JPS63291595A - 生体試料中のグルコ−スの測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ産業上の利用分野 本発明は、生体試料中例えば生体の体液中のグルコース
の測定方法に関するものである。

Ｂ発明の概要 尿を試料対象として、その中に含まれるグルコースを選
択的に酸化し、その際に生成する過酸化水素を定量する
ことにより、グルコース量を求める方法を用いてグルコ
ースの定量を行う場合、グルコースを酸化する前から既
に尿中に存在している過酸化水素によって測定の妨害を
受けるため、グルコースの低濃度領域においては正確な
測定を行うことができなかった。

本発明は、グルコースの酸化前幻尿中に既に存在してい
る過酸化水素を、無機触媒を作用させることにより分解
除去し、グルコースの低濃度領域において正確な測定を
行うことを可能にしたものである。

Ｃ従来の技術 一般に、血液や尿等の体液中には微量のグルコースが含
まれている。生体が健康である場合には、かかるグルコ
ースは極微量しか存在しない。

しかし、例えば糖尿病にかかっている場合、該グルコー
スの量は著しく増加する。

従って、例えば尿中のグルコースの定量は、糖尿病の診
断や経過観察等において極めて有効な手段である。

従来、例えば尿中のグルコースの定量法としては、グル
コースの還元力を利用した方法等が用いられていたが、
操作が煩雑であったり、あるいは特異性が低いために精
度が低いという問題があり、操作が簡便でかつ測定精度
が高いという条件を同時に充たす方法はなかった。

しかし最近では、反応により過酸化水素を発生させ、発
生した過酸化水素の量からグルコースの量を求める方法
が行われる。

かかる方法は、グルコースオキシダーゼを触媒として試
料中のグルコースのみについて選択的に酸化を行い、そ
の反応時に生成する過酸化水素を化学発光法で定量し、
その過酸化水素量より、グルコースと過酸化水素との検
量線からグルコース量を求めるものである。

かかる方法は、グルコースの酸化反応の際に、反応する
グルコースと等モルの過酸化水素が生成する。また、グ
ルコースオキシダーゼを使用するので、特異性が高い。

さらに、化学発光法を用いて過酸化水素の定量を行うの
で測定感度が高く、しかも操作が比較的簡単である。

従って、かかるグルコースの測定方法は、操作が簡便で
かつ測定精度が高いという条件を充たす有効なグルコー
スの定量方法の一つといえよう。

Ｄ発明が解決しようとする問題点 第１図は、上述の方法において、化学発光法による過酸
化水素量と発光強度の関係を示す図である。

図において、Ｏ印の示すグラフは、上述の方法により尿
中の過酸化水素を測定したものである。

一方、・印の示すグラフは、純水にグルコースを加えた
標準溶液による検量線である。両者を比較した場合、グ
ルコース濃度が１０−’　ｍｏｌ／１より低７農度の領
域において、Ｏ印のグラフは高レベルのまま値が低下せ
す、・印のグラフと大きく離れてしまっていることが分
かる。これは、グルコースオキシダーゼによってグルコ
ースを酸化する前に、尿中にＡＨ化水素が既に存在して
いるためであり、この過酸化水素によってブランク値が
上昇したものと考えられる。

従って、例えば尿等の試料を測定対象とする場合、上記
の方法によって該試料中の微量のグルコースを定量しよ
うとしても、１０−’　ｍｏｌ／Ｉ以下の低濃度領域に
おいては正確な定量を行うことができないという問題点
があった 本発明はかかる問題点を解決するためになされたもので
、試料中のグルコース濃度が１０−４ｍｏｌ／ｌ以下の
低４度領域においても正確に定量することができる方法
を提供することを目的とするものである。

Ｅ問題点を解決するための手段 未発明に係る方法は、前記グルコースキシダーゼを触媒
とするグルコースの還択酸化を行う前に、無機触媒を添
加することにより、試料中に既に存在している過酸化水
素の分解を行うことにより、上記問題点を解決したもの
である。

Ｆ作用 本発明においては、試料に無機触媒を添加することによ
り、グルコースの酸化反応前から試料中に存在している
過酸化水素を分解することにより、検量線中のブランク
値のレベルを低下させることができるので、グルコース
の低濃度領域においても正確な測定を行うことが可能と
なる。

Ｇ実施例 尿を試料対象として、上記グルコースの定量方法を適用
する場合において、グルコース以外の代謝産物等による
測定妨害を除去するための種々の実験を行った。

すなわち、尿に、白金、パラジウム、酸化マンガン、酸
化コバルト等の無機触媒を作用させて尿中に存在する過
酸化水素を分解除去し、その後にカタラーゼ阻害剤とし
てアジ化ナトリウムを作用させた。

