JPH0216319B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規含リン化合物及びその製造法に
関し、更に詳しくは、新規含リン化合物及び該化
合物生産菌を好気的条件下において培養すること
により得られる培養物より、該化合物を採取する
ことを特徴とする新規含リン化合物の製造法に関
する。 本発明者らは、除草剤として有用なSF―1293
物質（特公昭51−639号公報）の製造法の改良研
究中、SF―1293物質生産菌ストレプトミセス・
ハイグロスコピクスSF―1293株（微工研菌寄第
996号：ATCC寄託番号21705号）の一変異株が新
規含リン化合物MP―103物質及びMP―104物質
を多量に産生することを見い出し、下記に示す理
化学的性状により、それぞれ２―アミノ―３―
（ハイドロキシ）フオスフイノイルプロピオン酸
及び２―ハイドロキシ―３―（ハイドロキシ）フ
オスフイノイルプロピオン酸と同定し、またそれ
らの物質は、SF―1293株を用いたSF―1293物質
の生産培養時に添加するとSF―1293物質の増収
がはかられることを発見し、本発明を完成するに
至つた。 即ち、本発明は、２―アミノ―３―（ハイドロ
キシ）フオスフイノイルプロピオン酸（以下、
「MP―103物質」という。）及び２―ハイドロキ
シ―３―（ハイドロキシ）フオスフイノイルプロ
ピオン酸（以下、「MP―104物質」という。）並
びにストレプトミセス属に属し、MP―103物質
及びMP―104物質生産菌を好気的条件下におい
て培養することにより得られる培養物より、MP
―103物質及び／又はMP―104物質を採取するこ
とを特徴とするMP―103物質及びMP―104物質
の製造法である。 本発明に使用されるストレプトミセス属の菌株
は、その培養物中に採取するに充分な量のMP―
103物質及びMP―104物質の生産能を有するもの
であれば、どのようなものでもよい。このような
ストレプトミセス属の菌株の例としては、本発明
者らによつて、ストレプトミセス・ハイグロスコ
ピクスSF―1293株のニトロソグアニジン処理に
より得られた変異株（菌株番号MP―103株）が
挙げられる。ストレプトミセス・ハイグロスコピ
クスMP―103株は微工研に寄託され（微工研菌
寄第6328号）、その菌学的性状は、胞子形成が少
ないことをのぞいて、特公昭51−639号公報記載
のストレプトミセス・ハイグロスコピクスSF―
1293株と同一である。 MP―103株は他のストレプトミセス属の菌株
の場合に見られるように、その性状が変化しやす
く、例えば紫外線、エツクス線、薬品等を用いる
人工的変異手段で変異しうるものであり、このよ
うな変異株であつてもMP―103物質及びMP―
104物質の生産能を有するストレプトミセス属の
菌株はすべて、本発明に使用することができる。 本発明の製造法においては、MP―103株を、
通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地
で培養する。栄養源としては、従来、ストレプト
ミセス属の菌の培養に利用されている公知のもの
が使用される。例えば、炭素源としては、グルコ
ース、澱粉、グリセリン、シユークロース（シヨ
糖）、水あめ、糖蜜等が挙げられ、これらは、単
独又は組合わせて用いられる。また、窒素源とし
ては、大豆粉、小麦胚芽、肉エキス、ペプトン、
乾燥酵母、コーンステイーブリカー、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ナトリウム等が、単独又は組合わせ
て用いられる。その他必要に応じて炭酸カルシウ
ム、食塩、塩化カリウム、燐酸塩等の無機塩類を
添加するほか、菌の発育を助け、MP―103物質
及びMP―104物質の生産を促進するごとき有機
物、及び無機物を適当に添加することができる。
培養法としては液体培養法、特に深部培養法が最
も適している。培養は好気的条件下で行なわれ、
培養に適した温度は25〜35℃であるが多くの場
合、28℃付近で培養する。 培養日数は３〜７日が適当であり、４〜６日が
更に好ましい。 培養液より本発明の化合物であるMP―103
物質及びMP―104物質を精製単離するには、微
生物代謝産物をその培養液から単離するために通
