JPS61243024A - 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 - Google Patents
新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物Info
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- JPS61243024A JPS61243024A JP61076420A JP7642086A JPS61243024A JP S61243024 A JPS61243024 A JP S61243024A JP 61076420 A JP61076420 A JP 61076420A JP 7642086 A JP7642086 A JP 7642086A JP S61243024 A JPS61243024 A JP S61243024A
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- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6459—Plasminogen activators t-plasminogen activator (3.4.21.68), i.e. tPA
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は酵素の分解した種、その種の単離、その種を含
む製薬組成物及び血栓症の治療に用いられるその用途に
関する。
む製薬組成物及び血栓症の治療に用いられるその用途に
関する。
ヒトのフィブリン溶解酵素である組織型プラスミノーゲ
ン活性物質（ｔ−ＰＡ）は血栓症の治療に用いられてき
ている。しかしこの酵素の不利はその活性が肝臓を経る
クリアランス及び天然のアンチグロテアーゼによる不活
性化により生体内で急速に消失することにある。
ン活性物質（ｔ−ＰＡ）は血栓症の治療に用いられてき
ている。しかしこの酵素の不利はその活性が肝臓を経る
クリアランス及び天然のアンチグロテアーゼによる不活
性化により生体内で急速に消失することにある。
天然ｔ−ＰＡの活性部位の不可逆的なブロッキングはｔ
−ＰＡ分子の急速なりリアランスに殆んど効果がなくそ
れ放油性部位滴定剤例えばｐ−アニシン酸によるｔ−Ｐ
Ａの活性部位の可逆的ブロッキングがその生物学的半減
期を延長しないことも示唆された〔シー・コーニンガー
（（：：＊Ｋｏｒｎｉｎｇｅｒ）ら、１９８１．ｒ’ｘ
ｏング、へＡ 、 （Ｔｈｒｏｍｂ、Ｈａｅｍ、 ）
４６．６５８〜６６１ ）。
−ＰＡ分子の急速なりリアランスに殆んど効果がなくそ
れ放油性部位滴定剤例えばｐ−アニシン酸によるｔ−Ｐ
Ａの活性部位の可逆的ブロッキングがその生物学的半減
期を延長しないことも示唆された〔シー・コーニンガー
（（：：＊Ｋｏｒｎｉｎｇｅｒ）ら、１９８１．ｒ’ｘ
ｏング、へＡ 、 （Ｔｈｒｏｍｂ、Ｈａｅｍ、 ）
４６．６５８〜６６１ ）。
天然のヒトｔ−ＰＡは分子量（Ｍｒ）＝６３，０００及
び６５．０００ の二つの形で存在する〔ディー・ベ
ン二カ（Ｄ＊Ｐｅｎｎ１ｃａ）ら、１９８３．ｒネーチ
ュア（Ｎａｔｕｒｅ） Ｊ ３０１．２１４〜２２１
）。ｔ −ＰＡの単離された活性の軽い鎖とは別に〔デ
ィー・シー・リケ７ （Ｄ１１Ｃ＠Ｒｉｊｋｅｎ）、
１９８４． 「ヘモスタシｘ （Ｈａｅｍｏｓｔａｇｉ
ｓ）ＪＩ４．１４）、 ｔ −ＰＡの２種のフィブリン
溶解活性分解様が既に記載されている。ｇｒ−Ｊ）５５
．０００ （イー・エル・ウイルソ：ｙ （Ｅ、 Ｌ、
Ｗｉｌａｏｎ）ら、１９８０．ｒキャンサーレｘ、（Ｃ
ａｎｅｅｒ Ｒｅｇ、 ）Ｊ土０，９３３〜９３８；シ
ー・フセｙ （Ｃ，［ｕｅｓｓｓｅｎ）及びイ一番ビー
・ダウドｋ ＣＥ、 Ｂ、Ｄｏｗｄ ｌ ｅ ）、 ｒ
７ナル、ビオケＡ、 （Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｅｈｅ
ｍ、）Ｊ１０２．１９６〜２０２：エル・シー・ギルバ
ー） （Ｌ、 Ｃ，Ｇｉｌ −ｂｅｒｔ）及びジエー・
ティ・ワクスマン（Ｊ、Ｔ。
び６５．０００ の二つの形で存在する〔ディー・ベ
ン二カ（Ｄ＊Ｐｅｎｎ１ｃａ）ら、１９８３．ｒネーチ
ュア（Ｎａｔｕｒｅ） Ｊ ３０１．２１４〜２２１
）。ｔ −ＰＡの単離された活性の軽い鎖とは別に〔デ
ィー・シー・リケ７ （Ｄ１１Ｃ＠Ｒｉｊｋｅｎ）、
１９８４． 「ヘモスタシｘ （Ｈａｅｍｏｓｔａｇｉ
ｓ）ＪＩ４．１４）、 ｔ −ＰＡの２種のフィブリン
溶解活性分解様が既に記載されている。ｇｒ−Ｊ）５５
．０００ （イー・エル・ウイルソ：ｙ （Ｅ、 Ｌ、
Ｗｉｌａｏｎ）ら、１９８０．ｒキャンサーレｘ、（Ｃ
ａｎｅｅｒ Ｒｅｇ、 ）Ｊ土０，９３３〜９３８；シ
ー・フセｙ （Ｃ，［ｕｅｓｓｓｅｎ）及びイ一番ビー
・ダウドｋ ＣＥ、 Ｂ、Ｄｏｗｄ ｌ ｅ ）、 ｒ
７ナル、ビオケＡ、 （Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｅｈｅ
ｍ、）Ｊ１０２．１９６〜２０２：エル・シー・ギルバ
ー） （Ｌ、 Ｃ，Ｇｉｌ −ｂｅｒｔ）及びジエー・
ティ・ワクスマン（Ｊ、Ｔ。
Ｗａｃｈｓｍａｎ）ｒビオキム、ビオフジ、アクタ。
（Ｂｉｏｅｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ％Ａｃｔａ、 ）
Ｊ ７０４．４５０〜４６０：ケー・スエイシ（Ｋ、
５ｕｅｉａｈｉ）ら、１９８２、ｒビオキム、ビオフ
ジ、オクタ、Ｊ ７１７゜３２７〜３３６）及びＭｒ＝
約３８，０００（（−−：！−ル・ウィルソンら、１９
８０：エル・シー拳キルハート及ヒシエー・ティーワク
スマン、１９８２）。
Ｊ ７０４．４５０〜４６０：ケー・スエイシ（Ｋ、
５ｕｅｉａｈｉ）ら、１９８２、ｒビオキム、ビオフ
ジ、オクタ、Ｊ ７１７゜３２７〜３３６）及びＭｒ＝
約３８，０００（（−−：！−ル・ウィルソンら、１９
８０：エル・シー拳キルハート及ヒシエー・ティーワク
スマン、１９８２）。
しかし何れも単離そして分析されていない。
天然のｔ−ＰＡと異なりｔ−ＰＡのＭｒ＝５５．０００
の種はフィブリンクロットに強く結合しないことが報告
されている〔エルーバイヤイ（Ｌ、 Ｂａｎｙａｉ）ら
、１９８３．ＦＥＢＳ、１６３゜３７〜４１）。ｔ−Ｐ
ＡのＭｒ＝３８，０００，４０，０００の種がＭｒ＝５
５．０００の種により失われたのと少くとも同じ部分の
天然のｔ−ＦＡ酵素を失ったのではないかと予想するの
は不合理ではない。
の種はフィブリンクロットに強く結合しないことが報告
されている〔エルーバイヤイ（Ｌ、 Ｂａｎｙａｉ）ら
、１９８３．ＦＥＢＳ、１６３゜３７〜４１）。ｔ−Ｐ
ＡのＭｒ＝３８，０００，４０，０００の種がＭｒ＝５
５．０００の種により失われたのと少くとも同じ部分の
天然のｔ−ＦＡ酵素を失ったのではないかと予想するの
は不合理ではない。
それ故Ｍｒ＝３８．０００／４０．０００の種がフィブ
リンの親和性を示すと予想されなかった。
リンの親和性を示すと予想されなかった。
驚くべきことにｔ−ＰＡのＭｒ＝３８，０００．／４０
．０００の種がヒトのフィブリンクロットに顕著な親和
性を保持することを本発明者は見い出した。さらにＭｒ
＝３８，０００／４０，０００ の種の形が生体内で
クリアランス速度を低下させることが驚くべきことに分
った。
．０００の種がヒトのフィブリンクロットに顕著な親和
性を保持することを本発明者は見い出した。さらにＭｒ
＝３８，０００／４０，０００ の種の形が生体内で
クリアランス速度を低下させることが驚くべきことに分
った。
Ｍｒ＝３８．０００／４０，０００の種は整理されセし
てＮ末端配列順アラニン−グリシン−リジン−チロシン
−よりなるととが分った。これはペン二カらにより記載
された天然のｔ−ＰＡの配列順と比較されそれから種の
Ｎ末端アミノ酸残基が天然のｔ−ＰＡの残基 に相
当するこ１６ σ とが帰納される。この種は以下にアラニン１６０・ｔ−
ＰＡ（アラｉ６゜・−ｔ−ＰＡ）として示されよう。
てＮ末端配列順アラニン−グリシン−リジン−チロシン
−よりなるととが分った。これはペン二カらにより記載
された天然のｔ−ＰＡの配列順と比較されそれから種の
Ｎ末端アミノ酸残基が天然のｔ−ＰＡの残基 に相
当するこ１６ σ とが帰納される。この種は以下にアラニン１６０・ｔ−
ＰＡ（アラｉ６゜・−ｔ−ＰＡ）として示されよう。
天然のｔ−ＰＡは軽い０３）そして重い（４）鎖よりな
る。Ｂ鎖は酵素の活性部位を含む。Ａ鎖が他の血漿蛋白
