JPH0632778A

JPH0632778A - カルバゾール系化合物

Info

Publication number: JPH0632778A
Application number: JP4186392A
Authority: JP
Inventors: Haruo Seto; 治男瀬戸; Yoichi Hayakawa; 洋一早川
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-07-14
Filing date: 1992-07-14
Publication date: 1994-02-08

Abstract

(57)【要約】（修正有）【目的】抗酸化作用を基調とする脳疾患、心疾患、肝疾
患及び動脈硬化疾患などに有効な薬物を得る。【構成】Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｅｘｆｏｌｉａｔ
ｕｓ２４１９−ＳＶＴ２菌によって産生される、図示
構造式の化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗酸化作用を有するカ
ルバゾール系化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明の化合物と同様の作用をもち同一
の構造を有する化合物は知られていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗酸
化作用を有する新しい構造の化合物を提供することにあ
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
の達成のために多数の菌株を土壌より分離し、その菌株
の培養物について種々検討した結果、ある種の菌株の生
産する化合物が強い抗酸化作用を有することを見いだ
し、本発明を完成するに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、式

【０００６】

【０００７】で表わされる化合物である（以下、これを
ＣＳ−７９Ｂと略称する。）。

【０００８】ＣＳ−７９Ｂを生産する菌株は、本発明者
らが長野県松本市で採取した土壌より新たに分離した菌
株であり、微生物の名称「Streptomyces exfoliatus２
４１９−ＳＶＴ２」及び微生物寄託番号「微工研菌寄第
１２７０７号（FERM P−1207）」として工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託されている。

【０００９】この菌株の菌学的性状を以下に示す。１）形態本菌株の基生菌糸は分断しない。

【００１０】気菌糸は主軸を形成し、それにより不規則
に分岐した先端に、１０〜５０個またはそれ以上からな
る曲状またはループ状の胞子鎖を形成する。

【００１１】胞子は非運動性で、円柱形あるいは長楕円
形を呈し、幅０．６〜０．８μｍ、長さ０．８〜１．０
μｍで、胞子表面は平滑である。

【００１２】菌核、胞子のう、その他の特殊形態は観察
されない。

【００１３】細胞壁化学型はＩ型である。２）培地上での生育状態各種培地上で２７℃、１４日間培養したときの肉眼によ
る観察結果を表１に示す。

【００１４】集落表面の菌叢色は灰色系列で裏面色は不
鮮明色を呈し、ＰＨで僅かに変化する。

【００１５】拡散性色素は明茶色が認められた。

【００１６】

【表１】

【００１７】（）内はカラーハーモニーマニュア
ル（コンテナーコーポレイションオブアメリカ、
１９５０）の色調コード。

【００１８】３）生理的性質生育温度範囲本菌株は２０〜４５℃の範囲で生育し、最適生育温度は
２０〜３７℃である。生化学的性質ａ）好気性、嫌気性の区別：好気性ｂ）ゼラチンの液化：＋ｃ）脱脂乳の凝固：− ｄ）脱脂乳のペプトン化：− ｅ）スターチの加水分解：＋ｆ）メラニン様色素の生成：＋ｇ）細胞壁の型：Ｉ型炭素源の利用（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用する：グルコース、アラビノース、キシロース、フ
ラクトース、ラムノース、ラフィノース、イノシトー
ル、マンニット利用しない：シュクロース

【００１９】以上の性状を基に「細菌名承認リスト１
９８０」およびそれ以後の有効名リストに記載されたス
トレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ以後
Ｓ．と略す）属の種について検索し、近縁の２種を選出
した。

【００２０】Ｓ．ナシビレンシス（Ｓ．ｎａｓｈｖｉｌ
ｌｅｎｓｉｓ）とＳ．パーペオフスカス（Ｓ．ｐｅｒｐ
ｅｏｆｕｓｃｕｓ）の診断的性状を比較すると本菌株と
Ｓ．ナシビレンシスの性状はよく一致しており、炭素源
の同化のみことなっている。

【００２１】

【表２】

【００２２】Ｓ．パーペオフスカスは形態、裏面色、拡
散性色素のＰＨ感受性、炭素源の同化が異なっている。
従って本菌株はＳ．ナシビレンシス最も近似であるが
「バージェイ氏細菌系統分類学便覧４巻」、（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓＭａｎｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ
ＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙＶｏｌ．４）のＳ．属に
関するウィリアムス等（Ｗｉｌｌｉａｍｓ、ｅｔ．ａ
ｌ．）の記載によれば、Ｓ．ナシビレンシスはＳ．イク
スホリエタス（Ｓ．ｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ）のシノニム
（異名）となっている。

