JPH01300895A - ホスホリラーゼの回収方法 - Google Patents
ホスホリラーゼの回収方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はホスホリラーゼの回収方法に関し、更に詳細に
は、馬鈴薯澱粉工場排水を利用するホスホリラーゼの回
収方法に関する。
は、馬鈴薯澱粉工場排水を利用するホスホリラーゼの回
収方法に関する。
ホスホリラーゼは、例えば医薬用抗菌剤、抗腫瘍剤（白
金錯体）、心臓病の治療薬（アミン塩）等として有用な
解糖系の初期化合物であるグルコース−１−リン酸（以
下１’−ｃ−１−Ｐ」と略称する）を合成する際に、非
常に有用な酵素であり、これは馬鈴薯塊茎等の植物、ウ
サギ筋肉等の動物、酵母などの微生物等に広く分布して
いる、 Ｇ−１−Ｐの製造において、ホスホリラーゼ源としては
、馬鈴薯の汁や家兎筋肉抽出液をそのまま用いたり、或
いはそれらを精製し念のちセルロース系イオン交換樹脂
に固定して用いられている。
金錯体）、心臓病の治療薬（アミン塩）等として有用な
解糖系の初期化合物であるグルコース−１−リン酸（以
下１’−ｃ−１−Ｐ」と略称する）を合成する際に、非
常に有用な酵素であり、これは馬鈴薯塊茎等の植物、ウ
サギ筋肉等の動物、酵母などの微生物等に広く分布して
いる、 Ｇ−１−Ｐの製造において、ホスホリラーゼ源としては
、馬鈴薯の汁や家兎筋肉抽出液をそのまま用いたり、或
いはそれらを精製し念のちセルロース系イオン交換樹脂
に固定して用いられている。
しかしながら、家兎筋肉抽出液を利用する方法は家兎の
入手に限りがあり、馬鈴薯の汁をそのまま用いる方法は
ホスホリラーゼの濃度や不純物等の問題がある。！た、
馬鈴薯の汁を精製したのち七西ロース系イオン交換樹脂
に固定化する方法は操作が煩雑な上、副生ずる廃棄物が
大量に生産されるため好ましくない。
入手に限りがあり、馬鈴薯の汁をそのまま用いる方法は
ホスホリラーゼの濃度や不純物等の問題がある。！た、
馬鈴薯の汁を精製したのち七西ロース系イオン交換樹脂
に固定化する方法は操作が煩雑な上、副生ずる廃棄物が
大量に生産されるため好ましくない。
そこで、本発明者は上記問題点を解決すべく、馬鈴薯澱
粉製造工場から排出される排水に着目し鋭意検討を行な
った結果、この排水を合成高分子系アニオン交換樹脂に
接触させれば、高収率で高活性の固定化ホスホリラーゼ
が得られること、更にこれは容易に溶出できることを見
い出し本発明を完成した。
粉製造工場から排出される排水に着目し鋭意検討を行な
った結果、この排水を合成高分子系アニオン交換樹脂に
接触させれば、高収率で高活性の固定化ホスホリラーゼ
が得られること、更にこれは容易に溶出できることを見
い出し本発明を完成した。
すなわち、本発明は馬鈴薯澱粉工場排水を合成高分子系
アニオン交換樹脂に接触させてホスホリラーゼを固定化
し、必要に応じ溶出することを特徴とするホスホリラー
ゼの回収方法を提供するものである。
アニオン交換樹脂に接触させてホスホリラーゼを固定化
し、必要に応じ溶出することを特徴とするホスホリラー
ゼの回収方法を提供するものである。
本発明において馬鈴薯澱粉工場排水としては、通常の澱
粉製°造工場において排出されるものが使用される。
粉製°造工場において排出されるものが使用される。
また、本発明に用いるアニオン交換樹脂としては、例え
ばスチレン系、ビニル系、プロピレン系、エチレン系、
ゾタゾエン系、アクリロニトリル系、インゾレン系、ア
クリル酸・メタアクリル酸系、フェノール系、フェノー
ル・ｍ−フェニレンシアミン系、エピクロルヒドリン系
が挙げられ、その中でも特にスチレン系、アクリル酸系
