JPS6011427A - 血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法 - Google Patents
血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法Info
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- JPS6011427A JPS6011427A JP58118809A JP11880983A JPS6011427A JP S6011427 A JPS6011427 A JP S6011427A JP 58118809 A JP58118809 A JP 58118809A JP 11880983 A JP11880983 A JP 11880983A JP S6011427 A JPS6011427 A JP S6011427A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法に関
するものであり、より詳細には血栓溶解性蛋白に高分子
多糖類および塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステ
ルを化学的に結合させることを特徴とする血栓溶解性蛋
白の疾患局所親和性向上方法である。
するものであり、より詳細には血栓溶解性蛋白に高分子
多糖類および塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステ
ルを化学的に結合させることを特徴とする血栓溶解性蛋
白の疾患局所親和性向上方法である。
ウロキナーゼなどの血栓溶解剤は、血栓溶解剤としての
みならず抗癌剤とも併用されるが、その疾患局所への親
和性を向上させることによって、少量の投与でより優れ
た薬りＪを発揮させることができる。また、ウロキナー
ゼ等の血栓溶解性蛋白は生体内投与後、血中より速やか
に消失し、その半減期は数分である。さらに投与された
ウロキナーゼ等の血栓熔解性蛋白は血中のインヒビター
の作用をうりるので、ある程度以上を投与しなければ効
果の発現が乏しい。そのため、現在では大量投与が一般
化しつつある。また、ウロキナーゼ等の血栓熔解性蛋白
は熱安定性に欠りるきらいがある。
みならず抗癌剤とも併用されるが、その疾患局所への親
和性を向上させることによって、少量の投与でより優れ
た薬りＪを発揮させることができる。また、ウロキナー
ゼ等の血栓溶解性蛋白は生体内投与後、血中より速やか
に消失し、その半減期は数分である。さらに投与された
ウロキナーゼ等の血栓熔解性蛋白は血中のインヒビター
の作用をうりるので、ある程度以上を投与しなければ効
果の発現が乏しい。そのため、現在では大量投与が一般
化しつつある。また、ウロキナーゼ等の血栓熔解性蛋白
は熱安定性に欠りるきらいがある。
従って、本発明の第一の目的は、血栓溶解性蛋白の疾患
部位（血栓部位、癌発生部位）への親和性を向上させる
方法を提供することである。本発明の第二の目的は血栓
溶解性蛋白の熱に対する安定性および血中における安定
性を向上させる方法を提供することである。本発明の第
三の目的は安定な血栓熔解性蛋白およびその製造方法を
提供することである。本発明のその他の目的は以下の記
述から明らかとなろう。
部位（血栓部位、癌発生部位）への親和性を向上させる
方法を提供することである。本発明の第二の目的は血栓
溶解性蛋白の熱に対する安定性および血中における安定
性を向上させる方法を提供することである。本発明の第
三の目的は安定な血栓熔解性蛋白およびその製造方法を
提供することである。本発明のその他の目的は以下の記
述から明らかとなろう。
面して、本発明者らは、種々研究を重ねてきたところ、
血栓溶解性蛋白を、好ましくは高分子多糖類を介して、