常用いられる分離、精製の方法が利用できる。 具体的には本発明の化合物MP―103物質及び
MP―104物質がそれぞれ水溶性の両性及び酸性
物質であることから、その精製にあたつては、ア
ンバーライトIR―120、ダウエツクス50W等の陽
イオン交換樹脂、若しくは、アンバーライトIRA
―400、ダウエツクス１×２等の陰イオン交換樹
脂を用いる方法及びセフアデツクス、セルロー
ス、シリカゲル、炭末等を使用するクロマトグラ
フイーを適当に組合せて行なうことが好ましい。
例えば、ダウエツクス50W（H⁺型）の樹脂塔を通
過させ、塩基性の不純物を除去する方法は、MP
―103物質及びMP―104物質の精製法として有効
な手段である。 本発明の方法で得られたMP―103物質及びMP
―104物質の理化学的性状は次の通りである。 MP―103物質 外 観 白色結晶 融 点 196―197℃（分解） 溶解性 水に溶けやすいが、エタノール、アセ
トン、酢酸エチル、エチルエーテル等の有
機溶媒には溶けにくい。 〔α〕²⁰ _D ＋17.0゜（Ｃ＝１，0.1N塩酸） 紫外吸収（UV）スペクトル 末端吸収を示す
のみである。 赤外吸収（IR）スペクトル KBr錠中で測定
したものを第１図に示す。 元素分析 C21.12，Ｈ 5.92，N8.30， O46.27，P17.92％ FD―マススペクトル ｍ／ｅ：154（M⁺＋１） 以上の元素分析及びFD―マススペクトルのデ
ータより、分子式はC₃H₈NO₄P・H₂Oであると
考えられた。また、展開溶媒ｎ―ブタノール―酢
酸―水（２：１：１）のシリカゲル薄層クロマト
グラフイーでRf値0.22、セルロース薄層クロマト
グラフイーでRf値0.43にそれぞれ単一のスポツト
を与えた。 以上の理化学的性状及び別途研究の結果から、
MP―103物質は、次式（） で示される２―アミノ―３―（ハイドロキシ）フ
オスフイノイルプロピオン酸であることが判明し
た。 MP―104物質 外観及び性状 無定形の吸湿性粉末 溶解性 水に溶けやすいが、エタノール、アセ
トン、クロロホルム、エチルエーテル等の
有機溶媒には溶けにくい。 〔α〕²⁰ _D −6.5゜（Ｃ＝１，0.1N塩酸） UVスペクトル 末端吸収を示すのみである。 IRスペクトル ヌジヨール中で測定したもの
を第２図に示す。 元素分析 C20.94，H4.89，O55.73， P17.80％ FD―マススペクトル ｍ／ｅ：154（M⁺） 以上の元素分析及びFD―マススペクトルのデ
ータより、分子式はC₃H₇O₅P・H₂Oであると考
えられた。また、展開溶媒ｎ―ブタノール―酢酸
―ピリジン―水（４：１：１：１）のセルロース
薄層クロマトグラフイーでRf値0.3に単一のスポ
ツトを与えた。 以下の理化学的性状及び別途研究の結果から、
MP―104物質は、次式（） で示される２―ハイドロキシ―３―（ハイドロキ
シ）フオスフイノイルプロピオン酸であることが
判明した。 さらに、MP―103物質及び／又はMP―104物
質を、前述のSF―1293物質を生産する放線菌を
用いたSF―1293物質の生産培養時に添加するこ
とにより、SF―1293物質の生産が飛躍的に高め
られ、MP―103物質及びMP―104物質は除草剤
として有用なSF―1293物質の前駆体として、極
めて重要な化合物であることが判明した。 また、MP―103物質はDNAウイルスであるワ
クシニアウイルス及び単純性疱疹ウイルス
（HSV型）に対して活性を示した。MP―103物
質の抗ウイルス活性についての細胞変性抑制試験
の結果を第１表に示す。

【表】 以下、実施例及び試験例により、本発明を更に
詳しく説明する。 実施例 １ ストレプトミセス・ハイグロスコピクスMP―
103株（微工研菌寄第6328号）を前培養培地（可
溶性澱粉2.0％、ポリペプトン1.0％、肉エキス0.3
％、燐酸水素二カリウム0.05％；PH7.0）10mlに
接種した。これを28℃で24時間振盪培養し、さら
に同培地80mlに継代して28℃で24時間振盪培養し
たものをジヤーフアーメンターの種母とした。ジ
ヤーフアーメンターでは、グルコース4.0％、サ
ングレイン2.25％、小麦胚芽3.5％、燐酸二水素
カリウム0.1％、塩化コバルト0.0001％の組成の
生産培地4.0に前記種母を植菌し、28℃で通気
