JPH01238536A - 動脈の血栓症的閉塞または塞栓症を阻止するための医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、血漿から誘導されたか、または組み換えで製
造された、活性化蛋白質Ｃ（ＡＰＣ）の単独または血栓
溶解剤との組み合わせによる動脈の血栓症的閉塞または
塞栓症の阻止に関する。

従来技術 外科的方法の多くは、静脆および動脈の血栓症および塞
栓症の危険を伴う。手術中または手術後の症例における
最近の抗血小板剤または繊維素溶解剤の使用は、ひどい
出血を併発しうる。そのため、これらの薬剤の使用には
余分の注意が要る。

動脈血栓症を併発している疾病においても、抗血栓症お
よび／または繊維素溶解剤の使用は、心筋梗塞症の血栓
溶解処置中の出血または再閉塞、外科手術のあとの出血
または血栓症、および移植または他の心臓・血管補綴機
器を使う外科手術のあとの血栓症のような好ましくない
副次効果を有する。

そのため、出血の危険なしに同時に抗凝固性、抗血小板
性および繊維素溶解性であるような抗血栓症薬剤に対す
る需要がある。ＡＰＣは凝固を阻止し繊維素溶解を促進
するので、生理学的坑凝固剤のなかでは独特である。Ａ
ＰＣはトロンビンで仲介される血小板の活性化ならびに
フィブリンの生成を阻止し、こうしておもに血小板とフ
ィブリンで造られる動脈血栓症の生成を阻止する。ＡＰ
Ｃの使用はその作用によって、組織型プラスミノーゲン
活性化因子（、ｔ−ＰＡ）または他の血栓溶解剤の投与
量を減らす。すなわち、ＡＰＣは出血の危険および再閉
塞の危険を少なくして、より安全な血栓溶解を行う。

ＡＰＣは、インビトロでもインビボでも強力な抗凝固性
の酵素である。ＡＰＣは血液凝固の経路およびＦ、Ｖａ
およびＦ、ＶＩｌｌａの蛋白質分解によるトロンビンの
生成を阻害し、また繊維素分解を促進する〔シーガース
ら、トロンボシス・リサーチ、第１Ｓ、４４３−４６０
頁（１９７２年）、キシール、ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・インベスティゲーション、第６４巻、７Ｇｌ−
７６９頁（１９７９年）、マーラー＆グリフイン、ジャ
ーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション、
第６６巻、１１８６−１１８９　（１９８０年）、マー
シーら、グランド、第５９巻、１０６７−１０７２頁（
１９８２年）、クローズ＆コンブ、ニューイングランド
・ジャーナル・オブ・メディシン、第３１４巻、１２９
８−１３０４頁（１９８６年）〕。ＡＰＣは、血管の内
皮上の固定したトロンビンによる活性化によって、その
循環前駆体、すなわちビタミンに依存の蛋白ｌτＣ（Ｐ
Ｃ）から生成する〔マンメンら、Ｔｈｒｏｍｂ。

Ｄｉａｔｈ、　Ｉｌａｅｍｏｒｒｈ、、第５巻、２１８
−２４９頁（１９６０年〕、ステンフロ、ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー、第２５１巻、３
５５−３６３頁（１９７６年）、エムソン＆オーエン、
プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オ
ブ・サイエンスＵＳＡ、第７８巻、２２４９−２２５２
頁（１９８１年）〕。ＡＰＣは蛋白質Ｃの経路を通って
凝固の負のフィードバンク調節の中心の酵素として働く
。ＰＣの遺伝的な不足は静脈の塞栓症を伴う〔グリフイ
ンら、ジャーナル・オプ・クリニカル・インへステイゲ
ーション、第６８巻、１３７０−１３７３　（１９８１
年）、ヘルテイナら、Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｉｌａｅｍｏｓ
ｔ、、第４８巻、１−５頁（１９８２年）、グリフイン
、血栓症および止血に関するセミナー、第１０巻、１６
２−１６６頁（１９８４年）、マルシニャークら、ブラ
ッド、第６５巻、１５−２０頁（１９８５年）〕が、遺
伝的な蛋白質Ｃの不足は動脈の血栓症には有為には付随
しない〔コラ−ら、アルテオスクロレシス、第７巻、４
５６−４６２頁（１９８７年）〕。ＡＰＣの注入は、種
々の動物のモデルにおいて血液の凝固性を減らし、ヒヒ
ヘの大腸菌の注入における凝固作用および致死効果を防
止する〔カンプ＆エムソン、ジャーナル・オブ・クリニ
カル・インへスティゲーション、第６８巻、１’２２１
−１２２８頁（１９８１年）、カンブら、ジャーナル・
オブ・クリニカル・インベスティゲーション、第７０巻
、１２７−１３４頁（１９８２年）、コルフシら、ジャ
ーナル・オプ・クリニカル・インベスティゲーション、
第７４巻、２００−２０４頁（１９８４年）、ティラー
ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲー
ション、第７９巻、９１８−９Ｌ５頁（１９Ｂ　７年）
、バーデイツク＆シャウブ、トロンボシス・リサーチ、
第４５巻、４１３−４１９頁（１９８７年））、ｔ−ｐ
Ａのような血栓溶解剤をヒトに注入すると急性の心筋梗
塞（ＡＭＩ）において有効な血栓溶解をもたらす〔ユス
フら、ヨーロピアン・）、Ｘ−ト・ジャーナル、第６巻
、５５６−５８５頁（１９８５年）、ヨーロッパ共同研
−究グループ、ランセット、８４２−８４７頁（１９８
５年）〕。

