JPH01502986A

JPH01502986A - 人体のソマトメジン担体蛋白質サブユニットとこれらの製法

Info

Publication number: JPH01502986A
Application number: JP63503623A
Authority: JP
Inventors: スペンサー・エメラルド・マーチン
Original assignee: セルトリックス　ファーマシュウティカルズ，インク
Priority date: 1987-04-06
Filing date: 1988-03-31
Publication date: 1989-10-12
Anticipated expiration: 2012-09-03
Also published as: EP0308500A1; DK677688D0; IL85983A; EP0308500B1; DK677688A; ATE90690T1; CA1340295C; DE3881801D1; AU627423B2; DE3881801T2; ES2058341T3; ZA882407B; EP0294021A1; IL85983A0; WO1988007863A1; AU1702088A; JP2648951B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】人体のソマトメジン担体蛋白質サブユニットとこれらの製法〔関連出願に対する参考〕本出願は１９８７年４月６日出願の合衆国特許出願の出願番号０７１０３４．８８５の一部継続出願である。〔連邦政府公認の調査と開発の下に行われた発明の権利に関する説明〕合衆国政府は本発明において支払い済みのライセンスを有しており、かつ、”Ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄＨｕｍａｎ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ＋　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　５ｅｒｖｉｃｅｓ、’（保健・人間業務者の国立児童保健９人間間発研究所）が付与した付与条件、番号５ＳＳ−Ｃ（３１１Ｒ４３）１０２１３２３−０１　ＥＮＧによって規定される合理的な条件で特許保有者が他の者に許可を与えることを要求する権利を、限られた事柄について、保有している。〔発明の分野〕本発明は人体のソマトメジン担体蛋白質サブユニ７）ならびに、これらの製法に関するものである。更に詳しくは、本発明はインシュリン様の成長要素としても公知の人体ソマトメジン様のポリペプチドに結合する担体蛋白質サブユニットに関するものである。更に、本発明は本質的に純粋な人体ソマトメジン担体蛋白質サブユニットにも関するものである０本発明はまた、人体の血漿からかような担体蛋白質サブユニットを調整する方法にも関するものである。この方法は、一連の各種のクロマトグラフィ処理による人体の漿液部分からのＣｏｈｎ　Ｎ’−１の調整に関係している０本発明の担体蛋白サブユニットと方法とは各種の治療上９診断上、そして他の有用な応用に用いられることができよう。〔発明の背景〕ソマトメジン（特には°ＳＭｓ”とも言われる）は有用な生物学的特性を持つホルモンである＠　ＳＭｓは分子量が約７５００ドルトンのポリペプチドであるｅ　ＳＭｓはｔａｌ成長ホルモン（時には”ＧＨ”とも言われる）の成長促進の効果を実行し、（ｂ）弱いインシュリン様の活性を有しくそしてこのため“インシュリン様成長要素”または°ＩＧＦｓ”とも言われる＞　、（Ｃ）各種の骨格、その他の組織に対する細胞分裂刺激作用があり、（ｄ＋大形担体蛋白質に結合されて血漿内を運ばれる０人体には２種の針組成物がある。　ＳＭ−Ｃは基本的なポリペプチドであり、時にはＩＧＦ−１と言われる。　ＳＭ−Ｃは出生後のＧＨの成長促進作用を実行する。　ＳＭ−Ａは主としてＩＧＦ−■として公知のポリペプチドと、いろいろな量である変形例のＳＭ−Ｃとの混合物である。　５ｐｅｎｃｅｒ＋　Ｅ、Ｍ、等、”Ｔｈｅ　Ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｏｆＨｕｍａｎ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ　Ｉ　ａｎｄ　ＩＩ　Ｗｉｔｈ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎｓ　Ｃａｎｄ　Ａ　Ｗｉｔｈ　Ｒａｔ　ＩＧＦ　Ｉ　ａｎｄ　ＩＩ”　（ソマトメジンＣ及びＡを含む人体のインシュリン様の成長要素Ｉ及びｎとランｈｌＧＦＩ及び■との同一性）、出典：　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ／Ｓ。餠ａｔｏｍｅｄｉｎｓｌＷｉｎ集者：　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｅ、Ｍ　（Ｗａｉｔｅｒ　ｄｅ　Ｇｒｕｙｔｅｒ　１９８３）　ｅＩＧＦ−ＩＩはＧＨ依存性が低く、胎児の成長にある役割を持つだろう。ＳＭｓは生体内で、骨の形成を刺激しく例えば骨多孔症治療において）、疵の治癒、及び動物の成長、　ＧＨ不足の人体の成長を刺激するために有用であろう、　ＳＭ−Ｃの漿液レベルは、末端肥大症、下垂体性の巨人症、　ＧＨ欠乏症または、その他の成長に関する状態を診断するために測定されるｍ　５ｐｅｎｃｅｒ＋　Ｅ、Ｍ、、”Ｓｏ＋ｎａｔｏ−ｍｅｄｉｎｓ　（ソマトメジンド、出典＝　Ｂａ５ｉｃ　ａｎｄ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ−６］ｏｇｙ　Ｗ集音：　ＧｒｅｅｎｓｐａｎＦ、Ｓ、及びＦｏｒｓｈａｍ　Ｐ、Ｈ，（１９８６）　８９頁。Ａｐｐｌｅｔｏｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ−Ｃｒｏｆｔｓ　ＳＭｓは、組織培養における様々な細胞の増殖を試験管内で刺激するためにも使用され、従って、正常及び異常な細胞成長の調節の研究に有用である。ある種の肺及び腎臓の癌細胞によって生じるＳＭｓは、癌細胞と癌Ｍ織の成長を助けるに必要な脈管組織及び線維組織との増殖を刺激するだろう。５ｐｅｎｃｅｒ、Ｅ、Ｍ、等＋　”Ｐｏ５ｓｉｂｌｅ　Ａｕｔｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨｕｍａｎＭａｓｍａｒｙ　Ｃａｒｃｒｎｏｍａ　Ｇｒｏｗｔｈ　ｂｙ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎｓ、’（ソマトメジンによる人体乳癌腫成長の可能な自動刺激）　Ａｒ＋ｒ＋ａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎ、Ｙ。Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　４６４号、４４８頁（１９８６）；　Ｈｕｆｆ　Ｋ、に、等＋　”５ｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ−１−ｒｅｌａｔｅｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｂｙ　ＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅ１ｌｓ、翼人体肺癌細胞によるインシュリン様成長要素Ｉに関連する蛋白の分泌）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４６号、４６１３〜４６１９頁　（１９８６）。ＳＭｓの作用を阻止することはこれらの癌の増殖防止に有用であろう。人体のＳＭｓは体内において他の蛋白によって運搬され調節されるようである。旧山、　Ｒ，Ｌ、等＋　”Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳｐｅｃｉｆｉｃＰｌａｓｍａ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　５ｉｔｅｓ　Ｆｏｒ　Ｓｏｓａｔｏｍｅｄｉｎ＋”　（ソマトメジンに対する特定血漿蛍白結合部位の立証）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ。Ｍｅｔａｂ、４５号、９８８頁（１９７７）　、これらの蛋白は生体内でＳＭｓに結びつき、ＳＭｓの生物学的活性を調節するようである。中性のｐＨで人体の漿液のゲル濾過を行って分かったのだが、免疫反応性の５ＦＩ−Ｃ活性材の９５％及び多分ＩＧＦ−Ｉｆの活性材は、約１５００００ないし１６００００ドルトン（１５０〜１６０キロドルトン即ち“ｋＤａ”にて、３５〜５０ｋＤａの範囲の少量と共に溶出する。ただ、極めて少量の免疫性の活性材だけが７．５ｋＤａで溶出し、この際、遊離のＳＭｓが現れる筈である＋＋　Ｓｍ１ｔｈ＋　Ｇ、Ｌ、＋　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　３４号、８３〜８９頁（１９８４）　、このことはＳＭｓが血漿中で大きい方の蛋白質と複合していることを示している。人体の血漿中において少な（とも２クラスの蛋白質または蛋白質複合体がＳＭｓを結合すると報告されている＊　Ｄｒｏｐ、　ｓ、ｔｏ等。 ”Ｉｍｍｕｎｏａａｓａｙ　ｏｆ　Ａ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｆｒｏｍ　ＨｕｍａｎＡｍｎｉｏｔｉｃ　Ｆｌｕｉｄ：　Ｌｅｖｅｌｓ　Ｉｒ＋　Ｆｅｔａｌ、　Ｎｅｏｎａｔａｌ＋　Ａｎｄ　Ａｄｕｌｔ　５ｅｒａ’（人体の羊水からのソマトメジン結合蛋白質の免疫分析；胎児。新生児、及び成人の漿液中の水準）、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅ−ｔａｂ、５９号、９０８頁（１９８４）　％　Ｗｉｌｋｉｎｓ、　Ｊ、Ｒ，等、“Ａｆｆｉｎｉｔｙ−１ａｂｅｌｅｄ　Ｐｌａｓｍａ　Ｓｏｓ＋ａｔｏｍｅｄｉｎ−Ｃ／　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　ＦａｃｔｏｒＩ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”（親和性ラベルをはった血漿ソマトメジン−Ｃ／インシュリン様成長要素！