JPH02113883A - 培養された菌株による農作物へのうどん粉病の蔓延・感染の制御方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野コ 本発明は害虫の生物化学的制御（抑制）に関する。さら
に詳しくは、うどん粉病（以下、ＰＭＤという）の原因
となる微生物（病原体）の重複寄生生物（二次寄生体）
　（ａ　ｈｙｐｅｒｐａｒａ、５Ｈｅｏｒ　ｔｈｅ　ｃ
ａｕｓａｔｉｖｅ　ａ＋ＩｃｒｏｏｒｇａｎｌｓＬ１１
）によるＰＭＤの生物化学的制御に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］ 近年、農作物の害虫に対する生物化学的制御についての
関心が高まりつつある。すなわち、従来の化学的殺虫剤
の環境に対する悪影響に鑑み、害虫に対して敵対する微
生物の利用に関心が高まってきている。そのような制御
は対象物つ（特定され、かつ環境汚染がない点でを利で
ある。

ＰＨＤは各種タイプの菌類により世界中にわたって発生
している植物の病気であり、該菌類は各種の樹木、花植
物、野菜、果実植物および以下において集合的に「農作
物」といわれる各種の口］畑（ｆ’　１ｅａｄ）の穀物
に感染しうる。ＰＭＤによる感染は、葉、芽、若い技、
花 （ｉｎｆ’１ｏｒｃｓｃｅｎｃｅｓ）、果実およびさら
には花の表面に白色またはうすい灰色の粉末またはフェ
ルト状物が成長することによって外見的にわかる。

多くのばあい、ＰＭＤに感染することにより、農作物の
収穫の減少および穀物の品質の低下が招来される。

今日まで、ＰＭＤに敵対する微生物は見出されていない
。ＰＯＤの病原体の二次寄生体を利用する技術が提案さ
れている（ウオルフーデイーターーフィリンブ（Ｗｏｌ
ｒ−Ｄｌｅｔｅｒ　Ｐ旧１ｉｐｐ）およびゲルト・クル
ーガ−（Ｇｅｒｄ　Ｃｒｕｇｅｒ）　、ジャーナル・オ
ン・プラント・デイジ−シーズ争アンド・プロテクショ
ン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒＰｌａｎｔ　Ｄｌ、５ｅａｓ
ｅｓａｎｄ　　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）８Ｂ（３／４）
　　、　１．２９−１４２　　（１９７９））　　。

しかし、本発明以前に分離されたすべての二次寄生体は
、田畑などの野外または温室の農作物中のＰＭＤの制御
に対し効果が不充分である。

本発明の目的は、ＰＭＤの制御に使用しうるＰ）ＩＤの
病原体の二次寄生体の純粋培養株（ｐｕｒｅｃｕｌｔｕ
ｒｅ）を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明にしたがった菌種アムベロミシス　キス力リス（
ＡｍｐｅｌｏＩＢｙｃｅｓ　　ｑｕｉｓｑｕａｌｌｓ）
に属する新規な菌株が分離され、Ａ　Ｑ　１．０と銘名
された。

ＡＱＩＯはＰＭＤの病源閑の二次寄生体であることが発
見された。さらに本発明にしたがった八〇ＩＯの分生子
（ｃｏｎｉｃＨａ＞は強力な抗ＰＯＤ剤であり、該剤は
農作物中のＰＭＤと戦うために効果的に使用することが
でき、それにより長期間にわたって切望されていたこと
が初めて達成されることが見出された。

このように本発明によれば、ＡＱＩＯ株の純粋培ｉ？株
が提供される。このＡＱＩＯ株はバストウール研究所の
微生物株保存機関（コレクシオン・ナショナール・ドウ
・クルトゥール・ドウ・ミクロオルガニスム（Ｃｏｌｌ
ｅｃｔｉｏｎ　Ｎａｔｌｏｎａｌｅ　　ｄｅＣｕｌｔｕ
ｒｅ　ｄｅ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｌｓｍｅｓ　　−Ｃ
ＮＣＭ））に１９８８年１０ＪＪｔｏ日に寄託され、ｌ
−１１０７という名称が付外された。

ＡＱＩＯの純粋培養株は＾Ｑ１．０株の突然変異株をう
るために種々の放射性物質、突然変異誘発性化学物質（
ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａ＋ｕｔａｇｅｎｓ）あるいはγ線
かＸ線の照射による制御された突然変異処理を受けても
よい。該ＡＱＩＯ株の分生子はまたＰＭＤの原因となる
微生物の拮抗物質（ａｎｔａｇｏｒ＋ｌ５ｔ）であり、
それはより高いボテンシ−（ｐｏｔｅｎｃｙ）　、すぐ
れた再生率、貯蔵中の改良された感染性などをもってい
る。