発明の構成 本発明は、患者の急性の動脈の血栓症的閉塞、塞栓症、
または冠状動脈、脳または末梢動脈におけるまたは導管
移植における狭窄症を阻止する方法であって、有効量の
、血漿から誘導されるかまたは組み換えで製造した活性
化された蛋白質Ｃを、単独で、または組織プラスミノー
ゲン活性化因子またはその同族体、ウロキナーゼまたは
その同族体、プロウロキナーゼまたはその同族体、スト
レプトキナーゼまたはその同族体、プラスミノーゲンま
たはプラスミンのアシル化物またはその同族体、および
アシル化ストレプトキナーゼ・プラスミノーゲンの複合
体のような血栓溶解剤と併用して、患者に投与すること
を特徴とする。

ｌｆ〜のモデル 動脈血栓症のモデルは、既往の実験で試験され特徴づけ
られている〔ハンソン＆バーカー、ジャーナル・オブ・
クリニカル・インベスティゲーション、第７５！、１５
９１−１５９９頁（１９８５年）、ハンソン＆バーカー
、Ｔｈｒｏｍｂ、　）ｌａｅｍｏｓＬ−ａｓ、第５３巻
、４２３−４２７頁（１９８３年）、ハンソンら、アー
テリオスクレロシス、第５巻、５９５−６０３頁（１９
８５年）〕。このモデルは、動脈血栓の生成に対する薬
剤の影響を判定するのに有用である。１０−１２ｋｇの
雄のヒヒを駆虫し実験に先立って発明者らの動物施設で
４０日以上ｒｙ１察した。内径３　ｍ　ｍのシラステイ
ンクの管を使って大腿部の動脈と静脈の間に永久的な動
静脈側路を作成した。そのあと長さ５ｃｍ、内径４ｍｍ
のダクロン管の導管移植を介在させて血液凝固面の役目
をさせて、７０±２０分で移植部の進行性の閉塞が起こ
るまで連続的な血小板−フィブリンの血栓の生成を誘導
した。このヒヒの動脈血栓症モデルでの組換えで造った
ＡＰＣを使った実験結果は、血漿から誘導したＡＰＣの
場合に類似した結果を示した。

ＡＰＣおよびｔ−ＰＡの１ すべてのヒヒは、ＡＰＣの投与の前に少なくとも、一つ
の対照実験を受けた。ＡＰＣは、全ＰＣ投与量の１／４
ないし１／３を大量−時投与として注射し、残りの２／
４ないし２／３を１時間の連続の注入として与えた。移
植部の介在と大量−時投与は時間−〇で行い、ＡＰＣは
シラステインクの側路の基部側に投与した。実験は三つ
のグループに分けられた。２．０−３．４ｍｇ（合計）
を受ける「低投与量Ｊ　ＡＰＣグループ、ｌ１ｍｇ（合
計）を受ける「高投与量」グループおよび２．１ｍｇの
ＡＰＣプラス１．３　ｍ　ｇのｔ−ＰＡ　（合計）を受
ける組み合わせグループである。