を結合する蛋白質）＋　Ｊ−Ｃ１１ｎ。Ｉｎｖｅｓｔ、　７５号、１３５０頁（１９８５）　、この説明はこれらの本来の一クラスの蛋白質または蛋す質複合体をＳＭ□担体蛋白質”として言及している。つまり、その機能がＳＭｓの運搬であると思われるからである。これは担体蛋白質が単一蛋白質であることを示そうとしているのではない、担体蛋白質は一つ以上あるがもしれないし、それは蛋白質複合体であるがもしれない、この説明は他に°羊水結合蛋白質”即ち°ＡＦＢＰ”のようなりラスがあると言っているのである。ＡＦＢＰは１つ以上あるがも知れない。またおそら＜　、ＳＭｓを結合する別のクラスの蛋白質または蛋白質複合複合体が見つかるだろう。ＳＭ−Ｃ活性材のように、担体蛋白質活性材はＧｌ＋依存であり、ＧＨ欠乏の人間には低く、末端肥大症として知られた状態であるＧ）Ｉ発生腫瘍がある患者では高い＊　Ｗｈｉｔｅｔ　Ｒ，Ｍ、等＋　”Ｔｈｅ　ＧｒｏｗｔｈＨｏｒａｒｏｎｅ　Ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ　ｏｆ　５ｏｓａｔｏａ＋ｅｄｉｎ−ｂｉｎｄｉＢ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉｎ　ＨｕｍａｎＳｅｒｕ蒙、°（人体漿液におけるソマトメジン結合蛋白質の成長ホルモン依存性Ｌ　Ｊ、　Ｃ１１ｎ　Ｅｎｄ′ｏｃｒｉｎｏｌ　Ｍｅｔａｂ、５３号、４９頁（１９８１）　。担体蛋白質は潜在的に有効な用途を指示するような生物学的特性を示す、生体内では、ＳＭｓが担体蛋白質に結合する場合、ＳＭｓの半減期は試験する動物の種次第により約１時間から約２４時間まで増加すると報告されており　（Ｃｏｈｅｎ、に、Ｌ、等ｒ　”Ｔｈｅ　ＳｅｔｕｍＨａｌｆ−１ｉｆｅ　ｏｆ　Ｓｏｍａｔｏ＋ｎｅｄｉｎ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ：　Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　Ｆｏｒ　ＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅ　Ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ、”　（ソマトメジン活性材の漿液半減期；成長ホルモン依存性の証拠）、　Ａｃｔａ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　８３号、２４３頁（１９７６））　、そして、ＳＭｓは不活性となり結局解離される。他の模型システムでの研究が示唆するところによると、担体蛋白質を含む不純調整によって、（Ｊｌ）潅流したラントの心臓に及ぼすＳＭｓの代謝作用は廃絶される（Ｍｅｕｌｉ　Ｃ０＋等、　’Ｎ５ＩＬＡ−ｃａｒｒｉｅｒ　Ｐｒｏ −ｔｅｉｎ　Ａｂｏｌｉｓｈｅｓ　ＴｈｅＡｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｏｎ５ｕｐｐｒｅｓｓｉｂｌｅ　ｆｓｕｌｉｎ−１ｉｋｅＡｃｔｉｖｉｔｙ　（ＮＳＩＬＡ− ｓ）　Ｏｎ　Ｐｅｒｆｕｓｅｄ　Ｒａｔ　Ｈｅａｒｔ”　（ＮＳＩＬＡ担体蛋白質によって潅流を施したラットの心臓に及ぼす抑制不能インシュリン様活性材（ＮＳＩＬＡ−ｓ）の作用は廃絶される）、　Ｄｉａｂｅｔｏ−１ｎｇｉａ　１４号、２５５頁（１９７１１り）、Ｑ）１培養中の細胞に及ぼすＳＭＳの鎮静作用は抑止される（Ｋｎａｕｅｒ、　Ｄ、Ｊ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。Ｕ、Ｓ、Ａ、　７７号、？２５２−７２５６頁（１９８０）及びＫｕｆｆｅｒ、　Ａ、Ｄ、等。 ”Ｐａｒｔｉａｌ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ａ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｉｎ５−ＵＩｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ　Ｂｙ　Ｒｅｖｅｒｓｅｄ　Ｐｈａｓｅ旧ｇｈ−ｐｅｒ　ｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｗａｔｏｇｒａｐｈｙ＋’　（逆相高性能液体クロマトグラフィによるインシュリン様成長要素の特定抑止剤の部分精整）。Ｊ、　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　３３６号、８７〜９２頁（１９８４））、モしてＩｃＩラットの脂肪組織に及ぼすＳＭｓのインシュリン様活性は阻止される（Ｚａｐｆ、　Ｊ、等、　”Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｎｏｎ５ｕｐｐｒｅ−ｓｓｉｂｌｅ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｏｎ　ｌ５ｏｌａｔｅｄ　Ｒａｔ　Ｒａｔ　Ｃｅ１ｌｓ　ＢｙＢｉｎｄｉｎｇ　Ｔｏ　Ｉｔｓ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ、 ”　（その担体蛋白質に結びつけることによる分離ラット細胞に及ぼす抑止不能インシュリン様活性の作用の抑止）＋　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ　Ｉｎｖｅｓｔ、６３号、】０７７頁（１９７９））。担体蛋白質を部分的に純粋に調整したものを放射性レッテル付きのＳＭｓと共に用いて、ＳＭｓ測定のための拮抗的結合の分析を行うようにした＊　Ｍｏ５ｅｓ、　Ａ、Ｃ，等、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　１０４号、５３６頁（１９７９）　。価値が高い生物学的特性がこれらにあるので、その活性の原因である担体蛋白質または、その担体蛋白質のサブユニットを分離し特徴表示する多くの努力が払われた０本発明以前は担体蛋白質またはその活性サブユニットを純粋な形で分離し、特徴表示しようとするあらゆる試みは失敗した。この理由は一部は血漿中の担体蛋白質の濃度が低いことである。精製方法に成功するためには、酸素による消化と、担体蛋白質の不安定性、特にｐＨの変動による変化の問題とが解決されねばならなかった。担体蛋白質サブユニットの精製は、ソマトメジンに結合するＡＦＢＰが血漿中に存在することによって更に複雑になる。担体蛋白質は糖蛋白質である。ｐＨが中性の漿液ではこの蛋白質はＳＭｓと結合し、その複合体の分子量はゲル濾過によって測ると約１５０〜１６０ｋＤａである。　ｐＨが中性の担体蛋白質複合体の分子量は他の方法によって約１２５ｋＤａと測定されている。酸性状態での漿液または血漿のゲル濾過クロマトグラフィは、担体蛋白質から結合ＳＭｓを分離し、また分子量が約４０〜５０ｋＤａである担体蛋白質のユニットを生じさせると報告されている。このユニットもソマトメジンに結合する＊　）ｔ＋ｎｔｚ＋　Ｒ，Ｌ−等、　”Ｄｅｍｏｎｓｔｒａ− ｔｉｏｎ　Ｏｆ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｐｌａｓｓａ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　５ｉｔｅｓ　Ｆｏｒ　Ｓｏｍａｔｏ−腸ｅｄｉｎ”（ソマトメジンに対する特定血漿蛋白質結合位置の立証）、Ｊ。Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、Ｍｅｔａｂ　４５号、９８８頁（１９７７）　、　４０〜５０ｋＤａの酸安定性ユニットは、１５０〜１６０ｋＤａの担体蛋白質複合体を改質するように誘導され得ないので、他の人々の提唱によると、担体蛋白質は部分的に数年安定であって、それ自体ソマトメジンに結合しないユニットで構成することもできるｅ　Ｍｏ５ｅｓ、　Ａ。Ｃ１等＋＋Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１０４号、５３６頁（１９７９）　、　Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏの報告によれば、漿液を３５〜５５％硫酸アンモニウム溶液で処理し、沈澱を分離し、沈澱をｐｎ（１，２０の０．０５ＨのＴｒｉｓに溶解し、そして、Ｔｒｉｓ緩衝剤を用いてＤＥＡＥ　５ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−５０上でクロマトグラフィ処理をしている＋＋　Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏ　Ｒ，Ｗ、　 ”Ｔｈｅ　Ｓｏｍａｔｏｓｉｅｄｉｎ　ＣＢｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ：　Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　Ｆｏｒ　Ａ　Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　５ｕｂｕｎｉｔ　５ｔｒ−ｕｃｔｕｒｅ”　（ソマトメジンＣを結合する蛋白質：不均質サブユニット構造の証拠）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ　Ｍｅｔａｂ、　５１号、１２頁（１９８０）、　Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏはこれ以上の精製については開示しなかった。寧ろＦｕｒｌａｎｅｔｔｏは各種の留分を用いて実験を行い、ソマトメジンＣの漿液中の結合活性は少なくも２ユニツトで構成され、一つは３６人のストークス半径を持ってＳＭ−Ｃを縛る　（いわゆる酸安定ユニット）もの、もう一つはストークス半径が３０〜３８人であってＳＭ−Ｃを縛らない（いわゆる数千安定ユニット）ものであるという彼の見解を確認しようとした。Ｗｉｌｋｉｎｓは親和性ラベリングによってＳＭ−Ｃと複合した血漿蛋白質と確認した。Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｊ、Ｒ，等＋　”Ａｆｆｉｎｉｔｙ−１ａｂｅｌｅｄ　Ｐｌａｓｍａ　Ｓｏｍａｔｏｓｅｄｉｎ−Ｃ／Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｉ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”　（親和性ラベリングを行った血漿ソマトメジン−Ｃ／インシュリン様成長要素Ｉを結合する蛋白質）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、誌７５号、１３５０頁（１９８５）　、ｌ”ｌ−５Ｍ−Ｃを全血漿及び血漿の５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−２００留分にＳＭ−Ｃを結びつけた蛋白質に共有交差結合した。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動と自動放射線透過写真とによって、約１６０．１１０．８０．５０．２５ｋＤａの各種の他にＡＦＢＰを確認した。　Ｗｉｌｋｉｎｓ等は１６０ｋＤａの担体蛋白質複合体は６個の約２５ｋＤａ　（２４〜２８ｋＤａ）のサブユニット複合体から構成されており、夫々の複合体はＳＭ−Ｃを加えたサブユニットにて構成されていると仮定した。しかし、Ｗｉｌｋｉｎｓ等はこの２５ｋＤａのサブユニットの分離と精製とについては報告しなかった。別の研究者は僅かに大きめのサブユニット構造を提案したが、確認はしなかった。　ＤａｕｇｈａｄａＶ＋　Ｗ、Ｈ，等＋　”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　Ｏｆ　ＳｏｍａｔｏｍｅｄｉｎＢｉｎｄｉｎｇ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　５ｅｒｕ＋ｍ　Ｂｙ　Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ　Ａｎｄ　ＧｅｔＦｉｌｔｒａｔｉｏｎ”（超遠心分離とゲル濾過とによる人体漿液中のソマトメジンの結合の特徴表示）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｔｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ。５５号、９１６頁（１９８２）　。若干の研究音速は人体血漿から酸安定性の４０〜５０ｋＤａ担体蛋白質ユニットの分離を試みて成功しなかったと報告している。Ｄｒａｚｎｉｎ等は僅か１％のＳＭ結合活性材を含む物質について報告したが、この物質の起源が担体蛋白質であるか、八ＦＢＰであるかについては開示しなかった。　Ｄｒａｚｎｉｎ　Ｂ、等”Ｓｏｓａｔｏｍｅｄｉｎｓ　ａｎｄＧｒｏｗｔｈ＋　”　（ソマトメジンと成長）１編集者：Ｇ、　Ｇｉｏｒｄａｎｏ等（Ａｃａ−ｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　１９７９）、１４９〜１６０頁＊　Ｆｒｙｋｌｕｎｄ等は、ポリエチレングリコール沈澱、カルホキジメチル−セファデックスクロマトグラフィ及びゲル濾過によって新鮮な凍結された人体血漿を分留した＠　Ｆｒｙｋｌｕｎｄ、　Ｌ、等Ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ、ｋＨ集集音　Ｇ、Ｈ，５ａｔｏ等（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　１９７９）　４９〜５９頁＠　Ｆｒｙｋｌｕｎｄ等は、担体蛋白質が３５ｋＤａと４５ｋＤａとの２種の不同鎖からなると提案した。Ｆｒｙｋｌｕｎｄ等は、Ｎ−末端列の解析によってグリシンが解放されることを開示したが、それがどの鎖から始まっているか、あるいは両鏡がグリシンに終わっているのかどうかを確認しなかったｅ　Ｆｒｙｋｌｕｎｄ等の調合品の報告による結合活性材は極めて低く、純度は報告されなかった。Ｆｒｙｋｌｕｎｄ等は担体蛋白質または八ＦＢＰの何れが調合品中に存在していたかを確認しなかったｅ　Ｍｏｒｒｉｓ等は人体のＣｏｈｎ留分■の酢酸抽出と、”’　Ｉ　−ＩＧＦ−１ニよＡ［化と、５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ−２００上のクロマトグラフィとによって粗製のＳＭ結合留分が得られたことを報告した。　Ｍｏｒｒｉｓ、　Ｄ、Ｈ，等′″５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ＳｏｍａｔｏｍｅｄｉｎＢｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ：　Ａｌｋａｌｉｎｅ　ＰＨ−Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎＡｃｉｄ−Ｓｔａｂｌｅ、６０．０００　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｗｅｉｇｈｔ　Ｃｏｍｐｌｅｘ　Ｉｎｔｏ　ＳｍａｌｌｅｒＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ”　（ソマトメジン結合蛋白質の構造：酸安定性の分子量６００００の複合体のアルカリ性ｐ１１誘導によるより小さな成分への分解）、Ｅｎｄｏｃｔｉｎｏｌｏｇｙ　１１１号、８０１〜８０５頁（１９８２）　、　Ｍ。ｒｒｉｓ等は見掛けの分子量が６００００と４６０００との結合された放射性ＩＧＦ−１を含む留分について述べた０Ｍｏｒｒｉｓ等はこれらの留分をｐＨ８，０ニ暴露すると、”’　Ｉ　１ＧＦ−１結合活性材が６００００及び４６０００　ドルトンから、４６０００及び３００００の複合体を有する留分に移行する結果になることを報告した。これらの留分はこれ以上は純化されなかった。　Ｍａｒｔｉｎ等は酸安定性ユニットに対する多クローン抗体を調整したと報告した。後者のものは２Ｍの酢酸と７５１の食塩とによって人体のＣｏｈｎ留分■を抽出して分離された。　５Ｐ−５ｅｐｈａｄｅｘへの吸着によってＳＭｓを除去した後、酸安定性ユニットをＩＧＦ−Ｉｔ−親和クロマトグラフィによって得、免疫処理に用いた。　Ｍａｒｔｉｎ等は肝ＬＣが更に酸安定性ユニットを純化できると開示した。彼等の最終精製物の純度を確認するためのデータは全く提供されなかった＊　Ｍａｒｔｉｎ、　Ｊ、Ｌ、等、“ＡｎｔｉｂｏｄｙＡｇａｉｎｓｔ　Ａｃ１ｄ−３ｔａｂｌｅ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐ−ｒｏｔｅｉｎ　Ｄｅｔｅｃｔｓ１５０，０００　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｗｅｉｇｈｔ　Ｈｏｒｍｏｎｅ−ＤｅｐｅｄｅｎｔＣｏｍｐｌｅｘ　Ｉｎ　ｌ（ｕｍａｎ　Ｐｌａｓｍａ”　（酸安定性インシュリン様成長要素結合蛋白質に対する抗体は人体血漿中に分子量が１５０．０００のホルモン依存性複合体を検出する）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ。６１号、７９９〜８０１頁（１９８５）　、　Ｋｕｆｆｅｒ等は彼がインシュリン様の成長要素（ＳＭｓ）の抑止剤として述べたものの部分的精製について報告した＊　Ｋｕｆｆｅｒ、　Ａ、Ｄ、等”ｐａｒｊｉａｌ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆＡ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　ＦａｃｔｏｒｓＢｙ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｈａｓｅ　Ｈ４ｇｈ−Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏａ＋ａｔｏｇｒａｐｈｙ″（逆相高性能液体クロマトグラフィによるインシュリン様の成長要素の特定抑止材の部分精製）　Ｊ、　ｏｆ　Ｃｈｒｏ＋＊ａｔｏｇｒａｐｈｙ　３３６号、８７〜９２頁（１９８４）　、　Ｋｕｆｆｅｒ等は５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−７５及び旧ｏ−Ｇｅ１　Ｐ−３０カラムでの酸性状態におけるイオン交換クロマトグラフィと、連続式ゲルクロマトグラフィとによってＣｏｈｎ留分■から分子量１６０００ないし１８０００のＳＭ抑止材を調整した。親和クロマトグラフィ及び高性能液体クロマトグラフィの後、Ｋｕｆｆｅｒ等は°大きくて一見均質な蛋白質ピーク及び、小さな不均質ビーク”に相当する２つの活性材ピークとして“抑止活性材１を得た。Ｋｕｆｆｅｒ等はどちらのピークの活性の分離についても報告しなかった。上記研究の何れも、ソマトメジン様のポリペプチドを結合しうる人体担体蛋白質サブユニットの類を開示していない。更に、これらの研究の何れも、ＳＭｓを結合でき、しかも均質になるまで純化された担体蛋白質のサブユニットについては全く開示していない、　ＡＦＢＰまたは汚濁体でなく担体蛋白質が分離されたことを確立し、かつ、生物学的活性を研究するためには純度が必要である。不純調合物は酵素を含有するだろうし、精製物を不安定にさせ、容易に劣化させたり変性させる。不純な調合品は、また、動物にも人体にも使用不可能である。とぅのは、当初の漿液中に存在しているがまたは精製手順の結果得られる多くの不純物は抗原であり、好ましがらぬ生物学的影響を与える可能性があるからである０例えば、骨多孔症の人間用には、抗原であるかもしれず、または生物学的に悪い影響をもつ汚濁物をすべて除去する必要がある。他の研究音速の中に、ＳＭｓを結合することができる別の蛋白質を分離し、人体の妊娠中の羊水から羊水結合蛋白質即ち“ＡＦＢＰ”を得たものがいる。　ＡＦＢＰは担体蛋白質でもなければ、担体蛋白質のサブユニットでもない。