JPH01312994A - 抗真菌物質ｙｉ−ｈｕ１及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ１及びその製造法
に関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題Ｊ 従来、微生物が生産する種々の生理活性物質が知られて
おり、これらの物質のいくつかは医薬品として実用に供
されている。

しかしながら、医薬やＩＩＬ楽としてさらに有用な生理
活性物質の開発が′４まれている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、自然界より数多くの微生物を単離し、そ
の生産物について徨々の検討を行った結果、和歌山面の
土壌から分離した―休が抗真菌活性を有する新規な物質
を生殖することを見い出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規抗真菌物質ＹＩ−ＨＵＩ及びそ
の２！！！造法を提供するものである。

本発明の抗真因物＊ＹＩ−ＨＵｌ金生腫する凶の一例で
めるＹＩ−ＭＵ株は次のような菌学的性質を有する。

（１）　　形態 ポテトデキストロース斜面培地上で２８℃、３日坩誉し
、ＹＩ−）ＩＵ休の形態を、光学顕微ｇｓあるいは電子
顕倣説で一察した結果、以下の％倣を示す。

細胞の大きさは１〜５μでろシ％細胞の多形性はなく、
鞭毛ｕｎ、運動性を南゛する。胞子形成はなく、ダラム
染色性は随性であり、抗酸性はない。

（２）　　各（４ａｌ＠地における生育状態Ｙ　Ｉ−）
４０株の各種培地における生育状態は次のとおシである
。観察は２８０．３日培養後に行った。

■肉汁寒天平板培養 集落の形状は、光沢を持つ隆起状円形 で、卵黄色を示す。培地への色素拡散は認められない。

■肉汁液体培養 Ｊ＠地は、全ｔｆＦｓａｖ、淡黄色ノ発＊、　薄い皮膜
を有する。

■肉汁ゼラチン穿刺培養 表面に膜を形成し、液化する。

（３）生理学的性質 ■一般的性質 硝酸塩の還元　　　　　　− インドールの生成　　　　− デンプンの力ａ水分解　　　　　　　−クエン酸の利用
　　　　　　　十 色素の生成　　　　　　　　　十 ウレアーゼ　　　　　　　　　− オキシダーゼ　　　　　　　　士 酸素に対する態度　　　　好気性 エスクリンの分解　　　　　　− リシンの脱炭酸反応　　　　　十 アルギニンの分解　　　　　　− オルニチンの脱炭酸反応− アジルアミラーゼ　　　　　　− ■生育温度（献テトデキストロース瑞地、２４時間） 温度　生育 Ｃ− ２５Ｃ＋ ３０℃＋ ４０℃士 ４５　Ｃ− ■０−Ｆ試躾（ヒューライフンン（ＨｕｇｈＬｅｉｆｓ
ｏｎ　）法により、３０ Ｃ，７日間） ０゜ ■炭素源の資化性（３０Ｃ，７日間＠養）糖　　生育 キシロース　　　＋ グルコース　　　＋ フラクトース　　士 ガラクトース　　＋ マルトース　　　− ショ糖　　　　　　− 乳糖　　− マンニット　　　士 デンプン　　　　− ■紫外線下での螢光テスト 陰性 ■各槙化合吻の利用性 化曾物　　　　　　利用性 Ｌ−ラムノース　　　　　− レブリネート　　　　　　− メサコネート　　　　　　＋ Ｄ−タートレート　　　　＋ Ｌ−タートレート　　　　＋ Ｌ−ブタンジオール　　− ２　、３−　）リゾタミン　　− 以上の菌学的性質のうち（１）ダラム陰性の桿菌である
、（２）オキシダーゼが陽性である、（３）−毛を有し
、活発に運動する。（４）好気性である、（５）胞子の
形成が認められない等の点よシ、ＹＩ−ＨＵ株はシュー
ドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属の一菌種であ
ると判断される。