五上旦旦且１ ヒト血漿プロトロンビン複合前の濃縮液（ウィーン、イ
ミュノＡＣ）が、蛋白質Ｃの源泉であった。ＰＣのＬ　
ｉｆｆに対して向けられたモノクローナル抗体（Ｃ３と
いう）が調製され、臭化シアンで活性化されたセファロ
ース４Ｂ（スエーデン、ウプサラ、ファーマシア）に結
合され、緩衝液　（０，０２Ｍ／　　ρ　ト　リ　ス　
、　　０．００２Ｍ／ｊ’ＥＤＴＡ、０．００２　Ｍ　
／　１　ヘンザミジン、０．１Ｍ／ＩＮａｃｌ、０．０
７５ｍＭ／ｆｆｐＡＰＭｓＦ、Ｏ，０２％アジ化Ｎａ、
０．０２％ツイーン２０（ｐＨ７゜４）〕で希釈したプ
ロトロンビン複合ａ濃縮液をカラム上に加えた。ＰＣは
、２Ｍのチオシアネートで溶出し、トリスで緩衝した塩
水（０，ＯＩＭ／！　　ト　　リ　　ス　、　　０．１
４Ｍ／ｊ！ＮａＣｌ　　　　（ｐＨ７，４））に対して
透析した。精製したＰＣは、マーシーら、ブラッド、第
５９巻、１０６７−１０７２頁（１９８２年）に記載さ
れたようにしてトロンビン−セファロースビーズを使っ
て活性化した。

精製したＡＰＣは、５ＤＳ−ＰＡＧＥ上に二つのバンド
として現れ、他の蛋白質による存意の汚！０！（≧５％
）は検出されなかった。若干の調合品においては、凝固
試験で立証される痕跡量のトロンビンがパイオーレック
ス７０での吸着またはモノーＱカラム（スエーデン、ウ
プサラ、ファーマシア）上での急速蛋白質液体クロマト
グラフィー（Ｆ　Ｐ　Ｌ　Ｃ）で分離された。精製ＡＰ
Ｃの活性は、抗凝集活性を測る活性化部分トロンボプラ
スチン時間（ＡＰＴＴ）凝固試験〔マーシーら、ブラッ
ド、第５９巻、１０６７−１０７２頁（１９８２年）〕
および色色原性基体験で測定し、結果は予め精製したＡ
ＰＣ調製品の活性および正常なヒトの血漿にＰＣ活性化
因子であるプロタンク（コネティカット州、グリエッチ
、アメリカン・ディアグノスチ力）の添加で生成したＡ
ＰＣの活性と比較した。

！ＩＡＰＣのアミドゝ”および−ｒ古ｉ、・種々の！（
０，５ないし５マイクロリツトル）のＡＰＣ溶液および
対照の精製ＡＰＣ溶液（０，５ｍｇ　　／　　ｍ　　　
Ｒ）　　　を　０．　　　ＯＩ　　　Ｍ　　　）　　　
リ　　ス　−　］−１ＣＩ　　　、　　　０．　　１　
　４　　ＭＮａＣｌ、１％オポアルブミン、０．０２％
アジ化ナトリウム−、０，０５％ツイーン８０、を含む
・車夏衝液（ｐＨ８，０）２１０マイクロリツトルに加
え、試料をミクロタイター・プレートウェル（コーニン
グ、グイナテックーイミュロン、またはコスクール）に
入れた。色原性基体であるＳ−２４０１の２０マイクロ
リツトル（４，６ｍＭ）を加えたあと、試料の吸光度の
変化を室温でＥＬ　Ｉ　ＳＡプレート・リーダーを使っ
て読み取った。観測値を対照値と比較してＡＰＣのアミ
ド分解活性を得た。

この試験では、正常なヒトの血漿（ｎｈｐ）の希釈は、
蛋白質Ｃ不足の血漿（ｐ　ｃ　ｄ　ｐ　）を希釈剤とし
て使って行った。これらの混合物の１００マイクロリツ
トルを１００マイクロリツトルのプロタック試薬（アメ
リカン・ディアグノスチ力）および１００マイクロリツ
トルのＡＰＴＴ試薬（ゼネラル・ダイアグノスチクス）
と混合した。５分の培養のあと、１００マイクロリツト
ルのＣａＣ１□　（５０ｍＭ）を加えて凝固時間を測定
した。