Ｗｉｌｋｉｎｓ、　Ｊ、Ｒ，等”Ａｆｆｉｎｉｔｙ−１ａｂｅｌｅｄ　Ｐｌａｓｍａ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ−Ｃ／Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　ＦａｃｔｏｒＩ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”　（親和ラベリングされた血漿ソマトメジノーＣ／インシュリン様の成長要素■を結合する蛋白質）、Ｊ。Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ　７５号、１０００頁（１９８５年）　、　ＡＦＢＰはＴａｌ担体蛋白質のいわゆる酸安定性ユニットよりも小さく、分子量は３２〜４０ｋＤａの範囲にあり、伽）グリコジル化されず、ｔｅｌ報告されたＮ−末端列においては本発明の担体サブユニットとは異なり（Ｐｏｖｏａ、　Ｇ。等＋　’ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　Ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ　Ｆｒｏｍ　Ｍｉｄ−ｔｅｒｍ　Ｈｕｍａｎ　Ａｍｎ１ｏｔｉｃ　Ｆｌｕｉｄ”（中期の人体羊水からのソマトメジン結合蛋白質の分離と特徴表示）　Ｅｕｒ、　Ｊ。Ｂｉｏｃｈｅ蒙１４４号、１９９〜２０４頁（１９８４））、及び（ｄｌ異なった免疫学的特性を有する＊　Ｄｒｏｐ、　Ｓ、Ｌ、Ｓ、等、“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｏｆ　Ａ　Ｓｏｗｈａｔｏａ＋ｅｄｆｎ−ＢｉＦｌｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ　Ｆｒｏｓ　Ｈｕｍａｎ　Ａｓｎ１ｏｔｊｃ　Ｆｌｕｉｄ：　ＬｅｖｅｌｓＩｎ　Ｆｅｔａｌ、　Ｎｅｏｎａｔａｌ　ａｎｄ　Ａｄｕｌｔ　５ｅｒａ”（人体羊水からのソマトメジン結合蛋白質の免疫分析：胎児、新生児、成人の漿液中の水準）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ　５９号、９０８頁（１９８４）、Ｍａｒｔｉｎ、　Ｊ、Ｌ、等＋　５ｕｐｒａ、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ　６１号、７９９〜８０１頁（１９８５）　、　ＡＦＢＰに対する抗血清は、１５０ｋＤａ担体蛋白質またはその酸安定性ユニットとは交差反応しない、　Ｄｒｏｐ等は放射性免疫分析（ＲＩＡ）にて測定されたＡＦＢＰの水準は、担体蛋白質とは逆に幼児及び児童期にあっては低下し、また、担体蛋白質とは異なり、日中の変動がはげしいことを報告した＊　Ｅｎｂｅｒｇも次の４段階のクロマトグラフィによって成人の人体血漿からＡＦＢＰを分離した。すなわち、ＣＭ−Ａｆｆｉｇｅｌ　ｂｌｕｅ、水酸化リン灰石。素早い蛋白質の液相クロマトグラフィゲル浸透及び高性能液相クロマトグラフィ（”ＨＰＬＣ”）水酸化リン灰石＊　Ｅｎｂｅｒｇ＋　ｃ、ｌ　”Ｐｕｒ−ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ　Ｈｉｇｈ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｗｅｉｇｈｔ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ　ＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ　Ｆｒｏｍ　Ｈｕｍａｎ　Ｐｌａｓｍａ”　（人体血漿からの高分子ソマトメジン結合蛋白質の精製）　Ｂｉｏｃｈｅａ＋、　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙ、Ｒｅｓ、　Ｃｏｓｍｕｎ１３５号、１７８〜８２頁（１９８６）。ＥｎｂｅｒｇはＮ−末端列、＾１ａ−Ｐｒｏ− Ｔｒｐ−の“可能性°を報告し、間違ってＥｎｂｅｒｇが結論した１５０ｋＤａの担体蛋白質ではなく　、ＡＦＢＰを分離したことを立証した。ＳＭｓを縛る蛋白質は細胞培養抽出物中にもｎ認された。これまで、この担体蛋白質は確認されていなかった。　５ｐｅｎｃｅｒが最初に明らかにしたのだが、肝臓細胞の最初の培養はＳＭｓと複合する蛋白質を生じた。　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｅ、Ｍ、Ｔｈｅ　Ｕｓｅ　Ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｄＲａｔ　Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ　Ｔｏ　５ｔｕｄｙ　Ｔｈｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｏｆ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎ　ＡｎｄＩｔｓ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎｔ”（ソマトメジンの合成とその結合蛋白質との研究のための培養したラットの肝細胞の利用）　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ９９号、１５７頁（１９７９）　、その後、正常及び異常ないくつかの細胞の種類は、ＳＭｓと複合する蛋白質を合成することが分かった。バッファローラットの培養した肝臓腫瘍細胞（ＢＲＬ　３Ａ）は、抗体反応、Ｎ −末端アミノ酸列、及びグリコジル化がない点について担体蛋白質とは異なる３３ｋＤａのＳＭ結合蛋白質を生じる。　ＬｙｏｎｓＲ，Ｍ、等＋　”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ−３ｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＡｃｔｉｖｉｔｙ　’ＭＳＡ”　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ’ 　（増殖刺激活性材”ＭＳＡ”担体蛋白質の特徴表示）　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ　４Ｓ号、２６３〜７０頁（１９８６）　、Ｍｏｔｔｏｌａ、　Ｃ，等、　Ｊ、ｏｆ　Ｒｉｏｔ、　Ｃｈｅ＋ｓ。２６１号、１１８０〜８８頁（１９８６）　、　Ｒｏｍａｎｕｓ等はある蛋白質と交差反応したこの結合蛋白質に対する抗体は胎児の漿液には存在するが、成長したラットの漿液には存在しないことを報告した。Ｒｏｍａｎｕｓ、Ｊ、Ａ、等＋　”Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｐｒｏｔ−ｅｉｎｓ　Ｉｎ　Ｎｅｏｎａｔａｌ　Ａｎｄ　Ａｄｕｌｔ　Ｒａｔ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｒｅ　ｆｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙＤｉｆｆｅｒｅｎｔ：　Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ　Ｕｓｉｎｇ　Ａ　Ｎｅｗ　ＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙＦｏｒ　Ｔｈｅ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｆｒｏｍ　ＢＲＬ−３Ａ　Ｒａｔ　Ｌｉｖｅｒ　Ｃｅ１ｌｓ、 ’（生まれたて及び成長したラットの漿液中のインシュリン様の成長要素担体蛋白質は免疫学的に異なる二ＢＲＬ−３パラフトの肝細胞からの担体蛋白質に対する新しい放射性免疫分析を用いる立証）Ｅｎｄｏｃｒ＋ｎｏｌｏｇｙ　［８号、１７４３頁（１９８６）　、　ＢＲＬ−３Ａを結合する蛋白質は奮歯頻におけるＡＦＢＰの同等物であろうが、しかし、Ｎ−末端列のデータからは両分子間に類像性は見られない。〔発明の開示〕本発明には次の各用語を用いる。ソマトメジン様の一人体ＳＭｓまたはインシュリン様の成長要素であるが、これに含まれるものは、ＳＭ−Ｃ，ＳＭ−Ａ、　ＩＧＦ−１及びＩＣＦ−ＩＩに限られないものの一つの生物学的活性を示すポリペプチド、このポリペプチドは生来の人体Ｓｌ’ｌｓのアミノ酸に加えてアミノ酸類を持っていてもよく、またはそれは生来の人体Ｓｌ’ｌｓのアミノ酸を全部は包含していなくてもよい。担体蛋白質−５？ｌｆｉのポリペプチドの結合を含む一つのプロセスによって生体中で人体のＳＭｓの生物学的活性を調節する能力を示し、成長ホルモン依存であり、ＳＭｓと複合する際の生理学的ｐｎ状態において約１２５０００ないし１６００００ドルトンの見掛けの分子量を示す人体血漿中の糖蛋白質または糖蛋白質複合体、担体蛋白質は様々な形のものであってもよい０例えば、異なる個人の各細胞は生理学的に同じではあるが、構造的には原型とは僅かに異なる担体蛋白質種を生成するだろう。サブユニット−より大きな蛋白質ユニットのポリペプチド破片、一部または成分、サブユニットという用語は、他の別々のポリペプチド鎖に対して共有結合または任意の他種の結合によって結合された別々のポリペプチド鎖の普通の意味には限定されない。担体蛋白質サブユニット−担体蛋白質のサブユニ７）の一つの類。ポリペプチド−ペプチド結合によって結ばれたアミノ酸の直鎖。ソマトメジン−〇　（”ＳＭ−Ｃ”または“ＩＧＦ−１ゝ）−出生後の成長を調節する原則的なホルモン、　ＳＭ−ＣはＧＨの成長促進作用を実行し、担体蛋白質に結合する。本発明は、利用できる人体の担体蛋白質サブユニットを、ソマトメジン様のポリペプチドを結合させうるようにして前記諸問題を解決する０本発明の担体蛋白質サブユニットのソマトメジン様のポリペプチドを結合する能力は、試験管内でこれらのサブユニットを略生理的なｐＨでソマトメジン−Ｃに結合させることによって立証されている０本発明の担体蛋白質サブユニットが生体中でソマトメジン様のポリペプチドを結合し、かつ、生来の担体蛋白質の運搬と調節する活性とを本質的に提供するだろうことを、この結合活性材は立証している。この説明において、ソマトメジン様のポリペプチドを結合するような担体蛋白質サブユニットの能力に言及する場合は、この能力がこのようなポリペプチドを試験管内でまたは生体内で結合することであることを意味している。