塩基性アミノ酸またはその１ルキルエステルと化学的に
結合させるごとによって血栓溶解性蛋白の血中における
安定性、熱に対する安定性が高まり、また疾患部位−・
の親和性が高まることを見いだして本発明を完成せしめ
た。
血栓溶解性蛋白を、好ましくは高分子多糖類を介して、
塩基性アミノ酸またはその１ルキルエステルと化学的に
結合させるごとによって血栓溶解性蛋白の血中における
安定性、熱に対する安定性が高まり、また疾患部位−・
の親和性が高まることを見いだして本発明を完成せしめ
た。
本発明で用いられる血栓溶解性蛋白としては、たとえば
ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノ−
ケン（メラノーマ細胞由来のもの、人腎細胞由来のもの
等）などがあげられ、これらは高度精製、特に医療用と
して精製されたものであれば、その由来などには制限さ
れず、たとえばウロキナーゼとしてはヒト尿、組織腎臓
培養、遺伝子組み換えなどの由来のものがあげられる。
ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノ−
ケン（メラノーマ細胞由来のもの、人腎細胞由来のもの
等）などがあげられ、これらは高度精製、特に医療用と
して精製されたものであれば、その由来などには制限さ
れず、たとえばウロキナーゼとしてはヒト尿、組織腎臓
培養、遺伝子組み換えなどの由来のものがあげられる。
その分子量は、例えばウロキナーゼにあっては一般に２
５，０００〜６０，０００の範囲のものが好ましい。
５，０００〜６０，０００の範囲のものが好ましい。
本発明で用いられる塩基性アミノ酸としては、アルギニ
ン、リジン、ヒスチジンなどがあげられ、好適にはアル
ギニン、リジンが用いられる。また塩基性アミノ酸アル
キルエステルにおけるアルキルとしては、メチル、エチ
ル、プロピル、イソプルピル、ブチル、イソブチル、な
どの炭素数１〜４のものがあげられ、特に好ましくはメ
チルがあげられる。
ン、リジン、ヒスチジンなどがあげられ、好適にはアル
ギニン、リジンが用いられる。また塩基性アミノ酸アル
キルエステルにおけるアルキルとしては、メチル、エチ
ル、プロピル、イソプルピル、ブチル、イソブチル、な
どの炭素数１〜４のものがあげられ、特に好ましくはメ
チルがあげられる。
高分子多糖類としては、デキストラン、コンドロイチン
硫酸、デンプンなどが例示され、好適にはデキストラン
が使用される。
硫酸、デンプンなどが例示され、好適にはデキストラン
が使用される。
本発明で用いられるデキストランもその由来を特に制限
されるものではなく、好ましくは高度精製されたもの、
特に医療用のものが用いられる。その好ましい分子量は
一般に１ 、０００〜２００万である。
されるものではなく、好ましくは高度精製されたもの、
特に医療用のものが用いられる。その好ましい分子量は
一般に１ 、０００〜２００万である。
本発明の方法は、たとえば次のようにして実施される。
即ち、塩基性アミノ酸（たとえば、アルギニン、リジン
、これらの“１ルキルエステル）と高分子多糖類（たと
えば、デキストラン）とを反応させ、さらに血栓溶解性
蛋白を反応させる。
、これらの“１ルキルエステル）と高分子多糖類（たと
えば、デキストラン）とを反応させ、さらに血栓溶解性
蛋白を反応させる。
塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステルとの反応に
おいては、高分子多糖類の水酸基をあらかじめ酸化して
アルデヒド基に活性化させておくことが好ましく、その
際の酸化剤としては、通常過ヨウ素酸ナトリウムが使用
される。本反応は通常室温にておこなわれ、溶媒として
は、通常、水性溶媒〔好ましくは、リン酸緩ｉ蚤ｉ液（
特に、０．ＩＨリン酸ナトリウム）〕が用いられ、また