【００２３】従って本菌株２４１９−ＳＶＴ２はＳ．イ
クスホリエタスに含まれる一菌株と同定し、ストレプト
マイセスイクスホリエタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ）２４１９−ＳＶＴ２株と称す
る。

【００２４】ＣＳ−７９Ｂの生産は大略一般の発酵生産
物を生産する場合に準じ、各種の栄養物を含む培地で本
菌株を好気的条件下で培養することにより行なう。

【００２５】培地は主として液体培地を用い、炭素源と
してはグルコース、廃糖密、スターチなどを単独または
混合して用いる。窒素源としては肉エキス、オートミー
ル、酵母エキス、大豆粉、ポリペプトンなどを単独また
は混合して用いる。その他、本菌株の生育を助けＣＳ−
７９Ｂの生産を促進する有機物及び無機塩を必要により
添加することができる。消泡剤としては、アデカノー
ル、シリコンなどを用いることができる。

【００２６】培養方法は振盪培養、通気攪拌培養などの
好気的培養が適しており、ｐＨ４〜８、２４〜３０℃で
２〜６日間、望ましくはｐＨ６〜７、２４〜２７℃で２
〜３日間培養する。

【００２７】この培養により生産されたＣＳ−７９Ｂを
単離するには発酵生産物を採取する一般的な方法に準じ
て行えばよい。ＣＳ−７９Ｂは菌体中に蓄積されるの
で、例えば次の方法が効果的である。

【００２８】すなわち、培養終了後、遠心分離または濾
過により菌体を得、アセトンなどの有機溶媒で溶出す
る。

【００２９】次いでこの菌体抽出液を濃縮後、酢酸エチ
ル、ベンゼン、クロロホルムなどの非水溶性有機溶媒に
転溶し、これを濃縮してシロップ状とする。

【００３０】このシロップを再度ベンゼン、酢酸エチ
ル、アセトン、メタノール、クロロホルムなどの有機溶
媒に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲ
ル濾過カラムクロマトグラフィー及び高速液体カラムク
ロマトグラフィーに付すことにより本発明化合物を精製
単離することができる。

【００３１】以上の精製法によって得られたＣＳ−７９
Ｂの理化学的性質を以下に示す。（ａ）元素分析値：実測値（％）Ｃ７１．２８，Ｈ６．３９，Ｎ
４．０１理論値（％）Ｃ７１．３９，Ｈ６．５２，Ｎ
３．９７（Ｃ₂₁Ｈ₂₃ＮＯ₄として計算）（ｂ）質量分析値：高分解能ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ３５４．１６９５
（Ｍ＋Ｈ）⁺ 理論値３５４．１７０５（ｃ）分子量：３５３（ｄ）融点：１５２〜１５４℃ （ｅ）比旋光度：測定不能（ｆ）紫外線吸収スペクトル：ＭｅＯＨ中 λ_Max ２３４ｎｍ（ε＝２９８００）２７０ｎｍ（ε＝２７１００）４３０ｎｍ（ε＝４９００）０．０１ＮＮａＯＨ−ＭｅＯＨ中 λ_Max ２４５ｎｍ（ε＝２８１００）２８７ｎｍ（ε＝２５７００）４７０ｎｍ（ε＝７０００）（ｇ）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒ錠中で測定した結
果を図１に示す。（ｈ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ｄ₆−ＤＭＳＯ中、４０
０ＭＨｚで測定した結果を図２に示す。（ｉ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ｄ₆−ＤＭＳＯ中、１
００ＭＨｚで測定した結果を図３に示す。（ｊ）溶剤に対する溶解性：ＤＭＳＯ、ＤＭＦに易溶ＭｅＯＨ、ＥｔＯＨ、ＣＨＣｌ₃、ＥｔＯＡｃに可溶ｎ−ヘキサン、Ｈ2Ｏに難溶（ｋ）呈色反応：陽性：Ｈ₂ＳＯ₄、ヨード（ｌ）塩基性、酸性、中性の区別：弱塩基性

【００３２】

【発明の効果】本発明の化合物は、抗酸化作用を有する
ので脳疾患、心疾患、肝疾患及び動脈硬化疾患などに有
用である。

【００３３】

【実施例】以下、実施例および試験例を挙げて本発明を
具体的に説明する。実施例（１）１００ｍｌ当り、デキストリン２．５ｇ、大豆粉
２．１ｇ、乾燥酵母０．２ｇ炭酸カルシウム０．４ｇを
含む液体培地を５００ｍｌの三角フラスコに１００ｍｌ
入れ滅菌したのちストレプトマイセスイクスホリエタ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ）
２４１９ＳＶＴ２株を接種し、２７℃、４８時間回転培
養した。

