し
た無菌の活性成分を加え、得た懸濁液を無菌容器へ無菌
充填する。

この組成物は０．２〜０．５　ｍｌを１日１〜４回点鼻
することにより新生物病の治療に有用である。

活性成分はまた、非希釈の純品形態で皮膚、経鼻、経咽
喉頭、経気管支又は経口的に局所使用のために存在しう
る。

組成物Ｈ（粉末剤） バルク形態の′活性成分５ｇをエアマイクロナイザーを
用いて微粉化し、シエイカータイプの容器に入れる。

上記組成物は１日１〜４回局所に適用することにより新
生物病の治療に有用である。

組成物ｉ　（経口用粉末剤） バルク形態の活性成分１００ｇをエアマイクロナイザー
を用いて微粉化し、各々２０■ずつ分包する。

上述の粉末は、１回１〜２包を１日１〜４回、コツプ−
杯の水に懸濁させて経口投与することにより、新生物病
の治療に有用である。

組成物Ｊ（吸入剤） バルク形態の活性成分１０ｇを、エアマイクロナイザー
を用いて微粉化する。

このものは３０ｍｇを１日１〜４回吸入することによっ
て新生物病の治療に有用である。

組成物Ｋ（硬ゼラチンカプセル剤） １カプセル当り２０＋ｎｇの活性成分を含有する、二鞘
弐ハードカプセル剤１００個をつくる。

エアマイクロナイザーを用いて活性成分を微粉化し、こ
れを常法に従ってカプセル充填する。

上述のカプセルは、１回ｌ〜２個、１日１〜４回経口投
与することにより新生物病の治療に有用である。

上述の方法により、活性成分２０ｍｇの代りに５ｇ、２
５ｇ又は５０ｇ用いて同様の操作により、夫々１カプセ
ル中に活性成分を５．２５及び５０■含有するカプセル
剤を製造できる。

実施例　２ 実施例１に記載の組成物のようにして作ったドラスタチ
ン１０の単位用量形態を、リンパ球白血病Ｐ３８８につ
いてＣａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｒｅｐ
ｏｒｔｓ　。

第３部、３巻、２号、１９７２年９月、Ｐ、　　９以下
に記載のプロトコール１２００を用いてスクリーニング
を行った。ドラスタチン１０はネズミのＰ２Ｓ５　リン
パ球白血病に対し１〜４μｇ／ｋｇの投与で６９−１０
２％の延命率を示した。ドラスタチンｌＯはまた生体内
細胞系でＰ２Ｓ５の生長を著しく阻害した（ＥＤｓ。−
４，６Ｘｌ０−’μｇ／　　）実施例　３ 実施例１により製造したドラスタチン１０の単位用量形
態を、ＭＣＩで用いられるプロトコールに従ってスクリ
ーニングを行ない、ＮＣＩ　ネズミ・ヒト黒色腫キセノ
グラフに対し３．２５−３６μｇ／ｋｇで１７−６７％
の治癒率を示した。

実施例　４ 実施例１に従ってつくった単位用量形態をＢ−１６ネズ
ミ黒色腫に試み、ＮＣＩのプロトコールを用いて１．４
４から１１．１μｇ／ｋｇの投与で４２％から１３８％
の延命率を得た。