ρ１１ば４〜８、好ましくは５〜７程度であり、反応時
間は２〜１０時間、好ましくは４〜６時間である。さら
に高分子多糖類と塩基性アミノ酸またはそのアルキルエ
ステルとの添加割合は高分子多糖類約１（）ｍｇに対し
て、塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステル） ０
．１〜５０ ｔｔ ｍｏｌ 、特に１〜３０９ ｍｏｌ
となるような割合である。本反応においては、還元剤と
して、たとえば水素化シアノポウ素すトリウムが使用さ
れる。
おいては、高分子多糖類の水酸基をあらかじめ酸化して
アルデヒド基に活性化させておくことが好ましく、その
際の酸化剤としては、通常過ヨウ素酸ナトリウムが使用
される。本反応は通常室温にておこなわれ、溶媒として
は、通常、水性溶媒〔好ましくは、リン酸緩ｉ蚤ｉ液（
特に、０．ＩＨリン酸ナトリウム）〕が用いられ、また
ρ１１ば４〜８、好ましくは５〜７程度であり、反応時
間は２〜１０時間、好ましくは４〜６時間である。さら
に高分子多糖類と塩基性アミノ酸またはそのアルキルエ
ステルとの添加割合は高分子多糖類約１（）ｍｇに対し
て、塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステル） ０
．１〜５０ ｔｔ ｍｏｌ 、特に１〜３０９ ｍｏｌ
となるような割合である。本反応においては、還元剤と
して、たとえば水素化シアノポウ素すトリウムが使用さ
れる。
かくシ゛ζ得られた反応生成物を血栓熔解性蛋白と反応
させる。この反応においては、還元剤として、たとえば
水素化シアノホウ素すトリウムが使用される。溶媒とし
ては、通常、リン酸緩衝液（通常、ｐＨ５〜９、好まし
くはｐＨ（ｉ〜８程度）が使用され、反応温度は一般に
０〜２０℃、好ましくは１〜１０℃程度であり 、反応
時間は５〜４０時間、好ましくはｌＯ〜２５時間程度で
ある。血栓熔解性蛋白（たとえば、ウロキナーゼ）の添
加量は通常高分子多糖類１ｍｇ当り１００１１１〜１０
０，０００１υである。当該反応の後、未反応のアルデ
ヒド基を水酸基に還元する。その際の還元剤としては、
たとえば水素化ホウ素ナトリウムがもちいられる。
させる。この反応においては、還元剤として、たとえば
水素化シアノホウ素すトリウムが使用される。溶媒とし
ては、通常、リン酸緩衝液（通常、ｐＨ５〜９、好まし
くはｐＨ（ｉ〜８程度）が使用され、反応温度は一般に
０〜２０℃、好ましくは１〜１０℃程度であり 、反応
時間は５〜４０時間、好ましくはｌＯ〜２５時間程度で
ある。血栓熔解性蛋白（たとえば、ウロキナーゼ）の添
加量は通常高分子多糖類１ｍｇ当り１００１１１〜１０
０，０００１υである。当該反応の後、未反応のアルデ
ヒド基を水酸基に還元する。その際の還元剤としては、
たとえば水素化ホウ素ナトリウムがもちいられる。
この反応の一例を模式的に示せば次の通りである。
（式中、−ＮＩｌ＝ＡＡは塩基性アミノ酸またはそのア
ルキルエステル残基を示す。） ここに塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステル残基
とは当該アミノ酸中のアミノ基の水素原子が−１１１と
れることによって形成された基を意味する。なお、本発
明の方法による結合物は上記模式の如きものに限定され
ず、例えば複数のアミノ基を有する塩基性アミノ酸また
はそのアルキルエステルを用いた場合には、高分子多糖
類と結合しなかったアミン基に１（１（栓溶解性蛋白が
結合したものであってもよく、要するに上記三成分が化
学的に結合したものであればよい。
ルキルエステル残基を示す。） ここに塩基性アミノ酸またはそのアルキルエステル残基
とは当該アミノ酸中のアミノ基の水素原子が−１１１と
れることによって形成された基を意味する。なお、本発
明の方法による結合物は上記模式の如きものに限定され
