JPH01308234A

JPH01308234A - 骨の吸収

Info

Publication number: JPH01308234A
Application number: JP1052741A
Authority: JP
Inventors: Jean Honore M Feyen; ジャン・オノル・エム・フェイエン; Trechsel Ulrich; ウーリッヒ・トレヒゼル
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1988-03-04
Filing date: 1989-03-03
Publication date: 1989-12-12
Also published as: AU621592B2; DK102389A; AU3094289A; GB2216412B; SE8900722D0; EP0331640A2; GB2216412A; DK102389D0; PT89893A; CA1332223C; HUT52962A; BE1003662A4; CH680070A5; GB8904646D0; DE3906923A1; IT8947695A0; NL8900524A; IT1230496B; PH26238A; SE8900722L

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】「産業上の利用分野］この発明は、利の吸収に関連した医薬に関づ−るもので
ある。

し従来の技術］インターロイギン６１Ｊ、線維芽細胞および多くの他の
細胞種により生産されることが示されたサイトカイン（
ｃｙｔｏｋｉｎｅ）である。インターロイギン６の製法
および例えば骨髄に対するその作用については、１９８
６年７月１５１３出願のアメリカ合衆国出願第０６　／
　８８５９０５　ケに基づいて出願されたＩ）ＣＴ出願
Ｐ○Ｔ／ＵＳ　８７１０１６　＋　１（Ｗ○８８１００
２０６）に記載されている。インター０イキン６（−１
、多重標的細胞を有すると思われる。インターロイギン
６は、β、インターフェロン、Ｂ細胞刺激因子２（Ｉ３
ＳＦ−２）、インター〔ｌイキンＩ−Ｉ　Ｐ　−１およ
び２６　Ｋ因子と同一・物質であることが判明した。現
在、インターロイキン６がその低い抗ウィルス活性から
考えて本当にインターフェロンとみなされ得るか否かは
疑わしい。

インターロイギン６の生産が、ある種の細胞ではインタ
ーロイキンＩ（Ｎ、−１）および肺よう壊死因子（ＴＮ
Ｆα）により刺激され得ることが報告されている。また
、プロスタグランンンＪＣ２生産、・１」吸収のマーカ
ーが、■Ｌ−１およびＴ　Ｎ　Ｆαにより刺激されるこ
とも知られている。

特に免疫学的および血液学領域においてインターロイキ
ン６による研究が熱心に行なわれたにも拘イつらず、骨
の吸収または形成に対ずろインターロイギン６の効果に
ついては一切報告されていない。

［発明の構成、効果および実施態様］この度、■Ｔ、−６分子（後で定義する）が骨の吸収阻
害および・１′１の形成促進に有用であることが見出さ
れた。ずなわし、それらは、オステオポローシス、例え
ば−次性および／または二次性オステオボ１−１−ノス
および局在性オステオポローシスを含む、閉経後のオス
テオポローシスの急性および／また（」慢性段階、外傷
後のオステオポローシス、骨のページエラＩ・病（変形
性儒炎）、骨の悪性腫ように起因する骨組織崩壊、例え
ば骨肉腫、骨ジストロフィー、例えば腎性骨ノス）・ロ
フィー、骨軟化症、骨の多発性骨髄腫、・Ｖ１形成革全
症、高カルシウム血症、骨髄炎、例えば抗生物質および
転移性石灰化に伴う場合の処置に有用である。

下記の結果は、Ｉ　Ｌ−６分子（後で定義する）が、１
）骨細胞培養からのＰ　Ｇ　Ｅ　７分圧・を阻害しく試
験１）、１１）骨培養において、例えば２種のｊノンフォカイン
である、インターロイギンＩおよび腫よう壊死因子によ
り誘導されたＰＧＥ３分泌刺激を阻害しく試験２）、１１１）骨形成を促進しく試験３）、さらにｉｖ）骨吸
収を低下させる（試験４および試験５）ことを示す。

ざらに、骨芽細胞（また、これは破骨細胞を生成させる
）がインターロイキン６活性を生産することが示されて
いる（試験６および７）。

この明細書で使用されているインターロイギン６活性の
１単位（Ｕ）と（」、例えば、ランス）・−プ等、［−
カル　トップ　マイクロパイオル　イミコ。

ノル、Ｊ（Ｃｕｒｒ、　Ｔｏｐ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
、　１ｍｍｕｎｏ１．）（１９８６）１３２．１０５お
よびアーデン等、［ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・
イミコノロジーＪ（Ｅｕｒ、　Ｊ、　１ｍｍｕｎｏ１．
Ｘｌ、　９８７）−１，７，］　４１１の具体的検定法
に記載されたクローンＢ］３．２９（セントラル・ラボ
ラＩ・リー・ネザーランズ・レッド・クロス、ブラッド
・トランスフコーンヨン・ザ−ビス（ピー・オー・ボッ
クス９４０６．１００６エーケー、アムステルタム）か
ら自由に入手され得る）を用いたＢ細胞増殖検定法にお
いて半最大刺激を誘発ずろ冊７−６分子の量を意味する
。

