JPH01285195A - ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法 - Google Patents

ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法

Info

Publication number
JPH01285195A
JPH01285195A JP11477788A JP11477788A JPH01285195A JP H01285195 A JPH01285195 A JP H01285195A JP 11477788 A JP11477788 A JP 11477788A JP 11477788 A JP11477788 A JP 11477788A JP H01285195 A JPH01285195 A JP H01285195A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
inulin
immobilized
chitosan
dfai
difructose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP11477788A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH066064B2 (ja
Inventor
Shoichi Kobayashi
昭一 小林
Kouji Seki
積 浩二
Mamoru Kishimoto
岸本 守
Mitsuru Kadoma
充 門間
Toshiya Takano
高野 敏弥
Kazushi Nagata
一志 永田
Keikichi Honbo
本坊 慶吉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NIPPON DENPUN KOGYO KK
National Food Research Institute
Original Assignee
NIPPON DENPUN KOGYO KK
National Food Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NIPPON DENPUN KOGYO KK, National Food Research Institute filed Critical NIPPON DENPUN KOGYO KK
Priority to JP63114777A priority Critical patent/JPH066064B2/ja
Publication of JPH01285195A publication Critical patent/JPH01285195A/ja
Publication of JPH066064B2 publication Critical patent/JPH066064B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、イヌリン及び/またはイヌリン含有植物抽出
液より固定化酵素を利用してジフルクトース・ジアンヒ
ドリドを連続的に効率よく、かっ高収率で製造する方法
に間するものである。尚、ここでいうジフルクトース・
ジアンヒドリドとはジフルクトース・ジアンヒドリド!
(以下、DFAtという)及びジフルクトース・ジアン
ヒドリド■(以下、DFAmという)を含む。
DFAIはフラクトース2分子が1.2’及び2.1′
の2tIi所で結合している非還元性の2糖類、DFA
mは1. 2’;  2. 3’″r!結合しテいる2
糖類である。これらは水に5容で、蔗糖の約半分の甘味
を有しているが、これは低甘味を要求する最近の市場動
向を満足するものである。また分子構造に起因した性質
として、非還元性で人体へは消化、吸収されにくく低カ
ロリーであること、かつ熱に対して安定で分解されにく
い糖である。
それとともに本発明者らは、DFAI及びDFAmにう
蝕予防効果、腸内ビフィズス菌増殖効果があることを見
い出した。
〔従来の技術〕
先に、本発明者らは、 イヌリン及び/またはイヌリン
含有植物抽出液にアースロバフタ−・グロビフtルミス
に属する細菌及び/またはその生産する酵素、イヌリン
フラクトトランスフェラーゼを利用してDFAI及び/
またはDFA■を製造する方法を確立した。 (特願昭
61−11908τ。
→ 同6l−119088)         ’〔発
明が解決しようとする課題〕 しかし、イヌリン及び/またはイヌリン含有植物油出i
αに菌体、もしくはその産生ずる酵素を作用させる回分
式の製造方法では、酵素の安定性などの制約により反応
時のp H,温度等の範囲が限定され、また反応終了後
酵素を回収し再利用することが困難であることなど工業