に見い出される構造に一致する多数の構造的及び機能的
領域を示す即ち２個の三重ジサルファイド結合構造即ち
クリングル、成長因子様領域及びフィブロネクチン−フ
ィンガ一様領域を示すことが分った〔ティー・ナイ（Ｔ
。
る。Ｂ鎖は酵素の活性部位を含む。Ａ鎖が他の血漿蛋白
に見い出される構造に一致する多数の構造的及び機能的
領域を示す即ち２個の三重ジサルファイド結合構造即ち
クリングル、成長因子様領域及びフィブロネクチン−フ
ィンガ一様領域を示すことが分った〔ティー・ナイ（Ｔ
。
Ｎｙ）ら、１９８４．ｒプロセ・ナトルーアカド・サイ
（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、）ＵＳＡＪ
、８１゜５３５５ｒザｅストラクチユア・オン・ザ・ヒ
ユーマン拳ティシュ−・タイプ・プラスミノーゲン−７
クテベーター・シーン：コリレーション・オフ゛ｅイン
トロン・アンドｅエキソン・ストラクチュアズ・ツウ・
ファンクショナル・アント−ストラクチュラル魯ドメン
ズ（Ｔｈｅ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ ｔｈｅ ｈ
ｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏ
ｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ ｇｅｎｅ：Ｃｏｒｒｅｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆｉｎｔｒｏｎ ａｎｄ ｅｘｏｎ ５ｔ
ｒｕｃｔｕｒｅｓ ｔ。
（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、）ＵＳＡＪ
、８１゜５３５５ｒザｅストラクチユア・オン・ザ・ヒ
ユーマン拳ティシュ−・タイプ・プラスミノーゲン−７
クテベーター・シーン：コリレーション・オフ゛ｅイン
トロン・アンドｅエキソン・ストラクチュアズ・ツウ・
ファンクショナル・アント−ストラクチュラル魯ドメン
ズ（Ｔｈｅ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ ｔｈｅ ｈ
ｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅ−ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏ
ｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ ｇｅｎｅ：Ｃｏｒｒｅｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆｉｎｔｒｏｎ ａｎｄ ｅｘｏｎ ５ｔ
ｒｕｃｔｕｒｅｓ ｔ。
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ５ｔｒｕｃｔｕｒａ
ｌ ｄｏｍａｉｎａ）Ｊ。
ｌ ｄｏｍａｉｎａ）Ｊ。
それ故ｔ−ＰＡ分子はＦＧＫＩＫ２Ｂとしてこれらの領
域により記載されＦはフィンガー領域でありＧは成長因
子領域でありに１及びに２はクリングル構造でありセし
てＢはＢ＠である。
域により記載されＦはフィンガー領域でありＧは成長因
子領域でありに１及びに２はクリングル構造でありセし
てＢはＢ＠である。
アラｈｇｏ−ｔ−ＰＡ種はクリングル２（Ｋ２）ととも
に天然のｔ−ＰＡのＢ鎖より主としてなり残基アラＮｉ
６Ｉはクリングル１内に存在してアラ１６Ｇ−ｔ−ＦＡ
種ではクリングル１の不充分なアミノ酸残基が存在して
その領域について構造的及び機能的の完全さをもたらす
。
に天然のｔ−ＰＡのＢ鎖より主としてなり残基アラＮｉ
６Ｉはクリングル１内に存在してアラ１６Ｇ−ｔ−ＦＡ
種ではクリングル１の不充分なアミノ酸残基が存在して
その領域について構造的及び機能的の完全さをもたらす
。
Ｂ鎖及びクリングル２よりなる遺伝子工学由来のｔ−Ｐ
Ａムティンの製造は既に記述されている〔ネーザランズ
・レッド・クロス・ブラッド・トランスフニージョン・
サービス、ＥＭＢＯワークショップ・オン・プラスミノ
ーゲン・アクチベーション、アマルフィ（Ｎｅｔｈｅｒ
ｌａｎｄｓＲｅｄ Ｃｒｏｓｓ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎ
ｓｆｕｓｉｏｎ ５ｅｒｖｉｃｅ。
Ａムティンの製造は既に記述されている〔ネーザランズ
・レッド・クロス・ブラッド・トランスフニージョン・
サービス、ＥＭＢＯワークショップ・オン・プラスミノ
ーゲン・アクチベーション、アマルフィ（Ｎｅｔｈｅｒ
ｌａｎｄｓＲｅｄ Ｃｒｏｓｓ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎ
ｓｆｕｓｉｏｎ ５ｅｒｖｉｃｅ。
ＥＭＢＯｗｏｒｋｓｈｏｐ ｏｎ ｐｌａｓｍｉｎｏｇ
ｅｎＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ、 Ａｍａｌｆｉ）イタリー
、１９８５年１０月１４〜１８日そして第１０回インタ
ーナショナル・コンブレス・オンｅスロンボシス・アン
ド・ヘモスタシス（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎ
ｇｒｅａａ ｏｎ ’ｌ’ｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ
Ｈａｅｍｏ −ａｔａｓｉｇ）、ＵＳＡ、１９８５年
７月１４〜１９日〕。
ｅｎＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ、 Ａｍａｌｆｉ）イタリー
、１９８５年１０月１４〜１８日そして第１０回インタ
ーナショナル・コンブレス・オンｅスロンボシス・アン
ド・ヘモスタシス（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎ
ｇｒｅａａ ｏｎ ’ｌ’ｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ
Ｈａｅｍｏ −ａｔａｓｉｇ）、ＵＳＡ、１９８５年
７月１４〜１９日〕。
しかし物質の単離及び精製は記述されていない。
本発明によれば天然のｔ−ＦＡ Ａ鎖の唯一の機能的
及び構造的に無関係な領域としてクリングル２へ結合し
た天然のｔ−ＰＡのフィブリン溶解に無関係なり鎖より
なる組織型プスミノーゲン活性体の精製し九フィブリン
溶解活性分解種が提供される。
及び構造的に無関係な領域としてクリングル２へ結合し
た天然のｔ−ＰＡのフィブリン溶解に無関係なり鎖より
なる組織型プスミノーゲン活性体の精製し九フィブリン
溶解活性分解種が提供される。
適当には分解した梅は従来の方法例えばナトリウムドデ
シルサルフェートポリアクリルアミドゲル電気透析によ
り測定されるとき少くとも７０チ純粋である。
シルサルフェートポリアクリルアミドゲル電気透析によ
り測定されるとき少くとも７０チ純粋である。
好ましくは分解した種は少くとも５Ｏｔｓ純粋であり一
層好ましくは少くとも９５チ純粋である。
層好ましくは少くとも９５チ純粋である。
一つの好ましい態様において分解した種はアラｘｓｏ−
ｔ−ｐＡである。
ｔ−ｐＡである。
他の好ましい態様では分解した種は３８，０００〜４０
．０００の範囲内の分子量を有する。
．０００の範囲内の分子量を有する。
本発明はさらに組換え宿主細胞にＤＮＡをコードした本
明細書で限定したｔ−ＰＡの分解した種を発現しそして
分解したｔ−ＰＡ生成物を回収することよりなる該分解
種を製造する方法を提供する。
明細書で限定したｔ−ＰＡの分解した種を発現しそして
分解したｔ−ＰＡ生成物を回収することよりなる該分解
種を製造する方法を提供する。
発明の方法は従来の組換え技術例えばマニアテス（Ｍａ
ｎｉａｔｉａ）ら「モレ中ニラ−・クローニンクーニー
・ラホラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｊｎｇ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ［ａｎｕ
ａｌ）Ｊ：コールドｅスプリング・ハーバ−（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ）１９８２に記載された
技術により行われよう。
ｎｉａｔｉａ）ら「モレ中ニラ−・クローニンクーニー
・ラホラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｊｎｇ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ［ａｎｕ
ａｌ）Ｊ：コールドｅスプリング・ハーバ−（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ）１９８２に記載された
技術により行われよう。
好ましい態様においてアラ −ｔ−ＰＡの実質的に純
粋な形又はＭｒ＝３８．０００〜４０，０００の種は例
えばクロマトグラフィを用いてｔ −ＰＡ分泌細胞系か
ら得られる天然のｔ−ＰＡからの分離により得られる。
粋な形又はＭｒ＝３８．０００〜４０，０００の種は例
えばクロマトグラフィを用いてｔ −ＰＡ分泌細胞系か
ら得られる天然のｔ−ＰＡからの分離により得られる。
好ましくは分離法で用いられる天然のｔ−ＰＡは部分的
に精製される〔例えばエム・ジエー・アラｔ ｙ （Ｍ
、 Ｊ、 Ｂｒｏｗｎｅ）ら、１９８５．ｒシーン （
Ｑｅｎｅ）Ｊ３３．２７９）。
に精製される〔例えばエム・ジエー・アラｔ ｙ （Ｍ
、 Ｊ、 Ｂｒｏｗｎｅ）ら、１９８５．ｒシーン （
Ｑｅｎｅ）Ｊ３３．２７９）。
クロマトグラフィは例えばセファデックス（Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ）である適切な分子ふるいを用いて行われよう。
ｄｅｘ）である適切な分子ふるいを用いて行われよう。
好ましくは少くとも２回のクロットゲラフイエ程が用い
られる。例えば限外濾過による濃縮は好ましくはそれぞ
れのクロマトグラフィ工程後に行われる。
られる。例えば限外濾過による濃縮は好ましくはそれぞ
れのクロマトグラフィ工程後に行われる。
Ｍｒ＝３８，０００／４０，０００ と名付けられる
分解した種はＭｒ＝３８，０００及びＭｒ＝４０，００
０の２種の変種に分離されそれらはこのやり方で異る天
然のｔ−ＰＡの２種の変種（Ｍｒ＝６３，０００及び６
５．０００ ）とのアナロジ−によりアミノ酸残基アス
パラギン１８４に炭水化物においてのみ恐らく異なるこ
とが分った〔ジー・ポール（Ｑ、ｐｏｈｌ）ら 「バイ
オケミストリー（１３ｉｏｃｈｅ−ｍｉｓｔｒｙ）１９
８４．−ジｊ、３７０１〜７参照〕。
分解した種はＭｒ＝３８，０００及びＭｒ＝４０，００
０の２種の変種に分離されそれらはこのやり方で異る天
然のｔ−ＰＡの２種の変種（Ｍｒ＝６３，０００及び６
５．０００ ）とのアナロジ−によりアミノ酸残基アス
パラギン１８４に炭水化物においてのみ恐らく異なるこ
とが分った〔ジー・ポール（Ｑ、ｐｏｈｌ）ら 「バイ
オケミストリー（１３ｉｏｃｈｅ−ｍｉｓｔｒｙ）１９
８４．−ジｊ、３７０１〜７参照〕。
他の好ましい態様において分解した株は約３８．０００
の分子量を有する。
の分子量を有する。
本発明のｔ−ＰＡの分解した種は誘導化されて周知のｔ
−ＰＡ含有コンジュゲートに似た製薬上有用なコンジュ
ゲートをもたらす。例えば以下の通シである。
−ＰＡ含有コンジュゲートに似た製薬上有用なコンジュ
ゲートをもたらす。例えば以下の通シである。
（ＩＬ）ＥＰ−Ａ−０１５５，３８８Ｋ開示すｈ ７’
Ｃ酵素−蛋白コンジュゲート（フィブリン溶解活性に関
係のある酵素上の触媒部位は可逆性結合基によりそれに
結合したヒト蛋白によりブロックされている）； （ｂ） ＥＰ−Ａ−０１５２，７３２に開示された酵素
−蛋白コンジュゲート（フィブリン溶解活性に関係のあ
る触媒部位以外の部位により少くとも１種のヒト蛋白へ
結合する少くとも１種の任意にブロックされてもよいフ
ィブリン溶解酵素よりなる）： （ｅ）％願昭６０−２６９２０６号に開示された蛋白−
重合体コンジュゲート（可逆性結合基により少くとも１
種の水溶性重合体へ結合した製薬上有用な蛋白よりなる
）：又は （ｄ）特願昭６０−２６９２０６号に開示された酵素フ
ンシュゲート（除去しうるブロッキング基によりその活
性中心を通して共に結合した複数のフィブリン溶解酵素
よりなる）。
Ｃ酵素−蛋白コンジュゲート（フィブリン溶解活性に関
係のある酵素上の触媒部位は可逆性結合基によりそれに
結合したヒト蛋白によりブロックされている）； （ｂ） ＥＰ−Ａ−０１５２，７３２に開示された酵素
−蛋白コンジュゲート（フィブリン溶解活性に関係のあ
る触媒部位以外の部位により少くとも１種のヒト蛋白へ
結合する少くとも１種の任意にブロックされてもよいフ
ィブリン溶解酵素よりなる）： （ｅ）％願昭６０−２６９２０６号に開示された蛋白−
重合体コンジュゲート（可逆性結合基により少くとも１
種の水溶性重合体へ結合した製薬上有用な蛋白よりなる
）：又は （ｄ）特願昭６０−２６９２０６号に開示された酵素フ
ンシュゲート（除去しうるブロッキング基によりその活
性中心を通して共に結合した複数のフィブリン溶解酵素
よりなる）。
本発明のｔ−ＰＡの分解した種は前記のフンシュゲート
の任意のものの酵素又は（ヒト）蛋白成分として適切な
らばｔ−ＦＡに代わるだろう０ ｔ−ＰＡの分解した種又はそのコンジュゲートは又誘導
化されてフィブリン溶解活性に必須の任意の触媒部位が
任意に除去しうるブロッキング基によりブロックされて
もよい。
の任意のものの酵素又は（ヒト）蛋白成分として適切な
らばｔ−ＦＡに代わるだろう０ ｔ−ＰＡの分解した種又はそのコンジュゲートは又誘導
化されてフィブリン溶解活性に必須の任意の触媒部位が
任意に除去しうるブロッキング基によりブロックされて
もよい。
アラ −ｔ−ＰＡ種の活性部位の可逆性プロツΦング
又はＭｒ＝３８．０００／４０．０００のｔ −ＦＡ種
が生体内で遅いクリアランス速度をもたらすことが分っ
た。
又はＭｒ＝３８．０００／４０．０００のｔ −ＦＡ種
が生体内で遅いクリアランス速度をもたらすことが分っ
た。
それ故又本発明によればフィブリン溶解活性に必須の触
媒部位が除去しうるブロッキング基によりブロックされ
ている前記の組織型プラスミノーゲン活性体のフィブリ
ン浴解活性分解種を提供する。
媒部位が除去しうるブロッキング基によりブロックされ
ている前記の組織型プラスミノーゲン活性体のフィブリ
ン浴解活性分解種を提供する。
本明細書において用語「除去しうるブロッキング基」と
は加水分解の擬−次速度定数が３７℃でｐ Ｈ７，４で
等張性水性媒体で１０→／秒〜１０−２／秒好ましくは
１０−１〜１０−）’秒の範囲内にあるような速度で加
水分解により除去されうる基を含む。
は加水分解の擬−次速度定数が３７℃でｐ Ｈ７，４で
等張性水性媒体で１０→／秒〜１０−２／秒好ましくは
１０−１〜１０−）’秒の範囲内にあるような速度で加
水分解により除去されうる基を含む。
このようなブロッキング基はヨーロッパ特許第０００９
８７９号に記載されておりそしてアフル基例えば置換さ
れていてもよいベンゾイル又は置換されていてもよいア
クリロイルを含む。
８７９号に記載されておりそしてアフル基例えば置換さ
れていてもよいベンゾイル又は置換されていてもよいア
クリロイルを含む。
ベンゾイルブロッキング基の適当な任意の置換基はハロ
ゲン、０１〜６アルキル、Ｃ８〜ｅアルコキシ、０１〜
．アルカノイルオキシ、Ｃ１〜６アルカノイルアミノ、
アミノ又はｐ−グアニジノを含む。
ゲン、０１〜６アルキル、Ｃ８〜ｅアルコキシ、０１〜
．アルカノイルオキシ、Ｃ１〜６アルカノイルアミノ、
アミノ又はｐ−グアニジノを含む。
アクリロイルプロツ牛ング基の適当な任意の置換基ｕｃ
、〜。アルキル、フリル、フェニル又ハＣ鵞〜６アル中
ルフェニルヲ含ｔｒ。
、〜。アルキル、フリル、フェニル又ハＣ鵞〜６アル中
ルフェニルヲ含ｔｒ。
除去しうるブロッキング基の例はｐ−７ニソイル及びＮ
、 Ｎ−ジメチル ４−アミノベンゾイルを含む。
、 Ｎ−ジメチル ４−アミノベンゾイルを含む。
除去しうるブロッキング基による活性中心のブロッキン
グはヨーロッパ特許第０００９８７９号に記載された方
法によ転打われる。
グはヨーロッパ特許第０００９８７９号に記載された方
法によ転打われる。
ｔ−ＰＡの分解した種の上述の誘導体は１−ＰＡｌｉそ
れ自体について下記される方法及び組成物の任意のもの
で用いられよう〇 天然のｔ−ＰＡ分子の急速なりリアランスをきめる認識
部位は本発明の分解した種に存在しないフラグメントに
存在することを本発明者の結果は示している。この推定
された部位が除去されると分子の活性中心は他のクリア
ランス機構により認識されるように思われる。従って活
性中心のノロツ中ングはファーマコキネテイクスの性質
を大きく改善する〇 本発明のｔ−ＰＡの種は適当には製薬組成物の形で投与
される。
れ自体について下記される方法及び組成物の任意のもの
で用いられよう〇 天然のｔ−ＰＡ分子の急速なりリアランスをきめる認識
