CN110174396A - 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法 - Google Patents

一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110174396A
CN110174396A CN201910400805.8A CN201910400805A CN110174396A CN 110174396 A CN110174396 A CN 110174396A CN 201910400805 A CN201910400805 A CN 201910400805A CN 110174396 A CN110174396 A CN 110174396A
Authority
CN
China
Prior art keywords
malathion
cufe
mncs
added
colorimetric
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910400805.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110174396B (zh
Inventor
周长利
刘汉彪
陈培培
刘建辉
夏方诠
田栋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Jinan
Original Assignee
University of Jinan
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Jinan filed Critical University of Jinan
Priority to CN201910400805.8A priority Critical patent/CN110174396B/zh
Publication of CN110174396A publication Critical patent/CN110174396A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110174396B publication Critical patent/CN110174396B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G01N21/3151—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths using two sources of radiation of different wavelengths
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/308—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells at least partially made of carbon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/48—Systems using polarography, i.e. measuring changes in current under a slowly-varying voltage
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/314—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry with comparison of measurements at specific and non-specific wavelengths
    • G01N2021/3155—Measuring in two spectral ranges, e.g. UV and visible

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明涉及农残分析测定技术领域，特别是涉及一种比色和电致化学发光双模式适配体传感器以及用其测定马拉硫磷的方法，包括双模式传感器制备步骤和使用该传感器测定马拉硫磷的操作方法等；这种双模式传感器，使用96孔板，操作简便，目视检测快捷，可进行定性和半定量检测；借助MPI‑B型多参数化学发光分析测试系统和紫外可见光谱仪可检测马拉硫磷含量，并对结果相互印证，准确度高；本测定方法有效降低了单一模式产生的误差和误报率，共存物质的干扰小，选择性好，灵敏度高。

Description

一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的 方法
技术领域
本发明涉及农残分析测定技术领域，特别是涉及一种基于比色和电致化学发光双模式传感器以及用其测定马拉硫磷的方法，包括双模式传感器制备步骤和使用该传感器测定马拉硫磷的操作方法等；这种双模式传感器可通过目视比色进行定性和半定量检测；可借助MPI-B型多参数化学发光分析测试系统和紫外可见光谱仪检测马拉硫磷含量，并对结果相互印证；有效降低了单一模式产生的误差和误报率。
背景技术
在农药残留常规分析方法中，色谱法及其联用技术具有较高的灵敏度并且能够实现多组分测定，依然占有重要地位。但这些方法普遍存在设备昂贵、技术含量高，样品的分离提纯等预处理过程繁琐耗时，检测成本高，不便于推广应用等缺陷。特别是在现场检测、样品筛选等工作中，亟需低成本、灵敏、快速检测农药残留的种类、含量，并进行评价。因此高灵敏度、高稳定性且对农药及其代谢物有特异性响应的检测技术成为研究热点。基于传感器技术的有机磷农药残留检测技术近两年来发展迅速，引起了越来越广泛的关注。酶型生物传感器是检测农药残留最常见的电化学传感器之一，目前可以用来进行农药残留检测的酶型电化学传感器的构建主要依赖于胆碱酯酶、有机磷水解酶等。虽然酶型生物传感器拥有选择性强、灵敏度高的优点，但酶的固定化技术，往往程序繁琐，且需要复杂的固定化基质材料以最大化程度保证酶的生理活性，这为保持传感器的稳定性增加了难度。光化学传感技术，特别是比色分析，可通过肉眼观察直接辨别和判断，检测方法更加直观，在农药残留分析检测领域受到青睐。目前，利用纳米粒子团聚作用如纳米金，进行农残比色检测应用较多。一些显色剂如四甲基联苯胺、亚甲基蓝常用作农残比色试剂，通过各种途径或反应，如利用抗坏血酸与亚甲基蓝的反应达到比色检测目的。但是，在抗坏血酸与亚甲基蓝比色体系中，需要外部加入抗坏血酸，这很容易被外部复杂环境所影响，极大的限制了该体系的准确性和选择性。