ｎｈｐは４．０マイクログラム／ｍｌの蛋白ＴＴＣを含
んでいるので、未知のＡＰＣ溶液の活性はｎｈｐの希釈
で得られる標準曲線と比較することによって測定した。

若干の実験ではＡＰＣのアミド分解活性の標準曲線はミ
ブロタックによって活性化されたｎｈｐの希釈を使用し
て作成した。若干の実験では、Ｓ−２４０１の代わりに
Ｓ、２３６６を使用した。ＡＰＣのすべての調製品の比
活性は、１．４　／　ｃ　ｍ　／　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｒ
の消衰係数を使用して２８０ｎｍにおける吸光度で測定
した蛋白質含有量にもとず＜ＡＰＣの値と良く一致した
。

ここに述べたヒトの実験でのＡＰＣの投与は、標準とし
ての正常なヒトの血漿および精製ＡＰＣに比べたＡＰＣ
ｔＡ製品の官能活性を示す。精’Ａ　ＡＰＣ調製品は、
ＡＰＴＴ試験および分解した色原性オリゴペプチド−パ
ラニトロアニリド基体であるＳ−２３６６およびＳ−２
４０１（スエーデン、ストックホルム、カビ）を使用し
てヒトおよびヒトの血漿に対して濃度依存的な形で抗凝
固効果を示した。黒色腫細胞系からのｔ−ＰＡは、ブザ
イア・コレン博士（ヘルギー、ロイベン）から提供を受
けた。

血流は、シラスティック管の末端部分のまわりに付けた
ドツプラー流量計を使って測定した。値はｍ（１７分で
与えられ、動脈流条件を与える１０１００−２Ｏ０！／
分（１３，３−２６，５ｃ　ｍ　／秒の速度に等しい）
の範囲にあった。流量の値は実験中を通して規則的な間
隔で記録された。方法は、ハンソン＆バーカーら、アル
テリオスクレロシス、第５巻、５９５−６０３頁（１９
８５年）に記載されている。

ダクロン？省　　での　ハ　の２　′ ＩＩＩ　（ｎ−標識の証小板の沈降は、移植管のシンチ
レーション画像で検出した。血小板標識法およびデータ
の解析は、ハンソン＆バーカー、「Ｔｈｒ。

ｍｂ、　ｌｌａｅｍｏｓｔａｓ、　Ｊ第５３Ｓ、４２３
−４２７頁（１９８５年）に記載されたのと同じである
が移植管内の血小板の数の式が下記のように単純化され
ていることだけが変わっている： ｃｐｍ−移植管×血小板の数７ｍ１ 全血液のｃ　ｍ　ｐ　／　ｍ　１ 撮像の時間も移植およびＡＰＣ実験でのＡＰＣの大量−
時投与のの開始の時点（１＝０）から２時間に延ばした
。血小板の蓄積のカーブは、普通対照実験では一時間以
内で水平になるので、血小板の沈降阻止の撮像はこの一
時間を超えなかった。

処置した動物の血小板の沈降阻止は、３０分および６０
分の時点での対照実験で沈降した血小板の全数に対する
％として表された。阻止の計算式は第１表に示す。血小
板の沈降は血小板の数に依存する（バーカー＆ハンソン
ｒＴｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、」第５３巻、
４２３−４２７頁（１９８５年）の第１表の式を使って
血小板降の阻止の補正を行った。

±１塁皿 標準化された鋳型出血時間は、血圧計の４Ｏｎ＋ｗＨｇ
の膨張でそれぞれ長さ５ｍｍ５深さｌｌｌ１ｆｆｌの２
ｔＭ所の切開で、マルパスら、ブラッド、第５７巻、７
３６−７４０頁（１９８１年）に記載された方法で実験
の前および途中に前腕の剃った掌側の面で行った。

