JPH01319422A - 神経疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、感染Ｍｉ織より抽出される生理活性物質を有
効成分として含有する神経疾患治療剤に関する。

（従来の技術） 神経成長促進因子（ＮＧＦ）は、交換神経節や知覚神経
節の神経細胞の分化や成長を促進する作用を有し、末梢
神経系の神経疾患との関連が古くから示唆されており、
これら疾患に対する治療剤の候補として挙げられている
。また近年、ＮＧＦは脳内でも合成され機能しているこ
とが明らかになり、アルツハイマー型老人痴呆症の発症
の原因とＮＧＦの相関が注目され、痴呆治療薬としてＮ
ＧＦを活用する可能性が期待されている。

しかし、ＮＧＦは蛋白性因子であるため、人間への治療
剤として使用する場合には、投与方法、剤形など多くの
問題点がある。従って、ＮＧＦと同様の神経成長促進作
用を有し、人間に容易に投与でき且つ副作用の少ない薬
剤が望まれている。

本発明者らは、各種ウィルスを動物又は培養１織に接種
して起炎させた感染動物組織（以下これらを単に感染組
織という）より抽出した生理活性物質について探索研究
を行った結果、本発明生理活性物質がＮ　Ｇ　Ｆ　様の
神経系作用を有することを見い出し本発明を完成した。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は、感染組織より抽出される生理活性物質
を有効成分として含有する各種神経疾患治療剤を提供す
ることにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明治療剤は、感染ｍ織を磨砕し、抽出溶媒を加えて
Ｍｉ織片を除去した後、除蛋白処理を行い、これを吸着
剤に吸着せしめ、次いで吸着成分を溶出することにより
得られる生理活性物質を有効成分として含有するもので
ある。

本発明に用いるウィルスとしては、起炎作用を有スルウ
ィルス類、好ましくは、ワクチニアウィルス、牛痘ウィ
ルス、痘渣ウィルス、エフトロメリアウィルス、サルポ
ックスウィルス等のオルソポックスウィルス、オーツウ
ィルス、パラワクチニアウィルス、ウシ乳頭状口内炎ウ
ィルス等のパラポックスウィルス、ヒツジポックスウィ
ルス、ヤギポックスウィルス、鹿皮病ウィルス等のヤギ
ポックスウィルス、ニワトリポックスウィルス、ノウサ
ギ線維腫ウィルス等のトリポックスウィルス、ウサギ粘
液腫ウィルス、ウサギ線維腫ウィルス等のウサギポック
スウィルス、その他豚痘ウィルス、Ｙａｖａサル腫瘍ウ
ィルス、Ｔａｒａポックスウィルスなどポックスウィル
ス科に属するウィルス類を挙げることができる。

感染組織を得るための動物としては、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハムスター、モルモッ
ト、ラット、マウス、ニワトリなど種々の哺乳動物や鳥
類を用いることができ、ポックスウィルスの種類や目的
に応じて選択できる。

又、培養組織としては、使用する種類のポックスウィル
スが増殖可能な培養細胞を用いることができ、例えば、
ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハム
スター、モルモット、ラット、マウス及びそれら胎児の
腎臓、皮膚、肺臓、率丸、肝臓、筋肉、副腎、甲状腺、
脳、神経細胞、血球など各組織の培養細胞やＩＩＩ瘍細
胞培養株、ｌ１ｅｌａ細胞等のヒト由来の培養Ｍｌ織、
並びに非酸尿膜などが挙げられる。

これら感染組織を無菌的に採取して磨砕し、そのｌ乃至
５倍量の抽出溶媒を加えて乳化懸濁液とする。

抽出溶媒としては、蒸留水、生理食塩水、弱酸性乃至弱
塩基性の緩衝液などを用いることができ、グリセリン等
の安定化剤、フェノール等の殺菌・防腐剤、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム等の無機塩類な
どを適宜添加してもよい。この時、凍結融解、超音波、
細胞膜溶解酵素又は界面活性剤等の処理により細胞組織
を破壊して抽出を容易にすることができる。