手続主甫正書（自発） 平底　１年　６月　７日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされ、ドラスタチン１０と命名されるところの細
   胞生長抑制物質。 ２、次の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつ天然の又は合成の物質、又はその無毒の医薬的活
   性誘導体の有効量を活性成分として含有し、医薬的に許
   容される担体より成る医薬組成物。 ３、次のＮＭＲ特性を有する特許請求の範囲第１項に記
   載の細胞生長抑制物質。 化学シフト（ｐｐｍ） 構造アサインメント　１３Ｃ（ｍｕｌｔ）　＾１Ｈ（ｍ
   ｕｌｔ；Ｊ，Ｈｚ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）　ＮＯＥ ２　１７０．５１（ａ） ４　１４２．７７（ｄ）　７．７１７（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ５　１１８．７６（ｄ）　７．２５４（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ６　５３．０２（ｄ）　５．５１６（ｄｄｄ；５．７，
   ７．２，９．３；１Ｈ） ６ａ　４１．４８（ｔ）　３．３３９（ｄｄ；５．７，
   １４；１Ｈ）３．２５６（ｄｄ；５．７，１４；１Ｈ） ６ｂ１　１３７．７４（ａ） ６ｂ２，６ｂ６　１２８．７４（ｄ）×２　７．２４３
   （ｄ；７．９；２Ｈ） ６ｂ３，６ｂ５　１２９．８０（ｄ）×２　７．２１４
   （ｄｄ；７．９，９．２；２Ｈ） ６ｂ４　１２７．０２（ｄ）　７．１９４（ｔ；９．２
   ；１Ｈ） ７　７．２５６（ｔ；７．６；１Ｈ）　９．９ａ，１０
   ，１０ａｂ，１１ ８　１７５．６７（ａ） ９　４４．７９（ｄ）　２．２８２（ｑｕｉｎｔｅｔ；
   ７．２；１Ｈ）　７ ９ａ　１４．４９（ｑ）　１．０８５（ｄ；７．１；３
   Ｈ） １０　８２．０５（ｄ）　３．８４５（ｄｄ；２．０，
   ８．２；１Ｈ）　７ １０ａｂ　６０．８９（ｑ）　３．３０９（ａ；３Ｈ）
   　６．７ １１　５９．８６（ｄ）　３．９８５（ｍ；１Ｈ） １２　２５．００（ｔ）　１．８０４（ｄｄｄ；５．５
   ，７．０；１９；１Ｈ） 　１．６０８（ｄｄｄ；７，９．２；１９；１Ｈ） １３　２５．４５（ｔ）　１．４４６（ｄｄｄ；４．７
   ，７，１９；１Ｈ） 　１．７１５（ｄｄｄ；４．７，７．８，１２．７；１
   Ｈ） １４　４８．０３（ｔ）　３．４０１（ｄｄ；７．８，
   １０；１Ｈ）　１７ 　３．３９０（ｍ；１Ｈ）＾ｂ １６　１７４．０１（ａ） １７　３８．１１（ｔ）　２．３９４（ＡＢｑ；９．０
   ；２Ｈ）　１４ １８　７８．８６（ｄ）　４．１２２（ｂｒｏａｄｔ；
   ８．７；１Ｈ） １８ａｂ　５８．１６（ｑ）　３．３１３（ａ；３Ｈ）
   　２２ １９　５４．１１（ｄ）　３．２６−３．３９（１Ｈ）
   ＾ｃ １９ａ　３３．６２（ｄ）　１．６８０（１Ｈ）＾ｂ １９ｂ　２６．２５（ｔ）　１．３７０（ｂｒｏａｄｍ
   ；１Ｈ） 　１．０００（ｂｒｏａｄｍ；１Ｈ）＾ｂ １９ｃ　１０．９２（ｑ）　０．８２３（ｔ；７．４；
   ３Ｈ） １９ｄ　１９．８２（ｑ）　１．００３（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２０ａ　３０．０９（ｑ）　３．０１２（ａ；３Ｈ）　
   ２２ ２１　１７１．３９（ａ）　１８，１８ａｂ，２０，１
   ９ ２２　５４．２０（ｄ）　４．７６１（ｄｄ；６．５，