撹拌培養を行なつた。144時間培養した培養液を
PH2.0に調整し、遠心分離により菌体を除去し、
2.0の培養液を得た。この培養液中のMP―
103物質の生産量をアミノ酸アナライザー（アト
ー社製MLC―703型、保持時間11分）で測定した
ところ、170μｇ／mlであつた。得られた培養
液を450mlのダウエツクス50W×２（H⁺型）を充
填したカラムを用いて、MP―103物質が溶出し
おわるまで水で展開した。溶出液の約1.8を600
mlのダウエツクス１×２（CH₃COO^-型）を充填
したカラムを用いて水洗後、0.5N塩酸で溶離し
た。溶離液のうち、MP―103物質及びMP―104
物質を含む画分を濃縮して塩化水素を除去し、水
を加え約30mlにして、さらにダウエツクス50W×
２（H⁺型）700mlを充填したカラムを用いて、水
で展開し20mlづつ分取した。次に、セルロース薄
層クロマトグラフイー〔展開溶媒ｎ―ブタノール
―酢酸―水（２：１：１）〕において、ニンヒド
リンにより単一のスポツトを与えるフラクシヨン
を濃縮させて、白色結晶のMP―103物質180mgを
得た。 実施例 ２ 実施例１のダウエツクス50W×２（H⁺型）700
mlを用いたカラムクロマトグラフイーにおける素
通り画分120mlを約10mlに濃縮し、セフアデツク
スＧ―10 950mlを充填したカラムを用いて、水で
展開し、10mlづつ分取した。MP―104物質を含
むフラクシヨンを濃縮し、ｎ―ブタノール―酢酸
―水―ピリジン（４：１：１：１）を用いてセル
ロース130mlを充填したカラム上に、前記濃縮物
をセルロースでペースト状にして重層し、前記混
合溶媒で溶出して7.5mlづつ分取した。MP―104
物質を含むフラクシヨンを濃縮し、ダウエツクス
50W×２（H⁺型）５mlを充填したカラムを通過
後、再び濃縮して、薄黄色の吸湿粉末のMP―
104物質110mgを得た。 試験例 ストレプトミセス・ハイグロスコピクスSF―
1293株（微工研菌寄第996号）を前培養培地（可
溶性澱粉2.0％、ポリペプトン1.0％、肉エキス0.3
％、燐酸水素二カリウム0.05％；PH7.0）10mlに
接種し、28℃で24時間振盪培養した。この種培養
を２％の割合で、グリセリン3.9％、小麦胚芽3.6
％、サングレイン0.5％、燐酸二水素カリウム0.1
％、塩化コバルト0.0001％の組成の生産培地に植
菌し、28℃で７日間培養した。MP―103物質及
びMP―104物質は第２表に示した濃度と時期で
添加した。培養液を酸性にした後、遠心分離
（3000rpm、15分）して上澄を得、アミノ酸アナ
ライザー（アトー社製MLC―703型、保持時間14
分）でSF―1293物質の生産量を測定した。その
結果を第２表に示す。

【表】 表から、MP―103物質又はMP―104物質の添
加により、SF―1293物質の生産量が高まること
がわかる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、MP―103物質のIRスペクトル図で
あり、第２図は、MP―104物質のIRスペクトル
図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次式 （式中、Ｒはアミノ基又は水酸基を表わす。） で示される化合物。 ２ ２―アミノ―３―（ハイドロキシ）フオスフ
   イノイルプロピオン酸である特許請求の範囲第１
   項記載の化合物。 ３ ２―ハイドロキシ―３―（ハイドロキシ）フ
   オスフイノイルプロピオン酸である特許請求の範
   囲第１項記載の化合物。 ４ ストレプトミセス属に属する、２―アミノ―
   ３―（ハイドロキシ）フオスフイノイルプロピオ
   ン酸及び２―ハイドロキシ―３―（ハイドロキ
   シ）フオスフイノイルプロピオン酸生産菌を培養
   することにより得られる培養物より、２―アミノ
   ―３―（ハイドロキシ）フオスフイノイルプロピ
   オン酸及び／又は２―ハイドロキシ―３―（ハイ
   ドロキシ）フオスフイノイルプロピオン酸を採取
   することを特徴とする２―アミノ―３―（ハイド
   ロキシ）フオスフイノイルプロピオン酸及び２―
   ハイドロキシ―３―（ハイドロキシ）フオスフイ
   ノイルプロピオン酸の製造法。