JPH02150273A - 新規なモエノマイシン分解微生物および分解方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 モエノマイシンＡ１１ｌ参、裸）は家畜栄養物に用いら
れるフラボマイシン■の主成分である。

他の公知のホスホグリコリピド抗生物質のよさにそれは
細菌細胞壁のペプチドグリカン骨格の生合成を阻害する
。より精密な調査により大腸菌のペニシリン−結合タン
／−？り質１ｂのグリコジル転移反応がこれらの物質に
よって阻害されることが示された。（Ｈｕｂｅｒ　Ｇ、
、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。

Ｖ−１，１３５〜１５６頁（１９７９年）〕今までのと
ころ、ホスホグリコリピド抗生物質の特定の酵素による
または微生物による分解における試みは成功していない
。

予想外なことに今般ホスホグリコリピド抗生物質を開裂
して所定の末端生成物とすることのできる新規なバチル
ス種がストレプトミセスガーナエンシス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｇｈａｎａｅｎａｉｓ）を用いるフラボ
マイシンの製造のための汚染発酵槽から単離された。こ
れらの末端生成物は抗生作用活性を有し、または新規な
トランスグリコシラーゼ阻害剤の合成における基礎単位
として使用することができる。

すなわち、本発明は ｔ　／Ｊチルス種ＤＳＭ　４６７５その変異体および突
然変異体。

で表わされるモエノマイシン人の開裂生成物。

五 一般式 （式中、Ｒ１は水素またはホスホノ基Ｃ−ＰＯ（Ｏ（至
）２〕であり、そしてＲ２は分枝鎖または非分枝鎖の飽
和または不飽和の（Ｃｓ−Ｃ５５）−アルキル基である
）で表わされるホスホグリコリピド抗生物質の開裂生成
物。

４、　その助けによりホスホグリコリピド抗生物質がホ
スホグリコシＰ結合で開裂され、または３に記載の開裂
生成物がモノホス７工−トエステル結合で開裂される酵
素。

５、　ホスホグリコリピド抗生物質をバチルス徨ＤＡＭ
　４６７５とともにインキュベートすることからなる２
および３に記載の分解生成物の製造方法。

＆　２および３に記載の物質のトランスグリコシラーゼ
阻害剤の合成における構築単位として、または抗生作用
活性を有する物質としての使用。

本発明を以後詳細に特に好ましい実施態様について述べ
る。さらに特許請求の範囲において定義づける。バチル
ス種は１９８８年６月２３日西Ｐイツのブラウンシュヴ
アイクにおけるＤｅｕｔｓｃｈｅＳａｍｍｌｕｎｇ　ｖ
ａｎ　Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　ｕｎｄ　Ｚｓ
ｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎＣ）ｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎ　Ｍｉ
ｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔ
ｕｒｅＣｏｌｌｅｃ　ｔｉｏｎ）でブダペスト条約の規
定に基づいて番号ＤＳＭ　４６７５とともに供託された
。該菌株の特徴は下記のものでありうる。

１、ノクチルス種ＤＡＭ　４６７５の分類特性ハ　形態
学 ０運動性の桿状体；５μｍまでの長さ：幾らかは短鎖 ０末端胞子（ｔｅｒｍｉｎａｌ　５ｐｏｒｅ）；膨張し
た胞子嚢 ０グラム陽性 Ｂ）各種培地における成長（２８℃；４８時間）ｔ　抗
生物質培地５　（Ｄｉｆｃｏ） ０１〜２ｍ径の粗い浅裂のコロニー λ　ルリアブイヨン（バクトドリプトン１０　？／ｉ　
；バクトイ−スト５　ｆ／ｌ　；　ＮａＣＡ　５　ｆ／
ｌ　）０２〜３ｍ径のなめらかで光沢のある円いコロニ
ー：不透明 五　栄養プロス（Ｄｉｒｃｏ） ０不規則な縁を有する白色で光沢のあるコロクリステン
七ン尿素寒天（ｐｉｆｃｏ）０成長陽性 ５、マツコンキー寒天（ＤｌｆＣｏ） ０成長陽性 ４゜ ＥＩＲＯＬＡＣ’寒天（ラクトース）　（ｖｌｔｃｏ）
０成長陽性 シモンズクエン酸塩寒天（Ｄｉｆｃｏ）０成長陰性 ペプトン／肉エキス培地（Ｄｉｆｃｏ）中７または１０
％ＮａＣ１の存在下では成長しない。