部位は本発明の分解した種に存在しないフラグメントに
存在することを本発明者の結果は示している。この推定
された部位が除去されると分子の活性中心は他のクリア
ランス機構により認識されるように思われる。従って活
性中心のノロツ中ングはファーマコキネテイクスの性質
を大きく改善する〇 本発明のｔ−ＰＡの種は適当には製薬組成物の形で投与
される。
従って本発明は又製薬上許容しうる担体と組合わさった
本明細書で規定されたｔ−ＰＡのフィブリン溶解活性分
解種姑又はその誘導体よりなる製薬組成物を提供する。
本明細書で規定されたｔ−ＰＡのフィブリン溶解活性分
解種姑又はその誘導体よりなる製薬組成物を提供する。
−本発明による組成物はヒトへの静脈内投与に適した製
薬組成物として従来のやり方に従って処方されよう。
薬組成物として従来のやり方に従って処方されよう。
代表的には静脈内投与用の組成物は滅菌した等仮性水性
緩衝液中の滅菌酵素の溶液である。
緩衝液中の滅菌酵素の溶液である。
必要ならば本組成物は又劣化ｔ−ＰＡｔ−溶液に保つ溶
解化剤及び注射の部位の痛みを和らげる局所麻酔剤例え
ばリグノカインを含んでもよい。
解化剤及び注射の部位の痛みを和らげる局所麻酔剤例え
ばリグノカインを含んでもよい。
一般に本発明のｔ−ＰＡは蛋白の量を活性単位で示す熱
的にシールされた容器例えばアンプル又はパック中の乾
燥粉末又は水のない濃縮物の如き単位投与の形で供給さ
れよう。ｔ−ＰＡ種が除去しうるプロツ中ング基を含む
場合遊離の蛋白が遊離される時間の表示がなされよう。
的にシールされた容器例えばアンプル又はパック中の乾
燥粉末又は水のない濃縮物の如き単位投与の形で供給さ
れよう。ｔ−ＰＡ種が除去しうるプロツ中ング基を含む
場合遊離の蛋白が遊離される時間の表示がなされよう。
蛋白が潅流により投与されるときそれは滅菌製薬グレー
ドの「注射用水」又は生理食塩水を含む潅流風によ抄処
理されよう。蛋白が注射により投与されるならばそれは
滅菌水又は生理食塩水のアンプルにより処理されよう。
ドの「注射用水」又は生理食塩水を含む潅流風によ抄処
理されよう。蛋白が注射により投与されるならばそれは
滅菌水又は生理食塩水のアンプルにより処理されよう。
注射しうる又は潅流しうる組成物は投与前に成分を混合
することにより作られよう。
することにより作られよう。
投与される物質の量は必要なフィブリン溶解の量、それ
が要求される速度、血栓症の症状の重さ、クロットの位
置及び大きさに依存しよう。
が要求される速度、血栓症の症状の重さ、クロットの位
置及び大きさに依存しよう。
用いられる正確な投与量及び投与の方法は治療を担当す
る医師による環境に応じて病状の性質を見てきめられる
べきである。しかし一般に成長した血栓を治療される患
者は例えば５回の投与の注射により又は潅流により００
０１〜１０１ｑ／体重Ｋｐ （１日当り）を投与されよ
う。
る医師による環境に応じて病状の性質を見てきめられる
べきである。しかし一般に成長した血栓を治療される患
者は例えば５回の投与の注射により又は潅流により００
０１〜１０１ｑ／体重Ｋｐ （１日当り）を投与されよ
う。
上述の投与量の範囲内で有害な毒性掌上の作用は本発明
の化合物では示されない。
の化合物では示されない。
従って本発明の他の態様において患者に有効且非毒性の
量の本明細書で規定されたｔ−ＰＡのフィブリン溶解活
性分解種又はその誘導体を投与することよりなる血栓症
を治療する方法を提供する。
量の本明細書で規定されたｔ−ＰＡのフィブリン溶解活
性分解種又はその誘導体を投与することよりなる血栓症
を治療する方法を提供する。
本発明は又活性治療物質として用いられるそして特に血
栓症の治療に用いられる本明細書で規定されたｔ−ＰＡ
のフィブリン溶解活性分解種又はその誘導体を提供する
。
栓症の治療に用いられる本明細書で規定されたｔ−ＰＡ
のフィブリン溶解活性分解種又はその誘導体を提供する
。
以下の実施例は本発明を説明する。
本明細書における分子量（Ｍｒ）は非還元条件下ナトリ
９ムドデシルサルフエートボＩＪ ７クリルアミドグル
電気透析により求められる見掛は上の分子量である。
９ムドデシルサルフエートボＩＪ ７クリルアミドグル
電気透析により求められる見掛は上の分子量である。
実施例１
アラニンｘｓｏｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）の単離
組換えボウス（Ｂｏｗｅｉ）黒色腫細胞により無血清培
地へ分泌された組織型プラスミノーゲン活性体はＳＤＳ
ＰＡＧＥ（Ｓ−・ケー・レエムリ（Ｕ、に、Ｌａｅｍ
ｍｌｉ）、 １９７０． ｒネーテユア」２２７．６８
０〜６８２〕次にフイプリンザイモグラフィ〔ニー拳グ
ラネリービペルノ（Ａ、Ｇｒａ−ｎｅｌｌｉ−ｐｉｐｅ
ｒｎｏ）及びイー・ライヒ（Ｅ、Ｒｅ ｉ ｃｈ）。
組換えボウス（Ｂｏｗｅｉ）黒色腫細胞により無血清培
地へ分泌された組織型プラスミノーゲン活性体はＳＤＳ
ＰＡＧＥ（Ｓ−・ケー・レエムリ（Ｕ、に、Ｌａｅｍ
ｍｌｉ）、 １９７０． ｒネーテユア」２２７．６８
０〜６８２〕次にフイプリンザイモグラフィ〔ニー拳グ
ラネリービペルノ（Ａ、Ｇｒａ−ｎｅｌｌｉ−ｐｉｐｅ
ｒｎｏ）及びイー・ライヒ（Ｅ、Ｒｅ ｉ ｃｈ）。
１９７８、ｒジエー・エクスペ・メゾ（Ｊ、ＥＸＰ。
Ｍｅｄ、）Ｊ、１４８，２２３〜２３４）によし数種の
ｔ−ＰＡを含むことが示された。すべてのｔ −ＰＡ株
は亜鉛キレート及びリジンセファローゼ（Ｓｅｐｈａｒ
ｏａｅ、商標名）のクロマトグラフィ〔エム・ジエー・
ブラウン（ｊｉＬ Ｊ、 Ｂ ｒ ｏｗｎ ｅ ）ら、
１９８５、ｒジーンＪ、３３，２７９］ により精製
し限外濾過により濃縮した。濃縮物を０．０５ＭＮ Ｈ
ａ ＨＣＯｓへ緩衝液交換しそして凍結乾燥した。
ｔ−ＰＡを含むことが示された。すべてのｔ −ＰＡ株
は亜鉛キレート及びリジンセファローゼ（Ｓｅｐｈａｒ
ｏａｅ、商標名）のクロマトグラフィ〔エム・ジエー・
ブラウン（ｊｉＬ Ｊ、 Ｂ ｒ ｏｗｎ ｅ ）ら、
１９８５、ｒジーンＪ、３３，２７９］ により精製
し限外濾過により濃縮した。濃縮物を０．０５ＭＮ Ｈ
ａ ＨＣＯｓへ緩衝液交換しそして凍結乾燥した。
ｔ−ＰＡａ［をセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ 、
商標名）Ｇ−７５のカラムを通す再生した凍結乾燥物の
クロマトグラフィにより分離した。Ｍｒ＝約３８．００
０ の種を含む両分を発色性基質Ｈ−ンザイモグラフ
イにより同定した。これらの両分を集め限外−過により
濃縮しそしてセファデックスＧ−７５０カラムのクロマ
トグラフィに再びかけた。Ｍｒ＝約３８，０００のｔ−
ＰＡの種を含む両分を前述の如く同定し集め限外ｐ過に
よし濃縮しそして凍結乾燥のため又は生体内の直接使用
のために適当な緩衝液へ緩衝液交換された。
商標名）Ｇ−７５のカラムを通す再生した凍結乾燥物の
クロマトグラフィにより分離した。Ｍｒ＝約３８．００
０ の種を含む両分を発色性基質Ｈ−ンザイモグラフ
イにより同定した。これらの両分を集め限外−過により
濃縮しそしてセファデックスＧ−７５０カラムのクロマ
トグラフィに再びかけた。Ｍｒ＝約３８，０００のｔ−
ＰＡの種を含む両分を前述の如く同定し集め限外ｐ過に
よし濃縮しそして凍結乾燥のため又は生体内の直接使用
のために適当な緩衝液へ緩衝液交換された。
生成物をＭｒ＝約３８，０００のｔ−ＰＡと確認した。
その理由は、（１）それがｔ−ＰＡ及びｔ−ＰＡ Ｂ鎖
に免疫学的な類似点を有しセしてｕ−ＰＡとは免疫学的
に相違する、（２）非還元条件下の５ＤＳＰＡＧＥによ
りそれがＰＡＧＥブルー８３〔プリティシュ・ドラッグ
・ハウスズ（ＢｒｉｔｉａｈＤｒｕｇ Ｈｏｕａｅａ）
、英国〕を用いる蛋白の染色により又はフイブリンザイ
モグラフイ（第１図）によりＭｒ＝約３８，０００
を有する、（３）ヒトフィブリンプレートの用量反応が
Ｍｒ＝６３，０００／６５．０００のｔ−ＰＡのそれと
平行でありセしてｕ−ＰＡのそれとは平行ではないそし
て（４）ｕ−ＰＡが結合しない精製したヒトフィブリン
クロット定食において分子が顕著なフィブリン結合活性
を有する（実施例４参照）からである。
に免疫学的な類似点を有しセしてｕ−ＰＡとは免疫学的
に相違する、（２）非還元条件下の５ＤＳＰＡＧＥによ
りそれがＰＡＧＥブルー８３〔プリティシュ・ドラッグ
・ハウスズ（ＢｒｉｔｉａｈＤｒｕｇ Ｈｏｕａｅａ）
、英国〕を用いる蛋白の染色により又はフイブリンザイ
モグラフイ（第１図）によりＭｒ＝約３８，０００
を有する、（３）ヒトフィブリンプレートの用量反応が