の樹脂が好ましい。アニオン交換基としては、第一級〜
第三級アミノ基、第四級アンモニウム基、ホスホニウム
基、スルホニウム基等が挙げられ、特に第三級アミン基
、第四級アンモニウム基が好ましい。交換容量、粒径に
関しては特に限定されないが、交換容量は０．０１〜１
０ ＩＴ＋＋ｅｑ ／ ｄ樹脂が好ましく、特に０．１
〜３ ｍｅｑ ／ ｍ樹脂が好ましい。粒径は５０〜１
０００μｍが好ましい。
ばスチレン系、ビニル系、プロピレン系、エチレン系、
ゾタゾエン系、アクリロニトリル系、インゾレン系、ア
クリル酸・メタアクリル酸系、フェノール系、フェノー
ル・ｍ−フェニレンシアミン系、エピクロルヒドリン系
が挙げられ、その中でも特にスチレン系、アクリル酸系
の樹脂が好ましい。アニオン交換基としては、第一級〜
第三級アミノ基、第四級アンモニウム基、ホスホニウム
基、スルホニウム基等が挙げられ、特に第三級アミン基
、第四級アンモニウム基が好ましい。交換容量、粒径に
関しては特に限定されないが、交換容量は０．０１〜１
０ ＩＴ＋＋ｅｑ ／ ｄ樹脂が好ましく、特に０．１
〜３ ｍｅｑ ／ ｍ樹脂が好ましい。粒径は５０〜１
０００μｍが好ましい。
本発明方法は上記アニオン交換樹脂に馬鈴薯澱粉工場排
水を接触させることにより実施することができる。
水を接触させることにより実施することができる。
具体的には、例えば活性化したアニオン交換樹脂もしく
は活性化したのち緩衝溶液で平衡化したアニオン交換樹
脂と馬鈴薯澱粉工場排水とを混合し攪拌もしくは振盪す
るか、または活性化したアニオン交換樹脂もしくは活性
化したのち緩衝溶液で平衡化したアニオン樹脂をカラム
につめ、馬鈴薯澱粉工場排水を流通させることにより、
馬鈴薯澱粉工場排水中のホスホリラーゼを該樹脂に吸着
して回収する。
は活性化したのち緩衝溶液で平衡化したアニオン交換樹
脂と馬鈴薯澱粉工場排水とを混合し攪拌もしくは振盪す
るか、または活性化したアニオン交換樹脂もしくは活性
化したのち緩衝溶液で平衡化したアニオン樹脂をカラム
につめ、馬鈴薯澱粉工場排水を流通させることにより、
馬鈴薯澱粉工場排水中のホスホリラーゼを該樹脂に吸着
して回収する。
回収時の馬鈴薯澱粉工場排水に対するアニオン交換樹脂
の使用量は特に限定されないが、体積比で１，０以上、
ホスホリラーゼ全活性（Ｕ）に対しアニオン交換樹脂５
．０（Ｕ／ｆ）以上を使用するのが望ましい。また固定
化温度は０〜５０℃、特に０〜３０℃が好ましい。
の使用量は特に限定されないが、体積比で１，０以上、
ホスホリラーゼ全活性（Ｕ）に対しアニオン交換樹脂５
．０（Ｕ／ｆ）以上を使用するのが望ましい。また固定
化温度は０〜５０℃、特に０〜３０℃が好ましい。
上記固定化におけるその他の条件、例えば攪拌もしくは
振盪時間、カラム流通時間、防腐剤の添加等については
目的に応じて設定すればよい。
振盪時間、カラム流通時間、防腐剤の添加等については
目的に応じて設定すればよい。
ホスホリラーゼを固定化したアニオン交換樹脂からホス
ホリラーゼを溶出するには、通常の酵素精製で行なわれ
ている方法が採用される。具体的には、例えばホスホリ
ラーゼを固定化したアニオン交換樹脂に溶離剤を加え溶
出する方法、ホスホリラーゼを固定化したアニオン交換
樹脂をカラムにっめ溶離剤を流し溶出する方法、ホスホ
リラーゼを固定化したアニオン交換樹脂をカラムにっめ
溶離剤を直線塩濃度勾配をかけ溶出する方法等によって
行なわれる。ＮａＣｔ等の溶離剤の種類、溶離剤濃度、
溶出温度等の条件は特に限定されないが、ホスホリラー
ゼが失活しない条件で行なわなければならない。
ホリラーゼを溶出するには、通常の酵素精製で行なわれ
ている方法が採用される。具体的には、例えばホスホリ