在农药残留分析检测领域，大多涉及痕量检测，又必须适应不同基体和大量共存物等复杂因素，是一项复杂系统的痕量分析。而目前普遍采用单一传感技术检测模式，使检测结果不确定性升高，误报率增加。
发明内容
本发明的目的就是针对上述农残传感分析中的缺点，构建一种能够用于快速、准确、高灵敏和选择性检测农药残留马拉硫磷的比色和电致化学发光双模式适配体传感器。本发明要解决的技术问题是设计功能材料高效负载马拉硫磷适配体和碱性磷酸酶ALP，通过酶水解反应生成抗坏血酸，抗坏血酸既作为电致化学发光模式中鲁米诺的共反应剂过氧化氢的抑制剂，又作为比色模式中亚甲基蓝的催化剂，使传感器具有相对独立的比色和电致化学发光两种信号传导模式，为农残马拉硫磷的检测提供了一种可行的新方法。
本发明的技术方案为：采用磁性纳米晶团簇CuFe2O4 MNCs负载马拉硫磷适配体和碱性磷酸酶ALP，球形CuFe2O4 MNCs与磷酸酶具有很好的结合能力，可以高效固载ALP，最大程度保持其活性。负载其上的马拉硫磷适配体Apt与96孔板固载的互补链结合而构筑成适配体传感器。ALP与L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐发生水解反应，产生抗坏血酸。当马拉硫磷存在时，酶水解反应受到抑制，抗坏血酸浓度降低，从而引起三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极+H2O2电致发光体系发光强度的变化和亚甲基蓝比色体系颜色的变化。具体方案为：
1. 双模式适配体传感器，有相对独立的比色和电致化学发光两种信号传导模式；抗坏血酸既作为电致化学发光模式抑制剂，又作为比色模式中催化剂；磁性纳米晶团簇CuFe2O4MNCs负载马拉硫磷适配体和碱性磷酸酶ALP；
2. 所述的CuFe2O4 MNCs，其制备方法如下：
（1）称取0.3197 g CuCl2·2H2O和1.3500 g FeCl3·6H2O溶于30.0 mL乙二醇，剧烈搅拌10 min；再加入2.700 g NaAc和0.75 g聚乙二醇4000，剧烈搅拌混合物30 min，然后密封在高压釜中；
（2）将高压釜加热至200 ℃并保持8 h，然后冷却至室温，用超纯水离心洗涤并重新分散；
3. 所述的三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极，其制备方法如下：
（1）在搅拌下，将1.2 mL 0.1 mol/L的硼氢化钠加入到40.0 mL含0.25 mmol/L的柠檬酸钠·二水和0.25 mmol/L的HAuCl4的混合溶液中，老化6 h，得到Au NPs；
（2）将1.5 mL 0.1mol/L盐酸多巴胺加入到Au NPs的溶液中震荡30 min，然后静置沉淀72 h后离心洗涤得到三维金凝胶；
（3）移取5.5 mL上述三维金凝胶溶液与0.5 mL、60 mmol/L鲁米诺混合震荡过夜后，离心洗涤，得三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物，用超纯水重新分散；
（4）移取5.0 μL三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物分散液，滴涂到已处理好的玻碳电极表面，晾干备用；
4. 所述双模式适配体传感器，其制备方法如下：
（1）将50.0 μL、1 mg/mL盐酸多巴胺滴入96孔板中，并在37℃下孵育30 min；
（2）氮气氛干燥后，将20.0 µL、0.1 µmol/L互补链和30.0 µL戊二醛加入到96孔板中，37 ℃下孵化1h；以10.0 µL、10 µmol/L 的6-巯基己醇封闭非特异性结合位点；
（3）移取20.0 µL Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs于96孔板中，37 ℃下孵化1h；
（4）将不同浓度的马拉硫磷滴涂于上述构建的适配体传感器的表面，在37 °C下孵化1h，再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗；
（5）将200.0 µL含100 mmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的Tris-HCl溶液加入到上述96孔板中，酶水解反应35 min，得酶水解液；
5. 所述 Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs，其制备方法如下：
（1）取1.0 mL、10 mg/mL 方案4所述的CuFe2O4 MNCs与9.0 mL、0.25 mmol/L Au NPs混合，搅拌过夜后离心洗涤，得到Au NPs@CuFe2O4 MNCs复合材料；
（2）将300.0 µL、100 µg/mL碱性磷酸酶ALP、200.0 µL 1 µmol/L马拉硫磷适配体Apt加入到125.0 µL、16.3 mg/mL Au NPs@CuFe2O4 MNCs溶液中，孵化过夜，离心洗涤并重新分散到1.0 mL Tris-HCl中存储备用；
6. 所述的比色和电致发光双模式适配体传感器用于检测马拉硫磷，方法如下：
（1）电致化学发光模式：移取技术方案3中步骤（5）所得酶水解液20.0 µL，加入到含有0.25 mol/L H2O2的pH 7.4 PBS缓冲溶液的电解池中，以三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，在0~0.7 V电位区间内进行循环伏安扫描，光电倍增管300 V，记录得到的光强；