分生子は菌微生物の無性生殖再生胞子 （ａｓｅｘｕａｌ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔ！ｖｅ　５ｐｏ
ｒｅｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇａｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｌｓ
Ｉｌｌｓ）である。ＡＱＩ　Ｏの分生子はＡＱＩＯの純
粋培養株から容易に実質上純粋な形でえられる。

このように、本発明はまたＡＱＩＯの分生子の本質的に
純粋な水性懸濁液を提供する。

さらに、本発明はＡＱＩＯまたはそれの突然変異体の分
生子の有効量からなる水性抗ＰＭＤ組成物を提供する。

もし必要ならば、前記分生子と植物薬理学上（ｐｈｙｔ
ｏｌｏｇｊｃａ、Ｉ　Ｉｙ）適合しつるたとえば界面活
性剤のような添加物を含有しうる。

さらにまた、本発明は農作物に有効量のＡＱＩＯまたは
その突然変異体の分生子を適用することよりなる農作物
におけるＰＭＤを制御する方法をも提供する。そのよう
な方法は定期的に繰返されることによって、ＰＭＤの病
原体を破壊することに対し、その増殖の抑制に対し、ま
た将来のＰＭＤの蔓延防止に対して効果がある。

本発明のＰＭＤの制御は田畑などの野外または温室にお
いて有効でありうる。予防措置的適用のために、分生子
はＰＭＤの蔓延（Ｉｎｒｅｓｔａｔｌｏｎ）の開始まで
はその活性力を温存し７、そののち直ちにその非常なる
寄生活力（ｈｙｐｅｒ−ｐａｒａｓｌｔｌｃａｃｔｉｖ
ｉｔｙ）を発揮するようフォーミュレートされるべきで
ある。

［実施例］ ■　培養株の保存および貯蔵 ＡＱＩＯの純粋培養株（培養菌）は、菌の成長および増
殖に適した培地中でしばらくの間保存さねでもよい。そ
のような培地の一例として、小麦ぬかの抽出物からの寒
天培養基（ａｇａｒｓｕｂｓｔｒａｔｅ）があげられる
。

ＡＱＩＯ・による栄養の消費および老廃物の分泌のため
に、ＡＱＩＯまたはそれにより生成された分生子の細胞
からなる培養菌のサンプルは、定期的に、たとえば３〜
４週間に１回、新しい寒天培養基（培地）に移されるべ
きである。もし培養菌が寒天培養基で成長（増殖）すれ
ば、微生物により製造された分生子は収穫されることが
でき、そして新しい寒天培養基に接種されることができ
る。分生子の収穫は寒天培養基に蒸留水を加えることに
より好適に実施することができる。浸透圧により成熟し
た分生子は上澄み液の中に溶けこんでいき、そしてそこ
で分生子は容易に収集される。

しかしながら、新しい培地への分生子の定期的移送は、
突然変異に対するストレスを高め、そしてその結果培養
菌の遺伝子浮動（ｇｅｎｅｔｉｃｄｒｉｆ’ｔ）が起こ
りうる。このように、このような培養菌の保存は主とし
て短期間の保存に適している。

約６月までの貯蔵期間のために、ぬか抽出寒天（ＢＥＡ
：ｂｒａｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｇａｒ）などのような
ソリッドマトリックス」二のＡＱｌ、０細胞の単層（ｍ
ｏｎ。

１ａｙｅｒ）は４℃に保持される。

発酵（下記参照）によりえられる分生子濃度が約１０７
分生子／ｍｌからなる水溶液中のＡＱＩＩ）分生子の懸
濁液は、より長い期間、すなわち約１２月間貯蔵されつ
る。分生子はおそらく他の微生物の成長を抑制する抗生
物質を分泌し、そして抑制が効果的になるようにするた
めに、特定されたオーダの分生子の濃縮が要求される。

長期間の貯蔵は、分生子を凍結乾燥することによっても
達成されうる。凍結乾燥された分生子は延長された貯蔵
期間をこえて生存能力（ｖｉａｂｌ　ｌ　ｔｔｙ）を保
持する。