ラーゼを固定化したアニオン交換樹脂に溶離剤を加え溶
出する方法、ホスホリラーゼを固定化したアニオン交換
樹脂をカラムにっめ溶離剤を流し溶出する方法、ホスホ
リラーゼを固定化したアニオン交換樹脂をカラムにっめ
溶離剤を直線塩濃度勾配をかけ溶出する方法等によって
行なわれる。ＮａＣｔ等の溶離剤の種類、溶離剤濃度、
溶出温度等の条件は特に限定されないが、ホスホリラー
ゼが失活しない条件で行なわなければならない。
本発明方法は馬鈴薯澱粉工場排水中のボスホリラーゼを
合成高分子系アニオン交換樹脂に吸着固定化することに
より、■高収率でホスホリラーゼを回収し利用できる、
■Ｇ−１−Ｐを安価に製造できる、■馬鈴薯澱粉製造工
場における排水処理の一助になる等の利点がある。
合成高分子系アニオン交換樹脂に吸着固定化することに
より、■高収率でホスホリラーゼを回収し利用できる、
■Ｇ−１−Ｐを安価に製造できる、■馬鈴薯澱粉製造工
場における排水処理の一助になる等の利点がある。
以下に実施例を挙げて説明する。
実施例１
再生した？リアクリル系合成高分子樹脂（粒径１２０μ
ｍ）に第三級アミノ基（ジエチルアミンメチル基）を導
入したアニオン交換樹脂（交換容量０１２ ｎｏ＠ｑ
／ ｙｘｌ樹脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００
ｗｅを加え、２５℃で５時間振盪（１００ストローク／
分）し、アニオン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せし
めた。次いでこのホスホリラーゼの吸着したアニオン交
換樹脂に０．５ ｎ＋ｏｌ ／ ｔのＮ ａ Ｃ１１０
０Ｎｌを加え、ホスホリラーゼを溶出した。
ｍ）に第三級アミノ基（ジエチルアミンメチル基）を導
入したアニオン交換樹脂（交換容量０１２ ｎｏ＠ｑ
／ ｙｘｌ樹脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００
ｗｅを加え、２５℃で５時間振盪（１００ストローク／
分）し、アニオン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せし
めた。次いでこのホスホリラーゼの吸着したアニオン交
換樹脂に０．５ ｎ＋ｏｌ ／ ｔのＮ ａ Ｃ１１０
０Ｎｌを加え、ホスホリラーゼを溶出した。
その結果、馬鈴薯澱粉工場排水７００ ｍｌに含まれる
４７４６Ｕのホスホリラーゼのうち、３０３７Ｕのホス
ホリラーゼが回収された。
４７４６Ｕのホスホリラーゼのうち、３０３７Ｕのホス
ホリラーゼが回収された。
なお、ここで示すホスホリラーゼ活性１Ｕとは、３０℃
で１分間に１μｒＩＩ０１の生成物を得るのに必要なホ
スホリラーゼ量と定義する。
で１分間に１μｒＩＩ０１の生成物を得るのに必要なホ
スホリラーゼ量と定義する。
また馬鈴薯澱粉工場排水は、北海道上用北部合理化澱粉
工場から出る排水を用いた。
工場から出る排水を用いた。
実施例２
再生したポリビニルビリシン系合成高分子樹脂（粒径８
００μｍ）に第四級アンモニウム基（トリメチルアンモ
ニオメチル基）全導入した強アニオン交換樹脂（交換容
ｔｏ、４８ｍｅｑ／１ＩＬｔ樹脂）６０ｔに馬鈴薯澱粉
工場排水７００ｄを加え、２５℃で５時間振盪（１００
ストローク／分）シ、アニオン交換樹脂にホスホリラー
ゼを吸着せしめた。次いでこのホスホリラーゼの吸着し
たアニオン交換樹脂に０、５ ｒｒ＋ｏｌ ／ ｌのＮ
ａＣｔｌ ００ ｄ ｋ加え、ホスホリラーゼを溶出し
た。その結果、馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄに含まれる