ず、例えば複数のアミノ基を有する塩基性アミノ酸また
はそのアルキルエステルを用いた場合には、高分子多糖
類と結合しなかったアミン基に１（１（栓溶解性蛋白が
結合したものであってもよく、要するに上記三成分が化
学的に結合したものであればよい。
本発明における三成分の結合割合は、好ましくは高分子
釜ｔｌ、ＩＪ類、例えばデキストラン１ｍｇに対して塩
基性アミノ酸またはそのアルキルエステル、例えばアル
ギニン（又はそのアルキルエステル）が０．１〜３μｍ
ｏ１ ％好ましくは０．５〜２．５μｍｏｌ、血栓熔解
性蛋白、例えばウロキナーゼが１００〜１００．０００
１ｔｌ 、好ましくは５，０００ＩＬＩ〜ｔ６ｏ、ｏｏ
ｏ＋ｕに相当する割合である。
釜ｔｌ、ＩＪ類、例えばデキストラン１ｍｇに対して塩
基性アミノ酸またはそのアルキルエステル、例えばアル
ギニン（又はそのアルキルエステル）が０．１〜３μｍ
ｏ１ ％好ましくは０．５〜２．５μｍｏｌ、血栓熔解
性蛋白、例えばウロキナーゼが１００〜１００．０００
１ｔｌ 、好ましくは５，０００ＩＬＩ〜ｔ６ｏ、ｏｏ
ｏ＋ｕに相当する割合である。
本発明によっ゛ζ生成した結合物は水性溶媒（例、水、
生理的塩類水溶液）に易溶性であり、また人フィブリン
標準平板法（Ｂ、 Ｂ、 Ａ、、 ２４．２７８゜１９
７６年）による力価測定が血栓熔解性蛋白（たとえば、
ウロキナーゼの場合）１ｍｇあたり５，０００〜８０．
０００１ｔｌ程度である。血栓熔解性蛋白（例、ウロキ
ナーゼ）と高分子多ＫＭ ＩＮ、たとえばデキストラン
の結合比は血栓溶解性蛋白中のアミノ基の４０〜７０％
が修飾されていることが好ましい。なお、アミノ基の定
量はアルギニンまたはそのアルキルエステルの場合はＩ
ｌ、 Ｆｉｅｌｄｓ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ＋
１２４、５８Ｌ １９７１年）の方法に従って、また、
リジンまたはそのアルキルエステルの場合は結合物を６
Ｎ塩酸中、１１０℃、２４時間加水分解後、アミノ酸分
析することによっ“ζ測定したものである。また、結合
比は血栓溶解性蛋白と未反応高分子多糖類をＤ［八Ｅ（
ジエチルアミノエヂル）−トヨバール６５０Ｍ（東洋ソ
ーダ製）にて除いた後測定したものである。
生理的塩類水溶液）に易溶性であり、また人フィブリン
標準平板法（Ｂ、 Ｂ、 Ａ、、 ２４．２７８゜１９
７６年）による力価測定が血栓熔解性蛋白（たとえば、
ウロキナーゼの場合）１ｍｇあたり５，０００〜８０．
０００１ｔｌ程度である。血栓熔解性蛋白（例、ウロキ
ナーゼ）と高分子多ＫＭ ＩＮ、たとえばデキストラン
の結合比は血栓溶解性蛋白中のアミノ基の４０〜７０％
が修飾されていることが好ましい。なお、アミノ基の定
量はアルギニンまたはそのアルキルエステルの場合はＩ
ｌ、 Ｆｉｅｌｄｓ （Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ＋
１２４、５８Ｌ １９７１年）の方法に従って、また、
リジンまたはそのアルキルエステルの場合は結合物を６
Ｎ塩酸中、１１０℃、２４時間加水分解後、アミノ酸分
析することによっ“ζ測定したものである。また、結合
比は血栓溶解性蛋白と未反応高分子多糖類をＤ［八Ｅ（
ジエチルアミノエヂル）−トヨバール６５０Ｍ（東洋ソ
ーダ製）にて除いた後測定したものである。
実験例１
本発明の方法による結合物の熱安定性をウロキナーゼを
例として調べた。ウロキナーゼの最も安定な９Ｈ８，０
において６０℃の加熱をおこなうと、第１図に示すよう
にウロキナーゼ約２時間の加熱で完全に活性を失ったが
（実施例■にて生成した結合物は８時間の加熱後におい
ても約９０％の活性を保っていた。
例として調べた。ウロキナーゼの最も安定な９Ｈ８，０
において６０℃の加熱をおこなうと、第１図に示すよう
