JPH02167232A - ウイルス除去方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、感染性ウィルス粒子による感染のおそれのな
い（ウィルスフリー）血液凝固第八因子製剤を取得する
ために血液凝固第八因子製剤中からエイズウィルス（Ｈ
ｒＶ）、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、等の感染性ウィ
ルスを除去する方法に関する。本発明の方法は、血液凝
固第八因子製剤を製造する血漿製剤分画工程の最終的段
階で実施することも、また病院において血友病患者に血
液凝固第八因子製剤を輸注する直前に実施することも可
能である。

（従来技術） 血液凝固第八因子製剤は血友病Ａの患者の治療のために
開発され、近年大量に利用されるようになったが１９８
５年以来エイズウィルス（以下単にｌ］Ｉ■と称す）の
キャリア数の増加に伴って血液凝固第八因子製剤へＨＩ
Ｖが混入しＨＩＶで汚染された血液凝固第八因子製剤を
用いた血友病の患者にＨＩＶが感染するという事故が多
発した。この感染を防ぐため抗原抗体反応を利用した試
薬による採血漿のスクリーニングおよび血液凝固第八因
子製剤の凍結粉末の加熱処理が義務づけられるようにな
った。これらの安全対策の実施により感染事故数は大幅
に低下したがまだ依然として感染事故が発生している。

また最近では熱処理された血液凝固第八因子製剤による
Ｂ型肝炎、Ｎｏｎ　Ａ　ＮｏｎＢ型肝炎の感染が問題に
なっている。このため加熱によるウィルス除去効果を高
めるために粉末状態での加熱ではなく、水溶液状態で加
熱（液状加熱）を行なう方法が奨励されている。液状加
熱の導入により感染率はさらに低下するものと期待され
ている。しかしながら血液凝固第八因子製剤を加熱する
と血液凝固活性そのものも低下し、その低下率は粉末加
熱の場合より液状加熱の方が大きく、条件によっては歩
留まりが４０〜５０％であると言われている。血液凝固
第八因子製剤の製造は大量の原料血漿を必要とすること
から加熱処理による歩留まりの低下は原料血漿の手当て
の面からも血液凝固第八因子製剤のコストの面からも大
きな問題である。

（本発明が解決しようとする課題） 本発明はＨＩＶはもちろんのことＨＢＶあるいはＮｏｎ
　Ａ　Ｎ０ＩＩ　Ｂ型肝炎ウィルスを確実に除去しなが
ら高い収率で血液凝固第八因子製剤を得ることのできる
ウィルス除去方法を提供するためになされたものである
。

（課題を解決するための手段） 本発明者等が鋭意研究を進めたところ、血液凝固第八因
子製剤を濾過するに際し、銅アンモニア法再生セルロー
ス製多孔膜中空糸を用いたフィルターを使用することに
よって、血液凝固第八因子製剤中のウィルスを除去する
ことが可能になることを見いだし、この知見に基づいて
本発明をなすに至った。

本発明は、血液凝固第八因子製剤を銅アンモニア法再生
セルロース製多孔膜中空糸を用いたフィルターで濾過し
て血液凝固第八因子製剤中に含まれるウィルスを除去す
るウィルス除去方法である。

本発明に用いる銅アンモニア法再生セルロース製多孔膜
中空糸は銅アンモニアセルロース溶液から製造される。

再生セルロースにはビスコース法、セルロースエステル
のケン化法、銅アンモニア法など、種々のものがあるが
、その中でも銅アンモニア法は、その独自の凝固、再生
方法のため、他の再生セルロースとは異なる優れた性質
を有する。

その特徴のひとつは親水性でかつ蛋白質の吸着性が小さ
い点にある。本発明方法に用いられる銅アンモニア法再
生セルロースからなる多孔膜中空糸が既存の中空糸の中
で一番吸着性が小さい。

本発明に用いる銅アンモニア法再生セルロース製多孔膜
中空糸は水流速法で測定した平均孔径が通常人工腎臓用
途に用いられる銅アンモニア法再生セルロース製中空糸
と異なり、１１０−１Ｏ０ｎの範囲にあり、しかも壁厚
全層においてスキン構造を有さない。

