JPH01230520A

JPH01230520A - 新規生理活性物質

Info

Publication number: JPH01230520A
Application number: JP63281784A
Authority: JP
Inventors: Jinemon Konishi; 小西　甚右衛門
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1987-11-06
Filing date: 1988-11-07
Publication date: 1989-09-14
Anticipated expiration: 2011-10-02
Also published as: JP2539674B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、感染組織より抽出される新規生理活性物質及
び該生理活性物質を有効成分として含有する生体機能賦
活剤に関する。

（従来の技術）動脈硬化等の器質的な血管の病変や寒冷、身体的及び精
神的ストレス、薬物等の各種誘因によって生体局所の血
流障害が生じ、虚血状態に陥った組織や臓器の機能障害
、これに伴う冷感、しびれ、痛み、知覚鈍麻等の症状が
現れる。この状態が長く続くと局所組織は萎縮、変性、
ついには壊死に陥る。

高齢化社会を迎え、日常多くの患者が、特に老齢者にお
いて、しびれ、痛み、機能障害等の症状に悩まされてい
る。従って、病態局所の血流を改善し低下した組織の機
能修復作用を有し、且つ副作用がない安全な薬剤の開発
が望まれている。

本発明者は、各種ウィルスを動物又は培養＆ｆｉ織に接
種して起炎させた感染動物＆ｌｌ織（以下これらを単に
感染組織という）より抽出した生理活性物質について探
索研究を行った結果、本発明物質が優れた病態局所の血
流改善作用及び低下した生体機能の賦活化作用を有する
ことを見い出し本発明を完成した。

（発明が解決しようとする問題点）本発明の目的は、感染組織より抽出される生理活性物質
を有効成分として含有する生体機能賦活剤を提供するこ
とにある。

（問題点を解決するための手段）本発明物質は、感染組織を磨砕し、抽出溶媒を加えて組
織片を除去した後、除蛋白処理を行い、これを吸着剤に
吸着せしめ、次いで吸着成分を溶出した後、分子量によ
る分画を行うことにより得られる生理活性物質である。

本発明に用いるウィルスとしては、起炎作用を有するウ
ィルス類、好ましくは、ワクチニアウィルス、牛痘ウィ
ルス、痘癒ウィルス、エフトロメリアウィルス、サルポ
ックスウィルス等のオルソポックスウィルス、オーツウ
ィルス、バラワクチニアウィルス、ウシ乳頭状口内炎ウ
ィルス等のパラポックスウィルス、ヒツジポックスウィ
ルス、ヤギポックスウィルス、塊成病ウィルス等のヤギ
ポックスウィルス、ニワトリポックスウィルス、ノウサ
ギ線維腫ウィルス等のトリポックスウィルス、ウサギ粘
液腫ウィルス、ウサギ線維腫ウィルス等のウサギポック
スウィルス、その他豚痘ウィルス、Ｙａｖａサル腫瘍ウ
ィルス、Ｔａｒａポックスウィルスなどポックスウィル
ス科に属するウィルス類を挙げることができる。

感染組織を得るための動物としては、ウサギ、ヒツジ、
ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハムスター、モルモッ
ト、ラット、マウス、ニワトリなど種々の哺乳動物や鳥
類を用いることができ、ポックスウィルスの種類や目的
に応じて選択できる。

又、培ｉ組織としては、使用する種類のポックスウィル
スが増殖可能な培養細胞を用いることができ、例えば、
ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、サル、ハム
スター、モルモット、ラット、マウス及びそれら胎児の
腎臓、皮膚、肺臓、翠丸、肝臓、筋肉、副腎、甲状腺、
脳、神経細胞、血球など各ｍ織の培養細胞や腫瘍細胞培
養株、Ｈｅ１ａ細胞等のヒト由来の培養Ｍｉ織、並びに
卵漿尿膜などが挙げられる。

