JPH01215291A - 新規生理活性物質ＫＳ−５０３ｃおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、サイクリックヌクレオチドホスホジェステラ
ーゼ阻害作用を有する新規物質およびその製造法に関す
る。

従来の技術 サイクリックアデノシン−３’、　５’−モノリン酸（
以下ｃＡＭＰと略記する）、サイクリックグアノシン−
３’、　５’−モノリン酸（以下ｃＧＭＰと略記する）
は、生体内の情報伝達経路におけるセカンドメツセンジ
ャーとして重要な役割を担う物質であり、気管支、血管
などの平滑筋の収縮、心筋の収縮、ホルモンの分泌、血
小板の凝集、細胞増殖１分化などに関与しているといわ
れている。サイクリックヌクレオチドホスホジェステラ
ーゼ（以下ＰＤＥと略記する）は、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ
を加水分解し、それぞれアデノシン−５′−モノリン酸
、グアノシン−５′−モノリン酸を生成する酵素である
。該酵素を阻害する物質は、生体内のｃＡＭＰ、ｃＧＭ
Ｐの濃度を上昇させることから、気管支拡張作用、平滑
筋弛緩作用１強心作用、ホルモン分泌促進作用、血小板
凝集抑制作用などをもたらすことが知られている。

従来、微生物が生産するＰＤＥ阻害作用を有する物質と
して以下のものが知られている。

■テルフｓｏ−ル（Ｔｅｒｆｅｒｏｌ）ジャーナル・オ
ブ・アンチビオティクス（Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔ、）　
３７６−９　（１９８４）■グリセオリツク　アシド（
Ｇｒｉｓｅｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）ジャーナル・オブ・ア
ンチビオティクス（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔ、）　３８８
２３　（１９８５）■レティキｓｏ−ル（Ｒｅｔｉｃｕ
ｒｏｌ）ジャーナル・オブ・アンチビオティクス（Ｊ、
Ａｎｔｉｂｉｏｔ、）　２８５５ｇ−５６０（１９７５
）■ＰＤＥ−１，ｎ アグリカルチユラル・アンド・バイオロジカル・ケミス
トリー（Ａｇｒ、　８ｉｏ１．　Ｃｈｅｍ、＞　４２１
３３１−ＰＤＥ−Ｉ　　：　Ｒ＝−ＮＨ２ ＰＤＥ−ｎ　：　Ｒ＝　　ＣＨｓ ■ＫＳ−６１９−１ ジャーナル・オブ・アンチビオティクス（Ｊ、Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔ、）　４０１１０４−１１１０　（１９８７）
■に−２５９−２ ジャーナル・オブ・アンチビオティクス（Ｊ、Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔ、）　４０１０９２−１１００　（１９８７）
■ゲ二ステイン（Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）アグリカルチユ
ラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（＾ｇｒ
、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、）　５１３００３−Ｕｔ＋ ■〜■の物質は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ）属、■の物質はミクＣ１％／Ｘボラ属（Ｍｉ
ｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）属、■の物質はストレプト
スポランギウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ
）属の放線菌が生産する。また、菌類が生産し、ＰＤＥ
を阻害する物質として、下記の構造をもつＴＰＩが知ら
れている。

ＴＰＩ−１：Ｒ士β−Ｄ−グルコピラノシルＴＰＩ−２
：Ｒ＝β−Ｄ−ガラクトピラノシルＴＰ　Ｉ−３：　Ｒ
＝６’−０−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル ＴＰＩ−４：Ｒ干６′−〇−アセチルーβ−〇−ガラク
トピラノシル ＴＰＩ−５：Ｒ＝Ｈ さらに、化学的に合成された物質として、テオフィリン
、パパベリンなどが知られてふり、強心剤、血管拡張剤
などの医薬として用いられている。

発明が解決しようとする課題 上述のご２く微生物が生産するＰＤＥ阻害作用を有する
物質を探索することは、その広範な薬理作用のゆえに医
療上有用であり、また、ｃＡＭＰ。

ｃＧＭＰの研究にも有用である。

課題を解決するための手段 医薬品またはその中間体となりつる有用な新規生理活性
物質を提供するという目的のもとに天然界より入手した
数多（の微生物の生産物について研究を行った結果、新
たに分離した微生物がＰＤＥ阻害作用を示す生理活性物
質を生産するという事実を見出した。該生理活性物質を
単離、精製し、その理化学的性質を調べたところ新規物
質であることが判明した。以下、該物質をＫＳ−５０３
Ｃと称する。