ｌＸＩＯ３単位（Ｊ約１ｍ７のポリペプチドである。

簡単に述べると、培養培地１５％（ｖ／ｖ）胎児うし血
ｌｌ？、ペニシリンおよびストレプトマイノンを補った
イスコブの修飾ダルベツコ培地］に細胞を懸澗し、マイ
クロタイター・プレートで培養する（５．１０′細胞／
２００μＬ培地）。細胞を、３７℃で空気中に５％ＣＯ
２を含む加湿雰囲気下４８時間培養する。最後の６時間
は１μＣ１の［３１（］デミノンの存在下で培養し、核
に取り込まれた放射能を分析する。試験ずべき条件培地
をＢＩ３．２９細胞培地中で系列希釈ずろ。

試験データを得るためのインターロイキン６は、ＣＩ−
Ｉ　Ｏ細胞により生産されたクリコシル化Ｉ　Ｌ　−６
を指し、所望により精製してＬ　Ｐ　Ｓ　（リボ多糖類
）を除去し得る。

以後、インターロイギン１α・ＩＩ川とする。

試験１ラット骨肉腫セルラインＲＯ８Ｉ　７／２．８における
プロスタグランジンＥ、の基底生産は、約０．０１〜約
］　００　Ｕ／ｍＱＩ　Ｌ　−６分子濃度で阻害される
。この試験では、ラット骨肉腫セルラインＲＯ８］　７
／２．Ｆ３の細胞は、３７°Ｃで空気中に５％ＣＯ９を
含む加湿雰囲気中１０％胎児うし血清および２ミリモル
Ｌ−グルタミンを含むダルヘッコ最少必須培地およびＦ
’１２培地（Ｉ　Ｉ）において培養される。全面生長時
点で、細胞を上記濃度のＩＬ−６分子により処理する。

２４時間の培養後、標準放射線免疫検定法を用いて培地
のアリコートをプロスタグランジンＥ、に関して測定す
る。

インターロイキン６により得られた結果は以下の通りで
ある。

インターロイキン６ａ度　　　　Ｐ　Ｇ　Ｅ　２、Ｐｇ
（（Ｕ／ｚの　　　　　　ピコグラム）／順０（対照）
】８４０．１　　　　　　　　　　　　１５１１．０　　　　
　　　　　　　　　　　１２８１０１１８　　　　　　
　　　　　　　　＋１８試験２インターロイキン１および腫よう壊死因子によるマウス
頭蓋冠細胞の刺激により生成されるプロスタグランジン
Ｅ、の生産量は、約１０〜約１００単位／ｍρのＩ　Ｌ
　−６分子濃度により低減化される。

この試験では、マウス頭蓋冠の器官培養を最初に調製す
る。

前頭部および頭頂部の骨を新生児（５〜６日令）マウス
（ＣＩ）−１系統）において切開し、矢状縫合線に沿っ
て剥かし、３５ｍｍプラスチック製組織培養ウェルに入
れた１ｍ９／ｙｔｔ、（ｌのうし血清アルブミン、ペニ
シリンおよびストレプトマイシンを含有する２靜のＢＧ
Ｊ培地中で培養する。

前培養期間（２４時間）後、この培地を、１０単位濃度
のインターロイギンｌまたはＩＯナノグラム／屑り濃度
のＴＮＦアルファおよび上記濃度のＩＩ、−６分子を補
ったＢＧＪ培地と取り替え、ざらに４８時間培養する。

全培養期間後、マルチ・ウェル皿を３７°Ｃで空気中に
５％ＣＯ３を含む加湿雰囲気中ロッカー・プラットフォ
ーム（１５振動／分）上で振動させる。頭蓋冠条件培地
を採取し、４℃で貯蔵する。