的にみて非常に不経済である。また反応終了後の精製工
程に時間的損失を生じるという間屈がある。
〔課題を解決する為の手段〕
そこで本発明者らは、イヌリンフラクトトランスフェラ
ーゼ、DFAI合成タイプ(以下、DFA1合成酵素と
いう)及び/またはイヌリンフラクトトランスフェラー
ゼ、DFAm合成タイプ(以下、DFAm合成酵素とい
う)おのおのをキトサンビーズ、またはアルキル化CP
Gを用いて固定化した後、カラムに充填し一定流量でイ
ヌリン溶液及び/またはイヌリン含有植物抽出液を通液
することで連続的にかつ高収率でDFA I及び/また
はDFAI[Iを生産することを見い出した。
本発明を以下に示す。
1)固定化素材としてキトサン、シリカ系担体を用い固
定化したイヌリンフラクトトランスフェラーゼをイヌリ
ン及び/またはイヌリン含有植物抽出液に作用させるこ
とを特徴とするジフルクトース・ジアンヒドリドの製造
方法。
2)架橋剤としてグルタルアルデヒド、ゲニビンを用い
て固定化したイヌリンフラクトトランスフェラーゼを用
いるジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法。
キトサンは、グルコサミンがβ−1,4結合しているセ
ルロース類似の分子構造を持った多糖類で、その分子内
にアミノ基を有している為、グルタルアルデヒド等の架
橋剤を用いて容易に酵素などの蛋白買を固定化すること
が可能である。最近、キトサンをビーズ状に成形した製
品や、キトサンに種々の架橋処理を行い物理的強度や耐
酸性を高めたビーズ状の製品が市販されている。
アルキル化CPGは、CPG(コントロールトポアグラ
ス エレクトロヌクレオニクス社1りをγ−アミノプロ
ピルトリエソキシシランでシラン化したものである。
これら担体をグルタルアルデヒド及び/またはゲニビン
(クチナシ由来の天然架橋剤 サントリー社製)を用い
て酵素との架橋を行った。
以下に固定化方法を述べる。
尚、固定化方法は以下にのべることに限ったものではな
く、担体としてはアミノ基を持つものであれば、本発明
の方法に利用できる。
固定化担体としてキトサンビーズ(キトバールBCW3
507、富士紡績社製、スペーサーとして芳香族ジイソ
シアナート架橋処理がなされている粒経7−の製品)を
用いた場合は以下のように固定化する。DFAI合成酵
素を産生ずる菌株、アースロバフタ−・グロビフォルミ
ス、514−3及び/またはDFAm合成酵素を産生ず
る菌株、アースロバフタ−・グロビフォルミス、CI 
1−1を30℃で14〜16時閏培養し、遠心分離等の
除菌処理して得られた培養上澄を硫安塩析により濃縮し
て固定化用粗酵素液とした。キトビーズに2.5% (
W/V)グルタルアルデヒドを加え、室温で1時閉架橋
反応を行った後、未反応のグルタルアルデヒドを洗浄除
去し、粗酵素液を加え、室温で2時閏、酵素と担体との
結合反応を行った。
その後、未反応の酵素を洗い流し固定化DFAI合成酵
素及び/または固定化DFAI[I合成酵素が得られた
。固定化酵素量は架橋反応条件により異なるが、通常2
10国際単位であるベツドボリュウムは3.5mg担体
である。得られたキトサンビーズ固定化DFAI合成酵
素及び/またはキトサンビーズ固定化DFAII[合成
酵素をカラムに充填し、極低速から1時間当り固定化酵
素量の20倍量迄の範囲でイヌリン及び/またはイヌリ
ン含有植物抽出液を通液すると、イヌリンはほぼ完全に
分解され、反応液としてオリゴ糖や単糖類を含んだDF
AIおよび/またはDFAm溶液が連続的に得られた0
通液は昇流、あるいは降流のいずれでもよい。
また、 10%(W/V)のイヌリン溶液を1ケ月間固
定化DFAI合成酵素及び/または固定化DFAm合成
酵素を充填したカラムに昇流式で1時間当り固定化酵素
量の5倍の流速で通液した結果、いずれの固定化酵素も
活性の低下は殆んど見られず、充分実用に耐え得ること
が判明した。
CPG(7)場合も、10%(W/V)r−7ミ)プロ
ピルトリエソキシシランでシラン化しアミノ基を導入し
た後、上述と同様の操作を行い固定化酵素が得られ、カ
ラムに充填しイヌリン溶液を通液することができる。
ゲニビンを架橋剤として用いる場合は、ゲニビンを1%
(W / V )となし、担体とDFAI及び/または
DFAIII合成酵素との架橋反応は40℃で一夜行っ
た。
この他の共有結合法、イオン結合法、物理的吸着法、架
橋法、包括法など各種の固定化法による固定化DFA合
成酵素でも本発明の方法を適用でき る。
イヌリン原料としては、キクイモ、ダリア、チコリ−、
ゴボウなどのイヌリン含有植物の抽出液が考えられるが
、濾過、脱色等の部分精製したものを直接、固定化DF
A I合成酵素及び/または固定化DFAfl1合成酵
素を充填したカラムに通液することができる。この他に
も微生物起源のフラクトースポリマー、例えばバチルス