Ｃ）生理学的特性 １、　オキシダーゼ　　　　　　　　　＋２　カタラー
ゼ　　　　　　　　　　＋６、　溶血反応 ４、７ミノベデチダーゼ ５、　硝酸還元 ６　　フェニルアラニンデアミナーゼ ８゜ ＆ ５０　℃ ＋ グルコースからのガス生成 インＰ−ル生成 アルーニンジヒＰラーゼ 尿素分解 エスクリン加水分解 ゼラチン分解 β−ガラクトシダーゼ リシンデカルボキシラーゼ オルニチンデカルボキシラーゼ Ｈ２Ｂ生産 トリプトファンデアミナーゼ アルカリホス７アターゼ フオゲスープロスカウェル反応 Ｄ）炭水化物の発酵 ＋ ＋ ア・クピン酸塩 液体 アＰニトール アラビノース カプリン酸基 クエン酸塩 ズルシトール ７ラクトース がラクトース グルコン酸塩 グルコース イノシトール ラクトース リンが酸塩 マロン酸塩 マルトース マンニトール マンノース メリビオース 酢酸フェニル ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ラフィノース　　　　　　＋　　　　　＋ラムノース スクロース　　　　　　　　＋　　　　　　＋サリシン ンルビトール トレハロース　　　　　　＋　　　　　＋キシリトール
　　　　　　−　　　　　−キシロース　　　　　　　
＋　　　　　＋Ｎ−７セチルーグルコサミン　　　−　
　　　　　　＋分類特性を考慮し、「Ｂａｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　５ｙｓ−ちｅｍａｔｉｃ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　Ｊ　（第２巻、Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ　＆Ｗｉｌｋｉｎｓ発行、ポルティモア、１９８６年
）によれば該菌株はバチルス属と指定できる。その種を
決定するためにＢａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅｒａｎｓ、
ｃｉｒｃｕｌａｎｓ。

１ｅｎｔｕａ、　ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ、　５ｔｅ
ａｒｏｔ、ｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、ｌｉｃｈｅｎｉ−
ｆｏｒｍｉｓ、　ｐｏｌｙｍｙｘａおよびｆａｓ　ｔｉ
ｄｌｏｓｕｓのタイプカルチャーの平行比較実験を行な
った。すべての比較菌株はバチルス［ＤＳＭ　４６７５
と明確に異なった性質を示した。これらの菌株は倒れも
ホスホグリコリピｒ抗生物質、特にモエノマイシンＡを
分解することができなかった。このことから菌株Ｄ８Ｍ
　４６７５は新しい種であることが結論づけられる。

本発明は各場合において、さらに知られているように自
然に発生し、または物理的動因、例えば紫外線またはＸ
線のような照射線もしくは化学的突然変異誘発物質１例
えばエチルメタンスルホネート（ｇＭｓ）　、Ｎ−メチ
ル−Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジ７　（ＭＮＮ
Ｇ）または２−ヒＰロキシー４−メトキシーベンゾフェ
ノン（ＭＯＢ）を用いて処理することにより発生する突
然変異体および変異体に関する。

・々チルス種ＤＡＭ　４６７５の好気性発酵用炭素源と
して好適で好ましいものは同化できる炭水化物およびグ
ルコース、ラクトースまたはマンニトールのような糖ア
ルコール、並びに麦芽エキスのような炭水化物含有天然
産物である。好適で好ましい窒素含有栄養物はアミノ酸
、ペプチＰおよびタン、Ｒり質並びにその分解生成物、
例えばペプトンまたはトリプトンさらに肉エキス、例え
ばトウモロコシ、豆、大豆またはワタの粉砕された種子
、アルコール製造の際の蒸留残留物、ミートミールまた
はイーストエキス並びにアンモニウム塩および硝酸塩で
ある。栄養物溶液はさらに付加的な無機塩として、例え
ばアルカリ金属またはアルカリ土類金属、鉄、亜鉛およ
びマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩またはリン酸塩を
含有してもよい。

本発明の微生物の成長および分解反応に必要な酵素の生
成は、特に炭素および窒素源とじてコーンスターチ、大
豆ミール、　スフｏ−Ｘ、／リセロール、ペプトンおよ
び／またはコーンスターチを含有する栄養培地において
良好である。

発酵は好気的に行なわれ、すなわち、例えば振とうフラ
スコまたは発酵槽中空気または酸素を取り入れて根とう
または攪拌しながら液内で培養する。発酵はおよそ室温
から５０℃の範囲の温度、好ましくは約６５〜６７℃で
行なうことができる。培養時間は一般に２４〜４８時間
である。