【００３４】次に種培地と同じ組成の無菌培地３０ｌを
入れた５０ｌ容のジャーファーメンターに、前培養の終
了した上記種培養液５００ｍｌを接種し２７℃、４８時
間通気攪拌培養した。

【００３５】培養終了後、培養液３０ｌを上清と菌体に
分離した後、菌体に１５ｌのアセトンを加え抽出した。
アセトン抽出液を、アセトン溜去後、３ｌの酢酸エチル
で２回抽出した。この酢酸エチル画分を無水硫酸ナトリ
ウムで脱水後、濃縮したのち濃縮液に１００ｍｌのｎ−
ヘキサン加え５．５ｇの黄色の沈澱を得た。

【００３６】（２）前項１で得られた沈澱をクロロホル
ム１５ｍｌに溶解し、シリカゲルを充填したカラム（容
量５００ｍｌ，溶媒；クロロホルム）に吸着させた。ク
ロロホルム１ｌで洗浄後、クロロホルム−メタノール
（５０：１）の混合溶媒で溶出される区分を除いた。次
いで、クロロホルム−メタノール（２０：１）の混合溶
媒で溶出を行い、濃縮乾固することにより２．２ｇの黄
色物質を得た。

【００３７】また、さらにクロロホルム−メタノール
（５０：１）の混合溶媒で溶出を行い、濃縮乾固するこ
とにより１．２ｇの黄色物質を得た。

【００３８】得られた試料をクロロホルム−メタノール
（１：１）で調製したセファデックスＬＨ−２０（商品
名，ファルマシア社製）にてゲル濾過を行い、活性区分
を集めて濃縮乾固し、クロロホルム−メタノール（５：
１）の溶出画分より黄色粉末としてＣＳ−７９Ｂを３０
ｍｇを得た。

【００３９】試験例（抗酸化作用）（１）ミクロソームの調製法１０週令のウィスター系雄性ラットの肝臓をとり、ホモ
ジナイズ後、４℃、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離
しその上清をとった。この上清を４℃、１００００ｒ
ｐｍで１０分間遠心分離し、上清をとった。これをさ
らに４℃、３００００ｒｐｍで６０分間遠心分離し、沈
澱画分をとり、緩衝液（０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス−
塩酸、０．１７４ｍｏｌ／ｌ塩化カリウムよりなる。
ＰＨ７．４）７０ｍｌを加え、ミクロソーム液とし
た。

【００４０】（２）抗酸化作用測定ミクロソーム液０．５ｍｌ、上記の緩衝液０．７５ｍｌ
及びサンプル（本発明化合物の１％メタノール溶液）
０．０５ｍｌを混和した後、Ｌ−アスコルビン酸（０．
００１５ｍｏｌ／ｌ）を０．５ｍｌ加え、３０℃にて１
時間反応させた。

【００４１】２０％トリクロロ酢酸０．５ｍｌを添加し
反応を止め、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、そ
の上清をとった。これに０．６７％チオバルビツール
酸０．５ｍｌを加えた。

【００４２】１００℃で２０分間反応させたのち、５３
０ｎｍでの吸光度を測定し、抗酸化作用の指標とした。
ＣＳ−７９ＢのＩＣ₅₀値は０．２０μＭであった。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ錠中で測定したＣＳ−７９Ｂの赤外線吸
収スペクトルを示す。

【図２】ｄ₆−ＤＭＳＯ中、４００ＭＨｚで測定したＣ
Ｓ−７９Ｂの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

【図３】ｄ₆−ＤＭＳＯ中、１００ＭＨｚで測定したＣ
Ｓ−７９Ｂの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

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【手続補正書】

【提出日】平成４年７月１４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】ＣＳ−７９Ｂを生産する菌株は、本発明者
らが長野県松本市で採取した土壌より新たに分離した菌
株であり、微生物の名称「Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ２４１９−ＳＶＴ２」及び微生物
寄託番号「微工研菌寄第１２７０７号（ＦＥＲＭＰ
−１２０７）」として工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託されている。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

【図２】

【図３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＥＤ 9360−4Ｃ (Ｃ１２Ｐ 17/10 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式で表される化合物。