担体蛋白質サブユニットにはインシュリンに対しては本質的な結合能力はない。本発明の担体蛋白質サブユニットは夫々、単一のポリペプチド鎖を構成している０本発明の担体蛋白質サブユニットは次式のような、Ｎ−末端基のアミノ酸列をもっている。ここでＲはシスティンまたは半シスチンである。半シスチンは二硫化結合により同じポリペプチド鎖内で他の半シスチンアミノ酸に結合されたあるアミノ酸のことである。担体蛋白質は多形であってもよいので、担体蛋白質サブユニットのアミノ酸列は担体蛋白質の多形的特性に応じて変わることもありえる。例えば、担体蛋白質サブユニットはＮ末端から５番目の位置においてアラニン（ ”Ａｌａ”）の代わりにグリシンじｃｌｙ″）残査を含んでいることがある。同様にして、Ｎ末端から１４番目の位置のＧｌｕは場合によっては、部分的にＰｈｅによって置換されるかもしれない。本発明の担体蛋白質サブユニットの分子量にはある範囲がある０本説明に言及されている担体蛋白質の分子量は、ベータナルカプトエタノール°ＢＭＥ’″のような適当な還元剤の存在において行われた、既知量の蛋白質に対する５ＤＳ−ＰＡＧＥゲル電気泳動によって測定したものである。既知の蛋白質標準物は２００，０００（ミオシン（Ｈ−鎖））、９７．４００　（ホスホリラーゼｂ”）　、６６．２００　（ボビンセラムアルプミン）　、４３．０００　（オバルブミン）、２５，７００（アルファクロモトリプシノーゲン）、１８，４００　（ベータラクトグロブリン）と１４．３００（リゾチーム）であった０分子量が約１５０００、２１０００．２６０００．３００００ドルトンの担体蛋白質サブユニットを分離し、識別した。担体蛋白質サブユニ７）は分子量が異なっているかもしれない、これは、これらがその大きさのポリペプチドとして担体蛋白質中に存在していたためであるか、または、酵素消化または他の原因による崩壊のためである。これらの相異の原因が何であるにせよ、本発明の担体蛋白質サブユニットの分子量は約３００００ないしそれ以下である０本発明の担体蛋白質サブユニットの分子量は約１５０００ないし約３００００　ドルトンまでであることが好ましい。本発明の担体蛋白質サブユニットが糖蛋白質であることは周期酸５ｃｈｉｆｆ試薬に対するそれらの積極的な反応と、アガローズに交差結合したコンカナバリンＡの結合能力（薬剤用、コンーＡセハローズ）とによって示される通りである。コンーＡセハローズへの結合はグルコースとマンノース残査を含む糖蛋白質に特異的なことである。従って、担体蛋白質サブユニットは本質的にグリコジル化される。本発明はまたＳ？Ｉ結合活性を有する本質的に純粋な担体蛋白質サブユニットを提供する０本発明の担体蛋白質サブユニットには本質的に他の蛋白質、ペプチド、ヌクレオチド、多糖類、脂質及び塩類が殆どない０本発明により、これらのサブユニットを、人体及び動物治療剤に、動物の成長促進剤として、人体及び他の動物の診断試薬として、また、人体及び他の動物の調査の用途において使用するために十分純度が高い状態で取得することができる。本発明はまたソマトメジン様のポリペプチドを結合しうる少な（とも一つの担体蛋白質サブユニット、または薬学的に許容しうる上記の塩類と薬学的に許容できる担体との有効量からなる治療組成物を提供する。このような治療組成物の担体蛋白質サブユニットは、少なくとも一種類の殆ど純粋な担体蛋白質サブユニットでよい０本発明の担体蛋白質サブユニットの組成物には、重要なＳＭｓの生物学的特性に関係がある多くの治療上の用途がある６人体の担体蛋白質サブユニットを含む組成物は増大し、調節されていない３Ｍ依存性の成長にかかわる病気の処理に役立つだろう、かくて、ＳＭｓを結合して不活性にするところの本発明の担体蛋白質サブユニットの能力によって様々の状態の新しい治療が可能となる。このような治療においては、明らかに、担体蛋白質サブユニットのある有効量は、生物学的に活性な、調節されていないＳＭｓの過剰な時に、ＳＨの活性を阻止または不活性化するのに十分な量である０例えば、担体蛋白質サブユニットのある有効量というのは、モル基準で、生物学的に活性なＳＭｓの量の１０倍またはそれ以上であろう０例えば、ある癌はＳＭｓを生じることが分かっている。つまり線維肉腫、軟骨肉腫及び肝腫細胞系である＊　Ｄｅ　Ｌａｒｃｏ、　Ｊ、Ｅ、等、　”Ａ　Ｈｕａ＋ａｎＦｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａ　Ｃｅ１ｌ　Ｌｉｎｅ　Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＡｃｔｉｖｉ　ｔｙ″ＭＳＡ”−ｒｅｌａｔｅｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ’（人体線維肉腫細胞系発生増殖刺激活性’ＭＳＡ’に関連するペプチド）　Ｎａｔｕｒｅ　２７２号、３５６〜３５８頁（１９７８）　、肺癌と腎臓癌とは自動的に癌の成長を刺激するｓＦＩを生成する＊　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｅ、Ｍ、等＋　”Ｐｏ５ｓｉｂｌｅ　Ａｕｔｏ−ｓｔｉ＋ｎｕｌａｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｍａｍｍａｒｙ　Ｃａｒｃｉｎｏｓａ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｂｙ　Ｓｏｍａｔｏｍｅｄｉｎｓ、”（ソマトメジンによる人体乳癌成長の自動刺激の可能性）　ＡｎｎａｌｓＮｅ＠Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　４６４号、４４８〜４４９頁（１９８６）　。内皮細胞と線維芽細胞との増殖もＳＭｓによって刺激され、肺癌によって生じたＳＭｓはバラタリンとしても作用することができ、腫瘍の生き残りに重要な支持間質組織の成長を刺激するｅ　Ｂａｒ＋Ｒ，Ｓ、等、　”Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　Ｆｏｒ　Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ａｃｔｉｖｉｔｙｏｎ　１ｌｕｓａｎ　Ａｒｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　Ｖｅｎｏｕｓ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅ１ｌｓ”（人体の動脈及び静脈内皮細胞に対する増殖刺激活性用の受容体）Ｊ。Ｃｌ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　Ｍｅｔａｂ、　５２号、８１４頁（１９８１）　、Ｃｌｅｍｍｏｎｓ。Ｄ、Ｒ，等＋　”Ｈｏｒｍｏｎａｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｏｆ　Ｉｍ＋ａｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ　ＳｏｓａｔｏｍｅｄｉｎＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｂｙ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ”　（培養した人体線維芽細胞による免疫反応性ソマトメジン発生のホルモンによる制御１）　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ　６７号、１０頁（１９８１）　、　ＳＭｓの作用を阻止することによって、本発明の人体担体蛋白質サブユニットを投与することによって腫瘍の成長速度を低減させ、更に悪性細胞を他の薬品に対してより敏感ならしめれると期待される。担体蛋白質サブユニットの治療はまた、糖尿病による増殖性網膜症の２次的な失明防止の一助とすることができる。　５ｐｅｎｃｅｒと他の音速は、ＳＭ−Ｃが糖尿病による網膜症における内皮細胞と線維芽細胞増殖とを刺激する要素の一つであると思われることを明らかにしたｅ　Ｌｏｒｅｎｚｉ、　Ｍ、＋　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｅ、Ｍ、等”　ＩｍｐｒｏｖｅｄＤｉａｂｅｔｉｃ　Ｃｏｎｔｒｏｌ＋　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｒａｐｉｄ　ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎＯｆ　Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ、責網膜症の糖尿病改善と、成長要素と、迅速な進行）　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　３０Ｂ号、１６０頁（１９８３）　、Ａｓｈｔｏｎ、　ＩＪ、等”Ｐ１ａｓｗ＋ａ　ｓｏ＋ｎａｔｏｍｅｄｉｎ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃｓｗｉｔｈ　ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ　ａｎｄ　ｊｏｉｎｔ　ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅｓ”（１４膜症と関節拘縮とを合併した糖尿病における血漿ソマトメジン）　Ｉｎｓｕｌｉｎ−ＬｉｋｅＧｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ／　Ｓｏｓａｔｏｍｅｄｉｎｓ　５ｐｅｎｃｅｒ、Ｅ、Ｍ　（Ｈａｌｔｅｒ　ｄｅＧｒｕｙｔｅｒ）　ｔＪｉ集、　ＳＭ−Ｃ（そして多分ＩＧＦ−１１も）のこの悪影響を阻止するような担体蛋白質サブユニットの能力は、有用な新しい治療となるであろう。本発明の担体蛋白質サブユニットはまた、抗体の製造にも有用である０本発明は純粋な担体蛋白質サブユニットを、タイターが高くて親和力すなわち阻止特性が高い多細胞（Ｐｏｌｙｃｌｏｎａ＋）抗体ならびに、現在では手にはいらない単細胞（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体を生じる抗原として利用することを可能にするだろう、これらの抗体を特殊測定を行うため免疫分析に、また担体蛋白質の活性、親和クロマトグラフィまたは免疫組織化学を阻止するために利用することができよう。