JPS6374500A - 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は体液、殊に尿中のしゅう酸塩を検出するための
試験片を提供するものである。

（従来の技術） 臨床医学的に体液、殊に尿中に排泄されるしよう酸塩は
腎石症、尿路結石、原発性高しゅう酸尿症を診断するた
めの重要な指標として見做されている。

尿中のしゅう酸塩の検査法は多数の方法が考案されてい
る。古典的な方法では、たとえば塩化カルシウムを加え
てしゅう酸を沈殿させ、分離し、これに硫酸を加えて溶
解した後、過マンガン酸カリウムで滴定する。

このように分離操作と測定操作の２段階に分ける方法が
多い。分離操作としてはカルシウム塩沈殿、有機溶媒抽
出、イオン交換樹脂カラムなどが用いられている。又分
離後の測定操作には上記滴定の他に沈殿物中のカルシウ
ムの原子吸光などによる定量、グリオキザル酸に還元後
のレゾルシノール螢光発色による定量法等が用いられて
いる。

他にしゅう酸膜炭酸酵素による二酸化炭素遊離の検圧、
あるいはｐＩ（変化などで測定する方法もあるが回収率
と特異性、再現性に問題がある。

近年、＋４ＣＬ、ゆう酸を内部標準に用いるアイソトー
プ法、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）による定量も行なわれてい
る。

しかしアイソトープ法は煩雑であり、ＧＣ法は前処理と
して何らかのエステル化が必要であり１１ＰＬｃ法は高
価で一般的でない。

（発明が解決しようとする問題点） このように従来法は１）操作が煩雑、２）前処理が必要
、３）測定に経験を要す、４）測定機械及び器具が高価
、５）特異性に欠＜、６）測定場所が限定される、等の
種々の欠点を有している。

（問題点を解決するための手段） 本発明は上記事情に鑑みなされたもので、その目的とす
るところはしゅろ酸塩と特異的に反応を示し前処理等の
操作も必要とせず分析の経験のない人でも短時間に極め
て簡単な操作でどんな場所でも体液中のしゅう酸塩を検
出するだめの方法を提供することにある。

即ち本発明の要旨とするところはしゅう酸塩酸化酵素、
ペルオキシダーゼ、ｐ　Ｈ１１衝剤及び呈色試薬を吸収
担体に含有することを特徴とする体液中のしゅう酸塩を
検出するための試験片であり、みごとに上記問題点を解
決したことにある。

本発明の原理は公知であるがしゅう酸塩をしゅう酸塩酸
化酵素存在下で過酸化水素と二酸化炭素に酸化させ、生
じた過酸化水素をペルオキシダーゼの作用により活性酸
素と水とにする。発生した活性酸素は呈色試薬と反応し
有色化合物を生成し、その呈色を比較判定し、しゅう酸
塩を検出する方法である。

反応式 呈色試薬＋活性酸素　　　　　　　　　を色化合物尚、
呈色試薬としては下記に述べるが、例えば４−アミノア
ンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスルホン酸を
用いた場合の反応は下記の様になる。

ｂＨｓ 本発明に使用されるｐＨ緩衝剤としてはｐＨ４，０〜７
．０の緩衝剤であればリン酸系、クエン酸系、酪酸系、
フタル酸系、ホウ酸系等種々の緩衝剤が使用出来るがし
ゅう酸塩酸化酵素の至適ｐＨの関係よりｐＨ４，７〜５
．４の緩衝剤を使用するのが好ましい。

呈色試薬としては活性酸素と反応し呈色する試薬であれ
ばいずれの試薬でも使用出来る。

臨床検査で使用される酸化還元試薬、例えば０−トリジ
シン、グアヤク脂、テトラベース、ベンチジン等でも十
分使用が可能であるが、呈色後の安定性等から上記４−
アミノアンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスル
ホン酸が望マシい。

酵素であるペルオキシダーゼ及びしゅう酸塩酸化酵素は
起源に限定なく使用可能である。

吸収担体としては濾紙、ポリエステルフリース、多孔性
プラスチック等があげられるが特に濾紙が好ましい。

尚、場合によっては酵素の安定剤としてゼラチン、しょ
糖、アラビアゴム、デキストリン又は吸収担体へ含浸液
を均一に含浸させるためあるいは呈色を均一にするため
に界面活性剤を添加する事もできる。