４７４６Ｈのホスホリラーゼのうち、１７ｏｏＵのホス
ホリラーゼが回収された。
００μｍ）に第四級アンモニウム基（トリメチルアンモ
ニオメチル基）全導入した強アニオン交換樹脂（交換容
ｔｏ、４８ｍｅｑ／１ＩＬｔ樹脂）６０ｔに馬鈴薯澱粉
工場排水７００ｄを加え、２５℃で５時間振盪（１００
ストローク／分）シ、アニオン交換樹脂にホスホリラー
ゼを吸着せしめた。次いでこのホスホリラーゼの吸着し
たアニオン交換樹脂に０、５ ｒｒ＋ｏｌ ／ ｌのＮ
ａＣｔｌ ００ ｄ ｋ加え、ホスホリラーゼを溶出し
た。その結果、馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄに含まれる
４７４６Ｈのホスホリラーゼのうち、１７ｏｏＵのホス
ホリラーゼが回収された。
実施例３
再生した。７５１７アクリル系合成高分子樹脂（粒径１
２０μｍ）に第三級アミノ基（ジエチルアミンメチル基
）を導入したアニオン交換樹脂（交換容ｉ Ｑ、１２ｒ
ｒ＋ｅｑ ／ ＭＥ／樹脂）５０ｔをカラムにつめ、馬
鈴薯澱粉工場排水４００ｄを８０ ｄ ／ ｂｒの速度
で流し、ホスホリラーゼをアニオン交換樹脂に吸着せし
めた。次いで、２ Ｑ ｒｎＭクエン酸緩衝溶液（ｐＨ
＆ｏ）４００１１１ｔ−同速度で流し洗浄後、Ｑ、５ｔ
ｎｏｌ／ｌのＮａＣ１１００ｍ／を同速度で流しホスホ
リラーゼを溶出した。その結果、馬鈴薯澱粉工場排水４
００−に含まれる３ ３９０Ｕのホスホリラーゼのうち
、２１３０Ｕのホスホリラーゼが回収された。
２０μｍ）に第三級アミノ基（ジエチルアミンメチル基
）を導入したアニオン交換樹脂（交換容ｉ Ｑ、１２ｒ
ｒ＋ｅｑ ／ ＭＥ／樹脂）５０ｔをカラムにつめ、馬
鈴薯澱粉工場排水４００ｄを８０ ｄ ／ ｂｒの速度
で流し、ホスホリラーゼをアニオン交換樹脂に吸着せし
めた。次いで、２ Ｑ ｒｎＭクエン酸緩衝溶液（ｐＨ
＆ｏ）４００１１１ｔ−同速度で流し洗浄後、Ｑ、５ｔ
ｎｏｌ／ｌのＮａＣ１１００ｍ／を同速度で流しホスホ
リラーゼを溶出した。その結果、馬鈴薯澱粉工場排水４
００−に含まれる３ ３９０Ｕのホスホリラーゼのうち
、２１３０Ｕのホスホリラーゼが回収された。
実施例４
再生した？リスチレン系（スチレ／ゾビニルベンゼン）
合成高分子樹脂（粒径３８０μＩｔ＋）ニ第四級アンモ
ニウム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した
強アニオン交換樹脂（交換容量０．６５ ｍ＠ｑ ／
ｄ樹脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄを加え、
２５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、アニ
オン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。その結
果、アニオン交換樹脂に吸着したホスホリラーゼは馬鈴
薯澱粉工場排水７００ＭＩに含まれる４７４６Ｕのホス
ホリラーゼのうち、２８０４Ｕであった。
合成高分子樹脂（粒径３８０μＩｔ＋）ニ第四級アンモ
ニウム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した
強アニオン交換樹脂（交換容量０．６５ ｍ＠ｑ ／
ｄ樹脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄを加え、
２５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、アニ
オン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。その結