次いで、放射線免疫検定法を用いて培地のアリコートを
プロスタグランジンＥ２について検定する。

ＩＯＵ／ｚρのインターロイキン１による刺激インター
ロイキン６　　プロスタグランジンＥ２の濃度（単位／
ｚＱ）　　　　　　　　ｐｇ／祿１０　　　　　　　　
４、４００＋００　　　　　　　　５００＊（＊インターロイキン６による刺激がない場合の対照値
に相当）１０ｎｇ／靜のＴＮＦαによる刺激インターロイキン６　　プロスタグランジンＥ２の濃度
（ｊｌｌａ／ｇ（り　　　　　　　　ｐｙ／ｍ０＋０　
　　　　　　　　　　　　　　１２００１００　　　　
　　　　　　　　　　　８００＊（＊刺激がない場合の
対照値−・５００　ｐｇ／ｍσ）プ［Ｊスタフランノン
■号７分泌刺激を非リンフ２カイン副甲状腺ホルモン（
１０−０モル）により誘発しても、プロスタグランノン
合成の小ざな阻害（Ｊ依然とし７て観察されろ。

インターロイキン６　　プ［ｌスタクランソンＥ。

の濃度（単イ９／屑（り　　　　　　　　ｐｇ／ｍρ］
　００　　　　　　　　　　３３００インターロイギン
６は、１−記試験にお（Ｊろ非刺激１”１培養のプロス
タクランノン１号２合成に対４゛ろ活性（Ｊ示さない。

試験３胎児ラット方ｊ蓋；ｉｌｌこお１〕るニノラーケン、１
３よひ、１１′コラーゲン蛋白質への［３１ｆｌプＩフ
リンの取り込み増加により示されろ通り、■Ｌ　６分子
は・目の形成を促進ずろ。

２１「ｊ全胎児ラソ）・において前頭部および頭頂部の
骨を切開し、縫合矢状線に沿って剥がし、クリーム等の
方法［［−エンｊ・クライノ［ｌジー−］（Ｉ・：ｎｄ
ｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙＸ　Ｉ　９８５　）ｊ、　、１−
６．２９６］に従って培養４−ることにより、ラット頭
蓋冠の器官培養を調製する。Ｔ　Ｌ　−６分子を１−　
］　００４４位の用里で２１１夕の培養に加える。培養
を２４〜４８ｎ４ｉ間行う。

コラゲナーゼ分解可能蛋白質および非コラーゲン蛋白質
への［３Ｔ（］ププロンの取り込みを定量するために、
シーゲルマンおよびペーテルコフスキー［［−デベロプ
メンタル　バイオロン−Ｊ（Ｄｅｖ、　Ｂｉｏｌ、）（
］　９７２）２８　：４４３］の方法およびクリート等
「「エンドクライノ「ｌジー−１（Ｅ　ｎｄｏｃｒｉｎ
ｏｌｏｇｙ）（１つ８５）七月隼、２９６］の修正方法
に従−〕て、〕骨ポモジネー１を細菌性コラゲナーゼに
より分解する。

試験４骨からの［４，５］Ｃａ放出の減少により示されるＩ　
ｌ　− ノ勇り、Ｉ　Ｊ、−６分子ＩＪ骨吸収を低下させる。

ごの試験は、ライフの原理「［−ンヤーナル・オブ・タ
リニカル・インへスティケーノヨンＪ（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、
　１ｎｖｅｓｔ、）（１９６５Ｅ）、ｌ０３１に従い行
ム゛イ′）れろ。

妊娠ラットに対し、口５］Ｃａによる皮］・注射を妊娠
１８　Ｅｌ　「ｌに行う。プラセポまたはｌ　Ｌ、　−
６分子（１動物当たり１〜１００中位）を皮下注射ずろ
。１９０「１に、動物を殺し、胎児を取り出す。

とう・Ｖｊおよび尺骨の石灰化した骨幹を切ｒｊＦＪ　
ｉ、、培養下に置く。骨エクスプラン！・からの［４５
］Ｃａの放出に基づいて吸収を定量化する。

試験５下記試験で示された破刊細胞のムタの減少および骨の密
度増加により示さイする通り、Ｉ　Ｌ　−６分子ｕ、　
、ｊｌ吸収を減少さ且ろ。

成長中のマウス（６〜８週令、体重約２０クラノー、）
を使用する。約ＯＩ〜約１０マイクログラム、例え（ｊ
凹マイクロクラムの用量のＩ　Ｌ　−６分子を、頭ぐ：
ｆ″Ｋｉ・ｉ旧１（分、例えば頭蓋の前頭骨および側頭
骨部分に皮下注射する。３〜’ｉ＝６’　ＩＥＩ間毎１
」注射を行う。処理中止の５０．７日または２週間後、
動物を殺ず。頭蓋近付を組織検査する。例えば前頭骨お
よび側頭骨を固定し、断片化し、埋封する。り・］照動
物と比べた骨形成の増加は、組織ベースにおいて、例え
ば酒石酸耐性酸ホスファターセ染色により示される例え
ば骨の密度増加および破骨細胞数の減少により観察され
ろ。