ＡＰＣ注入の抗凝固効果は、クエン酸中に取り出した動
脈血を規則的な間隔でＡＰＴＴ試験することによって実
施した。血漿蛋白質Ｃ阻止物質による八ＰＣのインビト
ロの阻止を最小にするために、試験は試料採取から５な
いし１０分以内に行った。循環ＡＰＣ水準を測定するた
めに、色原性アミド分解試験を開発した。ＥＬＩＳＡマ
イクロタイター・プレート（ダイナチック・イミュンロ
ンまたはコスクール）を、酵素のアミド分解活性に有意
な影響を与えない抗蛋白質ＣモノクＱ−ナル、抗体であ
るＣ３でコーティングした。血液は、３．８％クエン酸
塩／４．６％ベンズアミジン溶液（９：１）中に取り、
すぐ遠心分離して得られた血漿を実験するまで一８０℃
に保った。この血漿の試料ｌＯマイクロリットルを、担
体としての１％ＢＳＡ、酵素阻止剤としての０．３６％
ベンズアミジンを含むトリス緩衝の塩水で１６０−２０
０マイクロリツトルに希釈し、抗体でコーティングした
ウェル内で３７℃で１時間培養した。溶液を取り出して
ウェルを洗浄し、未結合の成分とベンズアミジンを除去
した。つぎに、Ｓ−２３６６またはＳ−２４０１のどち
らかの色原性基体を加え、基体の解裂の速度を分光光度
計で測定した。

標準のＡＰＣ希釈液を使用して検ｆｆｉ線がら血漿試料
中のＡ　Ｐ　ＣｔＱ度を計算した。

動脈の血栓症のモデルに使用されるヒヒへのＡＰＣ単独
またはＡＰＣと血栓溶解剤の注入の効果に関する図面（
グラフ）に従って、本発明の詳細な説明する。

第１ａ図ないし第３ａ図は、「低投与量」実験テ（７）
Ａ　Ｐ　ＴＴ（７）延長（０）を示す。合計２．０−３
゜４ｍＢのヒトＡＰＣの投与は、平均してＡＰＴＴ値を
約２倍にした。ＡＰＣ注入の終了（Ｎの矢印）のあとは
、ＡＰＴＴ値は累進的に低下し、アミド分解活性をもと
にしたＡＰＣの測定値は低下しく実線）、１２−１６分
の循環半減期を示唆した。第４ａ図および第５ａ図は、
ＡＰＴＴに対する「高投与量」のＡＰＣの効果を示す。

１１ｍｇの八ＰＣの投与は、両方の実験でＡＰＴＴの３
−４倍の延長を示した。注入の終了後のＡＰＴＴの変化
のパターンおよびＡＰＣの測定値は、これらの高投与量
のＡＰＣについても類似のＡＰＣ半減！１１１（約１２
分）を示した。ＡＰＣ（２，１ｍｇ）およびｔ−ＰＡ（
１，３ｍｇ）の組み合わせは低投与量のへＰＣ単独と同
じ効果をＡＰＴＴに与えた（第６ａ図および第７ａ図）
。どの実験でも観察の最後（１２０分）でＡＰＴＴ値は
初期の値（０分）に戻らなかった。

同じ図（第１ａ図ないし第７ａ図）には、上記色原性試
験で測定したＡＰＣ水準の変化も示されている（・）。

「低投与量」実験での０．３８ないし０．７０マイクロ
グラム／ｍ＋、（第１ａ図ないし第３ａ図）、「高投与
量」実験での０．９４ないし１．６４マイクログラム／
ｍ！　（第４ａ図および第５ａ図）および組み合わせの
実験での０．３０ないしＯ：　９０マイクログラム／ｍ
１　（第６ａ図および第７ａ図）の全範囲のＡＰＣ血漿
濃度を測定した。アミド分解活性試験で測定したヒトの
八ＰＣの循環半減期は、ＡＰＣ酵素の全投与量の如何に
かかわらずＡＰＴＴ測定から得られたものと類似してい
た。インビボの循環ＡＰＣ水準は、２時間以内には完全
に初期値には戻らなかった。高投与量の実験でのＡＰＣ
投与量は低投与量のそれの５倍であるが、循環ＡＰＣ水
準は５倍にはならず、有効なりリアランスまたは一時貯
蔵の機構または受容体の介入によるＡＰＣの調節を示唆
している。

七つの実験のうち六つでは出血時間は若干平均して上昇
はしたが正常な水準に留まった（第１ｂ図および第３ｂ
図ないし第７ｂ図の縦の棒グラフ）。

「低投与量」の実験の一つでは実験の前後および途中に
おいて出血時間は延長され異常であった（第２ｂ図）。

この動物はＡＰＣの注入の前も出血時間が異常に長かっ
たので、ＡＰＣ注入中に見られた長い出血時間はＡＰＣ
によるものではない。

これらの結果は、適用した投与量での循環ＡＰＣが標準
か出血時間法で測定した血小板の止血機能を大きくは変
えないことを示唆している。ｔ−ｐＡの高投与量に典型
的な組織損傷部位（すなわち、ｓｅｗｉｎｇ　ｃｕｆｆ
ｓ）に見られる溢血、血腫または再出血は観察されなか
った。