以下に、本発明の詳細な説明する。

本発明は、下記の理化学的性質を有する新規物質ＫＳ−
５０３Ｃおよびその製造法を提供する。

■性　　状：無色あめ状 ■比旋光度：　〔α〕。＝＋４０．２°　（ｃ＝０．６
゜メタノール） ■分子式：　Ｃｓ　ｍ　Ｈｓ　４０　Ｉ＊■元素分析： 実測値　Ｃ５７，１６％、Ｈ８，７６％計算値　Ｃｓ　
ａ　Ｈｇ　ａ　Ｏ＋　＊としてＣ５？、４３％、Ｈ８，
５７％ ■”Ｃ−ＮＭＲＸペクト）’　（４００Ｍ　Ｈｚ　、　
ＣＤ　ｓ　ＯＤ中、第１図に示す） δ（ｐｐｍ）　：　１７５．６．１７１．０．１７０．
６．１７０．５．１７０．４゜７６．６．７６．５．７
６．３．７６．０．７４．１．７３．０．７１．０９゜
７１．０７．７０．４．６８．８．６５．２．４０．０
．３８．０４（２）。

３７．９７．３７．８．２７．０．２６．９４（２＞、
　２６．８８．２６．８゜１４．８．１４．７．１４．
６２．１４．５９．１４．０．１２．２゜１２．０．１
１．９８．１１．９６．１１．９■’Ｈ−ＮＭＲスペク
トル（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ中、第２図に示す） δ（ｐｐｍ）　：　５．１５　（１Ｈ、ｄ、　Ｊ＝３．
２Ｈｚ）、　５．１２　（１）１゜ｄ、　　Ｊ＝３．３
Ｈｚ）、　　５．１１　（１Ｈ、ｄ、　　Ｊ＝３．４）
１ｚ）、　　５．（１９（１Ｈ、ｄ、　　Ｊ＝３．４Ｈ
ｚ＞、　　４．４９　（ｌＨ，ｄｄ、　　Ｊ＝２３゜１
１．４ｔｌｚ）、　　４．２３　　（１Ｈ、ｄｄ、　　
Ｊ＝６．６．　１１．４）１ｚ）。

４．２１　　（１Ｈ、ｄ、　　Ｊ＝３．５Ｈｚ）、　　
３．８９　（１Ｈ、ｄｄｄ、　　Ｊ＝２．３．　６．５
．　８．８Ｈｚ）、　　３．７〜３．８５　（：Ｅ、　
　ｍ＞、　　３．６〜３．７　（２Ｈ，ｍ）、　２．０
〜２．２　（五ｌ１ｌ）、　１．８〜２．０（Ｅ、　　
ｍ）、　　１．’２〜１．７　（ＩＯＨ，ｍ）、　　０
．８〜１．’２（３０Ｈ、　　ａ＋） ■赤外部吸収スペクトル（溶液法、ＣＨＣｌ、中、第３
図に示す） ３０１４、２９６０．２９００．１７５７．１４６４．
１３８４．１１８６゜１１２７、１１０４．１０４６．
１０１１０ｌ９’■マススペクトル（Ｓ　ＩＭＳ）、ポ
ジティブｍ／ｚ　　：　７５３　（Ｍ＋１　） ■紫外線吸収スペクトル（メタノール中）末端吸収のみ ■呈色反応：ヨード、５０％硫酸、アニスアルデヒドの
各反応に陽性。アニリン・フタル酸。

ニンヒドリン、ライダン・スミス、塩化第一鉄の各反応
に陰性。

■溶解性：メタノール、エタノール、クロロホルム、ア
セトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベンゼン、
アセトニトリル・ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド、ピリジン、酢酸に可溶。

ヘキサン、エタノールアミン、水、０．０５Ｎ水酸化す
）ＩＪウム水溶液、０．０５Ｎ塩酸に不溶。

次に、各種展開剤によるＫＳ−５０３Ｃの薄層クロマト
グラフィーのＲｆ値を第１表に示す。なお、検出は５０
％硫酸を噴霧した後、ホットプレート上で加熱すること
により行った。