担体蛋白質サブユニットはまた、体液内のＳＭｓの遊離水準を測定する最初の手順を開発するために使用されることができる。遊離水準は実際それの生物学的活性を決定するものであるので、全ＳＭｓ　Ｌか測定できない現行法を、この方法は改善することになろう、担体蛋白質サブユニット抗体は、体液中の遊離ＳＭｓからＳＭ担体蛋白質複合体を分離することに使用されるだろう、遊ｇＩＳＭｓを例えばＲＩＡによって測定することができる。本発明はまた、本質的に少なくとも一つのソマトメジン様のポリペプチドと複合した少なくとも一つの担体蛋白質サブユニットを含む組成物を提供する。このような組成物は様々な治療用途を持っている。　ＳＭｓは、これらを多くの治療上の応用に役立たせることを可能ならしめる生物学的活性を持っている。しかし、血漿中のＳＭｓの所要の水準を維持するためには、多数回にわたる毎日の注入を実施せねばなるまい、なぜならＳＭｓの半減期は遊離の状態では１時間以下だろうからである。この傷害は投与量を増大させることによっては克服できない、なぜなら、（ａｌｓＭｓは皮下、筋肉及び脈管組１ｉａ（線維芽細胞、内皮細胞、筋肉細胞、脂肪細胞及び内皮細胞）に対する有力な細胞分裂促進材であり、しかも、局部的な組織増殖を生ずる可能性があり、（ｂｌ多量の遊ｊｌｌｓＭｓは低血糖症を起こすだろうし、そして（ｃｌ安定的な血漿水準を維持するに必要な過剰量のＳＭｓは実用的な用途には高すぎるであろう。ＳＭを安全に、しかも効果的生理学的な方法にて目標の組織に投与することができ、それらの半減期はこれらを本発明の担体蛋白質サブユニットへ複合させることによってかなり伸ばすことができよう、　ＳＭ−担体蛋白質サブユニット複合体中の針は注入部位すなわち低血糖症位置では細胞分裂促進をおこさないだろう、制御された長期の吸収を行わせるようにこの複合体を処方することができる。目標の組織への運搬後、分解されてＳＭが解離されるだろう、かくて、療法は生理学的供給方式をまねることになろう、　ＳＭ−Ｃ，ＩＧＦ−１１，他のソマトメジン様のポリペプチドの治療的かつ蓄症的使用に成功することは、少なくとも１種類の人体ソマトメジン様のポリペプチドと少なくとも１種類の担体蛋白質サブユニットとの組成物によって可能となる。１種またはそれ以上の担体蛋白質サブユニットと１種またはそれ以上の５１１ｓとを含む組成物も、閉経期後の骨多孔症、その他の型の骨多孔症１人体のＧＨ欠乏症のような病気の治療のためにならびに、傷の治療、動物の成長促進のために役立つだろう、このような組成物は骨格組織にＳＭを与えて骨の成長を刺激することに使用されるだろう、担体蛋白質サブユニットと針との複合体からのＳＭの解離は、骨芽細胞を刺激し、閉経期後の骨多孔症における骨の形成を強化し、人工関節の多孔質母体に侵入して人工基管を安定化し、しかも、ばらばらになった破片の治療を促進させる筈である。ソマトメジン様のポリペプチドを結合できる少なくとも１種の担体蛋白質サブユニットまたは薬理的に受容可能なその塩類の有効量、及び薬理的に受容可能な担体を含む治療組成物と、このような組成物を用いる治療方法とはまた、生物学的に活性なソマトメジンの調節された水準の存在に自然治癒機構または応答が関係するような怪我、病気の治療にも役立つだろう。例えば、このような組成物は傷の治療に役立つだろうし、この場合、本来の生理学的応答は、傷の部位における内因的ＳＭｓの存在に関係がある。担体蛋白質サブユニットの有効量は内因的生物学的に活性なソマトメジンの半減期を延長するために十分な量である。少なくとも１種の担体蛋白質サブユニ７）とＳＭ−Ｃとの組成物を、蓄症における有効な生物学的分解可能な成長促進剤として使用することができる。現在では、抗生物質とステロイドとは市場で重要な動物成長促進剤である。両類についてはきびしい健康上の心配事があるので、新しい薬剤が、特に生物学的分解可能な薬剤がめられている。ＧＨは研究された。しかし、Ｓｌ’ｌ−Ｃ担体蛋白質サブユニット複合体は更に効果的だろう。なぜなら、ＳＭ−ＣはＧＨの成長促進効果の直接の仲介役だからである。ＳＭ−Ｃは糖尿病を起こし易いものでもなく脂肪分解性のものでもない。閉経期後の骨多孔症にあてはまるのと同じ理由から、ＳＭ−Ｃは担体蛋白質サブユニットとのある組成物として投与すべきであろう。すべてのこれらの理由から、担体蛋白質様の活性に必要な蛋白質構造を決定する多くの試みが行われた０本発明の担体蛋白質サブユニットを確認９分離したり、またはこれらを純粋な形で分離した試みは一つもなかった。本発明のもう一つの見解は人体血漿からの人体の担体蛋白質サブユニットを製造する方法であるが、これを構成しているものは（ａ）ｐＨを増加していく各水溶液で連続的に溶出を行って交差結合したデキストラン吸着剤のスルホプロピル誘導体上で、ｐＨが約４．５ないし７．５の水溶液に可溶のＣｏｈｎ留分ＩＶ−１の一部をクロマトグラフィにかけること、（ｂ）段階１ａ）と同じ吸着剤上でソマトメジン結合活性材を含む段階（ａ）からの留分を、ｐＨ約４．０以下の酸性溶液でクロマトグラフィにかけ、通過留分を捕集するか、または約１０％硫酸アンモニウムの中性溶液からの吸着によりアガロースのフェニル誘導体上で段階ｆａｔからの留分をクロマトグラフィにかけ、次いで略中性ｐＨの約０．５Ｍチオシアン酸ナトリウム溶液による溶出を行うこと、（Ｃ）ゲル濾過と酸性水溶液での溶出とによって、ソマトメジン結合活性材を含む段階（ｂ）からの留分をクロマトグラフィにかけ、酸性水溶液での溶出を行うこと、＋ｄｌ略中性のｐＨでの吸着によって、本質的に純粋なソマトメジン−Ｃに交差結合した固体サポート上で、ソマトメジン結合活性材を含む段階ｔｃ＋からの留分をクロマトグラフィにかけ、酸性水溶液での溶出を行うこと、ｔｅｌ逆相高性能液相クロマトグラフィによって、ソマトメジン結合活性材を含む段階（ｄｌからの留分をクロマトグラフィにかけることである。〔本発明実施の最良の方法〕本発明の理解を更に完全ならしめるために次の詳細な説明を開示する。〔ソマトメジン結合活性の分析〕ソマトメジン結合活性は配位子として放射性表示Ｉｔ８　１−ｓＭ（Ｓｒ１−Ｃ又はＩＧＦ−ｎ　）を使用する蛋白質結合分析によって測定する　Ｉｔｓ　ｌ− ３）１の結合された量を標準の調合品のそれと比較する。標準品は１０名の正常な血液提供者からの人体漿液の保存物のゲル濾過によって調整した。３５Ｉ１１の漿液に３５−ｌの４Ｎ酢酸を加えた。浄化した後、サンプルは流速８０ｍ１７時のＩＦＩの酢酸で平衡させた５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−５０（５Ｘ１００ｃｍ）　（分別範囲１５００ないし３００００）上にてクロマトグラフィを行った。すべての留分は、”’　Ｉ−ＳＭ−Ｃを用いてソマトメジン結合活性について分析された。結合活性はＫｄＯないし０．４が表れた。これらの留分を凍結乾燥し、ＩＭの酢酸に再溶解し、再びクロマトグラフィして結合ＳＭｓの全痕跡を除去した。最終粉末をＰＨ７，０の０．１？！燐酸塩緩衝剤３５１１　Ａに再溶解し、１００ｕ　１の量に等分し、そして−２６℃で貯蔵した。夫々の結合分析について、一つの標準としてこの材料の管を用いたが、これは随意に１．ＯＬＩ／ｍＡ！の値を割当てた。分析方法はＺａｐｆ等にて書かれた方法であった（”Ｓｅｒｕｍ　Ｌｅｖｅｌｓｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　（ＩＧＦ）　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｃａｒｒｉｅｒ＋”（インシュリン様の成長要素（ＩＧＦ）とその担体の漿液水準）　ＡｃｔａＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ　９５号、５０５〜５１７頁（１９８０））、担体蛋白質サブユニットがまだＳＭｓと複合されたサンプルについては、両者はＩＨの酢酸中で５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−５０クロマトグラフイ（０，９Ｘ　１１０ｃｍ）によって分離した。結合活性ピーク　（Ｋｄ、　１〜０．４）を次に凍結乾燥し、分析緩衝液中に戻し、試験した。結合されたＳＭｓを含まないサンプルについては、サンプルを分析緩衝液に対して透析して直接試験するか、または結合活性の濃度が低い場合は０．ＩＭの酢酸に対して透析して凍結乾燥し、少量の分析緩衝液に溶解した。分析緩衝液は、予め試験して競合する活性がないことを確認しておいた０、２％の人体または牛の漿液アルブミンを含むｐＨ７，０の０．１Ｍ燐酸ナトリウムであった。　Ｓｒ１−Ｃ又はＩＣＦ−ＩＩを５ｐｅｎｃｅｒの方法でヨウ素化したｍ　Ｇｒｅｃｕ、　Ｅ、Ｏ，、Ｅ、Ｍ、５ｐｅｎｃｅｒ等、　”ＳｅｒｕｍＳｏｍａｔｏ＊ｅｄｉｎ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　ｔｏ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｉｎｆｕｓｉｏｎ　１ｎＰａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｍｅｌｌｉｔｕｓ；　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅＤｅｇｒｅｅ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ＋’　（糖尿病患者の人体成長ホルモン注入に対する漿液ソマトメジンの応答；糖尿病抑制度との相関関係）　Ａｓ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｓｅｔ、　２８７号、７〜１０頁（１９８４）　、サンプルと標準品との連続希釈（２または４倍）物を３度分析した０分析用の管は１００ｕ１（７）　”Ｊ　ＳＭ、　２０．ＯＯＯｃｐｍと２００ｕ　ＩＩ　（７）サンプルとで構成された。この分析は４℃で１６時間行ったが、室温における２時間の培養にて満足な結果を得ることはできた。結合した＋ｔＪ　ＳＭを木炭抽出によって遊離状態から分離した。人体（または牛）の１％アルブミンを含む２％活性炭の、ｐＨ７，０の０．