Ｍｒ＝６３，０００／６５．０００のｔ−ＰＡのそれと
平行でありセしてｕ−ＰＡのそれとは平行ではないそし
て（４）ｕ−ＰＡが結合しない精製したヒトフィブリン
クロット定食において分子が顕著なフィブリン結合活性
を有する（実施例４参照）からである。
実施例２
部分的に精製されたアラニンｘｓｏｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝４
０．０００）の単離 亜鉛キレート及びリジンセファロースを用いるｔ−ＰＡ
の精製（実施例１に記載）中回収されたｔ−ＰＡ活性の
小さなしかし変化する部分がリジンセファロースカラム
の非吸着画分（Ｖｏ）に常にある。５ＤｓｐＡ６Ｅ 次
にフイプリンザイモグラフイにより分析すると見掛けＭ
ｒ＝４０．０００のｔ−ＰＡ様種がこれらの製品に検出
される。新しいリジンセファロースカラムのクロマトグ
ラフィに再びかけられるととの物質はそれに吸着しそし
て（１０２Ｍ）リス７０．５ ＭＮＩＬＣＬｌｏ、５Ｍ
Ｌ−アルギニ７１０．０１％７ウイーｙ（’ｌ’ｗｅｅ
ｎ）８０ｐＨ７，５を用いて次に解離される。
０．０００）の単離 亜鉛キレート及びリジンセファロースを用いるｔ−ＰＡ
の精製（実施例１に記載）中回収されたｔ−ＰＡ活性の
小さなしかし変化する部分がリジンセファロースカラム
の非吸着画分（Ｖｏ）に常にある。５ＤｓｐＡ６Ｅ 次
にフイプリンザイモグラフイにより分析すると見掛けＭ
ｒ＝４０．０００のｔ−ＰＡ様種がこれらの製品に検出
される。新しいリジンセファロースカラムのクロマトグ
ラフィに再びかけられるととの物質はそれに吸着しそし
て（１０２Ｍ）リス７０．５ ＭＮＩＬＣＬｌｏ、５Ｍ
Ｌ−アルギニ７１０．０１％７ウイーｙ（’ｌ’ｗｅｅ
ｎ）８０ｐＨ７，５を用いて次に解離される。
限外テ過による濃縮後存在する活性体の種の部分的な分
離はセファデックスＧ７５のカラムを通る１回の通過に
より達成される。カラムの画分された溶離物はＳＤＳ
ＰＡＧＥ／プイプリンザイモグラフィにより分析されそ
してＭｒ＝４０，０００に富んだ両分を集め濃縮した。
離はセファデックスＧ７５のカラムを通る１回の通過に
より達成される。カラムの画分された溶離物はＳＤＳ
ＰＡＧＥ／プイプリンザイモグラフィにより分析されそ
してＭｒ＝４０，０００に富んだ両分を集め濃縮した。
フイプリンザイモグラフイによる分析はＭｒ＝４０，０
００の種と実施例１のＭｒ＝３８，０００の種との間の
はつきりした区別を示した（第１図）。
００の種と実施例１のＭｒ＝３８，０００の種との間の
はつきりした区別を示した（第１図）。
実施例３
アラニア □６．ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）の純
度の確認 実施例１に記載されたアラニン１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝
３８，０００）の製品の冒純度は下記のテストで示され
た。
度の確認 実施例１に記載されたアラニン１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝
３８，０００）の製品の冒純度は下記のテストで示され
た。
（１）ＳＤＳ ＰＡＧＩ（次に蛋白の染色後非還元サ
ンプルはＭｒ＝３８，０００ で単一の大きなバンドを
示した。
ンプルはＭｒ＝３８，０００ で単一の大きなバンドを
示した。
（２）セクアＡ、１１リミテッド（Ｓｅｑｕａｌ Ｌｔ
ｄ、）〔英国、アバディーン〕により行われるＮ−末端
配列分析は「アラニン−グリクン−リジン−チロシン−
」の分子のＡ鎖部分についてのＮ−末端配列を与えた。
ｄ、）〔英国、アバディーン〕により行われるＮ−末端
配列分析は「アラニン−グリクン−リジン−チロシン−
」の分子のＡ鎖部分についてのＮ−末端配列を与えた。
混入した蛋白はこれらの残基の同定を妨げたに違いない
。
。
（３）ＳＤＳＰＡ（、Ｅ次にフィブリンザイモグラフィ
後単−の溶解が存在した（第１図）。
後単−の溶解が存在した（第１図）。
実施例４
７ラニン１６０ｔ−ＰＡのフィブリン結合の確認用いら
れるフィブリン結合テストはディーｅシー・リケ７ （
Ｄ、 Ｃ，Ｒｉｊｋｅｎ）及びディー・コレン（Ｄ、
Ｃｏ１１ｅｎ）（ｒジエ−１１バイオａ ｍ ケム、（
Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ）Ｊ（１９８１）、２５６゜７
０３５） のそれと同様であった。主としてプラスミ
ノーゲン活性体を含むフィブリノーゲン溶液をトロンビ
ンにより又はそれなしに処理されそしてすべて沈でんし
うる物質（例えばフィプ、リン）を遠心分離により単離
した。上澄み液をフィブリンプレート定量を用いて定量
した（実施例７記載）。２ａｌの処理（トロンビンによ
り又はそれなしに）の上澄み液の間の活性体の濃度中の
差はクロットに吸着した物質の量に等しかった。
れるフィブリン結合テストはディーｅシー・リケ７ （
Ｄ、 Ｃ，Ｒｉｊｋｅｎ）及びディー・コレン（Ｄ、
Ｃｏ１１ｅｎ）（ｒジエ−１１バイオａ ｍ ケム、（
Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ）Ｊ（１９８１）、２５６゜７
０３５） のそれと同様であった。主としてプラスミ
ノーゲン活性体を含むフィブリノーゲン溶液をトロンビ
ンにより又はそれなしに処理されそしてすべて沈でんし
うる物質（例えばフィプ、リン）を遠心分離により単離
した。上澄み液をフィブリンプレート定量を用いて定量
した（実施例７記載）。２ａｌの処理（トロンビンによ
り又はそれなしに）の上澄み液の間の活性体の濃度中の
差はクロットに吸着した物質の量に等しかった。
ｉ、５ｑ／−の最初のフィブリノーゲン〔カビ（Ｋａｂ
ｉ）グレードＬ〕の濃度及び約１００〜１０ Ｉ Ｕ／
−の範囲内のアラニン、６゜ｔ−ＰＡの４種の濃度を用
いフィブリンクロットへ吸着されたアラニン ｔ−Ｐ
Ａの量は元の溶液中の量の５５チであった。
ｉ）グレードＬ〕の濃度及び約１００〜１０ Ｉ Ｕ／
−の範囲内のアラニン、６゜ｔ−ＰＡの４種の濃度を用
いフィブリンクロットへ吸着されたアラニン ｔ−Ｐ
Ａの量は元の溶液中の量の５５チであった。
実施例５
Ｎ’ Ｎ’ジメチル ４−アミノベンツ′イルアラニン
１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）の合成０．０２
Ｍホスフェート、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０８０１
チツ９イーン８０ｐＨ７，４（ＰＢＳ／ＴＷ） 中の５
゜５％モルのアラニン１６０ｔ −ＰＡ（１４０Ｍｇ／
ｄ）を３０分間２５℃で３倍 モル過剰のＮ′，Ｎ′ジ
メチル ４−７ミノ安息香酸４−アミジノフェニルエス
テル肥 により処理した。遊離のアシル化剤を次にセフ
ァデックスＧ−２５を用いて ＰＢＳ／ＴＷへの緩衝液
交換により除去しそして生成物を一７０℃で貯蔵した。
１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）の合成０．０２
Ｍホスフェート、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０８０１
チツ９イーン８０ｐＨ７，４（ＰＢＳ／ＴＷ） 中の５
゜５％モルのアラニン１６０ｔ −ＰＡ（１４０Ｍｇ／
ｄ）を３０分間２５℃で３倍 モル過剰のＮ′，Ｎ′ジ
メチル ４−７ミノ安息香酸４−アミジノフェニルエス
テル肥 により処理した。遊離のアシル化剤を次にセフ
ァデックスＧ−２５を用いて ＰＢＳ／ＴＷへの緩衝液
交換により除去しそして生成物を一７０℃で貯蔵した。
合成に用いた方法はヨーロッパ特許第０Ｏ０９８７９号
に記載されたのと同じであった。
に記載されたのと同じであった。
３７℃で０．１ Ｍ ）リス、０．１５Ｍ塩化ナトリウ
Ａ、２０％（Ｖ／Ｖ）グＩＪ 七〇 −ル、 Ｑ。０
１チツウイーン８０ ｐ Ｆｌ ７．４中で行われた脱
アシル化ニヨリ３．４ Ｘ １０−’ ７秒の脱アシル
化速度定数（２回の測定の平均）を得た。
Ａ、２０％（Ｖ／Ｖ）グＩＪ 七〇 −ル、 Ｑ。０
１チツウイーン８０ ｐ Ｆｌ ７．４中で行われた脱
アシル化ニヨリ３．４ Ｘ １０−’ ７秒の脱アシル
化速度定数（２回の測定の平均）を得た。
実施例６
ｐ′−アニソイルアラニン１６０ｔ−ＰＡの合成ホスフ
ェート緩衝された生理食塩水（ＰＢＳｒＡ」：デエルベ
コ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ））１０．０１％ツウイー：／８