さらに、対照動物と比べた頭蓋近付、例えば前頭骨およ
び側頭骨にお１１．ｌる骨形成の増加は、組織ベースに
おいて、例えば骨成長増加により観察され、また遺骨細
胞数の増加により観察されろ。

試験６インターロイキン６様活性の放出は、ひと骨芽細胞杼５
ａｏｓ−２細胞においてポルボール　１２−ミリステー
１−１３−アセテ−１−（Ｐ　Ｍ△）（非骨細胞培養か
ら得られるインターロイギン６の公知刺激剤である）（
２〜２００ナノグラム／Ｒρの濃度）、インターロイキ
ン＋（１〜２０単位／ｍのおよび副甲状腺ホルモン（Ｐ
　ｉ”　１０（］　０−”〜１０−１０モル）により刺
激されろ。

この試験では骨芽細胞性ひと骨肉腫セルラインＳ　ａｏ
ｓ　−２ｉｊ、３７℃で空気中に５％ＣＯ７を含む加湿
雰囲気中、１５％（ｖ／ｖ）胎児うし血／Ｒ（ＦＣ８）
、ペニシリン、ストレプトマイノンおよび２ミリモルの
し一りルタミンを補ったマツコイＳＡ培地において培養
される。全面生長時点で、２または１０％胎児うし血清
を含有し、異なる試験薬剤が加えられた培地に細胞を移
す。４８時間または７２時間の刺激期間後５ａｏｓ−２
細胞の培地を採取し、４℃で貯蔵する。

以下の要領で慣用的三重水素−チミジン取り込み検定法
を用いることにより、インターロイギン６様活性が検出
される。

」二連のＢ細胞（り［７−ン１３１３．２９）増殖検定
法を用いて５ａｏｓ−２細胞の条件培地をインターロイ
ギン６活性の存在に関して検定する。４８時間以内に顕
著なレベルのインターロイギン６が検出される。

典型的な結果は次の通りである。

ＦＣ８＝２％条件培地の希釈率１／１０刺激剤　　　　　　３Ｈ−チミジン取り込み（ｃｐｍ）
＊無し　　　　　　　　　　　　８７４ＰＭＡ（２０ｍｇ７’ｚ（り　　　　　６１０１５Ｉ　
Ｌ　−１（１［１１Ｊ／ｚ（り　　　　２３１８９ＰＴ
Ｈ（１０〜８モル）　　　　１２８７＊（基底値−４０
０ｃｐｍ、最大取り込み６６０００ｃｐｍ）対照非刺激条件下では検出可能な量のインターロイキン
６様活性は一切観察されない。

試験７試験２０項で記載されたマウス頭蓋冠細胞培養は、４８
時間培養後、対照条件（２００００ｃｐｍ）下で顕著な
インターロイキン６活性を示す。これは、ホルボール　
１２−ミリステート　１３−アセテート（ＰＭＡＸＩ−
１００Ｈｇ／７！Ｑ、）および副甲状腺ホルモン、旧〕
ＴＦ■１−３４、（Ｐ　Ｔ　ＨＸ　Ｉ　Ｏ−７〜１０−
１０モル）の存在下で刺激される。

