JPH02142496A - 光学活性２−ヒドロキシ‐４−フェニル酪酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸
の製造方法に関する。

光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸は、種々の
医薬品の原料として有用である。たとえば、その（Ｒ）
体のエチルエステルは、アンジオテンシン交換酵素の阻
害剤として、有効な血圧降下剤であるシラザプリルの原
料となる（Ｊ、　Ｃｈｅｎ、　Ｓｏｃ、、　Ｐｅｒｋｉ
ｎ　Ｔｒａｎｓ、　　１．１０１１（１９８６））。

〈従来の技術〉 従来、光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の製
造方法としては、あらかじめ有機合成的にラセミ体の２
−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸を合成したのち、ｌ−
メントールのエステルに誘導し、光学分割する方法（Ａ
ｎｎ；　Ｃｈｅｒａ。

２０．９７（１９５６））および同じくラセミ体の２−
ヒドロキシ−４−フェニル酪酸を光学活性ボルニアミン
で光学分割する方法（Ｃｈｅｎ。

Ｂｅｒ、　、旦、６７１（１９５６））などが知られて
いる。

〈発明が解決しようとする課題〉 しかし、これらの分割剤を用いた光学分割法は操作が煩
雑であり、工業的に有利な方法とはいい難い。

く課題を解決するための手段および操作〉本発明者らは
、光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の製造方
法を種々検討した結果、微生物の有する酸化力および還
元力を利用し、１種の微生物で、ラセミ体２−ヒドロキ
シ−４−フェニル醋酸を、酸化反応で２−オキソ−４−
フェニル酪酸と光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル
醋酸にし、次にエネルギー源を加えて還元反応で２−オ
キソ−４−フェニル酪酸を光学活性２−ヒドロキシ−４
−フェニル酪酸へ有利に交換し得ることを見出し、本発
明に至った。微生物を利用してラセミ体２−ヒドロキシ
−４−フェニル酪酸から光学活性２−ヒドロキシ−４−
フェニル酪酸を蓄積させることは従来知られておらず、
かつ行われていない。

本発明は、ラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸
を、光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸へ交換
する能力を有し、コリネバクテリウム属、ブレビバクテ
リウム属、アースロバクター属に属する微生物より選ば
れた少なくとも１種の微生物の培養物、菌体またはその
処理物をラセミ＃２−ヒドロキシー４−フェニル酪酸に
作用させて、光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪
酸を生成蓄積せしめ、反応液から光学活性２−ヒドロキ
シ−４−フェニル酪酸を単離採取することを特徴とする
光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の製造方法
である。

以下、本発明の構成を詳細に説明する。

本発明においては、ラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェ
ニル酪酸を光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸
へ交換する能力を有し、コリネバクテリウム属、ブレビ
バクテリウム属、アースロバクター属に属する微生物よ
り遇ばれた、少なくとも１種の微生物を用いる。

かかる微生物の具体例としては、たとえば、コリネバク
テリウム・グルタミカムＡＴＣＣｌ３０３２、コリネバ
クテリウム・アセトアシドフィラムＡＴＣＣ１３８７０
、ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタムＡＴＣＣ
１３８６９、ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ１
３８２６、アースロバクター・シトレウスＡＴＣＣ１１
６２４などが挙げられる。

これらの微生物の培養には、通常これらの菌が責化しう
る有機および無機の炭素源、窒素源およびビタミン、ミ
ネラルなどを適宜配合した培地を用いる。培地のＰＨは
、通常ｐＨ３〜９が好ましい、温度は通常２０〜４０℃
で、菌は通常４〜２０日間、好気的または嫌気的に培養
すればよい。

本発明の反応においては、これらの微生物の培養物、菌
体またはその処理物を用いる。好ましくは菌体懸濁液ま
たは菌体処理物を用いる。

ここでいう菌体懸濁液とは、培養して得られた菌体を遠
心分離取得したもので、菌体処理物とは、培養して得ら
れた菌体を超音波処理したものや、たとえば公知の方法
によりアクリルアミドゲル担体などに固定化したものが
挙げられる。

本発明の反応系には、通常エネルギー源を添加する。

エネルギー源としては、使用する菌株により異なるが、
一般的にはグルコース、フラクトース、シュークロース
、グリセロール、ソルビトールなどの糖質が用いられる
。

反応基質であるラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェニル
酪酸の反応液中での濃度は、通常０゜１〜５％程度用い
ることができる。添加方法に関しては、−括あるいは分
割添加のどちらでもよい。