本発明に係わる試験片は例えば次の様にして製造する。

純水１００〜１５０部に安定剤１〜１０部を加え溶解す
る。次にｐｉｆ緩衝剤５〜１５部及び呈色試薬０．１〜
２部を加え良く攪拌し最後にペルオキシダーゼ５００〜
５０００　Ｕ及びしゅう酸塩酸化酵素５００〜５０００
　Ｕを添加して含浸液を作成する。この含浸液に濾紙の
如き担体を含浸させ　４０〜６０℃で乾燥する。

このようにして得られた試験片を両面接着テープでプラ
スチックフィルムに貼り使用の便に供することが出来る
。

被検尿に試験紙を浸して直ちに引き上げ一定時間後に生
じた色を予め作成した標準色表と比較（対比）すること
により尿中しゅう酸塩濃度を判定するかまたは一定時間
内に得られた色から分光反射率計を用いて反射率を求め
検量線よりしゆう酸濃度を求めることも可能である。

（実施例） 次に本発明を以下の実施例により更に具体的に説明する
がこれにより本発明の範囲が限定されるものではない。

実施例１ 濾紙（東洋濾紙１に５１４）を下記の溶液に浸し４５℃
で通風乾燥する。

〈溶　液〉 アラビアゴム　　　　　　　　　　２ｇしょＷ　　　　
　　　　　　　　　　　　３ｇリン酸−カリウム　　　
　　　　　７ｇ４−アミノアンチピリン　　　　０．２
ｇジクロロハイドロオキシ ベンゼンスルホネート　　　　　０．５ｇしゅう酸塩酸
化酵素　　　　　７００Ｕペルオキシダーゼ　　　　　
　６００Ｕ純　　水　　　　　　　　　　　　　１００
ｍ＃このようにして得られた試験紙を５ｆｉ角に切断し
て両面接着テープを用いて５　ｔｍ　Ｘ　８５　ｔｍの
プラスチックシートの一端に貼付する。この試験紙を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白色
を示したがしゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
３０秒〜５分後に桃〜赤色を示し感度限界は２■／ｄＩ
であった。

実施例２ 濾紙（東洋濾紙ｍ５１４）を下記の溶液に浸し４５℃で
通風乾燥する。

く溶　液〉 ゼラチン　　　　　　　　　　　　３ｇアラビアゴム　
　　　　　　　　　２ｇクエン酸　　　　　　　　　　
　　２ｇクエン酸ナトリウム　　　　　　　１０ｇ０−
トリジン　　　　　　　　　　０．１ｇしゅう酸塩酸化
酵素　　　　　７００Ｕペルオキシダーゼ　　　　　　
７００Ｕ黄色色素　　　　　　　　　　　１０■純　　
　水　　　　　　　　　　　　　１００　ｍβこのよう
に得られた試験紙を実施例１と同様に切断及び貼付する
。

この試験片を被検尿に浸したところしゆう酸塩を含有し
ない尿では黄色を呈し、しゅう酸塩を含有している尿で
はその濃度により３０秒〜５分後に黄緑色〜紺色を示し
感度限界は２■／ｄｉであった。

実施例３ 濾紙（東洋濾紙に５１４）を下記の溶液に浸し４５℃で
通風乾燥する。

く溶　液〉 しょ糖　　　　　　　　　　　　　５ｇクエン酸　　　
　　　　　　　　　２ｇクエン酸ナトリウム　　　　　
　　１０ｇテトラベース　　　　　　　　　０．１ｇし
ゅう酸塩酸化酵素　　　　　７００Ｕペルオキシダーゼ
　　　　　　７００Ｕ純　　水　　　　　　　　　　　
　　１００ｍｊ！このようにして得られた試験紙を実施
例１と同様に操作し切断及び貼付した。この試験片を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白黄
色を示し、しゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
３０秒〜５分後に淡青〜青色を示した。

感度限界は３ｍｇ１ｄｉであった。

尚、臨床医学的にみると腎石症、尿路結石及び原発性高
しゅう酸尿症の尿中にはしゅう酸塩が１０■／ｄ１以上
排泄されるとの事であり本発明試験片で十分確認判定が
可能であった。（正常値約３■／ｄ１以下） （発明の効果） 本発明の試験片を用いることにより分析の経験のない人
でも、極めて短時間にいかなる場所でも、簡単な操作で
体液中殊に尿中のしゅう酸塩の濃度を判定出来る。

従って本発明は産業界に稗益するところが極めて大であ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. しゅう酸塩酸化酵素、ペルオキシダーゼ、ｐＨ緩衝剤及
   び呈色試薬を吸収担体に含有させてなる体液中のしゅう
   酸塩を検出するための試験片。