得られた結果（３Ｈ−デミジン取り込み、ｃｐｍ）は次
の通りである。

希釈率　　対照　　ＰＭＡ　　　　　ＰＭＡ　　　　　
　Ｐ）ＩＡｌｏｏ　ｎｇ／ｍｌ　　１０　ｎｇ／ｍｌ　
　　　１　ｎｇ／ｍ１１　　　　　１０　　　３９９１
９　　　　４７５１０　　　　　３７６７９　　　　　
　．４８１５０４　　　１００００　　　　　３４６　
　　　　５８８５　　　　　２５．４５　　　　　　　
　　５８０ｓ　　　１０００００　　　　　３０５　　
　　　５９５　　　　　　５ｙｚ　　　　　−４１１Ｐ
ＴＨ７ＰＴＦＩ　　　　　８　ＰＴＨ９ＰＴＨｌｏ−７
８１０−８Ｍ　　、　１０，９　Ｍ　　、　　１０−１
０　Ｍｌ　　　１２３２６　　　　１４６３８　　　　
１６２５２　　　　　３５８９７２　　２３２２２　　
　　２６８８５　　　　３０１７２　　　　　１３ｏ７
３５　　３３６　　　　４５２　　　　６８２　　　　
　６７Ｂ従って、畳の発明は、ｉ）対象における骨吸収阻害または骨形成促進またはオ
ステオポローシスもしくは骨関節炎もしくは他の」一連
の適応症の処置方法であって、処置を必要とする対象に
ＩＬ−６分子の治療有効量を投与すること示含む方法ミ
　　　　　　　　　　　　゛　□ｉｉ）骨吸収阻害また
は骨形成促進またはオステオポローシスもしくは骨関節
炎も１くは他の」二連の適応症の処置に適した医薬の製
造におはるＩＬ−６分子の用途、　　　　　　　　　　
　　　　　　　・山）骨吸収阻害または骨形成促進また
はオス会オボローソスもしくは骨関節炎もしくは他の上
述の適応症の処置を目的とするＩＬ’−６分子の使用、
またはｉｖ）骨吸収阻害または骨形成促進またはオステオポロ
ーシスもしくは骨関節炎もしくは他の上述の□適応症の
処置を目的とするＩＬ’−６分子含有［医薬。

を提供する。

Ｉ　Ｌ　−６分子なる語は、公知インターロイキン６（
上述のＰＣＴ出願またはランズドープおよびアーう′ノ
の出版物を引用（２て−１−述し）こ具体的増殖検定法
参照）：Ｊ：た（：Ｊｌ−述の因子、例え（」１・ＣＰ
２２０５７４△（イエータ）、ＰＣＴ出願ＷＯ３８１０
０２０６（ンーｒネう゛イソクス・インスティテコ１−
１・）およびｒＤｐ２５７ｄＯ（ｉ（味の素）に記載さ
れた例えばインターフＪ［ｌンβ２と一致するか、木質
的にそれと同じ構造または同じ活性スベクＩ・ルを有す
る化合物を包含ずろ。これら全ての出版物（以後、イン
ターロイキン６関連出版物と称する）の内容を引用し７
て説明の一部と川ろ。

Ｔ　１．−６分子（Ｊ、例えばアルギニン部位において
クリコノル化され得、例えば」、ノゴリヒア・＝ｌす（
Ｉシｃａｌｉ）またｔ」：　ＣＩ−Ｉ　Ｏ細胞から製造
されｊすろ。

記載されたＩ　Ｌ　−６分子ミー１２１２アミノ酸ポリ
ペブチ）・である。所望により、最初らしく（：ｌ最後
のメヂオニン・アミノ酸または非コート領域全体、すな
わら最初の２８アミノ酸、ＩＶＩｅＬ・ΔｓｎかうＰ　
ｈｅ　Ｐ　ｒｏ△Ｉａ（コねらム含めろ）ｋｌ省かね得
る。

インター［Ｊイキン６において、１個、２個もしく（３
３個らしく（」それ以上のアミノ酸の欠失、追加または
他のアミノ酸との置換は可能であり、インタ−ロイギン
６様話性は依然として保持され、この発明の方法におい
て活性を示しくＥｌる。

＋　Ｌ−６分子という表現は、それらの類縁体、および
骨培養においてＩ　Ｌ−６活性を選択的に刺激する化合
物（特に、化合物が他の因子または他の経路による骨吸
収に対して微々たる作用しか示さないという点で選択的
である場合）を全て包含する。