このようにして得られたバチルスＤＳＭ　４６７５の培
養物またはその調製物は、ホスホグリコリピＰ抗生物質
を開裂させるのに使用することができる。これらのもの
には特にモエノマイシン群、１） ２、し４えばホリボマイゾン　　プラ・ジ１イシン　、
ジウマイシン（マカルボマイシン）　　　エサンコマイ
シン、デレノマイシンおよびタイコマイシンそして相応
じて官能化されたホスホグリセリン酸を有する他の構造
的に関連のある物質が包含される。

（１）　８　、　Ｔａｋａｈａｓｈｉら、　Ｔｅｔｒａ
ｈｓｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　１９８５＋２）　Ｆ、Ｌ、
　Ｗｅｉｓｓｎｂｏｒｎら、　Ｎａｔｕｒｅ　２１３　
、１０９２３）８．　Ｔａｋａｈａｓｈｉら、　Ｊ、　
／１ｔｌｔｉｂｉｏｔ、　２６　、５４２酵素は特に好
ましく、モエノマイシン例えばフラボマイシンを分解す
るのく用いられる。

バチルス細胞を用いた場合、後者を例えばセチルトリメ
チルアンモニウム塩を用いて浸透化することが有利であ
る。同様にバチルス細胞からの蛋白質単離物または例え
ば塩析またはクロマトグラフィーにより部分的に濃縮さ
れた酵素抽出物またはもちろん精製された酵素を用いる
ことができる。さらに酵素および細胞を自由または固定
化形態で使用することができる。

酵素分解を例としてモエノマイシンＡを用いて次の図式
で説明する。

この図式より開裂生成物を製造するためには２つの酵素
が必要であることが明らかである。

本発明者らがモエノマイシナーゼと呼んでいる酵素がホ
スホグリコシＰ結合を開裂するのに必要とされる。モエ
ノマイシナーゼはバチルス種ＤＳＭ　４６７５の細旭質
膜に随伴され、それ自体既知の酵素分離法により微生物
から得られる。

モエノマイシナーゼの最適な一値は約８．０〜８．５、
特Ｋ　８．２〜ａ３である。酵素の最適な温度は４５〜
５５℃、特に４９〜５１℃である。

モエノマイシナーゼのＫＤｌ値はモエノマイシンＡにつ
いて４〜１０ミリモルである。

２つの開裂生成物が得られる。開裂生成ウニはホスホグ
リコリピＰ抗生物質の糖成分からなる。一般式（ＩＩ） Ｌ：ｔＪｔＪｌ−ｔ （式中、Ｒ１はホスホノ基であり、Ｒ２は（ａｓ−ａｓ
５）−アルキル基、好ましくは（Ｃ１０〜Ｃ３０）−ア
ルキル基、特ＶＣ（Ｃ２０−Ｃ２５）−アルキル基（各
々は分枝鎖または非分枝鎖の飽和または不飽和の好まし
くは分枝鎖で不飽和の基でありうる）である）で表わさ
れる開裂生成物もまた得られる。

モエノマイシンは好ましく基質として用いられ、従って
その結果得られる開裂生成物は化合物ＭＣ並びに化合物
ＭＢおよび息に相当する物質である。（反応式図を参照
） 別の酵素がモエノマイシナーゼを用いてのインキュベー
ションにより得られる一般式（■）（式中Ｒ１は水素で
ある）のホスホグリセリン［ＩＪビＰの脱ホスホリル化
のために必要であり、同じく本発明の微生物から得るこ
とができる。本発明においてこの酵素をＭＢアーゼと呼
ぶ。■アーゼは同様にしてそれ自体既知の方法によりこ
の微生物から分離することができる。例えば、細胞を超
音波で分裂し、その結果得られた粗抽出物を硫酸アンモ
ニウム分別（２５〜５５％飽和）または超遠心分離の何
れかによりさらに濃縮する。次いでこれを透析する。モ
エノマイシナーゼおよび■アーゼを最後にクロマトグラ
フィーにより分離する。

飄アーゼは６７℃より高い温度で、並びに−がＰ１１５
より低い酸性−範囲内である時だんだん不活性化される
。

モエノマイシンおよびホスホグリコリビｒ抗生物質の開
裂は上述したように全細胞または酵素単離物を用いて行
なうことができる。

反応は一般に一約５．５〜８．５、好ましくは−７〜８
で水性媒体中性なわれる。反応時間は一般に５〜４８時
間、好ましくは約２４時間である。反応温度は４〜６０
℃、好ましくは３０〜３７℃である。基質濃度は０．１
〜５％、好ましくは１〜２％の範囲内がよい。