■　発酵 抗ＰＭＤ組成物の調製用として大量のＡＱＩＯをうるた
めには発酵が必要とされる。発酵はジャガイモのだし汁
からなる流体培地（Ｉｌｑｕｌｄ　ｏ＋ｅｄｌａ）（該
培地は煮たジャガイモの溶解性抽出物である）、トウモ
ロコシのひたし汁（該汁は澱粉工業におけるトウモロコ
シ種を煮こんだのちに残っているシロップである）、綿
のひき割抽出物（綿実の粉末の煮込後の抽出物）、乳し
よう、小麦ぬか、もしくはそれらの混合物などのような
流体培地を用いて行なってもよいし、または半固体培地
（ｓｅｍｉ−ｓｏｌｉｄ　ｍｅｄｌｕｍ）　、すなわち
湿った微粒子固体基材、たとえばバーミキュライト（ｖ
ｅｒｌｃｕｌｌｔｃ）およびピート　−モス（ｐｅａｔ
−ａｏｓｓ）などのような粉末キャリア内またはモロコ
シ、小麦、もしくは大麦の粒などのようなｌりっだ粉体
マトリックス内で行なってもよい。

液体発酵はＡ　Ｑ　１．、　Ｏのサンプルを増殖培地に
接種し、かつ培地を充分な時間好気培養することにより
行なわれる。発酵のための最適な温度は約２５℃であり
、そして最適なｐＨは約６．５〜約８．０である。発酵
は撹拌のもと、たとえばフラスコを撮りながら行なわれ
るのが好ましい。そのような最適の条件のもとでは、７
〜９日間で約１．５〜２．ＯＸ　１０７分生子／　ｍｌ
の割で発酵させることができる。

発酵させるための好適な培地は、ジャガイモのたし汁で
ある。この培地中では、７〜９日間の培養後の分生子の
生産量は前記の他の培地のそれの約１０倍である。しか
しながら、前記されていない、乳しようとトウモロコシ
だし汁のｍ対体積割合を２＝１としたトウモロコシだし
汁を追加された乳しよう培地においても分生子の同様の
生産口が達成されることが見出された。

これに対して本発明により、ある条件のもとに八〇ＩＯ
が成長しそして暗所においてよりよく増殖することが見
出された。それゆえ、本発明では、ＡＱＩＯの発酵はと
きおり暗所でなされるのが好ましい。

半固体発酵は前記の特定された多数のキャリアトにおい
て行なってもよい。そのような発酵後に収穫されること
ができる分生子の最終的数瓜は、液体発酵によりえられ
る量よりも多いが、発酵時間は、キャリアの形式にもよ
るが、通常はより長い。

■　抗ＰＭＤ組成物の発酵 ＡＱＩＯ分生子は、濃度が約１０６分生子／　ｍｌであ
る水性組成物をスプレィすることにより一般的に農作物
に適用される。

効果的な処理のために、ＡＱＩ　Ｏの分生子の水性組成
物は、ＰＭＤに侵される葉および花、果実、ｉＥなどの
ような他の植物型骨の全表面をカバーするように散布す
べきである。水が葉などのようなつるつるした表面にス
プレィされるときは、水滴が形成されやすいので濡れが
不充分となる。

そのため、本発明の水性抗ｐＨｌＤ組成物は、界面活性
剤や湿潤剤、たとえばシンナーなどのような添加物を含
をしているのが好ましく、そして該添加物は典型的には
約０．２重量％の量で添加されている。

本発明の抗Ｐ）４Ｄ　ＡＱＩＯ微生物はＰＭＤの病原体
の二次寄生体であるので、組成物中に栄養素を添加する
必要はない。しかしながら、ときどきそのような栄養素
を添加することは望ましく、そして微生物を長期間生育
させておくことが必要なプロフィラフティック（ｐｒｏ
ｐｈｙｌａｃｔｌｃ）処理に使用されるようなばあいに
は、分生子の生育の維持を助けるプロテクタントを添加
することもまた望ましい。

以下にいくつかの特定の態様を記述するが、本発明はこ
れらに限定されるものではなく、特許請求の範囲内で数
々の修飾が可能である。

実施例１　（ＡＱＩＯの培養） ＡＱＩＯはＢＥＡ培養基を含むプレート（ｐｌａｔｅ）
上で培養された。

ＢＥＡの調製は次のように行なった。すなわち、１００
ｇの小麦ぬかが１ｇの蒸留水に溶解され、その溶液が小
麦のぬかを抽出するために２０分間オートクレーブ中で
滅菌された。そののち２０ｕｍ穴のゲージフィルターを
使ってン濾過された。オートクレーブ処理とそれに続＜
ｒｐ過ののち、その溶液が１１！になるまで水が加えら
れ、２０ｇのモルト抽出物、２ｇのＤｉ、−アスパラギ
ンおよび２０ｇの寒天がその溶液に混合された。そのの
ち、その溶液はオートクレーブ処理後寒天平板上に注が
れ冷却された。