第　　　　１　　　　表 展開溶剤　　　　Ｒｆ値 ■りｏｏホルム二メタノーノに＝９二ｌ（ｖ／ｖ）　　
０．１７−０．２３■アセトン二濃アンモニア水＝９５
二５　（ｖ／ｖ）　　０．２０−０．３８■酢酸エチル
：酢酸＝　９　：　１　（ｖ／ｖ）　　　　　　０．２
３−０．４３■２０％メタノール、５０％アセトニトリ
ル−水　０．２０薄層：■〜■　シリカゲル６０Ｆ２ｓ
−プレート（メルク社、Ｎα５６２８） ■　　ＲＰ　　８Ｆ２ｓ＊Ｓプレート（メルク社、Ｎα
１３７２５） 展開：室温、上昇法、１５〜６０分 ＫＳ−５０３ｃは、ＰＤＥ阻害作用を有する。

次に、ＫＳ−５０３ｃの製造法について説明する。

ＫＳ−５０３ｃは、ホルモネマ　（）Ｉｏｒｍｏｎｅｍ
ａ）属に属し、ＫＳ−５０３Ｃ生産能を有する微生物を
培地に培養し、培養物中、主に菌体にＫＳ−５０３ｃを
生成蓄積させ、該培養物からＫＳ−５０３０を採取する
ことにより製造される。

ＫＳ−５０３ｃ生産性微生物としてはホルモネマ　（Ｈ
ｏｒｍｏｎｅｍａ）属に属し、ＫＳ−５０３Ｃ生産能を
有するものであればいずれの微生物でもよい。

具体的に好適な一例として、本発明者らにより北海道に
おいて針葉樹の落葉から分離されたホルモネマ・デマテ
ィオイデｘ　（Ｈｏｒｍｏｎｅｍａ　ｄｅｍａｔｉｏｉ
ｄｅｓ）ＫＡＣ−２０４０株（以下、ＫＡＣ−２０４０
と称する）があげられる。

ＫＡＣ−２０４０の菌学的性質は次のとおりである。

麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培養した時、集
落の直径は培養６８目で４８〜５ＱＩ１ｍｌ二達する。

集落は、オリーブ黒色、黒色あるいは暗褐色を呈し、分
生子の形成に伴い集落は粘質状となる。菌糸は、隔壁を
有し、よく分岐する。菌糸は初め無色であるが、やがて
褐色となり壁は厚くなる。菌糸の幅は２〜１０ｍ＋であ
る。分生子形成細胞は未分化で、菌糸から直接分極子を
形成する。

分生子の形成様式は、内生出芽型で菌糸細胞の１ケ所よ
り１個ずつ分生子を内生的に多産する。分生子は無色！
平滑で楕円形を呈する。大きさは、長さ６〜１０．５Ｍ
、輻２．゛５〜４−である。分生子形成部位から離脱し
た分生子は、しばしば膨潤し、褐色あるいは暗褐色を呈
するようになる。本菌株は、上述したアナモノ’ｂフ（
不完全世代の特徴）のみ観察され、テレオモルフ（完全
世代の特徴）は観察されない。

以上の観察の結果、本菌株は、ホルモネマ・デマティオ
イデス（Ｈｏｒｍｏｎｅｍａ　ｄｅｍａｔｉｏｉｄｅｓ
）と同定された。ホルモネマ・デマティオイデスについ
ての菌学的性質は、スタビロース・イン・マイクロン４
　　（Ｓｔｕｃｌｉｅｓ　ｉｎ　ｌＪｙｃｏｌｏｇｙ）
　　１５．　１４１〜１７７（１９７７）およびε、Ｊ
、Ｈｅｒｍａｎｉｄｅｓ−Ｎｉｊｈｏｆ著オウレオバシ
デイウム・アンド・アライド・ジェネラ（＾ｕｒｅｏｂ
ａｓｉｄｉｕｍ　ａｎｄ　ａｌｌｉｅｄ　ｇｅｎｅｒａ
）に詳しく記載されている。本発明者らは、本菌株をホ
ルモネマ・デマティオイデス　ＫＡＣ−２０４０と命名
し、微工研条寄１６３５（寄託日：昭和６２年１２月２
３日）として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託さ
れている。