果、アニオン交換樹脂に吸着したホスホリラーゼは馬鈴
薯澱粉工場排水７００ＭＩに含まれる４７４６Ｕのホス
ホリラーゼのうち、２８０４Ｕであった。
次に、このホスホリラーゼの吸着したアニオン交換相Ｍ
７． Ｉ ＰＫＤＥ ３．９７のデキスト１７ン１０．
Ｏｆ 、 ＫＨ２ＰＯ４１２，７ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ
４１８，４？を含有する８０ｒｘｌの水溶液と防腐剤と
してトルエン２ｄを加え、１００ＲＩＩＩＣ調整後４０
℃で４８時間振盪し反応した。その結果、ｊ １４０
ｍｍｏｌ／ｌのＧ−１−Ｐが合成された。
７． Ｉ ＰＫＤＥ ３．９７のデキスト１７ン１０．
Ｏｆ 、 ＫＨ２ＰＯ４１２，７ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ
４１８，４？を含有する８０ｒｘｌの水溶液と防腐剤と
してトルエン２ｄを加え、１００ＲＩＩＩＣ調整後４０
℃で４８時間振盪し反応した。その結果、ｊ １４０
ｍｍｏｌ／ｌのＧ−１−Ｐが合成された。
実施例５
再生した？リスチレン系（スチレンノビニルベンゼン）
合成高分子樹脂（粒径３８０μｍ）に第四級アンモニウ
ム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した強ア
ニオン交換樹脂（交換容量０．６５ ｍｅｑ ／ｍｌ樹
脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００ｗ１を加え、２
５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、アニオ
ン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。その結果
、アニオン交換樹脂に吸着したホスホリラーゼは馬鈴薯
澱粉工場排水７００ｄに含まれる４７４６Ｕのホスホリ
ラーゼのうち、２８０４Ｕであった。
合成高分子樹脂（粒径３８０μｍ）に第四級アンモニウ
ム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した強ア
ニオン交換樹脂（交換容量０．６５ ｍｅｑ ／ｍｌ樹
脂）５０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水７００ｗ１を加え、２
５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、アニオ
ン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。その結果
、アニオン交換樹脂に吸着したホスホリラーゼは馬鈴薯
澱粉工場排水７００ｄに含まれる４７４６Ｕのホスホリ
ラーゼのうち、２８０４Ｕであった。
次に、このホスホリラーゼの吸着したアニオン交換樹脂
３．６ｆＫＤＫ３．９７のデキストリ／ａＯｆ、ＫＨ２
ＰＯ４ａ ４ ｆＳＫ、ＨＰｏ、９．３ ｆｆ含有する
４０ｙｘｌの水溶液と防腐剤としてトルエン１１１Ｉを
加え、５０ｄに調整後４０℃で４８時間振盪し反応せし
めた。その結果、１１１．６ｍｒｒ＋ｏ１ ／ ｔのＧ
−１−Ｐが合成された。
３．６ｆＫＤＫ３．９７のデキストリ／ａＯｆ、ＫＨ２
ＰＯ４ａ ４ ｆＳＫ、ＨＰｏ、９．３ ｆｆ含有する
４０ｙｘｌの水溶液と防腐剤としてトルエン１１１Ｉを
加え、５０ｄに調整後４０℃で４８時間振盪し反応せし
めた。その結果、１１１．６ｍｒｒ＋ｏ１ ／ ｔのＧ
−１−Ｐが合成された。
次いで反応液を濾過して回収したアニオン交換樹脂にＤ
Ｅ３．９７のデキストリン！１ＬＯｆ１ＫＨ２ＰＯ４ａ
