JP3074361B2 - 定量分析装置 - Google Patents
定量分析装置Info
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- chemiluminescence
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/08—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a stream of discrete samples flowing along a tube system, e.g. flow injection analysis
- G01N35/085—Flow Injection Analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N2035/00178—Special arrangements of analysers
- G01N2035/00237—Handling microquantities of analyte, e.g. microvalves, capillary networks
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、医学、薬学、化学分
析、食品工業分野における酵素反応を利用した定量分析
を行う装置に関する。
析、食品工業分野における酵素反応を利用した定量分析
を行う装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、酵素反応により定量分析を行う装
置としては、酵素フローインジェクション分析装置が一
般的である。これは、図５に示されるようにキャリヤー
９の流れをつくるためのポンプ７、キャリヤーの流れの
中に一定量の試料を導入する試料導入器８、酵素を固定
化した充填剤を充填し、試料中に含まれる測定対象物質
と酵素反応を行わせる酵素反応部３、酵素反応生成物の
量もしくは酵素反応に伴うキャリヤー中の物質量の変化
を検出する検出部５から構成される。検出部には、物質
の吸光量により定量を行う吸光度検出器、物質を電極に
より電気化学的に酸化還元してその時流れる酸化還元電
流から定量を行う電気化学検出器などが用いられる。
置としては、酵素フローインジェクション分析装置が一
般的である。これは、図５に示されるようにキャリヤー
９の流れをつくるためのポンプ７、キャリヤーの流れの
中に一定量の試料を導入する試料導入器８、酵素を固定
化した充填剤を充填し、試料中に含まれる測定対象物質
と酵素反応を行わせる酵素反応部３、酵素反応生成物の
量もしくは酵素反応に伴うキャリヤー中の物質量の変化
を検出する検出部５から構成される。検出部には、物質
の吸光量により定量を行う吸光度検出器、物質を電極に
より電気化学的に酸化還元してその時流れる酸化還元電
流から定量を行う電気化学検出器などが用いられる。
【０００３】また、酵素フローインジェクション分析装
置の検出器として、化学発光反応を利用して定量を行う
ものも考案されており、図６に示されるような構成の化
学発光検出器が市販されている。これは、酵素フローイ
ンジェクション分析装置における酵素反応部３の後に化
学発光試薬２を導入するポンプ７、酵素反応生成物と化
学発光試薬を混合する混合器１９、化学発光を検出する
渦巻型フローセル２０および化学発光量を電気信号に変
換する光電子増倍管２１を設置した構成となっていた。
置の検出器として、化学発光反応を利用して定量を行う
ものも考案されており、図６に示されるような構成の化
学発光検出器が市販されている。これは、酵素フローイ
ンジェクション分析装置における酵素反応部３の後に化
学発光試薬２を導入するポンプ７、酵素反応生成物と化
学発光試薬を混合する混合器１９、化学発光を検出する
渦巻型フローセル２０および化学発光量を電気信号に変
換する光電子増倍管２１を設置した構成となっていた。
【０００４】これらの酵素フローインジェクション分析