得られた乳状抽出液を濾過又は遠心分離して＆１１￥ａ
片を除去した後、除蛋白処理を行う。除蛋白は、公知の
方法により実施でき、加熱、超音波、蛋白質変性剤、例
えば、酸、塩基、尿素、グアニジン、有機溶媒、界面活
性剤等による処理、等電点沈澱、塩析等の方法を適用す
ることができる０次いで、濾紙（セルロース、ニトロセ
ルロース等）、クラスフィルター・セライト、ザイツ濾
過板等を用いた濾過、限外濾過、ゲル濾過、イオン交換
樹脂、遠心分離などにより析出してきた不溶蛋白質を除
去する。

こうして得られた有効成分含有抽出液を、塩酸、硫酸、
臭化水素酸等の酸を用いて酸性、好ましくはｐＨ３，５
乃至５．５に調整し、吸着剤への吸着操作を行う。使用
可能な吸着剤としては、活性炭、カオリン、イオン交換
樹脂などを挙げることができ、抽出液中に吸着剤を添加
し撹拌するか、吸着剤を充填したカラムを通過させるこ
とにより、有効成分を吸着させることができる。

吸着成分より、本発明物質を溶出するには、前記吸着剤
に溶出溶媒を加え、室温又は適宜加熱して或いは攪拌し
て溶出し、濾過等の通常の方法で吸着剤を除去して達成
できる。用いられる溶出溶媒としては、水、メタノール
、エタノール、イソプロパツール等又はこれらの適当な
混合溶液、或いは塩基性溶媒、好ましくはｐＨ９乃至１
２に調整した前記溶媒を使用することができる。

このようにして得られた溶出液を、好ましくはｐＨ６，
５乃至８．５の中性付近に調整した後、減圧下に蒸発乾
固又は凍結乾燥することによって、目的とする生理活性
物質を得ることができる。

前記操作によって抽出、精製された本発明を効成分は以
下の物理化学的性質を有する。

■性状：淡黄褐色無定形の吸湿性粉末 ■溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶■紫外部
吸収：　ＵＶｍａｘ　　２５５〜２７５ｎｍ■ニンヒド
リン反応：陽性 ■本発明物質を２■をとり、過塩素酸１−を加え、液が
無色となるまで加熱し、希硫酸３−１塩酸アミトール０
．４　ｇ及び亜硫酸水素ナトリウム８ｇに水１００Ｗ１
１加えて溶かした液２−、モリブデン酸アンモニウム１
ｇに水３０−を加えて溶かした液２−を加え放置すると
き、液は青色を呈する。

■本発明物質５ｗをとり、水を加えて溶かしＩＯ−とし
、この液１−にオルシン０．２ｇ及び硫酸第二鉄アンモ
ニウム０．１３５ｇにエタノール５−を加えて溶かし、
この液を塩酸８３艷に加え、水を加えて１０〇−とした
液３−を加え沸騰水浴中で加熱するとき、液は緑色を呈
する。

■本発明物質の水溶液は硝酸銀試薬で沈澱を生じる。

■核酸塩基類を含有する。

■本発明物質に対する各種蛋白検出反応は陰性である。

以下は、本発明物質の製造方法の実施例である。

但し、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

（実施例） 実施例１゜ 健康な成熟家兎の皮ｙ５にワクチニアウィルスを接種し
感染させた後、発痘した皮膚を無菌的に剥出しこれを細
切した後フェノール加グリセリン水を加え、ホモゲナイ
ザーで磨砕し乳状とした０次いでこれを遠心濾過し、得
た濾液を塩酸で弱酸性（約ｐＨ４，５乃至５．５）に調
整した後、流通蒸気下１００℃で加熱処理し濾過した。

濾液はさらにザイツ濾板を用いて濾過した後、水酸化ナ
トリウムで弱アルカリ性（約ｐＨ８，５乃至１０．０）
とし、さらに１００℃で加熱処理した後濾過した。濾液
を塩酸でｐＨ４，５とし、活性炭１．５％を加えて１乃
至５時間攪拌した後濾過した。

濾取した活性炭に水を加え水酸化ナトリウムでｐＨ９，
４乃至ＩＯに調整し、３乃至５時間攪拌した後、濾過し
た。濾液を塩酸で約ｐＨ７の中性付近に中和し、減圧下
に濃縮乾固して本発明物質を得た。