また、本発明に用いる銅アンモニア法再生セルロース製
多孔膜中空糸は該中空糸の内壁面から外壁面への膜厚方
向に層状構造を有している。このため高い蛋白質の透過
性と高いウィルスの阻止性能を併せ持っている。

本発明に用いる銅アンモニア法再生セルロース製多孔膜
中空糸の膜厚は薄ければ薄いほど濾過速度が大きくなる
ので好ましい。しかしながら、膜厚が１０μｍ未満にな
ると、中空糸にはピンホールが多発し、ウィルス粒子が
濾液中に洩れ出てくる。また膜厚が１００　ｇｒａ以上
になると濾過速度が大きく低下する。

また本発明は、血液凝固第八因子製剤を濾過するに際し
、好ましくは銅アンモニア法再生セルロース製多孔膜中
空糸を用いたフィルターを多段に使用しかつ前段のフィ
ルターに使用する中空系の平均孔径がその次に使用する
フィルターのそれよりも小さくない様に配置するもので
ある。

血液凝固第八因子製剤は、コーンのエタノール分画法に
よりクリオプレシピテート分画から得られる。クリオプ
レシピテートは血液凝固第八因子の他にフィブリノーゲ
ン等の夾雑タンパクを含んでいる。その後の処理により
血液凝固第八因子以外の成分の除去が行われ、血液凝固
第八因子の濃縮が進行するが、最終製品中にはなおフィ
ブリノケンをはしめとする血’ｔ＆　’１１固第八因子
以外のタンパク成分が多量に含まれる。このような血液
凝固第八因子製剤を濾過するにあたり、銅アンモニア法
再生セルロース製多孔膜中空糸を用いたフィルターを多
段に使用しかつ前段のフィルターに使用する中空糸の平
均孔径がその次に使用するフィルターのそれよりも小さ
くないように配置することによって高い血液凝固第八因
子回収率と高いウィルス阻止率の両者が満足される。

前段に使用するフィルターの平均孔径は小さすぎるとタ
ンパクの回収率が下がるため５０ｎｎ＋以上が望ましく
、さらに高い回収率を得るためには６０ｎｍ以上が望ま
しい。さらに、ウィルスの除去率は、フィルターの段数
を増やすことによって向上するので段数を増やすことを
前提とするならば血液凝固第八因子の回収率を高めるた
めに８０ｎｍ以上の平均孔径のフィルターを使用するこ
とも可能である。後段に使用するフィルターの平均孔径
は前段と同じか小さいものであることが要求される。小
さいものであるほどウィルスの阻止率が大きくなるが一
方で血液凝固第八因子の回収率が低下してしまう。その
ため３０ｎｎ＋以上であることが望ましい。

フィルターの段数はフィルターの平均孔径の組み合わせ
との関係で適宜選択すればよい。血液凝固第八因子製剤
は前述のようにフィブリノーゲン等の夾雑タンパクを多
量に含んでおり、しかもその含有量は製剤の製造条件に
よって大きく異なる。

したがってフィルターの平均孔径、段数等の適正な条件
はそれぞれの製剤について実験にもとづいて定めること
が必要である。

本発明方法による実施例を説明するに先立ち、本明細書
中に用いられた各種物性値の測定方法を以下に示す。

〔水流速平均孔径〕

銅アンモニア法再生セルロースからなる多孔膜中空糸の
モジュールを作製し、そのモジュール状態で中空糸の水
の流出量を測定し、（１）式から水流速平均孔径（Ｄ）
を求めた。

■　＝　流出！　（ｒｎ１／＋１ｎ） Ｔ　：　膜厚（μｍ） Ｐ　：　圧力差（閣Ｈｇ） Ａ　：　膜面積（ポ） Ｐｒ　：　空孔率 μ　：　水の粘性率（ｃｐ） 空孔率Ｐｒは水膨潤時の見かけ密度ρａ＋＋、ポリマー
の密度ρｐより（２）式で求めた。セルロースの場合、
ρｐ　＝１．５６１を用いた。