４ ｆ 、ｘ＝ａｐｏ４ａ ３ ｆを含有する４０ａ
ｔの水溶液と防腐剤としてトルエン１Ｍｉを加え、５０
ｄＫ調整後４０℃で４８時間振盪し反応せしめた。その
結果、１ ｊ ３．９ ｍｍｏｌ／ｌのＧ−１−Ｐが合
成された。
Ｅ３．９７のデキストリン！１ＬＯｆ１ＫＨ２ＰＯ４ａ
４ ｆ 、ｘ＝ａｐｏ４ａ ３ ｆを含有する４０ａ
ｔの水溶液と防腐剤としてトルエン１Ｍｉを加え、５０
ｄＫ調整後４０℃で４８時間振盪し反応せしめた。その
結果、１ ｊ ３．９ ｍｍｏｌ／ｌのＧ−１−Ｐが合
成された。
次いでさらに反応液を濾過して回収したアニオン交換樹
脂にＤＥ３．９７のデキストリンａｏｒ、ＫＨ，ＰＯ４
ａ ４ ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ４９，３ｆを含有する４０
ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｄを加え、５０
ｗｔｌ ＶＣ調整後４０°Ｃで４８時間振盪し反応せし
めた。その結果、１１２．８ｎ＋ｒｎｏｌ ／ ｌのＧ
−１−Ｐが合成された。
脂にＤＥ３．９７のデキストリンａｏｒ、ＫＨ，ＰＯ４
ａ ４ ｆ 、 Ｋ２ＨＰＯ４９，３ｆを含有する４０
ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｄを加え、５０
ｗｔｌ ＶＣ調整後４０°Ｃで４８時間振盪し反応せし
めた。その結果、１１２．８ｎ＋ｒｎｏｌ ／ ｌのＧ
−１−Ｐが合成された。
実施例６
再生した？リスチレン系（スチレンジビニルベンゼン）
合成高分子樹脂（粒径３８０μｍ）に第四級アンモニウ
ム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した強ア
ニオン交換樹脂（交換容量ｏ、 ６５ ｍ＠ｑ ／ ｄ
樹脂）１８０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水２５００ｄを加え
、２５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、ア
ニオン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。
合成高分子樹脂（粒径３８０μｍ）に第四級アンモニウ
ム基（トリメチルアンモニオメチル基）を導入した強ア
ニオン交換樹脂（交換容量ｏ、 ６５ ｍ＠ｑ ／ ｄ
樹脂）１８０ｆに馬鈴薯澱粉工場排水２５００ｄを加え
、２５℃で５時間振盪（１００ストローク／分）し、ア
ニオン交換樹脂にホスホリラーゼを吸着せしめた。
このホスホリラーゼの吸着したアニオン交換樹脂１６７
ｆ’をカラムにつめ、カラムのまわりに４０℃の水を
流通させカラムを保温する。ＤＥ３．９７のデキストリ
ン１０． Ｏｆ ／マ係、ＫＨ鵞ＰＯ４１２，７ｒ／マ
係およびに、ＨＰｏ、 １ ＆ ６２７７％の水溶液を
流速＆ ６ ｍｏｌ ｈｒ、空間速度α０２４／ｈｒで
カラムに供給し、カラム出口でのＧ−１−Ｐ合成量を測
定した。その結果、少なくとも３ケ月は安定にＧ−１−
Ｐが合成された。結果を第１表に示す。
ｆ’をカラムにつめ、カラムのまわりに４０℃の水を
流通させカラムを保温する。ＤＥ３．９７のデキストリ
ン１０． Ｏｆ ／マ係、ＫＨ鵞ＰＯ４１２，７ｒ／マ
係およびに、ＨＰｏ、 １ ＆ ６２７７％の水溶液を
流速＆ ６ ｍｏｌ ｈｒ、空間速度α０２４／ｈｒで
カラムに供給し、カラム出口でのＧ−１−Ｐ合成量を測
定した。その結果、少なくとも３ケ月は安定にＧ−１−
Ｐが合成された。結果を第１表に示す。
以下余白
ｔｌｃ１表
比較例１
再生したセルロース系樹脂（粒径２００μｍ）に第三級