（2）比色模式：移取技术方案3中步骤（5）所得酶水解液180.0 µL，加入到含0.1 mol/LHCl和1.0×10-4 mol/L亚甲基蓝的混合溶液中，置于暗处5 min；目视比色进行定性和半定量分析；同时用紫外可见光谱仪测定吸光度。
本发明的有益效果为：
1.磁性纳米晶团簇CuFe2O4 MNCs与磷酸酶具有很好的结合能力，采用CuFe2O4 MNCs负载碱性磷酸酶，可以高效固载ALP，最大程度保持其活性；
2.体系中的抗坏血酸由传感器界面磷酸酶和底物水解反应而得，有效避免了外部加入抗坏血酸易于氧化变质，失去作用的缺陷，提高了比色检测敏感度和抗干扰能力；
3. 首次采用三维金凝胶/鲁米诺复合材料提高了鲁米诺发光性能；
4. 首次提出马拉硫磷双模式检测技术，目视检测快捷，可进行定性和半定量检测，借助仪器可对测定结果相互印证，准确度高；
5.双模式检测技术有效降低了单一模式产生的误差和误报率，共存物质的干扰小，选择性好，灵敏度高；
6.利用96孔板制备传感器，操作简便快捷。
附图说明：
图1所示为电致化学发光传感器的光强图 (A) 和线性关系 (B)
其中，1--10-9，2--10-10，3--10-11，4--10-12，5--10-13，6--10-14，7--10-15mol/L
图2所示为比色传感器的紫外吸收光谱图 (A)和线性关系 (B)
其中，1--10-6，2--10-7，3--10-8，4--10-9，5--10-10，6--10-11，7--10-12mol/L
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。
实施例1 CuFe2O4 MNCs的制备：
（1）称取0.3197 g CuCl2·2H2O和1.3500 g FeCl3·6H2O溶于30.0 mL乙二醇，剧烈搅拌10 min；再加入2.700 g NaAc和0.75 g聚乙二醇4000，剧烈搅拌混合物30 min，然后密封在高压釜中；
（2）将高压釜加热至200℃并保持8 h，然后冷却至室温，用超纯水离心洗涤并重新分散。
实施例2 Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs的制备：
（1）取1.0 mL、10 mg/mL CuFe2O4 MNCs与9.0 mL、0.25 mmol/L Au NPs混合，搅拌过夜后离心洗涤，得到Au NPs@CuFe2O4 MNCs复合材料；
（2）将300.0 µL、100 µg/mL碱性磷酸酶ALP、200.0 µL 1 µmol/L马拉硫磷适配体Apt加入到125.0 µL、16.3 mg/mL Au NPs@CuFe2O4 MNCs溶液中，孵化过夜，离心洗涤并重新分散到1.0 mL Tris-HCl中存储备用。
实施例3 三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极的制备：
（1）在搅拌下，将1.2 mL 0.1 mol/L的硼氢化钠加入到40.0 mL含0.25 mmol/L的柠檬酸钠·二水和0.25 mmol/L的HAuCl4的混合溶液中，老化6 h，得到Au NPs；
（2）然后将1.5 mL 0.1mol/L盐酸多巴胺加入到Au NPs的溶液中震荡30 min，然后静置沉淀72 h后离心洗涤得到三维金凝胶；
（3）移取5.5 mL上述三维金凝胶溶液与0.5 mL、60 mmol/L鲁米诺混合震荡过夜后，离心洗涤，得三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物，用超纯水重新分散；
（4）移取5.0 μL三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物分散液，滴涂到已处理好的玻碳电极表面，晾干备用。
实施例4 适配体传感器制备：
（1）将50.0 μL、1 mg/mL盐酸多巴胺滴入96孔板中，并在37℃下孵育30 min；
（2）氮气氛干燥后，将20.0 µL、0.1 µmol/L互补链和30.0 µL戊二醛加入到96孔板中，37℃下孵化1h；以10.0 µL、10 µmol/L 的6-巯基己醇封闭非特异性结合位点；
（3）移取20.0 µL Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs于96孔板中，37℃下孵化1h；
（4）将不同浓度的马拉硫磷滴涂于上述构建的适配体传感器的表面，在37°C下孵化1h，再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗；
（5）将200.0 µL含100 mmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的Tris-HCl溶液加入到上述96孔板中，酶水解反应35 min，得酶水解液。
实施例5 比色和电致发光双模式适配体传感器用于检测马拉硫磷的方法：
（1）电致化学发光模式：移取酶水解液20.0 µL，加入到含有0.25 mol/L H2O2的pH 7.4PBS缓冲溶液的电解池中，以三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，通过MPI-B型多参数化学发光分析测试系统，在0~0.7 V电位区间内进行循环伏安扫描，光电倍增管300 V，记录得到的光强；绘制工作曲线；同时测定传感器线性范围和检测限；结果表明，电致化学发光强度随马拉硫磷浓度增加而增大，与其浓度的对数呈正相关，线性方程为I=28570+1693.3lgc，相关系数r=0.9935，线性范围为1.0×10-9 ~1.0×10-15 mol/L，检出限为5.0×10-16 mol/L；