次に、グルコースオキシダーゼを触媒としてグルコース
のみについて選択的に酸化を行い、その反応時に生成す
る過酸化水素を、例えば過マンガン酸塩；滴定、ヨウ素
酸還元滴定等の化学的滴定方法によって、あるいは発光
法、吸光度法、蛍光法、レーザ比澗法等の光学的方法、
ポーラログラフイー等の物理的方法によって定量を行い
、その過酸化水素量より尿中のグルコースを定量した。

その結果、一番高感度でありたのは化学発光法であった
。以下、化学的発光法による方法を例にとり、その具体
的実施例について説明する。

（実施例１） 尿１ｍｌに、触媒として°白金（白金黒　半井化学薬品
■製−級）　０．０１ｇを、加えて攪拌した。その処理
した尿を濾過し、白金（白金黒）を除去した。

その濾液から０．２　ｍｌを採取した。

次に、純水９．８　ｍｌを加えて希釈した。

その希釈溶９ｉ０．１ｍｌを採取し、そこへ１００　Ｕ
／ｍΩのグルコースオキシダーゼ溶液（■東洋紡製グル
コースオキシダーゼ−ｆｒｏｍ　八ｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ　ｎｉｇｅｒ−を０．０１ｍｏｌ／ｌ酢酸緩衝？（１
２（ｐＨ５，ｔ）で調整）　０．０１ｍ１を加え、その
後２ｘ　１０−’ｍｏｌ／Ｉのルミノール溶液（東京化
成工業制０製特級ルミノールを０．２　ｍｏｌ／１炭酸
ナトリウム−炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐｎ９．８）
で調整）　０．５　ｍｌ　（発光試薬）及び６Ｘ　１０
−３ｍｏｌ／１　の−ツーエリシアン化カリウム水溶液
（ＭＥＲＣＫ製ｐｒｏ　ａｎａｌｙｓｉ　フェリシアン
化カリウム）０．５　ｍｌ　（触媒）を加えて化学発光
させ、化学発光量をルミノメータ（ＩＩＰＤ−８０００
：　＠明電舎製）で測定し、その測定した過酸化水素量
でグルコースの検量線（β−Ｄ−グルコース標準液を同
様な操作で定量して作成した検量線）との比較対応から
グルコースの値を算出し、その値を尿中のグルコースの
量とした。

（実施例２） 尿１ｍｌに、触媒としてパラジウム（パラジウム黒半井
化学薬品■製−級）　０．０１ｇを加え、攪拌した。そ
の処理した尿を濾過し、パラジウム（パラジウムＮ）を
除去した。その濾液から０．２　ｍｌを採取した。

次に、そこへ純水９．８　ｍｌを加えて希釈した。

以下（実施例１）と同様な操作で尿中のグルコースを定
量した。

第１図に上記実施例の工程図を示す。また、上記の方法
によって得られた検量線のうち、実施例１による結果を
第２図のΔ印で示す。図から分かるように、グルコース
濃度が１０−’　ｍｏ１７１以下におけるブランク値は
低下し、かかる低濃度領域においても前記標準溶液のグ
ラフと良い一致が得られた。従って、本発明の方法によ
れば、グルコース濃度が１０−’　ｍｏｌ／ｌ以下の低
濃度領域においても精度よく測定を行うことが可能であ
ることがわかる。

Ｈ発明の効果 ■　白金、パラジウム、酸化マンガン、酸化コバルト等
の無機触媒を作用させることにより、グルコースを酸化
する前に試料中に既に存在している過酸化水素による測
定妨害を防止することがてきる。

■　現在用いられているソモジー法を代表とする、グル
コースの還元性を利用した測定法に対し、グルコースオ
キシダーゼの酵素反応を測定する特異性の高い方法を用
いることができるようになる。

■　■■の方法を用いることにより、Ｉ＋　２０２を定
量するという高感度の測定系を利用することができる。

■　■■の方法を用いて、検出系に化学発光法を使用す
ることにより、過酸化水素の定量を短時間に確実に行う
ことができ、かつ極めて簡単な高感度な手法となる。

■　検出系に化学発光法を使用することにより、多検体
を短時間に測定することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の一実施例を示す工程図、第２図は化学
発光法による検量線図である。 代理人　弁理士　佐　藤　正　年 第１図

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）生体試料中のグルコースについて、グルコースオ
   キシダーゼの存在下において選択酸化を行い、前記グル
   コースの酸化反応に伴って発生する過酸化水素を化学的
   または物理的方法により定量を行い、グルコースと過酸
   化水素との検量線に基づいてグルコースの量を求める生
   体試料中のグルコースの測定方法において、 前記グルコースの選択酸化を行う前に、無機触媒を添加
   することにより試料中に既に存在している過酸化水素の
   分解除去を行うことを特徴とする生体試料中のグルコー
   スの測定方法。
2. （２）前記過酸化水素を定量する方法は、化学発光法で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の生体
   試料中のグルコースの測定方法。