・ヴルガタスのレバンなとも原料として考えられる。
植物からのイヌリン抽出液には、色素とペクチン機物質
も含まれるが陰イオン交換樹脂カラムにより容易に除去
でき、無色透明とすることができる。また、ペクチン様
物貢はカラムにアルカリ溶iαを通すことにより回収で
きる。
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが
、これらに限定されるものではない。
(実施例〕 実施例1゜ 市販イヌリンを熱水中に溶解し10%(W/V)トナシ
、pH5,5に調梵後、本発明のキトサンビーズ(商品
名、キトバールBCW3507、富士紡績社1りにゲニ
ビンを架橋剤として固定化したDFAI合成酵素充填カ
ラムに昇流式でSV4 (1時間当リカラム体積の4倍
の流量)で、かつ50℃の温度をかけて反応を行フた。
反応液をカラムに充填したイオン交換樹脂で連続的に脱
塩後、処理液中の糖組成を高速液体りaマドグラフィー
で分析したところ、0FAI :87.9χ、フラクト
オリゴ糖:  Il、IL  その他:  1.OKで
あった。
実施例2 市販イヌリンを原料として用い、pH5でキトサンビー
ズにグルタルアルデヒドを架橋剤として固定化したDF
Am合成酵素充填カラムに昇流式でSV6の流速で、か
つ60℃の温度をかけて連続的に反応を行った。
反応液を実施例1と同優にして分析したところD F 
A m:  88.2K、フラクトオリゴ糖:  10
.8K、その他:  1.Ofであった。
実施例3 市販イヌリンを原料として用い、pH5,5でアルキル
化CPGにグルタルアルデヒドを架橋剤として固定化し
たDFAI合成酵素充填カラムにSv4の流速で、かつ
60℃の温度をかけて連続的に反応を行った。
反応液を実施例1と同様にして分析したところDFAI
:86.π、フラクトオリゴ糖:  12.0χ、その
ti:  t、sxであった。
実施例4 キクイモ500gに水250m1を加え、ホームミキサ
ーで磨砕した後、ガーゼで濾過し、濾液を得た。これを
遠心分離し、その上清に20gのセライトを加え濾過し
た後、得られた濾液に15gの活性炭を加え70℃で脱
色、濾過を行い濾液を得た。このm液310m1はpH
5,91[1度7.9%であった。
この部分精製を行った原液を本発明のキトサンビーズ固
定化DFAm合成酵素を充填したカラムに昇流式で、 
1時間当りビーズ量の5倍の流速で、かつ60℃の温度
をかけて通潰し、連続的に反応を行った。このようにし
て得られた反応液をイオン交換樹脂、 lR120B、
  IRA93、MB3をそれぞれ充填したカラムに順
時通液し、脱塩、脱色操作を行った。これを濃縮して水
分25%のDFAm含有シロップ28.1gを得た。
液体クロマトグラフィーにより糖組成を求めたところD
FAI[[:46.2X、7ラクトtリコ糖:  46
.I!、シュークロース:6、π、グルコ−ス:  0
.8K、フラクトース:  0.7!であった。
実施例5 キクイモ500gを実施例3と同様の部分精製を行い原
料液を得た。
これを本発明のキトサンビーズ固定化DFAI合成酵素
充填カラムに昇流式で、SV4の流速で、かつ55℃の
温度をかけて通液し、連続的に反応を行った。このよう
にして得られた反応液を実施例3と同様にして、脱塩、
脱色操作を行った。これを濃縮して水分25%のDFA
I含有シロップ25.3gを得た。
液体クロマトグラフィーで求めた糖組成は、DF A 
I:  46.I!、フラクトオリゴ糖:  46.O
!、シュークロース:  6.3Lフラクトース二〇、
α、グルコース:  0.8!であった 〔発明の効果〕 DFA合成酵素を固定化することで酵素の繰り返し利用
ができ、経済性が著しく高まるとともに、pH1熱に対
する安定性が増すことにより広範囲の条件で反応が行え
るようになった。また反応至適温度が5℃程上昇し、よ
り高温で反応がおこなえるようになったことは微生物汚
染防止効果もあり、サニタリーの面でも向上したといえ
る。
固定化防禦カラムにより得られた反応液は通常の脱塩、
脱色工程、例えば陽イオン交換樹脂及び陰イオン交換樹
脂等のカラムに通液することで連続的に精製することが
できる。
したがって、固定化DFA合成酵素を用いた反応工程と
、その後の精製工程とを連続的に、時間的損失なくして
運転することができる。
本発明の方法によれば、イヌリン含有植物抽出液からD
FAI及び/またはDFADIにオリゴ糖や、単糖類を
含んだ製品が得られるが、さらにDFAI及び/または
DFAmの純度を高めるには、固定化酵素反応工程と、
市販のゲル濾過剤やイオン交換樹脂、活性炭等のカラム
クロマトグラフィー、または種々の膜を用いた膜分離濃
縮などと組み合わせることも考えられる。カラムクロマ
トグラフィー、または膜分離等で得られたフラクトオリ
ゴ糖等は、副産物として既存の利用を行うこともできる