反応を上述よりも高いまたは低い温度または一値で行な
うこともできる。しかしながらその場合モエノマイシナ
ーゼはより活性が低い。

モエノマイシン人から得られる反応生成物は図に描かれ
ている物質迎およびＭＣである。生成物界、はＭＢをＭ
Ｂアーゼを用いて３ｏ〜３７℃、好ましくは３５〜３７
℃で、そしてｐＨ５，５〜８．５、好ましくはＰＩ（６
〜８で約２４時間にわたってインキュベーションするこ
とにより得られる。

該反応生成物は抗生物質（例えばＭＢ）としてまたはト
ランスグリコシラーゼ阻害剤の合成における基礎単位（
例えば胤およびＭＣ）として使用することができる。

本発明を実施例により更に詳細に説明する。

特に記載がなければＪＲ−セント値は重量に基づくもの
である。

実施例　１ ノ々チルス種ＤＳＭ　４６７５菌株の維持バチルスｇ　
ＤＳＭ　４６７５を下記の固形栄養培地（培地１）上で
維持する： バクトトリプトン（Ｄｉｆｃｏ）　　　　１０　ｔ／１
イーストエキス（Ｄｉｆｃｏ）　　　　　ｓ　ｆ／ＩＮ
ａＣＡ　　　　　　　　　　　　　　　５ｔ／１寒　　
天　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｆ／１ｐＨ７
，２ 培地を試験管に振り分け、１２１℃で３０分間滅菌し、
次いで冷却し培養物を植え付け、そして３７℃で２〜３
日インキュベートする。

成長培養物を洗い出して下記のモエノマイシン含有主培
養物（培地２）のための接種物を得る。

コーンスターチ　　　　　　４０　ｔ／１大豆ミール　
　　　　　　　　　３５　ｆ／１スクロース　　　　　
　　　　　１０ｆ／ＪＣ５ＬＣＯ３８９／１ コーンスチーデ　　　　　　　　　４　ｆ／ｌＣｏ８０
４２０　Ｗ／　１ ＠Ｃ）ｅｎａｐｏｌ　（アルキルポリグリコールエステ
ル）　　　５ｒｄ／１それぞれこの培地を３０ｍ／含有
する３００　ｄのエルレンマイヤーフラスコに植え付け
、次いで６７℃、１９０　ｒｐｍで８〜４８時間インキ
ュベートする。培養ろ液の薄層クロマトグラフィー分析
は化合物鳳、ＭＢおよびＭＣがモエノマイシンの開裂生
成物として検出可能であり、そして反応終了近く用いた
モエノマイシンが完全に消滅することを示す。

実施例　２ 細胞を含有しない抽出物の製造 細胞を含有Ｉ２ない抽出物を製造するためにバチルス種
Ｄ８Ｍ　４６７５を発酵槽中で培養する。このため寒天
プレートの細胞を洗い出して前培養物（２１のエルシン
マイヤーフラスコ中、フラホマイシンを含まない５００
　Ｒ１の培地２）のための１、０　ｄの接種物を得、次
いでこれを３７’ＣＣ１９０ｒｐで２４時間インキュベ
ートする。

９１の培地６を含む１２１の実験室用発酵槽が主培養段
階で使用される： ペゾトン グリセロール クエン酸塩 に２ＨＰＯ４ ＭｇＳＯ４ｘ　７Ｈ２０ ＦｅＣＬｓ　Ｘ　６Ｈ２０ デスモフエン（テロピレングリコール）−＆８ １２．５　タ／１ ２０、Ｏｂｆ／１ ２．０　　ｆ／１ １．５　　ｔ／１ ０．５　　ｆ／１ ０．０４？／１ ５、Ｏｒｘｌ／１ これｋ　５００　ｄの前培養物を植え付け、次いで５７
℃、３００　ｒｐｍそして１３．５　ｖｖｍの曝気速度
で２４時間インキュベーションすル。

成長培養物を遠心分離し、細胞（−ストをリン酸カリウ
ム緩衝剤（Ｐｌ（７０）５０ｍＭ（ＩＰの湿潤細胞＋２
−の緩衝剤）中で再懸濁する。次いで細胞を超音波すな
わちＦｒ８ｎｃｈ　Ｐｒｅｓｓ”またはＤｙｎｏ　Ｍｉ
ｌｌ−■を用いて分裂し、その結果得られる粗抽出物を
転換のために使用する。