０１０．０２５Ｍ Ｌ−リジｙ ／ １０ ｍ１Ｆ／
−のマンニトール／１ｍＭ Ｋ−アミノカプロエート
（ＥＡＣＡ）中の２１ｎモルのアラ＝ｙｔｓｏｔ−ＰＡ
（０，５ｖ／ｄ）を３０分間２５℃で３倍モル過剰のｐ
−７ミジノフエニルｐ’−７ニセー） ＨＣＬにより処
理した。遊離のアシル化剤をセファデフ り、ｃ Ｇ
２ ｓ ｔ”用イテｐｎｓｒＡＪ、１０．０１ ％ｙ
ｅｙイーン８０１０．０２ＭＥＡＣＡへの緩衝液交換に
より除去した。生成物を一７０℃に貯蔵した。
ェート緩衝された生理食塩水（ＰＢＳｒＡ」：デエルベ
コ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ））１０．０１％ツウイー：／８
０１０．０２５Ｍ Ｌ−リジｙ ／ １０ ｍ１Ｆ／
−のマンニトール／１ｍＭ Ｋ−アミノカプロエート
（ＥＡＣＡ）中の２１ｎモルのアラ＝ｙｔｓｏｔ−ＰＡ
（０，５ｖ／ｄ）を３０分間２５℃で３倍モル過剰のｐ
−７ミジノフエニルｐ’−７ニセー） ＨＣＬにより処
理した。遊離のアシル化剤をセファデフ り、ｃ Ｇ
２ ｓ ｔ”用イテｐｎｓｒＡＪ、１０．０１ ％ｙ
ｅｙイーン８０１０．０２ＭＥＡＣＡへの緩衝液交換に
より除去した。生成物を一７０℃に貯蔵した。
ＰＢＳｒＡＪｌｏ、０１％ツウ（−：／ ８０ テ行ｂ
ｈｆｃ。
ｈｆｃ。
脱アシル化により３．９ Ｘ １０−’ ７秒の脱アシ
ル化速度定数を得た。脱アシル化前に少くとも９３チの
物質がアシル型であった。
ル化速度定数を得た。脱アシル化前に少くとも９３チの
物質がアシル型であった。
実施例７
モルモットの血流中のフィブリン溶解活性の定量
オスのダンキン・ハートレー（１）ｕｎｋｉｎＨａｒｔ
ｌｅｙ）−ｖ：ルモット（３５０〜４５０ Ｆ ）をウ
レタ７（２５％Ｖ／Ｖ溶液： ６ｄ／に９ｔ、Ｐ、 ）
［！り麻酔した。１本の頚動脈を血液サンプルの採取の
ためにカニヌレートした。１本の大腿静脈をヘパリンの
注入（ｓＯＵ／Ｋｐ ｉ、 ｖ、 ）及びテスト中の化
合物の注入のためにカニヌレートした。ヘパリン化の約
５分後に投与前の血液サンプルをとりそして０．１容量
の１２９ｍＭのくえん酸三ナトリウムと混合した。テス
ト中の化合物を次に１０秒かけて注入した（１−Ｚ／Ｋ
ｆ）。さらに血液サンプルを正確に２．４．８．１６．
３０及び６０分後にとった。ヘパリン処理（５０Ｕ／に
４ｔ、 ｖ、）をカニヌーラ開通性を維持するためにサ
ンプリングの３０分後に繰返した。すべてのくえん酸塩
添加血液サンプルをそれぞれの実験の終りまで氷上に保
ち次に血漿を得るために４Ｃで１５分間１７００Ｆで遠
心分離した。ニーグロブリン画分を０．１ ｍの各血漿
を水中の水冷０．０１−１％（Ｖ／Ｖ ）酢酸１．８２
−へ加えることにより沈でんさせた。水中に３０分間装
いた後すべての管を４℃で１５分間遠心分離した。上澄
み液を捨て６管の内壁を注意深く拭いて乾燥させセして
各沈テンをＯ−０１％ （Ｖ／Ｖ）ツウ（−７８０を含
む０．４−のホスフェート緩衝生理食塩水ｐＨ７，４に
再俗解した。一部（３０μｔ）を次に四分割のフィブリ
ンプレートに適用した。フィブリンプレートは１２５ｍ
ＭＮａＣ４中の０．０２９Ｍバルビ） ン（ｐＨ７，４
） ｖｃ溶Ｍｌ、た０、 ４ ％ （Ｗ／Ｖ）ヒトフィ
ブリノーゲン〔カビ（Ｋａｂｉ）、グレードＬ、フロー
・ラボラトリーズ（ＦＩＯＷ Ｌａｂｏ −ｒａｔｏｒ
ｉｅｓ）、 スコツトランド〕から製造され１０Ｘ１
０３の正方形のプラスチック皿〔ステリリン（Ｓｔｅｒ
ｉ目１）〕へ〕１０−ピペッで移しそして０．３−のウ
シトロンビン（５０ＮＩ）Ｉ単位／−、バーク・デービ
ｘ （ｐａｒｋｓ−］）ａｖｉｓ）、英国〕との急速な
混合によりクロットされた。プレートを通常１８〜２４
時間しかしもし必要ならばそれより長く３７℃でインキ
ュベートしそして水性ブロモフェノールブルーにより染
めた。それぞれの溶解帯についてそれぞれ直角の２本の
ｔＨＩｔベル二工（Ｖｅｒｎｉｅｒ）コンパスを用いて
測った。それぞれのサンプルのすべての直径を平均しそ
してこの平均値を補正曲線を参照してフィブリン溶解活
性へ転換した。曲線は各動物の投与前の血漿へテスト中
の化合物の周知の量を加えることにより得られた。これ
らの標準は実験用サンプルと同じ方法及び同じ時間を用
いて処理された。補正曲線を作るために直径・（■）は
化合物のｌｏｇｔｏ濃度に対してプロットされた。それ
ぞれの実験用サンプル中の化合物の血漿濃度はそれぞれ
のモルモットについて５（ｌｄの血漿／Ｋｆ体重の推定
に基いて予想されるもののチとして示された。
ｌｅｙ）−ｖ：ルモット（３５０〜４５０ Ｆ ）をウ
レタ７（２５％Ｖ／Ｖ溶液： ６ｄ／に９ｔ、Ｐ、 ）
［！り麻酔した。１本の頚動脈を血液サンプルの採取の
ためにカニヌレートした。１本の大腿静脈をヘパリンの
注入（ｓＯＵ／Ｋｐ ｉ、 ｖ、 ）及びテスト中の化
合物の注入のためにカニヌレートした。ヘパリン化の約
５分後に投与前の血液サンプルをとりそして０．１容量
の１２９ｍＭのくえん酸三ナトリウムと混合した。テス
ト中の化合物を次に１０秒かけて注入した（１−Ｚ／Ｋ
ｆ）。さらに血液サンプルを正確に２．４．８．１６．
３０及び６０分後にとった。ヘパリン処理（５０Ｕ／に
４ｔ、 ｖ、）をカニヌーラ開通性を維持するためにサ
ンプリングの３０分後に繰返した。すべてのくえん酸塩
添加血液サンプルをそれぞれの実験の終りまで氷上に保
ち次に血漿を得るために４Ｃで１５分間１７００Ｆで遠
心分離した。ニーグロブリン画分を０．１ ｍの各血漿
を水中の水冷０．０１−１％（Ｖ／Ｖ ）酢酸１．８２
−へ加えることにより沈でんさせた。水中に３０分間装
いた後すべての管を４℃で１５分間遠心分離した。上澄
み液を捨て６管の内壁を注意深く拭いて乾燥させセして
各沈テンをＯ−０１％ （Ｖ／Ｖ）ツウ（−７８０を含
む０．４−のホスフェート緩衝生理食塩水ｐＨ７，４に
再俗解した。一部（３０μｔ）を次に四分割のフィブリ
ンプレートに適用した。フィブリンプレートは１２５ｍ
ＭＮａＣ４中の０．０２９Ｍバルビ） ン（ｐＨ７，４
） ｖｃ溶Ｍｌ、た０、 ４ ％ （Ｗ／Ｖ）ヒトフィ
ブリノーゲン〔カビ（Ｋａｂｉ）、グレードＬ、フロー
・ラボラトリーズ（ＦＩＯＷ Ｌａｂｏ −ｒａｔｏｒ
ｉｅｓ）、 スコツトランド〕から製造され１０Ｘ１
０３の正方形のプラスチック皿〔ステリリン（Ｓｔｅｒ
ｉ目１）〕へ〕１０−ピペッで移しそして０．３−のウ
シトロンビン（５０ＮＩ）Ｉ単位／−、バーク・デービ
ｘ （ｐａｒｋｓ−］）ａｖｉｓ）、英国〕との急速な
混合によりクロットされた。プレートを通常１８〜２４
時間しかしもし必要ならばそれより長く３７℃でインキ
ュベートしそして水性ブロモフェノールブルーにより染
めた。それぞれの溶解帯についてそれぞれ直角の２本の
ｔＨＩｔベル二工（Ｖｅｒｎｉｅｒ）コンパスを用いて
測った。それぞれのサンプルのすべての直径を平均しそ
してこの平均値を補正曲線を参照してフィブリン溶解活
性へ転換した。曲線は各動物の投与前の血漿へテスト中
の化合物の周知の量を加えることにより得られた。これ
らの標準は実験用サンプルと同じ方法及び同じ時間を用
いて処理された。補正曲線を作るために直径・（■）は
化合物のｌｏｇｔｏ濃度に対してプロットされた。それ
ぞれの実験用サンプル中の化合物の血漿濃度はそれぞれ
のモルモットについて５（ｌｄの血漿／Ｋｆ体重の推定
に基いて予想されるもののチとして示された。
第２図はｔ−ＰＡのＭｒ＝３８，０００の種のＮ′Ｎ′
−ジメチル ４−７ミノベンゾイル（ＤＡＢ）誘導体が
ｔ−ＰＡ又はｔ−ＰＡのＤＡＢ−誘導体よりもモルモッ
トの循環からはるかに遅く排出されることを示す。
−ジメチル ４−７ミノベンゾイル（ＤＡＢ）誘導体が
ｔ−ＰＡ又はｔ−ＰＡのＤＡＢ−誘導体よりもモルモッ
トの循環からはるかに遅く排出されることを示す。
第１図はアラニン ｔ−ＰＡの２種の変種のナトリウ
ムドデシルサルフェートポリアクリルアミドゲル電気透
析次にフイブリンザイモグラ “フィを示す。 高純度アラ１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）’（
Ｌ／−ンＡ〕又は部分的に精製されたアラ□６０を−Ｐ
Ａ（Ｍｒ＝４０．ＧＯＯ）（Ｖ−７Ｂ ）又は両方の混
合物〔レーンＣ〕は主として実施例１に記載されたよう
にＳＤＳ ＰＡＧＥ次にフイプリンザイモグラフィによ
り分析された。生成物中のフィブリン溶解活性種は溶解
されないフィブリンに対して明確な溶解帯として現われ
る。レーンＤはフィブリン溶解マーカー蛋白である。 第２図はモルモットの血流中のフィブリン溶解活性を示
す。 投与後の分に対する最初の理論上の濃度（１）のプロッ
