JPS6374500A - 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 - Google Patents
体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片Info
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- JPS6374500A JPS6374500A JP21727186A JP21727186A JPS6374500A JP S6374500 A JPS6374500 A JP S6374500A JP 21727186 A JP21727186 A JP 21727186A JP 21727186 A JP21727186 A JP 21727186A JP S6374500 A JPS6374500 A JP S6374500A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は体液、殊に尿中のしゅう酸塩を検出するための
試験片を提供するものである。
試験片を提供するものである。
(従来の技術)
臨床医学的に体液、殊に尿中に排泄されるしよう酸塩は
腎石症、尿路結石、原発性高しゅう酸尿症を診断するた
めの重要な指標として見做されている。
腎石症、尿路結石、原発性高しゅう酸尿症を診断するた
めの重要な指標として見做されている。
尿中のしゅう酸塩の検査法は多数の方法が考案されてい
る。古典的な方法では、たとえば塩化カルシウムを加え
てしゅう酸を沈殿させ、分離し、これに硫酸を加えて溶
解した後、過マンガン酸カリウムで滴定する。
る。古典的な方法では、たとえば塩化カルシウムを加え
てしゅう酸を沈殿させ、分離し、これに硫酸を加えて溶
解した後、過マンガン酸カリウムで滴定する。
このように分離操作と測定操作の2段階に分ける方法が
多い。分離操作としてはカルシウム塩沈殿、有機溶媒抽
出、イオン交換樹脂カラムなどが用いられている。又分
離後の測定操作には上記滴定の他に沈殿物中のカルシウ
ムの原子吸光などによる定量、グリオキザル酸に還元後
のレゾルシノール螢光発色による定量法等が用いられて
いる。
多い。分離操作としてはカルシウム塩沈殿、有機溶媒抽
出、イオン交換樹脂カラムなどが用いられている。又分
離後の測定操作には上記滴定の他に沈殿物中のカルシウ
ムの原子吸光などによる定量、グリオキザル酸に還元後
のレゾルシノール螢光発色による定量法等が用いられて
いる。
他にしゅう酸膜炭酸酵素による二酸化炭素遊離の検圧、
あるいはpI(変化などで測定する方法もあるが回収率
と特異性、再現性に問題がある。
あるいはpI(変化などで測定する方法もあるが回収率
と特異性、再現性に問題がある。
近年、+4CL、ゆう酸を内部標準に用いるアイソトー
プ法、ガスクロマトグラフィー(GC)、高速液体クロ
マトグラフィー(HPLC)による定量も行なわれてい
る。
プ法、ガスクロマトグラフィー(GC)、高速液体クロ
マトグラフィー(HPLC)による定量も行なわれてい
る。
しかしアイソトープ法は煩雑であり、GC法は前処理と
して何らかのエステル化が必要であり11PLc法は高
価で一般的でない。
して何らかのエステル化が必要であり11PLc法は高
価で一般的でない。
(発明が解決しようとする問題点)
このように従来法は1)操作が煩雑、2)前処理が必要
、3)測定に経験を要す、4)測定機械及び器具が高価
、5)特異性に欠<、6)測定場所が限定される、等の
種々の欠点を有している。
、3)測定に経験を要す、4)測定機械及び器具が高価
、5)特異性に欠<、6)測定場所が限定される、等の
種々の欠点を有している。
(問題点を解決するための手段)
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、その目的とす
るところはしゅろ酸塩と特異的に反応を示し前処理等の
操作も必要とせず分析の経験のない人でも短時間に極め
て簡単な操作でどんな場所でも体液中のしゅう酸塩を検
出するだめの方法を提供することにある。
るところはしゅろ酸塩と特異的に反応を示し前処理等の
操作も必要とせず分析の経験のない人でも短時間に極め
て簡単な操作でどんな場所でも体液中のしゅう酸塩を検
出するだめの方法を提供することにある。
即ち本発明の要旨とするところはしゅう酸塩酸化酵素、
ペルオキシダーゼ、p H11衝剤及び呈色試薬を吸収
担体に含有することを特徴とする体液中のしゅう酸塩を
検出するための試験片であり、みごとに上記問題点を解
決したことにある。
ペルオキシダーゼ、p H11衝剤及び呈色試薬を吸収
担体に含有することを特徴とする体液中のしゅう酸塩を
検出するための試験片であり、みごとに上記問題点を解