これら感染組織を無菌的に採取して磨砕し、その１乃至
５倍量の抽出溶媒を加えて乳化懸濁液とする。

抽出溶媒としては、蒸留水、生理食塩水、弱酸性乃至弱
塩基性の緩衝液などを用いることができ、グリセリン等
の安定化剤、フェノール等の殺菌・防腐剤、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム等の無機塩類な
どを適宜添加してもよい、この時、凍結融解、超音波、
細胞膜溶解酵素又は界面活性剤等の処理により細胞組織
を破壊して抽出を容易にすることができる。

得られた乳状抽出液を濾過又は遠心分離して組織片を除
去した後、除蛋白処理を行う。除蛋白は、公知の方法に
より実施でき、加熱、超音波、蛋白質変性剤、例えば、
酸、塩基、尿素、グアニジン、有機溶媒、界面活性剤等
による処理、等電点沈澱、塩析等の方法を適用すること
ができる。次いで、濾紙（セルロース、ニトロセルロー
ス等）、グラスフィルター、セライト、ザイッ濾過板等
を用いた濾過、限外濾過、ゲル濾過、イオン交換樹脂、
遠心分離などにより析出してきた不溶蛋白質を除去する
。

こうして得られた有効成分含有抽出液を、塩酸、硫酸、
臭化水素酸等の酸を用いて酸性、好ましくはｐＨ３，５
乃至５．５に調整し、吸着剤への吸着操作を行う、使用
可能な吸着剤としては、活性炭、カオリン、イオン交換
樹脂などを挙げることができ、抽出液中に吸着剤を添加
し攪拌するか、吸着剤を充填したカラムを通過させるこ
とにより、有効成分を吸着させることができる。

吸着成分より、本発明有効成分含有物質を溶出するには
、前記吸着剤に溶出溶媒、好ましくは塩基性溶液を加え
ｐＨ９乃至１２として、室温又は適宜加熱して或いは撹
拌して溶出し、濾過等の通常の方法で吸着剤を除去して
達成できる。このようにして得られた溶出液を、好まし
くは酸を加え中性付近のｐＨに調整した後、限外濾過、
ゲル濾過等の手段を用いて、分子量による分画を行い本
発明物質を得ることができる。

以下は、本発明物質の製造方法の実施例である。

但し、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

（実施例）実施例１゜健康な成熟家兎の皮膚にワクチニアウィルスを接種し発
痘させた後、発痘した皮膚を無菌的に剥出し、これを細
切した後フェノール水を加え、ホモゲナイザーで磨砕し
た０次いでこれを遠心濾過し、得られた濾液を塩酸で弱
酸性（約ｐＨ４，５乃至５．５）に調整した後、流通蒸
気下１００℃で加熱処理した。濾過−して除蛋白した後
、水酸化ナトリウムで弱アルカリ性（約ｐＨ８，５乃至
１０．０）とし、さらに１００℃で加熱処理した後濾過
して、より完全に除蛋白処理した。

濾液を塩酸でｐＨ５，０に調整し、活性炭７．５％を加
えて４時間撹拌した後濾過した。濾取した活性炭に水を
加え水酸化ナトリウムでｐＨ９，５に調整し、６０℃で
１．５時間撹拌して抽出処理を行った。これを濾過して
活性炭を除去した後、濾液を塩酸で中性付近（約ｐＨ６
，５乃至８．５）に中和し、減圧下に濃縮した。蒸留水
で溶解し、濾過して不溶物を除去した後、分子量５００
以上を通す限外濾過膜を用いて限外濾過を行い、その膜
下通過画分を得た０次いで、この両分を分子［５，００
０以下を通す濾過膜を用いて同様に限外濾過を行い、本
発明物質を濾液として得た。