１００μｌの粗抽出物、１２■のモエノマイシンおよび
９００μ！のリン酸カリウム緩衝剤（ＰＨ８，（））５
０ｍＭを含有する試験混合物において７〜２４時間内３
７℃で５０％の用いられた基質の分解が行なわれる。見
い出された反応生成物は凧、■およびＭＣである。

実施例　３ モエノマイシンＡの調製用転換 調製用転換はリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ８，０）５０
ｍＭ、８００ｍ／の粗酵素抽出物および１００Ｐのモエ
ノマイシンＡを含有する１２／の発酵槽中、５７℃、１
００　ｒｐｍで行なわれる。転換過程はＴＬＣで追跡す
る。全体の反応混合物を８〜４８時間後凍結乾燥する。

モエノマイシン分解は一般に４０〜６０％である（　Ｔ
ＬＣでのＵＶ分析）。

その結果得られた反応生成物はＭＡ、ＭＢおよびＭＣで
ある。

実施例　４ 分解生成物の製造 酵素転換からの凍結乾燥混合物１００？を２１の水に溶
解し、そして各々２１の酢酸エチルを用いて２回抽出し
た。この場合完全な相分離とするために遠心分離が必要
である。合一した有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥
し、ろ過し、そして蒸発乾固した。０．４　ｔ　（α４
％）の暗い褐色の油状物が得られ、モリブデートリン酸
／硫酸セリウム（ｆＶ）発色剤（以下、ＦＭＳ試薬と省
略する）でスプレーしたシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ６０　
Ｆ２５４アルミニウムＴＬＣシート）上ｎ−ブタノール
／酢酸／水＝３／１／２系での薄層クロマトグラフィー
によりその主成分が風であることがわかった（　Ｒｆ値
＝Ｏ，ＳＳ）。

残留の水性相を次いで各回２ノのｎ−ブタノールで２回
抽出した。再び相を分離させるために遠心分離が必要で
あった。次いで合一したブタノール相をできるだけ濃縮
しそして残留物を少しの水に溶解し最終的に凍結乾燥し
た。ス４ｆｃ７．４％）の黄色粉末が得られ、薄層クロ
マトグラフィー（上述の条件および同じ検出を用いる）
による分析から主成分が■であることがわかった（Ｒｆ
＝１５２）。

このよ５にして非極性物質の除去された水性相を凍結乾
燥した。これから得られる残留物の量は７６．９ｆであ
った（総量が８５％での７６．９％）。

薄層クロマトグラフィーによりこの淡黄色の粉末はＭＣ
（Ｒｆ　＝　０．１　）と称する極性の主物質、残留す
るモエノマイシンＡおよび副生成物から成ることがわか
った。

この上うにして得られる成分界１、ＭＢおよびＭＣから
成る粗生成物をさらに下記のようにして精製した。

実施例　５ ａ）分解生成物Ｗ、の精製 ４００■の恵、粗生成物をＰ）！７．５に調整した１２
０Ｖのシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ　６０．１５〜４０　ｍ
ｃｍ　）上のクロマトグラフィーに付した（カラム物質
をこの目的のために下記のようＫして前処理したニジリ
カゲルを５００ｄの２　Ｎ　ＨＣ６中１時間攪拌し、次
いで吸引しなからろ去しそして洗浄して中性とした。次
にＩ　Ｎ　ＮａＯＨを用いて−を７．５　Ｋ、調整しそ
して最後に２１の水および５０ＣＩａ／のメタノールを
用いての洗浄を行なった。このようにして前処理した物
質を乾燥しそして一晩１２０℃で活性化した）。クロロ
ホルム／エタノール＝１７１を溶離剤とし【用いた。物
質を６−の溶媒混合物中カラムに充てんしそして各々２
．５１の２１６個のフラクションを集めた。ＴＬＣ分析
（実施例１と同じＴＬＣプレートおよび検出、カラム溶
離剤と同じ溶媒系）を用いて、フラクション１１５〜１
７５を合一し、硫酸ナトリウム上乾燥しそして最後に蒸
発乾固した。２７■の分光学的に純粋なり、が得られた
。