にウロキナーゼ約２時間の加熱で完全に活性を失ったが
（実施例■にて生成した結合物は８時間の加熱後におい
ても約９０％の活性を保っていた。
実験例２
人の新鮮なプラズマをもちいて、血中の血栓熔解性蛋白
インヒビターに対する安定性を調べた。
インヒビターに対する安定性を調べた。
試験方法は次の通りである。すなわち、フィブリン平板
による線溶活性にて、１ｍｌあたり１ｏｏｉｕおよび２
００■υとなるよう希釈したウロキナーゼあるいは実施
例１にて得られた結合物に、その４倍量のプラズマを加
え、３７℃にて１時間インギュヘーション後、フィブリ
ン平板法にて残存活性を測定した。その結果は第２図に
示す通りである。即ち、１００１０ ／ ｍｌの場合ウ
ロキナーゼはすべての活性を消失してしまうのに対して
実施例１の結合物は１０〜１３％、２００１ＬＩ／ｍｌ
の場合、ウロキナーゼが約１０％の残存活性しか示さな
いのに対して実施例１の結合物は２０％程度の残存活性
を保持している。
による線溶活性にて、１ｍｌあたり１ｏｏｉｕおよび２
００■υとなるよう希釈したウロキナーゼあるいは実施
例１にて得られた結合物に、その４倍量のプラズマを加
え、３７℃にて１時間インギュヘーション後、フィブリ
ン平板法にて残存活性を測定した。その結果は第２図に
示す通りである。即ち、１００１０ ／ ｍｌの場合ウ
ロキナーゼはすべての活性を消失してしまうのに対して
実施例１の結合物は１０〜１３％、２００１ＬＩ／ｍｌ
の場合、ウロキナーゼが約１０％の残存活性しか示さな
いのに対して実施例１の結合物は２０％程度の残存活性
を保持している。
実験例３
実施例１の結合物とウロキナーゼ自体との血栓熔解能の
比較をウサギを用いてｉｎ ｖｉｖｏにて行った。１２
５Ｉを用い、クロラミンＴ法（Ｂｉｏｃｈｅｍ。
比較をウサギを用いてｉｎ ｖｉｖｏにて行った。１２
５Ｉを用い、クロラミンＴ法（Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｊ、、 ８９．１．１４．１９６３年）により、フィブ
リノーゲン（ウサギ血液より精製した。）をラベルした
。
リノーゲン（ウサギ血液より精製した。）をラベルした
。
１２５■−フィブリノーゲンをウサギの血液とまぜたの
ちチャンドラ−の装置を用い、Ｉ ２５１−血栓を作成
した。１２５■−血栓を、第３図に示すようにウサギの
大腿動脈と大腿静脈とに入れたカテーテルを結び循環さ
せる際に、結合部位に注射筒をゴム栓にてつないだもの
の中にいれる（１２５Ｉ−血栓は釣針につるしである。
ちチャンドラ−の装置を用い、Ｉ ２５１−血栓を作成
した。１２５■−血栓を、第３図に示すようにウサギの
大腿動脈と大腿静脈とに入れたカテーテルを結び循環さ
せる際に、結合部位に注射筒をゴム栓にてつないだもの
の中にいれる（１２５Ｉ−血栓は釣針につるしである。
）。
そして、ウサギの体重を正６１〔に測定し、３にｇあた
り線溶活性にて１０５１１のウロキナーゼあるいは、こ
のウロキナーゼの蛋白量に等しい実施例１の結合物を血
液循環開始１時間後に静脈側の三方コックより投与し、
投与後１０．２０．３０．４５．６０．９０．１２０．
１５０．１８０分に動脈側より採血し、血中の放射活性
をｒ−シンチレーションカウンターに“Ｃ測定し、血栓
の溶解率をめた。その結果は第４図に示した。この結果
から本発明方法によって血栓の溶解率が２倍以上向上す
ることが理解できよう。
り線溶活性にて１０５１１のウロキナーゼあるいは、こ
のウロキナーゼの蛋白量に等しい実施例１の結合物を血
液循環開始１時間後に静脈側の三方コックより投与し、
投与後１０．２０．３０．４５．６０．９０．１２０．
１５０．１８０分に動脈側より採血し、血中の放射活性
をｒ−シンチレーションカウンターに“Ｃ測定し、血栓
の溶解率をめた。その結果は第４図に示した。この結果
から本発明方法によって血栓の溶解率が２倍以上向上す