ＡＰＣ投与中の実験（第１ｂ図ないし第７ｂ図の・）で
は、規則的に閉塞の起こった同一動物での対照実験とは
対照的に血流は消滅することなく保持された。七つの移
植管のうち六つは、全観察期間を通じて詰まらず動脈流
を良く通した。ＡＰＣ−ｔ−ＰＡの実験のうちの一つで
は、ダクロン移植管が１１５分で駄目になった。九つの
対照実験のうち四つでは、移植管は１時間以内で閉塞し
循環流中に有効な高血栓症剤を含まない場合はこれらの
移植管は７０±２０分で駄目になった。二つの対照実験
での血流の変化を第３ｂ図および第７ｂ図に示す、第３
ｂ図は、移植管が１時間まで詰まらずに残ったときの第
二の対照実験の流速を示す（第一の実験の移植管は変速
した）。第７ｂ図では、対照実験の移植管の急速な累進
的閉塞が観察できる。これらのデータは、ＡＰＣ単独ま
たはｔ−ＰＡとの併用が動脈流の条件下で高血栓症性で
あることを示している。高投与量のＡＰＣの実験は、血
流が２時間の間大きい変化を示さず高血栓症的効果が長
り続りことを示した。

第１Ｃ図ないし第７ｃ図は、放射能撮像データの解析の
結果を示す。その値は、最長対照実験で１時間、ＡＰＣ
実験で２時間の間にダクロン移植管内に沈降した全血小
板を表している。・（−）は、ＡＰＣを注入した場合の
動脈血栓形成中にちんこうした血小板の数を示し、Ｏ（
−・−・−）は、同じ動物で行った対照実験の結果を示
す、ハンソン＆バーカーｒＴｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏ
ｓｔａｓ、Ｊ　４２３−４２７頁（１９８５年）に記載
されているように、対照実験では典型的なＳ字形の曲線
９が見られる。移植管中の血小板の沈降は、対照実験に
比べてＡＰＣの実験でもＡＰＣ−ｔ−ＰＡの実験でも有
意に阻止された。阻止の程度は第１表に百分率で示した
。

血小板沈降阻止の補正値（Ｉ２、第１表）は、３０分の
「低投与士」の実験においてそれぞれ３１％、５２９石
および４２％（平均＝４３％）であった。（第１Ｃ図な
いし第３Ｃ図）。「高投与量」の実験においては、この
値は３０分で７４％および６４％（平均＝６９％）、６
０分で７２％および８３９１０（平均ニア８％）（第４
Ｃ図および第５Ｃ図）およびＡＰＣ−１−ＰＡの実験で
は３０分で５３　％および３６％（平均＝４５％）（第
６Ｃ図および第７Ｃ図）であった。高投与量の実験にお
いてはΔＰＣ注入の終了後も、血小板沈降の阻止は長い
継続が見られた。第８図は、同し実験モデルでのｔ−ｐ
Δでの若干の予備的な実験の結果を示す。１ｍｇのｔ−
ＰＡの注入（，０，１ｍ　ｇ／ｋ　ｇ／時）は、これら
の実験で中程度の抗血小板作用を有した。

発明者らの結果は、ヒトＡＰＣが投与量依存的に動脈血
栓形成を阻止し、ＡＰＣとｔ−ＰＡの組み合わせが動脈
血栓形成を阻止するという確証を与える。これは、ＡＰ
Ｃの注入がｔ−ｐへの抗血栓症の投与量を減らしうろこ
とを示す。これらの八ＰＣの効果は、出血時間を有意に
長くすることなく、また出血の危険なしに達成される。

ｌ丞 ヒ）ＡＰＣの単独または血栓溶解剤（ｔ−ＰＡ）との併
用での注入は、動脈血栓症を持つヒトの治療薬として使
用できる。研究の結果は、０．２４ないし１．６マイク
ログラム／　ｍ　１の血奉水準で動脈法条件下でＡＰＣ
が極めて強力な抗血栓症剤であると言う確証を与える。

