JPS63282657A - 生体試料中の尿酸の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ産業上の利用分野 本発明は、生体試料中の尿酸を検出定量する方法の改善
に関するものである。

Ｂ発明の概要 生体試料中に含まれる尿酸をウリカーゼを用いて反応さ
せ、その際に生成する過酸化水素を定量することにより
尿酸の量を求める方法を用いて尿酸の定量を行う場合、
尿酸を反応させる前から既に尿中に存在している過酸化
水素によって測定の妨害を受けるため、尿酸の低濃度領
域においては正確な測定を行うことができなかった。

本発明は、尿酸の反応前に尿中に既に存在している過酸
化水素を無機触媒を作用させることによって分解するこ
とにより、尿酸の反応によって生成する過酸化水素の量
を正確に定量できるようにしたものである。

Ｃ従来の技術 臨床医学の分野において、腎機能障害、痛風、糖尿病、
悪性腫よう、子簡、肺炎初期、腸障害、金属中毒、高血
圧等の疾病においては、血液中の尿酸が異常に高値を示
すのか認められ、黄色肝萎縮症等の疾病においては、血
液中の尿酸が減少するのが認められる。また、白組病、
重傷肝疾患、痛風等の疾病においては尿中に排せつされ
る尿酸が増加する。従って、これらの疾病の診断、鑑別
、管理等を行うにあたっては、血液中あるいは尿中の尿
酸を検出定量することの有用性が認められている。

従来、一般に行われている血液中あるいは尿中の尿酸の
定量法としては以下のような方法があった。

■　尿酸の還元力を利用してリンタングステン酸をリン
タングステン酸ブルーに還元し、その青色を比色法ある
いは吸光度法で測定するリンタングステン酸還元法。

■　酵素反応及びリンタングステン酸違元法を組み合わ
せたウリカーゼ還元性。

■　尿酸の有する２９３ｎｍにおける吸収が、酵素反応
によって消失することを用いた紫外部吸収法。

■　ウリカーゼ反応で生じた！１２０□を、ベルオキシ
ターセ共役系を用いて発色させ、比色定量する方法。

■　共役系としてカタラーゼを用い、アルデヒドを生成
させる方法。

■　ウリカーゼ酸素電極法。

Ｄ発明が解決しようとする問題点 上記のような従来の方法は、次に示すような問題点があ
った。

■、■、■の方法は、他の還元性物質例えば医薬品ある
いは還元性代謝産物等が定量を妨害することがある。

■、■の方法は呈色液が不安定で発色後足時間内に測定
する必要があり、日常検査において多数の検体を処理す
る場合に時間的制約を受ける。

■、■の方法は尿中では妨害物質の影響を受けるので測
定することが困難である。

■の方法は高価な「紫外部を測定できる分光光度計」を
必要とするため、一般の中、小検査室においては、はと
んど用いられていない。

■の方法では、尿酸の還元による吸収の減少として表わ
れる比較的低いシグナルが尿および血清試料自体の持つ
２９３ｎｍの吸収と重なってしまう。

■の方法は上記の方法の中では最も良いと思われるが、
自動化等を考えた場合には未だ不十分な点があり、短時
間、高精度の測定法の開発が切望されている。

■の方法は酸素電極を用いて測定する方法であるが、実
用上は種々の問題があり、未だ実用化されていない。

従来の方法は上記のような種々の問題点があつた。

本発明は、上記のような従来の方法の問題点を鑑みてな
さ、ねたもので、例えば生体試料中の尿酸の定量分析法
において、より高感度、高精度かつ操作の簡単な生体試
料中の尿酸の測定方法を提供することを目的とするもの
である。

Ｅ問題点を解決するための手段 本発明に係る方法は、試料中の尿酸を反応させて過酸化
水素を発生せしめる前に、該試料に無機触媒を作用させ
、該試料中に内在、混入及び発生する過酸化水素を分解
することにより上記問題点を解決したものである。

Ｆ作用 本発明においては、試料に無機触媒を作用させて試料中
に内在、混入及び発生する過酸化水素を分解することに
より、試料中に既に存在している目的反応によらない過
酸化水素が減少し、これらの過酸化水素によるブランク
のレベルか低下する。