すなわち、この語（１式（Ｉ）で示されろ化合物を包含
する。

２Ｏ− ＰＲＯＶＡＬ　ＰＲＯＰＲＯＧＬＹ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　
ＳＥＲＬＹＳ　ＡＳＰ　ＶＡＬＡＬＡ　ＡＬＡ　ＰＲＯ
ＨＩＳ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＰＲＯＬＥＵ　ＴＨＲＳＥＲ
５ＥＲＧＬＵ　ＡＲＧ　ＩＬＥ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＧＬ
Ｎ工ＬＥ　ＡＲＧ　ＴＹＲ工ＬＥ　ＬＥＵＡＳＰ　ＧＬ
Ｙ工ＬＥ　ＳＥＲＡＬＡ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＬＹＳＧＬ
Ｕ　ＴＨＲＣＹＳＡＳＮ　ＬＹＳ　ＳＥＲＡＳＮ　ＭＥ
Ｔ　ＣＹＳ　ＧＬＵ　ＳＥＲＳＥＲＬＹＳ　ＧＬＵＡＬ
Ａ　ＬＥＵ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳＮ　ＬＥＵ
　ＡＳＮ　ＬＥＵ　ＰＲＯＬＹＳＭＥＴ　ＡＬＡ　ＧＬ
Ｕ　ＬＹＳ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＣＹＳ　Ｐ［］Ｅ　ＧＬ
ＮＳＥＲＧＬＹＰ）ＩＥ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　Ｔ
ｕＲＣＹＳ　ＬＥＵ　ＶＡＬ　ＬＹＳ工ＬＥ工ＬＥＴＨ
ＲＧＬＹ　ＬＥＵ　ＬＥＵ　ＧＬＵ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　
ＶＡＬ　ＴＹＲＬＥＵ　ＧＬＵ　　　　　　（１）ＴＹ
ＲＬＥＵ　ＧＬＮ　ＡＳＮ　ＡＲＧ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　
ＳＥＲＳＥＲＧＬＵ　ＧＬＵＧＬＮ　ＡＩ＋Ａ　ＡＲＧ
　ＡＬＡ　ＶＡＬ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　ＳＥＲＴＨＲＬＹ
Ｓ　ＶＡＬＬＥＵ工ＬＥ　ＧＬＮ　ＰＨＥ　ＬＥＵ　Ｇ
ＬＮ　ＬＹＳ　ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＹＳ　ＡＳＮＬＥＵ
　ＡＳＰ　ＡＬＡ　工ＬＥ　ＴＨＲＴＨＦ、ＰＲＯＡＳ
Ｐ　ＰＲＯＴＨＲＴＨＲＡＳＮ　ＡＬＡ　ＳＥＲＬＥＵ
　ＬＥＵ　ＴＨＲＬＹＳ　ＬＥＵ　ＧＬＮ　ＡＬＡ　Ｇ
ＬＮＡＳＮ　ＧＬＮ　ＴＲＰ　ＬＥＵ　ＧＬＮ　ＡＳＰ
　ＭＥＴ　ＴＨＲＴＨＲＨＩＳ　ＬＥＵ工ＬＥ　ＬＥＵ
　ＡＲＧ　ＳＥＲＰＨＥ　ＬＹＳ　ＧＬＵ　ＰＨＥ　Ｌ
ＥＵ　ＧＬＮ　５ＥＲＳＥＲＬＥＵＡＲＧ　ＡＬＡ　Ｌ
ＥＵ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＭＥＴ。

また、それ（Ｊ、例えばＮ−末端基、例えばＡｌａまた
はＭｅｔＡｌａと結合した追加アミノ酸を有する式（１
）の化合物または式０Ｉ）ＡＬＡ　ＰＲＯＴＨＲ５ＥＲＳＥＲＳＥＲＴＨＲＬＹＳ
　ＬＹＳ　ＴＨＲＧＬＮＬＥＵ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＧＬ
Ｕ　ＨＩＳ　ＬＥＵ　ＬＥＵ　ＬＥＵＡＳＰ　ＬＥＵ　
ＰＨＥ　　　　　　（ＩＩ）ＡＲＧ　ＡＬＡ　−Ｘ（式中、Ｘは式（Ｉ）である）の化合物を包含する。

また、この語は、１個Ｊ：たはそれ以」−のアミノ酸が
置換または省かれている分子、例えば配列ＰＲＯＶＡＬ
　ＰＲＯＰＲＯＧＬＹ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　ＳＥＲＬＹＳ
ＡＳＰ　ＶＡＬ　ＡＬＡ　ＡＬＡが例えばＮ−末端配列として組み込まれ、および／また
は木質的に残りの同じ配列を保ｊ’、’Ｊしている分子
を包含する。

これらの適応症の場合、勿論、適当な用量ｉ」、例えば
使用される厳密なＴ　Ｌ　−６分子、宿主、投与方法並
びに処置される状態の性質および重さにより異なる。し
かしながら、一般に、動物における満足すべき結果は、
動物体重Ｉｋｇ当たり約０゜５マイクログラム〜約２０
マイクログラムの一日用量で得られることが示されてい
る。大型（Ｊ乳類、例えばひとの場合、指示−日用量（
Ｊ、約２５マイクログラム〜約１０００マイクロクラ１
＼の範囲のＩ　Ｔ、　−６分子が例えば−日４回以下の
グ割用量で好都合に投与される。