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1)固定化素材としてキトサン、シリカ系担体を用い固
    定化したイヌリンフラクトトランスフエラーゼをイヌリ
    ン及び/またはイヌリン含有植物抽出液に作用させるこ
    とを特徴とするジフルクトース・ジアンヒドリドの製造
    方法。 2)固定化架橋剤としてグルタルアルデヒド、ゲニビン
    を用いる請求項1記載の製造方法。
JP63114777A 1988-05-13 1988-05-13 ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法 Expired - Fee Related JPH066064B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP63114777A JPH066064B2 (ja) 1988-05-13 1988-05-13 ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP63114777A JPH066064B2 (ja) 1988-05-13 1988-05-13 ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH01285195A true JPH01285195A (ja) 1989-11-16
JPH066064B2 JPH066064B2 (ja) 1994-01-26

Family

ID=14646425

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63114777A Expired - Fee Related JPH066064B2 (ja) 1988-05-13 1988-05-13 ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPH066064B2 (ja)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003090759A1 (fr) * 2002-04-26 2003-11-06 Fancl Corporation Composition contenant du difructose anhydride et utilisation de celle-ci
WO2004078989A1 (ja) * 2003-03-05 2004-09-16 Nippon Beet Sugar Mfg. Co., Ltd. ジフルクトース・ジアンヒドリドiiiの精製方法
WO2006070483A1 (ja) 2004-12-28 2006-07-06 Nippon Beet Sugar Manufacturing Co., Ltd. ジフラクトース ジアンヒドリドiii結晶の製造方法
WO2003020054A3 (de) * 2001-08-31 2007-11-29 Nordzucker Ag Getränk mit lagerstabilem ballaststoffzusatz
US8048866B2 (en) 2004-08-13 2011-11-01 Nippon Beet Sugar Mfg., Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic agent for calcipenia
JP5748661B2 (ja) * 2009-06-15 2015-07-15 フジ日本精糖株式会社 ジフルクトース・ジアンヒドリドiii合成酵素

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62275694A (ja) * 1986-05-26 1987-11-30 Natl Food Res Inst ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲iii▼の製造法
JPS62275693A (ja) * 1986-05-26 1987-11-30 Natl Food Res Inst ジフルクト−スジアンヒドリド1の製造法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62275694A (ja) * 1986-05-26 1987-11-30 Natl Food Res Inst ジフルクト−ス、ジアンヒドリド▲iii▼の製造法
JPS62275693A (ja) * 1986-05-26 1987-11-30 Natl Food Res Inst ジフルクト−スジアンヒドリド1の製造法