なお、尿酸と過酸化水素との反応は次の通りである。

Ｇ実施例 本発明の実施例について、まず操作手順の一例を以下に
示す。

（試薬の調製） ■０．１　ｍｏｌ／ｌリン酸緩衝液ｐＨ７，０を調製。

■ウリカーゼ（ベーリンガーマンハイム社製）５０％グ
リセリン、ｐ　Ｈ１０，２，５０ｍｍｏｌ／ｌグリセリ
ン、０．１３ｍｏｌ／ｌ炭酸ナトリウム中の溶液Ｓｐ、
活性４．５　Ｕ／＋ｎｇ　（２５℃）。

■ルミノール ２　ｘ　１０−７ｍｏｌ／１，０．２　ｍｏｌ／Ｉ炭酸
・重炭酸緩衝液ｐＨ９，８に溶解。

■フェリシアン化カリ ６　ｘ　１０−３ｍｏｌ／ｌ　。

■標準液ｌ：尿酸水溶液（５ｍｇ／ｄｌ、　１０　ｍｇ
／ｄｌ。

１　４Ｂ／ｄｌ　　） ■標準液２．尿酸添加尿（５，９＋ｎｇ／ｄ！　）■白
金黒（小島化学薬品株式会社製） （測定法） 試験管に試料（尿または標準液）を１ｍ１分取し、触媒
として白金黒０．Ｏｌｇを加え、１分間攪拌する。その
処理した尿を濾過して白金黒を除去する。

蒸留水で１００倍に希釈した後、１ｗｌを分取し、ウリ
カーゼ１０μｌをピペットで添加し、３０℃で１０分反
応させる。

反応後、１００μｍ分取し、ルミノメータ（ＵＰＤ−８
０００：■明電舎製）を用い、ルミノール溶液５００μ
！、フェリシアン化カリ溶液５００μｌを自動分注する
ことにより発光反応を起こさせ、発生した過酸化水素の
量を測定し、尿酸の量を定量分析した。

第１図は本実施例の工程図である。また、第２図は尿酸
含有量と発光量との関係を示す図、第３図は尿濃度と発
光量との関係を示す図である。

第２図及び第３図から、ともによい直線性が得られ、精
度のよい測定が行えることが分かる。

以上まとめると、上記方法を用いた上で生体試料等にウ
リカーゼを作用させ、尿酸との特異的な酵素反応を起こ
させＨ，０２を発生させる。その過酸化水素を、過マン
ガン酸塩滴定、ヨウ素酸還元滴定等の化学的に滴定する
方法、あるいは光学的方法（生物発光法、化学発光法、
吸光度法、けい光性、レーザー比ず発注）ポーラログラ
フイー等の物理的方法で測定し、生体試料中の尿酸を精
度よく定量分析することがてきる。

従って、本発明の方法を用いることにより、簡単な操作
で、短時間に少量のサンプルで精度の高い測定を行なう
ことかでさる。特に自動化を考えた場合、自動化に適し
た若干の操作と短時間に少量のサンプルで済むという点
を考慮すると利点が大きい。

Ｈ発明の効果 本発明によれば以下の効果が得られる。

■　無機触媒を用いて試料中の過酸化水素をあらかじめ
分解することにより、これらの過酸化水素による測定妨
害を除去でき、高感度かつ高精度の尿酸の測定を行うこ
とができる。

■　ウリカーゼと尿酸との酵素反応を用いるので特異性
が高い。

■　■、■の方法を用いることにより、過酸化水素を定
量する様々な高感度の測定系を利用することができるよ
うになる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の一実施例を示す工程図、第２図は、試
料中の尿酸含有量と発光量との関係を示す図、第３図は
尿濃度と発光量との関係を示す図である。 代理人　弁理士　佐　藤　正　年 第１図 第２図

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）生体試料中の尿酸について、ウリカーゼの存在下
   において選択酸化を行い、前記尿酸の酸化反応に伴って
   発生する過酸化水素の定量を行い、発生した過酸化水素
   を化学的または物理的方法により定量を行い、尿酸と過
   酸化水素との検量線に基づいて尿酸の量を求める試料中
   の尿酸の測定方法において、 前記尿酸の選択酸化を行う前に、無機触媒を添加するこ
   とにより試料中に既に存在している過酸化水素の分解を
   行うことを特徴とする生体試料中の尿酸の測定方法。
2. （２）前記無機触媒は、白金、パラジウム、酸化マンガ
   ン、酸化コバルトの中から選ばれたものであることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の生体試料中の尿酸
   の測定方法。