ＩＬ−６分子は、常用経路、特に例えば錠剤もしくはカ
プセル形態で経口的に、」Ｉたは好ましくは例えば注射
可能溶液も＋、　＜　ｆ」懸測液形態で非経目的に投与
され得る。

例えばインターロイキン６の投与方法およびこれを用い
た製剤（ｊ、例えば」二連のインタ−ロイギン６関連出
版物により公知である。

インターロイキン６は好ましい化合物である。

試験結果（Ｊ上記の通りである３、この化合物（ｊ、２
５マイクロクラム〜１２５マイクログラムの一日用■て
大型１」乳類、例えばひとに皮下注射により投与され得
るこ七が示されている。

医薬組成物は、Ｉ　Ｌ　−６分子を少なくとも１種の医
薬用担体また（Ｊ希釈剤と共に含有し得る。それらの組
成物（１，Ｉ常法で製造され得る。単位用量形態は、例
え（」約４マイクロクラム〜約５００マイクログラムの
Ｉ　Ｌ　−６分子を含む。

また、この発明は、−に記方法で使用される、ｌｌ７−
６分子含を医薬組成物を使用説明書と一緒に内包オろパ
ックを提供する。

この発明によって、下記のものが可能となる。

（１）骨吸収阻害に適した医薬の製造にお（：ＩるＩ　
Ｌ−６分子の用途。

（２）骨形成促進に適した医薬の製造におｌ−するＴ　
Ｌ−６分子の用途。

（３）オステオポローシスの処置に適した医薬の製造に
おけるＩＬ−６分子の用途。

（４）骨関節炎の処置に適した医薬の製造におけるＩ　
Ｔ、、　−６分子の用途。

（５）骨のページェット病、骨の悪性腫ように起因する
骨組織崩壊、骨軟化症、骨の多発性骨髄腫、骨形成不全
症および骨髄炎のうちの少なくとも１疾患の処置に適し
た医薬の製造にお（ＪるＩＬ−６分子の用途。

（６）骨の多発性骨髄腫の処置に適した医薬の製造にお
ｌ′Ｊるｒ　Ｌ　−６分子の用途。

（７）高カルシウム血症の処置に適した医薬の製造にお
Ｉ′ｌｌるＩ　Ｌ　−６分子の用途。

（８）ＩＬ−６分子がインターロイキン−６である、」
１記１〜７のいずれか１項記載の用途。

（９）ＩＬ−６分子が下式（１）で示されるものである
、」１記１〜８のいずれか１項記載の用途。

ＰＲＯＶＡＬ　ＰＲＯＰＲＯＧＬＹ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　
ＳＥＲＬＹＳ　ＡＳＰ　ＶＡＬＡＬＡ　ＡＬＡ　ＰＲＯ
ＨＩＳ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＰＲＯＬＥＵ　ＴＨＲＳＥＲ
５ＥＲＧＬＵ　ＡＲＧ　工ＬＥ　ＡＳＰ　ＬＹＳ　ＧＬ
Ｎ　工ＬＥ　ＡＲＧ　ＴＹＲ工ＬＥ　ＬＥＵＡＳＰ　Ｇ
ＬＹ　ＩＬＥ　ＳＥＲＡＬＡ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＬＹＳ
　ＧＬＵ　Ｔｌ（ＲＣＹＳＡＳＮ　ＬＹＳ　ＳＥＲＡＳ
Ｎ　ＭＥ’ｒ　ＣＹＳ　ＧＬＵ　ＳＥＲＳＥＲＬＹＳ　
ＧＬＵＡＬＡ　ＬＥＵ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＡＳ
Ｎ　ＬＥＵ　ＡＳＮ　ＬＥＵ　ＰＲＯＬＹＳＭＥＴ　Ａ
ＬＡ　ＧＬＵ　ＬＹＳ　ＡＳＰ　ＧＬＹ　ＣＹＳ　ＰＩ
Ｅ　ＧＬＮ　ＳＥＲＧＬＹＰＨＥ　ＡＳＮ　ＧＬＵ　Ｇ
ＬＵ　ＴＨＲＣＹＳ　ＬＥＵ　ＶＡＬ　ＬＹＳ工ＬＥ工
ＬＥＴ）ＩＲＧＬＹ　ＬＥＵ　ＬＥＵ　ＧＬＵ　ＰＩＥ
　ＧＬＵ　ＶＡＬ　ＴＹＲＬＥＤ　ＧＬＵ　　　　　　
（Ｉ）ＴＹＲＬＥＵ　ＧＬＮ　ＡＳＮ　ＡＲＧ　ＰＩＥ
　ＧＬＵ　ＳＥＲＳＥＲＧＬＵ　ＧＬＵＧＬＮ　ＡＬＡ
　ＡＲＧ　ＡＬＡ　ＶＡＬ　ＧＬＮ　ＭＥＴ　ＳＥＲＴ
ＨＲＬＹＳ　ＶＡＬＬＥＵ工ＬＥ　ＧＬＮ　Ｐ）ＩＥ　
Ｌｇｕ　ＧＬＮ　ＬＹＳ　ＬＹＳ　ＡＬＡ　ＬＹＳ　Ａ
ＳＮＬＥＵ　ＡＳＰ　ＡＬＡ　ＩＬＥ　ＴＨＲＴＨＲＰ
ＲＯＡＳＰ　ＰＲＯＴＨＲＴＨＲＡＳＮ　ＡＬＡ　ＳＥ
ＲＬＥＤ　ＬＥＤ　ＴＨＲＬＹＳ　ＬＥＵ　ＧＩＪ　Ａ
ＬＡ　ＧＬＮＡＳＮ　ＧＬＮ　ＴＲＰ　ＬＥＵ　ＧＬＮ
　ＡＳＰ　ＭＥＴ　ＴＨＲＴＨＲＩ（ＩＳ　ＬＥυ工Ｌ
Ｅ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＳＥＲＰＨＥ　ＬＹＳ　ＧＬＵ　
ＰＨＥ　ＬＥＵ　ＧＬＮ　５ＥＲ５ＥＲＬＥＵ　ＡＲＧ
　ＡＬＡ　ＬＥＵ　ＡＲＧ　ＧＬＮ　ＭＥＴ。