この実験から、ＡＰＣ単独またはＡＰＣと血栓溶解剤と
の併用は動脈法条件下での複雑な血栓形成のための非常
に有効な抗血栓症剤であると結論づけることができる。

ＡＰＣ単独またはＡＰＣとｔ−ＰＡのような血栓溶解剤
との併用は、複雑な型の急性の動脈血栓症での血小板お
よびフィブリンの両方の生成への関与を強力に阻止する
。これはヘパリンまたは現在市販されている抗血小板薬
剤の単独使用または併用では達成できない。ＡＰＣは生
物学的な物質であるので、その投与は一次止血の有意の
悪化なしに（出血時間試験で測定されたように）また明
確な毒性なしに強力な抗血栓症効果を有する。

血工 Ａ　Ｐ　Ｃ単独使用またはＡＰＣと血栓溶解剤との併用
による治療法は、動脈血栓症を含む導管の障害に有用で
ある。

へＰＣ単独使用または血栓溶解剤との併用が有用である
動脈血栓症の若干の例には下記の臨床例が含まれる。

１）冠状動脈、大脳または末梢動脈を含む急性の動脈血
栓症的閉塞。

２）血管の外科的処置の後の急性の血栓症的閉塞または
再発狭窄症。

３）血栓溶解処置の後の再閉塞または再発狭窄症。

ｔ−ＰＡのような血栓溶解剤は、急性の心臓の発作から
数時間以内に使用された場合は閉塞した動脈の血流を再
生させることによって阻血組織を救う。現在、閉塞した
冠状動脈の血栓溶解処置’／＆　’ｄｏｔに成功した、
愚者の１／４ないし１／３は、ｔ−ＰＡの注入を中止し
たあと再閉塞を起こしている。この余病は、全量投与の
ヘパリン治療法でも起こる。ＡＰＣはヘパリンよりも再
閉塞防止の効果が高い。

４）小直径および大直径の移植専管の閉塞。小直径すな
わち３ｍｍ径の移植導管は血栓症的閉塞の頻度が高い。

ＡＰＣ単独使用または血栓溶解剤との併用が閉塞の防止
に有効である。

５）人工透析。すべての透析器の補啜面および流れの設
計は血液凝固性である。現在は、ヘパリンが透析中に注
入されている。しかし、ヘパリンは部分的にしか有効で
なく、そのため透析器の再使用が制限される。また、ヘ
パリンは、多（の厄介な副作用と合併症を有する。

６）心肺バイパス手術。酸素供給器およびポンプ装π中
での血栓生成を防ぐために、現在はヘパリンが使用され
ている。しかし、これは唾小板の活性化を阻止できず、
できた過渡的な血小板は機能異常であり術後の出血の素
因を与える。

７）左心室の心臓補助機器。この８ｉｉ綴ポンプは掻め
て血液凝固性であり、生命を脅かす塞栓症を起こす。−
これは従来の抗凝固剤（ヘパリンまたはクマリン剤）部
分的にしか減少させ得なかった併発症である。

８）全人工心臓および左心室の心臓補助ｉ器。

９）他の動脈血栓症。ＡＰＣは、現行の治療法が禁忌さ
れているか有効でない場合の動脈血栓症叉は塞栓症に有
用である。例えば、ＡＰＣは移植、網膜血栓症、または
余病を併発する他の器官の毛細管血栓性の壊死、腫瘍ま
たはクマリン処置を含む急性の毛細管の前後の閉塞の処
置にを効である。

要約すれば、天然に存在する生理学的抗血栓症性のヒ）
Ｗ白質であるヒトＡＰＣは、出血性（ヘパリン、血栓溶
解剤、抗血小板剤）、毒性（若干の抗血小板剤）、抗原
性（ストレプトキナーゼ）、クリアランス比（ヘパリン
、抗血小板剤、）、奇形形成性（クマリン誘導体）、−
船釣な副作用（抗血小板剤）、即効性の不足（抗血小板
剤、クマリンｖ９ｊ３体）、アレルギー反応（抗血小板
剤、ストレプトキナーゼ、ヘパリン）および低血圧作用
（プロスタサイクリン）の点において他の市販の抗血栓
症薬剤より優れている。