微生物の培養に際しては菌類の培養に用いられる通常の
培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化しう
る炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培地で
あれば天然培地１合成培地いずれでも用いろる。

炭素源としてはグルコース、フラクトース、スタビロー
ス、サッカロース、ラクトース、澱粉。

テキストリン、マンノース、マルトース、　ｌ１ｌｒ−
。

マツシユポテトの素などの炭水化物、クエン酸。

リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、グルタミン
酸などのアミノ酸あるいはグリセロール。

綿実油などが用いられる。

窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどのアンモニ
ウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、アラ
ニンなどのアミノ酸、尿素。

麦芽エキス、ペプトン、肉エキス、酵母エキス。

乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉。

綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア
、ソルブル・ベジタブル・プロティン、野菜・果実のジ
コースなどが用いられる。

無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム
、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウ
ム、炭酸バリウム。

炭酸カルシウム、塩化コバルト、塩化ナトリウム。

リン酸マグネシウムなどが用いられる。

その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミンなど菌
体の増殖あるいはＫＳ−５０３ｃの生産を促進する物質
を加えることができる。

用いられる微生物が生育に特定の物質を要求する場合は
、生育に必要な物を加えることが必要である。

培養は振盪培養法１通気攪拌培養法などにより１５〜３
０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。

３〜８日の培養によってＫＳ−５０３Ｃの蓄積が最大に
達し、培養は完了する。

蓄積したＫＳ−５０３ｃを菌体から単離採取するに際し
ては、通常の生理活性物質を菌体から採取する方法が適
用される。

即ち、濾過、遠心分離などによる菌体の取得、メタノー
ル、アセトンなどの有機溶剤による菌体からの抽出、水
または二種以上の有機溶剤による分配、吸着樹脂、シリ
カゲル、化学修飾シリカゲル、アルミニウム、セルロー
ス、珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲルが過剤などを用い
るカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラ
フィーによる活性物質の吸脱着処理などによってＫＳ−
５０３０を単離することができる。

菌体からＫＳ−５０３Ｃを単離する１例は次の。

通りである。

培養液を濾過もしくは遠心分離することによって菌体を
取得する。得られた菌体にメタノールなどの有機溶剤を
添加し、充分攪拌した後、再度濾過もしくは遠心分離に
よって菌体とＦ液もしく！マ上清液とを分離する。得ら
れたＰ液もしくは上清液から溶剤を減圧下で蒸発させて
濃縮し、水溶液とする。ついで、この水溶液から酢酸エ
チルなどの水と混和しない適当な溶剤を用いて抽出する
。

抽出液を減圧濃縮した後、クロロホルム−メタノールの
混合溶媒またはアセトニトリルなどを展開溶媒として、
シリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り返し行う。

次に、ＫＳ−５０３ｃを含む両分を集めて減圧下で濃縮
した後、メタノールを展開溶媒としてセファデフクスＬ
Ｈ−２０カラムクロマトグラフィーを行う。さらに、Ｋ
Ｓ−５０３Ｃを含む画分を集めて減圧下で濃縮した後、
メタノ−ルーア七トニトリルー水の混合溶媒を展開溶媒
としそ逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーを繰り
返し行う。ＫＳ−５０３ｃのみを含む両分を集めて減圧
下で濃縮することにより、無色あめ状のＫＳ−５０３Ｃ
を得る。

上記精製工程中のＫＳ−５０３Ｃの検出は、シリカゲル
薄層クロマトグラフィー、ついで５０％硫酸を噴霧後、
加熱することにより、または、紫外部の末端吸収を紫外
部吸収検出器により検出することにより、または、ＰＤ
Ｅ阻害活性を測定することにより行う。

以下に実施例を示す。

実施例 種菌としてホルモネマ・デマティオイデス（Ｈｏｒｍｏ
ｎｅｍａ　ｄｅｍａｔｉｏｉｄｅｓ）　　ＫＡＣ−２０
４０を用いる。該菌株をグルコース１゜Ｏｇ／ｄ１．ペ
プトン（極東製薬工業社製）　０．５　ｇ／ａ、乾燥酵
母エビオス（朝日麦酒社製）　０．５　ｇ／ａ、　Ｖ　
−８野菜ジユース（キャンペル社製）　０．２　ｄｌ／
ｄｌ、炭酸カルシウム０．３ｇ／Ｉ２！ｌ！、　　ｐＨ
６，０の組成の種培地３Ｑｍｌを含む３０　Ｑｍｌの三
角フラスコに植菌した。

