JPH01277757A - 過酸化水素の測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ、産業上の利用分野 本発明は、試料中の過酸化水素の測定試薬に関する。

Ｂ１発明の概要 本発明は、発光試薬に予め白金又はパラジウム等の無機
触媒を添加しておくことにより、発光試薬水溶液中食ま
れる過酸化水素を分解除去して、過酸化水素の測定に適
した試薬を生成し、測定対象である試料中の過酸化水素
の濃度が比較的低い場合でも定量することができるよう
にする。

Ｃ９従来の技術 過酸化水素の定量は、特に臨床検査の分野においては、
重要な役割を果たしている。生体中のグルコース、コレ
ステロール、アミノ酸、ポリアミン等の成分の分析には
、これらの成分を酸化酵素等と酵素反応させ、その際に
生成した過酸化水素を定量することにより、上記生体中
の成分を分析する方法が採用されている。

近年、臨床検査における免疫分析法の１つとして注目さ
れている酵素免疫分析法（Ｅｎｚｙｏ＋ｅｉｏ＋ｍｕｎ
ｏａｓｓａｙ　　Ｍｅｔｈｏｄ、　Ｅ　Ｉ　Ａ法）にお
いては、ホルモンや蛋白質等の抗原又は抗体にグルコー
スオキシデーゼ等の酸化酵素を標識し、それを基質（酵
素がグルコースオキシデーゼの場合はグルコース）と酵
素反応させ、発生する過酸化水素濃度を４−アミノアン
チピリン等の色素を用いて吸光度により定量することに
より、抗原又は抗体の分析が行われる。

また、色素の変わりに過酸化水素と反応して酸化触媒存
在下で発光するルミノールやルシゲニン等の化学発光物
質を用いるＥｌＡ法の改良法場合、高感度に過酸化水素
を測定できるので、生体中の成分の分析には特に有効な
方法である。

このような方法により生体中の成分の分析を行う場合に
は、試料中の過酸化水素を正確に定−１することが極め
て重要である。

上記の分析方法では、一般に、測定対象物質を加えない
で、発光試薬、触媒及び過酸化水素を混合して発光試薬
を発光させ、過酸化水素と発光量の関係を示す検量線を
予め作成し、それに基づいて、測定対象物質の酵素反応
によって発生した過酸化水素の定量が行われる。

Ｄ８発明が解決しようとする課題 しかしながら、上記のように発光物質を触媒存在下で発
光させて過酸化水素を走用する場合、発光物質及び触媒
の水溶液中に微量の過酸化水素が存在しているため、過
酸化水素濃度り月０−８ｍｏＱ／Ｑ以下の領域では、発
光物質に含まれる過酸化水素が発光に関与する割合が大
きく、実際に酵素反応によって生成さ杵た過酸化水素の
定量を正確に行うことが困難である。

従って、本発明は、測定対象である過酸化水素が低濃度
であっても精度よく測定できる過酸化水素の測定試薬及
び測定方法を提供することを目的とする。

Ｅ１課題を解決するための手段及び作用上記目的を達成
するため、本発明による過酸化水素の測定試薬は、無機
触媒が添加された発光試薬溶液から成る。

このように、予め発光試薬溶液に無機触媒を添加するこ
とにより、発光試薬溶液中に存在する過酸化水素を分解
除去しておき、この試薬を用いて測定対象である過酸化
水素の定量を行うことにより、低り度の過酸化水素の場
合であっても、精度よく測定できるようにする。

本発明によれば、無機触媒として、白金、パラジウム等
を使用することができる。また、発光試薬として、例え
ば、ルミノール、イソルミノール、アリルンユウ酸エス
テル、アクリジニウム塩などのような、触媒存在下で過
酸化水素と反応して発光する物質から選択することがで
きる。この場合、発光試薬を発光させるための触媒とし
て、フェリシアン化カリウム、マイクロペルオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼなどのＦ２゛を含むヘム構造を有
するもの、あるいはＣｕ″″イオン、Ｃｏ”イオン等を
含むものを用いることができる。

本発明の過酸化水素の測定試薬は、生体中のグルコース
、コレステロール、アミノ酸、ポリアミン等の成分のよ
うに、酸化酵素等と反応して過酸化水素を生成する成分
の分析に使用することができる。また、ホルモンや蛋白
質等の抗原又は抗体にグルコースオキシダーゼ等の酸化
酵素を標識し、それを基質と酵素反応させることにより
生成した過酸化水素を定量する場合にも用いることがで
きる。