装置で各ユニットはすべて別体の部品であり、使用する
場合はこれらを適当に組み合わせ、配管や配線で接続し
て用いている。
装置で各ユニットはすべて別体の部品であり、使用する
場合はこれらを適当に組み合わせ、配管や配線で接続し
て用いている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、従来の酵素フ
ローインジェクション分析装置では、各ユニットが別体
の部品で配管により接続した構成、特に酵素反応カラム
と検出器が別体の部品であることや、酵素カラムや検出
部が機械加工により作製されており微小化に限界がある
ことなどから、酵素反応カラムで生成した物質が検出部
へ流れていく間に拡散してしまい、微量試料の定量や低
能度領域における測定が困難であった。
ローインジェクション分析装置では、各ユニットが別体
の部品で配管により接続した構成、特に酵素反応カラム
と検出器が別体の部品であることや、酵素カラムや検出
部が機械加工により作製されており微小化に限界がある
ことなどから、酵素反応カラムで生成した物質が検出部
へ流れていく間に拡散してしまい、微量試料の定量や低
能度領域における測定が困難であった。
【０００６】また、検出器が吸光度検出器である場合は
光源が必要で装置の小型化が難しい、電気化学検出器で
は試料中に含まれる電極活性物質により妨害を受けやす
い、などの問題点を有していた。また、装置の全容積が
ある程度大きくなるため、測定時にはキャリヤーの流量
を１ｍｌ／ｍｉｎ前後としなければならず、連続測定を
行った場合に試薬の消費量が多くなるという問題も有し
ていた。
光源が必要で装置の小型化が難しい、電気化学検出器で
は試料中に含まれる電極活性物質により妨害を受けやす
い、などの問題点を有していた。また、装置の全容積が
ある程度大きくなるため、測定時にはキャリヤーの流量
を１ｍｌ／ｍｉｎ前後としなければならず、連続測定を
行った場合に試薬の消費量が多くなるという問題も有し
ていた。
【０００７】また、従来の化学発光検出を利用する方法
も同様に酵素反応カラムで生成した物質が混合器に流れ
ていく間に拡散してしまったり、混合器内で発生した化
学発光が、検出部である渦巻型フローセルへ移動する間
に減衰してしまうために微量試料の定量や低濃度領域に
おける測定が困難であるという問題や、キャリヤーおよ
び化学発光試薬の消費量が多くなるという問題があっ
た。
も同様に酵素反応カラムで生成した物質が混合器に流れ
ていく間に拡散してしまったり、混合器内で発生した化
学発光が、検出部である渦巻型フローセルへ移動する間
に減衰してしまうために微量試料の定量や低濃度領域に
おける測定が困難であるという問題や、キャリヤーおよ
び化学発光試薬の消費量が多くなるという問題があっ
た。
【０００８】また、これに加えて、酵素反応カラム、混
合器および渦巻型フローセルの作製に機械加工を伴うた
め、微小化に限界があったり、精密な加工を要するため
に費用がかかるという問題点があった。そこで、この発
明の目的は、酵素反応部、混合部、および検出部を一枚
の基板上に集積化し、従来のこのような課題を解決した
定量分析装置を得ることである。
合器および渦巻型フローセルの作製に機械加工を伴うた
め、微小化に限界があったり、精密な加工を要するため
に費用がかかるという問題点があった。そこで、この発
明の目的は、酵素反応部、混合部、および検出部を一枚
の基板上に集積化し、従来のこのような課題を解決した
定量分析装置を得ることである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
にこの発明の定量分析装置は、検出手段として化学発光
反応を利用している。これにより、検出用の光源が不要
になり容易に装置の小型化が行えること、および試料中
の妨害物質の影響を少なくすることが可能となった。
にこの発明の定量分析装置は、検出手段として化学発光
反応を利用している。これにより、検出用の光源が不要
になり容易に装置の小型化が行えること、および試料中
の妨害物質の影響を少なくすることが可能となった。