ることが理解できよう。
実施例１
デキストランＴ−１０、Ｔ−４０，１”−７０、Ｔ−５
００またばＴ −２０００（ファルマシア社製）のいず
れか１ｇを秤量し２０ｍ ｌの蒸溜水に溶解する。これ
を３０℃の水浴につけた後、過ヨウ素酸ナトリウム１．
０７８ｇを固体のまま加える。３０℃にて３０分間反応
させたのちＩＮ水酸化す１〜リウムにて中和し、蒸溜水
に対し充分透析、凍結乾燥し、酸化デキストラン（活性
化デキストラン）を得た。
００またばＴ −２０００（ファルマシア社製）のいず
れか１ｇを秤量し２０ｍ ｌの蒸溜水に溶解する。これ
を３０℃の水浴につけた後、過ヨウ素酸ナトリウム１．
０７８ｇを固体のまま加える。３０℃にて３０分間反応
させたのちＩＮ水酸化す１〜リウムにて中和し、蒸溜水
に対し充分透析、凍結乾燥し、酸化デキストラン（活性
化デキストラン）を得た。
アルギニン、リジンまたはこれらのメチルエステル１３
．ＩＪ ｍｏｌを０．２ｍｌのＯ，１Ｍ１ノン酸す１・
り富ンム（ｐｌ＋６．１ ）にン容かした後、同級ｆｆ
ｊ ？夜（１，８ｍｌに９．３ｍｇの酸化デキストラン
および１３μｍｏｌの水素化シアノホウ素ナトリウム（
６Ｂの試薬を１ｍｌの０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ
６，１）にとがしたもの〕を加え、室温にて４〜６時間
反応させる。この間、前記アミノ酸またはこれらのエス
テルがデキストランに結合したことをシリカゲルの薄層
クロマトグラフィーにて確認する。反応後、５℃にて冷
却し、■緩衝液に熔かし、ウロキナーゼ０．１μｍｏｌ
（１〜２ｎ＋１） 、続いて２６μｍｏｌの水素化シア
ノホウ素ナトリウムを加え、５℃にて５〜２４時間反応
させる。反応後、３６μｍｏｌの水素化ホウ素ナトリウ
ムＨ）ｍｇを０．１Ｍのリン酸ナトリウム（ｐＨ７，０
）に溶かしたもの）を加え５℃にて６時間反応させ、ア
ルデヒド基を完全に還元する。還元後、０．１Ｍリン酸
ナトリウム（ｐＨ７，０＞ にて充分透析後、ミリポア
フィルタ−による除菌濾過を行い力価を測定して凍結乾
燥し、ウロキナーゼ結合物を得る。この結合物は前述し
たウロキナーゼ・デキストラン・前記アミノ酸またはそ
れらのメチルエステル結合物の特性を有していた。
．ＩＪ ｍｏｌを０．２ｍｌのＯ，１Ｍ１ノン酸す１・
り富ンム（ｐｌ＋６．１ ）にン容かした後、同級ｆｆ
ｊ ？夜（１，８ｍｌに９．３ｍｇの酸化デキストラン
および１３μｍｏｌの水素化シアノホウ素ナトリウム（
６Ｂの試薬を１ｍｌの０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ
６，１）にとがしたもの〕を加え、室温にて４〜６時間
反応させる。この間、前記アミノ酸またはこれらのエス
テルがデキストランに結合したことをシリカゲルの薄層
クロマトグラフィーにて確認する。反応後、５℃にて冷
却し、■緩衝液に熔かし、ウロキナーゼ０．１μｍｏｌ
（１〜２ｎ＋１） 、続いて２６μｍｏｌの水素化シア
ノホウ素ナトリウムを加え、５℃にて５〜２４時間反応
させる。反応後、３６μｍｏｌの水素化ホウ素ナトリウ
ムＨ）ｍｇを０．１Ｍのリン酸ナトリウム（ｐＨ７，０
）に溶かしたもの）を加え５℃にて６時間反応させ、ア
ルデヒド基を完全に還元する。還元後、０．１Ｍリン酸
ナトリウム（ｐＨ７，０＞ にて充分透析後、ミリポア
フィルタ−による除菌濾過を行い力価を測定して凍結乾
燥し、ウロキナーゼ結合物を得る。この結合物は前述し
たウロキナーゼ・デキストラン・前記アミノ酸またはそ
れらのメチルエステル結合物の特性を有していた。
第１図は本発明方法による血栓溶解性蛋白の熱安定性向
上性を示す線図、第２図は本発明による血栓溶解性蛋白
の人血中のインヒビターに対する安定性を示す線図、第
３図は血栓溶解能試験（ｉｎｖｉｖｏ ）のためのウサ