アミン基（ジエチルアミンエチル基）を導入したアニオ
ン交換樹脂（交換容ｔｏ、６ｍｅｑ／ｄ樹脂）５０ｆに
馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄを加え、２５℃で５時間振
盪（１００ストローク／分）シ、アニオン交換樹脂にホ
スホリラーゼを吸着せしめた。次いでこのホスホリラー
ゼの吸着したアニオン交換樹脂にα５ ｍｏｌ ／ ｔ
のＮａＣ２１０，Ｏｄを加え、ホスホリラーゼを溶出し
た。その結果馬鈴薯澱粉排水７００ｄに含まれる４７４
６Ｕのホスホリラーゼのうち、１０９０Ｕのホスホリラ
ーゼが回収された。
アミン基（ジエチルアミンエチル基）を導入したアニオ
ン交換樹脂（交換容ｔｏ、６ｍｅｑ／ｄ樹脂）５０ｆに
馬鈴薯澱粉工場排水７００ｄを加え、２５℃で５時間振
盪（１００ストローク／分）シ、アニオン交換樹脂にホ
スホリラーゼを吸着せしめた。次いでこのホスホリラー
ゼの吸着したアニオン交換樹脂にα５ ｍｏｌ ／ ｔ
のＮａＣ２１０，Ｏｄを加え、ホスホリラーゼを溶出し
た。その結果馬鈴薯澱粉排水７００ｄに含まれる４７４
６Ｕのホスホリラーゼのうち、１０９０Ｕのホスホリラ
ーゼが回収された。
比較例２
再生したセルロース系合成高分子樹脂（粒径２００μｍ
）に第四級アンモニウム基（トリエチルアミノエチル基
）を導入した強アニオン交換樹脂（交換容量α７５ ｍ
ｅ＋ｑ ／ ｍｌ樹脂）５０ｔに馬鈴薯澱粉工場排水７
００ＩＩＥ／を加え、２５℃で５時間振盪（１００スト
ローク／分）し、アニオン交換樹脂にホスホリラーゼを
吸着せしめた。その結果、アニオン交換樹脂に吸着した
ホスホリラーゼは馬鈴薯澱粉工場排水７００ ｗｌに含
まれる４７４６Ｕのホスホリラーゼのうち、１４１７Ｕ
であった。
）に第四級アンモニウム基（トリエチルアミノエチル基
）を導入した強アニオン交換樹脂（交換容量α７５ ｍ
ｅ＋ｑ ／ ｍｌ樹脂）５０ｔに馬鈴薯澱粉工場排水７
００ＩＩＥ／を加え、２５℃で５時間振盪（１００スト
ローク／分）し、アニオン交換樹脂にホスホリラーゼを
吸着せしめた。その結果、アニオン交換樹脂に吸着した
ホスホリラーゼは馬鈴薯澱粉工場排水７００ ｗｌに含
まれる４７４６Ｕのホスホリラーゼのうち、１４１７Ｕ
であった。
次に、このホスホリラーゼの吸着したアニオン交換樹脂
４．６ｆＵＩＣＤＥ１９７のデキストリン５．ＯｆＸＫ
Ｈ２ＰＯ４６，４ｆ、 Ｋ、ＨＰＯ４９，３ｆを含有す
る４０ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｍｊ’（ｉ
−加え、５０ｒｘｌに調整後４０℃で４８時間振盪し反
応させた。その結果、１１２、１ ｍｍｏｌ ／ Ｌの
Ｇ−１−Ｐが合成された。
４．６ｆＵＩＣＤＥ１９７のデキストリン５．ＯｆＸＫ
Ｈ２ＰＯ４６，４ｆ、 Ｋ、ＨＰＯ４９，３ｆを含有す
る４０ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｍｊ’（ｉ
−加え、５０ｒｘｌに調整後４０℃で４８時間振盪し反
応させた。その結果、１１２、１ ｍｍｏｌ ／ Ｌの
Ｇ−１−Ｐが合成された。
次いで反応液を濾過して回収したアニオン交換樹脂にＤ
Ｅ３．９７のデキストリン＆ｏｆ。
Ｅ３．９７のデキストリン＆ｏｆ。
ＫＨ，ＰＯ４ａ ４ ｆ、Ｋ２ＨＰＯ４９，３ｆを含有
する４０ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｊ！／を
加え、５０ｒｔｔｌＶＣ調整後４０℃で４８時間振盪し
反応せしめた。その結果、８１２ ｍｍｏｌ ／ Ｌの
Ｇ−１−Ｐが合成された。