【００１０】また、同時に酵素反応部、混合部、および
検出部を同一の基板上に構成し、酵素反応部から検出部
までの距離を最短にして、物質の拡散や発光の減衰を最
小限に抑えている。同時に装置の全容積を小さくしてキ
ャリヤーおよび発光試薬の消費量を少なくしている。さ
らに、これらを作製するために機械加工ではなくシリコ
ン基板の異方性エッチングを用いることにより、多数個
を同時に加工できるため安価に作製が行えるようにし
た。
検出部を同一の基板上に構成し、酵素反応部から検出部
までの距離を最短にして、物質の拡散や発光の減衰を最
小限に抑えている。同時に装置の全容積を小さくしてキ
ャリヤーおよび発光試薬の消費量を少なくしている。さ
らに、これらを作製するために機械加工ではなくシリコ
ン基板の異方性エッチングを用いることにより、多数個
を同時に加工できるため安価に作製が行えるようにし
た。
【００１１】
【作用】上記のように構成された定量分析装置において
は、酵素反応部において試料中に含まれる測定対象物質
が基質として酵素反応により消費され、別の物質が生成
する。さらに混合部において、酵素反応生成物が化学発
光試薬と混合され、特定波長の光が発生する。その後、
検出部を流れていく間に、フォトダイオードや光電子増
倍管により、光の強弱が電気信号（電流値、電圧値）の
強弱へ変換される。この電気信号の強弱は、化学発光強
度を反映しており、化学発光強度は酵素反応生成物の量
に依存している。
は、酵素反応部において試料中に含まれる測定対象物質
が基質として酵素反応により消費され、別の物質が生成
する。さらに混合部において、酵素反応生成物が化学発
光試薬と混合され、特定波長の光が発生する。その後、
検出部を流れていく間に、フォトダイオードや光電子増
倍管により、光の強弱が電気信号（電流値、電圧値）の
強弱へ変換される。この電気信号の強弱は、化学発光強
度を反映しており、化学発光強度は酵素反応生成物の量
に依存している。
【００１２】また、当然ながら酵素反応生成物量は、も
ともと試料中に含まれていた基質（測定対象物質）量に
依存しているので、結局、測定された電気信号の強弱
は、測定対象物質の濃度を反映していることとなる。ま
た、酵素反応部、混合部、検出部を同一基板上に構成
し、酵素反応部から検出部までの距離を最短にすること
により、物質の拡散や発光の減衰を最小限に抑えること
が可能となった。
ともと試料中に含まれていた基質（測定対象物質）量に
依存しているので、結局、測定された電気信号の強弱
は、測定対象物質の濃度を反映していることとなる。ま
た、酵素反応部、混合部、検出部を同一基板上に構成
し、酵素反応部から検出部までの距離を最短にすること
により、物質の拡散や発光の減衰を最小限に抑えること
が可能となった。
【００１３】
【実施例】以下に、この発明の実施例を図面に基づいて
説明する。 （実施例１）図１は本発明の定量分析装置の模式図であ
る。
説明する。 （実施例１）図１は本発明の定量分析装置の模式図であ
る。
【００１４】図１において、試料導入器８により一定量
計量された試料１は、キャリヤー９中に導入され、ポン
プ７により酵素反応部３へと送られる。酵素反応部３で
試料中に含まれるある特定物質が酵素反応により消費さ
れ、別の物質が生成する。この酵素反応生成物は混合部
４へと送られ、ポンプ７により送られてくる化学発光試
薬２と混合し、化学発光反応が起こる。その後混合され
た液体は検出部５へと移動する。検出部５を流れていく
間に、外部に設置したフォトダイオード６により化学発
光量が電気信号へと変換される。この電気信号の強度
は、試料１中に含まれていた測定対象物質の濃度を反映
しているため、定量を行うことが可能である。
計量された試料１は、キャリヤー９中に導入され、ポン
プ７により酵素反応部３へと送られる。酵素反応部３で
試料中に含まれるある特定物質が酵素反応により消費さ
れ、別の物質が生成する。この酵素反応生成物は混合部
４へと送られ、ポンプ７により送られてくる化学発光試
薬２と混合し、化学発光反応が起こる。その後混合され