ギを使用した動脈−静脈シャントの模式図、第４図は第
３図の実験系で行った血栓溶解能試験の結果を示した線
図である。 １：実施例１の結合物（アルギニンメチルエステル、デ
キストランＴ−４０を使用） ２：実施例１の結合物（アルギニン、デキストランＴ−
４０を使用） ３：ウロキナーゼ自体 ４：大腿動脈 ５：大腿静脈 ６：カテーテル ７：三方コック ８：ゴムのチューブ ｇ、＋２５１−血栓ｌＯ：釣針
１１：注射筒 特許出願人 株式会社株式会社ミドリ十字第１図 １ ヵロ島時間（ｈｒ、） 第２図 ２ 手続補正書印釦 １．事件の表示 昭和５８年特許願第１１８８０９号 ２、発明の名称 血栓溶解性蛋白の局所親和性向上方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字 ４、代理人 ■５４１ 住 所 大阪市東区平野町４丁目５３の３ニユ一ライフ
平野町４０６号 電話（０６）２２７−１１５６ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 願書の「発明の名称」の欄 明細書の「発明の名称」の欄 ｆｌ） 願書の発明の名称の？房を別紙の通りにする。 （２） 明細書の発明の名称の欄を次の通りにする。 「血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向」三方法」（３）
明細書第４頁、第９行［プラスミノーゲ刈の次に「アク
チヘーター」を加入する。 （４）同書第７真 ［ に訂正する。 （５）同書第９頁、第６行ｒ８０，０ＯＯＪをｒ１４０
，０００ Ｊに訂正する。 （６）同書第１２頁、第１行「動脈側」の次に「の三法
コック」を加入する。 （７） 同書−第１３頁、第１０行「ラム１ｏ■」を「
ラム（１０■」に訂正する。
上性を示す線図、第２図は本発明による血栓溶解性蛋白
の人血中のインヒビターに対する安定性を示す線図、第
３図は血栓溶解能試験（ｉｎｖｉｖｏ ）のためのウサ
ギを使用した動脈−静脈シャントの模式図、第４図は第
３図の実験系で行った血栓溶解能試験の結果を示した線
図である。 １：実施例１の結合物（アルギニンメチルエステル、デ
キストランＴ−４０を使用） ２：実施例１の結合物（アルギニン、デキストランＴ−
４０を使用） ３：ウロキナーゼ自体 ４：大腿動脈 ５：大腿静脈 ６：カテーテル ７：三方コック ８：ゴムのチューブ ｇ、＋２５１−血栓ｌＯ：釣針
１１：注射筒 特許出願人 株式会社株式会社ミドリ十字第１図 １ ヵロ島時間（ｈｒ、） 第２図 ２ 手続補正書印釦 １．事件の表示 昭和５８年特許願第１１８８０９号 ２、発明の名称 血栓溶解性蛋白の局所親和性向上方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 氏名（名称） 株式会社 ミドリ十字 ４、代理人 ■５４１ 住 所 大阪市東区平野町４丁目５３の３ニユ一ライフ
平野町４０６号 電話（０６）２２７−１１５６ ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 願書の「発明の名称」の欄 明細書の「発明の名称」の欄 ｆｌ） 願書の発明の名称の？房を別紙の通りにする。 （２） 明細書の発明の名称の欄を次の通りにする。 「血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向」三方法」（３）
明細書第４頁、第９行［プラスミノーゲ刈の次に「アク
チヘーター」を加入する。 （４）同書第７真 ［ に訂正する。 （５）同書第９頁、第６行ｒ８０，０ＯＯＪをｒ１４０
，０００ Ｊに訂正する。 （６）同書第１２頁、第１行「動脈側」の次に「の三法
コック」を加入する。 （７） 同書−第１３頁、第１０行「ラム１ｏ■」を「