Ｆ、実施例 以下、本発明の実施例について説明する。

［実施例１］ ナイロン網に充填した１００ｍｇの白金（白金黒、半井
化学薬品（株）製、−級）を、それぞれ２Ｘ１０−’ｍ
ｏＱ／ρのルミノール水溶液（発光試薬）１００ｒ＋ｌ
と５ｘ　ｌ　Ｏ−Ｑｍｏｉ２　／Ｑのマイクロペルオキ
シダーゼ水溶液（触媒）１００ｍＱに添加し、室温で放
置した。その後、ｌｏ−４〜１０−”ｍ　ｏ　Ｑ　／Ｑ
の過酸化水素（測定試料）の水溶液０．１ｍ１２に、上
記ルミノール水溶液及びマイクロペルオキシダーゼ水溶
液を、各０　、５　ｍＱ。

ずつ添加し、反応により生ずる光の発光量を、ルミノメ
ータＵＰＤ−８０００（（株）明電舎製）により測定し
た。

比較例として、１０−’〜１０−’ｍ　ｏ（１／Ｑの過
酸化水素水溶液０．１ｍ＆に、白金による処理を行わな
い２Ｘ　Ｉ　（Ｉ’ｍｏｆ２　／Ｑのルミノール水溶液
０．５ｍ１２と５　Ｘ　Ｉ　Ｏ−’ｍｏ１２　／Ｑのマ
イクロペルオキシダーゼ水溶液０．５ｒｒｌを加え、同
様の方法により、発光量を測定した（比較例１）。

これらの結果を第１図に示す。第１図に示すように、比
較例１の場合、過酸化水素濃度がｌｏ−７ｒｎ　ｏρ／
Ｑ以下の低濃度領域においては、添加したルミノール水
溶液に含まれる過酸化水素が発光に関与する割合が大き
いため、実際に加えた過酸化水素による発光よりも発光
量が増大し、バックグラウンドの影響が大きく現れて、
測定が困難であることがわかる。一方、本実施例の場合
は、過酸化水素濃度が１０−８ｍｏＱ／Ｑ程度までバッ
クグラウンドが小さいものとなっており、このような低
濃度の領域まで測定可能であることがわかる。

［実施例２コ 白金のかわりにパラジウムを用いて、実施例１と同様に
、マイクロペルオキシダーゼ存在下で、ルミノールと過
酸化水素の反応により生じた光の発光量を測定した。

この結果を第１図に示す。本実施例においても、上記実
施例Ｉと同様の効果が得られた。

また、実施例Ｉ及び２による測定方法は、第２図に示す
装置によって行うことが出来る。第２図において、試薬
タンクｌはルミノール等の発光試薬を導入するタンクで
あり、試薬タンク２はマイクロペルオキシダーゼ等の触
媒を導入するタンクである。試薬タンクｌ及び２には、
ナイロン網に充填した白金又はパラジウム３が入ってい
る。発光試薬及び触媒は、それぞれポンプ４を介して、
暗箱５内に設けられたセル６内で混合され、反応による
試料７からの発光は、光電子増倍管８により検知される
。

Ｇ　発明の効果 本発明は、以上のように構成したので、以下のような効
果を奏する。

発光試薬溶液に白金、パラジウム等の無機触媒を添加す
ることにより、発光試薬中の過酸化水素を予め分解除去
しているので、測定対象である過酸化水素の定量を正確
に行うことができ、特に過酸化水素の低濃度領域におけ
る測定精度を向上させることができる。

また、発光試薬中の過酸化水素を分解除去するために、
白金、パラジウム等を用いているので、測定試薬が測定
試料に添加されるときに、白金、パラジウム等が測定試
料に混入しないで測定試薬のみが測定試料に添加される
ようにすることができ、その結果、測定対象である過酸
化水素まで分解除去することがなく、その取り扱いも容
易である。

【図面の簡単な説明】

第１図は第１及び第２の実施例、及びその比較例におけ
る過酸化水素濃度と発光量との関係を示す検量線図、第
２図は第１及び第２の実施例による測定試薬を生成する
ための装置である。 ■、２・・・試料タンク ３・・・ポンプ ４・・・ナイロン網に充填した固定化カタラーゼ５・・
・暗箱、　　６・・・セル フ・・・試料 ８・・・光電子増倍管

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）無機触媒が添加された発光試薬から成り、測定試
   料に添加されて測定試料中の過酸化水素の測定に使用さ
   れる過酸化水素の測定試薬。