ｂ）分解生成物ＭＢの精製 抽出により得られる５、１？（７）ＭＢ−含有粗生成物
を実施例２で説明した方法を用いてｐＨ７，５に調整し
たら００ｔのシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し
た。中圧クロマトグラフィーシステム（ＭＰＬＣ）を用
いて、クロロホルム／エタノール／水＝４／７／１５を
流速１０ｄ／分および圧力２〜５パールで溶離するため
に用いた。最初の６００ｄの流出の後裔々１０ｄの２２
０個の７ラクシヨンを集め、ＴＬＣに基づいて合一した
。ＭＢを含有する混合されたフラクションの他にフラク
ション９０〜１７０を蒸発させ水に溶解しそして凍結乾
燥した後ｔ２Ｂｆの純粋なＭＢが得られた。

Ｃ）分解生成物ＭＣの精製 抽出物の水性相からの２．２ｆの極性粗生成物を同様に
圧力下でのクロマトグラフィー（ＭＰＬｃ）に付した。

声がｚ５のシリカゲル５００ｆを用い（実施例２の方法
）、モして溶離剤として酢酸エチル／１−プ四ノ々ノー
ル／水＝４１５１５を用いた。充てんする量を１５ｔの
シリカゲルとともにメタノール中で懸濁し溶媒を留去し
そしてこのようＫして処理した保持体をプレカラムに導
入し、次いで２〜４パールの圧力下５ａｌ１分の流速で
溶離した。最初の９４０−の流出の後裔各１０ｔ／の２
５０個のフラクションを分別した。

フラクションをＦＭ８発色剤を用いる酢酸エチル／１−
グロノ５ノール／水＝１／１／１系での薄層クロマトグ
ラフィーおよび２５４　ｎｍでの―′吸収の検出により
試験を行ない、そして合一した。混合されたフラクショ
ンの他にフラクション１２０〜１９０を濃縮して水性相
とし次いで凍結乾燥してｔ３ｔの純粋なＭＣ’を得、こ
れを分光分析した。

実施例　６ モエノマイシンＡから酵素分解により得られる生成物風
およびＭＢの構造の解明 （構造の番号は後記の反応式図に関連する）臥について
の推定構造は１ａであった。１ａの　ＣＮＭＲスイクト
ルに基づいて、この構造が指定される。１＆とジアゾメ
タンの反応によりメチルエステル１ｂが得られ、これは
ＨＮＭＲおよびｇＩマススペクトルにより同定される。

”ＣＮＭＲおよびＦＡＢマススペクトルに基づいて旧の
推定構造は２であった。２の水素添加によりデカ上１口
誘導体３ａが生成し、これをジアゾメタンと反応させる
ことにより５ｂを与えるがこれは以前にすでに別のルー
トでモエノマイシンＡから得られたものである。２　（
ＭＢ）を酵素によって１　ａ　（ＭＡ）に転換すること
ができたということは提唱した構造に矛盾がないことを
支持するものである。

実験の説明 １ａ： ”ＣＮｌｖ［Ｒ（１０Ｑ、６ＭＨｚ　、　ＣＤ５ＯＤ　
）　：　モｘ／’ｙ／　−Ａ／部分：δ＝６７．５（Ｃ
−１）、１２３．５（Ｃ−２）、１４ｔ６および１４１
．８（Ｃ−３およびＣ−７）、３２．３および３２．５
（Ｃ−４およびＣ−５）、１２６．７（（：’−６）、
３５．９（ｃ−８）、４α９（Ｃ−９）、５ＣＪ−７（
Ｃ−１０）、１５１．１（Ｃ−１１）、３３．４（ｃ−
１２）、１２２．７（Ｃ−１３）、１３７．３（Ｃ−１
４）、ｓ６．４（ｃ−１ｓ）、２７．７　（Ｃ−１６）
、１２５．３（Ｃ−１７）、１！１２．２（Ｃ−１８）
、２５．９（Ｃ−１９）、１７．８（Ｃ−２０）、１６
．１（Ｃ−２１）、１０９．２（Ｃ−２２）、２７．３
（Ｃ−２３お！びＣ−２４）、２３Ｊ（Ｃ−２５）。　
グリセリン酸部分：δ＝１７５．９（ｃ−１）、８０．
＋５（Ｃ’−２）、６４．１　（ｃｌ）。

ＣｚｓＨａ６０ａ　　（４４６，６） １ｂ： １ａを■ｐｏｖｅｘ　５０　（Ｈ＋型）を用いて水溶液
中でＨ＋型に転換した。１ａ（Ｈ型、１８．５Ｍ９．０
．０４ミリモル）をメタノール（６ｄ）に溶解し、モし
て０℃で過剰のエーテル性ジアゾメタン溶液を加えた。

反応混合物を０℃で２時間そして２０℃で１２時間維持
し、次いで蒸発乾固した。カラムクロマトグラフィー（
５２の５１ｏ２　、石油エーテル／酢酸エチル２：１）
により１ｂ（３■）が得られた。