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003020054A3 (de) * 2001-08-31 2007-11-29 Nordzucker Ag Getränk mit lagerstabilem ballaststoffzusatz
EP2450044A1 (en) * 2002-04-26 2012-05-09 Fancl Corporation Difructose anhydride-containing composition for use in inhibiting dental caries
US7754701B2 (en) 2002-04-26 2010-07-13 Fancl Corporation Difructose anhydride-containing composition and use thereof
US7964581B2 (en) 2002-04-26 2011-06-21 Fancl Corporation Use of difructose anhydride-containing composition
WO2003090759A1 (fr) * 2002-04-26 2003-11-06 Fancl Corporation Composition contenant du difructose anhydride et utilisation de celle-ci
US8492363B2 (en) 2002-04-26 2013-07-23 Fancl Corporation Use of difructose anhydride-containing composition
WO2004078989A1 (ja) * 2003-03-05 2004-09-16 Nippon Beet Sugar Mfg. Co., Ltd. ジフルクトース・ジアンヒドリドiiiの精製方法
US7998710B2 (en) 2003-03-05 2011-08-16 Nippon Beet Sugar Mfg., Co., Ltd. Process for purifying difructose dianhydride III
EP2450452A1 (en) 2003-03-05 2012-05-09 Nippon Beet Sugar Mfg., Co., Ltd. Process for purifying difructose-dianhydride III
US8048866B2 (en) 2004-08-13 2011-11-01 Nippon Beet Sugar Mfg., Co., Ltd. Preventive and/or therapeutic agent for calcipenia
WO2006070483A1 (ja) 2004-12-28 2006-07-06 Nippon Beet Sugar Manufacturing Co., Ltd. ジフラクトース ジアンヒドリドiii結晶の製造方法
US8039615B2 (en) 2004-12-28 2011-10-18 Nippon Beet Sugar Manufacturing Co., Ltd. Process for producing difructose dianhydride III crystals
US8304534B2 (en) 2004-12-28 2012-11-06 Nippon Beet Sugar Manufacturing Co., Ltd. Process for producing difructose dianhydride III crystals
JP5748661B2 (ja) * 2009-06-15 2015-07-15 フジ日本精糖株式会社 ジフルクトース・ジアンヒドリドiii合成酵素

Also Published As

Publication number Publication date
JPH066064B2 (ja) 1994-01-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11312741B2 (en) Separation of oligosaccharides from fermentation broth
JPS609524B2 (ja) シクロデキストリンの回収法
US5007967A (en) Separation and purification of branched beta cyclodextrins
EP0672164A1 (en) Haze-free cyclodextrins
JPH01285195A (ja) ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法
JPH0154040B2 (ja)
EP0049801B1 (de) Saccharose-Mutase, immobilisierte Saccharose-Mutase und Verwendung von dieser immobilisierten Saccharose-Mutase zur Herstellung von Isomaltulose (6-0-alpha-D-Glucopyranosido-D-fructose)
JPS60166693A (ja) 高純度オリゴグルコシルフラクトシドの製造方法
JPS59148794A (ja) 高純度グルコオリゴ糖の製造方法
JPH06102033B2 (ja) イヌロオリゴ糖の製造法
GB2438573A (en) Purification method and production method for cellobiose
US5364794A (en) Process for producing saccharides
US5194094A (en) Fractionating starch hydrolysates
JPH02252701A (ja) 新規環状イヌロオリゴ糖およびその製造法
JPH0248561B2 (ja)
FI81116C (fi) Metod foer tillverkning av cyklodextriner innehaollande maltodextriner, staerkelse- och maltossiraper.
JP4819240B2 (ja) 精製されたn−アセチルラクトサミンの製造方法
JPH07274990A (ja) 環状イヌロオリゴ糖の精製方法
JP2639221B2 (ja) 糖類の製造法
JPH0265789A (ja) 寒天オリゴ糖の製造方法
JP2700423B2 (ja) グルコシル―サイクロデキストリン類の製造方法
JPH06184201A (ja) マルトペンタオース高含有糖質の製造方法
JP3594650B2 (ja) デキストランの製造方法
JPH0466092A (ja) ラミナリオリゴ糖の製造方法
JPH06343484A (ja) ラミナリオリゴ糖の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees