JPH01212323A - 分光蛍光光度計 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は分光蛍光光度計に関し、特に吸光分析も行なう
ことができるようにした分光蛍光光度計に関するもので
ある。

（従来の技術） 分光蛍光光度計は、光源からの光を分光して試料に照射
する励起分光器、試料からの蛍光を分光する蛍光分光器
及び蛍光分光器の出射光を検出する蛍光検出部を備えて
いる。

１台の分光蛍光光度計で蛍光分析と吸光分析をともに測
定できる装置は存在しない。

分光蛍光光度計の試料室の光学系を切り替えて吸光光度
計として使用できるようにしたものはある。しかし、そ
の場合、蛍光分析と吸光分析をともに行なうことはでき
ない。

また、試料の透過光を受光する位置に透過光検出用の検
出器を設け、蛍光測定用の励起光をそのまま吸光用光源
とし、蛍光分析と吸光分析をともに行なうようにした装
置もある。

（１Ｍ明が解決しようとする課題） 励起光波長で吸光分析を行なう後者の装ｒｏ場合は、吸
収波長と蛍光励起波長が同一であるため。

吸光分析と蛍光分析とで異なる対象を追跡することはで
きない０例えば、血小板などの細胞内のカルシウムを測
定するには、凝集反応を同時に監視することが大切であ
る。凝集反応は吸収や散乱を測定することにより監視で
き、一方、細胞内のカルシウムは励起波長を異ならせた
２波長蛍光分析により測定することができるが、従来の
装置ではこのような測定はできない。

本発明は同一試料について蛍光測定と吸光測定をともに
行なうことができ、しかも、吸収波長と蛍光励起波長を
独立して設定することのできる分光蛍光光度計を提供す
ることを目的とするものである。

（課題を解決するための手段） 第１図に本発明を概略的に表わす。

１は光源、２は光源１からの光を分光して試料３に照射
する励起分光器、４は試料３からの蛍光を分光する蛍光
分光器、５は蛍光分光器４の出射光を検出する蛍光検出
部である。

８は試料３の透過光を検出する透過光検出部であり、９
は蛍光検出部５と透過光検出部８のいずれかの出力を選
択するスイッチ回路である。

１０は励起分光器２と蛍光分光器４を複数の波長に切り
替える分光器切替え手段、６は励起分光器２の波長走査
を行なうドライバ、７は蛍光分光器４の波長走査を行な
うドライバである。１１は励起分光器２及び蛍光分光器
４の波長切替えと連動してスイッチ回路９を切り替える
サンプリング切替え手段、１２はスイッチ回路９を経た
出力信号を取り込むデータ取込み手段、１３は取り込ま
れるデータをデジタル信号に変換するＡ／Ｄ変換器であ
る。

（作用） 本発明の動作を、例えば細胞内のカルシウムの測定のよ
うに、１つの吸収波長での測定と２つの蛍光励起波長で
の蛍光測定とを行なう場合を例にし、第２図と第３図を
参照して説明する。第３図はサンプリング用の信号を表
わしている。

まず、吸収測定を行なうために、分光器切替え手段ｌＯ
により励起分光器２の波長と蛍光分光器４の波長を吸収
測定用の波長λ１に設定しくステップＳｌ）、サンプリ
ング切替え手段１１によりスイッチ回路９を透過光側Ｔ
に切り替える（ステップＳ２）。そして透過光検出部８
の検出信号をＡ／Ｄ変換器１３によりデジタル信号に変
換してデータ取込み手段１２に取り込み、メモリ装置の
所定の位置に保存する（ステップＳ３）。

次に、散乱光を測定するために、サンプリング切替え手
段１１によってスイッチ回路９を蛍光側Ｆに切り替え（
ステップＳ４）、データ取込み手段１２にデータを取り
込み、メモリ装置の所定の位置に保存する（ステップＳ
５）。

次に、蛍光測定を行なう０分光器切替え手段１０によっ
て励起分光器２を第１の励起波長λＥｘ１に設定し、蛍
光分光器４を第１の蛍光波長λＥｍ１に設定する（ステ
ップＳ６）。スイッチ回路９は蛍光側Ｆのままである。

そしてデータ取込み手段１２によってデータを取り込み
、メモリ装置の所定の位置に保存する（ステップＳ７）
。

次に、励起波長及び蛍光波長を異ならせて蛍光測定を行
なう。分光器切替え手段ｌＯによって励起分光器２を第
２の励起波長λＥｘ２に設定し、蛍光分光器４を第２の
蛍光波長λＥｍ２に設定しくステップＳ８）、データ取
込み手段１２によってデータを取り込み、メモリ装置の
所定の位置に保存する（ステップＳ９）。

その後、再び吸収測定を行なうために、ステップＳ１へ
戻り、予定時間が終了するまで上記の操作を繰り返えす
（ステップ５１０）。

このような操作により、それぞれの測定モードのデータ
の時間記録（タイムコース）ファイルが得られるので、
吸収の時間変化及び多波長励起による蛍光の時間変化を
タイムコースデータとして又は数値データとして出力す
ることができる。また、２波長励起の蛍光強度比の時間
変化も出力することができる。