’ＨＮＭＲ（８０ＭＨｚ　、　ＣＤＣ２３’）　：δ＝
０．９６　（ｓ　、　６Ｈ。

ＣＨｇ−２３およびｃＨ３−２４）、１６１（ｓ、６Ｈ
）、＋６８（ｓ、３Ｈ）、＋７３（ｓ、５Ｈ）　（４Ｘ
ＣＨ５）、１．９０〜２．１２（アリルＩｓ）、２．６
２（ブロードｄ　、Ｊ＝７Ｈｚ。

ＣＨ２−１２）、５．７８　（８、０ＣＨ５）、！Ｌ６
０〜４．３０　（ＯＣＨ３および０ＣＴ（シグナル）、
４．６２　（ブａ　−）’　ｓ　、　ＣＨ２−２２）、
４．８７〜５．４７　（オレフィン性Ｈｓ）。−Ｃ２９
Ｈ４８０ａ（４６０，７＞、ＭＳ　：　ｍ／ｚ　ｆ’Ａ
　＝４６０　（α０３）、２７１（１０）、２３０（１
９）、１９９（６８）、４３（１００）。

２： １３ＣＮＭＲ（１０ｏ、６ｙｚ　、　Ｄ２０　）　：モ
ーｃ／シ／−／Ｌ／部分：δ＝６８．６（Ｃ−１）、１
２４．５（Ｃ−２）、１４２．９（ｃ−３）、３４．６
（Ｃ−４）、３４．０　（Ｃ−５、Ｃ−１０）、１２ｓ
、１（ｃ−６）、１４５．６（Ｃ−７）、５７．８（Ｃ
−８）、４４．１（Ｃ−９）、１５ｔ４（Ｃ−１１）、
３７．２　（Ｃ−１２）、１２３．５（Ｃ’−１３）、
１３８．３（Ｃ−１４）、４２．２（Ｃ−１５）、２９
．１（Ｃ−１６）、１２６．９（Ｃ−１７）、１３３．
１（Ｃ−１８）、２８．０（Ｃ−１９）、１９．９　（
Ｃ’　−２０）、１８．２（Ｃ−２１）、１１　＋２（
Ｃ−２２）、２９．７（Ｃ−２３，２４）、２５．９（
Ｃ−２５）。グリセリ／酸部分：δ＝１７９．０（Ｃ−
１）、８ｔ８（Ｃ−２）、６８．６（ｃ−３）。−〇２
１１ＨＪ７０７Ｆ（５２＆７）、ＦＡＢ−ＭＳ　（マト
リックス：　ｐＭｓｏ／グリセロール）：　ｍ／ｚ＝６
１５　（Ｍ−５Ｈ＋４Ｎａ）”、５９３　（Ｍ−２Ｈ＋
３Ｎａ）”、５７１（Ｍ−Ｈ＋２Ｎ＆）”、４９２．２
６７．２５１，１８５．１６５．１４３．１１５゜ ３ａ： ２（１４，９■、２８．３マイクロモル）およびＰｔ、
０２（４ｇ９）を通常の条件下Ｈ２雰囲気下でメタノー
ル（３ゴ）および酢酸（５０μｌ）中３日間攪拌した。

触媒をろ去し次いで蒸発させることによリ５　ａ　（１
３，５ＷＱ）が得られた。

−Ｃ２８Ｈ５７０７Ｐ　Ｃ５３６，７）、ＦＡＢ−ＭＳ
　（マトリックス：ＤＭＳｏ／グリセロール：ｍ／ｚ＝
６２５（Ｍ−３Ｈ＋４Ｎａ）”６０３　（Ｍ−２Ｈ＋３
Ｎａ）”、５８１　（Ｗ、−Ｈ＋２Ｎａ）”、５５８（
Ｍ−Ｈ＋Ｎａ）”、５１４．５００，４９８，４６２，
４０４゜３６２．３４０，２９８，２８８，２６６．１
８６．１６４゜１４２．１１５．９３゜ ３ｂ： すべての酸性基を遊離させるために３ａをイオン交換体
（Ｄｏｗｅｘ　５０　、Ｈ＋型）を用いて水溶液中処理
した。樹脂をろ去し、次いで溶液を凍結乾燥した。この
よ５１７Ｃして処理した試料８６５■（１５，９マイク
ロモル）をメタノール（２Ｎｌ）中溶解した。過剰のエ
ーテル性・ジアゾメタン溶液な０℃で加えた。混合物を
０℃で２時間そして２０℃で１２時間放置した。蒸発さ
せカラムクロマトグラフィー（５ｆのＳｉＯ２，石油エ
ーテル／酢酸エチル１：１）Ｋより３ｂ（４，０ダ）が
得られた。