実施例２゜ 実施例１と同様にして得た吸着活性炭にメタノールを加
え、１時間撹拌した後濾過した。減圧下に乾固して有効
成分を得た。

（作用） 次に本発明治療剤の毒性試験及び臨床試験の結果の一例
を示す。

（１）毒性試験 雌雄マウス及び雌雄ラットに本発明治療剤の有効成分で
ある生理活性物質を経口、皮下、腹腔内、静脈内等の経
路で投与し、急性毒性試験を行った。

その結果、動物種及び性差に関係なく、いずれの投与経
路においても、本発明物質のＬＤＳ。は５，０００ａｉ
ｒ／ｋｇ以上であった。

また、亜急性毒性及び生殖試験など各種の安全性試験を
行ったが、各臓器で全く異常は認められず、生殖試験に
おいても、母体、胎仔、新生仔及び出生仔の生殖能力に
対して全く影響を与えなかった。

（２）神経成長促進作用 ＮＧＦに応答して神経突起を形成し交換神経様の特性を
持つ細胞に分化するＰＣ１２ｈ（ラットの褐色細胞腫）
細胞を用いて、本発明物質の神経成長促進作用を調べた
。

ＰＣ１２ｈ＄ｉｌ胞を、５％ウマ血清及び５％準胎児ウ
シ血清を含むＤＦ培地のコラーゲンコート２４−ｗｅ１
１マイクロプレートに移植した。−夜培養後、培養液を
無血清のものと置き換え、且つヒトトランスフェリン、
ウシインシュリン、プロゲストステロンを補い、本発明
物質を１００ｇ／−となるように加え、３７℃、９０％
空気−１０％炭酸ガス下で３日間インキュベートした。

神経突起（≧２０μｍ）を存する細胞数の割合を、位相
差顕微鏡を用い、無作為の１０範囲で細胞数を計測して
求めた。

その結果、神経突起形成及び細胞表面の形態変化におい
て、本発明物質はＮＧＦと類似の神経細胞成長作用を有
することが認められた。

（３）臨床試験 ■、帯状疱疹後神経痛 帯状疱疹後神経痛の患者に対して、本発明物質８■を毎
日２回４週間経口投与した結果、６３％の患者で軽度以
上の改善が得られ、全体の約半数において著明改善又は
中等度改善であった。

■、脳浮腫 脳浮腫の患者に対して、−日に本発明物質１０乃至３６
■を１乃至２週間静脈内投与又は点滴静注し、その後病
状に従って、８乃至１６ｗを毎日２回経口投与する治療
を数週間継続した。

ＣＴスキャンにより浮腫の大きさを経時的に測定すると
共に、神経学的な評価スケールを用いて、本発明治療剤
の臨床効果の評価を行った。

治療開始後１０日目におけるステロイド剤と本発明治療
剤の治療効果を比較した結果、ステロイド剤による改善
の割合が４２％であったのに対して、本発明治療剤では
６３％であり明らかに優っていた。

■、痴呆症 脳器官性障害、脳血管性痴呆、アルツハイマー型痴呆な
どの患者を対象として臨床試験を行った。

−日当り本発明治療剤１０ｑｔを静脈内又は点滴静注で
患者に投与した。

長谷用弐簡易知能精神機能評価スケール、ならびに意欲
・感情等の精神症状、日常生活動作スケール（ＡＤＬ）
などによる評価、及び脳波やＣＴスキャンなどの臨床検
査、或いはＣＢＳスケールによる痴呆症状の評価などの
方法を用いて臨床試験の評価を行った。

その結果、８週間投与した患者において、約７０％以上
の症例について、運動機能低下、言語障害、意欲低下、
注意・記憶力低下、失禁、情緒障害等の症状を改善する
有効性が認められた。

■、脊髄小脳変性症 本発明物質を遺伝性を髄小脳変性をもつ家系の４人に数
カ月間３乃至８■を連日静脈内投与した。末期症状にあ
った２人の患者には治療効果は見られなかったが、症状
が進行期であった残り２名の患者においては、失禁、運
動失調、視力減退、夜間痩彎・失調性歩行等に対し顕著
な改善効果が認められた。

本発明治療剤の効果は治療開始後２週間で現れ、症状進
行中の１人の患者においては２週間治療が中断されたが
、その中断期間中に再発したあらゆる病理症状は、本発
明治療剤による治療を再開することで再び改善された。