ついで２５℃で菌が充分生育するまで振盪培養した。こ
の種培養液全量を上記組成と同じ種培地３０　Ｑｍｌを
含む２１三角フラスコに植菌し、ついで同様に培養した
。この種培養液９０　Ｑｍｌを、サッカロース５．０ｇ
／ｄ１．ペプトン０．５ｇ／ｄ１．乾燥酵母エビオス０
．５ｇ／ｄ１．　Ｖ−８野菜ジユース０、２　ｄｌ／ｄ
１．炭酸カルシウム０．３ｇ／Ｊ、ＫＭ−７０（信越化
学社製）０．０２ｇ／ｄ１．ＬＧ−１０９（旭電化社製
）　０．０２ｇ／ｄｉ、　　ｐＨ６，５の組成の発酵培
地１８１を含む３０１ジヤーに植菌した。

培養は２５℃で１８１／分の通気下、３００ｒｐｍの回
転数で攪拌しながら５日間行った。培養終了後、培養液
３２１を遠心分離し、菌体と培養土清液とに分けた。菌
体には２０１のメタノールを添加し充分攪拌した後、セ
ライトを５〜６ｋｇ加えて濾過し、菌体を除去した。培
養上清液は、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＨ
Ｐ−２０（三菱化成社製）　２１を充填したカラムに通
塔した。

水ついで５０％メタノール水溶液おのおの１０１でカラ
ムを洗浄した後、メタノール６１でＫＳ−５０３Ｃを溶
出した。菌体のメタノール抽出液と培養上滑液のダイヤ
イオンＨＰ−２０カラム溶出液をあわせて減圧下で濃縮
することによりメタノールを除去した。得られた水溶液
５０　Ｑｍｌから４０　Ｑｍｌずつの酢酸エチルを用い
て３回抽出した。

酢酸エチル層をあわせて減圧下で濃縮した後、クロロホ
ルムに溶解した。クロロホルム溶液の約１７５をあらか
じめクロロホルムで充填したシリカゲル（フコ−ゲルＣ
−２０Ｏ，和光純薬社製）カラム（２Ｉｌ）の上端に供
給した。カラムを２１のクロロホルムで洗浄した後、５
％メタノールを含むクロロホルムで溶出を行った。溶出
液を８０ｇずつ分取するとフラクション番号１０９から
１５３にＫＳ−５０３Ｃが溶出された。これらのフラク
ションを集めて減圧下で濃縮した。残りのクロロホルム
溶液についても同様にしてシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーを行い、ＫＳ−５０３Ｃを含むフラクションを
減圧下で濃縮した。ＫＳ−５０３Ｃを含む画分をすべて
集めてアセトニトリルに溶解し、あらかじめアセトニト
リルで充填したシリカゲルカラム（２１）の上端に供給
した。５１のアセトニトリルを用いて溶出を行った後、
溶出液をすべて集めて減圧下で濃縮すると淡黄色あめ状
物質が５０ｇ得られた。この物質をメタノールに溶解し
、メタノール溶液の約１７１０をあらかじめメタノール
で充填したセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社
製）カラム１１の上端に供給し、メタノールを展開溶媒
として、溶出を行った。溶出液を４ｍｌずつ分取すると
フラクション番号１４０から１５９にＫＳ−５０３ｃが
溶出してくる。残りのメタノール溶液についても同様の
セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを
行い、ＫＳ−５０３Ｃを含む両分を集めた。これらのＫ
Ｓ−５０３Ｃを含む両分を減圧下で濃縮した後、メタノ
ールに溶解し、メタノール溶液の約ｌ／４０をあらかじ
め２０％メタノール−５０％アセトニトリル−水の混合
溶媒で平衡化した逆相ローパーカラム（メルク社製、Ｒ
Ｐ−８，サイズＢ）の一端に供給し、同じ組成の混合溶
媒を用いて流速４ｍ１Ｚ分で展開した。溶出液の２２０
ｎｍにおける吸光度をＵＶモニターにより検出しながら
、ＫＳ−５０３Ｃを含む両分を分取した。残りのメタノ
ール溶液についても同様にして逆相ローバーカラムクロ
マトグラフィーを行った。；ＫＳ−５０３Ｃを含む画分
を集めて、減圧下で濃縮した後、再度逆相ローバーカラ
ムクロマトグラフィーを同様にして再度繰り返すことに
より、無色あめ状のＫＳ−５０３Ｃを２．７０−ｇ得た
。