   ８．８；１Ｈ） ２２ａ　３１．４２（ｄ）　１．９８３（ｓｅｘｔｅｔ
   ；６．７；１Ｈ） ２２ｂ　１８．１８（ｑ）　０．９４１（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２２ｃ　１６．０９（ｑ）　０．９７７（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２３　６．８６１（ｄ；８．９；１Ｈ）　２５ｂｃ ２４　１７２．４４（ａ） ２５　７６．７７（ｄ）　２．４５４（ｄ；６．９；１
   Ｈ）　２３ ２５ｂｃ　４９．９２（ｑ）×２　２．２６２（ｓ；６
   Ｈ）　２３ ２６　２８．０８（ｄ）　２．７０３（ｓｅｘｔｅｔ；
   ６．７；１Ｈ） ２７　２０．２４（ｑ）　０．９６４（ｄ；６．８；３
   Ｈ） ２８　１８．１８（ｑ）　０．９０２（ｄ；６．８；３
   Ｈ） ａ）内部参照として残留ＣＨＤＣｌ＿２（５．３２ｐｐ
   ｍ） ｂ）オーバーラップしたシグナル ｃ）ＮＯＥデータからアサインしたシグナル ４、次のＮＭＲ特性を持つ、第２項に記載の医薬組成物
   。 化学シフト（ｐｐｍ） 構造アサインメント　１３Ｃ（ｍｕｌｔ）＾１Ｈ（ｍｕ
   ｌｔ；Ｊ，Ｈｚ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）　ＮＯＥ ２　１７０．５１（ａ） ４　１４２．７７（ｄ）　７．７１７（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ５　１１８．７６（ｄ）　７．２５４（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ６　５３．０２（ｄ）　５．５１６（ｄｄｄ；５．７，
   ７．２，９．３；１Ｈ） ６ａ　４１．４８（ｔ）　３．３３９（ｄｄ；５．７，
   １４；１Ｈ） 　３．２５６（ｄｄ；５．７，１４；１Ｈ） ６ｂ１　１３７．７４（ａ） ６ｂ２，６ｂ６　１２８．７４（ｄ）×２　７．２４３
   （ｄ；７．９；２Ｈ） ６ｂ３，６ｂ５　１２９．８０（ｄ）×２　７．２１４
   （ｄｄ；７．９，９．２；２Ｈ） ６ｂ４　１２７．０２（ｄ）　７．１９４（ｔ；９．２
   ；１Ｈ） ７　７．２５６（ｔ；７．６；１Ｈ）　９．９ａ，１０
   ，１０ａｂ，１１ ８　１７５．６７（ａ） ９　４４．７９（ｄ）　２．２８２（ｑｕｉｎｔｅｔ；
   ７．２；１Ｈ）　７ ９ａ　１４．４９（ｑ）　１．０８５（ｄ；７．１；３
   Ｈ） １０　８２．０５（ｄ）　３．８４５（ｄｄ；２．０，
   ８．２；１Ｈ）　７ １０ａｂ　６０．８９（ｑ）　３．３０９（ａ；３Ｈ）
   　６．７ １１　５９．８６（ｄ）　３．９８５（ｍ；１Ｈ） １２　２５．００（ｔ）　１．８０４（ｄｄｄ；５．５
   ，７．０；１９；１Ｈ） 　１．６０８（ｄｄｄ；７，９．２；１９；１Ｈ） １３　２５．４５（ｔ）　１．４４６（ｄｄｄ；４．７
   ，７，１９；１Ｈ） 　１．７１５（ｄｄｄ；４．７，７．８，１２．７；１
   Ｈ） １４　４８．０３（ｔ）　３．４０１（ｄｄ；７．８，
   １０；１Ｈ）　１７ 　３．３９０（ｍ；１Ｈ）＾ｂ １６　１７４．０１（ａ） １７　３８．１１（ｔ）　２．３９４（ＡＢｑ；９．０
   ；２Ｈ）　１４ １８　７８．８６（ｄ）　４．１２２（ｂｒｏａｄｔ；
   ８．７；１Ｈ） １８ａｂ　５８．１６（ｑ）　３．３１３（ａ；３Ｈ）
   　２２ １９　５４．１１（ｄ）　３．２６−３．３９（１Ｈ）
   ＾ｃ １９ａ　３３．６２（ｄ）　１．６８０（１Ｈ）＾ｂ １９ｂ　２６．２５（ｔ）　１．３７０（ｂｒｏａｄｍ