３週間の培養ののち、各プレートに１０ｍ１の蒸留水が
ＩＪＯえられ、浸透圧のゆえにその熟成した分生子は上
澄み液の中へ排出され、集められた。

収瓜はおよそ１０７〜１０’分生子／ｍｌであった。

えられた分生子はそののち再び新しいＢＥＡプレートに
再接種され凍結乾燥後４℃で保存されるか、または発酵
に使用されるかした。

実施例２　（ＡＱＩＯの保存） （田ＡＱＩＯ単層の保存 ＡＱＩＯ分生子は実施例１のように準備されたＢＥＡプ
レートートに接種され、＾Ｑ１．Ｏの単層かえられるま
で、１４日間培養された。寒天プレートは４℃で保存さ
れたが、少なくとも６力月間は細胞の生存能力が減少し
なかった。

山）分生子懸濁液の保存 ＡＱｉ　Ｄの１３ＥＡプレート上への接種とその収穫は
実施例１と同様に行なわれた。およそ１０７〜１０８分
生Ｔ−／　ｍｌを含む分生子の懸濁液は４℃で■２２力
間保存されたが、その活性の明白な低下は認められなか
った。

この期間中、他の菌や細菌による汚染は観察されなかっ
た。多分分生子調製中に分泌された抗生物質によるため
であろう。

＋Ｃ１分生子の凍結乾燥 １０６分生子／　ｍＩ　（７）懸濁液は１２０００　ｇ
テ１．０分間遠心分離された。そののち、えられた固形
物は１０％の脱脂乳（ｓｋｉｍｍｅｄ　ｍ１ｌｋ）で再
懸濁された。

そののち、懸濁液はドライアイス−アセトン中で凍らさ
れ、凍結乾燥されたのち、−４℃で保存された。再水和
化（ｒｅｈｙｄｒａｔ　ｔｏｎ）は凍結乾燥された分生
子に滅菌水を加えることにより行なわれた。

３力月後、ＢＥＡプレートの上に再プレート（ｒｅｐｌ
ａｔｅａ）されたとき、活性の低下の徴候は本質的に認
められなかった。

実施例３ （ａ）ＰＴｉ々の増殖培地（ｇｒｏｗｔｈ　ＩＩｅｄｉ
ａ）中での流体発酵（ｌｌｑｕｌｄ　ｆ’ｅｒＩＩｅｎ
ｔａｔｉｏｎ）約１０６分生子／　ｍｌを含む１００ｍ
１の分生子の試料は、それぞれ、ｐＨが６．５〜８．０
の間の発酵培地１ｇが入ったフラスコの中に接種された
。培尼温度は２５℃であった。培養中フラスコは振盪さ
れ、９日後分生子の収量が測定された。結果は第１表の
とおりであった。

Ｃ以下余白コ 前記結果から、一種の原料を用いた培地での最高収量は
、２０％のジャガイモ抽出物でえられた。しかし２０％
の乳しようとＣ９Ｌの組み合わせのばあいは、さらに高
い収量かえられた。

（ｂ）ＡＱＩＯの成長についての光の効果１０５分生子
／ｍｌを含むＡＱＩＯ分生子の懸濁液の試ｔ、１が、１
つの実験ではベトリ皿の中のＢＥＡ基質の」二に接ｆ−
ｉ（ｓｅｅｄ）され、他の実験ではジャガイモ／ブドー
糖（ＰＤ）液状培地の中に接種された。また別の実験で
は、液状のショ糖培地の中に接種された。ＡＱｌ、Ｏの
培養株のいくつかは、培養中、日中は日光に露出し、一
方残りのものについては、アルミ箔で覆って暗くした。

温度とｐＨは前記のごとくであった。１０〜１４日の培
養後、分生子の収量が測られた。結果は第２表に示す。

Ｅ以下余白］ 前記の結果から、前記条件下におけるはるかによい収量
は、ＡＱＩＯを暗所で培養したばあいに達成されること
は明らかである。

（Ｃ）半固体発酵 さとうもろこしの穀粒が約ｌｏｇ分生子／　ｍｌを含む
ＡＱＩＯ分生子懸濁液と混ぜられた。この混合物はそれ
から暗箱中で培養された。

２０口間の培養ののち、６Ｘ１．０７分生子／　ｍｌが
えられた。

実施例４　　（ＡＱＩＯ分生子のフォーミュレーション
）（ａ）野外テスト 野外のかぼちやがＰＭＤに感染させられた。

０．２５ニ一カー地区の植物はそれぞれ約４０株のグル
ープに分けられ、それぞれのグループは下記の処理のう
ちの１つを受けた。

１、実施例３（田で第１表の増殖培地山）にしたがって
発酵させてえられたＡＱＩＯ分生子の水性懸濁液を散布
。全体で４回、間隔を置いた散布が行なわれ、それぞれ
は前回の散布から５日以内に実施された。