実施例２゜実施例１と同様に除蛋白を行って得られた抽出液を、塩
酸でｐｉ−１３，５とし、活性炭を１５％を加え５時間
攪拌した後濾過した。この活性炭に約ｐＨ１１の水酸化
ナトリウム水溶液を加え、４５℃で３時間撹拌した後濾
過して活性炭を除いた。濾液を中和して、実施例１と同
様の限外濾過の操作を行い、本発明物質を得た。

このようにして得られた本発明物質を減圧下に乾固して
重量を測定した結果、感染組織１　ｋ＋ｒからの収率は
０．５〜１．０ｇであった。

前記方法により製造された本発明生理活性物質は、以下
の物理化学的性質を有する。

性　状：淡黄褐色無定形の吸湿性粉末溶解性：水、メタノール、アセトンに可溶、ベンゼン、
エーテルに不溶ｐＨ：６．５〜７．５分子量：５００〜５，０００紫外部吸収：λ、、、　　２６５〜２７５　ｎｍ呈色反
応ニアミノ酸、糖、リン・・・陽性蛋白質、フェノール
・・・陰性（作用）次に本発明生理活性物質の薬理試験の結果の一例を示す
。

（１）毒性試験雌雄マウス及びｊ１１１ｔｊ１ラットに本発明生理活性
物質を含有する組成物を経口、皮下、腹腔内、静脈内等
の経路で投与し、急性毒性試験を行った。

その結果、動物種及び性差に関係なく、いずれの投与経
路においても、本発明物質のＬＤｓ。は５，０００ＩＩ
ｆ／ｋｆ以上であった。

また、亜急性毒性及び生殖試験など各種の安全性試験を
行ったが、各臓器で全く異常は認められず、生殖試験に
おいても、母体、胎仔、新生仔及び出生仔の生殖能力に
対して全く影響を与えなかった。

（２）血流改善作用ＷｉｓＬａｒ系雄性ラット（体重約２００ｇ）に本発明
物質５０乃至４００■／ｋｇを経口投与した。１時間後
に１部位当り０．１ｔｔの０．２％カラゲニンを右後肢
皮下投与し、４８時間後まで足肢皮膚温をサーモグラフ
ィーを用いて測定した。

その結果、本発明物質はカラゲニン投与４５分乃至３時
間までに生じた足肢皮膚温の低下を用量依存的に改善し
、優れた血流改善作用を有することが認められた。

（３）臨床試験しびれ、疼痛、四肢冷感、知覚異常等の症状に悩むレイ
ノー症候群、糖尿病性神経障害、スモン後遺症などの患
者に対し、本発明物質を含有する治療剤を投与し上記症
状の改善につき調べた０本発明物質は、例えば注射剤の
場合、１日３乃至１２■を１日乃至２週間静脈内投与し
た。

総合改善度において、しびれ、疼痛、四肢冷感、知覚異
常等の症状に対してプラセボと比して明らかに有意な改
善効果が得られ、−例を挙げると、７割で中等度改善以
上、９割で軽度改善以上の効果が得られた試験例があっ
た。

尚、上記臨床試験において、重篤な副作用はもちろん、
不眠、発汗、０渇、消化器官異常など軽度な副作用もほ
とんど認められなかった。

（効果）上記試験結果から明らかなように、本発明生理活性物質
は心臓等に負担を与えることなく、血流障害により虚血
状態に陥った各種組織の血流改善を促し組織機能を正常
化する優れた作用を有する。又、本発明物質は、脳内の
グルコース取込促進作用、細胞の老化抑制作用など種々
の薬理作用も存する。

従って、振動病、白ろう病、閉塞性動脈硬化症、閉塞性
血栓血管症、痴呆、進行性筋萎縮症、脳梗塞、脳卒中、
脳動脈硬化症等の脳血管障害、結節性動脈周囲炎、全身
性エリスマトーデス、リウマチ性関節炎、大動脈炎症候
群等のレイノー症候群や糖尿病性神経障害、スモン後遺
症、虚血性神経症、凍癒、凍傷、耳鳴、難聴、網膜中心
動脈閉塞症などの血流障害に伴うに伴う各種疾患及び冷
感、しびれ、痛み、知覚鈍麻、機能障害、萎縮、壊死な
ど上記疾患の随伴症状を治療或いは緩和するための治療
剤として、本発明物質は非常に有用である。