する４０ｄの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｊ！／を
加え、５０ｒｔｔｌＶＣ調整後４０℃で４８時間振盪し
反応せしめた。その結果、８１２ ｍｍｏｌ ／ Ｌの
Ｇ−１−Ｐが合成された。
次いでさらに反応液を濾過して回収したアニオン交換樹
脂ＫＤＥ１９７のデキストリン５０２、Ｋ）Ｉ、ＰＯ４
ａ ４ ｔ ＸＫ、ＨＰＯ，ｌ ３ Ｆを含有する４０
１Ｌｌの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｄを加え、５
０ｍ１に調整後４０℃で４８時間振盪し反応せしめた。
脂ＫＤＥ１９７のデキストリン５０２、Ｋ）Ｉ、ＰＯ４
ａ ４ ｔ ＸＫ、ＨＰＯ，ｌ ３ Ｆを含有する４０
１Ｌｌの水溶液と防腐剤としてトルエン１ｄを加え、５
０ｍ１に調整後４０℃で４８時間振盪し反応せしめた。
その結果、７３．２ｍｍｏｌ ／ ｌのＧ−１−Ｐが合
成された。
成された。
以上
Claims (1)
- １、馬鈴薯澱粉工場排水を合成高分子系アニオン交換樹
脂に接触させてホスホリラーゼを固定化し、必要に応じ
溶出することを特徴とするホスホリラーゼの回収方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12997188A JP2598677B2 (ja) | 1988-05-27 | 1988-05-27 | ホスホリラーゼの回収方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12997188A JP2598677B2 (ja) | 1988-05-27 | 1988-05-27 | ホスホリラーゼの回収方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01300895A true JPH01300895A (ja) | 1989-12-05 |
| JP2598677B2 JP2598677B2 (ja) | 1997-04-09 |
Family
ID=15022963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12997188A Expired - Fee Related JP2598677B2 (ja) | 1988-05-27 | 1988-05-27 | ホスホリラーゼの回収方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2598677B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0608040A3 (en) * | 1993-01-22 | 1994-12-21 | Avebe Coop Verkoop Prod | Starch fractionation process. |
-
1988
- 1988-05-27 JP JP12997188A patent/JP2598677B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0608040A3 (en) * | 1993-01-22 | 1994-12-21 | Avebe Coop Verkoop Prod | Starch fractionation process. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2598677B2 (ja) | 1997-04-09 |
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