１Ｍ燐酸緩衝液への溶液０．８＋ａ１を氷で冷やしたものを加え、管を４℃で１５分間旋回させた。遠心分離の後、上澄みを計数した。　ｃｐｓを投与量の対数に対してプロットし、がっ未知品の効力を、１．ＯＵ／■ｌなる値を割当でた標準品のものと関係づけた。結合の特殊性は、無しッテルのＳＭの大過剰を伴ったサンプルを培養することにより決定した。〔担体蛋白質サブユニットの製法〕担体蛋白質サブユニットの製法はＣｏｈｎ留分ＩＶ−１で始まった。これは人体血漿留分であって、約１０％の血漿蛋白質と４０％の本来の血漿担体蛋白質活性材とを含んでいる。これは緑黄色のペーストで、約３５％が固体で、その大部分は変性した不溶性の蛋白質と糖蛋白質とである。このペーストの各１　ｋｇには約１０ｍｇの担体蛋白質が含まれている。下記の分析緩衝液には、別途指示がない限り、すべて次の酵素抑止剤が含まれている。すなわち、１ミリモルじ１′）のフッ化フェニールメチルスルフォニル（ ”ＰＭＳＦ’）と、１１ＯＮ−エチルマレイミド（”ＮＥＭ”）　と、１ｍＭのエチレンジアミンテトラ酢酸（“ＥＤＴＡ”）とである、酵素抑止剤は必須である。というのは各担体蛋白質は固有のプロテアーゼ活性をもっているが、または少なくとも一つの他の血漿プロテアーゼが親和クロマトグラフィ過程において同時精製されるからである。〔実施例１〕（８１イオン交換クロマトグラフイ留分ＩＶ−１を１回分の１　ｋｇに処理した。留分ＩＶ−１の１−に酵素抑止剤を含む、４０１１Ｍ酢酸アンモニウムのｐＨ５，６５酢酸溶液１０１を加え、４ ℃で一昼夜攪拌した。懸濁物を遠心分離し、１０１００ＯＯの半浸透膜による超濾過を行って上澄みを約１１に濃縮した。ｐＨ５，６５，４０ｍＭの酢酸アンモニウム−酢酸緩衝液にて予め平衡された交差結合したデキストラン（ＳＰ−５ｅｐｈａｄｅｘ、　Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のスルフォプロピル誘導体からなる１０　Ｘ　２５ｃｍのカラムに、４℃の状態にて全濃縮物を入れた。カラムを５１の同じ緩衝液で洗い、次ニｐＨ６，８ノ酢酸７７モニウム＜５０ｍＦＩ）１０１　Ｔ：洗い、最後ニｐＨ９，６の５０ｓ＋Ｈの酢酸アンモニウム−アンモニア２１で洗った。　ｐＨ９，６の溶出液を捕集して凍結乾燥した。結合分析によって測定した凍結乾燥物質中のＳ？Ｉ結合活性材の回収率は２０％であった。これは約１０倍の純化に相当した。山）疎水性相互作用クロマトグラフィ針結合活性を含む凍結乾燥物質を、１０％の硫安とｐＨ７，５の５０１トリス− （ハイドロキシメチル）アミノメタン（“トリスジー塩化水素（“トリス−ＨＣＡ　’）とを含む緩衝液に溶がし、同緩衝液に対して透析しそしてフェニルアガロースカラム（フェニルーセハロース、ファルマシア）に入れた。カラムを先ず１１の同じ緩衝液にて溶出し、次に０．針のチオシアン化ナトリウム（“Ｎａ５ＣＮ”）を含むｐＨ７，５（７）５ｈＭ　）　ＩＪ　スＨＣ７！　２　Ｊ　ニア、そして最後４１：ｐ）ｌ　９．０の５０ｍＭ　）リスにて溶出した。溶出した留分を捕集し、２８０ｎＭの紫外線吸収と結合分析におけるＳＭ結合活性とを試験した。　ｓＦＩ結合活性がＮａ５ＣＮ留分に現れた。これらを凍結乾燥し、次に蒸留水に対して透析した。析出した相当量の沈澱を上澄み液がら分離した。この段階の結果、回収率７０％であって精製は２０倍となった。（Ｃ）ゲル濾過上澄み液を凍結乾燥し、０．５Ｍの酢酸に溶がし、分別範囲が５．０００〜２３０，０００である交差結合したデキストランゲル（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１５０＋　Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の２Ｘ１００カラム上でクロマトグラフィを行った。　ＳＭ結合活性を含む留分を捕集した。針結合活性材の回収は結合分析によって８０〜９０％であり、精製の倍率は５倍であった。ｌｄｌ親和クロマトグラフィ５ｈ−ｃ親和カラムは最初人体血漿から予め精製されたＳＭ−Ｃ（Ｓｐｅｎｃｅｒ等＋　Ｉｎ５ｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ／ＳｏｍａｔｏｌＩｅｄｉｎｓ、　１５集者５ｐｅｎｃｅｒ。Ｅ、Ｍ、、Ｗａｉｔｅｒ　ｄｅ　Ｇｒｕｙｔｅｒ　１９８３）　８１頁）をアガロース（Ａｆｆｉ−Ｇｅ１１５、　ＢｉｏＲａｄ）のハイドロキシサンシンイミジル誘導体とｐＨ８，０゜２５°で２時間カップリングさせることによって、最初Ｓ？Ｉ−Ｃ親和カラムを製造した。前の段階がらの結合した担体蛋白質留分をｐＨ７，０の０．１Ｍｅ酸ナトリウムに対して透析し、次にＳＭ−Ｃ親和カラムに入れた。同緩衝液で１５ｍ１洗会した後、Ｓ？Ｉ結合活性材を０．５Ｍの酢酸１０ｍ　ｌで溶出し、凍結乾燥した。ＳＭ結合活性に対して次に、分別範囲が４０００−９００００であって、０．釦の酢酸にて平衡させた交差結合したデキストランゲル（Ｓｅ−ｐｈａｄｅｘ　Ｇ −１００＋　Ｐｈａｒｓａｃｉａ）上でクロマトグラフィを行った。活性材を含む留分をＳｌ’ｌ結合分析が示すように凍結乾燥した。Ｔｅｌ高性能液相クロマトグラフィ（”ＨＰＬＣ″）凍結乾燥した材料に対して、ブチルシラン（ＶｙｄａｃＣ，ＲＰ　（逆相））カラム上でＨＰＬＣによりクロマトグラフィを行った。　ＳＭ結合活性材を０．１％三フッ化酢ｉ（”ＴＦＡ ”）中で、アセトニトリルの０〜６０％の線形傾斜により溶出した。　ＳＭ−Ｃ結合活性の鋭いピークが起こったのはアセトニトリルが３９％の所であり、これを捕集した。このピークにおけるＳＭ結合活性は、銀ステイン（ＢｉｏＲａｄ）でスティンを施すと、１２．５％ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（“５Ｏ５−ＰＡＧＥ”）において単一バンドとして現れた。分離された担体蛋白質サブユニ７）の分子量は約２６ｋＤａであったことは、ベータカプトエタノールの存在においてＤＳＤ−ＰＡＧＥが示した通りである。この担体蛋白質サブユニットの全体にわたる収率は本来の結合活性の４％であった。この担体蛋白質サブユニットのＮ末端アミノ酸列は、ＨｕｎｋａｐｉｌｌａｒａＩＸｄ　Ｈｏｏｄの方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　９１号、４８６頁（１９８３））によって次のように判定されたが、これには自動式ガス相シケネータ（Ｂｅｃｋｓａｎ　６３００）を用いた。Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ− シａｌ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｒ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｒｇ− Ａｌａ−Ｌｅｕ−＾】ａ−１ここでＲはシスティンまたは半シスチンを示す。この担体蛋白質サブユニットはＩｉｓ１−５Ｍ−Ｃを結合し、周期的酸性５ｃｈｉｆｆ（“ＰＡＳ”）スティン処理によってグリコジル化されていることが分かった。〔実施例２〕（ａ）イオン交換クロマトグラフィＣｏｈｎ留分子Ｖ−１の１１を、抑止剤（１ｍＭ　ＥＤＴＡ、　１　ｍＭ　ＮＥＭ、　Ｏ，１ｍＭＰＭ５Ｅ及び１＋ｇ／ｌアプロチニン）を含むｐＨ５，６５の４０−Ｍ酢酸アンモニウム−酢酸緩衝液４１にて、４℃で一昼夜抽出した。蛋白質溶液を９０００Ｘｇで３０分間旋回して、上澄み液から沈澱を分離した。沈澱を上記の緩衝液４Ｅで４時間かけて再抽出した。両抽出からの上澄みを混ぜて一つにした。４℃で上記の緩衝液にて平衡された５Ｐ−Ｓｅｐｈａｄｅｘカラム（２０００＋ｍ　１樹脂）に上澄みを入れた。上澄みを加えた後、Ａｔ、。の滴下が１．０以下になるまでカラムを同緩衝液にて洗った。抑止剤入りであって、ｐＨ６，８の５０−Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液にてＡｇｕｅが１．０以下になるまでカラムを更に洗った０次にＳ？ｌ結合活性材を抑止剤と共にｐＨ９，６の６０ｍＭの酢酸アンモニウム−アンモニア緩衝液で溶出した。最後にカラムを１．０Ｍのｌ１ｔａＣｊ！Ｇ含ム、ｐＨ９，６の６０ｍＭの酢酸アンモニウム−アンモニアで浄化した。１ｋｇのＣｏｈｎ留分ＥＶ−１からの抽出物は約５０００ユニツトのＳＲ結合活性を与えた。　ｐｉ　９．６の留分から約７．５％の活性材が回収されたが、これは結合分析によって測定された通りである。この留分の重量は約５．５ｇであった。 −）イオン交換クロマトグラフィ前のカラムからのｐＨ９，６の留分を、抑止剤（０，１ｍＭＥＤＴ＾、　ＰＭＳＦ。ＮＥＷ及び１■ｇ／ｌアプロチニン）を含むＩＭの酢酸溶液１３０ｍＩ中に溶かした。溶液を同じ緩衝溶液に対して４℃で一昼夜透析し、５　Ｘ４Ｑｃｓ　５Ｐ −Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムに加えた。このカラムは予め同じ緩衝液にて平衡されていた。カラムをＡｏ、。が約０．２になるまで洗い、次に、抑止剤を含むｐｉ　９．６の６０ｍＭ酢酸アンモニウム−アンモニアにて溶出した。若干の変性蛋白質を沈澱させるために一昼夜蒸留水に対して４℃で透析された通過する留分中に針結合活性材は存在している。透析の後、３０分間、９０００Ｘｇで遠心分離を行って沈澱物を除去し、上澄みを凍結乾燥した。　ＳＭ結合活性材は可溶性の通過留分に定量的に回収され、一方ＳＭ−Ｃはｐ）ｌ　９．６留分中に回収された。ｔｅｌゲル濾過ＳＭ結合活性材を含む留分の一定量（０，３３ｇ）を次に０．５ＦＩ酢酸溶液の最低限の量に溶かし、２．５　Ｘ　１００ｃｍの５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１００カラムに入れたが、このカラムは同じ条件で平衡されていた。カラムを０．５Ｍの酢酸で溶出した。５ｍｎ留分のＡｌａ。と針結合活性とを測定した。活性を示すこれらの留分を混ぜ合わせて凍結乾燥した。この段階で精製は５倍であり、ＳＭ結合活性材を定量的に回収した。全物質の処理には何回も操作する必要があった。ｌｄｌ親和クロマトグラフィ前の段階からの結合活性材を含む留分８０＋ｉｇを抑止剤入りのｐＨ７，０の０．１Ｍ燐酸塩緩衝液４０ｍ　Ｉｉに溶かし、同じ緩衝液に対して約４時間透析を行った。