また前記の諸性質をもとに「Ｂｅｒｇｅｙ’　ｓＭａｎ
ｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ　Ｊ第８版より検索した結果、ＹＬ−
ＨＵ株の近縁種としてシュードモナス　グラデイオリが
挙げられる。しかしシュードモナス　モノ９シアはショ
糖の資化性が陽性である点、硝酸塩の亜硝酸への還元が
陽性でるる点及び各棟化合物の利用性でＹ　Ｉ−ＨＵ株
とは異なる。またシュードモナス　グラデイオリは各種
化合物の利用性でＹＩ−ＨＵ株と一致するが、ショ糖の
資化性が陽性でめる点でＹＩ−ＨＵ株とは異なる。

以上のようにＹＩ−１−１０株はいずれの槌とも一致し
ないので２本発明者らはＹＩ−ｄＬＩ株を公知の菌株と
区別するために、シュードモナＹＩ−１−１Ｕ）と部名
し、工業技術院微生物工業技術研究所に赦工研条寄第１
６１０号 （ＦＥＲＭＨＰ　−１６１０）　　として寄託した。

本発明の抗真菌物質ＹＩ−ＭＵＩは１例えば’ｌ’ｌ−
１−４Ｕ１生腫薗を栄誉源含Ｍ培地に接種し、好気的に
培誉し、該Ｊ＠養賽物り採取することにより製造される
。抗真薗物′ｘＹＩ−ＨＵｔ生並株としては、上記ＹＩ
−ＭＵ株はもとより、その人工変異体めるいは自然変異
株であっても抗真菌ｖｌＪ質’ｉ’ｌ−１−１０１を生
産する能力を有するものでめれば、すべて本発明に使用
することができる。次に抗臭劇物質ＹＩ−４（Ｕｌの製
造における菌株のＪ＠寮について説明する。

シュードモナス属に鵜する抗真菌物質ＹＩ−１−ＩＵＩ
生産凶の培養には５通常のシュードモナス菌の培養法が
用いられる。

’１’ｌ−１（Ｕ株を用いる場合、栄養培地としては？
テト浸出液、ブドウ糖を含有するポテトデキストロース
培地が好ましい。

培養法としては、一般の抗真因物質の生産に用いられる
方法が採用されるが、液体培養法が籍に好ましい。培養
は好気的な条件で行われ、ｓ＠養に過当な温度は１０〜
４０Ｃであるが、一般に２８℃付近でｊ＠養するのが好
ましい。抗真菌物質ＹＩ−ＨＵｌの生産量は２〜５日間
の培養で最高に達する。培−４！液中の抗真菌物質ＹＩ
−１−ＩＵＩの蓄積量がｉ＆高に達した時に培養を停止
し、培養液から目的物質を分離・精製する。

培養液中からＹＩ−）１Ｕ１の分離・精製は、後記する
ような理化学的性状金考厘して種々の方法を単独でろる
いは適宜組み会わせることによって行われる。すなわち
、抗真菌物質ＹＩ−１−ＩＵＩは通常＠養成及び一体中
に存在するので培養物を濾過によって陶体を分離しその
一体及び層誉濾叡から通常の分離手段、例えば浴媒抽出
法、イオン父挨樹脂法、グル濾過法、吸着または分配ク
ロマト法、沈＃法などを単独でまたは適宜組み付わせて
分離・精製する。

好ましい分離・精製の例としてｒｒ、、まず培＊＊を遠
心分離して濾液と１体に分ける。濾液から有機溶Ａ′１
１１例えばクロロホルムで抽出する。抽出ｇを濃縮後シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホル
ム等で浴出した後活性画分を集める。これを濃縮後、残
ｆを過当な溶剤、例えばクロロホルム−メタノール混合
液に溶解させた後、再度シリカゲル（キーイルグル５ｉ
ｓｏ、メル２社製）カラムクロマトグラフィーに付しク
ロロホルムで浴出し、活性画分を得る。かくして得られ
た活性画分を濃縮乾固した後、クロロホルム−メタノー
ル混液に溶解させ％　１１−へキサンを箔加することに
より白色の抗真菌物質ＹＩ−１−ＩＵ１が得られる。