（2）比色模式：移取酶水解液180.0 µL，加入到含0.1 mol/L HCl和1.0×10-4 mol/L亚甲基蓝的混合溶液中，置于暗处5 min；目视比色进行定性和半定量分析；同时用紫外可见光谱仪测定吸光度，绘制工作曲线；同时测定传感器线性范围和检测限；结果表明，紫外光谱强度与马拉硫磷浓度的的对数呈正相关，线性方程为A=1.76+0.134lgc，相关系数r=0.988，线性范围为1.0×10-6 ~ 1.0×10-12 mol/L，检出限为7.0×10-13 mol/L。
实施例6 适配体传感器使用条件的优化
本发明对H2O2的浓度、酶解反应时间及L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的浓度进行了条件优化，结果表明，当电致发光检测底液中H2O2的浓度由5增大到25 mmol/L时，电致化学发光强度随其浓度的增加而增大；其后，电致化学发光强度随着浓度的增大而减小；当酶解液中L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的浓度由20增大到120 mmol/L时，随其浓度增加，电致化学发光强度增大，比色体系吸光度降低；其后，发光强度和吸光度几乎没有变化；在酶解反应时间为5-30 min时，抗坏血酸的浓度随着酶解反应时间的增加而增大；随时间增加，电致化学发光强度增大，比色体系吸光度降低；35 min后，发光强度和吸光度几乎没有变化；选择25mmol/L H2O2，120 mmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐和35 min酶解反应时间为最优条件。

Claims (9)

1.一种比色和电致化学发光双模式适配体传感器，其特征在于，该传感器有相对独立的比色和电致化学发光两种信号传导模式；抗坏血酸既作为电致化学发光模式抑制剂，又作为比色模式中催化剂；磁性纳米晶团簇CuFe2O4 MNCs负载马拉硫磷适配体和碱性磷酸酶ALP。
2.权利要求1所述的抗坏血酸，其特征在于，抗坏血酸由碱性磷酸酶的水解反应生成。
3.权利要求1所述的电致化学发光模式，其特征在于，以三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极。
4.权利要求1所述的CuFe2O4 MNCs，其特征在于，其制备方法如下：
（1）称取0.3197 g CuCl2·2H2O和1.3500 g FeCl3·6H2O溶于30.0 mL乙二醇，剧烈搅拌10 min；再加入2.700 g NaAc和0.75 g聚乙二醇4000，剧烈搅拌混合物30 min，然后密封在高压釜中；
（2）将高压釜加热至200 ℃并保持8 h，然后冷却至室温，用超纯水离心洗涤并重新分散。
5.权利要求3所述的三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极，其特征在于，其制备方法如下：
（1）在搅拌下，将1.2 mL 0.1 mol/L的硼氢化钠加入到40.0 mL含0.25 mmol/L的柠檬酸钠·二水和0.25 mmol/L的HAuCl4的混合溶液中，老化6 h，得到Au NPs；
（2）将1.5 mL、0.1mol/L盐酸多巴胺加入到Au NPs的溶液中震荡30 min，然后静置沉淀72 h后离心洗涤得到三维金凝胶；
（3）移取5.5 mL上述三维金凝胶溶液与0.5 mL、60 mmol/L鲁米诺混合震荡过夜后，离心洗涤，得三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物，用超纯水重新分散；
（4）移取5.0 μL三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物分散液，滴涂到已处理好的玻碳电极表面，晾干备用。
6.权利要求1所述传感器，其特征在于，其制备方法如下：
（1）将50.0 μL、1 mg/mL盐酸多巴胺滴入96孔板中，并在37 ℃下孵育30 min；
（2）氮气氛干燥后，将20.0 µL、0.1 µmol/L互补链和30.0 µL戊二醛加入到96孔板中，37 ℃下孵化1h；以10.0 µL、10 µmol/L 的6-巯基己醇封闭非特异性结合位点；
（3）移取20.0 µL Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs于96孔板中，37 ℃下孵化1h；
（4）将不同浓度的马拉硫磷滴涂于上述构建的适配体传感器的表面，在37 °C下孵化1h，再用pH 7.4的PBS缓冲液冲洗；
（5）将200.0 µL含100 mmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐的Tris-HCl溶液加入到上述96孔板中，酶水解反应35 min，得酶水解液。
7.权利要求6所述 Apt/ALP-Au NPs@CuFe2O4 MNCs，其特征在于，制备方法如下：
（1）取1.0 mL、10 mg/mL 权利要求4所述的CuFe2O4 MNCs与9.0 mL、0.25 mmol/L AuNPs混合，搅拌过夜后离心洗涤，得到Au NPs@CuFe2O4 MNCs复合材料；
（2）将300.0 µL、100 µg/mL碱性磷酸酶ALP、200.0 µL 1 µmol/L马拉硫磷适配体Apt加入到125.0 µL、16.3 mg/mL Au NPs@CuFe2O4 MNCs溶液中，孵化过夜，离心洗涤并重新分散到1.0 mL Tris-HCl中存储备用。
8.权利要求1所述的比色和电致发光双模式适配体传感器用于检测马拉硫磷。
9.根据权利要求8所述的双模式适配体传感器检测马拉硫磷，其特征在于，方法如下：
（1）电致化学发光模式：取权利要求6中步骤（5）所得酶水解液20.0 µL，加入到含有0.25 mol/L H2O2的pH 7.4 PBS缓冲溶液的电解池中，以三维金凝胶/鲁米诺纳米复合物修饰玻碳电极为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为辅助电极，在0~0.7 V电位区间内进行循环伏安扫描，光电倍增管300 V，记录得到的光强；