反応温度は、通常２０〜４０’Ｃ１好ましくは２５〜３
５゛Ｃである。反応液のρＦ【は、通常４０〜８．５、
好ましくは７．０〜９．０に保たれる。

反応時間は反応温度によって異なるが、通常３０°Ｃで
３０〜９０時間である。

反応方式としては、培養終了液に基質を添加し、のちの
適当な時期にエネルギー源として糖質を添加し、好気的
に振とうする方法と、菌体懸濁液あるいは菌体処理物に
基質を添加し、のちの適当な時期にエネルギー源として
糖質を添加し、好気的に振とうする方法があり、どちら
も採用可能であるが後者の方が良好な結果を与える。

かくして、本発明に反応により、ラセミ体２−ヒドロキ
シ−４−フェニル酪酸から光学活性２−ヒドロキシ−４
−フェニル酪酸が生成する。

通常は光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸とし
て（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸が生成す
る。

かくして、生成した光学活性２−ヒドロキシ−４−フェ
ニル酪酸を反応液から単離するには、一般的な分離精製
方法を用いればよい、たとえば、反応液から遠心分離に
よって菌体などの不溶性物質を除去したのち、反応液の
ＰＨを酸性に調整し、酢酸エチルなどで抽出し、脱水後
、減圧乾固あるいは再結晶を行うことにより目的物を単
離採取できる。

〈実施例〉 以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

なお、実施例中、２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の
生成量およびＲ体、８体の比率は高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）で分析した。生成量分析はＯＤＳカ
ラムを用い、Ｒ体、８体の比率は、住化カラムＳＵＭＩ
ＰＡＫ　　０Ａ−３０００（住友化学工業株式会社）を
用いた。

また、第１表中のＲ％は生成した２−ヒドロキシ−４−
フェニル酪酸中の（Ｒ）体の割合を表わす。

実施例１ グルコース４％、ポリペプトン２％、酵母エキス０．５
％、リン酸二水素カリウム０．５％よりなる液体培地を
苛性ソーダ水溶液でｐＨ７，０とし、１８ｍ＋φ試験管
に５ｍｌ入れ、オートクレーブ中１２０℃で２０分間加
熱滅菌した。ここに第１表に示す菌株を斜面培地から１
白金耳接種し、２８℃で６３時時間上う機上で好気的に
培養した。その後、遠心分離により菌体を分離し、水で
１度洗浄して菌体を調整して、得られた菌体を１０ｔ／
１のラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸水溶液
５ｍｌの入った１８ｍｍφ試験管に添加し、２８℃で２
０時間ｐ　Ｈ７，５で振とうしたのち、グルコース２５
０■を添加し、さらに４０時時間上うし、反応した。こ
のようにて得られた反応液を遠心分離し、その上清をＨ
ＰＬＣで分析した結果を第１表に示す。

第　　１　　表 ※ＨＰＢ＝２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸実施例２ 実施例１と同様の液体培地を坂ロフラスコ１０本へ１０
０ｍ１ずつ分注し、オートクレーブ中１２０℃で２０分
間滅菌しな、ここに斜面培地からコリネバクテリウム・
グルタミヵム（ＡＴＣＣ１３０３２）を１白金耳接種し
、２８℃で６３時間好気的に培養した。その後、遠心分
離により培養液１ｉ！分の菌体を分離し、水で１度洗浄
して菌体を調整して、得られた菌体を１５ｔ　／　１の
ラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェニル醋酸水溶液５０
０　ｍｌの入った５１のエーレンマイヤーフラスコに添
加し、２８℃で２０時間ｐ　Ｈ７，５で振とうしたのち
、グルコースを２５ｇ添加し、さらに４０時時間上うし
な０次に、反応液から遠心分離によって菌体を除去し、
５００ｍ１分の反応液を約１００ｍ１に濃縮し、ｐＨを
２．０に調整し、酢酸エチル１００ｍ１で３回抽出操作
を行い、無水硫酸マグネシウムで脱水後、減圧乾固し、
トルエンで再結晶することにより、比旋光度〔α〕甘せ
８．４１　（Ｃ＝Ｉ　　ＢＴＯＨ）を有する（Ｒ）−２
−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸を５．０１ｇ得た（単
離収率８０．１％）。

〈発明の効果〉 本発明によれば、ラセミ体２−ヒドロキシ−４−フェニ
ル酪酸から光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸
を微生物により、効率よく有利に製造することができる
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ラセミ体の２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸を光学活
   性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸へ交換する能力を
   有し、かつコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔ
   ｅｒｉｕｍ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａ
   ｃｔｅｒｉｕｍ）属またはアースロバクター属（Ａｒｔ
   ｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物より選ばれた少
   なくとも１種の微生物の培養物、菌体またはその処理物
   を、ラセミ体の２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸に作
   用させて光学活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸を
   生成蓄積せしめ、反応液から光学活性２−ヒドロキシ−
   ４−フェニル酪酸を単離採取することを特徴とする光学
   活性２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸の製造方法。