２、下記の市販されている化学殺菌剤の散布：ＡｒＵｇ
ａｎ（ヘキスト社、西独（ＦＲＧ）　）、Ｍａｇｅｎ　
（日本ソーダ■、日本）　、５ａｎ６１．９　（サンド
社、スイス）　、０ｆｌｒ　（チバガイギー社、スイス
）。それぞれのばあい、前記（１）のばあいと同様に、
間隔を置いて３回散布が行なわれた。

３、Ｔｉ１ｔ（チバガイギー社、スイス）の散布。

この薬品は体組織の殺菌剤（３ｙ５１ｅｍｌｃｆ’ｕｎ
ｇｔｃｉｄｅ）である。（１）のばあいと同様に、全体
で３回の散布が行なわれた。

４、無処理のコントロール かぼちゃは２日ごとに手で採取され、４つのグループの
収穫は別々に保管され、それぞれは第１、第２等級の品
質に分けられ、計量された。

結果はつぎの第３表にまとめられている。

［以下余白コ 乾燥あるいは暑い天気であっても、ＡＱＩＯがＰＭＤに
対して良好な寄生性（ｂｙｌ）ｅｒｐａｒａｓｌｔｉｓ
ａ＋）を示すことが、葉の試料の顕微鏡観察で証明され
たようにシーズンを通して観察された。

最高の収穫はＴｉ　Ｉｔの使用時にえられた。この化合
物は新しい化学殺菌剤であって、これまでにまだ耐性菌
が現われていない。ＡＱＩＯはその他の殺菌剤と同様の
収量を与えた。そして処理をしなかったものに比べて存
意によい結果を与えた。

（１１）マンゴ樹でのＰＭＤの抑制 比イスラエルのボラン高原にある有機農場の３６本のマ
ンゴの木は９本づつの４つのグループに分けられた。２
つのグループの木は本発明によるＡＱＩＯ組成物で処理
された。この２つのグループには異なった反復散布割合
（ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｒａｔｅ）が用いられた。第３
のグループは無処理のコントロールとして提供され、第
４のグループはａ機農業でＰＭＤに対して通常の処理で
あるイオウによる処理を行なった。ＰＭＤ抑制の程度は
、１本ごとの木の全果実の平均重量を決めるのと同じよ
うに果実の数をかぞえることで評価された。結果はつぎ
の第４表に示されている。

［以下余白〕 ＡＱＩＯ処理の木からの果実の収量は処理をしなかった
対照よりも有意に高かった。そしてまた通常のイオウ処
理にもまさっていた。

［発明の効果］ 本発明によるとＡＱＩＯまたはその突然変異株の純粋培
養株かえられ、これらを用いるとを効な生物化学的抗う
どん粉病剤が調製され、うどん籾屑の感染および蔓延が
制御されうる。

持 許

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　菌株ＡＱ１０（ＣＮＣＭ、Ｉ−８０７）の純粋培養
   株。 ２　菌株ＡＱ１０（ＣＮＣＭ、Ｉ−８０７）の分生子の
   実質的に純粋な水性懸濁液。 ３　菌株ＡＱ１０（ＣＮＣＭ、Ｉ−８０７）の突然変異
   株の純粋培養株。 ４　請求項３記載の突然変異株の分生子の実質的に純粋
   な水性懸濁液。 ５　有効量の菌株ＡＱ１０（ＣＮＣＭ、Ｉ−８０７）ま
   たはそれの突然変異株の分生子、および必要に応じて前
   記分生子と適合しうる植物薬理学上許容しうる少なくと
   も１種の添加物を含むことを特徴とする抗うどん粉病水
   性組成物。 ６　添加物が界面活性剤である請求項５記載の組成物。 ７　農作物に有効量の菌株ＡＱ１０（ＣＮＣＭ、Ｉ−８
   ０７）またはそれの突然変異株の分生子を適用すること
   からなる、野外または温室における農作物へのうどん粉
   病の蔓延および感染を制御する方法。