決したことにある。
本発明の原理は公知であるがしゅう酸塩をしゅう酸塩酸
化酵素存在下で過酸化水素と二酸化炭素に酸化させ、生
じた過酸化水素をペルオキシダーゼの作用により活性酸
素と水とにする。発生した活性酸素は呈色試薬と反応し
有色化合物を生成し、その呈色を比較判定し、しゅう酸
塩を検出する方法である。
化酵素存在下で過酸化水素と二酸化炭素に酸化させ、生
じた過酸化水素をペルオキシダーゼの作用により活性酸
素と水とにする。発生した活性酸素は呈色試薬と反応し
有色化合物を生成し、その呈色を比較判定し、しゅう酸
塩を検出する方法である。
反応式
呈色試薬+活性酸素 を色化合物尚、
呈色試薬としては下記に述べるが、例えば4−アミノア
ンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスルホン酸を
用いた場合の反応は下記の様になる。
呈色試薬としては下記に述べるが、例えば4−アミノア
ンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスルホン酸を
用いた場合の反応は下記の様になる。
bHs
本発明に使用されるpH緩衝剤としてはpH4,0〜7
.0の緩衝剤であればリン酸系、クエン酸系、酪酸系、
フタル酸系、ホウ酸系等種々の緩衝剤が使用出来るがし
ゅう酸塩酸化酵素の至適pHの関係よりpH4,7〜5
.4の緩衝剤を使用するのが好ましい。
.0の緩衝剤であればリン酸系、クエン酸系、酪酸系、
フタル酸系、ホウ酸系等種々の緩衝剤が使用出来るがし
ゅう酸塩酸化酵素の至適pHの関係よりpH4,7〜5
.4の緩衝剤を使用するのが好ましい。
呈色試薬としては活性酸素と反応し呈色する試薬であれ
ばいずれの試薬でも使用出来る。
ばいずれの試薬でも使用出来る。
臨床検査で使用される酸化還元試薬、例えば0−トリジ
シン、グアヤク脂、テトラベース、ベンチジン等でも十
分使用が可能であるが、呈色後の安定性等から上記4−
アミノアンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスル
ホン酸が望マシい。
シン、グアヤク脂、テトラベース、ベンチジン等でも十
分使用が可能であるが、呈色後の安定性等から上記4−
アミノアンチピリンとジクロロヒドロキシベンゼンスル
ホン酸が望マシい。
酵素であるペルオキシダーゼ及びしゅう酸塩酸化酵素は
起源に限定なく使用可能である。
起源に限定なく使用可能である。
吸収担体としては濾紙、ポリエステルフリース、多孔性
プラスチック等があげられるが特に濾紙が好ましい。
プラスチック等があげられるが特に濾紙が好ましい。
尚、場合によっては酵素の安定剤としてゼラチン、しょ
糖、アラビアゴム、デキストリン又は吸収担体へ含浸液
を均一に含浸させるためあるいは呈色を均一にするため
に界面活性剤を添加する事もできる。
糖、アラビアゴム、デキストリン又は吸収担体へ含浸液
を均一に含浸させるためあるいは呈色を均一にするため
に界面活性剤を添加する事もできる。
本発明に係わる試験片は例えば次の様にして製造する。
純水100〜150部に安定剤1〜10部を加え溶解す
る。次にpif緩衝剤5〜15部及び呈色試薬0.1〜
2部を加え良く攪拌し最後にペルオキシダーゼ500〜
5000 U及びしゅう酸塩酸化酵素500〜5000
Uを添加して含浸液を作成する。この含浸液に濾紙の
如き担体を含浸させ 40〜60℃で乾燥する。
る。次にpif緩衝剤5〜15部及び呈色試薬0.1〜
2部を加え良く攪拌し最後にペルオキシダーゼ500〜
5000 U及びしゅう酸塩酸化酵素500〜5000
Uを添加して含浸液を作成する。この含浸液に濾紙の
如き担体を含浸させ 40〜60℃で乾燥する。
このようにして得られた試験片を両面接着テープでプラ
スチックフィルムに貼り使用の便に供することが出来る
。
スチックフィルムに貼り使用の便に供することが出来る
。
被検尿に試験紙を浸して直ちに引き上げ一定時間後に生
じた色を予め作成した標準色表と比較(対比)すること
により尿中しゅう酸塩濃度を判定するかまたは一定時間
内に得られた色から分光反射率計を用いて反射率を求め
検量線よりしゆう酸濃度を求めることも可能である。
じた色を予め作成した標準色表と比較(対比)すること
により尿中しゅう酸塩濃度を判定するかまたは一定時間
内に得られた色から分光反射率計を用いて反射率を求め
検量線よりしゆう酸濃度を求めることも可能である。
(実施例)
次に本発明を以下の実施例により更に具体的に説明する
がこれにより本発明の範囲が限定されるものではない。
がこれにより本発明の範囲が限定されるものではない。
実施例1
濾紙(東洋濾紙1に514)を下記の溶液に浸し45℃
で通風乾燥する。
で通風乾燥する。
〈溶 液〉