ラム（１０■」に訂正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■血栓溶解性蛋白に塩基性アミノ酸またはそのアルキル
エステルを化学的に結合させることを特徴とする血栓溶
解性蛋白の疾患局所親和性向上方法。 ■血栓熔解性蛋白と塩基性アミノ酸またはそのアルキル
エステルとの結合が、高分子多糖類を介しておこなわれ
る特許請求の範囲第０項記載の方法。 ■高分子多糖類がデキストランである特許請求の範囲第
０項記載の方法。 ■デキストランの分子量が１，０００〜２００万である
特許請求の範囲第０項記載の方法。 ■塩基性アミノ酸がアルギニン、リジンである特許請求
の範囲第■乃至０項のいずれかに記載の方法。 ■高分子多糖［１ｍｇに対して塩基性アミノ酸またはそ
のアルキルエステルを０．１〜３μｍｏｌ・血栓溶解性
蛋白を１００１０〜ｉｏｏ、ｏｏｏ ｔｕに相当する割
合で結合させることを特徴とする特許請求の範囲第０項
記載の方法。 ■高分子多糖類に塩基性アミノ酸またはそのアルキルエ
ステルを結合させた後、血栓熔解性蛋白を結合させるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第０項記載の方法。 °■血栓溶解性蛋白がウロキナーゼである特許請求の範
囲第０〜０項のいずれかに記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58118809A JPS6011427A (ja) | 1983-06-29 | 1983-06-29 | 血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58118809A JPS6011427A (ja) | 1983-06-29 | 1983-06-29 | 血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6011427A true JPS6011427A (ja) | 1985-01-21 |
| JPH0332356B2 JPH0332356B2 (ja) | 1991-05-10 |
Family
ID=14745661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58118809A Granted JPS6011427A (ja) | 1983-06-29 | 1983-06-29 | 血栓溶解性蛋白の疾患局所親和性向上方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6011427A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01238536A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-09-22 | Scripps Clinic Res Found | 動脈の血栓症的閉塞または塞栓症を阻止するための医薬組成物 |
-
1983
- 1983-06-29 JP JP58118809A patent/JPS6011427A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01238536A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-09-22 | Scripps Clinic Res Found | 動脈の血栓症的閉塞または塞栓症を阻止するための医薬組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0332356B2 (ja) | 1991-05-10 |
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