トにおいてプロットの印は次の通りである。 ０ 天然のｔ−ＰＡ （ｎ＝７ ） ・ ＤＡＢ ｔ−ＰＡ（ｎ＝４） Δ Ｍｒ＝３８，０００ ｔ−ＰＡ （ｎ＝４ ）Ａ
ＤＡＢ Ｍｒ＝３８，０００ｔ−ＰＡ（ｎ＝４）ｎ
＝動物の数 誤差の線は平均の標準誤差である。 代理人 弁理士 秋 沢 政 光 他１名 ＡＢＣＤ ｒＪ １０ ２０ ３０ ω
５０６０枚８箋軒吟間０ン Ｆｉｇ、２ 自発手続補正書 昭和６１年５月１２日
ムドデシルサルフェートポリアクリルアミドゲル電気透
析次にフイブリンザイモグラ “フィを示す。 高純度アラ１６０ｔ−ＰＡ（Ｍｒ＝３８，０００）’（
Ｌ／−ンＡ〕又は部分的に精製されたアラ□６０を−Ｐ
Ａ（Ｍｒ＝４０．ＧＯＯ）（Ｖ−７Ｂ ）又は両方の混
合物〔レーンＣ〕は主として実施例１に記載されたよう
にＳＤＳ ＰＡＧＥ次にフイプリンザイモグラフィによ
り分析された。生成物中のフィブリン溶解活性種は溶解
されないフィブリンに対して明確な溶解帯として現われ
る。レーンＤはフィブリン溶解マーカー蛋白である。 第２図はモルモットの血流中のフィブリン溶解活性を示
す。 投与後の分に対する最初の理論上の濃度（１）のプロッ
トにおいてプロットの印は次の通りである。 ０ 天然のｔ−ＰＡ （ｎ＝７ ） ・ ＤＡＢ ｔ−ＰＡ（ｎ＝４） Δ Ｍｒ＝３８，０００ ｔ−ＰＡ （ｎ＝４ ）Ａ
ＤＡＢ Ｍｒ＝３８，０００ｔ−ＰＡ（ｎ＝４）ｎ
＝動物の数 誤差の線は平均の標準誤差である。 代理人 弁理士 秋 沢 政 光 他１名 ＡＢＣＤ ｒＪ １０ ２０ ３０ ω
５０６０枚８箋軒吟間０ン Ｆｉｇ、２ 自発手続補正書 昭和６１年５月１２日
Claims (14)
- （１）天然のｔ−ＰＡＡ鎖の唯一の機能的及び構造的に
無傷の領域としてのクリングル （Ｋｒｉｎｇｌｅ）２へ結合した天然のｔ−ＰＡのフィ
ブリン溶解的に無傷のＢ鎖よりなる組織型プラスミノー
ゲン活性体の精製されたフィブリン溶解活性の分解した
種（ｓｐｅｃｉｅｓ）。 - （２）３８，０００〜４０，０００の範囲内の分子量を
有する特許請求の範囲第（１）項記載の種。 - （３）約３８，０００の分子量を有する特許請求の範囲
第（２）項記載の種。 - （４）精製されたアラニン＿１＿６＿０ｔ−ＰＡ。
- （５）少くとも７０％の純度の特許請求の範囲第（１）
〜（４）項の何れか一つの項記載の種。 - （６）特許請求の範囲第（１）〜（５）項の何れか一つ
の項記載の種の誘導体。 - （７）フィブリン溶解活性に必須な任意の触媒部位が除
去しうるブロッキング基により任意にブロックされてい
てもよい特許請求の範囲第（６）項記載の誘導体。 - （８）Ｎ′，Ｎ′ジメチル４−アミノベンゾイルアラニ
ン＿１＿６＿０ｔ−ＰＡ。 - （９）ｐ−アニソイルアラニン＿１＿６＿０ｔ−ＰＡ。
- （１０）製薬上許容しうる担体と組合わされた特許請求
の範囲第（１）〜（９）項の何れか一つの項記載の種よ
りなる製薬組成物。 - （１１）活性治療物質として用いられる特許請求の範囲
第（１）〜（９）項の何れか一つの項記載の種。 - （１２）血栓症の治療に用いられる特許請求の範囲第（
１）〜（９）項の何れか一つの項記載の種。 - （１３）組換え宿主細胞中にＤＮＡをコードした種を発
現させそして分解したｔ−ＰＡ生成物を回収することよ
りなる特許請求の範囲第（１）項記載の種を製造する方
法。 - （１４）ｔ−ＰＡ分泌細胞系から得られる天然のｔ−Ｐ
Ａから種を分離する特許請求の範囲第（２）、（３）又
は（４）項の何れか一つの項記載の種を製造する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858508717A GB8508717D0 (en) | 1985-04-03 | 1985-04-03 | Composition |
| GB8508717 | 1985-04-03 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61243024A true JPS61243024A (ja) | 1986-10-29 |
| JP2631645B2 JP2631645B2 (ja) | 1997-07-16 |
Family
ID=10577147
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61076420A Expired - Lifetime JP2631645B2 (ja) | 1985-04-03 | 1986-04-02 | 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4970159A (ja) |
| EP (1) | EP0196920B1 (ja) |
| JP (1) | JP2631645B2 (ja) |
| DE (1) | DE3689943T2 (ja) |
| GB (1) | GB8508717D0 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133988A (ja) * | 1986-01-24 | 1988-06-06 | ザイモジエネテイクス，インコ−ポレイテイド | 変形された組織プラスミノ−ゲンアクチベ−タ− |
| JPS6442442A (en) * | 1987-08-10 | 1989-02-14 | Eisai Co Ltd | Injectable composition containing modified type tpa |
| US6139838A (en) * | 1996-09-06 | 2000-10-31 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Tissue plasminogen activator medicinal composition |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8334498D0 (en) * | 1983-12-24 | 1984-02-01 | Beecham Group Plc | Compounds |
| GB8609948D0 (en) * | 1986-04-23 | 1986-05-29 | Beecham Group Plc | Compounds |
| US4880776A (en) * | 1983-12-24 | 1989-11-14 | Beecham Group P.L.C. | Plasmin A-chain urokinase B-chain hybrid protein |
| US5234686A (en) * | 1985-04-03 | 1993-08-10 | Beecham Group P.L.C. | Human tissue plasminogen activator consisting essentially of t-PA residues to 160 to 527, pharmaceutical compositions and methods of treatment |
| US5106741A (en) * | 1985-12-20 | 1992-04-21 | The Upjohn Company | Tissue plasminogen activator (TPA) analogs |
| JPH01500322A (ja) * | 1986-03-28 | 1989-02-09 | クリエイティブ バイオモレクレス，インコーポレーテッド | 組織プラスミノーゲンアクテイベーター類縁蛋白質 |
| US5580559A (en) * | 1986-12-05 | 1996-12-03 | Ciba-Geigy Corporation | Hybrid plasminogen activator |
| US5242819A (en) * | 1986-12-05 | 1993-09-07 | Ciba-Geigy Corporation | DNA molecules encoding hybrid proteins of tissue plasminogen activator and urokinase |
| JP2983997B2 (ja) * | 1987-01-30 | 1999-11-29 | アメリカン・ホーム・プロダクツ・コーポレイション | 脱―表皮細胞成長因子プラスミノーゲンアクチベーター |
| JPH084502B2 (ja) * | 1987-03-20 | 1996-01-24 | エーザイ株式会社 | 複合変異ｔＰＡ |