ＡＰＣは、ｔ−ＰＡその他の血栓溶解剤と併用すると血
栓溶解剤の抗血栓症効果を向上させる。

すなわち、へＰＣ療法は血栓症の下剤治療に必要なｔ−
ＰＡまたは他の血栓溶解剤の投与量を減少させ、血栓溶
解剤の高投与による併発症を避けることができる。

上記の説明は、本発明の具体例が製造され使用される方
法の詳細を示すものである。この説明は本発明の例示で
あり、本発明を特定的に限定しようとしたものではな（
、当業者の理解の範囲内の改変は本発明の範囲に入るも
のと考えられるべきである。

省ど　＝＝；　　目二＝　＝薫１−　１．　　　ｅ）Ｌ
）

【図面の簡単な説明】

第１３図ないし第３ａ図は、活性化部分トロンボプラス
チン時間試験（ＡＰＴＴｓ）を使って測定した血液の凝
固に対する低投与雇のＡＰＣの注入の影響を示すグラフ
、 第４ａ図および第５ａ図は、ＡＰＴＴｓに対する高投与
量のＡＰＣの注入の影響を示すグラフ、第６ａ図および
第７ａ図は、ＡＰＴＴｓに対するＡＰＣおよびｔ−ＰＡ
の組み合わせの注入の影響を示すグラフ、 第１ｂ図ないし第５ｂ図はＡＰＣの、第６ｂ図および第
７ｂ図はＡＰＣプラスｔ−ＰＡのそれぞれ血流および出
血時間に対する影響を示すグラフ、第１０図ないし第７
ｃ図は、放射性標識の血小板の放射能造影データの解析
からのダクロン移植における血小板の沈降（すなわち血
栓の生成）に対するＡＰＣ注大またはＡＰＣプラスｔ−
ＰＡの注入（第６ｃ図および第７ｃ図）の影響を示すグ
ラフ、 第８図は、放射性標識の血小板の放射能造影データの解
析からのダクロン移植における血小板の沈降（すなわち
血栓の生成）に対するｔ−ＰＡの注入の影ツを示すグラ
フである。 特許出願人　スクリソブス　クリニックアンド　リサー
チ　ファウ ンデイション

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）有効量の血漿から誘導され活性化された蛋白質Ｃ
   またはその同族体の単独、または、それと少なくとも一
   種血栓溶解剤との組み合わせを患者に投与することを特
   徴とする、患者の急性の動脈の血栓症的閉塞、塞栓症、
   または冠状動脈、大脳または末梢動脈における、または
   導管移植における狭窄症を阻止する方法。
2. （２）血栓溶解剤が組織プラスミノーゲン活性化剤であ
   ることを特徴とする請求項１の方法。
3. （３）血栓溶解剤がウロキナーゼまたはその同族体であ
   ることを特徴とする請求項１の方法。
4. （４）血栓溶解剤がプロウロキナーゼまたはその同族体
   であることを特徴とする請求項１の方法。
5. （５）血栓溶解剤がストレプトキナーゼまたはその同族
   体であることを特徴とする請求項１の方法。
6. （６）血栓溶解剤がプラスミノーゲンまたはプラスミン
   のアシル化型またはその同族体であることを特徴とする
   請求項１の方法。
7. （７）血栓溶解剤がアシル化ストレプトキナーゼ−プラ
   スミノーゲン複合体またはその同族体であることを特徴
   とする請求項１の方法。
8. （８）有効量の組み換えで製造した活性化された蛋白質
   Ｃまたはその同族体の単独、または、それと少なくとも
   一種の血栓溶解剤との組み合わせを患者に投与すること
   を特徴とする、患者の急性の動脈の血栓症的閉塞、塞栓
   症、または冠状動脈、大脳または末梢動脈における、ま
   たは導管移植における狭窄症を阻止する方法。
9. （９）血栓溶解剤が組織プラスミノーゲン活性化剤であ
   ることを特徴とする請求項８の方法。
10. （１０）血栓溶解剤がウロキナーゼまたはその同族体で
    あることを特徴とする請求項８の方法。
11. （１１）血栓溶解剤がプロウロキナーゼまたはその同族
    体であることを特徴とする請求項８の方法。
12. （１２）血栓溶解剤がストレプトキナーゼまたはその同
    族体であることを特徴とする請求項８の方法。
13. （１３）血栓溶解剤がプラスミノーゲンまたはプラスミ
    ンのアシル化型またはその同族体であることを特徴とす
    る請求項８の方法。
14. （１４）血栓溶解剤がアシル化ストレプトキナーゼ−プ
    ラスミノーゲン複合体またはその同族体であることを特
    徴とする請求項８の方法。