尚、上記いずれの臨床試験において、重篤な副作用はも
ちろん、不眠、発汗、口渇、消化器官異常など軽度な副
作用もほとんど認められなかった。

（効果） 上記の薬理試験及び臨床試験からも明らかなように、本
発明治療剤はＮＧＦ様の神経成長促進作用を有し、病変
成いは生理機能の低下した脳細胞や神経細胞を修復する
働きがあるため、脳動脈硬化症、脳炎後遺症、脳卒中後
遺症、頭部外傷後遺症等に伴う脳血管性痴呆、アルツハ
イマー型老年痴呆を含むアルツハイマー病、パーキンソ
ン病やハンチントン舞踏病等の皮質上痴呆などの痴呆症
、脳浮腫、脊髄小脳変性症などの脳疾患の他、自律神経
失調症、帯状疱疹後神経痛など交換神経や知覚神経の病
変やＦ員傷に伴う各種神経疾患などの治療剤として非常
に有用である。

本発明治療剤は、低毒性で副作用がほとんどなく経口投
与可能なため、安全に長期的な使用ができ、特に慢性的
な疾患を治療するのに存利である。

（実施例） 本発明生理活性物質を活性成分として含有する脳疾患及
び神経疾患治療剤は、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤、粉末、液剤、注射剤、座剤等の形態とすること
ができる。

処方にあたっては本発明物質を単独で用いてもよいし、
また他の医薬活性成分との配合剤とすることも可能であ
る。

経口投与製剤には、そのまま或いは適当な添加剤、例エ
バ乳糖、マンニット、トウモロコシデンプン、バレイシ
ョデンプン等の慣用の賦形剤と共に、結晶セルロース、
セルロース誘導体、アラビアゴム、トウモロコシデンプ
ン、ゼラチン等の結合剤、トウモロコシデンプン、バレ
イショデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の
滑沢剤、その他増量剤、湿潤化剤、緩衝剤、保存剤、香
料等を適宜組み合わせて錠剤、散剤、顆粒剤或いはカプ
セル剤とすることができる。

注射剤としては、注射用蒸留水、生理食塩水、５乃至２
０％ブドウ糖注射液等の水性溶剤、又は植物油、合成脂
肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステル、プロピレングリ
コール等の非水性溶剤の溶液、懸濁液若しくは乳化液と
することができ、必要に応じ溶解補助剤、等張化剤、懸
濁化剤、乳化剤、安定剤、保存剤等の通常用いられる添
加剤を適宜加えてもよい。

又、凍結乾燥製剤としてバイアル瓶等に入れ、使用時に
上記溶媒で適宜溶解して使用することもできる。

さらに本発明物質は、各種基剤、例えば乳剤性基剤又は
水溶性基剤と混和して平削としたり、その他吸入剤、エ
アゾール剤などに製剤化することができる。

本発明治療剤の望ましい投与量は、投与対象、剤形、投
与方法、投与期間等によって変わるが、所望の効果を得
るには、−ａに成人に対して有効成分債て一日に１乃至
１００ａｖ−好ましくは２乃至４０ｍｇ経口或いは非経
口（例えば注射剤）投与することができる。

以下に本発明治療剤の処方例を示す。

処方例１．　（錠剤） 成　　　分　　　　　　　　　　　　１錠当り　（■）
本発明化合物　　　　　　　　　　　　４乳　　　糖　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１０６結晶セルロ
ース　　　　　　　　　　４０ステアリン酸マグネシウ
ム　　　　　１０処方例２．　（カプセル剤） 成　　分　　　　　　　１カプセル当り　（■）本発明
化合物　　　　　　　　　　１０乳　　　糖　　　　　
　　　　　　　　　　　２００タ　　ル　　り　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　４０処方例３．（
注射剤）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）感染組織より抽出される生理活性物質を有効成分
   として含有する神経疾患治療剤。（２）帯状疱疹後神経
   痛治療剤である特許請求の範囲第１項記載の神経疾患治
   療剤。 （３）脳浮腫治療剤である特許請求の範囲第１項記載の
   神経疾患治療剤。 （４）抗痴呆剤である特許請求の範囲第１項記載の神経
   疾患治療剤。 （５）脊髄小脳変性症治療剤である特許請求の範囲第１
   項記載の神経疾患治療剤。