アラビアゴム 2gしょW
3gリン酸−カリウム
7g4−アミノアンチピリン 0.2
gジクロロハイドロオキシ ベンゼンスルホネート 0.5gしゅう酸塩酸
化酵素 700Uペルオキシダーゼ
600U純 水 100
m#このようにして得られた試験紙を5fi角に切断し
て両面接着テープを用いて5 tm X 85 tmの
プラスチックシートの一端に貼付する。この試験紙を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白色
を示したがしゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
30秒〜5分後に桃〜赤色を示し感度限界は2■/dI
であった。
3gリン酸−カリウム
7g4−アミノアンチピリン 0.2
gジクロロハイドロオキシ ベンゼンスルホネート 0.5gしゅう酸塩酸
化酵素 700Uペルオキシダーゼ
600U純 水 100
m#このようにして得られた試験紙を5fi角に切断し
て両面接着テープを用いて5 tm X 85 tmの
プラスチックシートの一端に貼付する。この試験紙を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白色
を示したがしゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
30秒〜5分後に桃〜赤色を示し感度限界は2■/dI
であった。
実施例2
濾紙(東洋濾紙m514)を下記の溶液に浸し45℃で
通風乾燥する。
通風乾燥する。
く溶 液〉
ゼラチン 3gアラビアゴム
2gクエン酸
2gクエン酸ナトリウム 10g0−
トリジン 0.1gしゅう酸塩酸化
酵素 700Uペルオキシダーゼ
700U黄色色素 10■純
水 100 mβこのよう
に得られた試験紙を実施例1と同様に切断及び貼付する
。
2gクエン酸
2gクエン酸ナトリウム 10g0−
トリジン 0.1gしゅう酸塩酸化
酵素 700Uペルオキシダーゼ
700U黄色色素 10■純
水 100 mβこのよう
に得られた試験紙を実施例1と同様に切断及び貼付する
。
この試験片を被検尿に浸したところしゆう酸塩を含有し
ない尿では黄色を呈し、しゅう酸塩を含有している尿で
はその濃度により30秒〜5分後に黄緑色〜紺色を示し
感度限界は2■/diであった。
ない尿では黄色を呈し、しゅう酸塩を含有している尿で
はその濃度により30秒〜5分後に黄緑色〜紺色を示し
感度限界は2■/diであった。
実施例3
濾紙(東洋濾紙に514)を下記の溶液に浸し45℃で
通風乾燥する。
通風乾燥する。
く溶 液〉
しょ糖 5gクエン酸
2gクエン酸ナトリウム
10gテトラベース 0.1gし
ゅう酸塩酸化酵素 700Uペルオキシダーゼ
700U純 水
100mj!このようにして得られた試験紙を実施
例1と同様に操作し切断及び貼付した。この試験片を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白黄
色を示し、しゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
30秒〜5分後に淡青〜青色を示した。
2gクエン酸ナトリウム
10gテトラベース 0.1gし
ゅう酸塩酸化酵素 700Uペルオキシダーゼ
700U純 水
100mj!このようにして得られた試験紙を実施
例1と同様に操作し切断及び貼付した。この試験片を被
検尿に浸したところしゅう酸塩を含有しない尿では白黄
色を示し、しゅう酸塩を含有する尿ではその濃度により
30秒〜5分後に淡青〜青色を示した。
感度限界は3mg1diであった。
尚、臨床医学的にみると腎石症、尿路結石及び原発性高
しゅう酸尿症の尿中にはしゅう酸塩が10■/d1以上
排泄されるとの事であり本発明試験片で十分確認判定が
可能であった。(正常値約3■/d1以下) (発明の効果) 本発明の試験片を用いることにより分析の経験のない人
でも、極めて短時間にいかなる場所でも、簡単な操作で
体液中殊に尿中のしゅう酸塩の濃度を判定出来る。
しゅう酸尿症の尿中にはしゅう酸塩が10■/d1以上
排泄されるとの事であり本発明試験片で十分確認判定が
可能であった。(正常値約3■/d1以下) (発明の効果) 本発明の試験片を用いることにより分析の経験のない人
でも、極めて短時間にいかなる場所でも、簡単な操作で
体液中殊に尿中のしゅう酸塩の濃度を判定出来る。
従って本発明は産業界に稗益するところが極めて大であ
る。
る。
Claims (1)
- しゅう酸塩酸化酵素、ペルオキシダーゼ、pH緩衝剤及
び呈色試薬を吸収担体に含有させてなる体液中のしゅう