’ＨＮＭＲ（８０２０ＭＨｚ　、　ＣＤＣｌ２　）　：
δ＝１７５（ｓ。

ＯＣＨ３および２ｄ　、　３．Ｔ、、　＝１０および１
２Ｈｚ。

Ｐ（ＯＣＨ３）　２）、３．２０〜４．４０　（ＯＣＨ
２およびＯＣＨ多重線）、−Ｃ１３Ｈ６ｓ０７Ｐ（５７
８，８）、ＭＳ　：　ｍ　／　ｚｅ’Ａ＝　５６３（０
，１、Ｍ−ｃＨｘ）、５１９（１、Ｍ−ＣＯＯＣＨ３）
、４５２（１、Ｍ−（ＣＨ３０）　２Ｆ（０）ＯＨ）、
３８１（３、Ｍ−Ｃ１４Ｈ２９，２５／ｆ−ヒＰロモエ
ノシノール部分のＣ−８およびＣ−９の間の結合の分裂
）、２２９（８、ａ）、２１２（６、ｂ）、１２７（２
０）、５７（１００）。

実施例　７ 開裂生成物の抗生作用活性 抗菌活性を決定するためＩｃ　Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎ
ｔｏｎ寒天を用いて寒天希釈試験を行なった。（Ａｎｔ
、１ｂｔｏ−ｔｌｅｓ　ｉｎ　Ｌａｂ、ｏｒａｔｏｒｙ
　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、　Ｖ、　Ｌｏｒｉａｎ、　Ｅｄ、
。

Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ　（１９８６年）１〜１０頁）。

最小阻害濃度（μ？／ｌｄ　） Ｓｔｒ、　　　　　５ｔａｐｈ、　　　　Ｅ、　ｃｏｌ
ｉｐｙｏｇｅｎｅｓ　　　　　　　ａｕｒｅｕｓ７７　
　　　　５ｒ１３　　　　　ＤＣ２）１００　　　　　
）１００　　　　：＞１００３．１２５　　　　　２５
　　　　　）１００＞１ｏｎ　　　　　＞１ｏｏ　　　
　＞１ｏ。

が開示したアッセイ ビｆ中間体を用いるＩｚａｋｉ （Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２４３、年））Ｋよ
り行なわれた。

このことよりモエノマイシンＡ がトランスグリコシラーゼ反応を そして開裂生成物ＭＢがこの酵素な ることがわかった。

５１８０〜３１９２（１９６８ （２０μｆ／ｌ／　） ５２．７％阻害し、 ３２．９％凪害す

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）バチルス種ＤＳＭ４６７５その変異体および突然変
   異体。 ２）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表わされる化合物。 ３）式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒ＾１は水素またはホスホノ基であり、そして
   Ｒ＾２は直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和の（Ｃ＿
   ５〜Ｃ＿５＿５）−アルキル基である）で表わされる化
   合物。 ４）アルキル基が炭素原子１０〜３０の鎖長を有する請
   求項３記載の化合物。 ５）アルキル基が炭素原子２０〜２５の鎖長を有する請
   求項３または４記載の化合物。 ６）下記の特徴、すなわち ホスホグリコシド結合におけるホスホグリ コリピド抗生物質の開裂 最適ｐＨ８．０〜８．５ 最適温度４５〜５５℃ Ｋｍ値４〜１０μモル（基質としてのモエノマイシンＡ
   に基づいて） を有するモエノマイシナーゼ。 ７）請求項３記載の化合物を脱リン酸化し、３７℃より
   上の温度で、そしてｐＨが５より低いｐＨで減少する時
   不活性化されるバチルス種ＤＳＭ４６７５由来の酵素。 ８）モエノマイシンＡをバチルス種ＤＳＭ４６７５また
   はそれから得られた酵素単離物とインキュベートするこ
   とからなる請求項２記載の式（ I ）の化合物の製造方
   法。 ９）ホスホグリコリピド抗生物質をバチルス種ＤＳＭ４
   ６７５またはそれから得られた酵素単離物とインキュベ
   ートすることからなる請求項３記載の式（II）の化合物
   の製造方法。 １０）インキユベーシヨンがｐＨ５．５〜８．５で行な
   われる請求項８または９記載の方法。