次に、実験例によってＫＳ−５０３ＣのＰＤＥ阻害作用
を説明する。

実験例 ＰＤＥは、垣内らの方法〔バイオケミカル・ジャーナル
（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、）　　１４６　１０９−１２
０　（１９７５）　）に従い、牛大脳皮質から部分精製
己た標品を用いた。メタノールに溶解した種々の濃度の
被検薬溶液５０４を８０ｍＭイミダゾール塩酸緩衝液（
ｐＨ６，９）、３ｍＭ硫酸マグネシウム、０．３ｍＭジ
チオスライトール、１００ｍＭ塩化ナトリウム。

１．２ｍＭ　　ｃＡＭＰ、４Ｕ／ｍｌカルモデユリン。

２６ｍＵ／＋ｎ１ＰＤＥを含む反応混液５００４に添加
し、３０℃で３０分間反応させた。

１００℃で５分間加熱することにより反応を停止させ、
次に塩化マンガン６μｍｏｌ　と５′−ヌクレ　　　　
゛オチダーゼを０．２Ｕ（ＩＵ＝１分間に１．１７１１
１０１のリン酸が生成する量）添加した後、３０℃で３
０分間反応させた。１０％過塩素酸３ｍｌを添加して反
応を停止させた後、生成した無機リン酸をエイムス（Ａ
ｗｅｓ）の方法〔メソッド吻イン・エンザイモロジー（
Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）　　３巻
１１５−１１６頁、　１９６６年、アカデミツク・プレ
ス（Ａｃａｄｅ＋ｎ１ｃＰｒｅｓｓ）　）に従って定量
した。阻害率を以下の式に従って算出した。

阻害率＝　（Ａ−Ｂ）　／ＡＸ　１００　（％）Ａ：被
検薬非存在下の無機リン酸生成量Ｂ：被検薬存在下の無
機リン酸生成量 ＰＤＨの活性を５０％阻害する被検薬濃度ＩＣ５゜を第
２表に示す。

第　　　　２　　　　表 被検薬　　　Ｉ　Ｃｓａ　（ｇ／１ｍ１）ＫＳ−５０３
Ｃ２１ パパベリン（塩酸塩）６０ レティキュロール　　　　　２０ 発明の効果 ＫＳ−５０３Ｃは、サイクリックヌクレオチドホスホジ
ェステラーゼを阻害することから、強心剤、血管拡張剤
として有用であり、また、ＣＡＭＰ。

ｃＧＭＰの研究用試薬としても有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＫＳ−５０３ＣのＩ３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを
示す。 第２図はＫＳ−５０３Ｃの’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示
す。 第３図はＫＳ−５０３ｃの赤外部吸収スペクトルを示す
。 手続補正書（自発） １．事件の表示 昭和６３年特許願第３９２２５号 ２、発明の名称 新規生理活性物質ＫＳ−５０３ｃおよびその製造法３、
補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　１００ 住　所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名称　
（１０２）協和醗酵工業株式会社（１）明細書第１０買
上から第３行の「〔α〕Ｄ＝＋　４０．２°」を「〔α
〕”：＝＋４０．２°」に訂正する。 （２）明細書第１３頁上から第２行の「ＲＰ　　８Ｆ２
Ｓ４Ｓ」をｒＲＰ　　８Ｆａｓ４ｓＪに訂正する。 （３）明細書第２４頁上から第１行の「カルモデユリン
」の後にｒ（ＩＵ＝該条件下、ＰＤＥの最大活性の５０
％を活性化する量）」を加入する。 （４）明細書第２４頁上から第２行のｒＰＤＥＪの後に
’（ＩＵ＝１分間に１μｌ１ｌＯ１ｅのｃＡＭＰを分解
する量）」を加入する。 手続補正書く自発） 昭和６３年ＩｅｋＪ１日