以上のμ口＜シて得られた抗真菌物質ＹＩ−ＨＵｌｊ：
次のような理化学的性′１！ｊ金Ｍする。

１）　分子量 ２）　索外庫吸収スペクトル（メタノール中）２７０１
１Ｊｎ付近に最大吸収含有する。第１図３）　赤外線吸
収スペクトル（ＫＢｒ云）第２図 ４）ＩＨ−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＩ）Ｃｉｓ　
）第３図 ５）溶剤に対するｔＩ解性 クロロホルムに易溶、メタノールに可溶１ｎ−ヘキサン
に不溶。

６）ｗ質の色 白色 〔作用〕 本発明の抗真菌物質ＹＩ−ＨＵＩは次のような薬理活性
を有する。

検定培地として？ナト／グルコース寒天を用い、検定１
としては各種の真菌を用い、ぺ、ｅディスク平板法にて
本発明抗真菌＠買Ｙｆ−ＨＵｘの作用を検討した。

その結果を第１表に示す。調べた一度範囲で、抗真菌作
用を有する濃度ではダラム陽性に対して、抗細菌作用は
示さなかった。

以下余白 〔発明の効果〕 本発明抗真１荀貞ＹＩ　−ＨＵ　１は、広範囲な抗真−
活性（植物病原真菌及びヒト病原真菌）を示し、医業、
農薬として有用である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明ｆ（説明する。

実施例１ ポテトデキストロース培地（デイフコ社展）を１１めた
シ２４２加えた液体培地（ｌｊ′１６．８　）１０００
−に、シュードモナス　エスピー。

ＹＩ−ＨＵ株（倣工研粂寄第１６１０号）を接攬し、２
８℃、４日間振とうＪ＠誉した。用養終了後、培＃版を
遠心分離し得られた濾液にクロロホルムを〃口元分層し
、クロロホルム１４ｔ−′、ａ縮した。この濃縮液をシ
リカゲル（ワコ−グルＣ−２００）カラムクロマトグラ
フィーに付し、クロロホルムで浴出し、活性画分を得た
。かくして侍られた活性画分をａｌＩ鰯し再度シリカゲ
ル（キーゼルグルＳｉ　６０、メルク社製）カラムクロ
マトグラフィーに付し。

クロロホルムで溶出し、活性画分を得た。かくして得ら
れた活性画分を濃縮乾固した後。

クロロホルム−メタノール混液に溶解させ。

ｎ−ヘキサンｔ−添加することにより白色の抗真菌物質
ＹＩ　−）ＩＵ　１　（５属ｇ）を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第３図は、本発明抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ１の紫
外線吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトルおよびｉＨ
−核磁気共鳴吸収スペクトルをそれぞれ示す図面である
。 第１図 ２５０．０　　　３００．０　　　３５０．０　　　４
００．０　　　４５０．０　　　５００．０（ｎｒｎン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の理化学的性質を有する抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ＿
   １。 （１）分子量 ４６１ （２）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）２７０ｎ
   ｍ付近に最大吸収を有する。 （３）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （４）＾１Ｈ−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＤＣｌ＿
   ３）第３図 （５）溶剤に対する溶解性 クロロホルムに易溶、メタノールに可溶、 ｎ−ヘキサンに不溶。 （６）物質の色 白色 ２、シュードモナス属に属する抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ＿
   １生産菌を培養し、その培養物から抗真菌物質ＹＩ−Ｈ
   Ｕ＿１を採取する事を特徴とする、抗真菌物質ＹＩ−Ｈ
   Ｕ＿１の製造法。 ３、抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ＿１生産菌がシュードモナス
   エスピー．ＹＩ−ＨＵ株 （￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．ＹＩ−ＨＵ￥）であ
   る請求項２記載の抗真菌物質ＹＩ−ＨＵ＿１の製造法。