   ；１Ｈ） 　１．０００（ｂｒｏａｄｍ；１Ｈ）＾ｂ １９ｃ　１０．９２（ｑ）　０．８２３（ｔ；７．４；
   ３Ｈ） １９ｄ　１９．８２（ｑ）　１．００３（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２０ａ　３０．０９（ｑ）　３．０１２（ａ；３Ｈ）　
   ２２ ２１　１７１．３９（ａ）　１８，１８ａｂ，２０，１
   ９ ２２　５４．２０（ｄ）　４．７６１（ｄｄ；６．５，
   ８．８；１Ｈ） ２２ａ　３１．４２（ｄ）　１．９８３（ｓｅｘｔｅｔ
   ；６．７；１Ｈ） ２２ｂ　１８．１８（ｑ）　０．９４１（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２２ｃ　１６．０９（ｑ）　０．９７７（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２３　６．８６１（ｄ；８．９；１Ｈ）　２５ｂｃ ２４　１７２．４４（ａ） ２５　７６．７７（ｄ）　２．４５４（ｄ；６．９；１
   Ｈ）　２３ ２５ｂｃ　４９．９２（ｑ）×２　２．２６２（ｓ；６
   Ｈ）　２３ ２６　２８．０８（ｄ）　２．７０３（ｓｅｘｔｅｔ；
   ６．７；１Ｈ） ２７　２０．２４（ｑ）　０．９６４（ｄ；６．８；３
   Ｈ） ２８　１８．１８（ｑ）　０．９０２（ｄ；６．８；３
   Ｈ） ａ）内部参照として残留ＣＨＤＣｌ＿２（５．３２ｐｐ
   ｍ） ｂ）オーバーラップしたシグナル ｃ）ＮＯＥデータからアサインしたシグナル ５、次の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ をもつ天然又は合成物質又はその医薬的に活性な無毒の
   誘導体の少量ではあるが有効量を、新生物病患者に投与
   することから成る該患者の治療方法。 ６、患者に対し０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇの該物質を静
   脈投与することから成る、第５項の治療方法。 ７、患者に対し１〜約５０ｍｇ／ｋｇの該物質を皮下投
   与することから成る、第５項の治療方法。 ８、患者に対し５〜約１００ｍｇ／ｋｇの該物質を経口
   投与することから成る、第５項の治療方法。 ９、該新生物病がリンパ球白血病Ｐ３８８である、第５
   項の治療方法。 １０、該少量のたゞし有効量が１〜約４μｇ／ｋｇであ
   る、第９項の治療方法。 １１、該物質が次のＮＭＲ特性を有している、第５項の
   治療方法。 化学シフト（ｐｐｍ） 構造アサインメント　１３Ｃ（ｍｕｌｔ）　＾１Ｈ（ｍ
   ｕｌｔ；Ｊ，Ｈｚ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）　ＮＯＥ ２　１７０．５１（ａ） ４　１４２．７７（ｄ）　７．７１７（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ５　１１８．７６（ｄ）　７．２５６（ｄ；３．３；１
   Ｈ） ６　５３．０２（ｄ）　５．５１６（ｄｄｄ；５．７，
   ７．２，９．３；１Ｈ） ６ａ　４１．４８（ｔ）　３．３３９（ｄｄ；５．７，
   １４；１Ｈ） 　３．２５６（ｄｄ；５．７，１４；１Ｈ） ６ｂ１　１３７．７４（ａ） ６ｂ２，６ｂ６　１２８．７４（ｄ）×２　７．２４３
   （ｄ；７．９；２Ｈ） ６ｂ３，６ｂ５　１２９．８０（ｄ）×２　７．２１４
   （ｄｄ；７．９，９．２；２Ｈ） ６ｂ４　１２７．０２（ｄ）　７．１９４（ｔ；９．２
   ；１Ｈ） ７　７．２５６（ｔ；７．６；１Ｈ）　９．９ａ，１０
