JPS63159389A - 抗生物質ｙｉ−ｈｕ３及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規抗生物質に関し、更に詳細には抗菌活性、
抗腫瘍活性を有する新規抗生物質ＹＩ−ＨＵ３及びその
製造法に関する。

〔従来の技術及びその問題点〕

従来、微生物が生産する糧々の生理活性物質が知られて
おり、これらの物質のいくつかは医薬品として実用に供
されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、医薬や農薬としてさらに有用な生理活性
物質の開発が望まれている。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、自然界よシ数多くの微生物を単離し、そ
の生産物について種々検討を行った結果、和歌山布の土
壌から分離した菌株が、抗菌活性、抗腫瘍活性を有する
新規抗生物質Ｙ　ｌ−ＨＵ３を生産することを見い出し
、本発明を完成した。

すなわち、本発明は新規抗生物質Ｙ　Ｉ　−ＨＵ３及び
その製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質ＹＩ−ＨＵ３を生産する菌の一例であ
るＹＩ−ＨＵ株は次のような菌学的性質を有する０ （１）形態 ？テトデキストロース斜面培地上で２８℃、３日培養し
、ＹＩ−ＨＵ株の形態を光学顕微鏡あるいは電子顕微鏡
で観察した結果、以下の特徴を示した。

細胞の大きさは１〜５μであシ、細胞の多形成はなく、
鞭毛を有し、運動性を有する。

胞子形成はなく、ダラム染色性は陰性であり、抗酸性は
ない。

（２）各種培地における生育状態 Ｙ　Ｉ−ＨＵ株の各糧培地における生育状態は次のとお
りである。観察は２８℃、３日培養後に行った。

■　肉汁寒天平板培養 集落の形状は、光沢を持つ隆起状円形で、卵黄色を示す
。培地への色素拡散は認められない。

■　肉汁液体培養 培地は、全面濁シ、淡黄色の発育で、薄い皮膜を形成す
る。

■　肉汁ゼラチン穿刺培養 表面に膜を形成し、液化する。

（３）　　生理学的性質 ■　一般的性質 硝酸塩の還元　　　　　　　　十 インドールの生成　　　　　　− デンゾンの加水分解　　　　　− クエン酸の利用　　　　　　　十 色素の生成　　　　　　　　　十 ウレアーゼ　　　　　　　　　− オキシダーゼ　　　　　　　　士 酸素に対する態度　　　　　好気性 エスクリンの分解　　　　　　− リシンの脱炭酸反応　　　　　− アルギニンの分解　　　　　　− オルニチンの脱炭酸反応　　　− アシルアミラーゼ　　　　　　　− ■　生育温度（？テトデキストロース培地。

２４時間） ４℃　　　　　　＋ ２５℃十 ３０℃　　　　　＋ ４５℃　　　　　− ■　糖の嫌気的分解（ヒユーライ７ソン（ＨｕｇｈＬｅ
ｌｆｓｏｎ　）法により、３０℃、７日間）グルコース
　　　密閉　　　　　− 開放　　　十 ■　各種炭素源の資化性（３０℃、７日間）糖　　　　
　　　生育 キシロース　　　＋ グルコース　　　＋ フラクトース　　＋ ガラクトース　　＋ マルトース　　　＋ ショ糖　　　　　− 乳糖　　− マンニット　　　士 デンプン　　　　− ■　紫外線下での螢光テスト ＋ 以上の菌学的性質のうち（１）ダラム陰性の桿菌である
、（２）オキシダーゼが陽性である、（３）鞭毛を有し
、活発に運動する、（４）好気性である、（５）胞子の
形成が認められない等の点より、Ｙｒ−ＨＵ株はシュー
ドモナス（ｐｇ＠ｕｄｏｍｏｎａｍ　）属の一菌種であ
ると判断される。

また前記の諸性質をもとに「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕ
ａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｌｎａ口ｗｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ　Ｊ第８版より検索した結果、ＹＩ−ＨＵ
株の近縁種トシてシュードモナス　フルオレッセンス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｇ　ｆｌｕｏｒｓｓｃ＠ｎｓ　）
およびシュードモナス　七ノ？シア（Ｐｓａｕｄｏｍｏ
ｎａｓ　ｅｅｐｃｌａ　）が挙げられる。しかしシュー
ドモナス　フルオレッセンスはマルトースの資化性が陰
性である点及びアルギニ／の分解性が陽性である点でＹ
Ｉ−ＨＵ株とは異なる。またシュードモナス　セ、ｅシ
アは紫外線下での螢光発色が無い点、および４℃で発育
できない点でＹＩ−ＨＵ株とは異なる。

以上のようにＹ　ｌ−１（Ｕ株はいずれの種とも一致し
ないので、本発明者らはＹＩ−ＨＵ株を公知の菌株と区
別するために、シュードモナス　エスピー、　ＹＩ　−
ＨＵ　（Ｐｇｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ。

ＹＩ−ＨＵ　）と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研菌寄第９０３５号 （ＦＥＲＭ　　Ｐ−９０３５）として寄託した。