透析後、溶液を３ｍｌのＳＭ−Ｃ−親和カラム樹脂と混合した。混合物を静かに４℃で一昼夜攪拌し、結合を強化した。樹脂をカラム透過によって蛋白質溶液から分離した。カラムをまず、燐酸塩緩衝液５０ｍ　ｌで洗い、次に０．５Ｍの酢酸で溶出した。　ＳＭ結合活性材（約１０ユニツト）を真空遠心分翻機（Ｓｐｅｅｄ−Ｖａｃ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ、　５ａｖｎｔ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）中で乾かした。ｔｅ）ｏｐｔ、ｃ回収したＳＭ結合活性材の１０ユニツトを０．１％ＴＦＡ溶液１−１に溶かした。　Ｖｙｄａｋ　Ｃ４ＲＰカラムへサンプルを注入した後、カラムを０〜６０％のアセトニトリル（頃斜によって６０分溶出をした。担体蛋白質ピークは約３９％のアセトニトリルの点で現れたが、これを捕集し凍結乾燥した。　ＳＭ結合活性材を定量的に回収したが約６０マイクログラムであった。ＳＭ結合活性は銀スティン処理後５０５−ＰＡＧＥ上に単一ノインドとして現れたが、分子量は約１５ｋＤａであった。この例の全収率は約３％であった。純担体蛋白質サブユニットの特定の活性はＡｕｇ／単位と測定されたが、ここで１単位は前記のように１０人の正常な男女の保存物から調合した標準血漿１ｍＪ中の量である。Ｎ末端列決定のために、４Ｍグアニジン−ＩＣＩ　、　０．５Ｍ　）リス−）１ｃｆｆｉ及びｐｕ　８．６の０．７％×β−メルカプトエタノール中で、ＳＲ結合活性を一昼夜にわたって変性１分離した。ヨードアセトアミドを溶液に加えた０反応は暗所で１時間実施し、ＴＦＡを０．１％まで加えて中止した０反応混合物をＨＰＬＣカラム上に注入し、カルボキシアミドメチル化された担体蛋白質サブユニットは前のように回収され、Ｎ末端列分析に利用された。この分析によって実施例１に述べたと同じＮ末端アミノ酸列が示された。〔実施例３〕担体蛋白質サブユニットをゲル濾過段階（Ｃ１によって実施例２の場合のように精製した。　Ｓ？Ｉ結合活性材を含んで出来たサンプルの定１１３０ｍｇを０．１％ＴＦＡ　ｔ８液に溶かし、準備用のＶｙｄａｋ　Ｃ４ＲＰカラムに注入した。カラムを０〜６０％のアセトニトリル傾斜によって６０分間溶出した。ＳＭ結合活性ピークは約３９％アセトニトリルの点で溶出したが、これを捕集して凍結乾燥した。　ＳＭ結合活性材は定量的に回収された。サンプルを次に、ベータメルカプトエタノールを含むトリス−グリシン緩衝液中に懸垂し、５Ｏ５−ＰＡＧＥ　（１２，５％ポリアクリルアミド）にて分離した。　１５．２１．２６．３０ｋＤａの担体蛋白質サブユニットに相当するバンド（これらは夫々−ｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔの表示針を結合する）がゲルから切取られ、蛋白質はトリス−グリシン緩衝液中へ電気溶出された。担体蛋白質サブユニットの夫々を凍結乾燥した０回収は定量的であった。〔実施例４〕傷の治療を可能にするＳＭ担体蛋白質サすブニ７）の可能性を測定するように設計した実験を次のように実施した。６匹の麻酔をかけた３００グラムの雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラフトの夫々の皮下に（ｓ、ｃ、）、その背中の四分の一区分の夫々にＳｃｈｉｌｌｉｎｇ−Ｈｕｎｔワイヤメンシュの傷用円筒を植え込んだ０円筒形チャンバーは内径２０Ｘ１．６ｍｍ、容積５２０ｕ　１のものであり、ステンレス綱ワイヤメツシュで構築されていた。一端をワイヤメツシュで密封し、他端をシラスチック（耐熱性シリコンゴム）円板で密封した。植え込んだ後、典型的な傷治癒現象の進行が起きた。すなわち、血管の血栓に次いで次々とワイヤメツシュを通して多形核白血球、大食細胞、線維芽細胞の移動が起こり、次に線維増殖、コラーゲン合成及び脈管形成が起きた。この過程の間、中空チャンバに集まった傷液を採取するか活性剤を注入すること（皮下にシラスチック円板を通して）ができた。治癒の殆どが、植込み後１７日までに完了した。しかし中央の空洞は決して完全に消えてしまわなかった。１５ｋＤａＳＭ担体蛋白質サブユニットを０．１％の牛のアルブミンを含むＰＢＳ（１５０ｍＭ塩化ナトリウム、　１０ｍＭ燐酸ナトリウム、　ｐＨ７，４）に溶解した。傷用チャンバにこの溶液（１５ｋＤａの種を１゜４ｕｇ含む）１００ｕｊ！を１２時間毎に注入した。生物学的に活性なソマトメジン量より僅かに過剰であって、これにより存在するソマトメジンの半減期を高めるように、この量は選定された。１７日の後、傷用円筒を除去し、線維組織を各円筒から注意深くこそぎ取りた。　１５ｋＤａ担体蛋白質サブユニット材料を注入した円筒はすべて、対照供試体中のものよりもかなり広範囲に凋密な線維組織で充たされていた。特に１５ｋＤａの担体蛋白質サブユニットを含む傷用チャンバ内に１９．５± １　（ＳＤ）ｍｇの蛋白質が沈澱していたのに対して、対照供試体中の沈澱は７．０±１．６ｍｇであった。　ＤＮＡ合成も、担体蛋白質サブユニットを含むチャンバ内の方がはるかに盛んであった（対照品の３８０±１’ｓｕｇに対して１１６０±２００ｕｇ）　、同様にして、ヒドロキシプロリンの水！１！（コラーゲン合成の指示薬）は担体蛋白質サブユニットを含むチャンバの場合が相当高かった（対照品の２７０ｕｇに対して４６０ｕｇ）。これらの結果が立証しているように、傷用チャンバ内に１５ｋＤａの担体蛋白質サブユニ７）を注入すれば治癒速度が著しく高くなる。我々は本発明のいくつかの実施態様を説明したが、基本的な過程と担体蛋白質サブユニットとを変更して、本発明の過程と組成物とを利用した他の実施態様を提供することができることは明瞭である０本発明の範囲は例示として示した特定の実施態様よりもむしろ次の特許請求の範囲によって限定される。国際調査報告？ＣＴ／ＵＳ　８１！１０ＬＯ４２＋１１＋、＋１＋ｌ＠ａｌ　Ａ。１．ｅＮｂ＊Ｉｌ　ｍｓ、　Ｐ　Ｃｍ　＋弔Ｓ ε８１りＩＣ４２

Claims

【特許請求の範囲】

１．ソマトメジン様のポリペプチドを結合し得る担体蛋白質サブユニット。
２．分子量が約３００００ドルトンまたはそれ以下である請求項１記載の蛋白質サブユニット。
３．分子量が約１５０００以上約３００００ドルトン以下である請求項１記載の蛋白質サブユニット。
４．ソマトメジンを結合し得る担体蛋白質サブユニットであって、下式の如きＮ末端アミノ酸列を有することを特徴とする。【配列があります】，ここで、Ｒはシスティンないし半シスチンであり、５−ＡｌａはＧｌｙであってもよく、また１４−ＧｌｕはＰｈｅであってもよい。
５．分子量が約３００００ドルトンまたはそれ以下である請求項４記載の蛋白質サブユニット。
６．分子量が約１５０００以上約３００００ドルトン以下である請求項４記載の蛋白質サブユニット。
７．ソマトメジン様のポリペプチドを結合し得る本質的に純粋な担体蛋白質サブユニット。
８．本質的に他の蛋白質類，ペプチド，ヌクレオチド，ポリサッカライド，脂質，及び塩類がない請求項７記載の本質的に純粋な担体蛋白質サブユニット。
９．分子量が約３００００ドルトンまたはそれ以下である請求項７記載の本質的に純粋な担体蛋白質サブユニット。
１０．分子量が約１５０００以上約３００００ドルトン以下である請求項７記載の本質的に純粋な担体蛋白質サブユニット。
１１．下式の如きＮ末端アミノ酸列を有することを特徴とする請求項７記載の本質的に純粋な担体蛋白質サブユニット。【配列があります】ここで、Ｒはシスティンないし半シスチンであり、５−ＡｌａはＧｌｙであってもよく、また１４−ＧｌｕはＰｈｅ　あってもよい。
１２．請求項１〜請求項１１の任意の一項に記載された少なくとも一種類の担体蛋白質サブユニットの有効量を含む治療組成物、または薬理学的に許容できるその塩及び薬理学的に許容できる担体。
１３．ソマトメジン依存性の癌の成長を抑制し、末端肥大症におけるソマトメジン−Ｃの効果を抑制し、糖尿病性網膜疾患における網膜血管及び線維組織の成長を抑制し、背高児童の成長を抑制し、ケロイド傷跡の成長を抑制し、あるいは悪性眼球突出における眼窩組織の成長を抑制する方法であって、請求項１２に記載された組成物の有効量を投与することを含む方法。
１４．少なくとも一種の人体ソマトメジン様のポリペプチドに実質的に複合された請求項１〜請求項１１の任意の一項における少なくとも一種類の担体蛋白質サブユニットを含む組成物。
１５．人体の骨多孔症を治療し、骨の成長を促進し、動物の成長を促進し、人体及び他の動物の傷の治癒を促進し、成長ホルモン欠乏の患者の成長を促進する方法であって、請求項１４記載の組成物の有効量を投与することを含む方法。
１６．請求項１記載の担体蛋白質サブユニットに対する単クローンまたは多クローン抗体。
１７．人間の体液中の遊離ソマトメジン水準を測定する方法であって、請求項１記載の担体蛋白量サブユニットに複合したソマトメジンを非結合ソマトメジンから分離することを含む方法。
１８．人体の血漿Ｃｏｈｎ留分ＩＶ−１から担体蛋白質サブユニットを製造する方法であって、（ａ）ｐＨが約４．５〜７．５の水溶液に可溶性のＣｏｈｎ留分ＩＶ−１の分留物を、ｐＨａを上げながら、水溶液で連続的に溶出していくことによって、交差結合したデキストラン吸着剤のスルホプロピル誘導体上でクロマトグラフィを実施し、（ｂ）ソマトメジン結合活性材を含む段階（ａ）からの留分のｐＨが約４．０以下である酸性溶液に段階（ａ）と同じ吸着剤上でクロマトグラフィを行い、通過留分を捕集するか、または、約１０％の硫安の中性溶液からの吸着にてアガロースのフェニル誘導体上で段階（ａ）付からの留分にクロマトグラフィを行い、略中性ｐＨにて約０．５Ｍチオシアン酸ナトリウム溶液での溶出を行い、（ｃ）ゲル濾過によってソマトメジン結合活性材を含む段階（ｂ）からの留分にクロマトグラフィを行い、酸性水溶液の溶出を行い、（ｄ）ほぼ中性のｐＨでの吸着により本質的に純粋なソマトメジン−Ｃに交差結合した固体のサポート上で、ソマトメジン結合活性材を含む段階（ｃ）からの留分にクロマトグラフィを行い、酸性水溶法での溶出を行い、そして、（ｅ）可逆相高性能液相クロマトグラフィによってソマトメジン結合活性材を含む段階（ｄ）からの留分にクロマトグラフィを行うことを含む方法。
１９．人体または他の動物の傷の治癒を促進する方法であって、請求項１２記載の組成物の有効量を投与することを含む方法。