（実施例） 第４図は一実施例を表わす。

光源１°として例えばキセノンランプを使用する。

励起分光器２で分光された光はビームスプリッタ１４で
分割され、一部は測定セルに収納された試料３へ入射し
、他の一部はモニタ検出器１５へ入射する。

試料３を透過した光はフィルタ１６を経て透過光検出器
、例えば光電子増倍管８ａに入射する。

検出器８ａの出力は増幅器８ｂにより増幅されてスイッ
チ回路９の一方の端子に導かれる。

試料３の散乱光又は試料３が励起されて発生した蛍光は
、蛍光分光器４で分光されて測光用検出器、例えば光電
子増倍管５ａにより検出される。

検出器５ａの検出信号は増幅器５ｂで増幅されてスイッ
チ回路９の他方の端子に導かれる。

スイッチ回路９の出力信号はＡ／Ｄ変換器１３によりデ
ジタル信号に変換され、入出力インターフェース２１を
経てマイクロコンピュータ２０に取り込まれる。Ａ／Ｄ
変換器１３のサンプリング動作は、励起分光器２、蛍光
分光器４．スイッチ回路９の切換えと連動してマイクロ
コンピュータ２０から入出力インターフェース２！を経
て制御される。Ａ／Ｄ変換器１３のサンプリング動作は
例えば第３図に示されるように行なわれる。スイッチ回
路９の切替え制御、励起分光器２、蛍光分光器４のそれ
ぞれのドライバ６．７の切替え制御も入出力インターフ
ェース２１を介してマイクロコンピュータ２０により行
なわれる。

マイクロコンピュータ２０では、この分光蛍光光度計の
動作を制御するＣＰＵ２２、取り込んだデータを保存し
たりプログラムを記憶するＲＡＭ２３、動作のプログラ
ムを保存しているＲＯＭ２４がパス２６を介して接続さ
れている。２５は動作の基準となるクロックを発生する
クロック発生回路である。マイクロコンピュータ２０は
第１図における分光器切替え手段１０、サンプリング切
替え手ｇｔｔｔ及びデータ取込み手段１２の機能を実現
している。

第２図及び第３図の動作の例では測定モードのサイクル
が吸収、散乱、蛍光ｌ、蛍光２という順になっているが
１例えば吸収１、吸収２（吸収ｌとは異なる波長）、蛍
光１、蛍光２、蛍光３というような測定モードに変える
こともでき、種々の測定モードを設定することができる
。

吸収測定を行なう際、第４図では透過光強度をそのまま
データとして取り込んでいるが、第５図に示されるよう
に、モニタ検出器１５の検出出力を増幅器１７で増幅し
、透過光検出器８ａの検出出力を増幅する増幅器８ｂの
出力とともに対数増幅器１８に入力し、吸光度に変換し
た後にＡ／Ｄ変換器１３を経てマイクロコンピュータ２
０に取り込むようにしてもよい。

（発明の効果） 本発明の分光蛍光光度計は試料の透過光を検出する透過
光検出部を設けるとともに、励起分光器と蛍光分光器の
波長を複数に切り替えることができるようにし、分光器
の波長切替えと連動して透過光検出部と蛍光検出部のい
ずれかからデータをサンプリングするようにしたので、
１つの試料について吸光分析と蛍光分析をともに追跡す
ることができるようになる。

例えば、血小板などの凝集反応を吸収測定により監視す
るとともに、２波長蛍光測定によって細胞内のカルシウ
ム測定もともに行なうことができるようになる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明を示すブロック図、第２図は動作の一例
を示すフローチャート図、第３図は動作の一例を示すタ
イミング図、第４図は一実施例を示すブロック図、第５
図は他の実施例における透過光測定部分を示すブロック
図である。 １・・・・・・光源、２・・・・・・励起分光器、３・
・・・・・試料、４・・・・・・蛍光分光器、５・旧・
・蛍光検出部。 ８・・・・・・透過光検出部、９・・・・・・スイッチ
回路。 １０・・・・・・分光器切替え手段、１１・旧・・サン
プリング切替え手段、１２・・・・・・データ取込み手
段。 特許出願人　株式会社島津製作所

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）光源からの光を分光して試料に照射する励起分光
   器、試料からの蛍光を分光する蛍光分光器及び蛍光分光
   器の出射光を検出する蛍光検出部を備えた分光蛍光光度
   計において、試料の透過光を検出する透過光検出部と、
   蛍光検出部と透過光検出部のいずれかの出力を選択する
   スイッチ回路と、励起分光器と蛍光分光器を複数の波長
   に切り替える分光器切替え手段と、励起分光器及び蛍光
   分光器の波長切替えと連動して前記スイッチ回路を切り
   替えるサンプリング切替え手段と、前記スイッチ回路を
   経た出力信号を取り込むデータ取込み手段とを設けたこ
   とを特徴とする分光蛍光光度計。