（2）比色模式：取权利要求6中步骤（5）所得酶水解液180.0 µL，加入到含0.1 mol/LHCl和1.0×10-4 mol/L亚甲基蓝的混合溶液中，置于暗处5 min；目视比色进行定性和半定量分析；同时用紫外可见光谱仪测定吸光度。
CN201910400805.8A 2019-05-15 2019-05-15 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法 Expired - Fee Related CN110174396B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910400805.8A CN110174396B (zh) 2019-05-15 2019-05-15 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910400805.8A CN110174396B (zh) 2019-05-15 2019-05-15 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110174396A true CN110174396A (zh) 2019-08-27
CN110174396B CN110174396B (zh) 2021-11-16

Family

ID=67690983

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910400805.8A Expired - Fee Related CN110174396B (zh) 2019-05-15 2019-05-15 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110174396B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239118A (zh) * 2020-01-22 2020-06-05 南京海关工业产品检测中心 基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法
CN113252631A (zh) * 2021-05-13 2021-08-13 青岛农业大学 双重检测丙溴磷农药的荧光比色核酸适配体传感器、其制备方法与应用
CN116550402A (zh) * 2023-07-03 2023-08-08 中国农业大学 一种快速检测马拉硫磷的3d纸基微流控装置与方法
CN117761009A (zh) * 2024-01-03 2024-03-26 莒南县计量测试所 一种食品农药残留的快速检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106501240A (zh) * 2016-11-16 2017-03-15 西南大学 具有双信号源的电致化学发光传感器及其制备方法和应用
CN107340245A (zh) * 2017-05-23 2017-11-10 宁波大学 一种检测食品中土霉素的比色检测探针及其检测方法
CN108562577A (zh) * 2018-05-09 2018-09-21 江苏大学 一种有机磷农药残留量的比色检测方法
CN108828030A (zh) * 2018-06-19 2018-11-16 南昌大学 基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法
WO2019043187A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Somaprobes Sl SIDE FLOW ASSAY FOR DETECTING THE PRESENCE OF A MAMMALIAN CELL OR SPECIFIC BACTERIUM IN A BIOLOGICAL SAMPLE

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106501240A (zh) * 2016-11-16 2017-03-15 西南大学 具有双信号源的电致化学发光传感器及其制备方法和应用
CN107340245A (zh) * 2017-05-23 2017-11-10 宁波大学 一种检测食品中土霉素的比色检测探针及其检测方法
WO2019043187A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Somaprobes Sl SIDE FLOW ASSAY FOR DETECTING THE PRESENCE OF A MAMMALIAN CELL OR SPECIFIC BACTERIUM IN A BIOLOGICAL SAMPLE
CN108562577A (zh) * 2018-05-09 2018-09-21 江苏大学 一种有机磷农药残留量的比色检测方法
CN108828030A (zh) * 2018-06-19 2018-11-16 南昌大学 基于AuNPs增强Na2S2O8/O2的ECL效应的蛋白激酶检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XU JINMENG等: ""Colorimetric and Electrochemiluminecence Dual Mode Sensing of Lead Ion Based on Integrated Lab-on-Paper Device"", 《ACS APPLIED MATERIALS&INTERFACES》 *
陈培培等: ""Dual-Signaling Amplification Electrochemical Aptasensor Based on Hollow Polymeric Nanospheres for Acetamiprid Detection"", 《ACS APPLIED MATERIALS&INTERFACES》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111239118A (zh) * 2020-01-22 2020-06-05 南京海关工业产品检测中心 基于碱性磷酸酶触发的荧光和比色双读数传感器检测有机磷农药的分析方法