た液体は検出部５へと移動する。検出部５を流れていく
間に、外部に設置したフォトダイオード６により化学発
光量が電気信号へと変換される。この電気信号の強度
は、試料１中に含まれていた測定対象物質の濃度を反映
しているため、定量を行うことが可能である。
【００１５】図２は本発明の定量分析装置の具体的な構
造の例を示す図である。本発明の定量分析装置はシリコ
ン基板１８とガラス基板１７が接合した構造となってい
る。シリコン基板上にはキャリヤー導入口１０、化学発
光試薬導入口１１、酵素反応部１２、混合部１３、およ
びフローセル部１４が設けられている。酵素反応部１２
中には表面に酵素を固定化した酵素固定化充填剤１５が
充填されている。また、化学発光を電気信号に変換する
ためのフォトダイオード１６がフローセル部の真上に設
置されている。測定時には、キャリヤー導入口から試料
を含むキャリヤーをポンプにより導入する。酵素反応部
で酵素反応により試料中の測定対象物の量に依存した酵
素反応生成物が生成し、混合部において化学発光試薬導
入口より導入された化学発光試薬と混合する。
造の例を示す図である。本発明の定量分析装置はシリコ
ン基板１８とガラス基板１７が接合した構造となってい
る。シリコン基板上にはキャリヤー導入口１０、化学発
光試薬導入口１１、酵素反応部１２、混合部１３、およ
びフローセル部１４が設けられている。酵素反応部１２
中には表面に酵素を固定化した酵素固定化充填剤１５が
充填されている。また、化学発光を電気信号に変換する
ためのフォトダイオード１６がフローセル部の真上に設
置されている。測定時には、キャリヤー導入口から試料
を含むキャリヤーをポンプにより導入する。酵素反応部
で酵素反応により試料中の測定対象物の量に依存した酵
素反応生成物が生成し、混合部において化学発光試薬導
入口より導入された化学発光試薬と混合する。
【００１６】そこで生じた化学発光が、フローセル部を
流れていく間に外部に設置したフォトダイオードにより
測定される。ここでは、発光量を測定するためにフォト
ダイオードを用いたが、フォトダイオードのかわりに光
電子増倍管を用いても同様の測定を行うことができる。
流れていく間に外部に設置したフォトダイオードにより
測定される。ここでは、発光量を測定するためにフォト
ダイオードを用いたが、フォトダイオードのかわりに光
電子増倍管を用いても同様の測定を行うことができる。
【００１７】（実施例２）本実施例では、本発明の定量
分析装置を用いて酵素反応部にグルコースオキシダーゼ
を固定化した充填剤を充填し、試料中に含まれるグルコ
ースの定量を行った結果について説明する。
分析装置を用いて酵素反応部にグルコースオキシダーゼ
を固定化した充填剤を充填し、試料中に含まれるグルコ
ースの定量を行った結果について説明する。
【００１８】図１において、表面にグルコースオキシダ
ーゼを３−アミノプロピルトリエトキシシランとグルタ
ルアルデヒドを用いてシッフ結合により固定化した直径
１００μｍのガラスビーズを酵素反応部３に充填し、キ
ャリヤー９にｐＨ７のリン酸緩衝溶液をポンプ７により
２０μｌ／ｍｉｎで、化学発光試薬２に０．４７ｍｍｏ
ｌ／ｌのルミノールと６．７ｍｍｏｌ／ｌのフェリシア
ン化カリウムを含む溶液を使用し、ポンプ７により６０
μｌ／ｍｉｎで供給した。試料導入器８では０．２μｌ
のサンプルを計量し、キャリヤー中に導入した。種々の
グルコース濃度に対する応答値をグラフ化した本発明の
定量分析装置の検量線を図３に示す。１０ｍｇ／ｄｌ〜
３００ｍｇ／ｄｌの濃度範囲で、グルコース濃度と応答
値の間に直線関係が成り立った。
ーゼを３−アミノプロピルトリエトキシシランとグルタ
ルアルデヒドを用いてシッフ結合により固定化した直径
１００μｍのガラスビーズを酵素反応部３に充填し、キ
ャリヤー９にｐＨ７のリン酸緩衝溶液をポンプ７により
２０μｌ／ｍｉｎで、化学発光試薬２に０．４７ｍｍｏ
ｌ／ｌのルミノールと６．７ｍｍｏｌ／ｌのフェリシア
ン化カリウムを含む溶液を使用し、ポンプ７により６０
μｌ／ｍｉｎで供給した。試料導入器８では０．２μｌ