酸塩を検出するための試験片。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21727186A JPS6374500A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21727186A JPS6374500A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6374500A true JPS6374500A (ja) | 1988-04-04 |
Family
ID=16701524
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP21727186A Pending JPS6374500A (ja) | 1986-09-17 | 1986-09-17 | 体液中のしゆう酸塩を検出するための試験片 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6374500A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997045552A1 (en) * | 1996-05-31 | 1997-12-04 | University Of Florida | Materials and methods for detecting oxalate |
CN104406949A (zh) * | 2014-12-02 | 2015-03-11 | 武汉瑞恒达生物工程有限公司 | 用于检测尿液和血液中草酸含量的试剂、试剂盒及方法 |
US9128084B2 (en) | 2006-10-12 | 2015-09-08 | Koninklijke Philips N.V. | Fast biosensor with reagent layer |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5592698A (en) * | 1978-12-31 | 1980-07-14 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | Test strip for glucose determination |
JPS5982100A (ja) * | 1982-09-30 | 1984-05-11 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テツド | 細胞物質検出方法とそれに用いる化学試験試薬系 |
JPS6086467A (ja) * | 1983-10-18 | 1985-05-16 | Terumo Corp | 試験剤 |
-
1986
- 1986-09-17 JP JP21727186A patent/JPS6374500A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JPS5592698A (en) * | 1978-12-31 | 1980-07-14 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | Test strip for glucose determination |
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JPS6086467A (ja) * | 1983-10-18 | 1985-05-16 | Terumo Corp | 試験剤 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO1997045552A1 (en) * | 1996-05-31 | 1997-12-04 | University Of Florida | Materials and methods for detecting oxalate |
US5776701A (en) * | 1996-05-31 | 1998-07-07 | University Of Florida | Materials and methods for detecting oxalate |
US9128084B2 (en) | 2006-10-12 | 2015-09-08 | Koninklijke Philips N.V. | Fast biosensor with reagent layer |
CN104406949A (zh) * | 2014-12-02 | 2015-03-11 | 武汉瑞恒达生物工程有限公司 | 用于检测尿液和血液中草酸含量的试剂、试剂盒及方法 |
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