本発明の抗生物質ＹＩ−ＨＵ３は上記菌株を栄養源含有
培地に接種し、好気的に培養し、該培養物より採取する
ことにより製造される。

抗生物質ＹＩ−ＨＵ３生産株としては、上記ＹＩ−ＨＵ
株はもとよシ、その人工変異株あるいは自然変異株であ
っても抗生物質Ｙ　Ｉ　−ＨＵ３を生産する能力を有す
るものであれば、すべて本発明に使用することができる
。

次に抗生物質Ｙ　ｌ−ＨＵ３の製造における菌株の培養
について説明する。シュードモナス属に属する抗生物質
ＹＩ−ＨＵ３生産菌の培養には、通常のシュードモナス
菌の培養法が用いられる０ ＹＩ−ＨＵ株を用いる場合、栄養培地としては？テト抽
出物、ブドウ糖を含有する一テトデキストロース培地が
好ましい。

培養法としては、一般の抗生物質の生産に用いられる方
法が採用されるが、液体培養法が特に好ましい。培養は
好気的な条件で行なわれ、培養に適当な温度は１０〜４
０℃であるが、一般に２８℃付近で培養するのが好まし
い。抗生物質ＹＩ−ＨＵ３の生産量は２〜５日間の培養
で最高に達する。培養液中の抗生物質Ｙ　Ｉ　−ＨＵ　
３の蓄積量が最高に達した時に培養を停止し、培養液中
から目的物質を分離・精製する。

培養液中からＹＩ−ＨＵ３の分離・精製は、後記するよ
うな理化学的性状を考慮して種々の方法を単独であるい
は適宜組み合せることによって行われる。すなわち、抗
生物質Ｙ　Ｉ　−ＨＵ３は通常培養液及び菌体中に存在
するので培養物をｆ過によって菌体を分離し、その菌体
及び培ｇＩＰ液から通常の分離手段、例えば溶媒抽出法
、イオン交換樹脂法、グルｆ過法、吸着または分配クロ
マト法、沈澱法などを単独でまたは適宜組み合せて分離
・精製する。

好ましい分離・精製の例としては、培養物を遠心分離し
てＰ液と菌体に分ける。ｒ液から水と混じらない有機溶
剤、例えばクロロホルムで抽出する。抽出液を濃縮後シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホル
ム等で溶出した後活性画分を集める。これを濃縮後、残
渣を適当な溶媒、例えばクロロホルム−メタノール混合
液に溶解させた後、ヘキサンを添加することによシ抗生
物質ＹＩ−ＩＩＵ３の淡黄色針状結晶が得られる。

以上の如くして得られた抗生物質ＹＩ−ＨＵ３は次のよ
うな理化学的性質を有する。

■　分子量 ■融点 １８０〜１９０　℃ ■　紫外線吸収スペクトル（クロロホルム中）３１２　
ｒｉｒｌｌ付近に最大吸収、３００　ｎｍ付近に第二吸
収を有する。（第１図） ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図 ■　ＩＨ−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＤＣ１，／Ｃ
Ｄ、ＯＨ）第３図 ■ｌＳ　（−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＤＣ４７Ｃ
ＤｐＨ）第４図 ■　溶剤に対する溶解性 メタノール、クロロホルムに可溶。

ｎ−へΦサンに不溶０ ■　物質の色、性状 淡黄色結晶 ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲル 〔作用〕 本発明の抗生物質ＹＩ−ＨＵ３は次のような薬理活性を
有する。

（１）植物病原菌に対する作用 検定培地として？ナト／グルコース寒天を用い、検定菌
としては灰色カビ病菌（Ｂｏｔｒｙｅｌａｅｌｎｅｒａ
　）　％炭ソ病菌（Ｃｏｌｌｅｔｈｏｔｒｉｅｕｍｇｒ
Ｃｏｌｌｅｔｈｏｔｒｉｅｕ　）を用い、ペー７９−デ
ィスク平板法にて本発明抗生物質ＹＩ−ＨＵ３の作用を
検討した。

その結果を第１表に示す。

第１表 （２）抗腫瘍作用 ｄｄ−Ｙ系マウスに８−１８０腹水腫瘍細胞をＩ　Ｘ　
１０’個／匹腹腔内に移植し、その翌日からＹＩ−ＨＯ
２を１日１回、３μｔ／匹宛１０日間腹腔内に注射した
。その後、マウスの生存を観察した。その結果を第２表
に示す。

以下余白 第２表 （３）　　一般細菌等に対する作用 第３表に示す細菌、カビ、酵母に対するＹ　ｌ−ＨＯ２
の作用をペー）Ｑ−ディスク平板法にて検討した。その
結果を第３表に示す。