   ，１０ａｂ，１１ ８　１７５．６７（ａ） ９　４４．７９（ｄ）　２．２８２（ｑｕｉｎｔｅｔ；
   ７．２；１Ｈ）　７ ９ａ　１４．４９（ｑ）　１．０８５（ｄ；７．１；３
   Ｈ） １０　８２．０５（ｄ）　３．８４５（ｄｄ；２．０，
   ８．２；１Ｈ）　７ １０ａｂ　６０．８９（ｑ）　３．３０９（ａ；３Ｈ）
   　６．７ １１　５９．８６（ｄ）　３．９８５（ｍ；１Ｈ） １２　２５．００（ｔ）　１．８０４（ｄｄｄ；５．５
   ，７．０；１９；１Ｈ） 　１．６０８（ｄｄｄ；７，９．２；１９；１Ｈ） １３　２５．４５（ｔ）　１．４４６（ｄｄｄ；４．７
   ，７，１９；１Ｈ） 　１．７１５（ｄｄｄ；４．７，７．８，１２．７；１
   Ｈ） １４　４８．０３（ｔ）　３．４０１（ｄｄ；７．８，
   １０；１Ｈ）　１７ 　３．３９０（ｍ；１Ｈ）＾ｂ １６　１７４．０１（ａ） １７　３８．１１（ｔ）　２．３９４（ＡＢｑ；９．０
   ；２Ｈ）　１４ １８　７８．８６（ｄ）　４．１２２（ｂｒｏａｄｔ；
   ８．７；１Ｈ） １８ａｂ　５８．１６（ｑ）　３．３１３（ａ；３Ｈ）
   　２２ １９　５４．１１（ｄ）　３．２６−３．３９（１Ｈ）
   ＾ｃ １９ａ　３３．６２（ｄ）　１．６８０（１Ｈ）＾ｂ １９ｂ　２６．２５（ｔ）　１．３７０（ｂｒｏａｄｍ
   ；１Ｈ） 　１．０００（ｂｒｏａｄｍ；１Ｈ）＾ｂ １９ｃ　１０．９２（ｑ）　０．８２３（ｔ；７．４；
   ３Ｈ） １９ｄ　１９．８２（ｑ）　１．００３（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２０ａ　３０．０９（ｑ）　３．０１２（ａ；３Ｈ）　
   ２２ ２１　１７１．３９（ａ）　１８，１８ａｂ，２０，１
   ９ ２２　５４．２０（ｄ）　４．７６１（ｄｄ；６．５，
   ８．８；１Ｈ） ２２ａ　３１．４２（ｄ）　１．９８３（ｓｅｘｔｅｔ
   ；６．７；１Ｈ） ２２ｂ　１８．１８（ｑ）　０．９４１（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２２ｃ　１６．０９（ｑ）　０．９７７（ｄ；６．８；
   ３Ｈ） ２３　６．８６１（ｄ；８．９；１Ｈ）　２５ｂｃ ２４　１７２．４４（ａ） ２５　７６．７７（ｄ）　２．４５４（ｄ；６．９；１
   Ｈ）　２３ ２５ｂｃ　４９．９２（ｑ）×２　２．２６２（ｓ；６
   Ｈ）　２３ ２６　２８．０８（ｄ）　２．７０３（ｓｅｘｔｅｔ；
   ６．７；１Ｈ） ２７　２０．２４（ｑ）０．９６４（ｄ；６．８；３Ｈ
   ） ２８　１８．１８（ｑ）　０．９０２（ｄ；６．８；３
   Ｈ） ａ）内部参照として残留ＣＨＤＣｌ＿３（５．３２ｐｐ
   ｍ） ｂ）オーバーラップしたシグナル ｃ）ＮＯＥデータからアサインしたシグナル １２、該新生物病がネズミ黒色腫である、第５項の治療
   方法。 １３、該少量の、たゞし有効な量が約１．４４から約１
   １．１μｇ／ｋｇである、第１２項の治療方法。 １４、該新生物病がヒト黒色腫である、第５項の治療方
   法。 １５、該少量の、たゞし有効な量が約３．２５から約２
   ６μｇ／ｋｇである、第１４項の治療方法。 １６、該物質の０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇを患者に静脈
   投与することから成る第１１項の治療方法。 １７、該物質の１〜約５０ｍｇ／ｋｇを患者に皮下投与
   することからなる第１１項の治療方法。 １８、該物質の５〜約１００ｍｇ／ｋｇを患者に経口投
   与することから成る第１１項の治療方法。