（１０）化合物がＡｌａ−ＸＥ式中、Ｘは式（（）で示
される配列である］である、上記８記載の用途。

（１１）化合物がＭｅｔ　−Ａ　ｌａ　−Ｘ　［式中、
Ｘは式（Ｉ）で示される配列である］である、上記８記
載の用途。

（１２）ＩＬ−６分子に、下記配列ＰＲＯＶＡＬ　ＰＲＯＰＲＯＧＬＹ　ＧＬＵ　ＡＳＰ　
ＳＥＲＬＹＳＡＳＰ　ＶＡＬ　ＡＬＡ　ＡＬＡが組み込まれている、請求項９記載の用途。

（１３）実質的に後記実施例のいずれか１つに記載され
ている、上記ｌ記載の用途。

（１４）上記１〜１３において前述しノこ疾患のうちの
１つの処置方法であって、処置を必要とする対象に上記
ｉ〜１３のいずれか１項記載の化合物を投与することを
含む方法。

（１５）上記１４記載の方法で用いられる、使用説明書
と一緒にＩＬ−６分子含有医薬組成物を内包するパック
。

特許出願人　サンド・アクチェンゲゼルシャフト代　理
人弁理士青　山　葆　ほか１名

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ＩＬ−６分子を含む骨吸収阻害用医薬組成物。
（２）ＩＬ−６分子を含む骨形成促進用医薬組成物。
（３）ＩＬ−６分子を含むオステオポローシスの処置用
医薬組成物。
（４）ＩＬ−６分子を含む骨関節炎の処置用医薬組成物
。
（５）ＩＬ−６分子を含む骨のページェット病、骨の悪
性腫ように起因する骨組織崩壊、骨軟化症、骨の多発性
骨髄腫、骨形成不全症および骨髄炎のうちの少なくとも
１疾患の処置用医薬組成物。
（６）ＩＬ−６分子を含む骨の多発性骨髄腫の処置用医
薬組成物。
（７）ＩＬ−６分子を含む高カルシウム血症の処置用医
薬組成物。
（８）ＩＬ−６分子がインターロイキン−６である、請
求項１〜７のいずれか１項記載の組成物。
（９）ＩＬ−６分子が下式（ I ）で示されるものであ
る、請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。【遺伝子配列があります】
（１０）化合物がＡｌａ−Ｘ［式中、Ｘは式（ I ）で
示される配列である］である、請求項８記載の組成物。
（１１）化合物がＭｅｔ−Ａｌａ−Ｘ［式中、Ｘは式（
I ）で示される配列である］である、請求項８記載の
組成物。
（１２）ＩＬ−６分子に、下記配列【遺伝子配列があります】が組み込まれている、請求項９記載の組成物。
（１３）請求項１〜１３記載の組成物の使用のために用
いられる、使用説明書と一緒にＩＬ−６分子含有医薬組
成物を内包するパック。