のサンプルを計量し、キャリヤー中に導入した。種々の
グルコース濃度に対する応答値をグラフ化した本発明の
定量分析装置の検量線を図３に示す。１０ｍｇ／ｄｌ〜
３００ｍｇ／ｄｌの濃度範囲で、グルコース濃度と応答
値の間に直線関係が成り立った。
【００１９】さらに、この結果に基づき血清中のグルコ
ースの測定を行ったところ、市販の臨床検査用グルコー
ス測定キットとよい相関をもつ測定値を得ることができ
た。また、１回の測定に要する時間は約１分であり、こ
の時使用するキャリヤーの量は約２０μｌ、化学発光試
薬の量は約６０μｌであった。
ースの測定を行ったところ、市販の臨床検査用グルコー
ス測定キットとよい相関をもつ測定値を得ることができ
た。また、１回の測定に要する時間は約１分であり、こ
の時使用するキャリヤーの量は約２０μｌ、化学発光試
薬の量は約６０μｌであった。
【００２０】（実施例３）本実施例では、本発明の定量
分析装置を用いて酵素反応部に乳酸オキシダーゼを固定
化した充填剤を充填し、試料中に含まれる乳酸の定量を
行った結果について説明する。
分析装置を用いて酵素反応部に乳酸オキシダーゼを固定
化した充填剤を充填し、試料中に含まれる乳酸の定量を
行った結果について説明する。
【００２１】図１において、表面に乳酸オキシダーゼを
３−アミノプロピルトリエトキシシランとグルタルアル
デヒドを用いてシッフ結合により固定化した直径１００
μｍのガラスビーズを酵素反応部３に充填し、キャリヤ
ー９にｐＨ７のリン酸緩衝溶液をポンプ７により２０μ
ｌ／ｍｉｎで、化学発光試薬２に０．４７ｍｍｏｌ／ｌ
のルミノールと６．７ｍｍｏｌ／ｌのフェリシアン化カ
リウムを含む溶液を使用し、ポンプ７により６０μｌ／
ｍｉｎで供給した。試料導入器８では０．２μｌのサン
プルを計量し、キャリヤー中に導入した。
３−アミノプロピルトリエトキシシランとグルタルアル
デヒドを用いてシッフ結合により固定化した直径１００
μｍのガラスビーズを酵素反応部３に充填し、キャリヤ
ー９にｐＨ７のリン酸緩衝溶液をポンプ７により２０μ
ｌ／ｍｉｎで、化学発光試薬２に０．４７ｍｍｏｌ／ｌ
のルミノールと６．７ｍｍｏｌ／ｌのフェリシアン化カ
リウムを含む溶液を使用し、ポンプ７により６０μｌ／
ｍｉｎで供給した。試料導入器８では０．２μｌのサン
プルを計量し、キャリヤー中に導入した。
【００２２】種々の乳酸濃度に対する応答値をグラフ化
した本発明の定量分析装置の検量線を図３に示す。４．
５ｍｇ／ｄｌ〜４５ｍｇ／ｄｌの濃度範囲で、乳酸濃度
と応答値の間に直線関係が成り立った。さらに、この結
果に基づき血清中の乳酸の測定を行ったところ、市販の
臨床検査用乳酸測定キットとよい相関をもつ測定値を得
ることができた。また、１回の測定に要する時間は約１
分であり、この時使用するキャリヤーの量は約２０μ
ｌ、化学発光試薬の量は約６０μｌであった。
した本発明の定量分析装置の検量線を図３に示す。４．
５ｍｇ／ｄｌ〜４５ｍｇ／ｄｌの濃度範囲で、乳酸濃度
と応答値の間に直線関係が成り立った。さらに、この結
果に基づき血清中の乳酸の測定を行ったところ、市販の
臨床検査用乳酸測定キットとよい相関をもつ測定値を得
ることができた。また、１回の測定に要する時間は約１
分であり、この時使用するキャリヤーの量は約２０μ
ｌ、化学発光試薬の量は約６０μｌであった。
【００２３】
【発明の効果】本発明の定量分析装置では、酵素反応
部、混合部、検出部を一体化してエッチングにより作製
したため、各部を接続するために必要な死体積を従来の
定量分析装置に比較して小さくするすることができたと
同時に、装置の全容積も小さくすることが可能となっ
た。これにより、微量の試料が死体積で拡散することも
なく、試薬消費量も１回の測定で数十μｌとすることが
できた。また、吸光度検出器などを利用する場合に比較
して光源が不要なため装置の小型化が可能となり、さら
にエッチングで多数個を一括して作製することにより、
作製コストも低減することができた。
部、混合部、検出部を一体化してエッチングにより作製
したため、各部を接続するために必要な死体積を従来の