| US6682733B1 (en) * | 1987-06-18 | 2004-01-27 | Roche Diagnostics, Gmbh | Fibrinolytic enzymes |
| US4935237A (en) * | 1988-03-21 | 1990-06-19 | Genentech, Inc. | Processes for the preparation of t-PA mutants |
| JPH02504102A (ja) * | 1987-06-30 | 1990-11-29 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | 血管障害治療のための改良法 |
| IL87276A (en) * | 1987-08-03 | 1995-07-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Analog of a tissue plasminogen activator containing the Pringle 2 and protease regions only, DNA encoding it, processes for its preparation, and pharmaceutical preparations containing it |
| US5244676A (en) * | 1987-10-09 | 1993-09-14 | Monsanto Company | Modified tissue plasminogen activator with modified glycosylation site |
| US5100666A (en) * | 1987-10-09 | 1992-03-31 | Monsanto Company | Modified tissue plasminogen activator K2K2SP |
| US4999194A (en) * | 1988-01-14 | 1991-03-12 | Collaborative Research, Inc. | Two-chain urokinase plasminogen activators for treatment of thrombotic disease |
| US4929560A (en) * | 1988-02-03 | 1990-05-29 | Damon Biotech, Inc. | Recovery of tissue plasminogen activator |
| US5037646A (en) * | 1988-04-29 | 1991-08-06 | Genentech, Inc. | Processes for the treatment of vascular disease |
| US5676947A (en) * | 1989-02-07 | 1997-10-14 | Boehringer Manneheim Gmbh | Method for treating thromboembolic conditions using thrombolytically active proteins |
| US5242688A (en) * | 1990-12-24 | 1993-09-07 | Eli Lilly And Company | Method of treating thromboembolic disorders by administration of diglycosylated t-pa variants |
| EP0580685B1 (de) * | 1991-04-16 | 1996-01-03 | Roche Diagnostics GmbH | Pharmazeutische verpackungseinheit enthaltend plasminogenaktivatoren zur mehrfachbolusgabe |
| US5510330A (en) * | 1994-03-25 | 1996-04-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Combinations of thrombolytically active proteins and non-heparin anticoagulants, and uses thereof. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8003402A (nl) * | 1980-06-11 | 1982-01-04 | Leuven Res & Dev Vzw | Nieuwe plasminogeen-activator en farmaceutisch preparaat met trombolytische werking. |
| AR241654A1 (es) * | 1982-05-05 | 1992-10-30 | Genentech Inc | Procedimiento para producir activador de plasminogeno de tejido humano. |
| DE3682891D1 (de) * | 1986-02-17 | 1992-01-23 | Stichting Centraal Lab | Gewebeplasminogen-aktivator-mutant, dafuer kodierende rekombinante genetische information und verfahren zur herstellung dieser mutanten, deren verwendung und pharmazeutische zusammensetzungen. |
-
1985
- 1985-04-03 GB GB858508717A patent/GB8508717D0/en active Pending
-
1986
- 1986-04-01 US US06/846,903 patent/US4970159A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-02 DE DE3689943T patent/DE3689943T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-02 EP EP86302424A patent/EP0196920B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-02 JP JP61076420A patent/JP2631645B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133988A (ja) * | 1986-01-24 | 1988-06-06 | ザイモジエネテイクス，インコ−ポレイテイド | 変形された組織プラスミノ−ゲンアクチベ−タ− |
| JPS6442442A (en) * | 1987-08-10 | 1989-02-14 | Eisai Co Ltd | Injectable composition containing modified type tpa |
| US6139838A (en) * | 1996-09-06 | 2000-10-31 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Tissue plasminogen activator medicinal composition |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0196920A2 (en) | 1986-10-08 |
| DE3689943D1 (de) | 1994-08-11 |
| GB8508717D0 (en) | 1985-05-09 |
| EP0196920B1 (en) | 1994-07-06 |
| EP0196920A3 (en) | 1988-07-27 |
| DE3689943T2 (de) | 1994-10-20 |
| JP2631645B2 (ja) | 1997-07-16 |
| US4970159A (en) | 1990-11-13 |
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