以下余白 第３表 〔発明の効果〕 本発明抗生物質Ｙ　ｌ−ＨＯ２は、広範囲な抗菌活性お
よび抗腫瘍活性を示し、医薬、漬薬として有用である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例 ポテトデキストロース培地（ディフコ社製）を１ｔあた
り２４ｆ加えた液体培地（ＰＨ６，８）１０００ｍ／に
、シュードモナス　エスピーＹ　Ｉ−Ｔ（Ｕ株（微工研
菌寄第９０３５号）を接種し、２８°Ｃ４日間振盪培養
した。培養終了後、培養液を遠心分離し、得られたＰ液
にクロロホルムを加え分層し、クロロホルム層を濃縮し
た。この濃縮液をシリカゲル（ワコーグルＣ〜２００）
カラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルムで溶出
し、活性画分を得た。かくして得られた目的物質を濃縮
乾固した後、クロロホルム−メタノール混液に溶解させ
、ｎ−ヘキサンを添加することによりＹ　ｌ−ＨＵ３の
淡黄色針状結晶ｌｏｍｇを得た。

本物質は前記した理化学的性質を有していた０

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質ＹＩ−ＨＵ３の紫外線吸収ス
ペクトル、第２図は同赤外線吸収スペクトル、第３図は
同ＩＨ−核磁気共鳴吸収スベクトル、第４図は同ｌ５Ｃ
−核磁気共鳴吸収スベクトルをそれぞれ示す図面である
。 以上 峠−→い□− 弁理士　小　野　信　ＨＩ’Ｈ”、’、’、　　Ｇ１−
゛ （−一。 −〇　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１′旨
０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　の手続補正
群（自発） 昭和６２年８　月　２６日 １４１９件の表示 昭和６１年　特　許　　願第３０７１６４号２　発明の
名称 ４代理人 氏　名　（６８７０）弁理士　有　ｒＹ　　三　幸。 ９−一、−−ｒ 作　　所　　同　　　　　上　　　　　　　　　　　　
、−−１氏　名　（７７５６）弁理士　高　野　登志雄
住　　所　　同　　　　　上　　　　　　　　　　　−
氏　名　　（８６３２）弁理士小　野　信　夫　“５、
　補正命令の日付 自　　　発 ６、　補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、　補正の内容 （１）　　明細書第６頁、第６行 「硝酸塩の還元　　　＋」とあるを 「硝酸塩の還元　　　−」と訂正する。 （２）同第６頁、第１５行 「リシンの脱炭酸反応　　−」とあるを「リシンの脱炭
酸反応　　＋」と訂正する。 （３）　　同第７頁、第７〜１０行 ［４℃　　　＋ ２５　℃　　　　士 ３０℃　　＋ ４５℃　　−」 とあるを ［４℃　　　− ２５℃士 ３０℃　　　士 ４０　℃　　　　士 ４５℃　　　−」 と訂正する。 （４）同第８頁、第７行 「マルトース　　＋」とあるを 「マルトース　　−」と訂正する。 （５）　　同第８頁、第１２〜１３行 ［■紫外線下での螢光テスト ＋　　　　　　」とあるを ［■紫外線下での螢光テスト ■ｄす・・イドロキシプチレート（ＰＨＢ　）の蓄積■
アルギニンディハイドロラーゼの有無−」と訂正する。 （６）　　同第９頁、第８行〜同第１Ｏ頁、第２行「種
としてシュードモナス・・・・ ・・・・・ＹＩ−ＨＵ株とは異なる。」とあるを「種と
してシュードモナス　グラディオリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ　ｇｌａｄｉｏｌｉ　］　　およびシュードモナ
ス　七ノ９シア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃｅｐａｃ
ｉａ　）が挙げられる。しかしシュードモナス　七ノＱ
シアはシュークロースの資化性が陽性である点及び硝酸
塩の亜硝酸への還元が陽性である点でＹＩ−ＨＵ株とは
異なる。またシュードモナス　グラディオリはシューク
ロースの資化性が陽性上ある点でＹＩ−ＨＵ株とは異な
る。」と訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の理化学的性質を有する抗生物質 ＹＩ−ＨＵ３。 （１）分子量 ４６９ （２）融点 １８０〜１９０℃ （３）紫外線吸収スペクトル（クロロホルム中）３１２
   ｎｍ付近に最大吸収、３００ｎｍ付近に第二吸収を有す
   る。 （４）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （５）１Ｈ−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＤＣｌ＿３
   ／ＣＤ＿３ＯＨ）第３図 （６）１３Ｃ−核磁気共鳴吸収スペクトル（ＣＤＣｌ＿
   ３／ＣＤ＿３ＯＨ）第４図 （７）溶剤に対する溶解性 メタノール、クロロホルムに可溶 ｎ−ヘキサンに不溶。 （８）物質の色、性状 淡黄色結晶 ２、シュードモナス属に属する抗生物質 ＹＩ−ＨＵ３生産菌を培養し、その培養物から抗生物質
   ＹＩ−ＨＵ３を採取することを特徴とする、抗生物質Ｙ
   Ｉ−ＨＵ３の製造法。 ３、抗生物質ＹＩ−ＨＵ３生産菌がシュードモナス　エ
   スピー、ＹＩ−ＨＵ株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ
   ．ＹＩ−ＨＵ）である特許請求の範囲第２項記載の抗生
   物質ＹＩ−ＨＵ３の製造法。