定量分析装置に比較して小さくするすることができたと
同時に、装置の全容積も小さくすることが可能となっ
た。これにより、微量の試料が死体積で拡散することも
なく、試薬消費量も１回の測定で数十μｌとすることが
できた。また、吸光度検出器などを利用する場合に比較
して光源が不要なため装置の小型化が可能となり、さら
にエッチングで多数個を一括して作製することにより、
作製コストも低減することができた。
【図１】本発明の定量分析装置の模式図である。
【図２】本発明の定量分析装置の構造を具体的に示す図
である。
である。
【図３】本発明の定量分析装置のグルコースに対する検
量線を示す図である。
量線を示す図である。
【図４】本発明の定量分析装置の乳酸に対する検量線を
示す図である。
示す図である。
【図５】酵素フローインジェクション分析装置の模式図
である。
である。
【図６】従来の化学発光検出器の構造を示す模式図であ
る。
る。
１ 試料 ２ 化学発光試薬 ３ 酵素反応部 ４ 混合部 ５ 検出部 ６ フォトダイオード ７ ポンプ ８ 試料導入器 ９ キャリヤー １０ キャリヤー導入口 １１ 化学発光試薬導入口 １２ 酵素反応部 １３ 混合部 １４ フローセル部 １５ 酵素固定化充填剤 １６ フォトダイード １７ ガラス基板 １８ シリコン基板 １９ 混合器 ２０ 渦巻型フローセル ２１ 光電子増倍管
Claims (3)
- 【請求項１】 液体中に含まれる物質を、酵素反応及び
化学発光反応を利用して、化学発光量により定量を行う
分析装置において、酵素反応を行う酵素反応部、酵素反
応生成物と化学発光試薬とを混合して化学発光反応を誘
発させる混合部、化学発光の検出を行う検出部から構成
され、前記酵素反応部と前記混合部と前記検出部および
これらを相互に接続する流路を同一基板上に一対で形成
し、前記酵素反応部が、前記基板に設けた凹部に酵素を
固定化した媒体を設置した構造を有し、前記酵素反応部
を液体が通過することにより液対中に含まれる特定の物
質から化学発光反応を生じせしめる化学発光原物質を生
成し、前記化学発光原物質が前記混合部に移送され、前
記混合部において前記化学発光原物質と化学発光試薬が
混合され、さらに前記検出部において化学発光量が測定
される構造を有することを特徴とする定量分析装置。 - 【請求項２】 前記基板がシリコン単結晶板とガラス板
を接着した基板であり、前記酵素反応部、前記混合部、
前記流路が前記シリコン単結晶板上にエッチングにより
製作された請求項１記載の定量分析装置。 - 【請求項３】 前記検出部が前記シリコン単結晶基板上
にエッチングにより製作したフローセル、および外部に
設置したフォトダイオードもしくは光電子増倍管で構成
される請求項２記載の定量分析装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04188243A JP3074361B2 (ja) | 1992-07-15 | 1992-07-15 | 定量分析装置 |
| DE19934323277 DE4323277B4 (de) | 1992-07-15 | 1993-07-12 | Analysator |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04188243A JP3074361B2 (ja) | 1992-07-15 | 1992-07-15 | 定量分析装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0630763A JPH0630763A (ja) | 1994-02-08 |
| JP3074361B2 true JP3074361B2 (ja) | 2000-08-07 |
Family
ID=16220293
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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