CN113252631A (zh) * 2021-05-13 2021-08-13 青岛农业大学 双重检测丙溴磷农药的荧光比色核酸适配体传感器、其制备方法与应用
CN116550402A (zh) * 2023-07-03 2023-08-08 中国农业大学 一种快速检测马拉硫磷的3d纸基微流控装置与方法
CN116550402B (zh) * 2023-07-03 2023-09-22 中国农业大学 一种快速检测马拉硫磷的3d纸基微流控装置与方法
CN117761009A (zh) * 2024-01-03 2024-03-26 莒南县计量测试所 一种食品农药残留的快速检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110174396B (zh) 2021-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110174396A (zh) 一种比色和电致发光双模式适配体传感器及测定马拉硫磷的方法
Jin et al. Construction of multienzyme-hydrogel sensor with smartphone detector for on-site monitoring of organophosphorus pesticide
Wang et al. A highly selective turn-on near-infrared fluorescent probe for hydrogen sulfide detection and imaging in living cells
CN102375021B (zh) 一种采用dna为探针的电化学检测环境污染物方法
CN110297023B (zh) 一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN110108679A (zh) 一种基于铜掺杂碳纳米点的有机磷农药无酶比率荧光检测新方法
CN110231335A (zh) 一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用
Liu et al. Acetylcholinesterase-catalyzed silver deposition for ultrasensitive electrochemical biosensing of organophosphorus pesticides
CN110441295A (zh) 一种基于铁蛋白封装Ir(ppy)3的生物传感器制备方法
Wang et al. A novel sensing platform for the determination of alkaline phosphatase based on SERS-fluorescent dual-mode signals
CN110455786A (zh) 一种基于CeO2@SnS2促进鲁米诺电致化学发光传感器的制备方法
Qu et al. Determination of butyrylcholinesterase activity based on thiamine luminescence modulated by MnO2 nanosheets
Li et al. Visual detection of acid phosphatase based on hollow mesoporous manganese dioxide nanospheres
Xu et al. A microdots array-based fluoremetric assay with superwettability profile for simultaneous and separate analysis of iron and copper in red wine
Ran et al. A fluorescent and colorimetric dual-channel sensor based on acid phosphatase–triggered blocking of internal filtration effect
CN112730367B (zh) 一种基于便携式智能终端的多信号光谱传感平台对碱性磷酸酶的测定方法及装置
CN114062333A (zh) Zif-8包覆金纳米簇复合材料的应用、有机磷的检测方法
CN107238598B (zh) 基于壳聚糖-铂模拟氧化酶的酸性磷酸酶测定方法
CN113607792A (zh) 一种血脂快速检测仪及检测方法
CN108896750A (zh) 一种BSA-Au/Ag NCs/OPD/HRP比例型荧光传感器的制备方法和用途
Chen et al. Nano-encapsulant of ascorbic acid-loaded apoferritin-assisted photoelectrochemical sensor for protease detection
Salinas-Castillo et al. Immobilization of a trienzymatic system in a sol–gel matrix: A new fluorescent biosensor for xanthine
CN110186912A (zh) 一种基于硫代胆碱共反应促进剂电致化学发光适配体传感器及测定毒死蜱的方法
CN112557384B (zh) 一种基于比色分析的硫化氢检测方法及应用
CN109946355A (zh) 一种检测肿瘤标志物的电化学发光方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20211116