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）以下の理化学的性質を有する新規生理活性物質Ｋ
   Ｓ−５０３ｃ。 ［１］性状：無色あめ状 ［２］比旋光度：〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝＋４０．２°（
   ｃ＝０．６、メタノール） ［３］分子式：Ｃ＿３＿６Ｈ＿６＿４Ｏ＿１＿６［４］
   元素分析： 実測値Ｃ５７．１６％、Ｈ８．７６％ 計算値Ｃ＿３＿６Ｈ＿６＿４Ｏ＿１＿６としてＣ５７．
   ４３％、Ｈ８．５７％ ［５］＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、
   ＣＤ＿３ＯＤ中、第１図に示す） δ（ｐｐｍ）：１７５．６、１７１．０、１７０．６．
   １７０．５、１７０．４、７６．６、７６．５、７６．
   ３、７６．０、７４．１、７３．０、７１．０９、７１
   ．０７、７０．４、６８．８、６５．２、４０．０、３
   ８．０４（２）、３７．９７、３７．８、２７．０、２
   ６．９４（２）、２６．８８、２６．８、１４．８、１
   ４．７、１４．６２、１４．５９、１４．０、１２．２
   、１２．０、１１．９８、１１．９６、１１．９ ［６］＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ＣＤ
   ＿３ＯＤ中、第２図に示す） δ（ｐｐｍ）：５．１５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）
   、５．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ）、５．１１（
   １Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．４Ｈｚ）、５．０９（１Ｈ、ｄ、Ｊ
   ＝３．４Ｈｚ）、４．４９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２３、１
   １．４Ｈｚ）、４．２３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．６、１
   １．４Ｈｚ）、４．２１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ）
   、３．８９（１Ｈ、ｄｄｄ、Ｊ＝２．３、６．５、８．
   ８Ｈｚ）、３．７〜３．８５（３Ｈ、ｍ）、３．６〜３
   ．７（２Ｈ、ｍ）、２．０〜２．２（４Ｈ、ｍ）、１．
   ８〜２．０（１Ｈ、ｍ）、１．２〜１．７（１０Ｈ、ｍ
   ）、０．８〜１．２（３０Ｈ、ｍ） ［７］赤外部吸収スペクトル（溶液法、ＣＨＣｌ＿３中
   、第３図に示す） ３０１４、２９６０、２９００、１７５７、１４６４、
   １３８４、１１８６、１１２７、１１０４、１０４６、
   １０１９ｃｍ＾−＾１［８］マススペクトル（ＳＩＭＳ
   ）、ポジティブｍ／ｚ：７５３（Ｍ＋１） ［９］紫外部吸収スペクトル（メタノール中）末端吸収
   のみ ［１０］呈色反応：ヨード、５０％硫酸、アニスアルデ
   ヒドの各反応に陽性。アニリン、フタル 酸、ニンヒドリン、ライダン・スミス、塩 化第一鉄の各反応に陰性。 ［１１］溶解性：メタノール、エタノール、クロロホル
   ム、アセトン、酢酸エチル、テトラヒド ロフラン、ベンゼン、アセトニトリル、ジ メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシ ド、ピリジン、酢酸に可溶。 ヘキサン、エタノールアミン、水、０．０５Ｎ水酸化ナ
   トリウム水溶液、０．０５Ｎ塩酸に不溶。
2. （２）ホルモネマ（Ｈｏｒｍｏｎｅｍａ）属に属し、Ｋ
   Ｓ−５０３ｃ生産能を有する微生物を培地中に培養し、
   培養物中にＫＳ−５０３ｃを生成蓄積させ、該培養物か
   らＫＳ−５０３ｃを採取することを特徴とするＫＳ−５
   ０３ｃの製造法。
3. （３）該微生物がホルモネマ・デマティオイデス（Ｈｏ
   ｒｍｏｎｅｍａ　ｄｅｍａｔｉｏｉｄｅｓ）に属し、Ｋ
   Ｓ−５０３ｃ生産能を有する微生物であることを特徴と
   する請求項２記載の製造法。
4. （４）該微生物がホルモネマ・デマティオイデス（Ｈｏ
   ｒｍｏｎｅｍａ　ｄｅｍａｔｉｏｉｄｅｓ）ＫＡＣ−２
   ０４０（微工研条寄第１６３５号）であることを特徴と
   する請求項２記載の製造法。