本発明生理活性物質は、血流障害に陥り機能低下した病
態状態においてのみ働きｍｍを賦活化し正常状態に復元
する作用を有し、低毒性で副作用がなく経口投与可能な
ため、安全に長期的な使用ができ、特に慢性的な疾患を
治療するのに有利である。

（実施例）本発明物質を活性成分として含有する生体機能賦活剤は
、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、粉末、液剤
、注射剤、圧刻等の形態とすることができる。

処方にあたっては本発明物質を単独で用いてもよいし、
また他の医薬活性成分との配合剤とすることも可能であ
る。

経口投与製剤には、そのまま或いは適当な添加剤、ｆｊ
４工１．；ｔ［Ｆ、マンニット、トウモロコシデンプン
、バレイショデンブン等の慣用の賦形剤と共に、結晶セ
ルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、トウモロ
コシデンブン、ゼラチン等の結合剤、トウモロコシデン
プン、バレイショデンプン、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネ
シウム等の滑沢剤、その他増量剤、湿潤化剤、緩衝剤、
保存剤、香料等を適宜組み合わせて錠剤、散剤、顆粒剤
或いはカプセル剤とすることができる。

注射剤としては、注射用蒸留水、生理食塩水、５乃至２
０％ブドウ糖注射液等の水性溶剤、又は植物油、合成脂
肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステル、プロピレングリ
コール等の非水性溶剤の溶液、懸濁液若しくは乳化液と
することができ、必要に応じ溶解補助剤、等張化剤、懸
濁化剤、乳化剤、安定剤、保存剤等の通常用いられる添
加剤を適宜加えてもよい。

又、凍結乾燥製剤としてバイアル瓶等に入れ、使用時に
上記溶媒で適宜溶解して使用することもできる。

さらに本発明物質は、各種基剤、例えば乳剤性基剤又は
水溶性基剤と混和して坐剤としたり、その他吸入剤、エ
アゾール剤などに製剤化することができる。

本発明物質の望ましい投与量は、投与対象、剤形、投与
方法、投与期間等によって変わるが、所望の効果を得る
には、−１’ｌに成人に対して有効成分量で一日に１乃
至１００■、好ましくは４乃至４０ＩＩ１ｇ経口投与す
ることができる。

非経口投与（例えば注射剤）の場合、−日投与量は前記
投与量の３乃至１０分の１の用量レベルのものが好まし
い。

以下に本発明治療剤の処方例を示す。

処方例１．　　（錠剤）成　　分　　　　　　　　　　１錠当り　（■）本発明
物質　　　　　　　　　　　　　　４乳　　　糖　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１０６結晶セルロース
　　　　　　　　　　４０ステアリン酸マグネシウム　
　　　　１０処方例２．　（カプセル剤）成　　分　　　　　　　１カプセル当り　（■）本発明
物質　　　　　　　　　　　１０乳　　　糖　　　　　
　　　　　　　　　　　２００タ　　ル　　り　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　４０計２５０■ 処方例３．　（注射剤）

Claims

【特許請求の範囲】

（１）感染組織を磨砕し、抽出溶媒を加えて組織片を除
去した後、除蛋白処理を行い、これを吸着剤に吸着せし
め、次いで吸着成分を溶出した後、分子量による分画を
行うことにより得られる生理活性物質。
（２）感染組織を磨砕し、抽出溶媒を加えて組織片を除
去した後、除蛋白処理を行い、これを吸着剤に吸着せし
め、次いで吸着成分を溶出した後、分子量による分画を
行うことにより得られる生理活性物質を有効成分として
含有する生体機能賦活剤。