Ｐｒ（Ｘ）＝（１−ρａＷ／ρｐ）Ｘ１００　　　（２
）〔ウィルスの阻止係数の測定〕 本発明におけるウィルス除去に関する効果の判定は大腸
菌ファージ−の一種であるファイエックス１７４（以下
φ×１７４と称す）の対数減少率（１ｏｇ　ｒｅｄｕｃ
ｔｉｏｎ　　ｖａ　ｊ２　ｕｅ　　又はＬＲＶ）で表わ
された阻止係数を測定することによっておこなった。φ
×１７４は直径約２５ｎｍであるため、直径４２ｎｍを
有する）（ＢＶはφ×１７４より高い阻止係数で除去さ
れると考えることができる。φ×１７４のＬＲＶの測定
はフィルターの膜面積１　ｃ４あたり１０８個のウィル
スを含む培地溶液を濾過し、濾液中のウィルス濃度を測
定することによって下記の式によりＬＲＶを求める。

（実施例） 次に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。

（実施例１〜４） セルロースリンターを公知の方法で調製した銅アンモニ
ア溶液中に８れ％の濃度で溶解し、濾過脱泡を行ない、
紡糸原液とした。その紡糸原液を環状紡糸口の外側紡出
口（外径２ＩＩＩＩｌφ）から、方中空剤として、アセ
トン５０−Ｌ％／アンモニア０．６　ｗｔ％／水４９．
４　ｗｔ％の混合？ｇ液を中央紡出口（外径０．６ｍｍ
φ）からそれぞれアセトン４０ｗｔ％／アンモニア０．
６ｗｔ％／、水５９．４　ｗｔ％（凝固剤）中に直接吐
出しｌ　Ｏｍ　／ｍｉｎの速度で巻き取った。

その後、真空乾燥した（２５°Ｃ１１，５ｈｒ）。この
様にして得られた銅アンモニア法再生セルロース製多孔
膜中空糸の内径は２５０．０μｍ、膜厚は２５．０μｍ
１水流速平均孔径は３０ｎｍ、空孔率は３９％であった
。

以下セルロース濃度６．８％、５．７％、５．４％の紡
糸原液を調製し、同様の条件で紡糸・乾燥を行い、表１
記載の中空糸を得た。

これらの中空糸５００本をたばね有効膜面積０．０３ｎ
−ｒのモジュールに成型したものを実施例１〜４とした
。

次にＡ社の加熱処理血液凝固第八因子製剤を２５００単
位／　ａｌｌの溶液に調製し、かつこの溶液に別途培養
したφ×１７４の培養液を３　ｘｌＯ”　ｐＦＵ／ｍ１
の濃度になるように添加し該溶液１００ｍＡを上記の各
種モジュールで１ｒｎｌｌ／ｍｉｎの流速で濾過した。

結果を表２に示す。

表２より、この方法では、高い血液凝固第八因子回収率
と高い阻止率の両者を満足することはむずかしいが、一
応可能である。

（実施例５〜１０） 上記方法によって得られた平均孔径の異なる中空糸によ
るモジュールを表３に示す様に組み合わせ、実施例１〜
４と同様の濾過実験を行った。結果を表３に示す。

表３゛より、フィルターを多段で用いることにより、高
い血液凝固第八因子回収率及び高いウィルス阻止係数の
両者を満足することは明らかである。

（発明の効果） 本発明により、多孔膜を用いて、血液凝固第八因子製剤
より、その活性を低下させることなくウィルス（特に）
（ＢＶ）を除去できる様になり、フィルターを多段にす
ることにより、血液凝固第八因子の回収率とウィルスの
阻止係数の両者を満足させる濾過ができる様になった。

以下余白 表 以下余白

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）血液凝固第八因子製剤からウィルスを除去する方
   法において、血液凝固第八因子製剤を銅アンモニア法再
   生セルロース製多孔膜中空糸を用いたフィルターで濾過
   することを特徴とする血液凝固第八因子製剤からのウィ
   ルス除去方法
2. （２）血液凝固第八因子製剤からウィルスを除去する方
   法において、血液凝固第八因子製剤を銅アンモニア法再
   生セルロース製多孔膜中空糸を用いて多段に濾過し、そ
   の際前段のフィルターに使用する中空糸の平均孔径がそ
   の次に使用するフィルターのそれよりも小さくないよう
   に配置することを特徴とする血液凝固第八因子製剤から
   のウィルス除去方法